專利名稱：治療和預(yù)防病毒性流感感染的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了用于治療病毒性流感(流行性感冒)感染的新方法。尤其是，提供了一種用于預(yù)防和/或治療流感的方法，該方法包括給予受治療者治療有效量的抑制素或抑制素類化合物，如美伐他汀(mevastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastain)以及辛伐他汀(simvastatin)。
背景技術(shù)：
A型流感病毒流感是世界范圍內(nèi)最廣泛傳播的傳染病之一。僅在美國，估計每年有20,000至40,000例死亡可歸因于A型流感病毒的感染。另外，還存在這樣的可能性，即由于病毒通過人群的快速傳播，使得流感病毒可引起時疫或大疫。
若干性能有助于流感病毒的流行病成功蔓延。首先，它通過浮質(zhì)(氣溶膠)可以很容易在人之間傳播(也稱作飛沫傳染)。第二，流感病毒抗原的較小變化是頻繁的(抗原漂移)，以致病毒很容易逃避通過由先前暴露于病毒的不同變異體所誘導(dǎo)的預(yù)防免疫性。第三，通過在不同菌株之間的遺傳物質(zhì)的重配或混合(抗原轉(zhuǎn)移)可以很容易產(chǎn)生流感病毒的新菌株。在A型流感病毒的情況下，上述混合可以發(fā)生在影響不同物種的亞型或菌株之間。
盡管進(jìn)行了大量深入的研究工作，但對于流感病毒感染仍然沒有有效的治療法并且現(xiàn)有疫苗的價值有限，這部分是由于上述抗原轉(zhuǎn)移和漂移的性能。由于這些原因，對于A型流感病毒的全球監(jiān)測已進(jìn)行了許多年。雖然目前基于滅活病毒的疫苗能夠在65歲以下的健康個體中預(yù)防大約70-80％的疾病，但在老年或免疫受損人群中，這種百分比要低得多。此外，與疫苗給予有關(guān)的費(fèi)用和潛在的副作用使得這種方式不是最優(yōu)的。
因此，仍然需要開發(fā)有效的治療法來治療和預(yù)防流感感染。
病毒重配和遺傳流感病毒是正粘病毒，并且分成三種類型A型、B型以及C型。A型和B型流感病毒顆粒包含反義基因組、分成8個線性片斷的單鏈RNA。單宿主同時感染兩種不同的流感病毒可以導(dǎo)致產(chǎn)生“重配(reassortment)”子代病毒，其具有基因組片斷的新組合，衍生自每個母病毒(在Baigent and McCauley，2003中對此有評述)。
A型流感病毒已引起最近4次嚴(yán)重人類呼吸病的大流行病。A型流感病毒根據(jù)它們的表面蛋白、血凝素(HA或H)以及神經(jīng)氨酸酶(NA或N)可以分成各亞型。存在14種已知的H亞型和9種已知的N亞型。已經(jīng)報道僅有三種H亞型(H1、H2和H3)和兩種N亞型(N1和N2)，通常在人類中傳播。
在稱作“抗原漂移”的過程中，人類中的季節(jié)性流感流行病與在血凝素和神經(jīng)氨酸酶蛋白的抗原部位的氨基酸變化有關(guān)。大流行病與下述有關(guān)通過重配，將來自動物源的流感病毒的新的血凝素和神經(jīng)氨酸酶基因引入目前傳播人類病毒的遺傳背景-稱作“抗原轉(zhuǎn)移”中。
流感感染的目前療法目前，有兩類商業(yè)上可獲得的藥物用于預(yù)防和治療人類的流感病毒感染M2離子通道阻斷劑和神經(jīng)氨酸酶抑制劑。
三環(huán)癸胺(Amantadine)和金剛乙胺(Rimantadine)是通過阻斷在病毒進(jìn)入復(fù)制生命周期的早期主要需要的病毒M2蛋白質(zhì)的離子通道活性來起作用。在治療A型流感時，兩種療法都是高度有效的，但對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝以及腎會引起顯著的副作用。在體外和體內(nèi)，敏感的流感菌株會快速產(chǎn)生耐藥性。
奧塞米韋(Oseltamivir)和扎那米韋(Zanamivir)可阻斷神經(jīng)氨酸酶的作用，以防止來自感染細(xì)胞新形成的病毒釋放以及在宿主內(nèi)傳播。在臨床研究中，兩種藥物都有效地抑制流感病毒，然而在細(xì)胞培養(yǎng)以及在患者體內(nèi)，已經(jīng)觀察到了逃避神經(jīng)氨酸酶抑制劑的選擇性壓力。
許多目前的抗病毒療法都直接針對靶病毒成分，因而傾向于代償性病毒逃避機(jī)制。
希望有這樣的療法，這些療法的目的在于通過增強(qiáng)抗病毒應(yīng)答或通過抑制在宿主細(xì)胞內(nèi)的前病毒活性來操縱宿主以干擾病毒復(fù)制，從而具有更大的潛力來控制流感而無需對病毒本身施加所需要的以代償方式突變的選擇性壓力。同樣特別引人關(guān)注的是，對于靶向病毒和宿主同時聯(lián)合治療的可能性，使得病毒獲得耐藥性的機(jī)會減到最低程度。
利巴韋林(ribavirinTM)是一種基于嘌呤核苷類似物的廣譜抗病毒劑，并且是丙型肝炎的標(biāo)準(zhǔn)治療處方藥(regimen)。已知利巴韋林通過誘導(dǎo)病毒RNA基因組的致死誘變而對于各種RNA病毒是活性的。并且已知利巴韋林相對于動物冠狀病毒顯示出抗病毒活性。雖然利巴韋林對于許多病毒都具有顯著的抗病毒活性，但它未被承認(rèn)為用于流感感染的藥劑。此外，與利巴韋林有關(guān)的相當(dāng)大的毒性限制了其作為藥劑的應(yīng)用。
抑制素化合物抑制素是這樣的化合物，已知這些化合物對人體血液中的LDL-膽固醇水平具有降低的效應(yīng)。抑制素抑制羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶，其為在膽固醇生物合成中的速率決定步驟。
目前可獲得的抑制素包括洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀(fluvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)以及阿托伐他汀(atorvastatin)。洛伐他汀(披露在美國專利第4,231,938號中)以及辛伐他汀(ZOCOR；披露在美國專利第4,444,784號以及WO00/53566號中)是以內(nèi)酯形式給予的。在吸收以后，在肝中內(nèi)酯環(huán)通過化學(xué)或酶催化水解作用被打開，并且產(chǎn)生活性羥酸。
普伐他汀(PRAVACHOL；披露在美國專利第4,346,227號中)是作為鈉鹽給予的。也是作為鈉鹽給予的氟伐他汀(LESCOL；披露在美國專利第4,739,073號中)以及西立伐他汀(披露在美國專利第5,006,530號以及第5,177,080號中)是全合成化合物，這些化合物是部分結(jié)構(gòu)上不同于包含六氫萘環(huán)的一類化合物的真菌衍生物。阿托伐他汀以及兩種新的“超抑制素”(稱作羅蘇伐他汀(rosuvastatin)和匹伐他汀(pitavastatin))是作為鈣鹽給予的。
國際專利申請WO 00/47196涉及一種用于治療患有丙型肝炎、人類免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎、G型肝炎或H型肝炎的哺乳動物的方法，其通過給予患者至少一種抑制素或抑制素類化合物。
然而，WO 00/47196并沒有考慮到將所述抑制素化合物應(yīng)用于預(yù)防上述病毒感染以及不同于在其中列出的病毒感染。
本發(fā)明人已經(jīng)驚人地發(fā)現(xiàn)，抑制素或其前體、或抑制素類化合物可以以預(yù)防方式起作用，以防止A型流感感染。尤其是，已經(jīng)驚人地和意想不到地發(fā)現(xiàn)，抑制素羥酸鹽(在本領(lǐng)域稱作抑制素的前藥化合物的活性代謝物)，其包括但不限于美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀以及辛伐他汀，可有效用于預(yù)防性治療暴露于流感病毒的任何菌株的脊椎動物、尤其是哺乳動物并且更尤其是人類。
本發(fā)明人已經(jīng)驚人地發(fā)現(xiàn)，通過任何給藥途徑，但優(yōu)選通過鼻內(nèi)給藥，以規(guī)定劑量給予患者抑制素前藥(羥酸鹽)的活性代謝物，將賦予對于流感病毒激發(fā)的感染抗性。
在臨床研究中，以任何規(guī)定的濃度給予相應(yīng)的前藥抑制素未表現(xiàn)出預(yù)防性抗病毒效應(yīng)，當(dāng)在用抑制素進(jìn)行治療的正常條件下的活性抑制素羥酸鹽的鼻內(nèi)濃度時，這種活性代謝物并沒有達(dá)到所需要的濃度以預(yù)防流感病毒附著和感染到對于流感病毒具有特異親合性的鼻/胸上皮細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了一種藥物組合物，其包含至少一種抑制素或其前藥以及藥用賦形劑、載體或稀釋劑。
在一
具體實施例方式
的藥物組合物中，抑制素是抑制素羥酸鹽。
在另一
具體實施例方式
的藥物組合物中，抑制素是洛伐他汀羥酸鈉鹽，即，Mevinolinic酸。
在另一
具體實施例方式
的藥物組合物中，抑制素前藥是選自由辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀組成的組。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種藥物組合物，其包含至少一種抑制素或其前藥、抗病毒化合物以及藥用賦形劑、載體或稀釋劑。
在一
具體實施例方式
的藥物組合物中，抑制素或其前藥配制在β-羥基環(huán)糊精中。
在另一
具體實施例方式
的藥物組合物中，抑制素前藥是選自由辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀組成的組。
在一
具體實施例方式
的藥物組合物中，其進(jìn)一步包括適宜的第二抗病毒化合物。
在進(jìn)一步的具體實施方式
的藥物組合物中，第二抗病毒化合物選自由利巴韋林、三環(huán)癸胺、金剛乙胺、奧塞米韋(達(dá)菲，TamifeluTM)或扎那米韋組成的組。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了所述藥物組合物在制備用于治療或預(yù)防人類感染A型流感的藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了所述藥物組合物在制備用于預(yù)防人感染甲型肝炎的藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了一種用于治療或預(yù)防人感染A型流感的方法，該方法包括以下步驟
提供一種包含至少一種抑制素或其藥用活性鹽或其前藥的組合物，以及將有效治療量的所述組合物給予至需要治療的受治療者。
在各
具體實施例方式
中，抑制素可以是至少一種抑制素羥酸鹽。在優(yōu)選的具體實施方式
中，抑制素是洛伐他汀羥酸鈉鹽，這種化合物也稱作Mevinolinic酸(Mevinolinic Acid)，該化合物具有444,54的分子量和CAS號[75225-50-2]。
在一
具體實施例方式
中，洛伐他汀由以下化學(xué)結(jié)構(gòu)所定義 在另外的一具體實施方式
中，也稱作Mevinolinic酸的洛伐他汀羥酸鈉鹽具有以下結(jié)構(gòu)式 在本文中提及“抑制素”時，該術(shù)語用來包括游離堿形式的抑制素、或這樣的抑制素的藥用鹽。另外，在提及抑制素的“前藥”時，它是進(jìn)一步用來包括前藥的鹽。
在某些
具體實施例方式
中，抑制素前藥可以選自由洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀組成的組。
在另外的具體實施方式
中，抑制素前藥可以是洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀的藥用活性鹽。在另一具體實施方式
中，抑制素是洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀的羥酸鹽。
在一
具體實施例方式
中，抑制素是普伐他汀羥酸鹽、辛伐他汀羥酸鹽、或美伐他汀羥酸鹽。
本發(fā)明的另一方面提供了至少一種抑制素或其前藥在制備用于治療人類的A型流感感染藥劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明的又一個方面提供了一種用于治療人類感染A型流感的藥物組合物，其中所述組合物包含至少一種抑制素或其前藥以及藥用賦形劑、載體或稀釋劑。
在一
具體實施例方式
中，組合物配制在β-羥基環(huán)糊精中。
本發(fā)明人也已經(jīng)確定，本發(fā)明的抑制素或抑制素前藥組合物可以與第二抗病毒組合物一起給予。這將提供聯(lián)合療法，其相對于具有特別高致病性的病毒感染可能具有實效。
因此，本發(fā)明的另一方面提供了一種用于預(yù)防或治療人類感染A型流感的方法，該方法包括以下步驟提供一種包含至少一種抑制素或其前藥的組合物，將有效治療量的所述組合物給予需要治療的受治療者，以及進(jìn)一步給予有效治療量的適宜的第二抗病毒化合物。
在各
具體實施例方式
中，抑制素可以是至少一種抑制素羥酸鹽(例如，洛伐他汀羥酸鈉鹽，也稱作Mevinolinic酸)。
在另外的具體實施方式
中，抑制素前藥可以選自由洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀組成的組。
在一
具體實施例方式
中，抑制素是普伐他汀羥酸鹽、辛伐他汀羥酸鹽、或美伐他汀羥酸鹽。
在一
具體實施例方式
中，抗病毒化合物是與抑制素或抑制素前藥組合物一起給予的，然而，在另外的具體實施方式
中，第二抗病毒化合物可以在給予抑制素或抑制素前藥組合物之前或之后給予。
在優(yōu)選的具體實施方式
中，第二抗病毒化合物可以選自由利巴韋林(ribavirin)、三環(huán)癸胺、金剛乙胺、奧塞米韋(oseltamivir)(達(dá)菲，TamifeluTM)或扎那米韋(zanamivir)組成的組。
根據(jù)本發(fā)明的又一個方面，提供了抑制素或抑制素前藥和抗病毒化合物在制備用于治療或預(yù)防感染A型流感的復(fù)方藥物(combined medicament)中的應(yīng)用。
在優(yōu)選的具體實施方式
中，第二抗病毒化合物可以選自由利巴韋林、三環(huán)癸胺、金剛乙胺、奧塞米韋(達(dá)菲，TamifeluTM)或扎那米韋組成的組。
本發(fā)明的又一個方面提供了一種用于治療人類感染A型流感感染的藥物組合物，其中所述組合物包含至少一種抑制素或其前藥、抗病毒化合物以及藥用賦形劑、載體或稀釋劑。
在一
具體實施例方式
中，組合物配制在β-羥基環(huán)糊精中。
抑制素不僅至少部分有效地抑制A型流感病毒的感染，而且有效地降低病毒傳播到未感染細(xì)胞的速度。在一具體實施方式
中，抑制素或其前體在制備用于治療感染A型流感的個體或具有被A型流感感染危險的個體的藥物中應(yīng)用。由于抑制素或其前體在感染性水平起作用，所以它們和抗病毒化合物協(xié)同地作用，其中抗病毒化合物通過其它方式起作用以預(yù)防病毒感染和傳播。
本發(fā)明人已進(jìn)一步確定，抑制素化合物及其羥酸鹽可用作預(yù)防藥，用于預(yù)防人感染肝炎病毒，尤其是丙型肝炎。
因此，在本發(fā)明的又一個方面提供了一種用于預(yù)防人感染A型流感的方法，該方法包括以下步驟提供一種包含至少一種抑制素或其前藥的組合物，將有效治療量的所述組合物給予至需要治療的受治療者。
在一
具體實施例方式
中，該方法進(jìn)一步包括進(jìn)一步給予有效治療量的適宜的第二抗病毒化合物的步驟。
在本發(fā)明的又一個方面，提供了抑制素或抑制素前藥以及抗病毒化合物在制備用于預(yù)防感染肝炎病毒的藥物中的應(yīng)用。在一具體實施方式
中，肝炎病毒是丙型肝炎。
本發(fā)明的又一個方面提供了用于預(yù)防人感染甲型肝炎的藥物組合物，其中所述組合物包含至少一種抑制素或其前藥以及藥用賦形劑、載體或稀釋劑。
抑制素化合物的合成本文中披露的活性化合物，即，抑制素羥酸鹽，可以合成或分離自作為原料的天然來源如紅曲(red yeast rice)。Mevinolinic酸(洛伐他汀羥酸鹽)是紅曲的一種已知成分。
治療/療法在本文中術(shù)語“治療”用來指任何可以有利于人或非人動物的方案(regimen)。治療可以是相對于現(xiàn)有狀態(tài)或可以是預(yù)防性的(預(yù)防性治療)。治療可以包括治愈效應(yīng)、減輕效應(yīng)或預(yù)防效應(yīng)。
更具體地說，本文中提及“治療性”和“預(yù)防性”治療時應(yīng)在最廣泛的范圍內(nèi)加以理解。術(shù)語“治療性的”并不一定意味著受治療者被治療直到完全恢復(fù)。類似地，“預(yù)防性的”并不一定指受治療者不會最后得病。
因此，治療性和預(yù)防性治療包括改善特定狀態(tài)的癥狀或預(yù)防或其他降低形成特定狀態(tài)的危險。術(shù)語“預(yù)防性的”可以看作是降低特定狀態(tài)的嚴(yán)重性或發(fā)作?！爸委熜缘摹币部梢越档同F(xiàn)有狀態(tài)的嚴(yán)重性。
給藥本發(fā)明的抑制素或其前體可以單獨(dú)給予，但優(yōu)選作為藥物組合物的一部分給予，其中藥物組合物通常還包含適宜的藥用賦形劑、稀釋劑或載體，其根據(jù)預(yù)計的給藥途徑加以選擇。
本發(fā)明的抑制素產(chǎn)品可以通過任何適宜的途徑給予需要治療的患者。精確劑量將取決于多種因素，這些因素包括要給予的抑制素形式的精確特性。
給藥途徑可以包括腸外(包括借助于例如滴液貼片(drippatch)的皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi))途徑，一些另外的適宜的給藥途徑包括(但不限于)口服、直腸、鼻內(nèi)、局部(包括口腔和舌下)、輸注、陰道、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、顱內(nèi)、鞘內(nèi)以及硬膜外給藥，或借助例如霧化器或吸入器，或借助植入物通過口腔或鼻吸入的給藥。
在優(yōu)選的具體實施方式
中，組合物可作為可注射組合物遞送，口服給藥，或作為氣霧劑通過口腔或鼻吸入給予肺部。
對于通過口腔或鼻吸入途徑的給藥，活性組分優(yōu)選是在適宜的藥劑劑型中，并且可以利用包括但不限于吸入器或霧化器裝置的機(jī)械形式加以遞送。其中機(jī)械形式包括但不限于吸入器或霧化器裝置。
另外，在使用口腔或鼻吸入途徑的情況下，可以使用SPAG(小顆粒氣霧劑發(fā)生器)進(jìn)行給藥。
對于靜脈注射，活性組分具有腸外可接受的水溶液形式，其是無熱原的(pyrogen-free)、并具有適宜的pH值、等滲性以及穩(wěn)定性。使用例如等滲載體，如氯化鈉注射液、林格注射液(Ringer’sinjection)、乳酸鹽化林格注射液(Lactated Ringer’s injection)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很好地制備適宜的溶液。需要時，可以包括防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、抗氧化劑和/或其它添加劑。
用于口服給藥的藥物組合物可以是片劑、膠囊、散劑或液體形式。片劑可以包括固體載體如明膠或佐劑。液體藥物組合物通常包含液體載體如水、凡士林、動物或植物油、礦物油或合成油類?？梢园ㄉ睇}水溶液、葡萄糖或其它糖類溶液或二醇如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。
還可以通過微球體、脂質(zhì)體、其它微粒遞送系統(tǒng)或放置在某些組織(包括血液)中的緩釋劑型來給予組合物。
可以根據(jù)本發(fā)明加以使用的上述技術(shù)和方案以及其它技術(shù)和方案的實例，可以在下述文獻(xiàn)中找到Remington’s PharmaceuticalScience，18th edition，Gennaro，A.R.，Lippincott Williams & Wilkins；20th edition(December 15，2000) ISBN 0-912734-04-3以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems；Ansel，H.C.，et al.7th Edition ISBN 0-683305-72-7，將其全部內(nèi)容結(jié)合于此作為參考。
藥物組合物如上所述，本發(fā)明延伸到藥物組合物，其包括用于治療疾病的抑制素或其前藥。根據(jù)本發(fā)明的組合物和根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用除了活性組分(即，至少一種抑制素)以外，還可以包含藥用賦形劑、載體、緩沖劑、穩(wěn)定劑或本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其它物質(zhì)。上述物質(zhì)應(yīng)該是非毒性的并且應(yīng)該不干擾活性組分的效力。
劑量優(yōu)選以“有效治療量”將抑制素給予個體，這足以對個體顯示益處。實際給予的量、以及給藥速率和時間進(jìn)程將取決于要治療的疾病的特性和嚴(yán)重性。治療處方例如劑量等的確定，最終是普通醫(yī)師(全科醫(yī)師)和其它醫(yī)生的責(zé)任并由他們判斷，并且通常考慮到要治療的病癥、患者個體的狀況、遞送部位、給藥方法以及醫(yī)師所知道的其它因素。
除非上下文中另有要求，本發(fā)明的每個方面的優(yōu)選特點(diǎn)和具體實施方式
是就在細(xì)節(jié)上已作必要改動的每個其它方面而論的。
除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解的含意。
在整個說明書中，除非上下文中另有要求，術(shù)語“包含”或“包括”應(yīng)理解為意味著包括所陳述的整體或整體的組，但不排除任何其它整體或整體的組。


圖1示出了Mevinolinic酸對流感H5N1的影響的曲線圖，其描述說明了相對于Mevinolinic酸濃度的增加，病毒抑制的水平的變化。
圖2示出了Mevinolinic酸對流感H5N1的影響的曲線圖，其描述說明了相對于Mevinolinic酸濃度的增加，病毒抑制的水平的變化。
圖3示出了Mevinolinic酸對流感H5N1的影響的曲線圖，其描述說明了相對于Mevinolinic酸濃度的增加，病毒抑制的水平的變化。
具體實施方式
現(xiàn)將參照以下實施例來描述本發(fā)明，其中實施例是用來說明而不是用來限制本發(fā)明。
本發(fā)明涉及預(yù)防性治療可能暴露于任何菌株的流感病毒的脊椎動物(包括人)的方法，其通過給予所述脊椎動物或人至少一種抑制素羥酸鹽(例如，洛伐他汀羥酸鈉鹽，其也稱作Mevinolinic酸)。
這是意料不到的和重要的，因為它使得首次可獲得一種化學(xué)個體，如果給予該化學(xué)個體的話則可以預(yù)防感染流感病毒，并且其作用方式似乎并不依賴于抑制流感病毒的任何特定的酶，因為借助本專利說明的化合物，耐受兩種已知抗流感化合物的菌株也被阻止而不能形成有效感染。
實施例實施例1-實驗和預(yù)防方案利用如在本專利范圍內(nèi)所描述的化合物對棉鼠(S.Hispidus)相對于A型流感/Wuhan(H3N2)進(jìn)行預(yù)防性治療。
對動物進(jìn)行如下治療第0天-步驟將70只6-8周齡的年輕成年棉鼠(S.Hispidus)分成7組，每組10只。將所有動物預(yù)放血并作耳標(biāo)記，然后用指定制劑進(jìn)行治療組A 未治療/未感染B 模擬治療/Wuhan 107C 化合物劑量1/Wuhan 107D 化合物劑量2/Wuhan 107E 化合物劑量3/Wuhan 107F 0.5mg/ml的扎那米韋/Wuhan 107G 1.75mg/ml的奧塞米韋/Wuhan 107在C-G組鼻內(nèi)接種0.1ml的指定制劑而H組用0.2ml進(jìn)行胃管飼法。
第2天重復(fù)C-G組的鼻內(nèi)接種以及H組的胃管飼法。
第3天重復(fù)C-F組的鼻內(nèi)接種以及H組的胃管飼法。
第4天用0.1ml體積的107 TCID 50(半數(shù)感染劑量)的A型流感/Wuhan鼻內(nèi)感染B-H組。
第5天使每組的5只動物安樂死，并除去雙肺(lung bloc.)。分成三份用于病毒定量、組織病理學(xué)、以及細(xì)胞活素/趨化激素分析(TNF-α和IFN-α)。
第6天對所有組中的剩余動物重復(fù)步驟5。
治療方案利用如在本文披露內(nèi)容中所描述的化合物對棉鼠(S.Hispidus)相對于A型流感/Wuhan(H3N2)進(jìn)行預(yù)防性治療。
第0天-步驟將70只6-8周齡的年輕成年棉鼠(S.Hispidus)分成7組，每組10只。將所有動物預(yù)放血和進(jìn)行耳標(biāo)記，然后用0.1ml的A型流感/Wuhan(H3N2)在鼻內(nèi)感染B-H組。
組A 未感染/未治療B Wuhan 107/模擬C Wuhan 107/化合物劑量1D Wuhan 107/化合物劑量2E Wuhan 107/化合物劑量3F Wuhan 107/0.5mg/ml的扎那米韋G Wuhan 107/1.75mg/ml的奧塞米韋第2天用0.1ml的指定制劑鼻內(nèi)治療C-G組。通過胃管飼法用0.2ml的制劑治療H組。
第3天重復(fù)步驟2。
第4天重復(fù)步驟2。
第5天使每組的5只動物安樂死，并除去雙肺。分成三份用于病毒定量、組織病理學(xué)、以及細(xì)胞活素/趨化激素分析(TNF-α和IFN-α)。
第6天對所有組中的剩余動物重復(fù)步驟5。
實施例2-Mevinolinic酸(洛伐他汀羥酸鈉鹽)對A型流感H5N1體外復(fù)制的抑制效應(yīng)的評價材料和方法宿主細(xì)胞—使用了犬腎源細(xì)胞(Mardin Darby Canine Kidney，MDCK)，其已廣泛用于分離流感病毒和確定抗流感效應(yīng)。
H5N1病毒—通過WHO標(biāo)準(zhǔn)中心(WHO reference centre)證實了病毒分離菌是A型流感H5N1，并且全部基因組可在基因庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/GenBanK/index.html)獲得。該病毒分離自在香港于1997年感染的人病例。使用的病毒種群(stock)是最初分離菌的第三代。
陽性對照—將已知對A型流感具有體外效應(yīng)的利巴韋林(RibavirinTM)用作陽性對照。使用的利巴韋林濃度，已經(jīng)確定為對于我們實驗室相應(yīng)的試驗系統(tǒng)，可對流感H5N1產(chǎn)生抑制效應(yīng)。
抗病毒測定—將兩種通常使用的方法平行用于試驗化合物Mevinolinic酸。第一種方法是“病毒產(chǎn)率降低測定”，其利用兩種方式進(jìn)行。在第一種方式(稱作“無吸附”)中，將病毒接種物和各種濃度的試驗化合物進(jìn)行混合。在混合和溫育30分鐘以后，將病毒-藥物混合物加入到包含MDCK細(xì)胞的試驗孔中(一式三份)。然后通過標(biāo)準(zhǔn)噬菌斑測定(其量化感染病毒顆粒的量)來確定37℃下溫育24小時后產(chǎn)生的病毒量。在第二種方式(稱作“有吸附”)中，步驟基本上相同，不同之處在于將病毒接種物加入到MDCK細(xì)胞中，并在加入藥物以前溫育1小時。后一種方式使病毒能夠在藥物具有任何起作用的機(jī)會以前進(jìn)入MDCK細(xì)胞中。因此，將“有吸附”方式用作驗證測定，其用于在病毒進(jìn)入以后靶向病毒生命周期過程的化合物。
在本研究中使用的第二種抗病毒測定是“空斑降低測定”。這是通常使用的用于確定抗病毒效應(yīng)的方法。將病毒接種物加入到MDCK細(xì)胞中，其然后覆蓋以含有各種藥物濃度的半固體瓊脂。半固體瓊脂可限制由感染細(xì)胞釋放的病毒的傳播。因而，在溫育24小時后觀察到的每個空斑(噬菌斑)表示病毒的一個感染單位。
因而，在這個實施例中，進(jìn)行了三種獨(dú)立的抗病毒測定以證實Mevinolinic酸對A型流感H5N1的抑制效應(yīng)。
結(jié)果(A)無吸附(同時加入Mevinolinic酸和病毒接種物)試驗的病毒A型流感H5N1(1997年分離自人)病毒接種物1×10-3pfu/細(xì)胞

圖1示出了根據(jù)這個實驗獲得的結(jié)果的曲線圖，其描述說明了相對于Mevinolinic酸濃度的增加病毒抑制的水平的變化。
(B)有吸附(病毒吸附后1小時加入Mevinolinic酸)試驗的病毒A型流感H5N1(1997年分離自人的菌株)病毒接種物1×10-3pfu/細(xì)胞

圖2示出了根據(jù)這個實驗獲得的結(jié)果的曲線圖，其描述說明了相對于Mevinolinic酸濃度的增加病毒抑制的水平的變化。
(C)空斑降低測定試驗的病毒A型流感H5N1(1997年分離自人)病毒接種物加以調(diào)節(jié)以產(chǎn)生每孔約200個空斑

圖3示出了根據(jù)這個實驗獲得的結(jié)果的曲線圖，其描述說明了相對于Mevinolinic酸濃度的增加病毒抑制的水平的變化。
總結(jié)這些實驗的結(jié)果表明，Mevinolinic酸對A型流感H5N1病毒具有抑制效應(yīng)，如由基于Mardin Dauby犬腎(MDCK)細(xì)胞的體外系統(tǒng)所證實的。當(dāng)使用病毒產(chǎn)率降低方法時，Mevinolinic酸可降低病毒復(fù)制的50％，即，當(dāng)和病毒接種物同時加入化合物時，抑制濃度50(IC50)為20.61μg/mL的藥物濃度；而當(dāng)Mevinolinic酸在病毒吸附1小時后加入時，IC50是15.22μg/mL。這表明化合物Mevinolinic酸是在病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后的階段起作用。當(dāng)利用空斑降低測定進(jìn)行進(jìn)一步的實驗時，Mevinolinic酸還顯示出IC50為22.57μg/mL的抑制效應(yīng)。
將所有在本說明書中提到的文獻(xiàn)全部結(jié)合于此作為參考。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，在不偏離本發(fā)明的范圍的情況下，對本發(fā)明所描述的具體實施方式
的各種改進(jìn)和變化是顯而易見的。雖然結(jié)合特定的優(yōu)選具體實施方式
對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但應(yīng)當(dāng)明了，所要求保護(hù)的本發(fā)明不應(yīng)當(dāng)受限于這樣的特定具體實施方式
。實際上，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，所描述的實施本發(fā)明的方式的各種顯而易見的改進(jìn)都將包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，包含至少一種抑制素或其前藥以及藥用賦形劑、載體或稀釋劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，所述抑制素是抑制素羥酸鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，所述抑制素是洛伐他汀羥酸鈉鹽，即，Mevinolinic酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，所述抑制素前藥是選自由辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀組成的組。
5.一種藥物組合物，包含至少一種抑制素或其前藥、抗病毒化合物以及藥用賦形劑、載體或稀釋劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中，所述抑制素或其前藥配制在β-羥基環(huán)糊精中。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的藥物組合物，其中，所述抑制素前藥是選自由辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀以及阿托伐他汀組成的組。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其進(jìn)一步包括適宜的第二抗病毒化合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中，所述第二抗病毒化合物選自由利巴韋林、三環(huán)癸胺、金剛乙胺、奧塞米韋(達(dá)菲，TamifeluTM)或扎那米韋組成的組。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的藥物組合物在制備用于治療或預(yù)防人類感染A型流感的藥物中的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的藥物組合物在制備用于預(yù)防人感染甲型肝炎的藥物中的應(yīng)用。
12.根據(jù)權(quán)利要求5至9中任一項所述的藥物組合物在制備用于治療或預(yù)防人類感染A型流感的藥物中的應(yīng)用。
13.根據(jù)權(quán)利要求5至9中任一項所述的藥物組合物在制備用于預(yù)防人類感染甲型肝炎的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及利用抑制素或其前體、或抑制素類化合物來治療病毒性流感的方法。尤其是，本發(fā)明披露了抑制素羥酸鹽可有效賦予對于流感病毒激發(fā)的抗性，其中抑制素羥酸鹽包括但不限于美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀以及辛伐他汀。
文檔編號A61P31/12GK101066262SQ20061012688
公開日2007年11月7日 申請日期2006年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月4日
發(fā)明者帕特里克·T·普倫德加斯特 申請人:帕特里克·T·普倫德加斯特