專利名稱：：一種破壁花粉的提取物及其提取方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種破壁花粉的提取物及其提取方法和應(yīng)用。技術(shù)背景花粉(pollen)是植物雄性配子體，例如向日葵花粉為菊科植物向日葵(i/e/^Wfew^ca/^to/wDari)的干燥成熟雄性繁殖器官，油菜花粉為十字花科植物油菜(&^^Cam^欲cwL.)的干燥成熟雄性繁殖器官?，F(xiàn)有研究表明花粉具有雌激素樣作用，可用于抗前列腺增生、前列腺炎等(杜旭，竇秋蓮，李春艷等.黑龍江葵花粉治療前列腺增生的藥效學(xué)研究.^房0^^/V發(fā)，2002;9(2):9495;吳巖印，趙筱萍，李乓.前列康治療前列腺增生的研究進(jìn)展.中國社區(qū)醫(yī)師，2007,23(2):44)。許多研究發(fā)現(xiàn)破壁花粉較未破壁花粉具有更佳的療效，現(xiàn)花粉的破壁方法包括酶破壁法、機(jī)械破壁法、溫差破壁法等(唐維,張星海.花粉破壁方法研究進(jìn)展，食品與發(fā)酵工業(yè)，2003;29(2):8692)。然而，更佳的是要得到花粉中的有效成分，以更好地提高藥效。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題即是提供一種具有更佳藥效的破壁花粉的提取物及其提取方法。本發(fā)明人經(jīng)過諸多試驗，驚奇地發(fā)現(xiàn)將破壁花粉，如向日葵、油菜花等破壁花粉溶液離心，取得的離心液經(jīng)過一定規(guī)格的膜微濾后取得的截留部分，具有較佳的抗炎和抗前列腺增生的作用。因此，本發(fā)明通過下列技術(shù)方案來解決上述問題。本發(fā)明提供的一種破壁花粉的提取方法，其包括將破壁花粉溶液離心，取得離心液采用《10KD的膜微濾，收集膜截留部分。本發(fā)明所說的破壁花粉溶液可以是現(xiàn)有固體的破壁花粉的提取液；也可以是采用現(xiàn)有花粉破壁技術(shù)制得的破壁花粉溶液，該溶液干燥后即可得到固體的破壁花粉。本發(fā)明優(yōu)選向日葵破壁花粉、油菜破壁花粉為例來進(jìn)行說明。較佳地，本發(fā)明的破壁花粉溶液選用簡單易得、經(jīng)濟(jì)的向日葵破壁花粉或油菜破壁花粉的水提取液。該水提取液可以由下列方法制得將向日葵破壁花粉或油菜破壁花粉用水在306(TC提取510小時。同其它常規(guī)提取工藝，更佳地是用水先浸泡花粉，攪拌成勻漿后再提??；每次提取用水以花粉重量的310倍為宜。當(dāng)然，本發(fā)明也可以將破壁工藝中最終得到的向日葵或油菜花破壁花粉溶液，例如將酶發(fā)酵破壁法制得的含有破壁花粉的發(fā)酵液(破壁方法可以參考張星海等.油菜花粉的微生物破壁技術(shù)研究，食品科學(xué)，2003，24(3):9295;以及公開號為CN1452888A的專利申請文件)直接進(jìn)行離心。由于上述破壁花粉溶液，不管是破壁花粉水提取液、還是破壁花粉的發(fā)酵液，通常為槳液，不能直接進(jìn)行膜過濾。故根據(jù)本發(fā)明，所述的離心以取得清液為目的，通常如選擇較慢的離心速度，則離心時間較長；反之選擇較快的離心速度，則離心時間較長。為更適于本
技術(shù)領(lǐng)域：
工業(yè)化生產(chǎn)的需求，所述的離心較佳地是以4000~8000轉(zhuǎn)/分離心30~60分鐘。顯然，為更充分地得到本發(fā)明的提取物，提高其收率，可將離心得到的殘渣再用水進(jìn)行上述提取，然后離心取上清液，如此重復(fù)通常2~3次后合并所有上清液進(jìn)行膜過濾；當(dāng)然也可以將各次上清液分別膜過濾后將最終產(chǎn)物合并。根據(jù)本發(fā)明，所述的膜優(yōu)選35KD的陶瓷膜。為便于保存和運輸，通常將膜截留部分采用常規(guī)技術(shù)如真空、冷凍等進(jìn)行干燥，得到粉末。而本發(fā)明要提供的一種破壁花粉提取物，即由上述提取方法制得。本發(fā)明制得的破壁花粉提取物經(jīng)動物試驗顯示，具有較強的抗炎及抗前列腺增生的作用，可制備成抗炎，以及抗前列腺炎、前列腺增生等前列腺疾病的藥物或保健食品。具體實施方式下面用實施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。實施例l向日葵破壁花粉水提取液的制備在向日葵破壁花粉中加入花粉重量3倍的水，浸泡，攪拌成勻漿，置30°C提取5小時。實施例2向日葵破壁花粉水提取液的制備在向日葵破壁花粉中加入花粉重量IO倍的水，浸泡，攪拌成勻漿，置6(TC提取10小時。實施例3向日葵破壁花粉發(fā)酵液的制備參照下列文獻(xiàn)張星海等.油菜花粉的微生物破壁技術(shù)研究，食品科學(xué)，2003，24(3):9295;以及公開號為CN1452888A的專利申請文件，具體步驟為①培養(yǎng)基的制備將黃豆用粉碎機(jī)碾碎，按l:IO的重量比例加水，在高壓鍋中蒸煮6080分鐘，用紗布過濾，或?qū)ⅫS豆包在紗布中蒸煮，提取黃豆汁，按10g黃豆，3g蔗糖，4g瓊脂的比例制備培養(yǎng)基;②滅菌、接種將剛制備的培養(yǎng)基趁熱分裝在培養(yǎng)皿中，滅菌，冷卻至室溫，分別接種試管菌種黑曲霉菌(Aspergillus3040sp.)和米曲霉菌(Aspergillus3514sp.)(購自浙江大學(xué)微生物研究所)，置283(TC的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時；③曲子制備采用麥麩培養(yǎng)基，按照體積比30%的比例，分別接種步驟②中培養(yǎng)皿中的菌種，在283(TC發(fā)酵2天，發(fā)酵完畢后，4000轉(zhuǎn)離心20分鐘分別獲得黑曲霉液和米曲霉液；④將上述黑曲霉液和米曲霉液按體積比2:13:1組成酶液，將干燥的向日葵花粉和酶液按照重量比1:3的比例混合均勻，置發(fā)酵罐中37'C發(fā)酵24小時，待pH值到4.5，停止發(fā)酵。實施例4向日葵破壁花粉提取物的制備將實施例1制得的向日葵破壁花粉水提取液以4000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，取上清液(離心液)，以5KD的陶瓷膜微濾，得到膜截留部分和膜透過部分，收集膜截留部分，并進(jìn)行冷凍干燥。實施例5向日葵破壁花粉提取物的制備將實施例2制得的向日葵破壁花粉水提取液以8000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，取上清液，以10KD的陶瓷膜微濾，得到膜截留部分和膜透過部分，收集膜截留部分，并進(jìn)行冷凍干燥。實施例6向日葵破壁花粉提取物的制備將實施例3制得的向日葵破壁花粉發(fā)酵液以6000轉(zhuǎn)/分離心60分鐘，取上清液，以3KD的陶瓷膜微濾，得到膜截留部分和膜透過部分，收集膜截留部分，并進(jìn)行冷凍干燥。實施例7油菜破壁花粉水提取液的制備在油菜破壁花粉中加入花粉重量6倍的水，浸泡，攪拌成勻漿，置45"C提取7小時。實施例8油菜破壁花粉水提取液的制備在油菜破壁花粉中加入花粉重量10倍的水，浸泡，攪拌成勻漿，置60°C提取IO小時。實施例9油菜破壁花粉發(fā)酵液的制備參照下列文獻(xiàn)張星海等.油菜花粉的微生物破壁技術(shù)研究，食品科學(xué)，2003,24(3):9295;以及公開號為CN1452888A的專利申請文件，具體步驟為①培養(yǎng)基的制備將黃豆用粉碎機(jī)碾碎，按l:IO的重量比例加水，在高壓鍋中蒸煮6080分鐘，用紗布過濾，或?qū)ⅫS豆包在紗布中蒸煮，提取黃豆汁，按10g黃豆，3g蔗糖，4g瓊脂的比例制備培養(yǎng)基;②滅菌、接種將剛制備的培養(yǎng)基趁熱分裝在培養(yǎng)皿中，滅菌，冷卻至室溫，分別接種試管菌種黑曲霉菌(Aspergillus3040sp.)和米曲霉菌(Aspergillus3514sp.)(購自浙江大學(xué)微生物研究所)，置283(TC的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時；③曲子制備采用麥麩培養(yǎng)基，按照體積比30%的比例，分別接種步驟②中培養(yǎng)皿中的菌種，在283(TC發(fā)酵2天，發(fā)酵完畢后，4000轉(zhuǎn)離心20分鐘分別獲得黑曲霉液和米曲霉液；④將上述黑曲霉液和米曲霉液按體積比2:13:1組成酶液，將干燥的油菜花粉和酶液按照重量比1:3的比例混合均勻，置發(fā)酵罐中37。C發(fā)酵24小時，待pH值到4.5，停止發(fā)酵。實施例IO油菜破壁花粉提取物的制備將實施例7制得的油菜破壁花粉水提取液以4000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，取上清液(離心液)，以5KD的陶瓷膜微濾，得到膜截留部分和膜透過部分，收集膜截留部分，并進(jìn)行冷凍干燥。實施例ll油菜破壁花粉提取物的制備將實施例8制得的油菜破壁花粉水提取液以8000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，取上清液，以10KD的陶瓷膜微濾，得到膜截留部分和膜透過部分，收集膜截留部分，并進(jìn)行冷凍干燥。實施例12油菜破壁花粉提取物的制備將實施例9制得的油菜破壁花粉發(fā)酵液以6000轉(zhuǎn)/分離心60分鐘，取上清液，以3KD的陶瓷膜微濾，得到膜截留部分和膜透過部分，收集膜截留部分，并進(jìn)行冷凍干燥。上述實施例中的向日葵破壁花粉和未破壁花粉為北京中健博元生物科技有限公司的產(chǎn)品；油菜花粉和破壁花粉為安徽省宣城市百康蜂業(yè)的產(chǎn)品；陶瓷膜為意大利水氣公司的產(chǎn)品。離心機(jī)為江蘇昆山市昆工環(huán)保機(jī)械有限公司SS450型離心機(jī)。試驗實施例1本發(fā)明破壁花粉提取物的抗炎作用SD大鼠按體重隨機(jī)分組每組10只，空白組給予0.4%的吐溫-80，試驗組按表1的劑量給予相應(yīng)供試品，陽性組給予阿司匹林為0.12g/kg,并給予現(xiàn)有花粉藥物前列康(油菜破壁花粉制劑)0.5g/kg劑量和舍尼通(裸麥破壁花粉提取物)0.015g/kg劑量作為對照。灌胃容積均為10ml/kg體重，連續(xù)給藥7天，末次給藥前l(fā)h用外徑千分尺測量大鼠左后足跖的厚度，給藥后lh左后足跖注射雞蛋清0.05ml/爪，然后于注射雞蛋清后2、4、6小時用外徑千分尺各測量一次左后足跖的厚度，測量時均在相同的部位，計算大鼠左后足跖在給藥后不同時間點的腫脹度，將其左后足跖腫脹度進(jìn)行組間比較，t檢驗。腫脹度(mm)-左后足跖厚度(注射雞蛋清后)一左后足跖厚度(注射雞蛋清前)，結(jié)果如下表1所示。表1本發(fā)明提取物對蛋清致大鼠足腫脹度的影響(7土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>可見，本發(fā)明向日葵破壁花粉提取物和油菜破壁花粉提取物的抗炎作用，如抗前列腺炎的療效較現(xiàn)常用的消炎藥阿司匹林更佳，也優(yōu)于現(xiàn)有破壁花粉制劑。試驗實施例2本發(fā)明破壁花粉提取物的抗前列腺增生作用取大鼠，隨機(jī)取9只做偽手術(shù)空白組，其他大鼠在無菌條件下，用2%的戊巴比妥鈉麻醉，摘除雙側(cè)睪丸，縫合皮膚。手術(shù)1周后，將去睪丸大鼠按體重隨機(jī)分組。除空白組外，其余大鼠每日按0.1ml/200g體重皮下注射丙酸睪酮，劑量為3mg/kg，共30d，試驗組和原料對照組按表2的劑量給予相應(yīng)實施例或原料供試品，陽性組分別給予前列康0.5g/kg劑量和舍尼通0.015g^g劑量，空白組和模型組給予等容積的蒸餾水，均灌胃給予，給藥容積為1.0ml/100g體重，l次/d，連續(xù)給藥30d。于末次給藥后2h處死動物，剖取前列腺各葉(腹、背+側(cè)葉)，用濾紙吸除表面液體，電子天平稱其濕重，計算前列腺各葉重量指數(shù)；前列腺各葉重量臟器指數(shù)=-xlOO體重結(jié)果如下表2所示。表2、本發(fā)明提取物對丙酸睪酮誘導(dǎo)前列腺增生大鼠模型前列腺指數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與模型組比較，><0.05》<0.01可見，本發(fā)明破壁花粉提取物的抗前列腺增生療效優(yōu)于現(xiàn)有破壁花粉制劑，特別是較現(xiàn)常用藥物前列康和舍尼通更佳。權(quán)利要求1、一種破壁花粉的提取方法，其包括將破壁花粉溶液離心，取得離心液采用≤10KD的膜微濾，收集膜截留部分。2、如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的破壁花粉溶液為破壁花粉的水提取液。3、如權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于所述的水提取液是由破壁花粉用3~10倍重量的水在3060'C提取5~10小時制得。4、如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的離心為4000~8000轉(zhuǎn)/分離心3060分鐘。5、如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的膜為3~5KD的陶瓷膜。6、如權(quán)利要求1所述,取方法，其特征在于將膜截留部分進(jìn)行干燥得到粉末。7、如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的破壁花粉為向曰葵或油菜花的破壁花粉。8、如權(quán)利要求17任一項所述的提取方法制得的破壁花粉提取物。9、如權(quán)利要求8所述的破壁花粉提取物在制備消炎藥物或保健食品中的應(yīng)用。10、如權(quán)利要求8所述的破壁花粉提取物在制備防治前列腺炎或前列腺增生的藥物或保健食品中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種破壁花粉的提取方法，其包括將向日葵或油菜花等破壁花粉溶液離心，取得離心液采用≤10KD的膜微濾，收集膜截留部分。本發(fā)明方法簡單，易于操作，制得的破壁花粉提取物具有較佳的消炎作用以及防治前列腺炎、前列腺增生等前列腺疾病的功效。文檔編號A61K36/28GK101332219SQ20071004327公開日2008年12月31日申請日期2007年6月29日優(yōu)先權(quán)日2007年6月29日發(fā)明者坤李,李永輝,楊義芳申請人:浙江海正藥業(yè)股份有限公司;上海醫(yī)藥工業(yè)研究院