專利名稱：芍藥苷在補(bǔ)血作用中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中成藥活性部位，特別是涉及四物湯活性部位及有效成分。
背景技術(shù)：
四物湯發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)是其有效化學(xué)成分，其防病治病的功效是其多種化學(xué)成分的總體效應(yīng)所致。但目前對(duì)四物湯化學(xué)成分的研究十分薄弱，要從根本上研究四物湯復(fù)方的配伍組方規(guī)律，從細(xì)胞、分子水平進(jìn)行揭示、從理論高度進(jìn)行闡釋四物湯組方原理的科學(xué)內(nèi)涵，必須將配伍機(jī)制的研究與四物湯復(fù)方產(chǎn)生療效的物質(zhì)基礎(chǔ)研究緊密結(jié)合起來。但是，四物湯作為中藥復(fù)方其有效成分極其復(fù)雜，甚至其每一味單藥均可作為一個(gè)小復(fù)方，因此，我們首先根據(jù)極性的不同及分子量的大小對(duì)四物湯水煎液進(jìn)行了化學(xué)部位分離，并以外周血象、骨髓造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)等指標(biāo)進(jìn)行活性追蹤；同時(shí)應(yīng)用高效薄層層析(HPTLC)及高效液相色譜(HPLC)技術(shù)等方法對(duì)各部位的成分進(jìn)行初步分析鑒定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供四物湯活性部位。
本發(fā)明四物湯活性部位，其特征在于由B和C兩部分組成，所述有效部位是由四物湯藥材煎煮1-3次，過濾，得水煎液；水煎液于20-70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，用15-25％乙醇沉淀，得沉淀，上清液繼續(xù)進(jìn)行35-45％乙醇沉淀，得沉淀，上清液繼續(xù)進(jìn)行55-65％乙醇沉淀，得沉淀上清液繼續(xù)進(jìn)行75-85％乙醇沉淀，得沉淀，上清液濃縮至無乙醇味得浸膏，加溶解進(jìn)行乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯液，回收溶劑得提取物，余下水液約進(jìn)行丁醇萃取，合并正丁醇液，回收溶劑得提取物B，余下水液約濃縮至發(fā)泡而不能繼續(xù)，得提取物C。
本發(fā)明公開一種四物湯活性部位，其特征在于主要含有芍藥苷9.7％，果糖16.5％，葡萄糖10.1％，蔗糖22.3％。該有效部位的制備方法為四物湯藥材煎煮1-3次，過濾，得水煎液；水煎液于20-70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，用15-25％乙醇沉淀，得沉淀，上清液繼續(xù)進(jìn)行35-45％乙醇沉淀，得沉淀，上清液繼續(xù)進(jìn)行55-65％乙醇沉淀，得沉淀上清液繼續(xù)進(jìn)行75-85％乙醇沉淀，得沉淀，上清液濃縮至無乙醇味得浸膏，加溶解進(jìn)行乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯液，回收溶劑得提取物，余下水液約進(jìn)行丁醇萃取，合并正丁醇液，回收溶劑得該活性部位。
按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明藥物組合物制備成多種臨床藥物劑型，包括口服制劑或非腸道給藥的劑型。所說的口服制劑選自于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑當(dāng)中的一種；所說的非腸道給藥劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的一種。本發(fā)明藥物還可加入常規(guī)的藥物賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑等。芍藥苷具有補(bǔ)血作用。
以下實(shí)驗(yàn)例用四物湯水煎液分離了的化學(xué)部位以外周血象、骨髓造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)等指標(biāo)進(jìn)行活性追蹤；同時(shí)應(yīng)用高效薄層層析(HPTLC)及高效液相色譜(HPLC)技術(shù)等方法對(duì)活性部位的成分進(jìn)行初步分析鑒定。
以下實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)例1 四物湯活性成分的分離第一次部位分離四物湯經(jīng)水煎、過濾、濃縮、配制成100％藥液(即每ml藥液含生藥1g)，然后逐步加乙醇至20％-80％，分別得20％醇沉物(A)、80％醇沉物(B)、80％醇沉上清提取物(C)。用A、B、C三部分進(jìn)行初步活性分析(見表1)。
表1四物湯及其第一次部位分離物對(duì)血虛證小鼠外周血白細(xì)胞的影響(x±s)

注*與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；△與四物湯組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。
結(jié)果提示B、C兩部分與四物湯的活性相當(dāng)后，進(jìn)行第二次部位分離四物湯經(jīng)水煎、過濾、濃縮、配制成100％藥液(即每ml藥液含生藥1g)，逐步加乙醇20-80％，分別得到20-40％、40-60％、60-80％醇沉物(B1)、(B2)、(B3)；醇沉上清液濃縮去乙醇，然后依次經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇萃提，回收溶劑得提取物為(C1)、(C2)，剩余水部分濃縮得提取物為(C3)，進(jìn)一步進(jìn)行活性評(píng)價(jià)。
表2四物湯及其B部位分離物對(duì)血虛證小鼠外周血白細(xì)胞的影響(x±s，n＝10)

注與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；△與四物湯組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01
表3四物湯及其C部位分離物對(duì)血虛證小鼠外周血白細(xì)胞的影響(x±s，n＝10)

注與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；△與四物湯組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以外周血白細(xì)胞、骨髓造血祖細(xì)胞為指標(biāo)對(duì)四物湯提取物進(jìn)行活性追蹤，提示80％醇沉物(B)及80％醇沉上清(C)活性較強(qiáng)；對(duì)二者進(jìn)一步分離提取物的活性追蹤實(shí)驗(yàn)提示B3、C2、C3部位活性相對(duì)較強(qiáng)，均能升高輻射損傷性血虛證小鼠外周血中白細(xì)胞數(shù)。但B1、B2及B3的補(bǔ)血作用均不及B。
表4四物湯及其提取物對(duì)血虛證小鼠造血祖細(xì)胞增殖的影響(x±s，n＝10)

注*與模型對(duì)照比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001體外造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)一步追蹤驗(yàn)證了四物湯分離提取物的補(bǔ)血活性，而且首次發(fā)現(xiàn)芍藥苷具有補(bǔ)血作用。
實(shí)驗(yàn)例2 四物湯復(fù)方活性部位的初步分析鑒定一、HPTLC表明四物湯B活性部分主要由芍藥苷、單糖、二糖(很可能是蔗糖)組成 見圖1、2。
二、H PLC表明四物湯正丁醇部分含有芍藥苷 見圖3三、ESIMS表明四物湯正丁醇部分含有芍藥苷 見圖4、5、6四、TLC表明四物湯正丁醇部分的單糖主要為果糖和葡萄糖 見圖7實(shí)驗(yàn)例3 四物湯正丁醇部分芍藥苷、果糖、葡萄糖、蔗糖的含量測(cè)定經(jīng)HPLC測(cè)定(方法略)，四物湯正丁醇部分浸膏中，含有芍藥苷9.7％，果糖16.5％，葡萄糖10.1％，蔗糖22.3％。


圖1、2四物湯B活性部分HPTLC3四物湯正丁醇部分HPLC4、5、6四物湯正丁醇部分ESIMS7四物湯正丁醇部分TLC圖下列實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1四物湯正丁醇提取物(B)及活性部位C的制備方法四物湯藥材600g，第一煎加水3000ml，浸泡1h，煎30min，三層紗布過濾，第二煎加水2100ml，煎20min三層紗布過濾，得水煎液3700ml。水煎液≤60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至600ml，20％乙醇沉淀，得沉淀(G部分，14.91g)，上清液685ml繼續(xù)進(jìn)行40％乙醇沉淀得沉淀(F部分，58.5g)，上清液500ml，繼續(xù)進(jìn)行60％乙醇沉淀，得沉淀(E，15.47g)，上清液725ml繼續(xù)進(jìn)行80％乙醇沉淀，得沉淀(D，59.33g)，上清液1320ml，濃縮至無乙醇味得浸膏(86.2g)，加水300ml溶解得水液約500ml，進(jìn)行乙酸乙酯萃取(500ml、500ml、300ml)，合并乙酸乙酯液，回收溶劑得提取物A(1.934g)，余下水液約500ml，進(jìn)行正丁醇萃取(500ml、400ml，300ml)，合并正丁醇液，回收溶劑得提取物B(11.5g)，余下水液約500ml濃縮至發(fā)泡而不能繼續(xù)，得提取物C(74.8g)。
實(shí)驗(yàn)例2膠囊劑的制備本發(fā)明有效部位B 500g、C 500g，藥用淀粉1000g，混合均勻，裝入1號(hào)膠囊，每粒0.2g，每次口服2-3粒，每日兩次。
實(shí)施例3片劑的制備本發(fā)明有效部位B 200g、C 800g，藥用淀粉400g，糊精100g，混合均勻，用適量乙醇制粒，經(jīng)整粒機(jī)整粒，壓片，每片0.25g，口服，每次2片，每日兩次。
實(shí)施例4顆粒劑的制備本發(fā)明有效部位B 15g、C 85g，，糖粉100g，混合均勻，用適量乙醇制粒，干燥、整粒、分裝即得?？诜?，一次5g，一日兩次。
實(shí)施例5四物湯藥材600g，第一煎加水3000ml，浸泡1h，煎30min，三層紗布過濾，第二煎加水2100ml，煎20min三層紗布過濾，得水煎液3700ml；水煎液≤60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至600ml，20％乙醇沉淀，得沉淀14.91g，上清液685ml繼續(xù)進(jìn)行40％乙醇沉淀得沉淀58.5g，上清液500ml，繼續(xù)進(jìn)行60％乙醇沉淀，得沉淀15.47g，上清液725ml繼續(xù)進(jìn)行80％乙醇沉淀，得沉淀59.33g，上清液1320ml，濃縮至無乙醇味得浸膏86.2g，加水300ml溶解得水液約500ml，分別用500ml、500ml、300ml乙酸乙酯進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯液，回收溶劑得提取物1.934g，余下水液約500ml，分別用500ml、400ml，300ml正丁醇進(jìn)行萃取，合并正丁醇液，回收溶劑得該活性部位，主要含有芍藥苷9.7％，果糖16.5％，葡萄糖10.1％，蔗糖22.3％。所得有效部位加入糖粉適量，混合均勻，用適量乙醇制粒，干燥、整粒、分裝即得。口服，一次5g，一日兩次。
權(quán)利要求
1.芍藥甙在制備具有補(bǔ)血作用的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開四物湯活性部位，尤其公開了芍藥甙在制備具有補(bǔ)血作用的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P7/06GK101040864SQ20061016181
公開日2007年9月26日 申請(qǐng)日期2003年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月9日
發(fā)明者高月, 王升啟, 馬百平, 梁乾德, 邱成斌, 馬增春, 陳鵬, 譚洪玲, 肖成榮, 趙永紅 申請(qǐng)人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所