專利名稱：一種的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及放射性核素標(biāo)記的抗人肝癌單抗磁性納米體，尤其是關(guān)于一種核素188錸(188Re)標(biāo)記抗人肝癌單抗磁性納米體及其制備方法。
背景技術(shù)：
肝癌是臨床常見的惡性腫瘤，惡性程度高，大多數(shù)肝癌發(fā)現(xiàn)時已屬晚期和常合并進行性肝癌化，已失去手術(shù)指征，僅有少部分病人可實施手術(shù)切除治療，常規(guī)的放化療僅有50％的有效率，平均生存期在18-32周。目前常規(guī)使用的臨床放化療技術(shù)方法對肝癌的治療存在明顯不足，具有高度靶向性的內(nèi)放射性治療是肝癌治療重要發(fā)展途徑之一， 從理論上說，內(nèi)放射治療可使肝癌組織獲得較高的治療劑量，而正常肝組織受到的輻射劑量則較低。雖然131I及其標(biāo)記物在肝癌的治療中取得了較好的療效，而且價格便宜、來源廣泛、標(biāo)記技術(shù)相對簡單，但是131I及其標(biāo)記物在體內(nèi)的穩(wěn)定性較差，易脫碘，半衰期長，儀器探測效果差，防護困難，對人體骨髓的生物毒性強。
放射性藥物作為一類特殊的藥物，其作用的基本原理是利用核素發(fā)射的特定能量射線當(dāng)其作為診斷藥物時，是利用發(fā)射適于顯像的γ射線核素標(biāo)記的藥物分子在靶器官或組織的濃集；當(dāng)其作為治療藥物時，則是利用放射性核素發(fā)射的具有較高線性能量傳遞(Linear EnergyTransfer)本領(lǐng)的粒子(如α粒子、β粒子及Auger電子等。這些粒子在體內(nèi)的射程一般小于10mm，因此非常有利于短距離內(nèi)積累大量能量，殺死癌細胞和病變組織，而不會傷及鄰近正常組織。188Re(188錸)是醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的極具潛力的治療用放射性核素，188Re具有優(yōu)良的輻射特性，半衰期為16.9hr，它發(fā)射具有用于體外顯像的γ(155kev)射線和具有良好治療效應(yīng)的β(2.128Mev)射線，而且188Re不具有親骨髓性，因此一般不會產(chǎn)生骨髓抑制反應(yīng)，人們對于它成為體內(nèi)放療最佳同位素之一充滿了希望。188Re標(biāo)記單抗不易脫落，核素來源方便，通過188W-188Re發(fā)生器隨時獲得新鮮的188Re溶液。因此，我們選擇188Re作為主要載藥核素，放射性免疫治療就是將治療用核素標(biāo)記在能與靶點特異結(jié)合的生物分子上，利用生物靶向性將核素定位于病變組織和細胞，從而起到治療的效果。這種核素標(biāo)記的生物分子將在一定的程度上濃集于作用位點，靶/非靶比可以達到幾到幾十倍。但到目前為止，這些生物分子的導(dǎo)向作用還不夠理想，存在一定的局限性，例如抗體體內(nèi)的不穩(wěn)定性、靶向的非高度特異性、靶向性結(jié)合的位點及結(jié)合量少、放射性標(biāo)記物體內(nèi)脫標(biāo)等方面。
為此，采用抗人肝癌單抗磁納米顆粒為導(dǎo)向物，將188Re標(biāo)記引入到腫瘤部位，即對及其應(yīng)用于制備治療肝癌的醫(yī)藥制品，是一個很有意義的科研工作。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種188Re標(biāo)記抗人肝癌單抗磁納米體顆粒，它能良好的保持單克隆抗體的免疫活性和納米顆粒性質(zhì)，并能與人肝癌細胞特異性結(jié)合，其188Re標(biāo)記物的放射化學(xué)純度可達90％以上，能有效的殺死腫瘤細胞。
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體，即188Re標(biāo)記單克隆抗體Hepama-1磁性納米顆粒，其化學(xué)式為188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite它是由188Re(CO)3-L2H和單克隆抗體Hepama-1及磁性納米顆粒交聯(lián)而成的放射性組合物。
同時，本發(fā)明還提供一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體的制備方法，該方法采用188Re(CO)3標(biāo)記中間體L2H，再用188Re(CO)3-L2H作為雙向偶聯(lián)劑，與單克隆抗體Hepama-1及磁性納米顆粒交聯(lián)，從而制備出該188錸-抗人肝癌單抗磁納米體。該制備方法的五個具體步驟為1、磁性納米微粒的制備；2、磁微粒子的硅膠修飾；3、磁納米微粒表面生物大分子固載組氨酸；4、磁性納米微粒表面偶聯(lián)抗肝癌單抗Hepama-1；5、188Re標(biāo)記抗肝癌單抗Hepama-1-磁性納米微粒。
5.1中間體fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+的合成5.2[188Re(CO)3-L2H]的合成5.3活潑酯188Re(CO)3-L2H-TFP的合成5.4188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite的合成并且，本發(fā)明還提供一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體的用途，即為制備治療人肝細胞癌的放射性藥物。
其中，Hepama-1單抗是由中科院上海細胞生物學(xué)研究所研制的抗人肝癌單抗，屬小鼠IgG1亞類，為分子量43000的糖蛋白，它所針對的抗原位于原發(fā)性肝癌的細胞膜上，已作專-性分析及鑒定。Hepama-1抗體碘-131標(biāo)記的放射性免疫藥物已經(jīng)進入臨床二期的研究階段。該藥物存在不足的地方主要來源于碘的高毒性及標(biāo)記的固有不足碘標(biāo)抗體在體內(nèi)隨著血液循環(huán)時間的增加，酶解脫碘，使I-131在病人甲狀腺濃積，造成甲狀腺輻照損傷。在治療的病人中，部分存在甲低的現(xiàn)象。
納米微粒特殊的物理化學(xué)性質(zhì)及其在生物體內(nèi)特殊的生物學(xué)行為決定其有可能利于固載于其上的放射性藥物實現(xiàn)高靶性。(1)表面效應(yīng)納米微粒尺寸小，表面能高，表面原子數(shù)多，原子配位不足，使表面原子具有高活性，容易與其它原子結(jié)合，將有利于其表面修飾和核素的加載。(2)異常的細胞通性由于比人體組織細胞還要小的尺度，一定粒徑的納米微粒具有能被組織或細胞吸收的特性，同時還可避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬。
七十年代末，Widder等人首先提出磁性靶向的概念，即注射包覆攜載藥物的磁感應(yīng)材料，用外置磁鐵引導(dǎo)至靶器官。美國FeRx公司研制微米級的磁性靶向載體(MTC)用于藥載成功的靶向于肺、肝、胰臟、腎、大腦和乳腺等。磁性納米靶向載藥系統(tǒng)以往研究載帶的藥物主要是細胞毒素類藥物，例如阿酶素。載帶這些藥物主要的不足是在靶點，隨著藥物的釋放離開磁載體，這些藥物不再具有靶向性?？朔@個不足的方法是在磁靶向的過程中保持藥物不離開載體。磁納米放射性免疫治療藥物可以很好的解決磁靶向藥物的不足。
因此，188Re標(biāo)記的抗人肝癌單抗磁納米顆粒用于制備放射性免疫靶向治療人肝癌的醫(yī)藥制品有著良好的應(yīng)用前景。
本發(fā)明一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體(188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite)的制備方法分五個具體步驟進行1、磁性納米微粒的制備采用部分還原沉淀法，將FeCl3、Na2SO3及濃氨水混合進行反應(yīng)，反應(yīng)溫度控制在60℃～80℃，反應(yīng)中要保持通入氮氣。反應(yīng)產(chǎn)物使用永磁鐵將磁性納米粒子分離，用蒸餾水反復(fù)清洗。將制得的產(chǎn)物進行X線衍射(圖1)及TEM圖像(圖2)表征。反應(yīng)式為6Fe3++SO32-+18NH3·H2O→2Fe3O4↓+SO42-+18NH4++9H2O2、磁微粒子的硅膠修飾反應(yīng)式Magnetic nanoparticles+Na2SiO3.5H2O→SiO2@Fe3O4將制得的磁微粒子分散于適量蒸餾水中，加冰乙酸調(diào)pH4～5，加一定量的硅烷偶聯(lián)劑(AEAPS)，超聲分散后水浴加熱過夜。反應(yīng)完畢后用磁鐵分離，棄上清液，用水和甲醇反復(fù)洗滌，最后分散于適量甲醇中。經(jīng)過修飾的磁性納米顆粒進行SEM和TEM進行表征(圖3、圖4)，顯示粒徑均勻，粒徑約為20nm，微粒外觀呈較規(guī)則球形，但有部分團聚，但是基本符合要求顯示超順磁性。
3、磁納米微粒表面生物大分子固載組氨酸在氨基化磁性納米微粒(SG-Si900修飾的硅膠包裹的四氧化三鐵納米微粒)表面固載了組氨酸，反應(yīng)示意圖如下
固載組氨酸的磁性納米微粒(MN-His)將氨基化磁性納米微粒分散在含2.5％戊二醛的PBS(pH 7.4)中，激烈混勻后4℃孵育4小時以上，再離心分離，用PBS(pH 7.4)洗滌，盡量除去過量游離的戊二醛。洗滌好的磁性納米微粒重新分散于L-組氨酸溶液中，室溫孵育12小時以上，離心分離，用硼酸鹽緩沖溶液洗滌。最后分散于MES緩沖溶液中，用于下一步的188Re標(biāo)記。
4、磁性納米微粒表面偶聯(lián)抗肝癌單抗Hepama-1取5％的戊二醛溶液，與磁性納米微?；靹蚝蠓磻?yīng)4h。再加入Hepama-1/Herceptin抗體，反應(yīng)12小時以上。將上述磁性納米微粒充分洗滌后，用NaBH4的硼酸鹽緩沖溶液于4℃下還原30min，以封閉過量的醛基和不飽和雙鍵。洗滌后，最后分散于MES緩沖液中。
5、188Re標(biāo)記抗肝癌單抗Hepama-1-磁性納米微粒以羰基化合物fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+形式作為標(biāo)記中間體，選擇羧基拖尾的含雙吡啶環(huán)的[二(2-吡啶甲基)-氨基]-乙酸(H2L)為雙功能螯合劑，間接標(biāo)記固載單克隆抗體Hepama-1的磁性納米微粒。
5.1中間體fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+的合成將BH3·NH3放入潔凈干燥安培瓶中，加蓋，密封，通CO氣體。在1ml無載體188Re-ReO4-的生理鹽水淋洗液中，加入一定量濃H3PO4(＞85％)，混勻后注射到安培瓶中，水浴加熱約15min。反應(yīng)過程中，將一支10ml的注射器插入安培瓶中，用于平衡反應(yīng)過程中產(chǎn)生的氫氣。反應(yīng)結(jié)束后，安培瓶用冰水冷卻。得到產(chǎn)物。
5.2[188Re(CO)3-L2H]的合成將fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+溶液與1 L1NH2(10-6mol/L)按照9∶1混合，在氮氣的保護下，在孵育器上加熱50min，即得反應(yīng)產(chǎn)物。采用TLC或HPLC測定反應(yīng)標(biāo)記率，混合物使用HPLC分離(圖5I)。
5.3活潑酯188Re(CO)3-L2H-TFP的合成在75℃用氮氣流吹干[188Re(CO)3-L2H]溶液，加水充分溶解。再加入TFP乙腈水溶液(乙腈/水體積比為1∶1)和EDC固體，充分混勻后，調(diào)pH值。室溫(25℃)反應(yīng)1h后，加水?；旌弦菏褂脙蓚€串聯(lián)的Sep-PakC18柱分離。先用10ml水淋洗柱子，再用10ml EtOH/0.01M磷酸緩沖液(體積比為1∶5；pH＝7.4)、5ml水和2ml無水乙醚依次淋洗，最后的產(chǎn)物188Re(CO)3-L2H-TFP使用2ml無水乙腈洗脫得到，使用HPLC分離(圖5II)。
5.4188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite的合成活潑酯188Re(CO)3-L2H-TFP溶解在生理鹽水溶液中，再加入Hepama-1-magnetite。調(diào)pH值6.0-6.5?；旌衔镌诜跤髦?7℃反應(yīng)1 h。放化產(chǎn)率使用新華1號紙檢測，生理鹽水為展開劑。產(chǎn)物在原點，而未反應(yīng)完的188Re(CO)3-L2H-TFP的Rf在0.4-0.5之間。最后的產(chǎn)物使用體積排阻色譜(SEC)分離純化Sephadex G50填的柱子(1×20cm)預(yù)先用PBS淋洗30min。取反應(yīng)溶液上柱，用同樣的緩沖液作為淋洗液。產(chǎn)物188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite用帶FDG-101γ射線流式探頭的放射性檢測器檢測。實驗得到最佳反應(yīng)條件188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite在生理鹽水和小牛血清中，都比較穩(wěn)定，37℃溫育48h小時后，放化純度都能達到90％。
本發(fā)明一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體的體外肝癌細胞抑制試驗采用MTT法測定對單層培養(yǎng)的腫瘤細胞的抑制效應(yīng)。分4個實驗組188Re-Hepama-磁性納米微粒組、188Re-Hepama組、188Re-磁性納米微粒組、188ReO4-組，一個對照組生理鹽水組。各實驗組分別采用3.7×104Bq、18.5×104Bq、37×104Bq、55.5×104Bq、74×104Bq/ml5個放射性劑量級別。
188錸-抗人肝癌單抗磁納米體組對腫瘤細胞的抑制率明顯高于188Re-磁性納米微粒組、188Re-Hepama組和188ReO4-組；在磁場作用下188Re-免疫磁性納米微粒組對腫瘤細胞的抑制率進一步提高。主要原因是因為188錸-抗人肝癌單抗磁納米體將核素188Re特異性的與腫瘤細胞結(jié)合，利用核素的衰變釋放能量殺死腫瘤細胞，達到抑制腫瘤細胞生長的目的。
本發(fā)明一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體的優(yōu)點
188Re標(biāo)記的單克隆抗體Hepama-1磁性納米顆粒，既保持了單克隆抗體Hepama-1與人肝癌結(jié)合力強的特性，磁性納米顆粒的超順磁性，又有188Re核素線性能量轉(zhuǎn)移高對腫瘤細胞的殺傷能力強的特點。


圖1X線衍射圖試驗所得到的納米顆粒為Fe3O4圖2試驗制備的納米顆粒形態(tài)多為不規(guī)則狀或針狀，直徑控制在10nm左右。
圖3硅膠修飾磁微粒子的SEM圖。
圖4硅膠修飾磁微粒子的TEM圖。
圖5188Re(CO)3-L2H(I)和188Re(CO)3-L2H-TFP(II)的HPLC圖。
具體實施例方式
通過以下實施例對本發(fā)明一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體及其制備方法的具體實施方式
做進一步說明，但實施例并不限制本發(fā)明的保護范圍。
實施例1.磁性納米微粒的制備在500ml三頸圓底燒瓶中加入6.0ml的2mol·L-1FeCl3(溶于2mol·L-1HCl)，用蒸餾水稀釋至約100ml，同時開始通入氮氣；在100mL燒杯中稱取0.52g Na2SO3，溶于100ml蒸餾水，然后加入到滴液漏斗，滴加至燒瓶中；滴畢，將8ml濃氨水(28％)加40ml蒸餾水稀釋后快速滴入燒瓶中，立即生成黑色沉淀。當(dāng)pH值升高到8左右，反應(yīng)趨于完成，繼續(xù)在60℃～80℃水浴加熱15～30min。停止加熱，等冷卻至45℃以下時，用永磁體將磁微粒子分離出來，用蒸餾水反復(fù)洗滌數(shù)次，以除去過量的電解質(zhì)。得到Fe3O4納米粒子平均粒徑10±2nm(圖1、圖2)。
實施例2.磁納米微粒表面生物大分子固載組氨酸在氨基化磁性納米微粒(SG-Si900修飾的硅膠包裹的四氧化三鐵納米微粒)表面固載了組氨酸。1ml氨基化磁性納米微粒(分散于甲醇中，固含量＞20mg/ml)離心分離后用0.1M磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffer solution，PBS，pH 7.4)洗滌，然后分散在1ml含2.5％戊二醛的0.1M PBS(pH 7.4)中，激烈混勻后4℃孵育4小時以上，再離心分離，用0.1 M PBS(pH 7.4)洗滌，盡量除去過量游離的戊二醛。洗滌好的磁性納米微粒重新分散于新鮮制備的1ml 0.2M L-組氨酸(用pH7.2的0.1M PBS-0.15M NaCl-0.005M EDTA緩沖溶液配制)溶液中，室溫孵育12小時以上，離心分離，用pH 9.2的0.1M硼酸鹽緩沖溶液洗滌，然后用含0.5mg/ml NaBH4的0.1M硼酸鹽緩沖溶液封閉過量的醛基和不飽和雙鍵(4℃，30min)。再離心，用pH 7.4的0.1M PBS洗滌，最后分散于1ml pH～6.6的0.5M MES緩沖溶液中，用于下一步的188Re標(biāo)記。
實施例3.表面偶聯(lián)抗肝癌單抗Hepama-1取1ml 5％的戊二醛溶液，與10mg/1mL的氨基化磁性納米微?；靹蚝笥赗T下反應(yīng)4h，再加入0.5ml.10mg/ml的Hepama-1/Herceptin抗體，于RT下反應(yīng)12小時以上。將上述磁性納米微粒充分洗滌后，用含0.5～1mg/L的NaBH4的pH9.2 0.1M硼酸鹽緩沖溶液于4℃下還原30min，以封閉過量的醛基和不飽和雙鍵。洗滌后，最后分散于1mL pH～6.6的0.5M MES緩沖液中。
實施例4.中間體fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+的合成及[188Re(CO)3-L2H]的合成稱取2-10mg BH3·NH3放入一個10ml的潔凈干燥安培瓶中，加蓋，密封，通CO氣體約20min。在1ml無載體188Re-ReO4-的生理鹽水淋洗液中，加入2-10μl濃H3PO4(＞85％)，混勻后注射到安培瓶中，60-80℃水浴加熱約15min。反應(yīng)過程中，將一支10ml的注射器插入安培瓶中，用于平衡反應(yīng)過程中產(chǎn)生的氫氣。反應(yīng)結(jié)束后，安培瓶用冰水冷卻。
900ml fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+溶液與100ml L1NH2(10-6mol/L)混合，在氮氣的保護下，在孵育器上75℃加熱50min(轉(zhuǎn)速為1100rps)，即得反應(yīng)產(chǎn)物。采用TLC或HPLC測定反應(yīng)標(biāo)記率，混合物使用HPLC分離。(圖5I)實施例5.活潑酯188Re(CO)3-L2H-TFP的合成在75℃用氮氣流吹干[188Re(CO)3-L2H]溶液，在冰水中冷卻后，加入500ml水，充分溶解。再加入200ml 100mg/ml TFP乙腈水溶液(乙腈/水體積比為1∶1)和50mg EDC固體，充分混勻后，溶液用0.5mol/LH2SO4調(diào)pH值至6.0-6.5。室溫(25℃)反應(yīng)1h后，加水至4ml?；旌弦菏褂脙蓚€串聯(lián)的Sep-PakC18柱(分離前活化方法小柱子先用20ml無水乙醇浸濕，再用20ml的水淋洗，保持柱子內(nèi)充滿水，待用)分離。先用10ml水淋洗柱子，再用10mlEtOH/0.01M磷酸緩沖液(體積比為1∶5pH 7.4)、5ml水和2ml無水乙醚依次淋洗，最后的產(chǎn)物188Re(CO)3-L2H-TFP使用2ml無水乙腈洗脫得到。(圖5II)實施例6.188Re(CO)3-L2H-Hcpama-magnctitc的合成活潑酯188Re(CO)3-L2H-TFP溶解在500 I生理鹽水溶液中，再加入500 1 1mg/mL濃度的Hepama-1-magnetite。用1 mol/L的H2SO4和1mol/L NaOH溶液調(diào)pH值6.0-6.5?；旌衔镌诜跤髦?7℃反應(yīng)1h。放化產(chǎn)率使用新華1號紙檢測，生理鹽水為展開劑。產(chǎn)物在原點，而未反應(yīng)完的188Re(CO)3-L2H-TFP的Rf在0.4-0.5之間。最后的產(chǎn)物使用體積排阻色譜(SEC)分離純化Sephadex G50填的柱子(1×20cm)預(yù)先用0.05 mol/L PBS(pH 7.4)淋洗30min。取反應(yīng)溶液上柱，用同樣的緩沖液作為淋洗液，流速為1ml/min。產(chǎn)物188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite用帶FDG-101γ射線流式探頭的放射性檢測器檢測。實驗得到最佳反應(yīng)條件188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite在生理鹽水和小牛血清中，都比較穩(wěn)定，37℃溫育48h小時后，放化純度都能達到90％。
實施例7.本發(fā)明的體外肝癌細胞抑制試驗取200μL(5000個細胞/孔)接種于96孔板中，置于37℃5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育24h細胞貼壁后，分別加入實驗組和對照組樣品。每個組設(shè)6個平行孔，將磁鐵置于含有磁性微粒的實驗組下，然后將96孔板置于5％CO2培養(yǎng)箱，37℃孵育48h后，棄培養(yǎng)液，每孔加入20μLMTT溶液，繼續(xù)孵育4小時，吸去上層培養(yǎng)基后，然后每孔加入DMSO50μL，搖勻后室溫放置15min，至顆粒溶解，在酶標(biāo)儀上測定492nm處的吸光度。按下式計算相對抑制率，繪制劑量-效應(yīng)曲線相對抑制率＝[(對照組OD均值-實驗組OD均值)÷對照組OD均值]×100％用GWBASIC回歸軟件計算半數(shù)抑制濃度(IC50)值進行比較評價。
MTT法是目前研究抗癌物質(zhì)對體外培養(yǎng)的癌細胞抑制作用的常用方法。本實驗采用該方法研究了三種188Re放射性標(biāo)記物及188Re對體外細胞培養(yǎng)的肝癌SMCC-7721細胞的抑制作用。研究結(jié)果顯示，188Re-免疫磁性納米微粒組的半數(shù)抑制濃度(IC50)測定值＝53.1×1044Bq·L-1，188Re-Hepama組的IC50＝76.1×10-44Bq·L-1，188Re-磁性納米微粒的IC50＝169×10-44Bq·L-1，188ReO4的IC50＝175×10-44Bq·L-1。
權(quán)利要求
1.一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體，其特征在于它是188Re標(biāo)記單克隆抗體Hepama-1磁性納米顆粒，其化學(xué)式為188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite它是由188Re(CO)3-L2H和單克隆抗體Hepama-1及磁性納米顆粒交聯(lián)而成的放射性組合物。
2.一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體的制備方法，其特征在于該制備方法分為五個步驟1)磁性納米微粒的制備2)磁微粒子的硅膠修飾3)磁納米微粒表面生物大分子固載組氨酸將氨基化磁性納米微粒分散在含2.5％戊二醛的PBS(pH 7.4)中，激烈混勻后4℃孵育4小時以上，再離心分離，用PBS(pH 7.4)洗滌，盡量除去過量游離的戊二醛，洗滌好的磁性納米微粒重新分散于L-組氨酸溶液中，室溫孵育12小時以上，離心分離，用硼酸鹽緩沖溶液洗滌；4)磁性納米微粒表面偶聯(lián)抗肝癌單抗Hepama-1取5％的戊二醛溶液，與磁性納米微?；靹蚝蠓磻?yīng)4h，再加入Hepama-1/Herceptin抗體，反應(yīng)12小時以上，將上述磁性納米微粒充分洗滌后，用NaBH4的硼酸鹽緩沖溶液于4℃下還原30min，以封閉過量的醛基和不飽和雙鍵，洗滌后，最后分散于MES緩沖液中；5)188Re標(biāo)記抗肝癌單抗Hepama-1-磁性納米微粒；a.中間體fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+的合成b.[188Re(CO)3-L2H]的合成將fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+溶液與1 L1NH2(10-6mol/L)按照9∶1混合，在氮氣的保護下，在孵育器上加熱50min，即得反應(yīng)產(chǎn)物；c.活潑酯188Re(CO)3-L2H-TFP的合成室溫(25℃)反應(yīng)1h后，加水，混合液使用兩個串聯(lián)的Sep-PakC18柱分離，先用10ml水淋洗柱子，再用10ml EtOH/0.01M磷酸緩沖液(體積比為1∶5；pH＝7.4)、5ml水和2ml無水乙醚依次淋洗，最后的產(chǎn)物188Re(CO)3-L2H-TFP使用2ml無水乙腈洗脫得到；d.188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite的合成活潑酯188Re(CO)3-L2H-TFP溶解在生理鹽水溶液中，再加入Hepama-1-magnetite，調(diào)pH值6.0-6.5，混合物在孵育器中37℃反應(yīng)1h，放化產(chǎn)率使用新華1號紙檢測，生理鹽水為展開劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種188錸-抗人肝癌單抗磁納米體，其特征在于它的用途為制備治療人肝細胞癌的放射性藥物。
全文摘要
本發(fā)明目的是提供一種
文檔編號A61P35/00GK101041081SQ20061012327
公開日2007年9月26日 申請日期2006年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月3日
發(fā)明者馮彥林, 譚家駒, 梁生, 孫靜, 汪勇先, 吳校連, 司建華, 夏姣云, 溫廣華 申請人:佛山市第一人民醫(yī)院