專利名稱：葎草在制備抗無菌性炎癥藥物中的新用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及葎草在制藥領域的應用，特別是指葎草在制備抗無菌性炎癥藥物中的新用途。
背景技術：
醫(yī)學界把炎癥分為“細菌性炎癥”和“無菌性炎癥”兩大類，細菌性炎癥容易導致急性病癥的發(fā)作，所以普遍引起重視，大量的抗細菌性感染藥物如青霉素、碳青霉烯類抗生素作為有針對性的特效藥已被開發(fā)出來并陸續(xù)用于臨床，而無菌性炎癥卻沒有任何特效甚至確實能有效治療的藥物，所謂無菌性炎癥一般包括頸椎病、腰椎病、肩周炎、網(wǎng)球肘、肌筋膜綜合癥、風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、四肢麻木肌寒勞損、陳舊跌打損傷、癌癥疼痛等病癥；現(xiàn)代醫(yī)學研究已經(jīng)證明，增生的骨刺常刺入周圍軟組織，出現(xiàn)炎性滲出、水腫及代謝物的堆積，形成粘連，從而刺激神經(jīng)感受器產(chǎn)生疼痛感，無菌性炎癥在肌肉、筋膜、韌帶、周圍神經(jīng)叢、關節(jié)囊、血管壁形成的水腫和粘連壓迫脊髓、推動脈和神經(jīng)根，導致頸腰椎病復雜癥狀難以消除，粘連及鈣化的韌帶、筋膜，與肌肉牽拉，是許多無菌性炎癥疾病如頸腰椎病、肩周炎、肌筋膜綜合癥、骨關節(jié)炎等肌體功能障礙出現(xiàn)的原因，這些無菌性炎癥所引發(fā)的疾病雖多為慢性病，但仍在摧殘著全世界數(shù)十億人的健康。
葎草學名Humulus scandens(Lour.)Merr.英文名Japan Hop又叫拉拉秧、拉拉藤、五爪龍、大葉五爪龍、拉狗蛋、割人藤等，來源?？迫劜輰僦参锶劜軭umulus scandens(Lour.)Merr.的全草，除青海、新疆和西藏外，全國都有分布，據(jù)《全國中草藥匯編》等記載，具有清熱解毒，利尿消腫的功效。用于治療肺結(jié)核潮熱，腸胃炎，痢疾，感冒發(fā)熱，小便不利，腎盂腎炎，急性腎炎，膀胱炎，泌尿系結(jié)石等疾病以及外用治癰癤腫毒，濕疹等但將葎草在制備抗無菌性炎癥藥物中的應用，至今未見報道。
經(jīng)過多年科研，發(fā)現(xiàn)葎草藥理作用較強。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種葎草新用途，尤其是在制備抗無菌性炎癥的藥物或保健品中的應用。
本發(fā)明提供了一種葎草在制備抗無菌性炎癥藥物中的新用途。經(jīng)過大量試驗，葎草對抗無菌性炎癥具有明顯效果，因此制備成相關藥物，可廣泛用于與無菌性炎癥有關的疾病都能治療或預防。
在上述方案基礎上，所述的葎草及其提取物直接用于制藥，也可以與其它中草藥植物或其提取物配伍使用制成抗無菌性炎癥藥物。
將所述的葎草按照現(xiàn)有中、草藥提取工藝和方法把有效成份提取出來后，可制成口服劑、注射劑和外用劑型或保健品。
首先，將葎草用浸提劑浸提、獲得提取液；其次，將提取液直接制成口服劑、注射劑和外用劑型中的一種，其中，浸提劑是乙醇、甲醇、丙二醇、丙酮、乙醚、甘油、氯仿中的一種或其混合物，或者用水、動植物油、釀造醋或無機醋作為浸提劑。
浸提方法包括冷浸和熱浸。
制備藥物的方法是將葎草用浸提劑浸提、獲得提取液，葎草及其提取物直接用于制藥，也可以與其它中草藥植物或其提取物配伍使用制藥。
也可以按照下述方法制備用40-60％濃度的乙醇作浸提劑，將原料藥冷浸不少于24小時，獲得藥物提取物。
在上述方案基礎上，將所述的浸提劑滲濾提取，可以重復一次，合并乙醇浸劑，回收乙醇至提取液無醇味，60℃減壓干燥，回收制成干浸膏，粉碎。
用葎草制備的抗無菌性炎癥藥物的用途，可以治療的無菌性炎癥包括頸椎病、腰椎病、肩周炎、網(wǎng)球肘、肌筋膜綜合癥、風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、四肢麻木肌寒骨冷、無菌性前列腺炎、多發(fā)性神經(jīng)炎、神經(jīng)性皮炎、腰鞘炎、腰肌勞損；由于無菌性炎癥引起的坐骨神經(jīng)痛、足跟痛、偏頭痛、頑固骨痛；癌癥疼痛、支氣管哮喘，以及醫(yī)學界定義的病因為無菌性炎癥的其它疾病如骨軟骨炎，臀上皮損傷，閉合性損傷等。
下面以具體的實施例來說明本發(fā)明，下述實施例僅是對本發(fā)明的進一步說明和解釋，并不用來限制本發(fā)明。
具體實施例方式
葎草浸膏粉制備取葎草藥材，分別以藥材4-12倍量的40-60％乙醇作為浸提劑，浸泡不少于24小時，滲濾提取，重復一次，合并乙醇浸提劑，回收滲濾物至無醇味，在60℃減壓干燥，60℃減壓回收，得到干的浸膏，粉碎即得浸膏粉。
對比試驗1葎草對二甲苯致小鼠耳殼炎癥的影響受試藥物名稱葎草50％乙醇提取物(Y120)性狀棕褐色固體陽性對照藥阿司匹林腸溶片(批號041001，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司)受試動物雄性昆明種小鼠，體重為20±2克；數(shù)量為50只，隨機分成5組，每組動物數(shù)為10只。
來源上海斯萊克實驗動物有限公司等級清潔級，許可證號SCXK(滬)2004-0005飼養(yǎng)場所上海第二軍醫(yī)大學藥學院動物房等級清潔級，合格證號醫(yī)動字第02-64號藥物劑量取葎草50％乙醇提取物(Y120)的低劑量為240mg/kg，低、中、高劑量比設計為1∶2∶4，故相應中、高劑量分別為480和960mg/kg。
陽性對照藥劑量阿司匹林腸溶片(上海信誼百路達藥業(yè)有限公司，批號041001，25mg/片)口服，小鼠劑量按體表面積折算，相當于7.5mg/kg，本實驗陽性對照藥阿司匹林腸溶片灌胃劑量為10mg/kg。
給藥途經(jīng)灌胃。
溶劑對照溶劑對照按10ml/kg灌胃。
給藥次數(shù)連續(xù)六日給藥，1次/日。
試驗方法取昆明種小鼠50只，隨機分為5個組，實驗前五天及實驗前30min按表1-1劑量設計表給藥。30min后，將0.05ml二甲苯涂于小鼠右側(cè)耳殼兩面，左耳不涂作為對照，致炎后30min拉斷頸椎處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑6mm的打孔器沖下左耳及右耳同一部位的圓片，于分析天平上稱重，以左右兩耳片重量計算各組腫脹率，求腫脹抑制率，進行組間比較。
表1-1 劑量設計表

公式為腫脹率(％)＝(右耳重量-左耳重量)/左耳重量×100％腫脹抑制率(％)＝(給藥組腫脹率-模型組腫脹率)/模型組腫脹率×100％觀察指標及觀察時間稱量打孔器取下的左右兩耳片重量，計算各組腫脹率，求腫脹抑制率。觀察時間為致炎后30分鐘。
數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學分析實驗數(shù)據(jù)以x±SD表示，用SPSS 10.0軟件進行方差分析，作顯著性檢驗。
試驗結(jié)果見表1-2葎草對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響所示，Y-120的三個劑量組和阿司匹林組與溶劑組比較，對二甲苯所致小鼠耳殼腫脹有明顯抑制作用(P＜0.05，或P＜0.01)，Y-120的三個劑量組與阿司匹林組相比較均無顯著性差異。
表1-2 葎草對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(x±SD，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01與溶劑對照組比較實驗結(jié)論二甲苯誘發(fā)小鼠耳殼水腫主要是某些炎癥介質(zhì)如組織胺、緩激肽和纖維蛋白溶解酶的釋放，引起局部毛細血管通透性增加，炎癥細胞浸潤，造成耳部急性滲出性炎癥水腫。本實驗結(jié)果表明，葎草的三個劑量組對二甲苯引起的耳殼腫脹有明顯的抑制作用，說明本藥對急性炎癥有顯著的抗炎作用。
對比試驗2葎草對角叉菜膠致大鼠關節(jié)炎的影響受試藥物名稱葎草50％乙醇提取物(Y120)性狀棕褐色固體陽性對照藥阿司匹林腸溶片
(批號041001，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司)受試動物雄性Wistar大鼠，體重為220±20克，數(shù)量為50只，隨機分成5組，每組動物數(shù)為10只來源上海斯萊克實驗動物有限公司等級清潔級，許可證號SCXK(滬)2004-0005飼養(yǎng)場所上海第二軍醫(yī)大學藥學院動物房等級清潔級，合格證號醫(yī)動字第02-64號藥物劑量取葎草50％乙醇提取物(Y-120)的低劑量為120mg/kg，低、中、高劑量比為1∶2∶4，相應中、高劑量分別為240和480mg/kg。因此本實驗采用的劑量為120、240、480mg/kg。
陽性對照阿司匹林腸溶片(上海信誼百路達藥業(yè)有限公司，批號041001，25mg/片)口服，小鼠劑量按體表面積折算，灌胃劑量為5mg/kg。
給藥途經(jīng)灌胃。
溶劑對照溶劑對照按10ml/kg灌胃。
給藥次數(shù)均單次給藥。
試驗方法取雄性Wistar大鼠50只，隨機分為5個組，禁食過夜，實驗前1h按表2-1劑量設計表給藥。1h后，每只大鼠右后足跖健膜下注射1％角叉菜膠(滅菌生理鹽水配置)0.1ml致炎，測量致炎前及致炎后1-5h的右踝關節(jié)周長，每小時測量一次，計算各組腫脹率，進行組間比較。
表2-1 劑量設計表

公式為腫脹率(％)＝(致炎后周長-致炎前周長)/致炎前周長×100％觀察指標及觀察時間測量大鼠右踝關節(jié)周長，計算腫脹率。觀察時間致炎前及致炎后1-5h，每小時測量一次。
數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學分析實驗數(shù)據(jù)以x±SD表示，用SPSS 10.0軟件進行方差分析，作顯著性檢驗。
試驗結(jié)果實驗結(jié)果表明，葎草的三個劑量組均能明顯抑制角叉菜膠引起的大鼠踝關節(jié)腫脹(P＜0.01)，且有劑量依賴性趨勢，作用時間持續(xù)5h以上。見表2-2，葎草對大鼠角叉菜膠性關節(jié)炎踝關節(jié)腫脹的影響(x±SD，n＝10)所示。
表2-2 葎草對大鼠角叉菜膠性關節(jié)炎踝關節(jié)腫脹的影響(x±SD，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01與溶劑對照組比較實驗結(jié)論角叉菜膠誘發(fā)大鼠關節(jié)腫脹模型是以血管通透性為主要改變的急性炎癥模型，該模型的特點是致炎局部PG合成增加，并與血管活性物質(zhì)和激肽類一起誘發(fā)水腫，用于觀察藥物對急性炎癥過程的影響。本實驗證明葎草的三個劑量組對角叉菜膠誘發(fā)大鼠踝關節(jié)腫脹均具有明顯抑制作用，特別是中、高劑量組在致炎后1-5小時均具有明顯的抗炎作用，說明本藥對急性炎癥有顯著的抗炎作用。
對比試驗3葎草對佐劑致大鼠關節(jié)炎的影響受試藥物名稱葎草50％乙醇提取物(Y120)性狀棕褐色固體陽性對照藥阿司匹林腸溶片(批號041001，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司)受試動物雄性Wistar大鼠，體重為170±20克，數(shù)量為100只，隨機分成10組，預防性和治療性實驗各5組。
來源上海斯萊克實驗動物有限公司等級清潔級，許可證號SCXK(滬)2004-0005飼養(yǎng)場所上海第二軍醫(yī)大學藥學院動物房等級清潔級，合格證號醫(yī)動字第02-64號藥物劑量設置取葎草50％乙醇提取物(Y-120)的低劑量為120mg/kg，低、中、高劑量比為1∶2∶4，相應中、高劑量分別為240和480mg/kg。因此本實驗采用的劑量為120、240、480mg/kg。
陽性對照阿司匹林腸溶片(上海信誼百路達藥業(yè)有限公司，批號041001，25mg/片)口服，小鼠劑量按體表面積折算，灌胃劑量為5mg/kg。
給藥途經(jīng)灌胃。
溶劑對照溶劑對照按10ml/kg灌胃。
給藥次數(shù)預防性實驗從致炎當日開始預防給藥，連續(xù)給藥至第12日，1次/日；治療性實驗從致炎后第7日開始灌胃給藥，連續(xù)給藥至第21日，1次/日，均單次給藥。
試驗方法1.對佐劑性關節(jié)炎的預防作用取雄性Wistar大鼠50只，隨機分為5個組，測量大鼠右后足踝關節(jié)圓周長，按Table 3-1給藥。1h后每只大鼠右后足跖皮下注射注射完全Freund′s佐劑0.1ml致炎，此后每天給藥1次，連續(xù)12d，并測量致炎后18h，3d、6d、9d、12d大鼠右踝關節(jié)圓周長，計算各組腫脹率，進行組間比較。
公式為腫脹率(％)＝(致炎后周長-致炎前周長)/致炎前周長×100％2.對佐劑性關節(jié)炎的治療作用取雄性Wistar大鼠50只，隨機分為5個組，測量大鼠右后足踝關節(jié)圓周長，每只大鼠右后足跖皮下注射注射完全Freund′s佐劑0.1ml致炎，致炎后第7d開始按表3-1劑量設計表灌胃給藥，并測量致炎后第6d、9d、12d、15d、18d、21d大鼠右踝關節(jié)圓周長，計算各組腫脹率，進行組間比較。
公式為腫脹率(％)＝(致炎后周長-致炎前周長)/致炎前周長×100％
表3-1 劑量設計表

觀察指標及觀察時間測量大鼠右踝關節(jié)周長，計算腫脹率。觀察時間預防性實驗為致炎前及致炎后18h，3d、6d、9d、12d；治療性實驗為致炎前及致炎后6d、9d、12d、15d、18d、21d。
數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學分析實驗數(shù)據(jù)以x±SD表示，用SPSS 10.0軟件進行方差分析，作顯著性檢驗。
試驗結(jié)果實驗結(jié)果表明，在預防性和治療性實驗中，葎草的三個劑量組均能明顯抑制Freund′s佐劑引起的大鼠踝關節(jié)腫脹(P＜0.05，或P＜0.01)，且呈劑量依賴性。見表3-2 Y-120對大鼠對佐劑性關節(jié)炎的預防作用(x±SD，n＝10)。
表3-2 Y-120對大鼠對佐劑性關節(jié)炎的預防作用(x±SD，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01與溶劑對照組比較葎草對佐劑性關節(jié)炎治療作用見表3-3葎草對大鼠對佐劑性關節(jié)炎的治療作用(x±SD，n＝10)。
表3-3 葎草對大鼠對佐劑性關節(jié)炎的治療作用(x±SD，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01與溶劑對照組比較實驗結(jié)論大鼠佐劑性關節(jié)炎模型是一種免疫劑刺激形成的免疫亢進性關節(jié)炎癥，與人類類風濕性關節(jié)炎的形成和表現(xiàn)有很多類似之處，原發(fā)病變主要是局部急性炎癥反應。本實驗中葎草的三個劑量組在預防和治療性實驗中均能明顯抑制Freund′s佐劑引起的大鼠踝關節(jié)腫脹，說明本藥對大鼠佐劑關節(jié)炎原發(fā)病變的炎癥反應具有較好的預防和治療作用。
對比試驗4葎草對醋酸所致小鼠扭體反應的影響受試藥物名稱葎草50％乙醇提取物(Y120)性狀棕褐色固體陽性對照藥阿司匹林腸溶片
(批號041001，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司)受試動物昆明種小鼠，雌雄各半，體重為22±2克；數(shù)量為50只，隨機分成5組，每組動物數(shù)為10只。
來源上海斯萊克實驗動物有限公司等級清潔級，許可證號SCXK(滬)2004-0005飼養(yǎng)場所上海第二軍醫(yī)大學藥學院動物房等級清潔級，合格證號醫(yī)動字第02-64號藥物劑量取葎草50％乙醇提取物(Y120)的低劑量為240mg/kg，低、中、高劑量比設計為1∶2∶4，故相應中、高劑量分別為480和960mg/kg。
陽性對照藥劑量阿司匹林腸溶片(上海信誼百路達藥業(yè)有限公司，批號041001，25mg/片)口服，小鼠劑量按體表面積折算，相當于7.5mg/kg，本實驗陽性對照藥阿司匹林腸溶片灌胃劑量為10mg/kg。
給藥途經(jīng)灌胃。
溶劑對照溶劑對照按10ml/kg灌胃。
給藥次數(shù)連續(xù)六日給藥，1次/日。
試驗方法取昆明種小鼠50只，隨機分為5個組，實驗前五天及實驗前30min按表4-1劑量設計表給藥。最后一次給藥30min后，均腹腔注射0.7％冰醋酸10ml/kg，5min后觀察記錄10min內(nèi)各組小鼠扭體反應次數(shù)，并計算藥物對扭體反應次數(shù)的抑制百分率，進行組間比較。
公式為抑制率(％)＝(給藥組扭體次數(shù)-溶劑對照組扭體次數(shù))/溶劑對照組扭體次數(shù)×100％表4-1 劑量設計表

觀察指標及觀察時間10min內(nèi)各組小鼠扭體反應次數(shù)。觀察時間為腹腔注射0.7％冰醋酸后5min。
數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學分析實驗數(shù)據(jù)以x±SD表示，用SPSS 10.0軟件進行方差分析，作顯著性檢驗。
試驗結(jié)果葎草的三個劑量組均對醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應有非常顯著的鎮(zhèn)痛作用，與對照組比較，有非常顯著的差異(P＜0.01)，低、中、高劑量組的抑制率分別為42.8％、45.3％和59.3％。見表4-2葎草對醋酸引起小鼠扭體反應的影響(x±SD，n＝10)所示。
表4-2 葎草對醋酸引起小鼠扭體反應的影響(x±SD，n＝10)

**P＜0.01與溶劑對照組比較實驗結(jié)論扭體法是研究藥物鎮(zhèn)痛作用較為常用的方法。腹腔注射冰醋酸后，醋酸中電離出的微量H+可引起腹腔深部大面積較持久的疼痛刺激(內(nèi)臟痛)，致使小鼠產(chǎn)生扭體反應。葎草能非常顯著減少由醋酸引起小鼠扭體反應次數(shù)，表明葎草具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
對比試驗5葎草對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高的影響受試藥物名稱葎草50％乙醇提取物(Y120)性狀棕褐色固體陽性對照藥阿司匹林腸溶片(批號041001，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司)受試動物昆明種小鼠，雌雄各半，體重為20±2克；數(shù)量為50只，隨機分成5組，每組動物數(shù)為10只。
來源上海斯萊克實驗動物有限公司等級清潔級，許可證號SCXK(滬)2004-0005飼養(yǎng)場所上海第二軍醫(yī)大學藥學院動物房等級清潔級，合格證號醫(yī)動字第02-64號藥物劑量取葎草50％乙醇提取物(Y120)的低劑量為240mg/kg，低、中、高劑量比設計為1∶2∶4，故相應中、高劑量分別為480和960mg/kg。
陽性對照藥劑量阿司匹林腸溶片(上海信誼百路達藥業(yè)有限公司，批號041001，25mg/片)口服，小鼠劑量按體表面積折算，相當于7.5mg/kg，本實驗陽性對照藥阿司匹林腸溶片灌胃劑量為10mg/kg。
給藥途經(jīng)灌胃。
溶劑對照溶劑對照按10ml/kg灌胃。
給藥次數(shù)連續(xù)七日給藥，1次/日。
試驗方法取昆明種小鼠50只，隨機分為5個組，實驗前六天及實驗前30min按表5-1劑量設計表給藥。30min后，尾靜脈注射0.5％伊文思藍溶液0.1ml/10g，隨后立即腹腔注射0.7％醋酸生理鹽水溶液0.2ml/只，20min后脫頸椎處死動物，剪開腹腔，用10ml生理鹽水分多次洗滌腹腔，吸取腹腔液，1500r/min離心10min，取上清液于751分光光度計590nm波長下比色測定OD值，計算抑制率，進行統(tǒng)計學處理，進行組間比較。
公式為抑制率(％)＝(給藥組OD值-溶劑對照組OD值)/溶劑對照組OD值×100％表5-1劑量設計表

觀察指標及觀察時間590nm波長下比色測定腹腔液上清OD值，計算抑制率。觀察時間為腹腔注射0.7％醋酸生理鹽水溶液后20分鐘。
數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學分析實驗數(shù)據(jù)以x±SD表示，用SPSS 10.0軟件進行方差分析，作顯著性檢驗。
試驗結(jié)果實驗結(jié)果表明，葎草的三個劑量組和阿司匹林組與溶劑組比較，對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高有明顯抑制作用(P＜0.05，或P＜0.01)，葎草低、中、高劑量組的抑制率分別為24.9％、33.8％和46.2％，這三個劑量組與阿司匹林組相比較均無顯著性差異。表5-2葎草對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增加的影響(x±SD，n＝10)所示。
表5-2葎草對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增加的影響(x±SD，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01與溶劑對照組比較實驗結(jié)論炎癥是機體對組織損傷或致病因子侵入所發(fā)生的以防御為主的反應，早期炎癥主要以毛細血管擴張、通透性增加而引起炎性滲出和炎性腫脹為特征。本試驗表明Y-120在醋酸誘發(fā)小鼠腹腔毛細血管通透性增高的實驗中表現(xiàn)了明顯的抑制作用，推測其可能通過抑制毛細血管的擴張，降低通透性，使?jié)B出減少以達到抗炎作用。
對比試驗6葎草對大鼠棉球肉芽腫的影響受試藥物名稱葎草50％乙醇提取物(Y120)性狀棕褐色固體陽性對照藥阿司匹林腸溶片(批號041001，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司)受試動物雄性Wistar大鼠，體重為160±20克；數(shù)量為50只，隨機分成5組，每組動物數(shù)為10只。
來源上海斯萊克實驗動物有限公司等級清潔級，許可證號SCXK(滬)2004-0005飼養(yǎng)場所上海第二軍醫(yī)大學藥學院動物房等級清潔級，合格證號醫(yī)動字第02-64號藥物劑量取葎草50％乙醇提取物(Y120)的低劑量為120mg/kg，低、中、高劑量比設計為1∶2∶4，故相應中、高劑量分別為240和480mg/kg。
陽性對照藥劑量阿司匹林腸溶片(上海信誼百路達藥業(yè)有限公司，批號041001，25mg/片)口服，小鼠劑量按體表面積折算，相當于3.75mg/kg，本實驗陽性對照藥阿司匹林腸溶片灌胃劑量為5mg/kg。
給藥途經(jīng)灌胃。
溶劑對照溶劑對照按10ml/kg灌胃。
給藥次數(shù)連續(xù)七日給藥，1次/日。
試驗方法取雄性Wistar大鼠50只，隨機分為5個組，各組大鼠乙醚麻醉，剪毛后無菌條件下切開下腹部正中皮膚，切口長1cm，止血鉗擴充皮下組織，向雙側(cè)腹股溝皮下植入10mg無菌干燥棉球，縫合切口，術后當日按表6-1劑量設計表灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7天，第8天頸椎脫臼處死大鼠，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，稱濕重，置60℃烘干，稱干重，減去原棉球凈重，即為肉芽腫凈重，按mg/100g體重表示，計算抑制率(％)，進行組間比較。
公式為肉芽腫凈濕重＝(棉球肉芽腫總濕重-原棉球凈重)/大鼠體重×100肉芽腫凈干重＝(棉球肉芽腫總干重-原棉球凈重)/大鼠體重×100濕重抑制率(％)＝(給藥組肉芽腫凈濕重-溶劑對照組肉芽腫凈濕重)/溶劑對照組肉芽腫凈濕重×100％干重抑制率(％)＝(給藥組肉芽腫凈干重-溶劑對照組肉芽腫凈干重)/溶劑對照組肉芽腫凈干重×100％表6-1 劑量設計表

觀察指標及觀察時間測量棉球肉芽腫濕重和干重，計算抑制率。觀察時間為植入無菌干燥棉球后第八天。
數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學分析實驗數(shù)據(jù)以x±SD表示，用SPSS 10.0軟件進行方差分析，作顯著性檢驗。
試驗結(jié)果實驗結(jié)果表明，葎草的中劑量和高劑量組均能明顯減輕棉球誘導的大鼠肉芽腫的重量(P＜0.05，或P＜0.01)，濕重抑制率分別為7.2％和14.6％，干重抑制率分別為10.2％和16.8％。見表6-2葎草對大鼠棉球肉芽腫的影響(x±SD，n＝10)所示。
表6-2 葎草對大鼠棉球肉芽腫的影響(x±SD，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01與溶劑對照組比較實驗結(jié)論大鼠棉球肉芽腫模型是以肉芽組織增生為特點的亞急性炎癥模型，棉球植入大鼠體內(nèi)引起結(jié)締組織增生，這種肉芽增生與臨床上某些炎癥后期病理改變相似，用于評定藥物抗結(jié)締組織增殖作用。本實驗中葎草的中劑量和高劑量組對大鼠棉球肉芽腫均有明顯抑制作用，說明本藥對慢性炎癥有明顯的抗炎作用。
對比試驗7葎草對小鼠碳粒廓清功能的影響受試藥物名稱葎草50％乙醇提取物(Y120)性狀棕褐色固體陽性對照藥強的松(批號050401，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司)受試動物昆明種小鼠，雌雄各半，體重為20±2克；數(shù)量為50只，隨機分成5組，每組動物數(shù)為10只。
來源上海斯萊克實驗動物有限公司等級清潔級，許可證號SCXK(滬)2004-0005飼養(yǎng)場所上海第二軍醫(yī)大學藥學院動物房等級清潔級，合格證號醫(yī)動字第02-64號藥物劑量取葎草50％乙醇提取物(Y120)的低劑量為240mg/kg，低、中、高劑量比設計為1∶2∶4，故相應中、高劑量分別為480和960mg/kg。
陽性對照藥劑量強的松(上海信誼藥業(yè)有限公司，批號050401，5mg/片)口服，小鼠劑量按體表面積折算，相當于7mg/kg，本實驗陽性對照藥阿司匹林腸溶片灌胃劑量為10mg/kg。
給藥途經(jīng)灌胃。
溶劑對照溶劑對照按10ml/kg灌胃。
給藥次數(shù)連續(xù)十日給藥，1次/日。
試驗方法取昆明種小鼠50只，隨機分為5個組，實驗前九天及實驗前30min按表7-1劑量設計表給藥。30min后，每鼠尾靜脈注射印度墨汁(北京西中化工廠生產(chǎn))0.05ml/10g體重，于2(t2)和10(t10)分鐘后，分別從眼眶靜脈取血20μl，加到2ml、0.1％Na2CO3溶液中搖勻，用751型分光光度計在680nm下比色，測光密度(以下分別用OD2和OD10來表示2分鐘和10分鐘所取血樣的光密度)，按下式計算廓清指數(shù)K值。
廓清指數(shù)K＝(lgOD2-lgOD10)/(t10-t2)＝lg(OD2/OD10)/8K值經(jīng)體重及肝脾重換算后，得吞噬指數(shù)α值吞噬指數(shù)α＝體重/肝脾重*K1/3以X±SD來表示給藥組與對照組的K值和α值，進行組間比較。
表7-1劑量設計表

觀察指標及觀察時間測定兩個時間點血樣的OD值，稱量體重及肝脾重，計算廓清指數(shù)K值和吞噬指數(shù)α值。觀察時間為注射印度墨汁后2分鐘和10分鐘。
數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學分析實驗數(shù)據(jù)以x±SD表示，用SPSS 10.0軟件進行方差分析，作顯著性檢驗。
試驗結(jié)果實驗結(jié)果表明，葎草三個劑量組小鼠的廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)α均比溶劑對照組低，中、高劑量組統(tǒng)計分析差異有顯著性意義(P＜0.05，或P＜0.01)。表明葎草能抑制小鼠巨噬細胞的吞噬功能，具有一定的免疫抑制作用。表7-2所示。
表7-2 葎草對小鼠碳粒廓清功能影響(x±SD，n＝10)

*P＜0.05，**P＜0.01與溶劑對照組比較實驗結(jié)論碳粒廓清實驗是了解整個單核巨噬細胞系統(tǒng)吞噬功能的常用方法。本實驗中葎草的中劑量和高劑量組小鼠的廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)α明顯減小，說明葎草能抑制小鼠巨噬細胞的吞噬功能，具有一定的免疫抑制作用，這一點與葎草的佐劑性關節(jié)炎實驗結(jié)果相吻合。
對比試驗8葎草ig對大鼠的急性毒性試驗受試藥物名稱葎草50％乙醇提取物保存條件及配制方法室溫保存。使用時用生理鹽水配制成相應濃度；溶媒生理鹽水。
受試動物SD大鼠，雌雄各半，體重為220-250克；數(shù)量為20只。
等級清潔級，合格證號SCXK(滬)-2002-0006；動物飼養(yǎng)環(huán)境動物房通風良好，光照12h，溫度20±3℃，濕度40-70％，試驗前在實驗室飼養(yǎng)適應一周，選出生長正常的健康動物進行試驗。
藥物劑量取葎草50％乙醇提取物(Y120)的給藥劑量14.0g/kg，給藥容積20ml/kg，給藥濃度0.7g/ml。
陽性對照藥劑量強的松(上海信誼藥業(yè)有限公司，批號050401，5mg/片)口服，小鼠劑量按體表面積折算，相當于7mg/kg，本實驗陽性對照藥阿司匹林腸溶片灌胃劑量為10mg/kg。
給藥途經(jīng)灌胃。
溶劑對照溶劑對照按10ml/kg灌胃。
給藥次數(shù)連續(xù)十日給藥，1次/日。
試驗方法將濃度為0.7g/ml葎草，每只大鼠一次最大量ig給藥20ml/kg。觀察給藥后14天內(nèi)動物的中毒反應及死亡情況。
觀察指標觀察動物給藥后的毒性反應及死亡情況。毒性反應重點觀察癥狀、程度，毒性反應起始時間、持續(xù)時間及恢復時間等。
觀察期為14天。
結(jié)果受試大鼠給藥期間未見明顯異常，給藥后4h內(nèi)活動遲緩，以后大鼠逐漸恢復正常，活動自如，給藥后24h內(nèi)動物出現(xiàn)稀便，其余未觀察到任何其它急性毒性反應。實驗中大鼠毛緊貼身、有光澤，飲食及其它情況均無異常。第7天和第14天每只動物體重均有增加見附表葎草單次ig對大鼠急性毒性試驗體重變化，第14天存活大鼠處死后經(jīng)剖檢肉眼觀察未見異常。結(jié)果表明葎草ig對大鼠的MTD＞14.0g/kg。
結(jié)束語大鼠ig葎草的MTD＞14.0g/kg。
附表 葎草單次ig對大鼠急性毒性試驗體重變化

權(quán)利要求
1.一種葎草的新用途，直接用葎草或其提取物制成抗無菌性炎癥藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葎草的新用途，其特征在于葎草及其提取物與其他中草藥或其提取物配伍制成抗無菌性炎癥藥物。
3.針對權(quán)利要求1或2所述的葎草的新用途制備抗無菌性炎癥藥物的方法首先，將葎草用浸提劑浸提、獲得提取液；其次，將提取液直接制成口服劑、注射劑和外用劑型中的一種，其中，浸提劑是乙醇、甲醇、丙二醇、丙酮、乙醚、甘油、氯仿中的一種或其混合物，或者用水、動植物油、釀造醋或無機醋作為浸提劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備含葎草新藥的方法，其特征在于用40-60％濃度的乙醇作浸提劑，將原料藥冷浸不少于24小時，獲得藥物提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備含葎草新藥的方法，其特征在于將所述的浸提劑滲濾提取，重復一次，合并乙醇浸劑，回收乙醇至提取液無醇味，60℃減壓干燥，回收制成干浸膏，粉碎。
全文摘要
本發(fā)明涉及葎草在制備抗無菌性炎癥藥物中的新用途。直接用葎草或其提取物制成抗無菌性炎癥藥物，或者，葎草及其提取物與其他中草藥或其提取物配伍制成抗無菌性炎癥藥物。葎草的新用途制備抗無菌性炎癥藥物的方法首先，將葎草用浸提劑浸提、獲得提取液；其次，將提取液直接制成口服劑、注射劑和外用劑型中的一種，其中，浸提劑是乙醇、甲醇、丙二醇、丙酮、乙醚、甘油、氯仿中的一種或其混合物，或者用水、動植物油、釀造醋或無機醋作為浸提劑。葎草對無菌性炎癥疾病，如頸椎病、腰椎病、網(wǎng)球肘、肌筋膜綜合癥、風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎等，效果顯著，安全可靠，無毒副作用。
文檔編號A61P29/00GK101036697SQ20071003959
公開日2007年9月19日 申請日期2007年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月18日
發(fā)明者錢獻和 申請人:上海亞商實業(yè)有限公司