專利名稱：：以逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和美度銨為基礎(chǔ)的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及美度銨(Meldonium)新的治療用途，以及降低逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑類的藥物引起的毒性的藥物組合物。
背景技術(shù)：
：已經(jīng)知道，人類免疫缺陷病毒的感染是最經(jīng)常發(fā)生的高危險(xiǎn)性感染，在2004年感染了37.7百萬(wàn)成人和2.2百萬(wàn)小孩。BROCKLEHURST，P，等人AntiretroviralsforReducingtheRiskofMother—to—ChiIdTransmissionofHIVInfection;CochraneDatabaseSystRev.2002，no.2。在HIV/AIDS治療中，抑制聚合酶的疊氮胸苷(AZT)、司他伏定和拉米夫定，以及用于HIV-1線粒體脫氧核糖核酸(mtDNA)復(fù)制的酵素是最常使用的。由于疊氮胸苷和司他伏定和拉米夫定阻止了新的線粒體的形成，從而引起其它的副作用。美度銨，化學(xué)表達(dá)為3-(2，2，2-三甲基肼)丙酸酯，在1982年7月8日的美國(guó)專利4481218(INST0RGANICHESK0G0SINTEZAAK(SU))中公開。美度銨作為藥物廣泛用于抗缺血和應(yīng)激保護(hù)的藥物中，用于治療不同的心血管疾病和涉及缺血性的其它疾病。疊氮胸苷，化學(xué)表達(dá)為3'-疊氮-3'-脫氧胸苷；疊氮胸苷；或AZT為逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。在1985年9月17日的美國(guó)專利4724232(BURROUGHSWELLCOMECO(US))中公開了疊氮胸苷和相關(guān)化合物及其制劑的治療用途。疊氮胸苷可以從商業(yè)上購(gòu)買，如100mg的膠囊、300mg的藥片、一次性使用的20ml藥瓶中的10mg/ml疊氮胸苷和240ml糖漿中的50mg/5ml疊氮胸苷。拉米夫定，化學(xué)表達(dá)為(2R-順)-4-氨基-1-[2-(羥甲基)-l，3-氧硫雜環(huán)戊垸-5-基]_2(1H)-嘧啶酮；(-)-2'-去氧-3'-硫雜胞啶；(-)-1-[(2R，5S)-2-(羥甲基)-1，3-氧硫雜環(huán)戊烷-5-基]胞核嘧啶；或3TC為逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。拉米夫定、相關(guān)化合物及其制劑的治療用途在1991年05月02日的W09117159(IAFBIOCHEMINT(CA))中公開。拉米夫定可以從商業(yè)上購(gòu)買，如100mg、150mg和300mg的藥片；240ml口服溶液中的10mg/ml拉米夫定。司他伏定，化學(xué)表達(dá)為2'，3'-二脫氫_3'-脫氧胸苷；1-(2，3-二去氧-3-甘油基-戊-2-enofuranosyl)胸腺嘧啶；或3'-脫氧_2'-胸苷為逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。在1991年4月29日的美國(guó)專利US5130421(BRISTOLMYERSCO(US))中公開了司他伏定和相關(guān)化合物及其制劑的治療用途。司他伏定可以從商業(yè)上購(gòu)買，如15mg、20mg、30mg和40mg的膠囊；以及200ml口服溶液中的lmg/ml司他伏定。己經(jīng)有幾種方法用于限制疊氮胸苷、司他伏定和拉米夫定的毒性引起的幾種副反應(yīng)。不過(guò)，它們都不能同時(shí)對(duì)心肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的機(jī)能產(chǎn)生影響。為了降低線粒體的受損，在一些文獻(xiàn)中推薦使用抗氧化劑，如高劑量的維生素C和維生素E;具體的文獻(xiàn)包括BROCKLEHURST，P等人AntiretroviralsforReducingtheRiskofMother-to-ChildTransmissionofHIVInfection.CochraneDatabaseSystRev，.2002，no.2,;FICHTENBAUM，CJ.CoronaryHeartDiseaseRisk,Dyslipidemia，andManagementinHIV_infectedPersons.HIVClinTrials,2004Nov—Dec,vol.5，no.6，p.416—433。鼠的試驗(yàn)證實(shí)，維生素C的日常劑量1250mg/kg和維生素E的日常劑量75mg/kg防止線粒體氧化，以及降低天冬氨酸酯轉(zhuǎn)移酶(AST)和乳酸脫氫酶(LDH)的活性，并限制線粒體超微結(jié)構(gòu)的受損。類似的，肌酸激酶(CK)活性得到了減弱，而在疊氮胸苷的應(yīng)用中得到了加強(qiáng)。PETERS，B.S.等人，MitochondrialMyopathyAssociatedwithChronicZidovudineTherapyinAIDS,QJMed，1993Jan，vol.86，no.1，p.5-15。輔酶Q10可以作為另一種能夠能夠施加積極效果的物質(zhì)，通過(guò)激活呼吸鏈中的電子轉(zhuǎn)移排除疊氮胸苷的副反應(yīng)；公認(rèn)核黃素、生育酚、琥珀酸酯、抗壞血酸、甲萘醌和煙堿抑制呼吸鏈阻塞。LARSSON，N.G.等人，MitochondrialMyopathies..ActaPhysiolScand.2001，no.171，p.225-233。1996年7月19日的W09705864(SIGMATAUINDFARMACEUTI(IT);MENDESSRL(IT);MORETTISONIA(IT))提供了關(guān)于L-肉堿、其衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽與抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒藥物一起降低神經(jīng)酰胺濃度、增強(qiáng)所述抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒藥物的活性的新的應(yīng)用，從而治療HIV感染和AIDS,以及通過(guò)這些藥物增強(qiáng)免疫系統(tǒng)。1993年3月9日的EP0560275A(SIGMATAUINDFARMACEUTI(IT))公開了L-肉堿及其藥學(xué)上可接受的鹽的新的治療應(yīng)用，即治療carnitine-depletedHIV-seropositive患者。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問題在AIDS治療中，疊氮胸苷(AZT)、司他伏定和拉米夫定在抑制聚合酶-Y(引起HIV-1線粒體脫氧核糖核酸(mtDNA)復(fù)制的酶)中廣泛得到應(yīng)用。因此，疊氮胸苷、司他伏定和拉米夫定阻礙了新的線粒體的形成。不過(guò)，含有AZT、司他伏定和拉米夫定的藥物劑型和組合物有個(gè)缺點(diǎn)，即其應(yīng)用受到AZT、司他伏定和拉米夫定毒性的副作用的限制(LEWIS,W.等人，AZTInducesMolecular,Biochemical,andUltrastructuralChangesinRatSkeletalMusclemitochondrion,JournalofCHnInvest.1992Apr,vol.89,no.4，p.1354-1210;SZABAD0S，E.等人，RoleofReactiveOxygenSpeciesandPoly-ADP-ribosePolymeraseintheDevelpomentofAZT-inducedCardiomyopathyinRat.FreeRadioBiolMed.1999Feb,vol.14，no.3-4，p.189-197;BLANCO，F(xiàn).等人，F(xiàn)irst-lineTherapyandMitochondrialDamage:DifferentNucleosides,DifferentFindings,HIVClinTrials,2003Jan-Feb,vol.4，no.1，p.11-19;BISHOP，丄B.等人，MitochondrialDamageRevealedbyMorphometricandSemiquantitativeAnalysisofMousePupCardiomyocytesFollowinginUteroandPostnatalExposuretoZidovudineandLamivudine，ToxicolSci2004,vol.81，no.2，p.512-517)。AZT毒性主要和線粒體的結(jié)合能力相關(guān)(NUSBAUM，NJ.，AZTIncorporationintoMitochondria:StudyinHumanMyeloidCellLine,DNACellBiol，1996，no.15，p.363-366)，從而使得其中的mtDNA和細(xì)胞色素C(CYC)減少。同時(shí)觀察到氧化磷酸酶的活性降低。AZT毒性使得線粒體產(chǎn)生的三磷酸腺苷(ATP)的水平降低，活性氧物質(zhì)(R0S)累積，從而細(xì)胞的厭氧作用加強(qiáng)，生成乳酸。疊氮胸苷和拉米夫定的毒性效應(yīng)臨床表現(xiàn)為由HIV本身的感染導(dǎo)致的線粒體病理學(xué)引起的肌細(xì)胞的肌病(PETERS,B.S.等人，MyopathyAssociatedwithChronicZidovudineTherapyinAIDS.QJMed，1993Jan，vol.86，no.1，p.5-15;BAKKER，H.D.等人，Vitamin-ResponsiveComplex-lDeficiencyinaMyopathicPatientwithIncreasedActivityoftheTerminalRespiratoryChainandLacticAcidosis,J"InheritMetabDis.1994，no.17，p.196-204;SULKOWSKI，M.S.等人，H印aticSteatosisandAntiretroviralDrugUseAmongAdultsCo_infectedwithHIVandH印atitisCVirus,AIDS,2005Mar24，vol,19，no.6，p.585-592;UCHTERFEU)，M.等人，F(xiàn)attyLiverandincreasedSerumLactateinaWomanwithHIV，DtschMedWochenschr，2003Jan17，vol.98，no.3，p.81-84;DELAASUNCION，J.G.等人，AZTInducesOxidativeDamagetoCardiacMitochondria:ProtectiveEffectofVitaminsCandE，LifeSci，2004Nov19，vol.76，no.1，p.29-56;BISHOP,J.B.等人，MitochondrialDamageRevealedbyMorphometricand7SemiquantitativeAnalysisofMousePupCardiomyocytesFollowinginUteroandPostnatalExposuretoZidovudineandLamivudine，ToxicolSci2004，vol.81，no.2，p.512-517)。線粒體受損通常主要影響肌細(xì)胞的功能，這是因?yàn)榧〖?xì)胞功能的特點(diǎn)是高能量消耗。LARSS0N，N.G.等人，MitochondrialMyopathies,ActaPhysiolScand，2001，no.171，p.225—233。肌病嚴(yán)重影響心肌。SZABAD0S，E.等人，RoleofReactiveOxygenSpeciesandPoly-ADP-ribosePolymeraseintheDevelpomentofAZT-inducedCardiomyopathyinRat，F(xiàn)reeRadioBiolMed，1999Feb,no.14，p.3-4和189-197;BISHOP,J.B.等人，MitochondrialDamageRevealedbyMorphometricandSemiquantitativeAnalysisofMousePupCardiomyocytesFollowinginUteroandPostnatalExposuretoZidovudineandLamivudine，ToxicolSci，2004，vol.81，no.2，p.512-517;GERSCHENS0N，M.等人，F(xiàn)etalMitochondrialHeartandSkeletalMuscleDamageinErythrocebusPatasMonkeysExposedinUteroto3'-azido-3'-deoxythymidine，AIDSResHumRetroviruses,2000May1，vol.16，no.7，p.635-626。疊氮胸苷和其它核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTIs)(拉米夫定和司他伏定)常常也引起感官神經(jīng)病，即導(dǎo)致患者的生活質(zhì)量變差(Cherry等人，JClinVirol2003，26:195-207)?，F(xiàn)在主要的問題是尋找降低逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑類型藥物的毒性的試劑。這些試劑能夠使得有效量的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑具有較低的副作用。技術(shù)方案本發(fā)明的方案是提供極低毒性的用于治療逆轉(zhuǎn)錄酶病毒感染的藥物組合物，本發(fā)明意外發(fā)現(xiàn)足夠劑量的含有美度銨[3-(2，2，2-三甲基肼)丙酸酯二水合物]的臨床藥物(一種用于治療心機(jī)能不全的藥物)聯(lián)合給藥、或在藥物組合物中和疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定或一些其它公知的臨床應(yīng)用的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑一起施用能夠有效的防止肌細(xì)胞的損害，特別是包括疊氮胸苷、拉米夫定和司他伏定在內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑引起的心肌細(xì)胞的損害。有很多物質(zhì)用于降低逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的毒性。因此，公知用于降低肉堿水平和肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性(DAMBR0VA，M等人，Mild織ate:CardioprotectiveActionthroughCamitine-LoweringEffect,TrendsCardiovascMed，2002，no.9，pl55-159)的美度銨具有心臟保護(hù)的效果是意外和令人驚異的。含有逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和肉堿的藥物組合物以及逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和肉堿的聯(lián)合施用是現(xiàn)有技術(shù)。肉堿和美度銨的結(jié)構(gòu)很接近。不過(guò)，一般認(rèn)為美度銨的藥學(xué)效果抵消了肉堿的效果。因此，顯而易見的，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員不會(huì)一起使用逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和美度銨。美度銨的意外效果也不能由其它活性解釋。因?yàn)槊蓝蠕@沒有在恒溫動(dòng)物和人體的組織內(nèi)被氧化，不能將美度銨認(rèn)為是直接作用的氧化劑，從而基本將美度銨從降低維生素或代謝物中區(qū)分開來(lái)，進(jìn)而用于排除疊氮胸苷、拉米夫定和司他伏定的副作用?，F(xiàn)有文獻(xiàn)沒有公開美度銨可以作為分子在線粒體呼吸作用的鏈中參與電子輸送。因而美度銨基本也可以和輔酶QIO、煙堿和具有類似作用機(jī)理的物質(zhì)區(qū)別開。同樣的，現(xiàn)有文獻(xiàn)中缺乏美度銨具有任何抗病毒性能的數(shù)據(jù)。因此，為了基本上抑制這些抗病毒藥物的副作用，我們發(fā)現(xiàn)美度銨單獨(dú)或和含有逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(如疊氮胸苷、拉米夫定、司他伏定和美度銨或其藥物上可接受的鹽)的藥物組合物特別是在心肌癥和神經(jīng)毒素作用中的意外效果沒有降低其抗病毒活性，這在現(xiàn)有技術(shù)中是不曾公開的，并且基本和現(xiàn)有的含有逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的組合物不同。美度銨作為藥物活性成分具有極低的毒性的特點(diǎn)是公知的(鼠致死量高于25，000mg/kg)，美度銨既不會(huì)產(chǎn)生胎兒畸形、胚胎中毒，也不會(huì)致癌，幾乎不對(duì)人類組織產(chǎn)生副作用。我們發(fā)現(xiàn)，美度銨也是化學(xué)惰性物質(zhì)，甚至可以和一些復(fù)雜和靈敏的化學(xué)物質(zhì)(如包括疊氮胸苷、拉米夫定和司他伏定的核苷類似物)一起用于制劑。我們發(fā)現(xiàn)在藥物組合物中，美度銨和逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑之間的比例可以為l:100到100:1。例如，在含有疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定和美度銨的組合物的試驗(yàn)中，美度銨與疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定之間的比例可以在1:5到5:1之間變化，優(yōu)選的比例為l:2到2:1。藥物組合物也可以美度銨和其它逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑為基礎(chǔ)制備；美度銨或其藥學(xué)上可接受的鹽與疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定的組合物不勝枚舉。在口服劑型中，每個(gè)藥片、膠囊、囊片或其它合適劑型中的疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定的含量為5-500mg。含有疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定與美度銨的藥物組合物可以配制成口服或腸胃外用劑型。在具體的實(shí)例中，也可以配制成經(jīng)由皮膚的劑型。對(duì)于口服的膠囊、藥片、囊片、藥丸、粉末、糖漿，以及其它含有疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定與美度銨、適于口服的合適劑型，除了疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定與美度銨外，可以包括藥學(xué)上接受的賦形劑。疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定與美度銨的量，以及疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定與美度銨的組合物的日常劑量應(yīng)該提供人體組織足夠濃度的疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定，對(duì)于人體一般為1-15mg/kg，鼠為10-150mg/kg。在這種情況下，所述組合物的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑為疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定，疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定與美度銨的組合物的藥片、膠囊、囊片或其它合適的口服劑型含有10-30mg的疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定，以及5-1000mg的美度銨。對(duì)于腸胃外劑型，疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定的濃度推薦為10-30mg/ml，美度銨的濃度推薦為50-400mg/ml。藥物組合物的配制以美度銨和其它逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑為基礎(chǔ)，這些逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑包括但不限于疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定，在司他伏定，疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定與美度銨或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物中，逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的比例和美度銨的比例一樣。本發(fā)明的特點(diǎn)通過(guò)下述實(shí)施例闡述，但不限于下述實(shí)施例。在為期2周的時(shí)間內(nèi)，通過(guò)向雄鼠施用初始量為15.69±1.56g的疊氮胸苷和美度銨藥物組合物，從而對(duì)心臟中毒作用進(jìn)行了考察。在試驗(yàn)期間，這些動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)溫度為22±0.5QC，進(jìn)行12小時(shí)的日光/黑暗循環(huán)，并用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物食物進(jìn)行喂養(yǎng)。對(duì)于控制組(n二6)，每日用0.9%NaCl水溶液通過(guò)腹膜注射(第1組和第12組)。在系列試驗(yàn)中，對(duì)于試驗(yàn)組的動(dòng)物(包括每6只鼠)，每日通過(guò)腹膜施用下述溶液。第1系列試驗(yàn)第1組—對(duì)照組；第2組-0.9%NaCl溶液中含有100mg/kg的美度銨；第3組-O.9%NaCl溶液中含有50mg/kg的疊氮胸苷；第4組-含有質(zhì)量比為1:2的疊氮胸苷和美度銨的150mg/Kg的藥物組合物溶于0.9%NaCl溶液中；第5組-100mg/kg的美度銨溶于0.9%NaCl溶液中，50mg/kg的疊氮胸苷溶于0.9。％NaCl溶液中；第2系列試驗(yàn)第6組-50mg/kg的司他伏定溶于0.9%NaCl溶液中；第7組-50mg/kg的拉米夫定溶于0.9%NaCl溶液中；第8組-含有質(zhì)量比為1:2的司他伏定和美度銨的150mg/Kg的藥物組合物溶于0.9%NaCl溶液中；第9組-含有質(zhì)量比為1:2的拉米夫定和美度銨的150mg/Kg的藥物組合物溶于0.9%NaCl溶液中；第10組-100mg/kg的美度銨溶于0.9%NaCl溶液中；第11組-100mg/kg的美度銨溶于0.9%NaCl溶液中，50mg/kg的司他伏定溶于0.9%NaCl溶液中；第12組-100mg/kg的美度銨溶于0.9%NaCl溶液中，50mg/kg的拉米夫定溶于0.9%NaCl溶液中；第13組-對(duì)照組。在試驗(yàn)的第15天，將動(dòng)物斬首，取出心臟，放在10%的福爾馬林溶液中。對(duì)于免疫組織化學(xué)學(xué)研究，根據(jù)使用DAKOLSAB試劑盒的抗生素蛋白-生物素免疫-組織化學(xué)方法，器官固定于石蠟中，切成4um厚的淺色標(biāo)本。除去標(biāo)本中的脂肪，用試劑阻斷過(guò)氧化酶(過(guò)氧化氫和疊氮化鈉0.015mo1/1)固定10分鐘，在等滲緩沖液(pH7.6)中清洗，然后在潮濕箱中用野兔多克隆NF-kBp65抗體(Abeam,Ltd)(1:200)在4。C下培育12小時(shí)。在室溫下用生物素化抗羊lgG將標(biāo)本培養(yǎng)30分鐘。然后用酶標(biāo)記的鏈霉親和素培養(yǎng)。免疫過(guò)氧化酶的顏色反通過(guò)二氨基聯(lián)苯胺的培養(yǎng)進(jìn)一步進(jìn)行。在著色過(guò)程中，肺組織(肺泡巨噬細(xì)胞)一般作為陽(yáng)性對(duì)照，而沒有用初級(jí)抗體預(yù)處理的組織作為陰性對(duì)照。NF-kBP65陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量(細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核染色中的)用盲估計(jì)方法計(jì)算。圖像分析軟件MoticImage,Motic禾口ImageProPlus，Leica:4000B用于數(shù)量估計(jì)。所有的細(xì)胞計(jì)數(shù)用每lm^的細(xì)胞表達(dá)。在心臟中，NF-kBp65陽(yáng)性心肌細(xì)胞核在高功率域(X400)計(jì)數(shù)，記錄下它們的總數(shù)。結(jié)果表示成平均士SEM。對(duì)于分析的統(tǒng)計(jì)可靠性，我們用impairedt-test(MannWhitneyUtest)進(jìn)行置信度分析，P〈0.05。和對(duì)照組相比，我們發(fā)現(xiàn)，AZT、司他伏定或拉米夫定誘導(dǎo)血管周水腫、心肌脂肪組織惡化和導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死的白細(xì)胞滲透。和AZT、司他伏定或拉米夫定一起服用的美度銨、以及例如比例為2:1的美度銨/AZT、美度銨/司他伏定或美度銨/拉米夫定藥物組合物大大減少了血管周和基質(zhì)水腫，防止了心肌細(xì)胞壞死、心肌脂肪組織惡化和白血病滲透。<image>imageseeoriginaldocumentpage13</image>圖1和表1顯示的結(jié)果證實(shí)AZT誘導(dǎo)的總的(定位于細(xì)胞核和細(xì)胞溶質(zhì))NF-kBp65活化是統(tǒng)計(jì)可靠的(P〈0.05)，和AZT組相比，美度銨/AZT藥物組合物破壞的心肌極少，這被美度銨/AZT組合物情況下NF-kB活性顯著降低(P〈0.05)的事實(shí)所證實(shí)。相同的結(jié)果從美度銨和AZT分別服用的組得到。而且，當(dāng)美度銨和美度銨/AZT組合物在藥物中應(yīng)用時(shí)，NF-kBp65活性和對(duì)照的動(dòng)物組的參數(shù)區(qū)別不大。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>圖1:心臟組織中NF-kB陽(yáng)性細(xì)胞的總數(shù)。其中所述的代碼含義:Control—對(duì)照組，Mildr-美度銨組，AZT—AZT組，AZT+Mildr-美度銨/AZT藥物組合物。相對(duì)于對(duì)照組，統(tǒng)計(jì)可靠性的計(jì)算值求P〈0.05;相對(duì)于AZT組，#P〈0.05。表lc亂dci亂仏cic^氛dci<image>imageseeoriginaldocumentpage14</image>圖2:心臟組織中NF-kB陽(yáng)性細(xì)胞的總數(shù)。其中所述的代碼含義Control-對(duì)照組，Meldonium-美度銨組，Stavudine-司他伏定組，Lamivudine-拉米夫定組，Stavudine&Meldonium-司他伏定/美度銨藥物組合物組，Lamivudine&Meldonium-拉米夫定/美度銨藥物組合物組。相對(duì)于對(duì)照組，統(tǒng)計(jì)可靠性的計(jì)算值tP<0.05;相對(duì)于司他伏定組，ttP〈0.05;相對(duì)于拉米夫定組，$〈0.05。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>圖2和表2顯示的結(jié)果證實(shí)司他伏定和拉米夫定誘導(dǎo)的總的(定位于細(xì)胞核和細(xì)胞溶質(zhì))NF-kBp65話化是統(tǒng)計(jì)可靠的(P<0.05)，和司他伏定和拉米夫定組相比，美度銨/司他伏定藥物組合物或美度銨/拉米夫定藥物組合物破壞的心肌極少，這被司他伏定/美度銨組合物或拉米夫定/美度銨組合物情況下的NF-kB活性顯著降低(P<0.05)的事實(shí)所證實(shí)。相同的結(jié)果從美度銨和拉米夫定或司他伏定分別服用的組得到。而且，當(dāng)應(yīng)用本發(fā)明的組合物時(shí)，NF-kBp65活性和對(duì)照的動(dòng)物組的參數(shù)區(qū)別不大。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>圖3:鼠心肌組織中的NF-kB陽(yáng)性心肌細(xì)胞。相對(duì)于AZT組計(jì)算統(tǒng)計(jì)可靠性*P〈0.05。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>定位于心肌細(xì)胞核中的NF-kBp65的活化(圖3和表3)僅僅在AZT和AZT+美度銨組中觀察到。也即，在美度銨和AZT藥物組合物的應(yīng)用中，NF-kB活性水平相對(duì)于AZT組(P〈0.05)的參數(shù)是相對(duì)很低的。相同的結(jié)果從美度銨和AZT分別服用的組得到。<image>imageseeoriginaldocumentpage16</image>圖4:鼠心肌組織中的NF-kB陽(yáng)性心肌細(xì)胞。相對(duì)于司他伏定組計(jì)算統(tǒng)計(jì)可靠性*P<0.05。相對(duì)于拉米夫定組計(jì)算統(tǒng)計(jì)可靠性#P〈0.05。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>定位于心肌細(xì)胞核中的NF-kBp65的活化(圖4和表4)僅僅在司他伏定和拉米夫定和美度銨/司他伏定或美度銨/拉米夫定藥物組合物中觀察到。也即，在美度銨/司他伏定和美度銨/拉米夫定藥物組合物的應(yīng)用中，NF-kB活性水平相對(duì)于司他伏定和拉米夫定組(P〈0.05)的參數(shù)是相對(duì)很低的。相同的結(jié)果從美度銨和AZT分別服用的組得到。研究表明，AZT增加了心臟組織中NF-kBp65陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)和心肌細(xì)胞核中NF-kBp65的總數(shù)。相反的，所述相應(yīng)的美度銨和AZT、司他伏定或拉米夫定的施用，以及美度銨和AZT、美度銨和司他伏定或美度銨和拉米夫定的藥物組合物降低了心臟組織中NF-kBp65陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)和心肌細(xì)胞核中NF-kBP65的總數(shù)。證實(shí)結(jié)果其它比例的美度銨/AZT、美度銨/司他伏定或美度銨/拉米夫定藥物組合物中觀察到，美度銨/AZT、美度銨/司他伏定或美度銨/拉米夫定的比例在5:l到l:2之間的副作用最小。口服時(shí)美度銨的生物利用度非常高，因此美度銨/AZT、美度銨/司他伏定或美度銨/拉米夫定藥物組合物的毒性大大低于腸胃外和腸道給藥的AZT、拉米夫定或司他伏定劑型。因此，結(jié)果顯示，美度銨和AZT、拉米夫定或司他伏定聯(lián)合給藥、以及施用含有美度銨/AZT、美度銨/司他伏定或美度銨/拉米夫定藥物組合物對(duì)心肌和神經(jīng)細(xì)胞的毒副作用和AZT、拉米夫定或司他伏定完全不同。AZT、拉米夫定或司他伏定引起心肌的脂肪惡化、心臟組織中的NF-kBp65活化，而沒有統(tǒng)計(jì)疏浚表明類似劑量的AZT、拉米夫定或司他伏定和美度銨平行使用或和美度銨一起在藥物組合物中使用對(duì)心肌有損害。進(jìn)一步做試驗(yàn)以證實(shí)，和AZT、拉米夫定或司他伏定使用時(shí)的NRTI毒害神經(jīng)作用相比，平行使用美度銨或AZT/美度銨組合物、拉米夫定/美度銨藥物組合物或司他伏定/美度銨藥物組合物具有很多優(yōu)點(diǎn)。在類似的試驗(yàn)中，兩周后對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)反應(yīng)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。在該評(píng)價(jià)中，進(jìn)行了尾部壓縮模型中潛在疼痛的常規(guī)測(cè)試和腦皮層神經(jīng)元退化的評(píng)價(jià)(分子和外部粒層)。試驗(yàn)表明，和對(duì)照組相比，AZT、拉米夫定或司他伏定刺激了極大的感覺過(guò)敏，同時(shí)引起大腦皮層神經(jīng)元的退化三倍。同時(shí)，和對(duì)照試驗(yàn)相比，美度銨和AZT、拉米夫定或司他伏定的聯(lián)合給藥或AZT/美度銨、拉米夫定/美度銨或司他伏定/美度銨藥物組合物的施用沒有造成大腦皮層中神經(jīng)元數(shù)量的退化，這表明所述的組合物和AZT、拉米夫定或司他伏定相比具有優(yōu)點(diǎn)。因此，在14天的使用中，AZT/美度銨、拉米夫定/美度銨或司他伏定/美度銨藥物組合物或美度銨和AZT、拉米夫定或司他伏定的聯(lián)合給藥和AZT、拉米夫定或司他伏定不同，所述的組合物對(duì)心臟或腦組織沒有毒副作用。因此，AZT/美度銨、拉米夫定/美度銨或司他伏定/美度銨藥物組合物或美度銨和AZT、拉米夫定或司他伏定的聯(lián)合給藥在臨床應(yīng)用中具有高度的安全性。美度銨/AZT、拉米夫定/美度銨或司他伏定/美度銨藥物組合物可以配制成口服、腸胃外給藥和局部給藥的劑型。對(duì)于腸胃外給藥的劑型，美度銨/AZT、拉米夫定/美度銨或司他伏定/美度銨藥物組合物可以配制成干的滅菌粉末用于注射，注射時(shí)可以和或不和藥物上合適的賦形劑或溶液一起使用。對(duì)于注射的溶液形式，包括相應(yīng)濃度的美度銨和AZT、美度銨/司他伏定或美度銨/拉米夫定水溶液、0.9%NaCl溶液、葡萄糖溶液或藥學(xué)上和其活性相容的合適的緩沖溶液。美度銨在注射劑型中的濃度可以達(dá)到40%，而AZT、拉米夫定或司他伏定的最大濃度取決于AZT、拉米夫定或司他伏定在相應(yīng)溶劑中的溶解度。美度銨/AZT、拉米夫定/美度銨或司他伏定/美度銨藥物組合物的口服劑型(有或沒有包衣的片劑、膠囊、囊片、糖衣丸、藥丸、藥粒、粉末或溶液)和類似劑型用口服劑型常用的制備方法制備，化學(xué)上和AZT、拉米夫定或司他伏定和美度銨相容的、藥學(xué)上可接受的賦形劑(添加劑)可以選擇使用。AZT、拉米夫定或司他伏定在沒中口服劑型的量為5-500mg，優(yōu)選為15-40mg或100-300mg，而美度銨的量為5-4500mg，優(yōu)選為20-600mg。本發(fā)明的口服藥物組合物實(shí)例包括但不限于下述片劑產(chǎn)品實(shí)例1實(shí)例2實(shí)例3實(shí)例4實(shí)例5AZT100mg300mg300mg00拉米夫定000100mg150mg美度銨250mg600mg60mg200mg300mg淀粉20mg40mg20mg20mg25mg滑石10mg20mg10mg10mg15mg硬脂酸,丐lmg2mglmglmglmg18<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>工業(yè)應(yīng)用性治療逆轉(zhuǎn)錄酶病毒感染的藥物組合物含有一種臨床有效量的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，即疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定，以及美度銨或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及其它藥學(xué)上可接受的賦形劑。該藥物組合物可以在標(biāo)準(zhǔn)的藥物生產(chǎn)企業(yè)中生產(chǎn)。權(quán)利要求1.一種藥物組合物，該藥物組合物含有臨床有效量的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、美度銨或其藥學(xué)上可接受的鹽、以及藥學(xué)上可接受的賦形劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑選自疊氮胸苷(AZT)(化學(xué)表達(dá)為3'-疊氮-3'-脫氧胸苷)；拉米夫定(化學(xué)表達(dá)為(2R-順)-4-氨基-1-[2-(羥甲基)-l，3-氧硫雜環(huán)戊垸-5-基]-2(lH)-嘧啶酮)和司他伏定(化學(xué)表達(dá)為2'，3'-二脫氫-3'-脫氧胸苷)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中含有美度銨和/或其鹽，美度銨/鹽和逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑之間的質(zhì)量比為100:1至1:100，優(yōu)選為20:1至1:20，更加優(yōu)選為5:1至1:5，最優(yōu)選為2:1至l:2。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的含量為1-500mg，美度銨和/或其鹽的含量為5-2500mg。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的含量為10-300mg，美度銨和/或其鹽的含量為5-600mg。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中拉米夫定的含量為10-300mg，美度銨和/或其鹽的含量為5-600mg。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中司他伏定的含量為1-40mg，美度銨和/或其鹽的含量為1-300mg。8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其中所述組合物通過(guò)口服或舌下給藥，劑型為片劑(有或沒有包衣)、膠囊、囊片、糖衣丸、藥丸、粉末或溶液，其中片劑、膠囊、囊片、糖衣丸、藥丸、粉末中含有0.1-5.Og的活性成分，口服用的溶液或糖漿中含有0.5-40%的活性成分。9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其中所述組合物通過(guò)腸胃外給藥，所述組合物為含有0.1-5.Og活性成分的滅菌粉末。10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其中所述組合物通過(guò)腸胃外給藥，所述組合物為含有l(wèi)-200mg/ml逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和1-400mg/ml美度銨和/或其鹽的注射液。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中美度銨和/或其鹽以0.9%NaCl溶液的形式施用。12.美度銨或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備減輕或消除副作用的藥物中的應(yīng)用，具體是在制備減少或避免線粒體受損中的藥物中的應(yīng)用，特別是在制備減少或避免藥物組合物中逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑引起的心臟和/或神經(jīng)中毒的藥物中的應(yīng)用。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其中美度銨和/或其鹽和一種或多種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑混合施用，或者分別和逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑同時(shí)施用，或者在逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑施用前或施用后立即施用，優(yōu)選以0.9%NaCl溶液的形式施用。14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的應(yīng)用，其中通過(guò)口服、腸胃外或局部給藥。15.根據(jù)權(quán)利要求12或13或14所述的應(yīng)用，其中美度銨和/或其鹽以臨床有效量給藥。全文摘要本發(fā)明公開了一種新的藥物組合物，所述藥物組合物含有一種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，即治療有效量的疊氮胸苷、拉米夫定或司他伏定，和美度銨，以及藥學(xué)上應(yīng)用的賦形劑。已經(jīng)證實(shí)，含有美度銨的這些藥物組合物基本降低了逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑對(duì)心臟和神經(jīng)的毒性。文檔編號(hào)A61P31/18GK101252925SQ200680029882公開日2008年8月27日申請(qǐng)日期2006年8月8日優(yōu)先權(quán)日2005年8月15日發(fā)明者I·卡維士,I·臺(tái)萬(wàn),J·盧馬克思,J·帕普,S·伊莎紀(jì)斯,V·個(gè)舊山,V·凱露莎申請(qǐng)人:拉脫維亞有機(jī)合成學(xué)院