專利名稱：：一種抗癌中藥復方靈芝制劑及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種口服給藥的中藥復方靈芝制劑及其制備方法。本發(fā)明中藥復方靈芝制劑以靈芝藥材和其孢子粉為主要原料，經過提取精制、制粒制備而成，主要用于預防、治療癌癥，提高機體免疫力，屬醫(yī)藥、保健品
技術領域：
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背景技術：
：靈芝是中醫(yī)藥學寶庫中的珍品，是中藥中一種極為重要的藥材，大量的藥理學及臨床實踐證明，靈芝藥材及孢子粉具有較強的抗腫瘤作用，所含有化學成分，靈芝多糖，靈芝三萜酸對多種癌癥腫瘤細胞具有較強抑制作用，對癌癥的發(fā)生，發(fā)展階段均有預防治療作用。能夠提高機體免疫功能?？梢酝瘜W治療和放射治療同時配合使用，提高對癌癥的治療效果，提高腫瘤患者對化療和放療的耐受性，減輕化學治療和放療引起的白細胞減少，食欲減退、脫發(fā)等副任用，改善腫瘤患者的惡病質，提高患者免疫功能，具有扶正，固本作用。目前，以靈芝及孢子粉為原料制成的產品從處方組成角度主要包括單方和復方兩類，以往的文獻及臨床實踐表明，采用單方靈芝藥材對治療腫瘤疾病具有一定局限性，其使用效果低于靈芝的復方制劑。已上市的產品靈芝單方制劑較多，而以靈芝為主要原料的復方制劑較少。文獻報道及已上市的復方靈芝產品，其使用用途包括保肝、降糖、抗癌、提高機體免疫力等。經調査，市場上已上市的靈芝復方產品包括，復方靈芝顆粒，適應癥為治療乙肝，未見具有抗癌作用報道，處方組成為靈芝、五味子、郁金，與本發(fā)明專利處方組成不同。復方靈芝沖劑，適應癥為治療乙肝，未見具有抗癌作用報道，處方組成靈芝、五味子、郁金，與本發(fā)明處方不同。雙靈固本散，適應癥為抗癌，處方由靈芝藥材、靈芝孢子粉兩味組成，屬于單方，與本發(fā)明處方不同，不具有復方協(xié)同作用。復方靈芝健腦膠囊，功能主治健腦，未見具有抗癌作用報道，處方組成由靈芝、枸杞子、當歸、酸棗、刺五加等組成，與本發(fā)明處方不同。復方靈芝降糖膠囊，由靈芝、黃芪、三七等組成的復方，適應癥為治療糖尿病，未見具有抗癌作用報道，處方組成與本專利處方組成不同。文獻報道，靈芝扶正膠囊初步研究報告，山東中醫(yī)藥大學學報，1997年第3期，報道靈芝扶正膠囊主要由靈芝、人參4味藥組成，主要作用抗癌，處方與本專利處方不一致，未見有詳細的抑瘤試驗及制備方法。高效液相法測定靈芝顆粒中五味子素的含量，廣東藥學院學報，2006年第1期，靈芝顆粒由靈芝、五味子、柴胡等藥材組成，未見具有抗癌作用報道，處方組成與本專利處方組成不同。專利文獻報道，中國專利200410051704.8公開了復方靈芝中藥制劑及制法，處方組成為靈芝、羊藿、丹參、灰樹芪、姬松茸，功能為抗癌提高免疫力，未見有詳細的抑瘤試驗及提高免疫力試驗，與本發(fā)明處方組成不同。中國專利200410020957.9公開了一種復方靈芝片劑及制備方法，處方由人參、靈芝、鹿茸、覆盆子、天門冬、枸杞子組成直接粉碎入藥，與本專利處方不同。中國專利93100151.X公開了復方靈芝口服液及其制備方法，處方由靈芝、刺五加、首烏、烏豆、等組成，未見有詳細的抑瘤試驗及提高免疫力試驗，與本發(fā)明處方不同。以上技術中較多采取藥材直接粉碎入藥方法，較少采用提取和揮發(fā)油包合入藥方法，方劑中雜質較多，人體吸收利用有一定局限性。另外以上文獻或專利中抗癌的靈芝復方制劑未公開其系統(tǒng)的藥效及毒理學研究結果。以上專利文獻及現(xiàn)有產品中的復方靈芝處方組成，均與本專利處方不同。
發(fā)明內容本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種抗癌中藥復方靈芝制劑，它采用以靈芝為主要藥材，按照中醫(yī)理論并結合現(xiàn)代藥理學進行復方組方，經過藥理藥學篩選后，得到靈芝復方，同以往的復方技術相比，具有較強的抗癌和提高免疫力的作用，并得到體內和體外試驗的證實。本發(fā)明所要解決的另一個技術問題是提供抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，它按照方劑中各種藥材中有效成分性質，分別進行了提取精制，并且考慮到揮發(fā)油的不穩(wěn)定易揮發(fā)的特性，采用了環(huán)糊精的包合入藥的工藝，所采用的工藝均進行了藥效學篩選，最終得到了可以工業(yè)化生產穩(wěn)定的生產工藝。本發(fā)明的組方是按照中醫(yī)理論，結合以抗癌抑瘤率和免疫力為藥效學指標的篩選試驗結果，組成了以靈芝藥材及孢子粉為主要原料，輔以其它抗癌及提高免疫力的中藥材成分組成了中藥復方靈芝顆粒的復方制劑。處方由靈芝、靈芝孢子粉、白術、三七、川芎、白花蛇舌草、土茯苓、僵蠶、甘草九味中藥構成，其中靈芝和靈芝孢子粉為方中的君藥，作用為扶正祛邪，增效互補，驅逐癌毒；白術的作用為補氣健脾，助脾運化，白術揮發(fā)油成分具有抑制腫瘤細胞作用，為方中的臣藥；川芎活血行氣，三七活血散瘀，兩藥相需為用，行血中之氣，散血中之瘀。白僵蠶軟堅，白花蛇舌草通泄解毒，土茯苓消腫通絡，三種藥均有較強抗癌作用。以上諸藥共奏活血化瘀，消腫散結之功，為佐藥；甘草解毒和中，調和諸藥，為使藥。為了解決上述技術問題，按照上述組方方法，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種抗癌中藥復方靈芝制劑，它由下述原料按所述重量份制備而成靈芝1500一4000份、靈芝孢子粉400—600份、白術250-400份、三七100_200份、川芎100_200份、僵蠶70—150份、白花蛇舌草70—150份、土茯苳70_150份、甘草40—60份。本發(fā)明中藥靈芝復方制劑，它由下述原料按所述重量份制備而成靈芝2000—2300份、靈芝孢子粉400—500份、白術270—300份、三七140—160份、川芎120—140份、僵蠶80—100份、白花蛇舌草80—100份、土茯苳80一100份、甘草40—50份。一種所述抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，它包括以下工藝步驟它包括以下工藝步驟按上述重量比取白術，加水8—10倍水蒸汽蒸餾1.5-2.5小時，蒸餾所得揮發(fā)油，加入5—10倍量P—環(huán)糊精，加入膠體磨中，研磨30分鐘，低于4(TC真空干燥，得白術揮發(fā)油包合物；按上述重量比取靈芝、川芎、白花蛇舌草、土茯苓、僵蠶、甘草及上述蒸餾白術揮發(fā)油后的殘渣，加水8—10倍，煎煮2次，每次0.5-1.5小時，過濾，濾液濃縮至比重為1.11.2g/ml，殘渣棄去，然后，按上述重量比加入靈芝孢子粉及粉碎過篩的三七粉，充分混合，70—8(TC干燥1.5-2.5小時，粉碎過篩，同白術揮發(fā)油包合物充分混合，置于流化床或濕法制粒機中制粒，得到本發(fā)明的復方靈芝顆粒。6一種所述抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，也可以采用如下直接煎煮法，它包括以下工藝步驟按上述重量比取各種藥材，按總量9-ll倍量加水，煎煮2次，每次1.5-2.5小時，過濾，濾渣棄去，濾液濃縮至干，75-85'C真空干燥1.5-2.5小時，粉碎過篩，采用流化床一步粒機制粒，即得。一種所述抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，也可以采用如下方法，它包括以下工藝步驟按上述重量比取除靈芝孢子粉外各種藥材，按總量9-11倍量加水，煎煮2次，每次1.5-2.5小時，同時收集揮發(fā)油，收集的揮發(fā)油，采用9-11倍量的e—CD進行包合，即在膠體磨中研磨0.3-0.8小時，烘干，粉碎，得揮發(fā)油P—CD包合物；煎煮液過濾，濾渣棄去，濾液濃縮至比重為1.1—1.2g/ml;將浸膏與靈芝孢子粉及揮發(fā)油包合物混合，75-85'C烘干1.5-2.5小時，粉碎過篩，采用流化床一步制粒，即得。一種所述抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，取上述制備的顆粒3份，取3份填充輔料，O.l份崩解劑，壓片，得到中藥復方靈芝片劑。取上述制備的顆粒直接灌裝膠囊，得中藥復方靈芝膠囊。本發(fā)明的顆粒劑質量標準如下，性狀，本品為棕褐色的顆粒、氣芳香、味甜。鑒別包括(l)取本品，置顯微鏡下觀察靈芝孢子呈卵圓形或卵形大小為68x912um;頂端平截或鈍圓錐形；孢壁雙層，外壁透明、平滑；內壁棕色或近褐色，孢內細胞質呈淡棕色或淡黃色；有時可觀察到孢內有呈黃綠色的小油滴。(2)取本品3g，研細，加乙酸乙酯30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取靈芝對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4pl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-三氯甲垸-丙酮-甲酸(9:6:4:2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液(1—10)，105。C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(3)取本品6g，研細，加水30ml、正丁醇30ml,超聲處理30分鐘，加水60ml使之分層，取正丁醇層，蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取三七對照藥材0.5g，加水10ml、正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，加水20ml使之分層，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各l(Hil，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液(1—10)，105。C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(4)取本品lg，研細，加乙醚20ml,加熱回流1小時，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己垸-乙酸乙酯(8:1)為展開劑，薄層板置展開缸中預飽和20分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(5)取本品lg，研細，加具塞的錐形瓶中，加無水乙醇50ml，水浴(4050°C)30分鐘，冷卻后，超聲10分鐘，過濾，濃縮濾液至約2ml加乙酸乙酯溶解并定容至10ml量瓶中，作為供試品溶液。另取白術油對照品加無水乙醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照氣相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIE)測定，吸取上述兩種溶液各l)il，分別注入氣相色譜儀，測定，記錄色譜峰即得。含量測定，照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈一0.2%磷酸水溶液(30:70)為流動相；檢測波長為203nm。理論塔板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計算應不低于2500。對照品溶液的制備取人參皂苷Rgl對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.3mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品，研細，取約4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，75"C水浴回流2小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足失重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25ml蒸干，殘渣加水10ml，用水飽和的正丁醇提取3次，每次10ml，正丁醇提取液蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取對照品與供試品溶液l(Vl，注入高效液相色譜儀，測定，記錄色譜峰即得。本發(fā)明的優(yōu)點效果如下按照本發(fā)明制備的抗癌中藥復方靈芝顆粒，生產工藝操作性強，質量可控，組方有利于發(fā)揮靈芝等各種藥材抗癌效果，方劑中抗癌有效成分穩(wěn)定，產品穩(wěn)定，經各種體內外試驗證實，具有較高的抑瘤率，可顯著提高機體免疫力，具有確切的抗腫瘤作用，與化療藥物聯(lián)合應用能夠提高化療藥的療效，同時可減輕化療藥物的毒性。臨床應用中取得了較好的抗癌臨床效果。本發(fā)明中藥復方靈芝顆粒其抗腫瘤作用的機制可能與其調節(jié)免疫機能、抑制腫瘤細胞生長有關。作為一個抗腫瘤輔助用藥具有很好的潛在臨床應用前景，適宜各期腫瘤患者作為抗腫瘤輔助治療劑使用，同化療藥合用能起到增效、減毒、改善生存質量等作用。具體實施例方式以下通過具體實施方式的描述對本發(fā)明作進一步詳細說明，但這不能用于限定本發(fā)明的保護范圍，本領域技術人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內。實施例l本發(fā)明中藥復方靈芝顆粒由下述原料按所述重量制備而成靈芝150kg、靈芝孢子粉40kg、白術30kg、三七10kg、川芎10kg、僵蠶7kg、白花蛇舌草7kg、土茯苓7kg、甘草4kg。其顆粒劑的制備工藝如下按上述重量取白術，蒸汽蒸餾1.5-2.5小時，蒸餾所得揮發(fā)油，加入5_IO倍量P—環(huán)糊精，加入適量水，加入膠體磨中，研磨30分鐘，低于4(TC真空干燥，得白術揮發(fā)油包合物；按上述重量比取靈芝、川芎、白花蛇舌草、土茯苓、僵蠶、及上述蒸餾白術揮發(fā)油的殘渣，加水8—10倍，煎煮2次，每次1小時，過濾，濾液濃縮至比重為U1.2g/ml，殘渣棄去，然后，按上述重量比加入靈芝孢子粉及粉碎過篩的三七粉，充分混合，70—8(TC干燥1.5-2.5小時，粉碎過篩，同白術揮發(fā)油包合物充分混合，置于流化床或濕法制粒機中制粒，得到本發(fā)明的復方靈芝顆粒。實施例2本發(fā)明中藥復方靈芝顆粒由下述原料按所述重量比制備而成靈芝4000g、靈芝孢子粉600g、白術400g、三七200g、川芎200g、僵蠶150g、白花蛇舌草150g、土茯苓150g、甘草60g。其顆粒劑按實施例1制備方法制備。實施例3本發(fā)明中藥復方靈芝顆粒由下述原料按所述重量比制備而成靈芝2100g、靈芝孢子粉430g、白術290g、三七145g、川芎130g、僵蠶87g、白花蛇舌草87g、土茯苓87g、甘草50g。其顆粒劑按實施例1制備方法制備。實施例4本發(fā)明中藥復方靈芝顆粒由下述原料按所述重量比制備而成靈芝2000g、靈芝孢子粉485g、白術380g、三七155g、川芎175g、僵蠶lOOg、白花蛇舌草95g、土茯苓100g、甘草45g。上述的本發(fā)明復方靈芝顆粒，可以采用如下直接煎煮法，按上述重量比IOO倍量取各種藥材，按總量10倍量加水，煎煮2次，每次2小時，過濾，濾渣棄去，濾液濃縮至干，8(TC真空干燥2小時，粉碎過80目篩，采用流化床一步粒機制粒，即得。上述的本發(fā)明復方靈芝顆粒，也可以采用如下方法，按上述重量比100倍量取除靈芝孢子粉外各種藥材，按總量10倍量加水，煎煮2次，每次2小時，同時收集揮發(fā)油，收集的揮發(fā)油，采用10倍量的e—CD進行包合，即在膠體磨中研磨0.5小時，烘干，粉碎，得揮發(fā)油3—CD包合物;煎煮液過濾，濾渣棄去，濾液濃縮至比重為1.1一1.2g/ml;將浸膏與靈芝孢子粉及揮發(fā)油包合物混合，8(TC烘干2小時，粉碎過80目篩，采用流化床一步制粒，即得。實施例5本發(fā)明中藥復方靈芝顆粒由下述原料按所述重量制備而成靈芝1800g、靈芝孢子粉455g、白術350g、三七175g、川芎135g、僵蠶130g、白花蛇舌草130g、土茯苓120g、甘草47g。除按照實施例1的方法制備外，最后制粒采用濕法制粒，即用搖擺制粒機制粒，烘干即得。實施例6取按照實施例1制備的顆粒3份，加入乳糖3份，加入0.1份的羧甲基纖維素鈉，壓片，包裝，得到復方靈芝片劑。實施例7取按照實施例1制備的顆粒，直接灌裝膠囊，包裝即得。實施例8本發(fā)明中藥復方靈芝顆粒由下述原料按所述重量制備而成靈芝2500g、靈芝孢子粉450g、白術330g、三七160g、川芎145g、僵蠶90g、白花蛇舌草90g、土茯苓90g、甘草40g。其顆粒劑按實施例4中的任意一種制備方法制備。實施例9本發(fā)明中藥復方靈芝顆粒由下述原料按所述重量制備而成靈芝2750g、靈芝孢子粉560g、白術360g、三七180g、川芎165g、僵蠶110g、白花蛇舌草110g、土茯苓110g、甘草60g。其顆粒劑按實施例4中的任意一種制備方法制備。實施例10按照本發(fā)明實施例3制備的復方靈芝顆粒，其藥效學結果如下-抗腫瘤藥效學試驗名稱復方靈芝顆粒(以下簡稱靈芝顆粒)規(guī)格每克相當于生藥材3.93g配制方法精密稱取一定量的靈芝顆粒加入0.5Q/。的CMC-Na混懸至所需陽性對照藥注射用環(huán)磷酰胺(CTX):上海環(huán)聯(lián)制藥有限公司，批號050310;5-氟尿嘧啶(5-Fu):上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號041006;注射用絲裂霉素(MMC):日本協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會社，批號224AEJ;華蟾素片安徽金蟾生化股份有限公司，批號050910;香菇菌多糖片湖北吉達藥業(yè)有限公司。批號050603。陽性藥選擇依據(jù)①環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素分別屬烷化劑、抗代謝物、抗腫瘤抗生素類抗腫瘤藥物，臨床廣泛用于腫瘤的治療。試驗中用于考察試驗方法的成功與否，同時聯(lián)合增效試驗中作為傳統(tǒng)化療藥物的單方用藥。②華蟾素片為市售較好的抗腫瘤輔助用藥，可作為復方靈芝顆粒主要藥效學的比較實驗用藥。③香菇菌多糖片為市售較好的免疫調節(jié)藥，可作為靈芝扶正顆粒輔助藥效學的比較實驗用藥?？瞻讓φ账?.5%羧甲基纖維素鈉中國醫(yī)藥(集團)上?；瘜W試劑公司，批號F20020715。實驗方法及實驗結果(一)抗腫瘤作用1體外實驗1.1靈芝顆粒藥液的配制取3g靈芝顆粒，充分研細，加水10mL混懸，超聲30min，離心取上清，用0.22pm無菌微孔濾膜過濾除菌，即為藥物的飽和水溶液(母液)。將母液與RPMI1640培養(yǎng)液按l:10，1:20，1:40，1:80，1:160，1:320配成6個濃度的藥液，分別稱藥液I、II、III、IV、V、VI。1.2靈芝顆粒對人癌細胞體外增殖的影響采用SRB法，取對數(shù)生長期的Hela及HepG-2細胞，臺盼藍排染法計數(shù)活細胞數(shù)，RPMI1640培養(yǎng)液調整細胞密度分別為4X104/mL，以100pL/wel1接種于96孔板內，置5%<:02培養(yǎng)箱內37"C培養(yǎng)24h。分別加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)液100^iL/we11，每個濃度5個復孔，同時設陰性對照、陽性對照(鹽酸多柔米星，終濃度2ng/mL)。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，SRB法490nm處檢測OD值，按下述公式計算藥物對腫瘤細胞體外增殖的抑制率。實驗重復三次，結果見表l。IR=(OD空白-OD給藥)/OD空白X1000/。1.3靈芝顆粒對骨髓細胞的影響12昆明種小鼠3只，體重18-22g，雄性。無菌取股骨，放入RPMI1640培養(yǎng)液中，用1mL注射器吹出骨髓，200目篩網(wǎng)過濾，1000rpm離心5min，去上清，用RPMI1640培養(yǎng)液(含20%FBS)混懸，放入25mL培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。以下實驗步驟同上，陽性藥鹽酸多柔米星終濃度為0.02ng/mL。試驗重復三次，實驗結果見表2。由表1結果可見，靈芝扶正顆粒水溶液對Hela及HepG-2細胞體外增殖有一定得抑制作用，抑制率隨藥液濃度的降低而降低，最大濃度藥液抑制率約為30%左右。表1靈芝扶正顆粒水溶液對人癌細胞體外增殖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>預實驗結果顯示，鹽酸多柔米星0.02ng/mL對Hela細胞體外增殖的抑制率約為30%，相同劑量的鹽酸多柔米星對小鼠骨髓細胞的抑制率大于30%。而靈芝扶正顆粒溶液對骨髓細胞體外增殖無顯著影響。結果見表2。表2靈芝顆粒水溶液對骨髓細胞體外增殖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>多柔米星0.02ng/mL藥I藥II藥III藥IV藥V藥VI31%7%3%2%1%2%2%35%8%4%3%2%1%2%36%6%5%5%2%1%3%2體內試驗2.1給藥途徑、劑量及容量灌胃給藥，與擬臨床給藥途徑一致。靈芝顆粒設低、中、高三個劑量，分別相當于靈芝顆粒生藥量2.25、4.50、9.0g/kg。給藥容量0.2mL/10g。表3給藥途徑、給藥劑量及給藥容量藥物(g/kg)給藥途徑給藥體積(ml/10g)2.2靈芝顆粒對小鼠移植性肉瘤818。的生長抑制作用[1~2]昆明種小鼠60只，雄性，隨機分為6組，每組10只。分別為空白對照組(0.5%CMC-Na)，靈芝扶正顆粒低、中、高劑量組(相當于靈芝扶正顆粒生藥量2.25、4.50、9.00g/kg)，陽性藥環(huán)磷酰胺組(0.03g/kg)，陽性藥華蟾素組(0.75g/kg)。除陽性藥環(huán)磷酰胺組外，其余各組動物連續(xù)灌胃給藥6天。第6天時，無菌吸取接種810天的肉瘤S^傳代小鼠腹水，用生理鹽水稀釋成靈芝顆粒低劑量2.25靈芝顆粒中劑量4.50靈芝顆粒高劑量9.00環(huán)磷酰胺低劑量0.01環(huán)磷酰胺中劑量0.02環(huán)磷酰胺高劑量0.035-氟尿嘧啶低劑量0.015-氟尿嘧啶高劑量0.02絲裂霉素低劑量0.001絲裂霉素高劑量0麓5華蟾素0.75香菇多糖0.005222222.222222胃胃胃腔腔腔腔腔腔腔胃胃灌灌灌腹腹腹腹腹腹腹灌灌145xl()S/mL的瘤細胞懸液，每只小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2mL。接種后，環(huán)磷酰胺組隔日腹腔注射給藥，其余各組繼續(xù)每天灌胃給予藥物或溶媒l次。第14天處死各組小鼠，稱體重，剝取瘤塊并稱瘤重，計算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率=(空白對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/空白對照組平均瘤重xl00。/。。實驗重復3次。由表46結果可見，靈芝顆?？蓜┝恳蕾囆缘囊种菩∈笠浦残匀饬鯯,8o的生長。中、高劑量對小鼠肉瘤S咖的生長均有明顯的抑制作用，試驗重復3次的抑瘤率分別為32%、34%、30%和41%、42%、41%。靈芝顆粒低劑量雖有抑制小鼠肉瘤S咖生長的趨勢，抑瘤率約為20%，但與空白對照組比較瘤重無顯著性差異。受試物各劑量組動物一般狀態(tài)良好，體重正常增長，未見明顯毒性反應。陽性對照藥環(huán)磷酰胺抑瘤作用明顯，抑瘤率約為80%左右，但與空白組比較動物體重明顯降低。表4靈芝顆粒對小鼠移植性S咖肉瘤生長的影響(^ts)組別劑量動物數(shù)(n)體重(g)瘤重抑瘤率(g/kg)給藥前給藥后給藥前給藥后(g)(%)空白組-101021.0±0,630.8±3.51.19±0.27-環(huán)磷酰胺0,0310820.5±0.823.3±2.8**0.23±0.17**80%華蟾素0.7510820,4±1.426.8±6.41.03±0.3814%低劑量2.2510820.2±1.227.4±5.30.93±0.2622%中劑量4.5010820.8±1.125.5±5.0*0.81±0.25**32%高劑量9.0010920.8±1.027.6±5.00,71±0.23**41%*尸<0.05,**P<0.01與空白組比較表5靈芝顆粒對小鼠移植性s,8。肉瘤生長的影響(；±s)組別劑量動物數(shù)(n)體重(g)瘤重抑瘤率(g/kg)給藥前給藥后給藥前給藥后(g)(%)空白組-10820.6±1.330.8±3.51.20±0.21-環(huán)磷酰胺0.0310820.5±1.523肚3.3^0.23±0.15**81%華蟾素0.7510920.3±1.531.4±3.11.03±0.2615%低劑量2.2510920.1±1.631.0±5.80.93±0.20*22%中劑量4.5010820.6±1.629.8±1.90.80±0.15**34%高劑量9.0010820.1±1.627.2±5.60.70±0.09**42%*P<0.05,**尸<0.01與空白組比較表6靈芝顆粒對小鼠移植性S咖肉瘤生長的影響(S±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>*尸<0.05,**尸<0.01與空白組比較2.3靈芝顆粒對小鼠移植性1122肝癌生長的抑制作用[1~21實驗方法同"2.2靈芝顆粒對小鼠移植性肉瘤S^的生長抑制作用"。結果見表79。結果表明，靈芝顆粒低、中、高劑量對小鼠移植性H22肝癌的生長均有一定的抑制作用。高、中劑量組瘤重與空白組相比，差別具有顯著性意義，抑瘤率分別大于40%和30%。受試物組動物狀態(tài)良好，體重增長正常。陽性對照藥環(huán)磷酰胺抑瘤作用明顯，抑瘤率約為80%左右，但與空白組比較動物體重明顯降低。表7靈芝顆粒對小鼠移植性H22肝癌生長的影響(5±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>*戶<0.05,**P<0.01與空白組比較表8靈芝顆粒對小鼠移植性H22肝癌生長的影響(；士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>*尸<0.05,村PO.Ol與空白組比較2.4靈芝顆粒對C57BL/6小鼠移植性Lewis月巿癌的生長抑制作用^21無菌剝離接種10-14天的C57BL/6小鼠Lewis肺癌瘤塊，用組織研磨器研碎，生理鹽水稀釋成5xl0"mL的瘤細胞懸液，每只C57BL/6小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2mL。接種24小時后，將小鼠隨機分為6組，每組10只。分別為空白對照組(0.5%CMC-Na)，靈芝顆粒低、中、高劑量組(相當于靈芝顆粒生藥量2.25、4.50、9.00g/kg)，陽性藥環(huán)磷酰胺組(0.03g/kg)，陽性藥華蟾素組(0.75g/kg)。除陽性對照藥環(huán)磷酰胺隔日腹腔注射給藥外，其余各組每日均灌胃給藥或溶媒l次，連續(xù)10天。第ll天處死小鼠，稱體重，剝取瘤塊并稱瘤重，計算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率=(空白對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/空白對照組平均瘤重xlOOM。實驗重復3次。結果顯示，靈芝顆粒對小鼠移植性Lewis肺癌的生長有一定的抑制作用，且動物一般體征、生長狀態(tài)良好，體重與空白對照組比較未見顯著性差異。低、中、高劑量對小鼠移植性Lewis肺癌的生長均有明顯的抑制作用，試驗重復3次的抑瘤率分別為23%、22%、22%，30%、30%、35%和43%、44%、43%。華蟾素亦可顯著抑制小鼠移植性Lewis肺癌的生長，抑瘤率約為40%。實驗結果見表1012。表IO靈芝顆粒對小鼠移植性Lewis肺癌生長的影響(；±s)組別劑量動物數(shù)(n)體重(g)瘤重抑瘤率給藥前給藥后給藥前給藥后(g)(%)空白組-101018.3±0.520.8±2.12.44±0.56-環(huán)磷酰胺0.0310918.2±0.817.1±2.1**0.46±0.30**81%華蟾素0.7510818.3±0.721.0±1.11.60±0.27**34%低劑量2.25101018.5±0.820.9±1.01.87±0.27*23%中劑量4.50101018.4±0.620.4±1.71.71±0.42**30%高劑量9.00101018.3±0.721.0±0.91.38±0.33**43%尸<0.05，**尸<0.01與空白組比較表ll靈芝顆粒對小鼠移植性Lewis肺癌生長的影響(；士s)組別劑量動物數(shù)(n)體重(g)瘤重抑瘤率(g/kg)給藥前給藥后給藥前給藥后(g)(%)空白組-101018,4±0.621.8±2.32.23±0.31—環(huán)磷酰胺0.0310918.3±0.517.8±1.1**0.37±0.10**83%華蟾素0.75101018.2±0.720.2±1.41.54±0.36**31%低劑量2.25101018.2±0.820.4±0.91.75±0.30**22%中劑量4.50101018.6±0.821.0±1.11.56±0.44**30%高劑量9.00101018.1±0.720.8±U1.25±0.40**44%尸<0.05,**P<0.01與空白組比較表12靈芝顆粒對小鼠移植性Lewis肺癌生長的影響(；士s)組別劑量動物數(shù)(n)體重(g)瘤重抑瘤率(g/kg)給藥前給藥后給藥前給藥后(g)(%)空白組-101018.4±0.724.0±1.92.34±0.67—環(huán)磷酰胺0.0310918.6±0.920.7±1.7**0.43±0.13**82%華蟾素0.75101018.4±0.624.7±1.31.42±0.48**39%低劑量2.25101018,5±0.723.3±3.41.83±0.4322%中劑量4.50101018.4±0.723.7±1.91.51±0.39**35%高劑量9.00101018,4±0.924.7±1.71.35±0.45**43%*尸<0,05,**<0.01與空白組比較(二)與傳統(tǒng)化療藥物聯(lián)合應用的增效作用L與環(huán)磷酰胺聯(lián)合應用對小鼠移植性S^肉瘤生長的影響昆明種小鼠90只，雄性，隨機分為9組，每組10只。分別為空白對照組(0.5%CMC-Na)，環(huán)磷酰胺中劑量組(0.02g/kg)，環(huán)磷酰胺低劑量組(0.01g/kg)，靈芝顆粒低、中、高劑量組(相當于靈芝顆粒生藥量2.25、4.50、9.00g/kg)，靈芝顆粒低劑量和環(huán)磷酰胺低劑量合用組，靈芝顆粒中劑量和環(huán)磷酰胺低劑量合用組，靈芝顆粒高劑量和環(huán)磷酰胺低劑量合用組。除環(huán)磷酰胺外，其余藥物或溶媒連續(xù)灌胃給藥6天。第6天時，無菌吸取于接種8~10天的肉瘤S剛傳代小鼠腹水，用生理鹽水稀釋成5xl06/mL的瘤細胞懸液，每只小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2mL。接種后，環(huán)磷酰胺每曰腹腔注射給藥，其余各組繼續(xù)每天灌胃給予藥物或溶媒l次。第14天處死各組小鼠，稱體重，剝取瘤塊并稱瘤重，計算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率=(空白對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/空白對照組平均瘤重x100。/。。實驗重復結果顯示，靈芝顆粒與化療藥物環(huán)磷酰胺聯(lián)合應用，抑瘤率高于單純應用環(huán)磷酰胺藥物組。靈芝顆粒9.00g/kg與CTX0.01g/kg合用可以提高CTX的抑瘤率，使CTX的抑瘤率從27%提高到59%，與CTX0.02g/kg抑瘤作用相當。結果見表13。表13靈芝顆粒與環(huán)磷酰胺聯(lián)合應用對小鼠移植性S18Q肉瘤生長的影響(x士s)組別劑量(g/kg)-動物數(shù)瘤重(g)抑瘤率給藥前給藥后空白組-10101.17±0.18—環(huán)磷酰胺中劑量0.0210100.46±0.20**60%環(huán)磷酰胺低劑量0.0110100.86±0.20**27%低劑量2.251090.90士0.16"23%中劑量4.5010100.80±0.24**31%高劑量9.001090.65±0.21**45%低劑量+環(huán)磷酰胺低劑量2.25+0.011090.81±0.33**31%中劑量+環(huán)磷酰胺低劑量4.50+0.0110100.63±0.19**#46%高劑量+環(huán)磷酰胺低劑量9.00+0.0110100.48±0.10**##59%*i50.05，**P<0.01與空白組比較；###P<0.01與環(huán)磷酰胺低劑量組比較192與5-氟尿嘧啶聯(lián)合應用對小鼠移植性S^肉瘤生長的影響昆明種小鼠90只，雄性，隨機分為9組，每組10只。分別為空白對照組(0.5%CMC-Na)，5-氟尿嘧啶高劑量組(0.02g/kg)，5-氟尿嘧啶低劑量組(0.01g/kg)，靈芝顆粒低、中、高劑量組(相當于靈芝顆粒生藥量2.25、4.50、9.0g/kg)，靈芝顆粒低劑量和5-氟尿嘧啶低劑量合用組，靈芝顆粒中劑量和5-氟尿嘧啶低劑量合用組，靈芝顆粒高劑量和5-氟尿嘧啶低劑量合用組。除5-氟尿嘧啶外，其余藥物或溶媒連續(xù)灌胃給藥6天。第6天時，無菌吸取于接種8~10天的肉瘤S咖傳代小鼠腹水，用生理鹽水稀釋成5xl0VmL的瘤細胞懸液，每只小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2mL。接種后，5-氟尿嘧啶每日腹腔注射給藥，其余各組繼續(xù)每天灌胃給予藥物或溶媒l次。第14天處死各組小鼠，稱體重，剝取瘤塊并稱瘤重，計算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率=(空白對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/空白對照組平均瘤重xlOOn/c)。實驗重復3次。結果顯示，靈芝顆粒與化療藥物5-氟尿嘧啶聯(lián)合應用，抑瘤率亦高于5-氟尿嘧啶單純應用藥物組。與5-Fu0.01g/kg合用能提高5-Fu單方的抑瘤率，靈芝顆粒2.25g/kg、4.50g/kg、9.00g/kg使5-Fu的抑瘤率從24%分別提高到26%、48%、59%。結果見表14。表14靈芝顆粒與5-氟尿嘧啶聯(lián)合應用對小鼠移植性S18C肉瘤生長的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>承戶0.05，**尸<0.01與空白組比較；##尸<0.01與5-氟尿嘧啶低劑量組比較3與絲裂霉素聯(lián)合應用對小鼠移植性S18Q肉瘤生長的影響昆明種小鼠90只，雄性，隨機分為9組，每組10只。分別為空白對照組(0.5%CMC-Na)，絲裂霉素高劑量組(0.0015g/kg)，絲裂霉素低劑量組(0.0010g/kg)，靈芝顆粒低、中、高劑量組(相當于靈芝顆粒生藥量2.25、4.50、9.0g/kg)，靈芝顆粒低劑量和絲裂霉素低劑量合用組，靈芝顆粒中劑量和絲裂霉素低劑量合用組，靈芝顆粒高劑量和絲裂霉素低劑量合用組。除絲裂霉素外，其余藥物或溶媒連續(xù)灌胃給藥6天。第6天時，無菌吸取于接種8~10天的肉瘤S^傳代小鼠腹水，用生理鹽水稀釋成5xl0VmL的瘤細胞懸液，每只小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2mL。接種后，絲裂霉素每日腹腔注射給藥，其余各組繼續(xù)每天灌胃給予藥物或溶媒l次。第14天處死各組小鼠，稱體重，剝取瘤塊并稱瘤重，計算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率=(空白對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/空白對照組平均瘤重xl00。/。。實驗重復3結果顯示，靈芝顆粒與化療藥物絲裂霉素1mg/kg合用，抑瘤率亦高于單純應用絲裂霉素藥物組。結果見表15。表15靈芝顆粒與絲裂霉素聯(lián)合應用對小鼠移植性Si8o肉瘤生長的影響(;士s)組別劑量動物數(shù)瘤重(g)抑瘤率給藥前給藥后空白組-10101.18±0,12—絲裂霉素高劑量0扁51090.58±0.16**50%絲裂霉素低劑量0扁1090.84±0.25**29%低劑量2.251090.94±0.23*20%中劑量4.5010100.81±0.25**31%高劑量9.001090.69±0.25**42%低劑量+絲裂霉素低劑量2.25+0.00110100.83±0.19**29%中劑量+絲裂霉素低劑量4.50+0.00110100.78±0.11**34%高劑量+絲裂霉素低劑量9.00+0.00110100.55±0.12**#53%*P<0.05,**P<0.01與空白組比較；#/><0.05與絲裂霉素低劑量組比較(三)對傳統(tǒng)化療藥物所致骨髓抑制的保護作用PI1靈芝顆粒對環(huán)磷酰胺引起的白細胞減少的保護作用昆明種小鼠60只，雄性，隨機分為6組，分別為空白對照組，環(huán)磷酰胺模型組，陽性藥香菇多糖組(0.005g/kg)，靈芝顆粒低、中、高劑量組(相當于靈芝顆粒生藥量2.25、4.50、9.0g/kg)。各給藥組連續(xù)灌胃給藥7天，空白對照組，環(huán)磷酰胺模型組每天給予等容積的0.5%CMC-Na。第1天給藥l小時后，除空白組外，各組腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg復制免疫低下模型，空白組腹腔注射等量生理鹽水。分別于第3，5，7天給藥1.5小時后眼眶靜脈叢取血，進行白細胞計數(shù)。實驗結果見表16。結果表明，環(huán)磷酰胺100mg/kg給藥后3-5天時動物外周血白細胞計數(shù)明顯較空白組低。靈芝顆粒高劑量組在給藥第5天時與環(huán)磷酰胺模型組相比白細胞數(shù)明顯提高，給藥第3天時高劑量組動物外周血白細胞數(shù)有增加趨勢，但與環(huán)磷酰胺模型組相比統(tǒng)計不顯著。表16靈芝顆粒對環(huán)磷酰胺造成的白細胞減少的保護作用(5±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>"PO鹿與空白組比較；弁P〈0.05與模型組比較2靈芝顆粒對5-氟尿嘧啶引起的白細胞減少的保護作用試驗方法同3.1，實驗結果見表17。結果表明，靈芝顆粒對5-氟尿嘧啶造成的白細胞減少具有保護作用，靈芝顆粒高劑量在給藥第7天時的白細胞數(shù)相對模型組有明顯提高。表17靈芝顆粒對5-氟尿嘧啶造成的白細胞減少的保護作用(5±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>高劑量9.001092685±10082894±13268700±2422#*P<0.05,**P<0.01與空白組比較；#P<0.05與模型組比較(四)免疫調節(jié)作用1靈芝顆粒對環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫器官臟器系數(shù)的影響實驗方法同"3.1靈芝顆粒對環(huán)磷酰胺引起的白細胞減少的保護作用"，實驗結束后，處死小鼠并稱體重，解剖脾臟、胸腺稱重，計算脾指數(shù)，胸腺指數(shù)。結果見表18。脾指數(shù)=脾重/體重(mg/g)胸腺指數(shù)=胸腺重/體重(mg/g)由表18可見，靈芝顆粒高劑量能明顯提高免疫低下小鼠的胸腺指數(shù)，與環(huán)磷酰胺模型組比較有顯著性差異。靈芝顆粒對免疫低下小鼠的脾指數(shù)未見明顯影響。表18靈芝顆粒對胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響(5±S)組別劑量(g/kg)脾指數(shù)(mg/g)胸腺指數(shù)(mg/g)空白組—5.16±1.084.37±1.51環(huán)磷酰胺模型組0.014.53±1.261.64±1.06**香燕多糖陽性組0.0054.15±1.452.79±1,08#低劑量組2.254.02±0.492.07±1.15中劑量組4.504.35±1.652.26±0.81高劑量組9.004.28±1.072.63±0.78#**P<0.01與空白組比較；#P<0.05與模型組比較2對免疫低下小鼠碳粒廓清能力的影響4昆明種小鼠60只，雄性，隨機分為6組，即空白對照組，環(huán)磷酰胺模型組，陽性藥香菇多糖組(5mg/kg)，靈芝顆粒低、中、高劑量組(相當于靈芝顆粒生藥量2.25、4.50、9.0g/kg)。各給藥組每日灌胃給藥一次，空白對照組，模型組給予等容積的0.5。/。CMC-Na，連續(xù)給藥7天。第2、3天給藥1小時后，除空白組外，各組每只小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg復制免疫低下模型，空白組腹腔注射等量的生理鹽水。末次給藥1.5小時后，尾靜脈注射25。/。印度墨汁10mL/kg，于注射后2、12min眼眶靜脈叢取血20uL，溶于2mL0.1。/。Na2C(V溶液中，在640nm測定吸光度OD值，同時摘23取小鼠肝臟、脾臟，稱濕重，按下式計算廓清指數(shù)K及吞噬指數(shù)a,實驗結果見表19。K=(1ogOD廣logOD2)/(t2-t!)01=1^3*體重/(肝重+脾重)(OD!、OD2分別為兩次取血所得的光密度；t2+:為兩次取血樣的時間差，此次實驗中t2+二10)結果顯示腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg能顯著降低小鼠的廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)ou靈芝顆粒各劑量組能明顯提高免疫低下小鼠的廓清指數(shù)K，高、中劑量的廓清指數(shù)為0.047±0.016和0.048±0.013，與模型組比較有顯著性差異；靈芝顆粒高、中劑量亦有可提高免疫低下小鼠的吞噬指數(shù)a的趨勢，但與模型組比較差異不顯著?？梢婌`芝扶正顆粒能提高小鼠的非特異性免疫功能。表19靈芝顆粒對廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)的影響(^hs)組別/:、^Z"TZ~~^TT^~廓清指數(shù)K吞噬指數(shù)_(g/kg)實驗前實驗后_空白組—1080.057±0.0196.789±1.594環(huán)磷酰胺組0.0110了0.032±0.008*5.934±0.837*香菇多糖組o馬1080.049±0.014##6.543±0.639低劑量2.251090.034±0.0135.217±1.436中劑量4.5010100.047±0.016#6.131±1.466高劑量9,001080廁±0.013##6.485±0.803承PO.05與空白組比較；#P<0.05,##P<0.01與模型組比較3對免疫低下小鼠血清溶血素的影響昆明種小鼠60只，雄性。分組、給藥劑量及給藥方式同"4.2對免疫低下小鼠碳粒廓清能力的影響"，各給藥組每日灌胃給藥一次，空白對照組,模型組給予等容積的0.5%CMC-Na，連續(xù)給藥9天。除空白組，各組于第3、4天給藥l小時后腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg，復制免疫低下模型，空白組腹腔注射等量的生理鹽水。第3、4、5天每鼠腹腔注射5%綿羊紅細胞懸液0.2mL致敏。最后一次給藥1.5小時后眼球后靜脈叢采血，分離血清，用生理鹽水稀釋300倍。取稀釋的血清lmL、5X綿羊紅細胞懸液0.5mL、10%補體lmL混合，37。C水浴保溫30min，0。C冰箱中終止反應，1500rpm離心5min，取上清液于7230分光光度計540nm處比色，測光密度。實驗結果見表20。結果顯示腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg能顯著降低小鼠的OD值，靈芝顆粒各劑量組能明顯提高免疫低下小鼠的OD值，中劑量組與模型組比較有顯著性差別，作用與陽性藥香菇多糖組相當?？梢婌`芝顆粒能提高小鼠的體液免疫功能。表20靈芝顆粒對血清溶血素的影晌(5±s)組別劑量動物數(shù)OD值(g/kg)實驗前實驗后空白組—1080.262±0.066環(huán)磷酰胺模型組0.011070.184±0.028*香菇多糖陽性組0.0051090.224±0.031#低劑量組2.251080.216±0.036中劑量組4.501080.223±0.031#高劑量組9.001080.213±0.028*PO.05與空白組比較；#PO.05與模型組比較4二硝基氯苯誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應實驗5]昆明種小白鼠60只，雄性。分組、給藥劑量及給藥方式同"4.2對免疫低下小鼠碳粒廓清能力的影響"，各給藥組每日灌胃給藥l次，空白對照組，模型組給予等容積的0.5。/。CMC-Na，連續(xù)給藥10天。除空白組外，各組于第4、5天灌胃給藥1小時后腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg，復制免疫低下模型，空白組腹腔注射等量的生理鹽水。第4天灌胃給藥1.5小時后每鼠頸部皮下注射20pL7%二硝基氯苯-丙酮溶液致敏。于第9天每鼠右耳(兩面)均勻涂抹7%二硝基氯苯溶液20^L，進行攻擊。24小時后處死小鼠剪下兩耳，用直徑8mm的不銹鋼圓沖沿耳緣相同部位沖下耳片，稱量耳片重量，以左右兩耳重量之差表示遲發(fā)超敏反應的程度。實驗結果見表21。靈芝顆粒高、中、低劑量組可提高二硝基氯苯誘導遲發(fā)型超敏反應小鼠的耳腫脹度；靈芝顆粒高劑量組動物耳腫脹度與模型組比較有顯著性差別。提示靈芝顆粒可能對遲發(fā)型超敏反應中T淋巴細胞活化有促進作用。表21靈芝顆粒對左右耳片重差的影響(5±S)組別劑量動物數(shù)左右耳片重量差Cg/kg)實驗前實驗后(mg)空白組—10916.2±5.1環(huán)磷酰胺模型組0.0110109.0±2.9*香菇多糖陽性組0.00510109.5±3.3低劑量組2.2510911.0±4.6中劑量組4.5010914.2±4.7高劑量組9.0010915.5±5.9#*P<0.05與空白組比較；弁PO.05與模型組比較4.5NK細胞測定實驗問昆明種小鼠42只，雄性。分組、給藥劑量及給藥方式同"4.2對免疫低下小鼠碳粒廓清能力的影響"，各給藥組每日灌胃給藥一次，空白對照組，模型組給予等容積的0.5%CMC-Na，連續(xù)給藥9天。除空白組，各組第1、2天給藥l小時后腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg，復制免疫低下模型，空白組腹腔注射等量的生理鹽水。第9天脫臼處死小鼠，無菌條件取脾，用眼科鑷輕輕將脾磨碎，200目篩網(wǎng)過濾，制成單個脾細胞懸液；1000ipm離心5min，去上清，低滲除去紅細胞，1000rpm離心5min，去上清，用RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋成3xl06/mL的脾細胞懸液。靶細胞取HeLa體外培養(yǎng)細胞，RPMI-1640培養(yǎng)液調整細胞濃度為1.5xl05/mL，使效靶細胞之比為20:1。取96孔培養(yǎng)板分別加入效應細胞和靶細胞，另設效應細胞和靶細胞對照，于37t:5。/。C02條件培養(yǎng)12小時后，加入MTT染色液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，離心吸棄上清，加入DMSO，搖勻，570nm測OD值。按公式計算NK細胞活性。實驗結果見表20。NK細胞活性％={[靶細胞對照組OD均值-(實驗組OD均值-效應細胞OD均值)]/靶細胞對照組OD均值)xl00n/。由表22可見，靈芝顆粒高劑量能明顯提高免疫低下小鼠的NK細胞活性，與模型組比較有顯著性差異。表22靈芝顆粒對NK細胞活性的影響(5±s，n=7)組別劑量NK細胞活性26<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>*P<0.05與空白組比較；#P<0.05與模型組比較結論1抗腫瘤作用復方靈芝顆粒對小鼠移植性S咖肉瘤、H22肝癌、Lewis肺癌的生長均有明顯的抑制作用，復方靈芝顆粒高、中劑量的抑瘤率分別約為40%和30%左右。且實驗的重復性較好。復方靈芝顆粒水溶液對人宮頸癌HeLa細胞及肝癌HepG-2細胞體外增殖有一定的抑制作用。2聯(lián)合增效作用復方靈芝顆粒各劑量與環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素合用，均能提高三種化療藥的抑瘤率，其中高劑量作用最明顯。3減毒作用復方靈芝顆粒高劑量能減輕傳統(tǒng)化療藥物環(huán)磷酰胺和5-氟尿嘧啶造成的白細胞降低。4免疫調節(jié)作用復方靈芝顆粒具有調節(jié)免疫作用，能夠提高免疫低下小鼠的胸腺指數(shù)、巨噬細胞吞噬能力、特異性免疫應答和NK細胞活性。因此，綜上所述，本發(fā)明復方靈芝顆粒具有確切的抗腫瘤作用，與化療藥物聯(lián)合應用能夠提高化療藥的療效，同時可減輕化療藥物的毒性。其抗腫瘤作用的機制可能與其調節(jié)免疫機能、抑制腫瘤細胞生長有關。實施例11穩(wěn)定性試驗，取按照本發(fā)明實施例3制備得到的顆粒做相關穩(wěn)定性試驗:1.樣品來源靈芝顆粒，批號050701050702050703為三批中試樣品。2.考察項目性狀、鑒別、裝量、水分、粒度、溶化性、微生物限度、含量等。3.穩(wěn)定性考察3丄加速試驗將三批包裝樣品置于留樣室(溫度40土2'C、RH75±5%)中，放置6個月，于第l、2、3、6個月取樣測定。檢驗結果見表。加速試驗結果時間批號性狀-鑒別裝量差異234水分%粒度微生物限度溶化性含量mg/g0月加速1月符合規(guī)定符合規(guī)定本符a050703品SS為一050701050702-乂j--符合050701，規(guī)定揭符a05濯，規(guī)i的"a050703顆〖=*i規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定3.5%3.6%3.8%符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定3.5%3.6%3.8%符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定4.554.484.514.664.434.52050701050702050703符合符合符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定符合符合符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定符合符合符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定3.7%3.9%4.1%符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定4.424.264.24結果表明加速樣品的各項指標與O月相比均無明顯變化，各項檢驗均符合規(guī)定(加速3月050701050702050703甜符合符合符合符合符合e規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定°符合符合符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定符合符合符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定規(guī)定3.6%3.8%3.9%符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定符合符合符合規(guī)定規(guī)定規(guī)定4.534.334.37050701050702050703加速6月955534合定合定合定符規(guī)符規(guī)符規(guī)合定合定合定符規(guī)符規(guī)符規(guī)合定合定合定符規(guī)符規(guī)符規(guī)合定合定合定符規(guī)符規(guī)符規(guī)合定合定合定符規(guī)符規(guī)符規(guī)合定合定合定符規(guī)符規(guī)符規(guī)合定合定合定符規(guī)符規(guī)符規(guī)合定合定合定符規(guī)符規(guī)符規(guī)j、氣芳香、味加速2月28權利要求1、一種抗癌中藥復方靈芝制劑，其特征在于它是由下述原料按所述重量份制備而成靈芝1500—4000份、靈芝孢子粉400—600份、白術250-400份、三七100—200份、川芎100—200份、僵蠶70—150份、白花蛇舌草70—150份、土茯苓70—150份、甘草40—60份。2、根據(jù)權利要求1所述的抗癌中藥復方靈芝制劑，其特征在于它是由下述原料按所述重量份制備而成靈芝2000—2300份、靈芝孢子粉400—500份、白術270—300份、三七140—160份、川芎120—140份、僵蠶80—100份、白花蛇舌草80—100份、土茯苓80—100份、甘草40—50份。3、一種權利要求1或2所述的抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，其特征在于它包括以下工藝步驟按上述重量比取白術，加水8_10倍水蒸汽蒸餾1.5-2.5小時，蒸餾所得揮發(fā)油，加入5—10倍量P—環(huán)糊精，加入膠體磨中，研磨30分鐘，低于4(TC真空干燥，得白術揮發(fā)油包合物；按上述重量比取靈芝、川芎、白花蛇舌草、土茯苓、僵蠶、甘草及上述蒸餾白術揮發(fā)油后的殘渣，加水8—10倍，煎煮2次，每次0.5-1.5小時，過濾，濾液濃縮至比重為1.11.2g/ml，殘渣棄去，然后，按上述重量比加入靈芝孢子粉及粉碎過篩的三七粉，充分混合，70—80'C干燥1.5-2.5小時，粉碎過篩，同白術揮發(fā)油包合物充分混合，置于流化床或濕法制粒機中制粒，得到本發(fā)明的復方靈芝顆粒。4、一種權利要求1或2所述的抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，其特征在于它包括以下工藝步驟按上述重量比取各種藥材，按總量9-ll倍量加水，煎煮2次，每次1.5-2.5小時，過濾，濾渣棄去，濾液濃縮至干，75-85"C真空干燥1.5-2.5小時，粉碎過篩，采用流化床一步粒機制粒，即得。5、一種權利要求1或2所述的抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，其特征在于它包括以下工藝步驟按上述重量比取除靈芝孢子粉外各種藥材，按總量9-ll倍量加水，煎煮2次，每次1.5-2.5小時，同時收集揮發(fā)油，收集的揮發(fā)油，采用9-ll倍量的P—CD進行包合，即在膠體磨中研磨0.3-0.8小時，烘干，粉碎，得揮發(fā)油P—CD包合物；煎煮液過濾，濾渣棄去，濾液濃縮至比重為1.1一1.2g/ml;將浸膏與靈芝孢子粉及揮發(fā)油包合物混合，75-85"C烘干1.5-2.5小時，粉碎過篩，采用流化床一步制粒，即得。6、根據(jù)權利要求3、4或5所述的抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，其特征在于取上述制備的顆粒3份，取3份填充輔料，0.l份崩解劑，壓片，得到中藥復方靈芝片劑。7、根據(jù)權利要求3、4或5所述的抗癌中藥復方靈芝制劑的制備方法，其特征在于取上述制備的顆粒直接灌裝膠囊，得中藥復方靈芝膠囊。全文摘要本發(fā)明公開了一種口服給藥的中藥復方靈芝制劑及其制備方法，屬醫(yī)藥、保健品
技術領域：
。它是由下述原料按所述重量份制備而成靈芝1500-4000份、靈芝孢子粉400-600份、白術250-400份、三七100-200份、川芎100-200份、僵蠶70-150份、白花蛇舌草70-150份、土茯苓70-150份、甘草40-60份。本發(fā)明藥物抗癌有效成分穩(wěn)定，經各種體內外試驗證實，具有較高的抑瘤率，可顯著提高機體免疫力，具有確切的抗腫瘤作用，與化療藥物聯(lián)合應用能夠提高化療藥的療效，同時可減輕化療藥物的毒性。文檔編號A61K36/88GK101450165SQ20071015861公開日2009年6月10日申請日期2007年11月29日優(yōu)先權日2007年11月29日發(fā)明者穆瑛俊,莉艾,董英杰,韓亞男申請人:北京久久方元保健品經銷有限公司