專利名稱：：一種羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種納米粒及其制備方法，具體地涉及一種羥基喜樹堿納米粒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：羥基喜樹堿是喜樹堿的10-位羥基衍生物，與喜樹堿同屬細胞毒類抗癌藥物。近來發(fā)現(xiàn)，其對DNA拓撲異構(gòu)酶I有靶向選擇性抑制作用，在殺死癌細胞的同時，對正常細胞代謝也有影響。該藥物在水中難溶，且具有一定的毒性，使得其臨床應(yīng)用存在一定的限制。因此，改善羥基喜樹堿的性能，成為目前關(guān)注的熱點之一。專利申請文獻CN1875946A公開了一種10-羥基喜樹堿固體納米粒及其制備方法。其納米粒包含10-羥基喜樹堿、載體、穩(wěn)定劑和水，其中載體為脂肪酸泊洛沙姆膽固醇酯和脂肪酸聚乙二醇膽固醇酯，粒徑小于1"m。專利申請文獻CN1363394A公開了一種羥基喜樹堿聚乳酸納米粒的制備方法。該方法制備得到的納米粒主要材料為聚乳酸。其制備過程需在堿性條件下進行，對藥物羥基喜樹堿的穩(wěn)定性影響比較大。據(jù)文獻報道(WaniMC,RonmanPE,WallME.JMed.Chem.，1980,23:554;雷英杰，天然抗癌藥物一喜樹堿及其衍生物的研究進展，化學研究與應(yīng)用，2001，13(4):359362)，藥物羥基喜樹堿在堿性條件下易開環(huán)，而開環(huán)后的羥基喜樹堿的抗癌活性只有未開環(huán)的十分之一。因此，堿性條件下進行制備會使藥效大大降低。專利申請文獻CN1362060A公開了一種羥基喜樹堿葡聚糖納米粒的制備方法。該方法以葡聚糖為載體將羥基喜樹堿制成50~300nm的微粒。專利申請文獻CN1875944公開了一種靜脈注射用的聚乙二醇修飾的羥基喜樹堿隱形脂質(zhì)納米球及其制備方法。其脂質(zhì)納米球含有治療有效量的羥基喜樹堿、聚乙二醇脂類(如PEG化磷脂)、注射用油、磷脂和藥學上可接受的輔料。目前，在羥基喜樹堿納米粒的應(yīng)用中存在一個很大的缺陷在溶液相中其穩(wěn)定性不高，藥物羥基喜樹堿容易析出。很多文獻都采用了凍干的方法以提高其穩(wěn)定性。但凍干后容易出現(xiàn)包封率降低過大，納米粒粒徑變大的問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是公開一種能克服現(xiàn)有技術(shù)中缺陷、更適用于醫(yī)藥領(lǐng)域的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒。本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒由下列原料成分組成活性成分羥基喜樹堿、可生物降解材料丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)、表面活性劑和膜修飾材料。本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒結(jié)構(gòu)為羥基喜樹堿包封于PLGA中，形成納米粒，表面被覆表面活性劑和膜修飾材料。本發(fā)明中，上述各原料組分的重量份數(shù)比較佳的為羥基喜樹堿1份PLGA5~畫份表面活性劑1~10份膜修飾材料110份本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒用于醫(yī)藥領(lǐng)域時，其中所含羥基喜樹堿的量為治療有效量。本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒的平均粒徑較佳的為20100nm。本發(fā)明中，所述的膜修飾材料較佳的選自下列中的一種或幾種泊洛沙姆188、聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇類脂衍生物和殼聚糖；所述的表面活性劑較佳的選自下列中的一種或多種磷脂、泊洛沙姆188、聚山梨醇80和聚乙烯吡咯烷酮。本發(fā)明的另一目的是提供一種本發(fā)明的輕基喜樹堿長循環(huán)納米粒的制備方法，其包括下列步驟將羥基喜樹堿和丙交酯乙交酯共聚物PLGA溶于有機溶劑中，加入到含表面活性劑和膜修飾材料的水溶液中，然后經(jīng)剪切制成乳劑，再蒸去有機溶劑，攪拌即得。其中，所述的原料組分羥基喜樹堿、丙交酯乙交酯共聚物PLGA、表面活性劑和膜修飾材料的重量比較佳的為1份5~100份1~10份1~10份；所述的有機溶劑較佳的選自下列中的一種或幾種乙醚、石油醚、乙酸乙酯、氯仿和二氯甲烷；所述的表面活性劑在水溶液中的濃度一般應(yīng)能滿足形成亞微乳或納米乳所需要的量，較佳的濃度為0.5~5g/100ml，而膜修飾材料在水溶液中的濃度要保證這些材料能吸附或鍵合在最后形成的納米粒表面，較佳的濃度為l~5g/100ml;所述的剪切較佳的為高速剪切，剪切轉(zhuǎn)速較佳為8000~15000轉(zhuǎn)/分鐘的高速，時間較佳的為4~10分鐘，可使用的儀器如fluko剪切機，剪切可在室溫下進行；所述的蒸去有機溶劑較佳的在407(TC下進行；所述的攪拌較佳的在室溫下進行，時間較佳的為1小時。按上述方法進行制備，其制備過程的溶液體系在中性或接近中性的條件下進行，避免了藥物在堿性條件下的水解失活。由上述方法制得的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，可再進行凍干，即制得注射用羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒凍干粉。本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒可用于制備細胞毒類抗癌藥物，用于治療原發(fā)性肝癌、乳腺癌、賁門腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、卵巢癌、肺癌和宮頸癌等疾病。其劑量一般為48mg/次J0kg體重。本發(fā)明所用試劑均市售可得。本發(fā)明的積極進步效果在于(1)本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒在體內(nèi)滯留時間長。普通納米粒進入循環(huán)系統(tǒng)后，易被網(wǎng)狀內(nèi)皮組織系統(tǒng)(RES)識別吸收，從而降低了藥物在其它組織中的分布。為此，本發(fā)明在納米粒中加入了膜修飾材料，使納米粒表面暴露出一些親水性多羥基基團，獲得了一種包封羥基喜樹堿的長循環(huán)納米粒。本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒能更持久地延長藥物在血液中的滯留時間，避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)的吞噬，以獲得更充足的時間到達耙向部位。大鼠體內(nèi)代謝動力學實驗結(jié)果顯示，本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒在體內(nèi)停留時間較普通納米粒明顯延長，可達6小時以上。(2)本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒粒徑小，可達平均粒徑100nm以下，且經(jīng)凍干后粒徑無明顯變化。具有此粒徑的制劑具有一定的耙向功能，更有利于疾病的防治。(3)本發(fā)明在制備過程中將膜修飾材料置于水相當中，大大提高了納米粒在液相中的穩(wěn)定性。實驗證明，由本發(fā)明方法制得的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒在溶液態(tài)4t:放置2個月未見藥物析出。(4)本發(fā)明的制備方法可在羥基喜樹堿穩(wěn)定的條件下進行制備，從而可避免羥基喜樹堿在堿性條件下發(fā)生內(nèi)酯環(huán)的開環(huán)反應(yīng)，避免藥效的降低。(5)本發(fā)明的制備方法步驟簡單、重復(fù)性好，易應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。圖1為制備實施例1的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒的粒徑數(shù)據(jù)圖。圖2為制備實施例1的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒經(jīng)凍干后(制備實施例6)的粒徑數(shù)據(jù)圖。圖3為羥基喜樹堿、普通羥基喜樹堿納米粒、制備實施例1和制備實施例2的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，在大鼠體內(nèi)的血藥濃度時間曲線圖。具體實施方式下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。實施例1~6羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒表1給出了羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒實施例1~6。表1羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒實施例16<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>制備實施例1將lOmg羥基喜樹堿和150mgPLGA溶于75ml乙酸乙酯中，加入到100ml含有5g泊洛沙姆188和1.5gPEG400的水溶液中，pH值為4.5，于室溫下，用fluko剪切機以8000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速剪切10分鐘，制成乳劑，再于4(TC下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，室溫攪拌1小時即得羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，測得平均粒徑為50nm。制備實施例2將10mg羥基喜樹堿和200mgPLGA溶于80ml石油醚中，加入到100ml含有l(wèi)g聚山梨醇80和3g泊洛沙姆188的水溶液中，pH值為7.2，于室溫下，用fluko剪切機以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速剪切8分鐘，制成乳劑，于60。C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去石油醚，室溫攪拌1小時即得羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，測得平均粒徑為30nm。制備實施例3將10mg羥基喜樹堿和180mgPLGA溶于80ml乙醚中，加入到100ml含有2g泊洛沙姆188和2gPEG400的水溶液中，pH值為6.3，于室溫下，用fluko剪切機以12000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速剪切6分鐘，制成乳劑，于6(TC下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醚，室溫攪拌1小時，即得羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，測得平均粒徑為60nm。制備實施例4將10mg羥基喜樹堿和180mgPLGA溶于80ml二氯甲烷中，加入到100ml含有4g磷脂和2g殼聚糖的水溶液中，pH值為6.7，于室溫下，用fluko剪切機以15000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速剪切4分鐘，制成乳劑，于5(TC下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去二氯甲烷，室溫下攪拌l小時，即得羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，測得平均粒徑為80nm。制備實施例5將10mg羥基喜樹堿和180mgPLGA溶于80ml氯仿中，加入到100ml含有4g泊洛沙姆188和2gPEG4000的水溶液中，pH值為5.6，于室溫下，用fluko剪切機以8000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速剪切6分鐘，制成乳劑，于7(TC下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，35"C下攪拌2小時，即得羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，測得平均粒徑為70nm。制備實施例6將制備實施例1制得到的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒膠體溶液加入甘露醇(1.8g/100ml)作支架劑，凍干后得到其凍干產(chǎn)品，此凍干產(chǎn)品復(fù)溶后，須i謀包封率為82.3%。效果實施例1經(jīng)制備實施例1所得到的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒溶液在4"C冰柜放置2個月，其包封率在放置前后無明顯變化，放置前為85.6%，放置后為84.8%，證明基本無藥物析出。效果實施例2制備實施例1的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒的粒徑如圖1所示，經(jīng)凍干(制備實施例6)后的粒徑如圖2所示。由圖1和圖2可見，本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒粒徑小，可達平均粒徑100nm以下，且經(jīng)凍干后粒徑無明顯變化。效果實施例3將羥基喜樹堿注射液(市售)、普通羥基喜樹堿納米粒、制備實施例1及制備實施例2的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，通過尾靜脈注射到大鼠體內(nèi)。在不同時間測其血漿中的藥物濃度，繪制血藥濃度隨時間曲線圖，如圖3所示。.由圖3可見，原料藥在體內(nèi)約1小時就代謝基本完全，而普通納米粒也只能維持3小時，本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米?？梢跃S持6小時以上。由此證明，本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，較普通羥基喜樹堿納米粒，在大鼠體內(nèi)的滯留時間顯著延長。權(quán)利要求1.一種羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，其特征在于包含原料組分羥基喜樹堿、丙交酯乙交酯共聚物PLGA、表面活性劑和膜修飾材料，其結(jié)構(gòu)為羥基喜樹堿包封于丙交酯乙交酯共聚物PLGA中，表面再被覆表面活性劑和膜修飾材料。2.如權(quán)利要求1所述的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，其特征在于所述的原料組分羥基喜樹堿、丙交酯乙交酯共聚物PLGA、表面活性劑和膜修飾材料的重量比為l份5100份110份110份。3.如權(quán)利要求1所述的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，其特征在于所述的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒的平均粒徑為20100nm。4.如權(quán)利要求1所述的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，其特征在于所述的膜修飾材料選自下列中的一種或幾種泊洛沙姆188、聚乙二醇、聚乙二醇類脂衍生物和殼聚糖。5.如權(quán)利要求1所述的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，其特征在于所述的表面活性劑選自下列中的一種或多種磷脂、泊洛沙姆188、聚山梨醇80和聚乙烯吡咯烷酮。6.如權(quán)利要求1所述的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒的制備方法，其包括下列步驟將羥基喜樹堿和丙交酯乙交酯共聚物PLGA溶于有機溶劑中，加入到含表面活性劑和膜修飾材料的水溶液中，然后經(jīng)剪切制成乳劑，再蒸去有機溶劑，攪拌即得。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的羥基喜樹堿、丙交酯乙交酯共聚物PLGA、表面活性劑和膜修飾材料的重量比為1份5100份:110份1~10份。8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的有機溶劑選自下列中的一種或幾種乙醚、石油醚、乙酸乙酯、氯仿和二氯甲烷。9.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的剪切的轉(zhuǎn)速為8000~15000轉(zhuǎn)/分鐘。10.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的剪切的時間為4~10分鐘。11.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的蒸去有機溶劑在4070r下進行。12.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的攪拌的條件為室溫下攪拌1小時。全文摘要本發(fā)明公開了一種新穎的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒，包含原料組分羥基喜樹堿、丙交酯乙交酯共聚物PLGA、表面活性劑和膜修飾材料，其結(jié)構(gòu)為羥基喜樹堿包封于丙交酯乙交酯共聚物PLGA中，表面再被覆表面活性劑和膜修飾材料。本發(fā)明還公開了其制備方法。本發(fā)明的羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒毒性較低、體內(nèi)滯留時間長，溶液相中穩(wěn)定性高，粒徑小，且凍干后粒徑無明顯變化。本發(fā)明的制備方法可在羥基喜樹堿穩(wěn)定的條件下進行，避免藥效的降低，且步驟簡單、重復(fù)性好，易應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號A61K31/4738GK101219144SQ20071003642公開日2008年7月16日申請日期2007年1月12日優(yōu)先權(quán)日2007年1月12日發(fā)明者奉建芳,張樂樂,林祝,鄒凌燕,陳滿倉申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院