專利名稱：一種治宮頸炎的中藥組合物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法和質量檢測方法，特別涉及一種治療宮頸炎的中藥組合物及其制備方法和質量檢測方法。
背景技術：
本處方為中醫(yī)臨床經驗方，一直以湯劑在臨床應用，為了更廣泛使用，便于患者服用，便于攜帶，便于運輸，進一步降低服用劑量，進行成藥的研制。宮頸炎在臨床屬慢性病，且易反復發(fā)作，故需選擇口服固體制劑，較為適宜。膠囊劑質量穩(wěn)定，而且生產工藝簡單，機械化程度高，生產成本低，便于儲藏、運輸、攜帶和服用，生產成本低，患者容易接受，故選擇制成膠囊劑。
益母草具有活血調經，利尿消腫的功效，用于月經不調，痛經，閉經，惡露不盡，水腫尿少。主要含有生物堿、黃酮類、環(huán)烯醚萜類、二萜類、丹寧、脂肪酸、皂甙、強心甙和揮發(fā)油等成分。據(jù)現(xiàn)代藥理學研究報道益母草對子宮有興奮作用，益母草總堿對豚鼠離體子宮有興奮作用。益母草對血小板聚集、微血栓形成、纖維蛋白血栓形成及紅細胞的聚集性均有抑制作用，使血栓形成時間延長，血栓長度縮短，益母草堿有顯著的降低血液粘度的作用，是一種良好的活血化瘀藥。預實驗研究表明益母草總堿可明顯增加離體及在體動物子宮的活動能力，低劑量8mg表現(xiàn)為子宮活動的振幅和頻率加快，張力變化不明顯(不引起強直性痙攣)；大劑量則表現(xiàn)為抑制作用。同時益母草總堿可增加整體動物子宮頸的血流量。
據(jù)文獻報道其提取條件主要為水提醇沉或一定濃度的乙醇提取。本實驗根據(jù)益母草中總生物堿水溶性大，易與酸成鹽的理化性質，確定以水煮提，濃縮至干，稀酸溶解，強酸型離子交換樹脂進一步精制的工藝路線。
廣東紫珠的化學成分未見報道，預試驗結果表明有黃酮類、縮合鞣質、酚性化合物、糖類的化學反應。廣東紫珠的藥理作用亦未見報道，同屬的紫珠、華紫珠、杜虹花、裸花紫珠(Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.)報道較多。紫珠有明顯的止血作用和升高血小板作用，其醇提物對小鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。裸花紫珠可加快創(chuàng)面愈合，減少疤痕形成并具有延緩衰老的作用，裸花紫珠片對金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌、肺炎球菌有不同程度的抑菌作用，是一個藥理作用較廣泛的抗菌消炎藥。華紫珠與杜虹花對金黃色葡萄球菌及沙門氏菌有高度的抑菌作用，對白色念珠菌、寒傷桿菌及福氏痢疾桿菌有較強的抑菌作用。蔣惠銻等測定了該屬植物中的紫珠、華紫珠、枇把葉紫珠(C.kochiana)、日本紫珠、大葉紫珠、老鴉糊(C.giraldii)的體外抗氧化作用。文獻報道華紫珠、杜虹花與裸花紫珠的毒性較小，臨床口服用藥安全范圍較大。廣東紫珠苦、澀、涼，歸肝、肺、胃經，具收斂止血、清熱解毒之功效。臨床用于咯血、便血等各種出血及咽喉腫痛、熱毒瘡瘍。常用于治療宮頸糜爛出血、陰道炎、宮頸炎等婦科疾病。根據(jù)黃酮類化合物溶于水、乙醇中的性質，確定以水煮，醇沉除去雜質；大孔樹脂精制黃酮類化合物，為了提高療效降低服用量，所以選擇大孔樹脂進一步精制廣東紫珠中的黃酮類化合物。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種中藥組合物及其制劑的制備方法，本發(fā)明另一目的在于提供該中藥組合物制劑的質量檢測方法及用途。
本發(fā)明目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的本發(fā)明中藥組合物的原料藥組成如下益母草7-60重量份 廣東紫珠7-60重量份上述原料藥的優(yōu)選重量配比如下益母草7重量份 廣東紫珠55重量份上述原料藥的優(yōu)選重量配比如下益母草60重量份廣東紫珠15重量份上述原料藥的優(yōu)選重量配比如下益母草40重量份廣東紫珠40重量份本發(fā)明中藥組合物原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床可接受的劑型，如膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體、內服膏劑、栓劑、外用膏劑、泡騰片、外用洗劑、氣霧劑或噴霧劑。
本發(fā)明組合物的具體制備工藝如下取益母草藥材，加8-12倍量水，提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，過濾，濃縮至50℃-70℃相對密度1.00-1.15的稠膏，加0.1mol/L-1mol/L鹽酸溶解，用濃鹽酸調pH為1-3，然后用0.1mol/L-1mol/L鹽酸稀釋至1mL藥液相當于1-2g藥材，即50℃-70℃相對密度1.00～1.20，經離心或濾過后，取上清液上強酸型離子交換樹脂柱，吸附0.5-2h，用蒸餾水洗脫至流出液無色，用氨水堿化樹脂PH8-9，用30-95％氨性乙醇或2mol氨水洗脫，使流出液pH8-12，收集10倍柱體積流出液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏，備用；取廣東紫珠藥材，粉碎成段，加8-12倍量水，提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，過濾，濃縮至1mL藥液相當于1.5g藥材，即50℃-70℃相對密度為1.00～1.02，加95％乙醇使含醇量為50-70％，冷藏放置24h，濾過，回收乙醇，使1mL藥液相當于1.5g藥材，即50℃-70℃相對密度為1.00～1.02，將藥液過大孔樹脂，吸附0.5-2h，用蒸餾水洗脫至流出液近無色，用10％-80％乙醇洗脫，收集5BV洗脫液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏；將干浸膏加常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體、內服膏劑、栓劑、外用膏劑、泡騰片、外用洗劑、氣霧劑或噴霧劑。
本發(fā)明組合物的優(yōu)選制備工藝如下取益母草藥材，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，過濾，濃縮至60℃相對密度1.05的稠膏，加0.1mol/L鹽酸溶解，用濃鹽酸調pH為1，然后用0.1mol/L鹽酸使1mL藥液相當于1g藥材，即60℃相對密度為1.00～1.02，經離心后，取上清液上001×7型離子交換樹脂柱，吸附1h，用蒸餾水洗脫至流出液無色，用氨水堿化樹脂PH8-9，75％或95％氨性乙醇或2mol氨水洗脫，使流出液pH9-10，收集10倍柱體積流出液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏，備用；取廣東紫珠藥材，粉碎成段，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，過濾，濃縮至1mL藥液相當于1.5g藥材，即60℃相對密度為1.00～1.02加95％乙醇使含醇量為60％或70％，冷藏放置24h，濾過，回收乙醇，使1mL藥液相當于1.5g藥材，即60℃相對密度為1.00～1.02，將藥液過HPD 100、HPD 400或HPD 300大孔樹脂，吸附1h，用蒸餾水洗脫至流出液近無色，用50％、60％或70％乙醇洗脫，收集5倍柱體積洗脫液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏；將干浸膏加常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體、內服膏劑、栓劑、外用膏劑、泡騰片、外用洗劑、氣霧劑或噴霧劑。
本發(fā)明的質量檢測方法包括如下鑒別和/或含量測定鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種A.取本藥物組合物固體制劑成人日服用劑量的1/3(相當于生藥量10g)加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1∶0.5正丁醇-鹽酸-水為展開劑，展開，取出，涼干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.取本藥物組合物固體制劑成人日服用劑量的1/3(相當于生藥量30g)，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取過60目篩的廣東紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液濾過，水浴蒸干，殘渣加5ml蒸餾水使溶解，用10ml水飽和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，減壓回收正丁醇后，殘渣加510mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各2μl，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％AlCl3乙醇溶液，熱風吹至斑點在365nm波長下顯黃色熒光；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
質量檢測方法中的含量測定如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色譜柱，以流動相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，檢測波長為192nm，柱溫為35℃；理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計算應不低于1500；對照品溶液的制備稱取105℃干燥3小時的鹽酸水蘇堿對照品適量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備將本藥物組合物固體制劑成人日服用劑量的1/3(相當于生藥量10g)，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，稱定重量，超聲提取30ml，放冷，再稱定重量，用乙醇補足所失的重量，搖勻，濾過；取續(xù)濾液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO4 10mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加熱半分鐘，攪拌，濾過，濾液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液5μl與供試品溶液5～10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得；藥物組合物每單位制劑(按膠囊每粒，片劑每片、顆粒劑每袋、口服液體每10毫升等常規(guī)制劑單位計)含鹽酸水蘇堿C7H13NO2計，不得少于0.03mg。
本發(fā)明藥物組合物制劑成人日服用劑量相當于生藥量30g。
組合物膠囊劑藥效學實驗表明組合物膠囊可明顯改善苯酚和大腸桿菌所致的宮頸病理損傷，使局部炎癥反應得到緩解，并減輕苯酚刺激引起的大鼠陰道潛血。組合物膠囊可明顯降低上述宮頸炎模型動物IL-1β、IL-2、TNFα、銅蘭蛋白、PGE2、等與炎癥有關的炎性介質和細胞因子含量。組合物膠囊體外對于多種宮頸炎致病菌具有抑制或殺滅作用。組合物膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹、角叉菜膠致大鼠足腫脹以及大鼠棉球肉芽腫的形成均有顯著抑制作用，表明其具有顯著抗炎作用。組合物膠囊可明顯抑制醋酸致小鼠扭體反應，具有鎮(zhèn)痛作用。組合物膠囊可降低大腸桿菌所致的宮頸炎模型大鼠的血液粘度，顯示具有一定活血化淤作用。
下述實驗和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。
實驗例1 益母草提取工藝實驗1、水提條件的優(yōu)選采用正交試驗的方法，選擇四因素三水平正交試驗表，以加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)為三因素，每因素設計三個水平，以出膏率、總生物堿提取的百分含量為指標，采用L9(34)正交設計表安排實驗，因素水平見表1
表1益母草水提因素水平表

提取方法根據(jù)正交表中的實驗設計，每份稱取藥材50g進行煎煮，提取液濾過，濃縮，真空干燥，稱重，測定含量。
表2益母草總堿正交實驗優(yōu)選結果

表3出膏率的方差分析表

方差分析表3結果表明，因素A、B對出膏率無顯著性影響，因素C有顯著性影響(P＜0.05)，各因素對出膏率的影響程度從大到小依次為C＞B＞A；在A因素中A3＞A2＞A1；在B因素中B3＞B2＞B1；在C因素中C2＞C3＞C1。
表4總生物堿的方差分析表

方差分析表4結果表明因素A、B對出膏率無顯著性影響，因素C有顯著性影響(P＜0.05)，各因素對出膏率的影響程度從大到小依次為C＞A＞B；在A因素中A2＞A3＞A1；在B因素中B2＞B3＞B1；在C因素中C3＞C2＞C1，。綜合以上兩個方差分析結果，結合具體操作條件，優(yōu)選益母草水提的工藝路線為A2B2C3，即加水量10倍，煎煮1.5小時，煎煮3次。
2、強酸型陽離子交換樹脂精制總生物堿的工藝研究不同型號陽離子交換樹脂的選擇分別取各型樹脂20ml，每型3份，濕法裝入規(guī)格相同的柱中，，加入樣品液20ml(1ml藥液相當于1.0g藥材)，放置30min，，先用蒸餾水沖洗至流出液近無色，用2mol的氨水40ml堿化樹脂，使流出液PH值為9-10，用氨性乙醇(PH9-10)洗脫，使洗脫速率為1-2ml/min，收集有色洗脫液100ml。
表5不同型號離子交換樹脂對總生物堿的吸附量(n＝3)

實驗結果表明在相同條件下，007型強酸型離子交換樹脂對總生物堿的吸附量最大，故選擇007型強酸型離子交換樹脂。
洗脫溶媒的選擇取強酸型陽離子交換樹型7型20ml上柱，加樣品液10ml(1ml藥液相當于1g藥材)，放置0.5h后，用蒸餾水洗至流出液近無色，水液棄去，用氨水堿化樹脂PH8-9，依次用2mol氨水、氨性乙醇30％、50％、70％、95％洗脫，使流出速率為1-2ml/min，收集各部分洗脫液，蒸干后，用0.molM鹽酸10ml溶解，各加0.5g活性炭，水浴加熱1min后，濾過，分別用改良碘化鉍鉀、硅鎢酸試液，新鮮配制的雷氏鹽試液作鑒別實驗。實驗結果見表6。
表6洗脫溶媒的考察

注-代表陰性，+代表陽性根據(jù)實驗結果，選擇95％氨性乙醇為洗脫溶劑氨性乙醇洗脫體積的考察取強酸型陽離子交換樹型7型20ml上柱，加樣品液10ml(1ml藥液相當于1g藥材樣品液)，放置0.5h后，用蒸餾水洗至流出液近無色，水液棄去，用氨水堿化樹脂PH8-9，氨性乙醇95％洗脫，使流出速率為1-2ml/min，收集洗脫液每25ml為一份，連續(xù)收集6份，蒸干后，用0.1M鹽酸10ml溶解，各加0.5g活性炭，水浴加熱1min后，濾過，分別用改良碘化鉍鉀、硅鎢酸試液，新鮮配制的雷氏鹽試液檢查。實驗結果見表7。
表7乙醇洗脫體積的考察

實驗結果表明，氨性乙醇洗脫體積為100ml，10ml/g最佳交換時間的考察取007型離子交換樹脂4份，各20ml，分別濕法裝入規(guī)格相同的柱中，均加入樣品液10ml(1ml藥液相當于1g藥材)，分別放置0.5、1、2、6h后，先用蒸餾水沖洗至流出液近無色，再用2mol的氨水堿化樹脂，使流出液pH值為9-10，然后用堿性乙醇(pH9-10)洗脫，使洗脫速率1-2ml/min，收集有色洗脫液100ml。樣品液的制備及總生物堿的含量測定同上。實驗結果見表8。
表8最佳交換時間的考察

實驗研究結果表明，時間短或太長，均使測定結果偏低，究其原因，交換時間短，部分生物堿離子來不及與樹脂結合或結合不牢固，易被蒸餾水洗脫下去，交換時間太長，部分生物堿離子與樹脂結合非常牢固，不易被洗脫下來，從而使過柱收得率降低。因此，使用離子交換樹脂，掌握交換時間十分關鍵，根據(jù)實驗研究結果，選擇交換時間為1h。
最大吸附量的測定取7型強酸型陽離子交換樹脂6份，各20ml，濕法裝入規(guī)格相同的柱中，分別加入樣品液6ml、8ml、10ml、12ml、14ml、16ml(1ml藥液相當于1g藥材)，1h后，先用蒸餾水沖洗至流出液近無色，水液棄去，用2mol的氨水堿化樹脂，使流出液PH值為9-10，用氨性乙醇(PH9-10)洗脫，使洗脫速率1-2ml/min，收集有色洗脫液100ml。
樣品液的制備及總生物堿的含量測定同上。實驗結果見表9。
表9最大吸附量的考察

經實驗測定，體積為20ml的7型強酸陽離子交換樹脂最大的交換容量為104.55mg，也就是1ml樹脂可交換0.7g藥材中的生物堿。即比上樣量為1.4/g。
小結經對強酸型陽離子交換樹脂交換益母草總生物堿的影響因素的考察，實驗結果表明7型強酸型陽離子交換樹脂交換益母草總生物堿的性能最好，其洗脫溶劑為95％的氨性乙醇，最佳交換時間為1h，每毫升最大吸附量為0.7g藥材，即比上樣量為1.4/g，在此條件下，上柱保留率為98.05％。
實驗例2 廣東紫珠提取工藝的研究實驗1、提取工藝條件的優(yōu)選為了優(yōu)選廣東紫珠提取工藝條件，以加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)為三因素，每因素設計三個水平，以出膏率、總黃酮提取的百分含量為指標，采用L9(34)正交設計表安排實驗，結果見表10。
表10總黃酮水提正交實驗表頭

提取方法根據(jù)正交表中的實驗設計，每份稱取藥材50g進行水提，提取液濾過，濃縮，真空干燥，稱重。
正交優(yōu)選實驗結果表11表11廣東紫珠總黃酮的正交實驗結果

表12出膏率的方差分析表

方差分析表12結果表明，因素A、B和C對出膏率無顯著性影響，各因素對出膏率的影響程度從大到小依次為C＞B＞A；在A因素中A3＞A1＞A2；在B因素中B2＞B1＞B3；在C因素中C3＞C2＞C1。
表13以總黃酮在藥材中百分含量為指標的方差分析表

方差分析表13結果表明，因素B對總生物堿提出率無顯著性影響，因素A、C有顯著性影響(P＜0.05)，各因素對出膏率的影響程度從大到小依次為C＞A＞B；在A因素中A2＞A1＞A3；在B因素中B2＞B3＞B1；在C因素中C3＞C2＞C1。綜合表25、26的方差分析結果，結合具體操作條件，確定最佳有提取工藝為A2B2C3，即加水量10倍，煎煮1.5小時，煎煮3次。
2、醇沉工藝的考察不同醇沉濃度的考察取藥材200g，按選定的提取工藝提取，濃縮至200ml，(1ml藥液相當于1g藥材)等分為四份，每份50m1，用95％的乙醇使含醇量分別為50％，60％，70％，80％，放置24小時后，濾過，回收乙醇，濃縮，真空干燥，精密稱定，研成粉末后裝入密封塑料袋內保存?zhèn)溆?。取各醇沉濃度的干浸膏粉約1g(平行兩份)，置索氏提取器內，用70％乙醇80ml提取至無色，并定容于100ml容量瓶內。精密吸取5ml于50ml容量瓶內，蒸餾水定容。含量測定方法按3.2.1.2項下測定各醇沉條件下所得干浸膏中總黃酮的含量，實驗結果見表14表14不同醇沉濃度的考察

注總黃酮的百分含量以每50g藥材含總黃酮的百分含量計總黃酮在藥材中的百分含量的結果表明，60％醇沉條件較好，選擇70％醇沉條件，損失0.09％的總黃酮，可是出膏率降低1.54％，確定醇沉條件為含醇量70％更為合理。
不同濃縮程度的考察稱取藥材150g，按選定的條件提取，將煎液合并濾過，濃縮至150ml，等分為3份，其中兩份再分別濃縮至1g藥液相當于1.5、2.0藥材。分別加95％乙醇使含醇量為70％，置冰箱中放置24小時后，濾過，回收乙醇，濃縮，真空干燥，精密稱定重量。取各醇沉濃度的干浸膏粉約1g(平行兩份)，精密稱定。置索氏提取器內，用70％乙醇80ml提取至無色，定容于100ml容量瓶內。精密吸取5ml于50ml容量瓶內，蒸餾水定容。含量測定方法按3.2.1.2項下操作測定。實驗結果見表15。
表15不同濃縮程度對總黃酮含量影響的考察結果

注總黃酮的百分含量以每50g藥材含總黃酮的百分含量計結果表明，以出膏率為評價指標，濃縮比例為1∶2時最低，但損失總黃酮較多；以總黃酮的含量為評價指標，濃縮比例為1∶1含量最高。選擇濃縮比例為1∶1.5，其出膏率比1∶1時低1.2％，和1∶2時相近，而總黃酮含量與1∶1時相近，故選擇濃縮比例為1∶1.5。
3、大孔樹脂柱吸附凈化工藝的研究藥液的制取按前面優(yōu)選的提取條件提取，既加水量10倍，每次1.5小時，煎煮3次，合并煎液，濃縮至1ml藥液相當于1.5g藥材，加入95％乙醇使含醇量為70％，置冰箱中放置24小時后，濾過，回收乙醇，濃縮至使1ml藥液相當于1.5g藥材。
不同型號的大孔樹脂對廣東紫珠總黃酮吸附量的考察量取處理好備用的各型大孔樹脂，每型20ml濕法裝入相同規(guī)格的柱中，每柱加入樣品液15ml時達到過量吸附，用蒸餾水沖洗至流出液近無色，水液棄去，用70％的乙醇洗脫，調節(jié)流出速率1-2ml/min，收集洗脫液。將收集的洗脫液濃縮適量，用70％的乙醇溶解，并定容于100ml容量瓶內，取5ml于50ml容量瓶內，蒸餾水定容。取5ml于25ml容量瓶內，按3.2.1.2項下操作測定總黃酮含量。
表16不同型號大孔樹脂對廣東紫珠的吸附量

根據(jù)實驗研究結果，選擇HPD-300型大孔樹脂。
大孔樹脂乙醇洗脫濃度的考察4、定性考察實驗選擇了水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇依次洗脫吸附在樹脂上的總黃酮，收集各洗脫液，濃縮至干，95％乙醇溶解，鹽酸鎂粉反應、三氯化鋁乙醇液檢測。實驗結果見表17。
表17乙醇洗脫濃度對總黃酮洗脫能力的定性檢查

注+表示陽性反應，-表示陰性反應，實驗結果表明70％乙醇可將總黃酮全部洗脫下來。
5、定量考察量取處理好備用HPD-300的大孔樹脂20ml，濕法裝柱，用蒸餾水沖洗后，上樣10ml(1ml相當于1.5g藥材)，放置30min，，用蒸餾水沖洗至流出液近無色，依次用10％、30％、50％、70％、95％的乙醇洗脫，使洗脫速率1-2ml/min收集洗脫液100ml。將收集的洗脫液濃縮適量，用70％的乙醇定容于100ml容量瓶內，取5ml于50ml容量瓶內，蒸餾水定容至刻度。取5ml于25ml容量瓶內，測定總黃酮含量。實驗結果見表18。
表18乙醇洗脫濃度對總黃酮洗脫能力的定量檢查

根據(jù)實驗研究結果確定70％乙醇為洗脫溶劑。
大孔樹脂乙醇洗脫體積的考察量取處理好備用的大孔樹脂HPD-300型20ml，濕法裝柱，上樣10ml(1ml相當于1.5g藥材)，放置30min后用蒸餾水沖洗至流出液近無色，棄去水液，用70％乙醇洗脫200ml洗脫，使洗脫速率1-2ml/min，每收集50ml為一份，收集4份，共200ml。將收集的洗脫液用70％的乙醇定溶于100ml容量瓶內，取5ml于50ml容量瓶內，蒸餾水定容至刻度?？傸S酮的含量測定同前，實驗結果結果見表19。
表19洗脫溶劑用量的考察

研究結果表明，70％乙醇100ml可將20ml大孔樹脂吸附的廣東紫珠總黃酮完全洗脫下來，相當于5BV70％的乙醇洗脫。
吸附時間的考察量取處理好備用的大孔樹脂HPD-300型20ml，取4份，濕法裝柱，上樣品液10ml(1ml相當于1.5g藥材)，使放置0.5、1.0、2.0、6.0小時，使洗脫速率1-2ml/min用蒸餾水沖洗至流出液近無色，水洗脫液棄去，用70％乙醇洗脫洗脫，分別收集洗脫液100ml，水浴濃縮適量，70％乙醇定容于100ml容量瓶內，精密量取10ml，濃縮，真空干燥后，精密稱定重量。分別另取5ml于50ml容量瓶內，蒸餾水定溶?？傸S酮的含量測定同前。實驗結果見表20。
表20吸附時間的考察

注總黃酮的百分含量以每15g藥材含總黃酮的百分含量計實驗研究結果分析吸附時間越長，出膏率越低，相應的總黃酮的損失也越大。吸附時間為1h，其出膏率比0.5低0.1％，總黃酮含量很接近，吸附時間越長，其出膏率雖然降低，但是總黃酮損失較大，故選擇吸附時間為1h。
最大上樣量的考察量取處理好備用的大孔樹脂HPD-300型6份，每份20ml，濕法裝柱，分別上樣4、6、8、10、12、14ml樣品液(1ml相當于1.5g藥材)，均吸附1.0小時后，用蒸餾水沖洗至流出液近無色，水液棄去，用70％乙醇100ml洗脫，使洗脫速率1-2ml/min，分別收集洗脫液，水浴濃縮適量，70％乙醇定容于100ml容量瓶內，精密量取10ml，濃縮，真空干燥后，精密稱定重量。分別另取5ml于50ml容量瓶內，蒸餾水定容?？傸S酮的含量測定同前，實驗結果見表21。
表21大孔樹脂HPD-300型最大吸附量的考察

注總黃酮百分含量相當于以藥材中含總黃酮的百分含量計實驗研究結果分析隨著上樣量的增大，大孔樹脂吸附量成比例的增加，到上樣量為12、14ml時，不隨上樣量的增加而增加，而且總黃酮在藥材中的含量下降了幅度較大，表明總黃酮有較大損失。上樣量為10ml，結果表明總黃酮基本無損失，故選擇最大上樣量為10ml(1m藥液相當于1.5g藥材)，相當于每ml大孔樹脂吸附總黃酮量相當于0.75g藥材中所含的總黃酮。即比上樣量為1.33ml/g。
實驗例3 對苯酚致宮頸炎模型大鼠保護作用的實驗1.對苯酚致宮頸炎模型大鼠陰道隱血的影響模型組動物有明顯的陰道黏膜出血，隱血陽性反應程度顯著增強，與對照組比較P＜0.001。受試藥物高、中劑量組可明顯抑制動物陰道隱血，使陽性反應程度減輕，與模型組比較P＜0.05。地塞米松也降低動物陰道隱血陽性反應程度，與模型組比較P＜0.05?？箤m炎片抑制陰道隱血作用不明顯。結果見表22。
表22藥物組合物膠囊對苯酚致宮頸炎模型大鼠陰道隱血的影響(x±s)

2.對苯酚致宮頸炎模型大鼠宮頸形態(tài)的影響鏡下觀察結果顯示，正常對照組宮頸粘膜及頸管粘膜各層結構清晰，宮頸粘膜下及頸管粘膜內少量淋巴細胞散在浸潤；模型組宮頸粘膜之鱗狀上皮細胞大量水腫，宮頸粘膜下及頸管粘膜內多量淋巴細胞及少量嗜酸性白細胞浸潤，亦見組織細胞及血管反應性增生；地塞米松及抗宮炎片組宮頸粘膜之鱗狀上皮水腫減輕，宮頸粘膜下及頸管粘膜內淋巴細胞明顯減少，伴少許嗜酸性白細胞浸潤；12g/kg劑量組宮頸粘膜之鱗狀上皮水腫明顯，宮頸粘膜下及頸管粘膜內有較多淋巴細胞及少量嗜酸性白細胞浸潤，亦見組織細胞及血管反應性增生；6、3g/kg劑量組宮頸粘膜之鱗狀上皮水腫明顯減輕，部分區(qū)域消失，宮頸粘膜下及頸管粘膜內少許淋巴細胞及嗜酸性白細胞浸潤，組織細胞及血管反應不明顯；1.5g/kg組宮頸粘膜之鱗狀上皮水腫區(qū)域明顯，宮頸粘膜下及頸管粘膜內較多淋巴細胞及嗜酸性白細胞浸潤，組織細胞及血管反應性改變較明顯。結果見表23。
表23藥物組合物膠囊對苯酚致宮頸炎大鼠宮頸炎癥程度的影響

Kruskal-Wallis H檢驗結果如下

Kruskal-Wallis Test

3.對苯酚模型大鼠血漿銅蘭蛋白活力的影響模型組銅蘭蛋白活力相對于空白組顯著升高(P＜0.01)；地塞米松組和抗宮炎片組均可顯著抑制銅蘭蛋白活力的升高(P＜0.05)；藥物組合物1.5、12.0g/Kg灌胃給藥均可顯著降低銅蘭蛋白活力(P＜0.05)，其中以12.0g/Kg作用最強(P＜0.001)，1.5g/Kg次之，而3.0、6.0g/Kg組均對銅蘭蛋白活力沒有顯著的影響。結果見表24。
表24藥物組合物對苯酚致宮頸炎大鼠血漿銅蘭蛋白活力(CP)的影響(x±s)

注與模型對照組比較*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.0014.對苯酚致宮頸炎模型大鼠血漿PGE2含量的影響與對照組比較，模型組動物血漿中PGE2明顯升高，藥物組合物膠囊較模型組血漿中PGE2明顯降低，各劑量組均有顯著性差異(p＜0.001)；地塞米松組和抗宮炎片組也都有顯著性差異(p＜0.001)。結果見表25。
表25藥物組合物膠囊對苯酚致宮頸炎模型大鼠血漿中PGE2含量的影響(X±SD)

與模型組比較*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。
5.對苯酚致宮頸炎模型大鼠血清中IL-1β含量的影響與對照組比較，模型組血清IL-1β明顯升高，有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)；抗宮炎片優(yōu)化處方組高、中劑量組較模型組血清IL-1β無差異；中低劑量組和低劑量組較模型組血清IL-1β減少，有差異，其中中低劑量組有較顯著差異(p＜0.01)；地塞米松組也具較顯著差異(p＜0.01)；抗宮炎片組較模型組有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。結果見表26。
表26藥物組合物膠囊對苯酚致宮頸炎模型大鼠血清中IL-1β含量的影響(X±SD)

與模型組比較*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。
6.對苯酚致宮頸炎模型大鼠血清中TNF含量的影響模型組與對照組比較，模型組血清TNF顯著升高，有顯著性統(tǒng)計學差異(p＜0.01)；優(yōu)化處方組中高劑量組與中低劑量組血清TNF含量減少，較模型組有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)，其中高劑量組有顯著性差異(p＜0.01)；地塞米松組也有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。見表27。
表27藥物組合物膠囊對苯酚致宮頸炎模型大鼠血清中TNF含量的影響(X±SD)

與模型組比較*p＜0.05；**p＜0.01。
討論與結論局部粘膜損傷和病原微生物感染是導致宮頸炎的兩大主要原因，本試驗結果顯示，將化學刺激性物質苯酚或致病性大腸桿菌經陰道反復給與可誘發(fā)類似人類宮頸炎樣病理改變，并伴有炎性介質和相關細胞因子的異常改變。
本試驗結果顯示，藥物組合物膠囊對苯酚及致病性大腸桿菌引起的宮頸組織病理改變均有明顯抑制作用，并可減少炎性介質及相關細胞因子的產生。為其臨床治療宮頸炎提供了依據(jù)。
實驗例4 抗炎作用實驗研究1、藥物組合物膠囊對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響與模型組比較，受試藥物高劑量組、中劑量組有顯著的抑制小鼠耳腫脹的作用(p＜0.01)；中低劑量組作用次之(p＜0.05)；低劑量組、抗宮炎片組未觀察到抑制小鼠耳腫脹的藥效作用，受試藥物組之間有量效關系。說明受試藥物具有抑制小鼠耳腫脹的藥效作用。結果見表28。
表28抗宮炎片優(yōu)化處方對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(X±SD)

注與模型對照組比較**p＜0.01，*p＜0.05
2、藥物組合物膠囊對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響大鼠足跖皮內注射角叉菜膠后，鼠爪呈紅、腫、熱、痛等早期急性炎癥反應。陽性對照藥抗宮炎片與地塞米松均可明顯降低角叉菜膠致炎大鼠足跖腫脹度和腫脹率(P＜0.05-0.001)。藥物組合物3.0、6.0及12.0g/Kg灌胃給藥均可顯著減輕大鼠角叉菜膠致炎后1h、2h、4h、6h及8h的急性炎癥反應，使足跖腫脹度和腫脹率顯著降低(P＜0.05-0.001)，除外3.0g/Kg大鼠角叉菜膠致炎后4h的足跖腫脹度；1.5g/Kg對大鼠足跖腫脹度和腫脹率無顯著影響(P＞0.05)。結果見表29。
表29A藥物組合物對角叉菜膠致大鼠左足跖腫脹度的影響(x±s)

注與模型對照組比較*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001。
表29B藥物組合物對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹率的影響(x±s)

注與模型對照組比較*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001。
3、藥物組合物對大鼠棉球肉芽腫形成的影響在大鼠兩側腹股溝皮下植入滅菌棉球，14天后產生肉芽增生現(xiàn)象。陽性對照藥地塞米松與抗宮炎片均可顯著降低棉球的干重、濕重(P＜0.001)，抗炎作用顯著。藥物組合物1.5、3.0、6.0及12.0g/Kg灌胃給藥均可顯著抑制大鼠棉球肉芽腫形成，減輕慢性炎癥反應，使棉球的干重與濕重顯著降低(P＜0.05)，其中以6.0及12.0g/Kg最為顯著。結果見表30。
表30藥物組合物對大鼠棉球肉芽腫形成的影響(x±s)

注與模型對照組比較*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001討論與結論試驗結果顯示，藥物組合物膠囊對急、慢性實驗性炎癥均有抑制作用，為臨床治療宮頸炎改善癥狀提供了依據(jù)。
實驗例4 鎮(zhèn)痛作用實驗研究受試藥物與陽性對照藥作用趨勢一致。說明本次試驗藥物劑量選擇的比較合適，但無量效關系，但抗宮炎片未觀察到陽性結果。受試藥物中低劑量組藥效作用最強，與模型對照組相比，有極顯著性統(tǒng)計差異(p＜0.01)；其它各組也都具有顯著性統(tǒng)計差異(p＜0.05)。結果表明受試藥物具有減輕醋酸所致小鼠扭體次數(shù)的藥效作用，即有一定鎮(zhèn)痛的作用。結果見表31。
表31藥物組合物膠囊的鎮(zhèn)痛作用(X±SD)

注各給藥組與模型對照組比較**p＜0.01；*p＜0.05
試驗結果顯示，藥物組合物可減少醋酸致小鼠扭體反應的次數(shù)，表明具有一定的鎮(zhèn)痛作用，為臨床治療宮頸炎改善疼痛癥狀提供了依據(jù)。
實驗例5對血液流變學影響的實驗研究模型組全血粘度明顯高于正常對照組(P＜0.01)。藥物組合物1.5、3.0、12.0g/Kg灌胃給藥均可顯著降低大鼠的全血粘度(P＜0.05~0.01)。陽性對照藥抗宮炎片可顯著降低大鼠的全血粘度(P＜0.05)。結果見表32。
表32藥物組合物對大鼠全血粘度的影響(x±s)

注與模型對照組比較*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001討論與結論結果顯示，藥物組合物膠囊可降低大腸桿菌致宮頸炎模型大鼠血液粘度，對改善炎癥局部的血流供應、促進炎癥的吸收有一定意義。
上述實驗例的藥物組合物實驗用藥均按實施例1制備膠囊劑，下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果。
具體實施例方式
實施例1膠囊劑的制備益母草 7kg廣東紫珠 55kg取益母草藥材，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，過濾，濃縮至60℃相對密度1.05的稠膏，加0.1mol/L鹽酸溶解，用濃鹽酸調pH為1，然后用0.1mol/L鹽酸使1mL藥液相當于1g藥材，即60℃相對密度為1.02，經離心后，取上清液上001×7型離子交換樹脂柱，吸附1h，用蒸餾水洗脫至流出液無色，用氨水堿化樹脂，用氨性乙醇洗脫，使流出液pH9-10，收集10倍柱體積流出液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏，備用；
取廣東紫珠藥材，粉碎成段，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，過濾，濃縮至1mL藥液相當于1.5g藥材，即60℃相對密度為1.02加乙醇使含醇量為70％，冷藏放置24h，濾過，回收乙醇，使1mL藥液相當于1.5g藥材，即60℃相對密度為1.02，將藥液過HPD 300大孔樹脂，吸附1h，用蒸餾水洗脫至流出液近無色，用70％乙醇洗脫，收集5倍柱體積洗脫液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏；將干浸膏中加淀粉100kg，粉碎，過5號篩，得干浸膏粉，加乙醇潤濕，制成膠囊劑。
實施例2顆粒劑的制備益母草 60kg廣東紫珠 15kg取益母草藥材，加8倍量水，提取4次，每次2h，合并提取液，過濾，濃縮至50℃相對密度1.00的稠膏，加0.1mol/L鹽酸溶解，用濃鹽酸調pH為1，然后用0.1mol/L鹽酸使1mL藥液相當于1g藥材，即70℃相對密度為1.02，經離心后，取上清液上001×7型離子交換樹脂柱，吸附2h，用蒸餾水洗脫至流出液無色，用氨水堿化樹脂，用氨性乙醇洗脫，使流出液pH10，收集10倍柱體積流出液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏，備用；取廣東紫珠藥材，粉碎成段，加12倍量水，提取4次，每次2h，合并提取液，過濾，濃縮至1mL藥液相當于1.5g藥材，即70℃相對密度為1.00加乙醇使含醇量為70％，冷藏放置24h，濾過，回收乙醇，使1mL藥液相當于1.5g藥材，即70℃相對密度為1.00，將藥液過HPD 300大孔樹脂，吸附1h，用蒸餾水洗脫至流出液近無色，用80％乙醇洗脫，收集5BV洗脫液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏；將干浸膏中加淀粉100kg，粉碎，過5號篩，得干浸膏粉，加乙醇潤濕，加常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成顆粒劑。
實施例3丸劑的制備益母草 40kg廣東紫珠 40kg取益母草藥材，加12倍量水，提取2次，每次2h，合并提取液，過濾，濃縮至50℃相對密度1.15的稠膏，加0.1mol/L鹽酸溶解，用濃鹽酸調pH為1，然后用0.1mol/L鹽酸使1mL藥液相當于1g藥材，即70℃相對密度為1.02，經離心后，取上清液上001×7型離子交換樹脂柱，吸附2h，用蒸餾水洗脫至流出液無色，用氨水堿化樹脂，用氨性乙醇洗脫，使流出液pH9，收集10倍柱體積流出液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏，備用；取廣東紫珠藥材，粉碎成段，加12倍量水，提取4次，每次2h，合并提取液，過濾，濃縮至1mL藥液相當于1.5g藥材，即70℃相對密度為1.02加乙醇使含醇量為70％，冷藏放置24h，濾過，回收乙醇，使1mL藥液相當于1.5g藥材，即70℃相對密度為1.02，將藥液過HPD 300大孔樹脂，吸附2h，用蒸餾水洗脫至流出液近無色，用60％乙醇洗脫，收集5倍柱體積洗脫液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏；將干浸膏中加淀粉100kg，粉碎，過5號篩，得干浸膏粉，加乙醇潤濕，加常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成丸劑。
實施例4片劑的制備益母草 8kg廣東紫珠 60kg加常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成片劑。
實施例5口服液的制備益母草 10kg廣東紫珠 50kg加常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成口服液。
實施例6質量檢測中的鑒別方法取實施例1的組合物制劑做鑒別A.取2粒組合物膠囊內容物，稱取0.5g，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1∶0.5正丁醇-鹽酸-水為展開劑，展開，取出，涼干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.取2粒組合物膠囊內容物，稱取0.5g，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取過60目篩的廣東紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液濾過，水浴蒸干，殘渣加5ml蒸餾水使溶解，用10ml水飽和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，減壓回收正丁醇后，殘渣加510mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各2μl，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％AlCl3乙醇溶液，熱風吹至斑點在365nm波長下顯黃色熒光；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例7質量檢測中的含量測定方法取實施例1的組合物制劑做含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色譜柱，以流動相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，檢測波長為192nm，柱溫為35℃；理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計算應不低于1500；對照品溶液的制備稱取105℃干燥3小時的鹽酸水蘇堿對照品適量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備將藥物組合物膠囊劑裝量差異項下的粉末0.5g，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，稱定重量，超聲提取30ml，放冷，再稱定重量，用乙醇補足所失的重量，搖勻，濾過；取續(xù)濾液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO410mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加熱半分鐘，攪拌，濾過，濾液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液5μl與供試品溶液5～10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得；藥物組合物膠囊每粒含鹽酸水蘇堿C7H13NO2計，不得少于0.03mg。
實施例8質量監(jiān)測方法取實施例1的組合物制劑做質量檢測A.取2粒組合物膠囊內容物，稱取0.5g，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1∶0.5正丁醇-鹽酸-水為展開劑，展開，取出，涼干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
B.取2粒組合物膠囊內容物，稱取0.5g，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取過60目篩的廣東紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液濾過，水浴蒸干，殘渣加5ml蒸餾水使溶解，用10ml水飽和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，減壓回收正丁醇后，殘渣加510mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各2μl，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％AlCl3乙醇溶液，熱風吹至斑點在365nm波長下顯黃色熒光；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色譜柱，以流動相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，檢測波長為192nm，柱溫為35℃；理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計算應不低于1500；對照品溶液的制備稱取105℃干燥3小時的鹽酸水蘇堿對照品適量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備將藥物組合物膠囊劑裝量差異項下的粉末0.5g，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，稱定重量，超聲提取30ml，放冷，再稱定重量，用乙醇補足所失的重量，搖勻，濾過；取續(xù)濾液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO410mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加熱半分鐘，攪拌，濾過，濾液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液5μl與供試品溶液5～10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得；藥物組合物膠囊每粒含鹽酸水蘇堿C7H13NO2計，不得少于0.03mg。
實施例9質量監(jiān)測方法取實施例2的組合物制劑做質量檢測A.取組合物顆粒劑，稱取5g，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1∶0.5正丁醇-鹽酸-水為展開劑，展開，取出，涼干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
B.取組合物顆粒劑，稱取5g，稱取0.5g，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取過60目篩的廣東紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液濾過，水浴蒸干，殘渣加5ml蒸餾水使溶解，用10ml水飽和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，減壓回收正丁醇后，殘渣加510mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各2μl，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％AlCl3乙醇溶液，熱風吹至斑點在365nm波長下顯黃色熒光；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色譜柱，以流動相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，檢測波長為192nm，柱溫為35℃；理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計算應不低于1500；對照品溶液的制備稱取105℃干燥3小時的鹽酸水蘇堿對照品適量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取組合物顆粒劑，稱取5g，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，稱定重量，超聲提取30ml，放冷，再稱定重量，用乙醇補足所失的重量，搖勻，濾過；取續(xù)濾液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO4 10mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加熱半分鐘，攪拌，濾過，濾液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液5μl與供試品溶液5～10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得；藥物組合物膠囊每粒含鹽酸水蘇堿C7H13NO2計，不得少于0.03mg。
實施例10質量監(jiān)測方法取實施例4的組合物制劑做質量檢測A.取本藥物組合物片劑2片，0.7g，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1∶0.5正丁醇-鹽酸-水為展開劑，展開，取出，涼干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.取本藥物組合物片劑2片，0.7g，稱取0.5g，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取過60目篩的廣東紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液濾過，水浴蒸干，殘渣加5ml蒸餾水使溶解，用10ml水飽和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，減壓回收正丁醇后，殘渣加510mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各2μl，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％AlCl3乙醇溶液，熱風吹至斑點在365nm波長下顯黃色熒光；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色譜柱，以流動相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，檢測波長為192nm，柱溫為35℃；理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計算應不低于1500；對照品溶液的制備稱取105℃干燥3小時的鹽酸水蘇堿對照品適量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取本藥物組合物片劑2片，0.7g，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，稱定重量，超聲提取30ml，放冷，再稱定重量，用乙醇補足所失的重量，搖勻，濾過；取續(xù)濾液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO4 10mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加熱半分鐘，攪拌，濾過，濾液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液5μl與供試品溶液5～10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得；藥物組合物膠囊每粒含鹽酸水蘇堿C7H13NO2計，不得少于0.03mg。
實施例11取益母草10kg，廣東紫珠55kg，加輔料，按常規(guī)工藝，制成片劑，每片0.35g。
實施例12取益母草55kg，廣東紫珠10kg，加輔料，按常規(guī)工藝，制成顆粒劑，每袋6g。
實施例13
取益母草20kg，廣東紫珠45kg，加輔料，按常規(guī)工藝，制成膠囊劑，每粒0.35g。
實施例14取益母草30kg，廣東紫珠35kg，加輔料，按常規(guī)工藝，制成陰道泡騰片，每片0.5g。
實施例15取益母草40kg，廣東紫珠25kg，加輔料，按常規(guī)工藝，制成口服液，每支10ml。
實施例16取益母草50kg，廣東紫珠15kg，加輔料，按常規(guī)工藝，制成栓劑，每粒5g。
權利要求
1.一種治療宮頸炎的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物的原料藥組成為益母草 7-60重量份廣東紫珠 7-60重量份。
2.如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物原料藥重量配比如下益母草 7重量份 廣東紫珠 55重量份。
3.如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物原料藥重量配比如下益母草 60重量份 廣東紫珠 15重量份。
4.如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物原料藥重量配比如下益母草 40重量份 廣東紫珠 40重量份。
5.如權利要求1-4任一所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物制成膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體、內服膏劑、栓劑、外用膏劑、泡騰片、外用洗劑、氣霧劑或噴霧劑。
6.如權利要求1、2、3或4所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法為取益母草藥材，加8-12倍量水，提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，過濾，濃縮至50℃-70℃相對密度1.00-1.15的稠膏，加0.1mol/L-1mol/L鹽酸溶解，用濃鹽酸調pH為1-3，然后用0.1mol/L-1mol/L鹽酸稀釋至1mL藥液相當于1-2g藥材，即50℃-70℃相對密度1.00-1.20，經離心或濾過后，取上清液上強酸型離子交換樹脂柱，吸附0.5-2h，用蒸餾水洗脫至流出液無色，用氨水堿化樹脂PH8-9，用30-95％氨性乙醇或2mol氨水洗脫，使流出液pH8-12，收集10倍柱體積流出液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏，備用；取廣東紫珠藥材，粉碎成段，加8-12倍量水，提取2-4次，每次1-2h，合并提取液，過濾，濃縮至1mL藥液相當于1.5g藥材，即50℃-70℃相對密度為1.00-1.02，加95％乙醇使含醇量為50-70％，冷藏放置24h，濾過，回收乙醇，使1mL藥液相當于1.5g藥材，即50℃-70℃相對密度為1.00-1.02，將藥液過大孔樹脂，吸附0.5-2h，用蒸餾水洗脫至流出液近無色，用10％-80％乙醇洗脫，收集5BV洗脫液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏；將干浸膏加常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體、內服膏劑、栓劑、外用膏劑、泡騰片、外用洗劑、氣霧劑或噴霧劑。
7.如權利要求6所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法為取益母草藥材，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，過濾，濃縮至60℃相對密度1.05的稠膏，加0.1mol/L鹽酸溶解，用濃鹽酸調pH為1，然后用0.1mol/L鹽酸使1mL藥液相當于1g藥材，即60℃相對密度為1.00-1.02，經離心后，取上清液上001×7型離子交換樹脂柱，吸附1h，用蒸餾水洗脫至流出液無色，用氨水堿化樹脂PH8-9，75％或95％氨性乙醇或2mol氨水洗脫，使流出液pH9-10，收集10倍柱體積流出液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏，備用；取廣東紫珠藥材，粉碎成段，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，過濾，濃縮至1mL藥液相當于1.5g藥材，即60℃相對密度為1.00-1.02加95％乙醇使含醇量為60％或70％，冷藏放置24h，濾過，回收乙醇，使1mL藥液相當于1.5g藥材，即60℃相對密度為1.00-1.02，將藥液過HPD 100、HPD 400或HPD 300大孔樹脂，吸附1h，用蒸餾水洗脫至流出液近無色，用50％、60％或70％乙醇洗脫，收集5倍柱體積洗脫液，回收乙醇，濃縮至干，真空干燥，得干浸膏；將干浸膏加常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體、內服膏劑、栓劑、外用膏劑、泡騰片、外用洗劑、氣霧劑或噴霧劑。
8.如權利要求5所述的中藥組合物的質量檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別中的一種或幾種A.取本藥物組合物固體制劑成人日服用劑量的1/3，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1∶0.5正丁醇-鹽酸-水為展開劑，展開，取出，涼干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.取本藥物組合物固體制劑成人日服用劑量的1/3，加乙醇5ml，超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取過60目篩的廣東紫珠粉末1g，用70％乙醇50mL回流提取0.5h，提取液濾過，水浴蒸干，殘渣加5ml蒸餾水使溶解，用10ml水飽和的正丁醇分2次萃取，萃取液合并，減壓回收正丁醇后，殘渣加510mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各2μl，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以4∶1∶0.5乙醇-水-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％AlCl3乙醇溶液，熱風吹至斑點在365nm波長下顯黃色熒光；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
9.如利要求5所述的中藥組合物的質量檢測方法，其特征在于該方法包括如下含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗3.5μm，250×4.6mm LC-SCX色譜柱，以流動相0.05mol/LNa2HPO4-0.05mol/L NaH2PO4，pH5.5，流速1mL/min，檢測波長為192nm，柱溫為35℃；理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計算應不低于1500；對照品溶液的制備稱取105℃干燥3小時的鹽酸水蘇堿對照品適量，加0.05mol/LNa2HPO4制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備將本藥物組合物固體制劑成人日服用劑量的1/3，置具塞三角瓶中，加乙醇25ml，稱定重量，超聲提取30ml，放冷，再稱定重量，用乙醇補足所失的重量，搖勻，濾過；取續(xù)濾液10mL，水浴蒸干，用0.05mol/LNa2HPO4 10mL溶解，加活性炭0.5g，水浴加熱半分鐘，攪拌，濾過，濾液置于25mL量瓶中，加0.05mol/LNa2HPO4溶液至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液5μl與供試品溶液5～10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，即得；藥物組合物單位制劑含鹽酸水蘇堿C7H13NO2計，不得少于0.03mg。
10.如權利要求1-4任一所述的中藥組合物在制備治療宮頸炎藥物中的應用。
11.如權利要求5所述的中藥組合物在制備治療宮頸炎藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療帶下，即宮頸炎、宮頸糜爛等癥的中藥復方制劑及其制備方法和質量檢測方法。該中藥組合物主要由益母草、廣東紫珠組成。本組合物經過常規(guī)工藝直接或間接加入藥學上可接受的賦型劑制成臨床可接受的劑型，如膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、內服膏劑、栓劑、泡騰片、外用洗劑、外用膏劑、氣霧劑、噴霧劑等，本組合物具有活血通脈，清利濕熱的作用。
文檔編號A61K9/20GK1903290SQ20061010401
公開日2007年1月31日 申請日期2006年8月1日 優(yōu)先權日2006年8月1日
發(fā)明者杜守穎, 洪纓 申請人:北京中醫(yī)藥大學