專利名稱：活血止痛膠囊的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種活血止痛膠囊的制備工藝。
背景技術(shù)：
活血止痛膠囊是經(jīng)典中成藥，該方源于清代道光年間“豫章彭竹樓民部家傳秘方”，收載于《驗(yàn)方新編》卷十三，處方最早見報(bào)道于1975年出版的《趙炳南臨床經(jīng)驗(yàn)集》，現(xiàn)收載于新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)(WS3-084(Z-74)-95(Z))，該藥組方合理，配伍精簡(jiǎn)，藥專力洪，療效確切，臨床反應(yīng)較好，為治療跌打損傷、瘀血腫痛的首選藥物。由于部頒標(biāo)準(zhǔn)受當(dāng)時(shí)條件限制，該活血止痛膠囊的制法僅采用簡(jiǎn)單粉碎技術(shù)，故制劑質(zhì)量較差，往往容易造成重金屬超標(biāo)、微生物含量超標(biāo)、制劑穩(wěn)定性差、生物利用度不高等缺點(diǎn)，故不少單位對(duì)其制備工藝進(jìn)行了改進(jìn)，或者將其劑型改為片劑、丸劑、軟膠囊等，但主要工藝步驟多數(shù)仍局限于水(醇)提、醇沉、粉碎等手段的簡(jiǎn)單組合，沒有很好地根據(jù)處方中各原料藥材的特點(diǎn)進(jìn)行有針對(duì)性地加工利用。
當(dāng)歸為傘形科植物Angelica sinensis(Oliv)Diels的干燥根，是處方中君藥，具有抗凝血抗血栓、改善血液循環(huán)、抗炎、鎮(zhèn)痛、解除平滑肌痙攣等作用。其所含揮發(fā)油以藁苯內(nèi)酯為主，還有少量β-羅勒烯-χ、藁本內(nèi)酯二聚物、香荊芥酚、黃樟醚、正丁烯基輔內(nèi)酯等80余種成分，具有抗炎鎮(zhèn)痛作用，可顯著抑制醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)，對(duì)炎癥早期的水腫和滲出及炎癥晚期的組織增生和肉芽組織增殖均有明顯的抑制作用。另外，阿魏酸為當(dāng)歸中較早分離出的藥效成分，既可溶于水又可溶于醇，具有抗炎、抗血小板聚集作用。文獻(xiàn)報(bào)道，采用一定濃度的乙醇提取可以獲得較高的提取率。
藁苯內(nèi)酯 阿魏酸乳香為橄欖科植物小喬木或喬木卡氏乳香樹Boswellia carterii Birdn.鮑達(dá)乳香樹Boswellia bhdw-dagand Birdw及野乳香樹Boswellia neglecta M Moore等干燥的樹酯，含有蒎烯、檸檬烯、a-乳香脂酸等成分。關(guān)于乳香抗炎鎮(zhèn)痛的藥用部位，不同研究者有著不同的見解，一種認(rèn)為乳香揮發(fā)油具有毒害作用和刺激性，易引起惡心、嘔吐等反應(yīng)，應(yīng)予以除去。而另一種觀點(diǎn)認(rèn)為，乳香揮發(fā)油是鎮(zhèn)痛作用的有效部位，應(yīng)保留。對(duì)于乳香的抗炎作用，有的學(xué)者認(rèn)為乳香揮發(fā)性成分為有效成分，醇提部位具有抗炎作用，超臨界萃取物具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。
尿囊素土鱉蟲為鱉蠊科昆蟲地鱉Eupolyphagasinensis Walker.或冀地鱉Steleophagaplancyi(Boeny).的雌蟲干燥體。主要成分為蛋白質(zhì)、揮發(fā)油(約20種)、脂肪酸、氨基酸(17種)、甾醇及多種微量元素等?，F(xiàn)已從土鱉蟲中分離出的單體有膽甾醇，棕櫚酸和5，4二羥基-7-甲氧基黃酮，二十八烷醇，β-谷甾醇，十八烷基甘油醚(鯊肝醇)，尿嘧啶和尿囊素。其中尿囊素具有鎮(zhèn)靜、促進(jìn)組織修復(fù)等作用。另外、大量文獻(xiàn)報(bào)道，土鱉蟲水提液具有抗凝血、抗血栓、鎮(zhèn)痛作用。
自然銅主要成分為FeS2，具有續(xù)筋接骨的作用，水煎液中鉛的含量會(huì)大大降低，而鐵離子含量仍保持較高水平。
三七為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen的干燥根，主要成分為三帖皂苷、三七素等，為貴重藥材，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、止血等作用，而且“生攆熟補(bǔ)”，生品重于散瘀止血，熟品重于補(bǔ)血和血，為發(fā)揮三七活血逐瘀的功效，一般將生藥粉碎后直接入藥。文獻(xiàn)報(bào)道，采用超微粉碎可以大大提高三七總皂苷的溶出。有學(xué)者比較了三七超細(xì)粉與常規(guī)粉碎的三七藥粉的家兔體內(nèi)吸收情況，三七超細(xì)粉吸收人參皂苷Rb1、Rg1、Re更快，量更大，并且二者之間有顯著性差異，說(shuō)明三七經(jīng)超微粉碎后增加了體內(nèi)吸收，提高了生物利用度。
冰片(syntheticborneol)主要含龍腦(borneol)和異龍腦(isoborneol)，在活血止痛膠囊處方中作為佐使之劑，起開竅醒神、清熱止痛的功效，中醫(yī)理論認(rèn)為其走竄力強(qiáng)，具有輔助藥性的作用，“獨(dú)行勢(shì)弱，佐使有功”，可以“引藥上行”?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，冰片不但具有抗炎、抗菌、止痛的作用，還可以促進(jìn)藥物透皮吸收，促進(jìn)藥物透過血腦屏障，促進(jìn)提高藥物體內(nèi)濃度。由于冰片在生產(chǎn)和貯存過程中容易逸失，采用β-環(huán)糊精包合技術(shù)將其包合，以增加藥物的穩(wěn)定性。
龍腦超臨界流體萃取技術(shù)(Superitical Fluid Extraction，簡(jiǎn)稱SFE)是20世紀(jì)興起的一種提取、分離技術(shù)。上世紀(jì)50年代，美國(guó)的Todd和Elain首先在理論上提出了其可行性，直到70時(shí)年代才用于提取和分離。超臨界流體兼有氣、液兩者的特點(diǎn)，密度接近于液體，粘度和擴(kuò)散系數(shù)接近于氣體，不僅具有與液體溶劑相當(dāng)?shù)娜芙饽芰Γ揖哂袃?yōu)良的傳質(zhì)性能。如超臨界CO2的粘度是液態(tài)CO2的百分之一，自擴(kuò)散系數(shù)是液體的100倍。CO2極性小，適于提取分子量小、親脂性的揮發(fā)油、內(nèi)酯、環(huán)氧化合物等物質(zhì)，且CO2安全無(wú)毒，容易獲得。超臨界流體萃取技術(shù)就是利用超臨界流體的這種特殊性質(zhì)，在高壓條件下將超臨界流體與待分離的固體或液體混合物接觸，調(diào)節(jié)系統(tǒng)的操作壓力和溫度，萃取出所需要的物質(zhì)，隨后通過降壓或升溫的方法，降低超臨界流體的密度，使萃取物得到分離，該技術(shù)具有低溫提取、保持有效成分的活性、沒有溶劑殘留和可進(jìn)行選擇性分離等特點(diǎn)，是利用超臨界狀態(tài)下CO2的較好的溶劑特性，對(duì)揮發(fā)性較強(qiáng)的成分、熱敏性物質(zhì)和脂溶性成分的提取分離具有較好的效果，正受到越來(lái)越多的重視，新的研究、應(yīng)用成果不斷問世。
超臨界提取的影響因素有SFE的流體比、CO2流量、壓力、時(shí)間、溫度、粉碎粉粒度等。壓力是SFE中最重要的參數(shù)。一定溫度下，隨著壓力的增大，流體密度顯著增加，溶質(zhì)的溶解度增大，萃取效率提高。但過高的壓力使生產(chǎn)成本明顯提高，其萃取率增加有限。在SFE過程中，溫度增加，加強(qiáng)了其擴(kuò)散能力，使得被萃取物在超臨界CO2中溶解度增加。有利于萃取。但隨著溫度的增加，雜質(zhì)的溶解度也增加，使精制過程復(fù)雜化，從而降低產(chǎn)品的收率。同時(shí)溫度增加，CO2流體的密度降低，使得對(duì)溶質(zhì)的溶解力下降，降低產(chǎn)品收率。萃取時(shí)間增加，有利于超臨界流體與溶質(zhì)中有效成分的溶解平衡，增加萃取的時(shí)間就增加萃取得率。由于萃取一定時(shí)間后，隨著溶質(zhì)中有效成分的減少，再增加萃取時(shí)間，萃取得率增加緩慢，能耗增加。而且有些無(wú)效成分也更多地被萃取出來(lái)，直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量。
包合物技術(shù)可使藥物在體內(nèi)的達(dá)峰時(shí)間縮短，促進(jìn)藥物在體內(nèi)的吸收，達(dá)峰濃度升高，提高生物利用度，并使藥物在體內(nèi)的滯留時(shí)間縮短，消除半衰期縮短，消除迅速，使藥物在達(dá)到治病療效的同時(shí)不會(huì)在體內(nèi)滯留很長(zhǎng)時(shí)間，減少副作用。
ZL03112939.0公開了一種活血止痛膠囊的制備方法(以下稱原工藝)，該專利將超臨界萃取技術(shù)、包合技術(shù)及超微粉碎技術(shù)應(yīng)用于活血止痛膠囊制備工藝，具體步驟是將三七、制乳香、煅自然銅制成超微粉，將當(dāng)歸超臨界萃取物以及冰片制成包合物，將土鱉蟲和當(dāng)歸藥渣水提物制成細(xì)粉，混合均勻裝入膠囊。該制備方法較部頒標(biāo)準(zhǔn)的簡(jiǎn)單粉碎技術(shù)有了較大提高，但仍存在一些不足，如未將乳香中的有效成分揮發(fā)油部位提取出來(lái)，進(jìn)行包合可以減輕乳香揮發(fā)油對(duì)胃腸道的刺激作用，而且由于乳香為樹脂類物質(zhì)在微粉化產(chǎn)業(yè)化方面存在一定困難；自然銅(煅)中鉛、砷等有害金屬元素會(huì)因?yàn)槲⒎刍黾尤梭w吸收；土鱉蟲現(xiàn)多為人工飼養(yǎng)，體內(nèi)含有大量的食物，采用粉碎工藝無(wú)法除去食物等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種活血止痛膠囊的制備工藝。
本發(fā)明的目的是通過下列技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)的一種活血止痛膠囊的制備工藝，選用原料藥的重量份為當(dāng)歸40份、三七8份、乳香(制)8份、冰片2份，土鱉蟲20份、自然銅(煅)12份，該工藝包括以下步驟a、按重量份配比稱取原料藥當(dāng)歸、三七、乳香(制)、冰片、土鱉蟲、自然銅(煅)，備用；b、粉碎將當(dāng)歸與乳香(制)按處方比例混合均勻，粉碎成顆粒，備用；三七粉碎成粒徑10-30μm的三七超細(xì)粉備用；c、CO2超臨界萃取取當(dāng)歸與乳香(制)混合顆粒于萃取釜中，CO2超臨界萃取，其中壓力為24-36Mpa，萃取釜溫度為40-60℃，CO2流速為10～30L/h，萃取時(shí)間為0.5-1.5小時(shí)，收集當(dāng)歸與乳香(制)超臨界萃取的揮發(fā)油，備用；d、揮發(fā)油包合取當(dāng)歸與乳香(制)超臨界萃取的揮發(fā)油重量4-8倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量2-3倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加當(dāng)歸與乳香(制)超臨界萃取的揮發(fā)油，碾磨包合20-40分鐘，傾出，冷藏靜置，濾過，真空干燥，即得揮發(fā)油包合物；e、冰片包合取冰片重量4-6倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精量1-3倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用適量乙醇溶解的冰片，碾磨包合30-50分鐘，傾出，冷藏靜置，濾過，真空干燥，即得冰片包合物；f、醇提當(dāng)歸與乳香(制)超臨界萃取的藥渣用藥渣重量6-10倍量的濃度為50-70％的乙醇攪拌回流提取1-3次，每次1-2小時(shí)，回流液靜置，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至60℃相對(duì)密度為1.15-1.25的清膏，得清膏I，備用；g、水提自然銅(煅)粉用布袋包裹，加入土鱉蟲，用自然銅(煅)粉與土鱉蟲總重量4-8倍量的水提取1-3次，每次1-2小時(shí)，合并水提液，靜置，取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.15-1.25的清膏，得清膏II，備用；h、混合、干燥、粉碎將清膏I和清膏II混合均勻，加入三七超細(xì)粉，真空干燥至干膏，粉碎成80-120目的細(xì)粉備用；I、制粒將干膏細(xì)粉、揮發(fā)油包合物及適量糊精混合，以70-90％乙醇為黏合劑制成軟材，16-20目篩制粒，40-80℃干燥，整粒，加入冰片包合物，混勻，裝入膠囊即可。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明提供的活血止痛膠囊工藝中，運(yùn)用了超臨界萃取技術(shù)、β-環(huán)糊精包合技術(shù)、超微粉碎技術(shù)等先進(jìn)技術(shù)，并采用統(tǒng)計(jì)學(xué)實(shí)驗(yàn)方法優(yōu)化提取和制備工藝，采用本發(fā)明工藝制備的活血止痛膠囊比現(xiàn)有技術(shù)制備的活血止痛膠囊療效好、重金屬含量低、穩(wěn)定性好、對(duì)人體副反應(yīng)反應(yīng)率降低。
本工藝中針對(duì)不同的原料采用不同的制備工藝，使各原料的有效部位能夠得到充分應(yīng)用，并減少了副作用，具體體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面(一)當(dāng)歸乳香CO2超臨界萃取揮發(fā)油工藝的研究1、正交試驗(yàn) 影響CO2超臨界萃取揮發(fā)油得率的主要因素有萃取釜壓力、萃取釜溫度、CO2流速和萃取時(shí)間，因此選用正交表L9(34)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，取當(dāng)歸乳香藥材混合粉400g(過3號(hào)篩，其中當(dāng)歸∶乳香為5∶1)，以萃取率(％)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，試驗(yàn)安排及結(jié)果見表1。
表1 因素水平表

以萃取率為指標(biāo)考察，極差分析結(jié)果B＞A＞D＞C，即影響萃取效果的因素順序?yàn)檩腿囟龋据腿毫Γ据腿r(shí)間＞C02流速。最佳工藝條件為A3B3C2D3，即萃取壓力為36MPa，萃取溫度為60℃，CO2流速為20L/h，萃取時(shí)間為1.5h。進(jìn)一步以C因素為誤差項(xiàng)進(jìn)行方差分析，三個(gè)因素對(duì)提取結(jié)果均無(wú)顯著性差異。
2、驗(yàn)證試驗(yàn) 為了驗(yàn)證正交試驗(yàn)的可行性，取當(dāng)歸、乳香混合粉400g，按照上述最佳工藝條件進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)，以萃取率(％)為考察指標(biāo)，三批試驗(yàn)平均萃取率為7.6％，表明該工藝穩(wěn)定可行。
(二)當(dāng)歸乳香CO2超臨界萃取藥渣醇提工藝的研究1、正交試驗(yàn) 影響醇提工藝的主要因素有乙醇濃度、溶劑倍量、回流時(shí)間和提取次數(shù)。上述4個(gè)因素各取3個(gè)水平進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，取當(dāng)歸乳香CO2超臨界萃取的藥渣20g，以干膏得率(％)、阿魏酸含量(％)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選最佳提取工藝，試驗(yàn)安排及結(jié)果見表2。
表2 因素水平表

以干膏得率為指標(biāo)，極差分析結(jié)果D＞B＞C＞A。即影響醇提效果的因素順序?yàn)樘崛〈螖?shù)＞溶劑倍量＞提取時(shí)間＞乙醇濃度。最佳工藝條件為A3B3C3D3，即70％乙醇，10倍量，每次2小時(shí)，提取3次。以A因素為誤差項(xiàng)進(jìn)一步方差分析。提取次數(shù)對(duì)醇提結(jié)果有顯著影響。
以阿魏酸含量為指標(biāo)，極差分析結(jié)果D＞B＞C＞A。即影響醇提效果的因素順序?yàn)樘崛〈螖?shù)＞溶劑倍量＞提取時(shí)間＞乙醇濃度。最佳工藝條件為A2B2C2D3，即60％乙醇，8倍量，每次1.5小時(shí)，提取3次。以A因素為誤差項(xiàng)進(jìn)一步方差分析。提取次數(shù)對(duì)醇提結(jié)果有顯著影響。
為了更合理的評(píng)價(jià)正交試驗(yàn)的結(jié)果，采用綜合評(píng)分尋找最佳工藝，計(jì)算方法如下在兩個(gè)指標(biāo)中，分別選取最高者作為100分，其余按公式計(jì)算得分yi′＝100-最高值+yi，然后對(duì)兩個(gè)指標(biāo)賦與不同的權(quán)重。賦予干膏得率權(quán)重系數(shù)為0.4，阿魏酸含量權(quán)重系數(shù)為0.6，按此方法計(jì)算公式如下綜合得分＝干膏得率得分×0.4+阿魏酸含量得分×0.6采用綜合評(píng)分，由極差分析結(jié)果D＞B＞C＞A，即影響醇提效果的因素順序?yàn)樘崛〈螖?shù)＞溶劑倍量＞提取時(shí)間＞乙醇濃度。最佳工藝條件A3B3C2D3，即70％乙醇，10倍量，每次1.5小時(shí)，提取3次。以A因素為誤差項(xiàng)進(jìn)一步方差分析。提取次數(shù)對(duì)提取結(jié)果有顯著差異。
2、追加驗(yàn)證試驗(yàn)為了驗(yàn)證正交試驗(yàn)的結(jié)果，同時(shí)由于提取次數(shù)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響，因此將提取次數(shù)再上浮一個(gè)檔次進(jìn)行追加驗(yàn)證試驗(yàn)，確定最佳工藝。取當(dāng)歸乳香超臨界萃取藥渣400g，以10倍量的70％乙醇提取，分別提取3次和4次，每次1.5小時(shí)。以干膏得率和阿魏酸含量為考察指標(biāo)。結(jié)果表明，提取3次和4次所得干膏得率和阿魏酸含量無(wú)顯著增加，考慮到大生產(chǎn)等成本因素，確定提取次數(shù)為3次。最佳醇提取工藝為A3B3C3D3。即70％乙醇、10倍量、每次1.5小時(shí)、提取3次。
(三)土鱉蟲、自然銅(煅)水提工藝的研究1、正交試驗(yàn) 影響水提工藝的主要因素有加水倍量、提取時(shí)間和提取次數(shù)。上述3個(gè)因素各取3個(gè)水平進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，取土鱉蟲10g，自然銅(煅)6g(包煎)，以干膏得率(％)、鉛含量(ppm)、尿囊素含量(％)、砷含量(ppm)和鐵含量(％)為考察指標(biāo)，篩選最佳提取工藝。試驗(yàn)安排及結(jié)果見表3。
表3 因素水平表

此實(shí)驗(yàn)是多指標(biāo)的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，其中有些指標(biāo)如尿囊素含量和鐵含量欲求其最大值，而有些指標(biāo)如得膏率、鉛含量和砷含量則越小越好，因此在優(yōu)化過程中需對(duì)各個(gè)指標(biāo)進(jìn)行綜合考慮和權(quán)衡，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果及要求，首先將各指標(biāo)確定最大值和最小值。
其次將各指標(biāo)進(jìn)行規(guī)格化。對(duì)于欲達(dá)到最大化的指標(biāo)，如尿囊素含量和鐵含量，其規(guī)格化方程為di＝(Yi-Ymin)/(Ymax-Ymin)。對(duì)于要進(jìn)行最小化的指標(biāo)，如得膏率、鉛含量和砷含量，其規(guī)格化方程為di＝(Ymax-Yi)/(Ymax-Ymin)。
其根據(jù)規(guī)格化方程計(jì)算出各指標(biāo)的規(guī)格化值后，由下式計(jì)算綜合指標(biāo)OD＝(d1d2d3...dk)1/k，進(jìn)行直觀分析和方差分析，極差分析結(jié)果C＞B＞A，即影響水提效果的因素順序?yàn)樘崛〈螖?shù)＞提取時(shí)間＞溶劑倍量。A3B2C3為最佳因素水平組合，即8倍量水，每次1.5小時(shí)，提取3次。經(jīng)方差分析可知，三因素對(duì)提取結(jié)果均無(wú)顯著差異。
2、驗(yàn)證試驗(yàn)取土鱉蟲10g和自然銅(煅)6g，按照上述最佳工藝條件進(jìn)行3批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。以干膏得率、鉛含量、尿囊素含量、砷含量和鐵含量為考察指標(biāo)，三批驗(yàn)證試驗(yàn)與正交試驗(yàn)結(jié)果相符，表明該工藝穩(wěn)定可行。
(四)冰片及當(dāng)歸乳香揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合工藝研究β-環(huán)糊精包合的方法有飽和水溶液法，超聲法和碾磨法，考慮到冰片和當(dāng)歸乳香揮發(fā)油的理化性質(zhì)和產(chǎn)業(yè)化等因素，選用膠體磨法進(jìn)行β-環(huán)糊精包合的研究。影響包合效果的主要因素有主客分子比，加水倍量和包合時(shí)間。對(duì)冰片和當(dāng)歸乳香揮發(fā)油的包合，分別選用不同的考察方法。
1、冰片β-環(huán)糊精包合工藝的研究1.1、正交試驗(yàn) 取冰片10g，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)，以龍腦含量(％)和龍腦利用率(％)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選最佳包合工藝，試驗(yàn)安排和結(jié)果見表4。
表4 正交試驗(yàn)因素水平表

以龍腦含量為指標(biāo)，極差分析結(jié)果A＞B＞C，即影響包合效果的因素順序冰片∶β-CD＞加水倍量＞包合時(shí)間，最佳工藝條件為A2B3C3，即冰片∶β-CD重量比為1∶5，加水量為3倍量，包合時(shí)間為50分鐘。以D項(xiàng)為誤差項(xiàng)，進(jìn)一步方差分析，結(jié)果冰片∶β-CD重量比比有顯著性差異。
以龍腦利用率為指標(biāo)，極差分析結(jié)果A＞C＞B，即影響包合效果的因素順序冰片∶β-CD重量比＞包合時(shí)間＞加水倍量，最佳工藝為A3B3C2，即冰片∶β-CD重量比為1∶6，加水倍量為3倍量，包合時(shí)間為40min。以D項(xiàng)為誤差項(xiàng)，進(jìn)一步方差分析，結(jié)果冰片∶β-CD重量比有顯著性差異。
為了更合理的評(píng)價(jià)正交試驗(yàn)的結(jié)果，尋找最佳工藝，計(jì)算方法如下在兩個(gè)指標(biāo)中，分別選取最高者作為100分，其余按公式計(jì)算得分yi′＝100-最高值+yi21，然后對(duì)兩個(gè)指標(biāo)賦與不同的權(quán)重。賦予包合物龍腦含量權(quán)重系數(shù)為0.4，龍腦利用率權(quán)重系數(shù)為0.6，進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)分析，計(jì)算公式如下綜合得分＝龍腦含量得分×0.4+龍腦利用率得分×0.6綜合評(píng)分分析，極差分析結(jié)果A＞C＞B，即影響包合效果的因素順序冰片∶β-CD＞包合時(shí)間＞加水倍量，最佳工藝條件為A2B3C2，即1∶5，3倍量水，包合40分鐘。進(jìn)一步方差分析，三因素均無(wú)顯著性差異。
1.2、驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)為了驗(yàn)證最佳包合工藝與正交試驗(yàn)是否相符，取冰片10g，按優(yōu)選的最佳工藝進(jìn)行三批驗(yàn)證試驗(yàn)，以龍腦含量(％)和龍腦利用率(％)為考察指標(biāo)，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)該工藝穩(wěn)定可行。最后確定最佳工藝條件為A2B3C2，即冰片∶β-CD重量比為1∶5，加水量為3倍量，包合時(shí)間為40分鐘。
2、當(dāng)歸乳香揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合工藝的研究2.1、正交試驗(yàn) 取當(dāng)歸乳香揮發(fā)油10g，以包合物含油量為考察指標(biāo)，評(píng)選最佳包合工藝。實(shí)驗(yàn)安排和結(jié)果見表5。
表5 因素水平表

以含油量為指標(biāo)進(jìn)行考察，極差分析結(jié)果為A＞B＞C，即油∶β-CD＞加水倍量＞包合時(shí)間，最佳工藝條件為A1B2C3。即油∶β-環(huán)糊精(1∶4)、加水2.5倍、包合時(shí)間40min。以D項(xiàng)為誤差項(xiàng)進(jìn)行方差分析，三因素均無(wú)顯著性影響。
2.2、驗(yàn)證試驗(yàn) 為了驗(yàn)證最佳包合工藝與正交試驗(yàn)結(jié)果是否相符，按優(yōu)選的最佳工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)，取當(dāng)歸乳香揮發(fā)油10g，以含油量為考察指標(biāo)，驗(yàn)證結(jié)果證實(shí)與正交結(jié)果基本相符，故確定最佳工藝條件為A1B2C3。即油∶β-環(huán)糊精(1∶4)、加水2.5倍、包合時(shí)間40min。
(五)三七超微粉碎工藝的研究1、三七預(yù)處理?xiàng)l件的選擇三七以藥材細(xì)粉入藥，在采收運(yùn)輸?shù)冗^程中感染細(xì)菌，微生物限度超過《中國(guó)藥典》所規(guī)定的限度?，F(xiàn)分別稱取30g藥材粗粉，按照國(guó)家衛(wèi)生部藥發(fā)1997第38號(hào)文60Co輻照藥材滅菌法進(jìn)行預(yù)處理，結(jié)果微生物限度檢查均能符合要求。
2、三七超微粉碎三七的超微粉碎，采用二次粉碎法。首先用萬(wàn)能粉碎機(jī)將三七粉碎成80目的粗粉，平均得粉率為97.3％。然后委托南京天目超微技術(shù)開發(fā)有限公司進(jìn)行超微粉碎，得粉率為90.4％。
超細(xì)粉經(jīng)掃描電鏡檢測(cè)，粒徑2～8μm，正態(tài)分布測(cè)定為97.05％(10～30μm)。
超微粉碎設(shè)備TC20藥用超微粉碎機(jī)超微粉碎工藝參數(shù)空氣壓力0.5～0.8Mpa；空氣壓力露點(diǎn)0～5℃；空氣量3M3/min；進(jìn)料粒度80目；加料速度100g/min；分級(jí)機(jī)頻率設(shè)定45Hz。
(六)、制法將干膏細(xì)粉、揮發(fā)油包合物及適量糊精混合，以90％乙醇為黏合劑制成軟材，20目不銹鋼篩制粒，40～80℃干燥，整粒，加入冰片包合物，混勻，膠囊灌裝，制成1000粒。
(七)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究性狀本品為膠囊劑，除去膠囊呈棕色至棕褐色顆粒；氣香、味微苦。
鑒別(1)取本品(按實(shí)施例1制得，下同)約1g，加稀鹽酸1ml，加熱煮沸數(shù)分鐘，濾過，濾液顯鐵鹽的鑒別反應(yīng)(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄IVB)。
(2)取本品1.5g，研細(xì)，加乙醚40ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取本品膠囊內(nèi)容物2.5g，研細(xì)，加乙醚30ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取乳香對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μl、對(duì)照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30-60℃)-醋酸乙酯(19∶2)為展開劑，展開，展距為8cm，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，105℃烘至顯色。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取本品2.5g，研細(xì)，加乙醚40ml，超聲處理10分鐘，濾過，藥渣揮去乙醚，加甲醇30ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，加水10ml溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用水洗滌2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取三七對(duì)照藥材1g，加甲醇30ml，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水(4∶1∶5)上層溶液為展開劑，展開，取出，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱數(shù)分鐘，分別置日光和紫外光燈(365nm)視檢，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
檢查應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄IL)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VID)測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇-1％醋酸水(1∶1∶5)作為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為316nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含4μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末適量(約0.5g)，精密稱定，置具塞三角燒瓶中，精密加入25ml甲醇-甲酸(9∶1)溶液，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過0.45μm微孔濾膜即得(避光操作)。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每粒含當(dāng)歸以阿魏酸(C10H10O4)計(jì)，不得少于0.09mg。
本發(fā)明的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)研究活血止痛膠囊(新工藝)(按實(shí)施例1制得，下同)的鎮(zhèn)痛、抗炎、抗凝血和抗血栓幾方面的作用，證實(shí)其主要藥效學(xué)功效。動(dòng)物采用小鼠和大鼠，分別設(shè)置對(duì)照組、活血止痛膠囊(新工藝)組、活血止痛膠囊(原工藝)組，所設(shè)劑量小鼠試驗(yàn)高、中、低劑量分別為3.0、1.5、0.75g(生藥量)/kg，大鼠試驗(yàn)高、中、低劑量分別為2.10、1.05、0.53g(生藥量)/kg，活血止痛膠囊(原工藝)給藥劑量相當(dāng)于活血止痛膠囊(新工藝)中劑量。對(duì)照組采用0.5％CMC-Na。
1.活血止痛膠囊(新工藝)鎮(zhèn)痛試驗(yàn)1.1.小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)取健康昆明小鼠，按體重隨機(jī)分組，小鼠給藥體積0.5ml/20g，連續(xù)灌胃給藥6天，禁食12小時(shí)，自由飲水，第7天再給藥一次，給藥后40min腹腔注射0.6％醋酸溶液0.20ml/只，觀察并記錄腹腔注射醋酸溶液后15min內(nèi)動(dòng)物的扭體反應(yīng)次數(shù)。以次數(shù)來(lái)表示疼痛程度的指標(biāo)，各實(shí)驗(yàn)組扭體反應(yīng)次數(shù)均值與對(duì)照組進(jìn)行比較并進(jìn)行t檢驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果以15min內(nèi)扭體反應(yīng)次數(shù)表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)采用組間t-student檢驗(yàn)，結(jié)果見表7。
表7.活血止痛膠囊(新工藝)醋酸扭體法小鼠鎮(zhèn)痛試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注**P＜0.01；與對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))。
活血止痛膠囊(新工藝)小鼠扭體數(shù)的量效關(guān)系公式為Y＝-24.914X+92.697，r＝0.9999[其中Y為扭體數(shù)，X為對(duì)數(shù)劑量，r為相關(guān)系數(shù)。量效關(guān)系曲線見圖1]試驗(yàn)結(jié)果表明活血止痛膠囊(新工藝)高、中、低劑量組的小鼠扭體反應(yīng)數(shù)與對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，說(shuō)明活血止痛膠囊(新工藝)具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。給藥對(duì)數(shù)劑量與小鼠扭體數(shù)呈明顯的線性關(guān)系，表明量-效關(guān)系明顯。與活血止痛膠囊(原工藝)比較，同等給藥量下降低小鼠扭體反應(yīng)數(shù)效果一致。
1.2.小鼠熱水縮尾法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)取健康昆明小鼠，按體重隨機(jī)分組，試驗(yàn)前動(dòng)物首先禁食12小時(shí)過夜，自由飲水。將實(shí)驗(yàn)小鼠尾浸入50℃恒溫水浴3cm，記錄縮尾潛伏期(TFL)為痛閾指標(biāo)。給藥前測(cè)兩次(間隔5min)，以其均值作為基礎(chǔ)痛閾，剔除過敏或遲鈍動(dòng)物TFL(＜4s或＞30s)。然后分別灌胃給予相應(yīng)藥物，給藥后40min將實(shí)驗(yàn)小鼠尾浸入50℃恒溫水浴3cm，再記錄縮尾時(shí)間，并與給藥前比較，并計(jì)算痛閾提高百分率(％)。試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果以縮尾反應(yīng)潛伏期(TFL)和痛閾提高百分率(％)表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)采用組間t-student檢驗(yàn)，結(jié)果見表8。
表8.活血止痛膠囊(新工藝)小鼠熱水縮尾法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果

注(1)*P＜0.05，**P＜0.01；與對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))。
(2)痛閾提高百分率(％)＝(給藥后TFL-基礎(chǔ)TFL)/基礎(chǔ)TFL*100％活血止痛膠囊(新工藝)小鼠縮尾反應(yīng)潛伏期的量效關(guān)系公式為Y＝5.9463X-9.1092，r＝0.9905[其中Y為潛伏期(S)，X為對(duì)數(shù)劑量，r為相關(guān)系數(shù)。量效關(guān)系曲線見圖2]活血止痛膠囊(新工藝)小鼠縮尾反應(yīng)痛閾提高百分率的量效關(guān)系公式為Y＝92.283X-233.18，r＝0.9979[其中Y為痛閾提高百分率，X為對(duì)數(shù)劑量，r為相關(guān)系數(shù)。量效關(guān)系曲線見圖3]試驗(yàn)結(jié)果表明活血止痛膠囊(新工藝)高、中、低劑量組小鼠熱水縮尾潛伏期與對(duì)照組比較有極顯著差異或顯著差異(P＜0.01或P＜0.05)，高、中、低劑量組痛閾提高百分率與對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，說(shuō)明活血止痛膠囊(新工藝)具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。給藥對(duì)數(shù)劑量與小鼠熱水縮尾潛伏期和痛閾提高百分率均呈良好的線性關(guān)系，隨著活血止痛膠囊(新工藝)給藥劑量的增加，小鼠熱水縮尾潛伏期延長(zhǎng)，痛閾提高百分率增加，表明量-效關(guān)系明顯。與活血止痛膠囊(原工藝)比較，同等給藥量下延長(zhǎng)縮尾潛伏期接近，但痛閾提高百分率平均值更大。
2.活血止痛膠囊(新工藝)抗炎試驗(yàn)2.1.二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用試驗(yàn)取昆明小鼠，按體重隨機(jī)分組，連續(xù)灌胃給藥6天，禁食12小時(shí)過夜，第7天再給藥一次，末次給藥1小時(shí)后，在小鼠右耳的前后兩面均勻涂布二甲苯0.05mL，左耳不做任何處理。各組分別于致炎后60分鐘脫頸椎處死小鼠，剪下雙耳用7mm直徑打孔器分別在雙耳相同部位打下圓耳片，電子天平稱質(zhì)量。計(jì)算腫脹度及腫脹抑制率，比較給藥組與對(duì)照組差異情況，統(tǒng)計(jì)學(xué)采用組間t-student檢驗(yàn)，結(jié)果見表9、圖4。計(jì)算公式為腫脹度(mg)＝右耳片質(zhì)量(mg)-左耳片質(zhì)量(mg)腫脹抑制率＝(對(duì)照組腫脹度-給藥組腫脹度)÷對(duì)照組腫脹度×100％。
表9.活血止痛膠囊(新工藝)對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用試驗(yàn)結(jié)果

注(1).**P＜0.01，與對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))(2).#P＜0.05，與原工藝組比較(2)腫脹度(mg)＝右耳片重-左耳片重(3)腫脹抑制率(％)＝(對(duì)照組腫脹度-給藥組腫脹度)/對(duì)照組腫脹度*100％試驗(yàn)結(jié)果表明，活血止痛膠囊(新工藝)高、中、低劑量組的耳廓腫脹度與對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，說(shuō)明活血止痛膠囊(新工藝)對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹有極顯著的抑制作用。且隨著活血止痛膠囊(新工藝)給藥劑量的增加，抑制作用增大，但給藥劑量與抗炎作用療效間的量-效關(guān)系不明顯。與活血止痛膠囊(原工藝)比較，同等給藥量下抗炎作用療效更好(P＜0.05)。
2.2.角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的抑制作用試驗(yàn)取SD大鼠，按體重隨機(jī)分組，連續(xù)灌胃給藥6天，禁食12小時(shí)過夜，第7天再給藥一次，前后共給藥7次，給藥容積0.50ml/20g。第7天用足跖容積測(cè)定儀測(cè)定大鼠右后足跖的排水量作為致炎前0h的足趾排水量，然后各組均灌胃給藥，立即于大鼠右后足跖皮內(nèi)注入1％的角叉菜膠0.05ml以致炎，分別于致炎后1，2，3，4，5，6h用足跖容積測(cè)定儀測(cè)定大鼠右后足跖的排水量(ml)，以致炎前后的排水量之差代表足跖的腫脹程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以腫脹度表示，結(jié)果見表10。統(tǒng)計(jì)學(xué)采用組間t-student檢驗(yàn)。
表10活血止痛膠囊(新工藝)對(duì)角叉菜膠致大鼠右后足趾腫脹的抑制作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注(1)腫脹度(ml)＝致炎后右后足排水量-致炎前右后足排水量(2)*P＜0.05，**P＜0.01；與對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))(3)#P＜0.05；與活血止痛膠囊(原工藝)組比較試驗(yàn)結(jié)果表明，在致炎后的前兩個(gè)小時(shí)活血止痛膠囊(新工藝)高、中、低劑量組對(duì)角叉菜膠導(dǎo)致的炎癥均有良好的抑制作用。尤其是活血止痛膠囊(新工藝)高(2.1g/kg)、中(1.05g/kg)劑量在前兩小時(shí)與對(duì)照組相比，腫脹度均有極顯著性差異(p＜0.01)。且活血止痛膠囊(新工藝)高劑量在6小時(shí)內(nèi)均有抑制作用，活血止痛膠囊(新工藝)中劑量在第5、第6小時(shí)亦有抑制活性，優(yōu)于活血止痛膠囊(原工藝)的作用。由此可見，活血止痛膠囊(新工藝)可抑制角叉菜膠導(dǎo)致的炎性反應(yīng)，隨著活血止痛膠囊(新工藝)劑量的增大，其抗炎作用也增強(qiáng)。綜合考慮，相同給藥量下，活血止痛膠囊(新工藝)療效好于活血止痛膠囊(原工藝)。
2.3.小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)取昆明小鼠，按體重隨機(jī)分組，續(xù)灌胃給藥6天，禁食12小時(shí)，自由飲水，第7天再給藥一次，術(shù)次給藥后40min，靜脈注射伊文思藍(lán)后腹腔注射醋酸致炎，腹腔內(nèi)滲出液中伊文思藍(lán)濃度以洗脫液的吸光度表示，表示炎性滲出的多少。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以吸光度(OD)表示，結(jié)果見表11、圖5。統(tǒng)計(jì)學(xué)采用組間t-student檢驗(yàn)。
表11.活血止痛膠囊(新工藝)對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響試驗(yàn)結(jié)果


注**P＜0.01；與對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))活血止痛膠囊(新工藝)抑制小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的量效關(guān)系公式為Y＝-0.2159X+0.8092，r＝0.997[其中Y為潛伏期(S)，X為對(duì)數(shù)劑量，r為相關(guān)系數(shù)，圖6]試驗(yàn)結(jié)果表明活血止痛膠囊(新工藝)高、中、低劑量組的吸光度與對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)。說(shuō)明活血止痛膠囊(新工藝)能夠顯著抑制小鼠腹腔炎性滲出，增加腹腔內(nèi)毛細(xì)血管的通透性。且隨著活血止痛膠囊(新工藝)給藥劑量的增加，抑制作用增大，給藥對(duì)數(shù)劑量與吸光度呈明顯的線性關(guān)系，表明量-效關(guān)系明顯。與活血止痛膠囊(原工藝)比較，同等給藥量下作用療效一致。
3.活血止痛膠囊(新工藝)抗凝血及抗血栓作用試驗(yàn)3.1.毛細(xì)管法測(cè)定小鼠凝血時(shí)間試驗(yàn)取昆明小鼠，按體重隨機(jī)分組，采用毛細(xì)玻管法試驗(yàn)，動(dòng)物連續(xù)灌胃給藥6天，末次給藥前禁食12小時(shí)，第7天給藥1h后，摘眼球取血至內(nèi)徑為1mm的玻璃毛細(xì)管，開始計(jì)時(shí)，至毛細(xì)管血柱達(dá)5cm，前1min每隔30s折斷毛細(xì)管一段，超過1min每隔10s折斷毛細(xì)管一段，檢查有無(wú)出現(xiàn)凝血絲。計(jì)算毛細(xì)管采血到出現(xiàn)血凝絲時(shí)間，即為凝血時(shí)間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以凝血時(shí)間表示，結(jié)果見表12。各實(shí)驗(yàn)組凝血時(shí)間均值與對(duì)照組比較并進(jìn)行組間t-student檢驗(yàn)。
表12.活血止痛膠囊(新工藝)毛細(xì)管法測(cè)定小鼠凝血時(shí)間試驗(yàn)結(jié)果

注**P＜0.01；與對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))活血止痛膠囊(新工藝)延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間的量效關(guān)系公式為Y＝46.0X+102.1，r＝0.990[其中Y為凝血時(shí)間(s)，X為給藥量(相當(dāng)于生藥量g/kg)，r為相關(guān)系數(shù)，量效關(guān)系曲線見圖7]試驗(yàn)結(jié)果表明活血止痛膠囊(新工藝)高、中、低劑量組的凝血時(shí)間與對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，說(shuō)明活血止痛膠囊(新工藝)能明顯延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間。且隨著活血止痛膠囊(新工藝)給藥劑量的增加，小鼠凝血時(shí)間延長(zhǎng)，給藥量與凝血時(shí)間呈較好的線性關(guān)系，說(shuō)明量-效關(guān)系明顯。與活血止痛膠囊(原工藝)比較，同等給藥量下延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間療效接近，但活血止痛膠囊(新工藝)凝血時(shí)間平均值更大。
3.2.大鼠動(dòng)靜脈旁路抗血栓試驗(yàn)取SD大鼠，根據(jù)動(dòng)物體重的不同，隨機(jī)分組，連續(xù)給藥7天，末次給藥后40min，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，后分離右頸總動(dòng)脈和左頸外靜脈，以50μg/ml肝素生理鹽水液充滿聚乙稀管，管中預(yù)先放入一段約4cm長(zhǎng)的一號(hào)手術(shù)絲線(每根絲線均于電子天平上稱重)，管兩端先后插入左頸靜脈和右頸總動(dòng)脈，開放動(dòng)脈夾，立即開始計(jì)時(shí)，使血流通15min，后中斷血流，取出絲線稱血栓濕重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以血栓濕重和血栓抑制率表示，結(jié)果見表13。統(tǒng)計(jì)學(xué)采用組間t-student檢驗(yàn)。
表13.活血止痛膠囊(新工藝)大鼠動(dòng)靜脈旁路血栓試驗(yàn)結(jié)果

注(1)血栓濕重＝(血栓+絲線重量)-絲線重量(2)血栓抑制率＝(對(duì)照組血栓重-給藥組血栓重)/對(duì)照組血栓重*100(3)**P＜0.01，與對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))(4)#P＜0.05，與原工藝組比較活血止痛膠囊(新工藝)對(duì)數(shù)劑量與血栓濕重的量效關(guān)系公式為Y＝-8.936X+48.246，r＝0.999。[其中Y為血栓濕重(mg)，X為對(duì)數(shù)劑量(mg/kg)，r為相關(guān)系數(shù)，對(duì)數(shù)給藥量與血栓重量的量效關(guān)系曲線見圖8]活血止痛膠囊(新工藝)對(duì)數(shù)劑量與血栓抑制率量效關(guān)系公式為Y＝27.741X-47.817，r＝0.999。[其中Y為血栓抑制率(％)，X為對(duì)數(shù)劑量(mg/kg)，r為相關(guān)系數(shù)，量效關(guān)系見圖9]試驗(yàn)結(jié)果表明活血止痛膠囊(新工藝)高、中、低劑量組的血栓濕重、血栓抑制率與對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，說(shuō)明活血止痛膠囊(新工藝)各劑量組均能明顯減輕血栓濕重。且隨著活血止痛膠囊(新工藝)給藥劑量的增加，血栓濕重減輕、血栓抑制率增大。給藥對(duì)數(shù)劑量與血栓濕重、血栓抑制率間呈良好的線性關(guān)系，表明量-效關(guān)系明顯。與活血止痛膠囊(原工藝)比較，同等給藥量下抗血栓作用更明顯(P＜0.05)，血栓抑止率更大。
4.試驗(yàn)總結(jié)試驗(yàn)結(jié)果表明，活血止痛膠囊(新工藝)具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗凝血和抑制血栓形成作用。小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)和小鼠熱水縮尾法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)證實(shí)具有鎮(zhèn)痛作用，并呈明顯的量-效關(guān)系；二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用試驗(yàn)、小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)和角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的抑制作用試驗(yàn)證實(shí)具有抗炎作用，增加毛細(xì)血管通透性作用，并呈量-效相關(guān)性；毛細(xì)管法測(cè)定小鼠凝血時(shí)間試驗(yàn)證實(shí)具有抗凝血作用，并呈明顯的量-效關(guān)系；大鼠動(dòng)靜脈旁路血栓形成試驗(yàn)證實(shí)具有抗血栓作用，并呈明顯的量-效關(guān)系。
活血止痛膠囊(新工藝)與活血止痛膠囊(原工藝)比較，其抗炎、抗血栓作用療效更好。表現(xiàn)為在二甲苯致炎作用試驗(yàn)、角叉菜膠致炎作用試驗(yàn)、動(dòng)靜脈旁路法抗血栓作用試驗(yàn)中，新工藝膠囊的療效明顯好于原工藝膠囊。另外，在熱水縮尾法鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)、對(duì)凝血時(shí)間的影響試驗(yàn)中，雖然新工藝膠囊與原工藝膠囊比較沒有明顯區(qū)別，但前者的平均療效結(jié)果好于后者。
本發(fā)明的毒理試驗(yàn)用SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，共用大鼠120只，雌雄各半。設(shè)活血止痛膠囊(新工藝)高、中、低劑量組及對(duì)照組，每組動(dòng)物數(shù)為30只(雌雄各半)。給藥劑量為5.0、2.5、1.25g/kg(相當(dāng)于生藥量為5.9、2.95、1.48g/kg，相當(dāng)于人用劑量的118倍，59倍，29.5倍)。采用灌胃給藥(i.g.)方法，每天給藥一次，每周給藥6天，停藥1天，連續(xù)給藥92天(三個(gè)月)。試驗(yàn)期間記錄動(dòng)物體重、食耗及一般表現(xiàn)等。連續(xù)給藥3個(gè)月后每組分別處死動(dòng)物20只(雌雄各半)，停藥4周后(恢復(fù)期)每組分別處死動(dòng)物10只(雌雄各半)，記錄及檢查處死動(dòng)物的血液學(xué)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)(生化十項(xiàng))、凝血時(shí)間、主要臟器重量、系統(tǒng)尸檢、器官組織切片。另外，因該藥具有活血化瘀作用，可明顯延長(zhǎng)凝血時(shí)間，故在給藥后三個(gè)月用試劑盒進(jìn)行了“凝血酶時(shí)間”測(cè)定，以檢驗(yàn)纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白的能力，驗(yàn)證對(duì)纖維蛋白原濃度、活性、是否引起異常的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明活血止痛膠囊(新工藝)長(zhǎng)期給藥對(duì)大鼠一般活動(dòng)、糞便、進(jìn)食情況與對(duì)照組相比無(wú)差異，其體重增長(zhǎng)與相應(yīng)對(duì)照組相比也無(wú)明顯差異(P＞0.05，t檢驗(yàn))。
活血止痛膠囊(新工藝)長(zhǎng)期給藥對(duì)紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白沒有明顯影響，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、平均紅細(xì)胞體積、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度這些指標(biāo)，給藥后三個(gè)月及恢復(fù)期三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
活血止痛膠囊(新工藝)連續(xù)給藥對(duì)大鼠血小板無(wú)明顯影響，給藥后三個(gè)月及恢復(fù)期三個(gè)劑量組均未見明顯變化(P＞0.05，與對(duì)照組比較)?；钛雇茨z囊(新工藝)三個(gè)月給藥對(duì)凝血時(shí)間產(chǎn)生明顯影響，三個(gè)劑量組凝血時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P＜0.01，與對(duì)照組比較)，且凝血時(shí)間呈明顯的劑量相關(guān)性。但恢復(fù)期三個(gè)劑量組凝血時(shí)間均未見明顯延長(zhǎng)(P＞0.05，與對(duì)照組比較)，表明給藥引起的凝血時(shí)間延長(zhǎng)停藥后可自然恢復(fù)。給藥后三個(gè)月“凝血酶時(shí)間”測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果顯示，三個(gè)劑量組試驗(yàn)結(jié)果均未與對(duì)照組有明顯差異(P＞0.05)，表明對(duì)纖維蛋白原的濃度、活性及可能引起的異常等均無(wú)明顯影響。
活血止痛膠囊(新工藝)長(zhǎng)期給藥對(duì)白細(xì)胞總數(shù)，嗜中性、嗜堿性、嗜酸性白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞數(shù)據(jù)及比例均沒有明顯影響。給藥后三個(gè)月及恢復(fù)期均未見以上指標(biāo)有顯著變化(P＞0.05，與對(duì)照組比較)。
活血止痛膠囊(新工藝)高、中劑量組給藥后三個(gè)月可使ALT明顯下降(P＜0.01，與對(duì)照組比較)，但這一指標(biāo)的下降無(wú)臨床意義；活血止痛膠囊(新工藝)對(duì)其它血液生化指標(biāo)(包括血液鈉、鉀、氯濃度)沒有明顯影響(P＞0.05，與對(duì)照組比較)，給藥期及恢復(fù)期均未見明顯影響。
活血止痛膠囊(新工藝)三個(gè)劑量組給藥后三個(gè)月及恢復(fù)期各臟器(心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、胸腺、睪丸及附睪、子宮及卵巢)的臟器指數(shù)均未發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象。
系統(tǒng)尸解表明，在試驗(yàn)期及恢復(fù)期處死的大鼠經(jīng)肉眼仔細(xì)觀察檢查，活血止痛膠囊(新工藝)三個(gè)劑量組(高、中、低劑量)與相應(yīng)時(shí)期的對(duì)照組相比各種臟器均未發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象。
對(duì)活血止痛膠囊(新工藝)高劑量組及對(duì)照組大鼠試驗(yàn)中期、試驗(yàn)?zāi)┢诩盎謴?fù)期大鼠的心、肝、脾、肺、腎、胸腺、腎上腺、胃、腸、腦、子宮、睪丸、胰腺、骨、淋巴結(jié)、甲狀腺等20種臟器的組織切片病理學(xué)檢查，并以正常對(duì)照組大鼠內(nèi)臟為基本標(biāo)準(zhǔn)與對(duì)照組比較，均未發(fā)現(xiàn)明顯毒性所致的組織學(xué)病變。
試驗(yàn)結(jié)果表明活血止痛膠囊(新工藝)長(zhǎng)期給藥對(duì)大鼠無(wú)明顯或嚴(yán)重的毒副作用，但對(duì)凝血時(shí)間有明顯影響，可計(jì)量相關(guān)性地延長(zhǎng)凝血時(shí)間。這一凝血時(shí)間的延長(zhǎng)不是改變血液纖維蛋白原濃度、活性及異常所致。


圖1活血止痛膠囊(新工藝)小鼠扭體反應(yīng)量效關(guān)系。
圖2活血止痛膠囊(新工藝)小鼠縮尾反應(yīng)潛伏期量效關(guān)系。
圖3活血止痛膠囊(新工藝)小鼠縮尾反應(yīng)痛閾提高率量效關(guān)系。
圖4活血止痛膠囊(新工藝)抑制二甲苯致炎作用試驗(yàn)結(jié)果。
圖5活血止痛膠囊(新工藝)對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響試驗(yàn)結(jié)果。
圖6活血止痛膠囊(新工藝)給藥劑量與炎性滲出洗脫液OD值量效關(guān)系。
圖7活血止痛膠囊(新工藝)給藥量與凝血時(shí)間量效關(guān)系。
圖8活血止痛膠囊(新工藝)給藥對(duì)數(shù)劑量與血栓濕重量效關(guān)系。
圖9活血止痛膠囊(新工藝)給藥對(duì)數(shù)劑量與血栓抑制率量效關(guān)系。
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。
實(shí)施例1取當(dāng)歸40份、三七8份、乳香(制)8份、冰片2份，土鱉蟲20份、自然銅(煅)12份，采用以下步驟制備(一)粉碎將當(dāng)歸、乳香粉碎成60目的細(xì)粉，備用。三七經(jīng)60Co輻照藥材滅菌后，粉碎成80目的細(xì)粉，然后將細(xì)粉超微粉碎成粒徑10μm的超細(xì)粉備用。
(二)CO2超臨界萃取取當(dāng)歸與乳香細(xì)粉于萃取釜中，加熱萃取釜和解析釜，送入一定流速的CO2氣，調(diào)節(jié)各釜壓力后開始循環(huán)萃取，其中萃取釜溫度為60℃，壓力為36Mpa，CO2流速為20L/h，萃取時(shí)間為0.5小時(shí)，收集當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油。
(三)揮發(fā)油包合取當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油重量6倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量2.5倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用油量的10％的無(wú)水乙醇溶解的當(dāng)歸、乳香超臨界萃取的揮發(fā)油，碾磨40分鐘，傾出，冷藏靜置12小時(shí)，于40℃真空干燥，即得揮發(fā)油包合物。
(四)冰片包合取冰片重量4倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量1倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用適量乙醇溶解的冰片，碾磨30分鐘，傾出，冷藏靜置12小時(shí)，于40℃真空干燥，即得冰片包合物。
(五)醇提取當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的藥渣，加藥渣重量10倍量的70％乙醇攪拌回流提取3次，每次1小時(shí)，回流液靜置12小時(shí)，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.20左右(60℃)的清膏，即得清膏I。
(六)水提取土鱉蟲、煅自然銅粉，將自然銅粉用布袋包裹，加土鱉蟲與自然銅粉重量4倍量的水提取1次，每次1.5小時(shí)，合并水提液，靜置，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15左右(60℃)的清膏，即得清膏II。
(七)清膏混合干燥粉碎將清膏I和清膏II混合均勻，加入處方比例的三七超細(xì)粉，真空干燥(40℃)至干膏，粉碎成100目的細(xì)粉備用。
(八)混合干燥制粒將干膏細(xì)粉、揮發(fā)油包合物及適量糊精混合，以90％乙醇為黏合劑制成軟材，20目不銹鋼篩制粒，60℃干燥，整粒，加入冰片包合物，混勻，即得。
(九)灌裝將所得顆粒，進(jìn)行灌裝。
(十)分裝將所得膠囊用鋁塑鋁封裝，裝盒，即得。
實(shí)施例2取當(dāng)歸40份、三七8份、乳香(制)8份、冰片2份，土鱉蟲20份、自然銅(煅)12份，采用以下步驟制備(一)粉碎將當(dāng)歸、乳香粉碎成40目的細(xì)粉，備用。三七經(jīng)60Co輻照藥材滅菌后，粉碎成60目的細(xì)粉，然后將細(xì)粉超微粉碎成粒徑10μm的超細(xì)粉備用。
(二)CO2超臨界萃取取當(dāng)歸、乳香細(xì)粉于萃取釜中，加熱萃取釜和解析釜，達(dá)到預(yù)定溫度，送入一定流速的CO2氣，調(diào)節(jié)各釜壓力后開始循環(huán)萃取，其中萃取釜溫度為40℃，壓力為24Mpa，CO2流速為10L/h，萃取時(shí)間為1.5小時(shí)，收集當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油。
(三)揮發(fā)油包合取當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油重量5倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量2倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用油量的10％的無(wú)水乙醇溶解的當(dāng)歸、乳香超臨界萃取的揮發(fā)油，碾磨20分鐘，傾出，冷藏靜置24小時(shí)，于40℃真空干燥，即得揮發(fā)油包合物。
(四)冰片包合取冰片重量6倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量2倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用適量乙醇溶解的冰片，碾磨35分鐘，傾出，冷藏靜置48小時(shí)，于40℃真空干燥，即得冰片包合物。
(五)醇提取當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的藥渣，加藥渣重量的6倍量50％乙醇攪拌回流提取1次，每次2小時(shí)，回流液靜置24小時(shí)以上，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.15左右(60℃)的清膏，即得清膏I。
(六)水提取土鱉蟲、煅自然銅粉，將自然銅粉用布袋包裹，加土鱉蟲和自然銅粉重量5倍量的水提取2次，每次1小時(shí)，合并水提液，靜置，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.25左右(60℃)的清膏，即得清膏II。
(七)清膏混合干燥粉碎將清膏I和清膏II混合均勻，加入處方比例的三七超細(xì)粉，真空干燥(50℃)至干膏，粉碎成80目的細(xì)粉備用。
(八)混合干燥制粒將干膏細(xì)粉、揮發(fā)油包合物及適量糊精混合，以70％乙醇為黏合劑制成軟材，16目不銹鋼篩制粒，60℃干燥，整粒，加入冰片包合物，混勻，即得。
(九)灌裝將所得顆粒，進(jìn)行灌裝。
(十)分裝將所得膠囊用鋁塑鋁封裝，裝盒，即得。
實(shí)施例3取當(dāng)歸40份、三七8份、乳香(制)8份、冰片2份，土鱉蟲20份、自然銅(煅)12份，采用以下步驟制備(一)粉碎將當(dāng)歸、乳香粉碎成80目的細(xì)粉，備用。三七經(jīng)60Co輻照藥材滅菌后，粉碎成65目的細(xì)粉，然后將細(xì)粉超微粉碎成粒徑20μm的超細(xì)粉備用。
(二)CO2超臨界萃取取當(dāng)歸、乳香細(xì)粉于萃取釜中，加熱萃取釜和解析釜，達(dá)到預(yù)定溫度，送入一定流速的CO2氣，調(diào)節(jié)各釜壓力后開始循環(huán)萃取，其中萃取釜溫度為50℃，壓力為30Mpa，CO2流速為30L/h，萃取時(shí)間為1小時(shí)，收集當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油。
(三)揮發(fā)油包合取當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油重量4倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量2.5倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用油量的10％的無(wú)水乙醇溶解的當(dāng)歸、乳香超臨界萃取的揮發(fā)油，碾磨40分鐘，傾出，冷藏靜置36小時(shí)，于40℃真空干燥，即得揮發(fā)油包合物。
(四)冰片包合取冰片重量5倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量3倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用適量乙醇溶解的冰片，碾磨40分鐘，傾出，冷藏靜置24小時(shí)，于40℃真空干燥，即得冰片包合物。
(五)醇提取當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的藥渣，加藥渣重量的10倍量70％乙醇攪拌回流提取3次，每次1小時(shí)，回流液靜置36小時(shí)，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.20左右(60℃)的清膏，即得清膏I。
(六)水提取土鱉蟲、煅自然銅粉，將自然銅粉用布袋包裹，加土鱉蟲和自然銅粉重量8倍量的水提取3次，每次1.5小時(shí)，合并水提液，靜置，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20左右(60℃)的清膏，即得清膏II。
(七)清膏混合干燥粉碎將清膏I和清膏II混合均勻，加入處方比例的三七超細(xì)粉，真空干燥(60℃)至干膏，粉碎成100目的細(xì)粉備用。
(八)混合干燥制粒將干膏細(xì)粉、揮發(fā)油包合物及適量糊精混合，以90％乙醇為黏合劑制成軟材，18目不銹鋼篩制粒，40℃干燥，整粒，加入冰片包合物，混勻，即得。
(九)灌裝將所得顆粒，進(jìn)行灌裝。
(十)分裝將所得膠囊用鋁塑鋁封裝，裝盒，即得。
實(shí)施例4取當(dāng)歸40份、三七8份、乳香(制)8份、冰片2份，土鱉蟲20份、自然銅(煅)12份，采用以下步驟制備(一)粉碎將當(dāng)歸、乳香粉碎成60目的細(xì)粉，備用。三七經(jīng)60Co輻照藥材滅菌后，粉碎成60目的細(xì)粉，然后將細(xì)粉超微粉碎成粒徑30μm的超細(xì)粉備用。
(二)CO2超臨界萃取取當(dāng)歸、乳香細(xì)粉于萃取釜中，加熱萃取釜和解析釜，達(dá)到預(yù)定溫度，送入一定流速的CO2氣，調(diào)節(jié)各釜壓力后開始循環(huán)萃取，其中萃取釜溫度為60℃，壓力為36Mpa，CO2流速為20L/h，萃取時(shí)間為1小時(shí)，收集當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油。
(三)揮發(fā)油包合取當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油重量8倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量3倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用油量的30％的無(wú)水乙醇溶解的當(dāng)歸、乳香超臨界萃取的揮發(fā)油，碾磨30分鐘，傾出，冷藏靜置48小時(shí)，于40℃真空干燥，即得揮發(fā)油包合物。
(四)冰片包合取冰片重量5.5倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量3倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用適量乙醇溶解的冰片，碾磨45分鐘，傾出，冷藏靜置36小時(shí)，于40℃真空干燥，即得冰片包合物。
(五)醇提取當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的藥渣，加藥渣重量的8倍量60％乙醇攪拌回流提取2次，每次1.5小時(shí)，回流液靜置48小時(shí)，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.25左右(60℃)的清膏，即得清膏I。
(六)水提取土鱉蟲、煅自然銅粉，將自然銅粉用布袋包裹，加土鱉蟲和自然銅粉重量6倍量的水提取2次，每次2小時(shí)，合并水提液，靜置，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.25左右(60℃)的清膏，即得清膏II。
(七)清膏混合干燥粉碎將清膏I和清膏II混合均勻，加入處方比例的三七超細(xì)粉，真空干燥(70℃)至干膏，粉碎成120目的細(xì)粉備用。
(八)混合干燥制粒將干膏細(xì)粉、揮發(fā)油包合物及適量糊精混合，以80％乙醇為黏合劑制成軟材，20目不銹鋼篩制粒，80℃干燥，整粒，加入冰片包合物，混勻，即得。
(九)灌裝將所得顆粒，進(jìn)行灌裝。
(十)分裝將所得膠囊用鋁塑鋁封裝，裝盒，即得。
實(shí)施例5取當(dāng)歸40份、三七8份、乳香(制)8份、冰片2份，土鱉蟲20份、自然銅(煅)12份，采用以下步驟制備(一)粉碎將當(dāng)歸、乳香粉碎成60目的細(xì)粉，備用。三七經(jīng)60Co輻照藥材滅菌后，粉碎成80目的細(xì)粉，然后將細(xì)粉超微粉碎成粒徑20μm的超細(xì)粉備用。
(二)CO2超臨界萃取取當(dāng)歸、乳香細(xì)粉于萃取釜中，加熱萃取釜和解析釜，達(dá)到預(yù)定溫度，送入一定流速的CO2氣，調(diào)節(jié)各釜壓力后開始循環(huán)萃取，其中萃取釜溫度為40℃，壓力為32Mpa，CO2流速為30L/h，萃取時(shí)間為1.5小時(shí)，收集當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油。
(三)揮發(fā)油包合取當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的揮發(fā)油重量7倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量2.5倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用油量的10％的無(wú)水乙醇溶解的當(dāng)歸、乳香超臨界萃取的揮發(fā)油，碾磨40分鐘，傾出，冷藏靜置36小時(shí)，于40℃真空干燥，即得揮發(fā)油包合物。
(四)冰片包合取冰片重量6倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量2倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用適量乙醇溶解的冰片，碾磨50分鐘，傾出，冷藏靜置12小時(shí)，于40℃真空干燥，即得冰片包合物。
(五)醇提取當(dāng)歸、乳香超臨界萃取的藥渣，加10倍量70％乙醇攪拌回流提取3次，每次2小時(shí)，回流液靜置24小時(shí)，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.20左右(60℃)的清膏，即得清膏I。
(六)水提取土鱉蟲、煅自然銅粉，將自然銅粉用布袋包裹，加土鱉蟲和自然銅粉重量8倍量的水提取3次，每次1.5小時(shí)，合并水提液，靜置，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20左右(60℃)的清膏，即得清膏II。
(七)清膏混合干燥粉碎將清膏I和清膏II混合均勻，加入處方比例的三七超細(xì)粉，真空干燥(80℃)至干膏，粉碎成100目的細(xì)粉備用。
(八)混合干燥制粒將干膏細(xì)粉、揮發(fā)油包合物及適量糊精混合，以90％乙醇為黏合劑制成軟材，16目不銹鋼篩制粒，80℃干燥，整粒，加入冰片包合物，混勻，即得。
(九)灌裝將所得顆粒，進(jìn)行灌裝。
(十)分裝將所得膠囊用鋁塑鋁封裝，裝盒，即得。
權(quán)利要求
1.一種活血止痛膠囊的制備工藝，選用原料藥的重量份為當(dāng)歸40份、三七8份、乳香(制)8份、冰片2份，土鱉蟲20份、自然銅(煅)12份，其特征在于該工藝包括以下步驟a、按重量份配比稱取原料藥當(dāng)歸、三七、乳香(制)、冰片、土鱉蟲、自然銅(煅)，備用；b、粉碎將當(dāng)歸與乳香(制)按處方比例混合均勻，粉碎成顆粒，備用；三七粉碎成粒徑10-30μm的三七超細(xì)粉備用；c、CO2超臨界萃取取當(dāng)歸與乳香(制)混合顆粒于萃取釜中，CO2超臨界萃取，其中壓力為24-36Mpa，萃取釜溫度為40-60℃，CO2流速為10～30L/h，萃取時(shí)間為0.5-1.5小時(shí)，收集當(dāng)歸與乳香(制)超臨界萃取的揮發(fā)油，備用；d、揮發(fā)油包合取當(dāng)歸與乳香(制)超臨界萃取的揮發(fā)油重量4-8倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量2-3倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加當(dāng)歸與乳香(制)超臨界萃取的揮發(fā)油，碾磨包合20-40分鐘，傾出，冷藏靜置，濾過，真空干燥，即得揮發(fā)油包合物；e、冰片包合取冰片重量4-6倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精量1-3倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加用適量乙醇溶解的冰片，碾磨包合30-50分鐘，傾出，冷藏靜置，濾過，真空干燥，即得冰片包合物；f、醇提當(dāng)歸與乳香(制)超臨界萃取的藥渣用藥渣重量6-10倍量的濃度為50-70％的乙醇攪拌回流提取1-3次，每次1-2小時(shí)，回流液靜置，吸取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至60℃相對(duì)密度為1.15-1.25的清膏，得清膏I，備用；g、水提自然銅(煅)粉用布袋包裹，加入土鱉蟲，用自然銅(煅)粉與土鱉蟲總重量4-8倍量的水提取1-3次，每次1-2小時(shí)，合并水提液，靜置，取上清液，濾過，濾液減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.15-1.25的清膏，得清膏II，備用；h、混合、干燥、粉碎將清膏I和清膏II混合均勻，加入三七超細(xì)粉，真空干燥至干膏，粉碎成80-120目的細(xì)粉備用；I、制粒將干膏細(xì)粉、揮發(fā)油包合物及適量糊精混合，以70-90％乙醇為黏合劑制成軟材，16-20目篩制粒，40-80℃干燥，整粒，加入冰片包合物，混勻，裝入膠囊即可。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種活血止痛膠囊的制備工藝。該工藝將當(dāng)歸與乳香采用超臨界萃取，萃取的揮發(fā)油采用β－環(huán)糊精制備成揮發(fā)油包合物，與冰片的β－環(huán)糊精包合物、當(dāng)歸與乳香超臨界萃取的藥渣的醇提物、土鱉蟲和自然銅粉的水提物、三七超微粉混合制粒，灌裝膠囊。采用該工藝制備的活血止痛膠囊療效好，副作用少。
文檔編號(hào)A61K31/045GK1939378SQ200610096420
公開日2007年4月4日 申請(qǐng)日期2006年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月25日
發(fā)明者濮存海, 王波, 關(guān)志宇, 趙開軍, 王軍花 申請(qǐng)人:南京中山制藥有限公司