專利名稱：姜黃色素在藥物中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是姜黃色素在藥物技術(shù)領(lǐng)域中的新用途，特別是姜黃色素在用于制備急性病毒性肝炎或中毒性肝炎藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
目前，國內(nèi)外對姜黃(Curcuma longa L)提取的姜黃色素，作為食品添加劑是世界公認(rèn)的食用色素、研究甚多。且世界衛(wèi)生組織(WHO)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)、歐洲共同體、美國、加拿大等國都許可使用。姜黃素作為藥用研究的報(bào)導(dǎo)甚多，主要涉及降脂、CN143518A、利膽、抗癌、防癌、抗氧化、抗炎及抗菌等作用，但是關(guān)于姜黃提取物，包含姜黃素(curcumln)作為抗病毒性肝炎的藥理、藥效研究和臨床應(yīng)用研究則至今未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是拓展姜黃色素的用途，即將其用于制備急性病毒性肝炎或中毒性肝炎的藥物中。
本發(fā)明提供的姜黃色素在用于制備急性病毒性肝炎或中毒性肝炎藥物中的新用途，其中所述的姜黃色素是指從植物姜黃根莖中提取分離出的姜黃素單體化合物；或70％以上姜黃素單體化合物，與余量為脫甲氧基姜黃素、雙脫甲氧基姜黃素中的一種或兩種單體化合物共同構(gòu)成的一類黃色素總提取物，其結(jié)構(gòu)式分別為 姜黃素 脫甲氧基姜黃素
雙脫甲氧基姜黃素本發(fā)明姜黃色素的提取分離方法，是通過、確認(rèn)植物姜黃(curcuma Longa L)品種，經(jīng)粉碎→有機(jī)溶劑提取→粗提物→溶劑精制→純品(姜黃色素總提取物，含姜黃素在70％以上)用含有姜黃素70％以上的總提取物(以下簡稱姜黃素)制成口服制劑。如膠囊每粒膠囊含姜黃色素總提取50mg用于治療急性病毒性(黃疽及非黃疽性)肝炎或中毒性肝炎的用藥。
本發(fā)明為姜黃色素提供了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域，經(jīng)過多年的基礎(chǔ)藥理、藥效學(xué)研究，對姜黃素抗病毒性肝炎的作用，做了深入的研究，其目的是用中國傳統(tǒng)的中藥姜黃色素總提取物，開發(fā)一種用于治療病毒性肝炎的藥物，尤其是對急性病毒性肝炎、中毒性肝炎的有效藥物。
具體實(shí)施方式為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用姜黃素進(jìn)行的藥理試驗(yàn)及藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
1、姜黃素在鴨體內(nèi)鴨肝炎病毒急性感染的治療效果試驗(yàn)該項(xiàng)試驗(yàn)由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所完成。
本實(shí)驗(yàn)對姜黃素在鴨肝炎病毒感染鴨體內(nèi)進(jìn)行治療試驗(yàn)驗(yàn)證效果。實(shí)驗(yàn)采用一日齡北京鴨靜脈注射鴨肝炎病毒，7天后開始給鴨口服姜黃素，1天2次，給藥10天(Bid×10)，觀察藥物對鴨的毒性和鴨血清鴨肝炎病毒DNACDHBV-DNA)的影響。實(shí)驗(yàn)表明，62.5mg/Kg，125mg/Kg，250mg/Kg組口服，1天2次10天，無毒性。125mg/Kg，250mg/Kg組均能降低DHBV感染鴨血清DHBV-DVA水平，與病毒對照組作統(tǒng)計(jì)分析比較，給藥第5天(T5)和第10天(T10)，這兩個(gè)劑量組三批實(shí)驗(yàn)重復(fù)至少有兩批有顯著(P＜0.05)或非常顯著(P＜0.0)的差異。同時(shí)在停藥第3天(P3)也有顯著(P＜0.05)或非常顯著(P＜0.01)的抑制效果。
結(jié)果還表明，姜黃素125mg/Kg，250mg/Kg，劑量對鴨血清中DHBV-DNA有明確的抑制作用，且有量效關(guān)系。
表1姜黃素在鴨體內(nèi)對DHBV-DNA OD值的抑制作用
給藥后不同時(shí)間(T5、T10、P3)OD值與同組給藥前(T0)OD值比較(配對t檢驗(yàn))*P＜0.05，**P＜0.01。
表2姜黃素治療組與病毒對照組在鴨體內(nèi)對DHBV-DNA抑制率的比較
給藥后不同時(shí)間DHBV-DNA抑制率分別與病毒對照組相同時(shí)間DHBV-DNA抑制率比較(成組t檢驗(yàn))，*P＜0.05，**P＜0.01。
2、姜黃素對乙肝病毒抗原產(chǎn)生的抑制作用方法Hep G2T1，細(xì)胞的生長條件，培養(yǎng)基為DMEM(Glbco)含10％胎牛血清(Glbco)，G-418(400ug/ml)青鏈毒素各100μg/ml，5％CO2，37℃條件下培養(yǎng)，姜黃素則溶于二甲基亞砜中，使用時(shí)可稀釋在細(xì)胞生長液中，將細(xì)胞接種于48孔培養(yǎng)板3天后，換不同濃度含姜黃素的生長液，繼續(xù)培養(yǎng)3天，然后取出培養(yǎng)上清液置-20℃保存，重復(fù)實(shí)驗(yàn)后，用ELISA法檢測HBV抗原，檢測HBsAg和HBeAg的試驗(yàn)盒由華美生物工程公司提供測定結(jié)果見表3。
表3姜黃素對HBsAg及HBeAg產(chǎn)生的抑制作用(％)
結(jié)果證實(shí)姜黃素在10μg/ml時(shí)對HepG2T1細(xì)胞，不產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，而對HBsAg和HBeAg的抑制率可分別達(dá)66.1％和20％。
3、姜黃素對HBV-DNA聚合酶活性的抑制作用采用的方法是用HBV-DNAP陽性血清+抗HSB→離心沉淀HBV顆粒→加開殼劑使HBV-DNPA暴露→加姜黃素37℃30分鐘→加酶作用底物→測定HBV-DNAP活性，結(jié)果見表4。
表4姜黃素對HBV-DNAP活性的抑制作用
結(jié)果顯示姜黃素抑HBV抗原的表達(dá)可能與其有抑制HBV-DNAP的活性作用相關(guān)。
4、姜黃素的降酶退黃作用試驗(yàn)。
(1)姜黃素對D-氨基半乳糖胺所致小鼠肝損傷保護(hù)作用。
姜黃素口服給藥3天，劑量20，100mg/Kg，對D-氨基半乳糖胺(800mg/Kg，ip)所致小鼠肝損傷的SGPT升高有一定的降低作用。(見表5)
表5姜黃素對小鼠Ga/N所致肝損傷的保護(hù)作用
(2)姜黃素對異硫氰酸(APIT)所致大鼠肝損傷的保護(hù)作用。
姜黃素口服藥4天，劑量100、200mg/Kg，可使APIT(po，100mg/Kg)所致的大鼠肝損傷有明顯的保護(hù)作用，可明顯降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶，血清總膽紅質(zhì)和肝重系數(shù)。結(jié)果見表6。
表6姜黃素對大鼠實(shí)驗(yàn)性黃疸模型的作用
*與對照組比較P＜0.015、姜黃素的利膽作用試驗(yàn)方法，姜黃素對小鼠口服給藥7次，劑量250，500mg/Kg，或?qū)Υ笫髥未问改c給藥，劑量100，250mg/Kg，顯示有較好的利膽作用，如果見表7、8。
表7姜黃素對小鼠的利膽作用試驗(yàn)
表8姜黃素對大鼠的利膽作用試驗(yàn)
*與給藥前膽汁分泌量比較P＜0.05，**P＜0.01括弧內(nèi)數(shù)字為與給藥前比較膽汁分泌量增加的％比。
6、姜黃素的毒性試驗(yàn)(A)急性毒性試驗(yàn)小鼠單次口服姜黃素10g/Kg，未見出現(xiàn)任何中毒癥狀。故推測其LD50應(yīng)＞10g/Kg。
(B)長期毒性試驗(yàn)大鼠口服姜黃素500mg/Kg，共12周，狗口服姜黃素200mg/Kg，14周，對動(dòng)物行為，毛色、食欲、血色素、紅、白細(xì)胞、血小板數(shù)、白細(xì)胞分類、凝血時(shí)間、SGPT、SGOT、BUN、Cr、AKP、BLS、Ch、TP、A、SB、尿液檢查(尿糖、尿蛋白、鏡檢)ECK、器官系數(shù)，等指標(biāo)的檢測，均未發(fā)現(xiàn)異常，僅雄性大鼠體重增長稍有影響，其余未見變化。
權(quán)利要求
1.姜黃色素在用于制備急性病毒性肝炎或中毒性肝炎藥物中的新用途。
2.如根據(jù)權(quán)利要求1所述的新用途，其特征是所述的姜黃色素是指從植物姜黃根莖中提取分離出的姜黃素單體化合物；或70％以上姜黃素單體化合物，與余量為脫甲氧基姜黃素、雙脫甲氧基姜黃素中的一種或兩種單體化合物共同構(gòu)成的一類姜黃色素總提取物，其結(jié)構(gòu)式分別為 姜黃素 脫甲氧基姜黃素 雙脫甲氧基姜黃素。
3.如權(quán)利要求1或2所述的新用途，其特征是治療急性病毒性肝炎或中毒性肝炎藥物為口服劑。
全文摘要
姜黃色素在藥物中的新用途，特別是用于制備急性病毒性肝炎或中毒性肝炎的藥物中。本發(fā)明的目的是拓展姜黃色素的用途，本發(fā)明所述的姜黃色素是指從植物姜黃根莖中提取分離出的姜黃素單體化合物；或70％以上姜黃素單體化合物，與余量為脫甲氧基姜黃素、雙脫甲氧基姜黃素中的一種或兩種單體化合物共同構(gòu)成的一類姜黃色素總提取物制成口服制劑，如膠囊用于治療急性病毒性(黃疽及非黃疽性)肝炎或中毒性肝炎的用藥。本發(fā)明為姜黃色素提供了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域，經(jīng)過多年的基礎(chǔ)藥理、藥效學(xué)研究，對姜黃素抗病毒性肝炎的作用，做了深入的研究，其目的是用中國傳統(tǒng)的中藥姜黃色素總提取物，開發(fā)一種用于治療急性病毒性肝炎、中毒性肝炎的有效藥物。
文檔編號A61P31/20GK101028256SQ20061001322
公開日2007年9月5日 申請日期2006年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月28日
發(fā)明者王士賢, 李維廉, 楊企錚, 胡人杰, 許兢兢, 賈淑杰, 王書新, 郝志輝 申請人:天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所, 天津泰達(dá)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司