專利名稱：用于口腔粘膜給藥的液體過敏反應(yīng)疫苗制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及口腔粘膜給藥的過敏反應(yīng)疫苗制劑。
背景技術(shù)：
過敏反應(yīng)是采用西方生活方式國家的主要健康問題。另外，過敏性疾病的流行在這些國家日益增加。盡管一般來說，過敏反應(yīng)不被認(rèn)為是危脅生命的疾病，但每年哮喘會導(dǎo)致大量的死亡。青少年中大約30％的異常的流行，導(dǎo)致了生活質(zhì)量，工作日和金錢的顯著降低，并且在西方世界構(gòu)成了主要類型的健康問題。
過敏反應(yīng)是復(fù)雜的疾病。由多種因素造成了過敏事件，其中包括由若干種基因之間尚未充分了解的相互影響所決定的個體的易感性。另一個重要因素是接觸超過某種閾值的過敏原。在致敏過程中有若干環(huán)境因素可能是重要的，包括污染，兒童感染，寄生蟲感染，腸道微生物等。一旦個體被敏化，并且產(chǎn)生了過敏免疫反應(yīng)，只是少量過敏原的存在就能有效轉(zhuǎn)變?yōu)榘Y狀。
過敏性疾病的天然過程通常伴隨著在兩種水平上的加重。首先是癥狀的發(fā)展和疾病的嚴(yán)重性，以及疾病的發(fā)展，例如，從花粉熱轉(zhuǎn)變成哮喘。其次，入侵的過敏原的傳播最常見的是導(dǎo)致過敏性多種反應(yīng)。慢性炎癥導(dǎo)致粘膜防御機制的總體削弱，導(dǎo)致了非特異性刺激，并最終破壞所述粘膜組織。嬰兒可能主要因為食品，即乳制品而過敏，導(dǎo)致濕疹或腸胃失調(diào)；不過，最常見的是它們自發(fā)地出現(xiàn)上述癥狀。這些嬰兒在它們的生活中隨后會發(fā)生吸入過敏反應(yīng)的危險。
最重要的過敏原來源是我們吸入的空氣中特定大小的最常見的顆粒。所述來源顯然是普遍的，并且包括青草花粉和房屋塵螨糞便顆粒，它們造成了所有過敏反應(yīng)的大約50％。具有全球性重要性的還包括動物毛屑，即貓和狗毛屑，其他花粉，如艾屬植物花粉，以及微型真菌，如支鏈格孢屬。在區(qū)域基礎(chǔ)上，還有其他花粉起著支配作用，如北歐和中歐的樺樹花粉，美國東部和中部的豚草屬，以及日本的日本雪松花粉。昆蟲，即蜜蜂和黃蜂毒液，以及食品各自占所有過敏反應(yīng)的大約2％。
過敏反應(yīng)，即I型超敏反應(yīng)是由對外源非致病物質(zhì)的不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)引起的。過敏反應(yīng)的重要的臨床表現(xiàn)包括哮喘，花粉熱，濕疹，胃腸道失調(diào)。過敏反應(yīng)是在接觸入侵的過敏原時迅速發(fā)生的，并且在20分鐘之內(nèi)達到高峰。另外，過敏反應(yīng)是特異性的，即特定的個體對特定的過敏原敏感，而所述個體不一定對已知會導(dǎo)致過敏性疾病的其他物質(zhì)產(chǎn)生過敏反應(yīng)。過敏性的表型的特征是目標(biāo)器官的粘膜的顯著發(fā)炎，以及IgE類型的過敏原特異性抗體在循環(huán)系統(tǒng)中以及在肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞表面上的存在。
過敏攻擊是由外源過敏原與過敏原特異性IgE抗體起反應(yīng)引起的，此時所述抗體以高的親和力與肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞表面上的IgE特異性受體結(jié)合。所述肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞包括預(yù)成型的介體，即組胺，類胰蛋白酶，和其他物質(zhì)，它們是在兩種或兩種以上受體結(jié)合的IgE抗體交聯(lián)時釋放的。IgE抗體是通過一個過敏原分子的同時結(jié)合交聯(lián)的。因此，只有一個抗體結(jié)合表位的外源物質(zhì)不會引起過敏反應(yīng)。結(jié)合在肥大細(xì)胞表面上的IgE的受體的交聯(lián)還導(dǎo)致了負(fù)責(zé)將嗜酸性粒細(xì)胞，過敏原特異性T-細(xì)胞，和其他類型的細(xì)胞吸引到過敏反應(yīng)部位的信號傳導(dǎo)分子的釋放。所述細(xì)胞與過敏原，IgE和效應(yīng)細(xì)胞相互作用，導(dǎo)致在接觸過敏原之后12-24小時重新出現(xiàn)過敏癥狀(后期反應(yīng))。
過敏性疾病控制包括診斷和治療，包括預(yù)防性治療。過敏反應(yīng)的診斷涉及驗證過敏原特異性IgE和確定過敏原來源。在很多情況下，詳細(xì)的既往病歷就足以診斷過敏反應(yīng)，并且確定入侵的過敏原來源材料。不過，最常見的是，診斷是通過客觀測定，如皮膚單刺試驗，驗血，或誘發(fā)試驗支持的。
治療選項分為三種主要類型。第一種可能是避開過敏原或減少接觸。而避免過敏原是顯而易見的，例如，對于食物過敏原來說就是如此。也可能是困難的或昂貴的，例如對于房屋塵螨過敏原來說；或它也許是不可行的，如對于花粉過敏原來說。第二種和最廣泛使用的治療方法是開處典型的對癥藥物，如抗-組胺藥和類固醇藥。對癥藥物是安全的和有效的；不過它們不會改變有關(guān)疾病的天然病因，也不能控制疾病傳播。第三種治療方案是特異性過敏反應(yīng)疫苗接種，在大部分情況下，這樣做可以減輕或緩解由相關(guān)過敏原引起的過敏癥狀。
傳統(tǒng)的特異性過敏反應(yīng)疫苗接種是過敏性疾病的病因療法。它能干擾基礎(chǔ)免疫機制，導(dǎo)致患者免疫狀態(tài)的持久性改善。因此，特異性過敏反應(yīng)疫苗接種的保護作用延長到超過治療時間，與有對癥藥物治療相反。某些接受治療的患者被治愈了，另外，大部分患者經(jīng)歷了疾病嚴(yán)重程度和所經(jīng)歷的癥狀的緩解，或至少抑制了疾病的發(fā)展。因此，特定的過敏反應(yīng)疫苗接種具有預(yù)防作用，能降低干草熱發(fā)展成哮喘的風(fēng)險，并且降低了出現(xiàn)新的過敏反應(yīng)的風(fēng)險。
尚不充分了解支持成功的過敏反應(yīng)疫苗接種的免疫學(xué)機制。已知，特異性免疫反應(yīng)，如生產(chǎn)抗特定病原體的抗體是適應(yīng)性免疫反應(yīng)。這種反應(yīng)有別于先天性免疫反應(yīng)，先天性免疫反應(yīng)是針對病原體的非特異性反應(yīng)。過敏反應(yīng)疫苗局限于克服適應(yīng)性免疫反應(yīng)，它包括具有抗原特異性的細(xì)胞和分子，如T-細(xì)胞和產(chǎn)生抗體的B-細(xì)胞。如果沒有具有相應(yīng)特異性的T-細(xì)胞的幫助的話，B-細(xì)胞不能成熟為能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞。參與過敏性免疫反應(yīng)刺激的T-細(xì)胞主要是Th2型的。業(yè)已提出了建立Th1和Th2細(xì)胞之間的新的平衡對于特異性過敏反應(yīng)疫苗接種的免疫學(xué)機制來說是有利的和重要的。無論是否是通過Th2細(xì)胞減少所引起的，從Th2到Th1細(xì)胞的偏移，或Th1細(xì)胞的上調(diào)是有爭論的。最近，業(yè)已提出了調(diào)控T-細(xì)胞對過敏反應(yīng)疫苗接種的機制來說是重要的。根據(jù)這種模型調(diào)控T-細(xì)胞，即Th3或Tr1細(xì)胞，下調(diào)了具有相應(yīng)的抗原特異性的Th1和Th2細(xì)胞。盡管存在這些不確定性，一般認(rèn)為活性疫苗必須具備刺激過敏原特異性T-細(xì)胞，優(yōu)選TH1細(xì)胞的能力。
盡管具備優(yōu)點，特異的過敏反應(yīng)疫苗接種并沒有廣泛使用，這主要是由于兩個原因。一個原因是，與傳統(tǒng)疫苗接種方案相關(guān)的不方便性，該方案包括重復(fù)的疫苗接種，即在幾個月時間內(nèi)進行注射。另一個更重要的原因是，出現(xiàn)過敏副反應(yīng)的危險。針對感染物的普通疫苗接種是通過一次或幾次大劑量免疫接種有效進行的。不過，這種方法不能用于過敏反應(yīng)疫苗接種，因為業(yè)已發(fā)生了病理性免疫反應(yīng)。
因此，常規(guī)特異性過敏反應(yīng)疫苗接種是通過在較長時間內(nèi)多次皮下免疫接種進行的。這一過程可以分成兩個階段，加大劑量階段和維持階段。在加大劑量階段，從小的劑量開始，增加接種劑量，通常持續(xù)16周時間。當(dāng)達到推薦的維持劑量時，在維持階段采用該劑量。通常每六周注射一次。在每次注射之后，患者必須接受30分鐘的醫(yī)療看護，因為存在過敏性副反應(yīng)的危險，盡管極為罕見，但原則上這種副反應(yīng)可能威脅生命。另外，診所的裝備應(yīng)當(dāng)能支持急診處理。毫無疑問的是，基于不同服用途徑的疫苗可以消除或減少現(xiàn)有基于皮下注射疫苗所固有的過敏性副反應(yīng)，以及有利于更廣泛的使用，甚至能夠在家中進行自我疫苗接種。
改善特異性過敏反應(yīng)疫苗接種的嘗試業(yè)已進行了30年以上，并且包括各種各樣的方法。已有若干種方法通過改變IgE反應(yīng)性集中在過敏原本身。其他方法致力于給藥途徑。
通過口腔和舌下給藥使過敏原進入免疫系統(tǒng)，這是已知的給藥途徑。還可以通過將疫苗制劑放置在舌頭下面，并且使它在舌頭下面保持較短時間，例如，30-60秒進行給藥。
利用口腔粘膜途徑的常規(guī)過敏反應(yīng)疫苗包括多至每天服用過敏原溶液。比較而言，給予的治療性(積累的)維持劑量可以超過相當(dāng)?shù)钠は陆o藥劑量5-500倍。
通過皮下注射施用商業(yè)化過敏反應(yīng)疫苗的方法是已知的，所述疫苗包括過敏原和作為佐劑的氫氧化鋁。另外，業(yè)已提出了將含氧金屬鹽用在疫苗中，用于通過胃腸道粘膜給藥。在以下討論中，提供了含氧金屬鹽的特性，以及含氧金屬鹽如何在注射疫苗和通過胃腸道粘膜給藥的疫苗中發(fā)揮作用的各種假說。
含氧金屬鹽可以用多種物理化學(xué)參數(shù)來表征，如吸附，溶解度和溶出特性以等電點pI形式衡量的離子電荷(對于可解離的化合物來說所述物質(zhì)的凈電荷為零的pH)，解離常數(shù)，復(fù)合物配位，電子構(gòu)型，化合價，成鍵軌道和反鍵軌道，儲存特性，粘附性質(zhì)，表面特性，顆粒特性，和佐劑性。
據(jù)信生物活性物質(zhì)被吸附(或結(jié)合)在含氧金屬鹽上，并且這種吸附造成了疫苗的效力。有若干種因素可能對活性物質(zhì)和含氧金屬鹽之間的吸附重要或產(chǎn)生影響(例如，參見P.M.Callahan et al.，Pharmaceutical Research Vol.8，No.7，851-858(1991)，和Vaccine Design.The Subunit and Adjuvant Approach)。所述因素包括pH，吸附反應(yīng)進行的時間長度，混合條件，疫苗中各種成分的濃度，容器，溫度，保存，緩沖劑和賦形劑。還發(fā)現(xiàn)，活性物質(zhì)的吸附受金屬鹽的凈電荷/總電荷，以及活性物質(zhì)的電荷的影響，這兩者都是pH依賴性的。另一個被認(rèn)為重要的特征是含氧金屬鹽的溶解度。
所述含氧金屬鹽可能還具有存儲效應(yīng)，存儲效應(yīng)表示活性物質(zhì)會從疫苗中逐漸釋放。因此，所述活性物質(zhì)保持在含氧金屬鹽中，并且從它里面逐漸釋放。這被認(rèn)為具有多種優(yōu)點，例如，長時間刺激，有利的藥物釋放，和保護生物學(xué)相互作用物質(zhì)不受環(huán)境條件的破壞。還認(rèn)為含氧金屬鹽可能具備某些俘獲特性，因此保留被輸送的活性物質(zhì)。
含氧鹽的另一個特征是通過在微環(huán)境中維持活性物質(zhì)的理想pH，由此抑制酸降解來保護所述活性物質(zhì)，或者通過防止活性物質(zhì)免受酶促降解從而可以輸送所述物質(zhì)。
另外，某些含氧金屬鹽具有緩沖能力。這種能力可導(dǎo)致疫苗制劑內(nèi)的體內(nèi)微環(huán)境，它能保護活性物質(zhì)不接觸可降解的環(huán)境。例如，這在胃或腸道中可能是有利的，在胃和腸道中，分別存在酸和酶促降解的危險。
含氧金屬鹽的另一個特征是它們附著在粘膜上的能力，或它們能夠?qū)ξ改c蠕動產(chǎn)生的作用，例如，使運動趨緩。通過腸道的時間延長可能是有利的，因為增加了延長活性物質(zhì)與目標(biāo)組織(粘膜)相互作用時間的可能性，從而導(dǎo)致了活性物質(zhì)通過粘膜轉(zhuǎn)運的增加。
還認(rèn)為，可以將含氧金屬鹽設(shè)計成具有對特異性粘膜組織，例如GALT和派伊爾淋巴集結(jié)的特殊偏好，進一步增強活性物質(zhì)在相關(guān)的目標(biāo)部位(粘膜組織)的輸送。對于若干種含氧金屬鹽(例如，Al(OH)3，AIPO4，Ca3PO4)來說，粒度范圍為0.5-15μm。
WO 00/45847涉及粘膜給藥的包含過敏原和選自含氧金屬鹽的過敏反應(yīng)疫苗。所述例子披露了用于經(jīng)口腔和腹膜內(nèi)給藥，即通過胃腸道給藥的液體過敏反應(yīng)疫苗，所述疫苗包括氫氧化鋁和梯牧草提取物形式的過敏原。在該說明書的總論部分指出了含氧金屬鹽可以通過一種或多種因素加強免疫刺激作用，包括對抗過敏原蛋白在胃腸道環(huán)境中的降解作用的保護作用，延長在胃腸道中的駐留時間的粘膜-粘著性，儲存效應(yīng)，以及適合通過GALT或派伊爾淋巴集結(jié)吸收的粒度。
WO 04/047794披露了用于過敏反應(yīng)疫苗舌下給藥的固體快速分散劑型。
舌下給藥的一種商業(yè)過敏反應(yīng)疫苗包括溶解在50％甘油和50％水的液體混合物中的過敏原。
本發(fā)明的目的是提供用于口腔粘膜給藥，特別是舌下給藥的改進的液體過敏反應(yīng)疫苗。
發(fā)明概述通過本發(fā)明實現(xiàn)了這一目的，本發(fā)明涉及使用包括過敏原和選自含氧金屬鹽的佐劑的組合物生產(chǎn)通過口腔粘膜給藥在對象體內(nèi)預(yù)防或治療過敏反應(yīng)的液體制劑的用途。
業(yè)已令人吃驚地發(fā)現(xiàn)，對于口腔粘膜給藥來說，以液體形式配制并且包含含氧金屬鹽的疫苗是特別合適的。具體地講，所述疫苗制劑在激活免疫系統(tǒng)的能力方面具有驚人的改善作用。由于含氧金屬鹽的功能特性，所述改善特性是無法預(yù)測的，含氧金屬鹽被認(rèn)為決定了過敏反應(yīng)疫苗通過胃腸道粘膜給藥，以及注射疫苗的改善了的特性，與打算通過舌下給藥的過敏反應(yīng)疫苗無關(guān)，其中，所述疫苗與舌下粘膜接觸短的預(yù)定的時間。
采用本發(fā)明的另一個優(yōu)點是，含氧金屬鹽賦予了液體疫苗制劑凝膠樣結(jié)構(gòu)，從而使它更容易保持在口腔中，特別是保持在舌頭下面需要的時間，因此，它有利于治療方案的適應(yīng)性和正確的用藥量。
使用本發(fā)明的另一個優(yōu)點是，其中，發(fā)生了所述刺激作用的粘膜腔室中的粘膜抗體反應(yīng)被認(rèn)為比其他粘膜腔室中的反應(yīng)更強。因此，認(rèn)為口腔粘膜給藥在所述過敏原接觸的口腔或咽喉的粘膜上引起了最強的抗體反應(yīng)，并因此導(dǎo)致對過敏反應(yīng)最有效的治療。
本發(fā)明還涉及在對象體內(nèi)預(yù)防或治療過敏反應(yīng)的方法，包括通過口腔粘膜給藥給對象施用包括過敏原和選自含氧金屬鹽的佐劑的液體制劑。
另外，本發(fā)明涉及制備通過口腔粘膜給藥在對象體內(nèi)預(yù)防或治療過敏反應(yīng)的液體制劑的方法，所述制劑包括過敏原和選自含氧金屬鹽的佐劑，所述方法包括將含氧金屬鹽通解在溶劑中，添加過敏原，并且使所述過敏原和含氧金屬鹽反應(yīng)一段時間。
發(fā)明的詳細(xì)說明過敏原本發(fā)明制劑的過敏原可以是業(yè)已報導(dǎo)了在反復(fù)接觸個體時能夠誘導(dǎo)過敏性，即IgE介導(dǎo)的過敏反應(yīng)的任何天然存在的蛋白。天然存在的過敏原的例子包括花粉過敏原(樹木，藥草，雜草，和青草花粉過敏原)，昆蟲過敏原(吸入劑，唾液和毒液過敏原，例如，螨蟲過敏原，蟑螂和蠓過敏原，膜翅目昆蟲(hymenopthera)毒液過敏原)，動物毛發(fā)和皮屑過敏原(例如，來自狗，貓，馬，大鼠，小鼠等)，以及食物過敏原。來自樹木，草類和藥草的花粉過敏原是來自分類學(xué)上以下目的植物山毛櫸目，油橄欖目(Oleales)，松目和懸鈴木科，包括樺樹(樺屬)，榿木(赤楊)，榛木(榛屬)，鵝耳櫪屬(CarpInus)和橄欖(Olea)，雪松(柳杉屬和檜屬)，懸鈴木(法國梧桐)，禾本目(Poales)包括黑麥草屬，梯牧草屬，早熟禾屬，絆根草屬，貓尾草，絨毛草屬，虉草屬，喬麥和高粱屬，菊目和蕁麻目包括豚草屬，蒿屬，和墻草屬的藥草。其他重要的吸入性過敏原是來自以下屬的家庭塵螨表皮螨屬和歐螨屬，儲螨屬，例如，LepIdoglyphys，食甜螨屬和食酪螨屬，來自蟑螂，蠓和跳蚤的過敏原，例如，小蠊屬，大蠊屬，搖蚊屬和Ctenocepphalides，以及來自哺乳動物，如貓，狗和馬的過敏原，毒液過敏原，包括如來自螫咬或叮咬昆蟲，如來自分類學(xué)上的膜翅目，包括蜜蜂(總科蜜蜂科)，黃蜂(總科黃蜂科)，和螞蟻(總科蟻科)的過敏原。來自真菌的重要的吸入過敏原，如來自支鏈孢屬和枝孢菌屬的過敏原。
在本發(fā)明的特定實施方案中，所述過敏原是Bet v1，Aln g1，Cor a1和Car b1，Que a1，Cry j1，Cry j2，Cup a1，Cup s1，Jun a1，Jun a2，jun a3，Ole e1，Lig v1，Pla l1，Pla a2，Amb a1，Amb a2，Amb t5，Art v1，Art v2 Par j1，Par j2，Par j3，Sal k1，Ave e1，Cyn d1，Cyn d7，Dac g1，F(xiàn)es p1，Hol l1，Lol p1 and 5，Pha a1，Pas n1，Phl p1，Phl p5，Phl p6，Poa p1，Poa p5，Sec c1，Sec c5，Sor h1，Der f1，Der f2，Der p1，Der p2，Der p7，Der m1，Eur m2，Gly d1，Lep d2，Blo t1，Tyr p2，Bla g1，Bla g2，Per a1，F(xiàn)el d1，Can f1，Can f2，Bos d2，Equ c1，Equ c2，Equ c3，Mus m1，Rat n1，ApIs m1，ApI m2，Ves v1，Ves v2，Ves v5，Dol m1，Dil m2，Dol m5，Pol a1，Pol a2，Pol a5，Sol i1，Soli2，Sol i3和Sol i4，Alt a1，CIa h1，Asp f1，Bos d4，Mal d1，Gly m1，Gly m2，Gly m3，Ara h1，Ara h2，Ara h3，Ara h4，Ara h5或來自上述任意一種的分子繁殖的改組子(shufflant)雜合體。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述過敏原選自下列一組青草花粉過敏原，塵螨過敏原，豚草屬過敏原，雪松花粉，貓過敏原和樺樹過敏原。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述制劑包括至少兩種不同類型的過敏原，所述過敏原來自相同的過敏原來源或來自不同的過敏原來源，例如，1型和5型草類過敏原，或1型和2型螨蟲過敏原，分別來自不同的螨蟲和草類，雜草抗原，如矮小和巨大豚草屬過敏原，不同的真菌過敏原，如支鏈孢屬和枝孢菌屬，樹木過敏原，如樺樹，榛木，鵝耳櫪，橡樹和赤楊過敏原，食物過敏原，如花生，大豆和牛奶過敏原。
摻入所述制劑中的過敏原可以是提取物形式的，純化的過敏原，改性的過敏原，重組過敏原或重組過敏原的突變體。過敏原提取物可天然含有相同過敏原的一種或多種異構(gòu)型，而重組過敏原通常只代表過敏原的一種異構(gòu)型。在優(yōu)選實施方案中，所述過敏原是提取物形式的。在另一種優(yōu)選實施方案中，所述過敏原是重組過敏原。在另一種優(yōu)選實施方案中，所述過敏原是天然存在的低IgE-結(jié)合變體或重組低IgE-結(jié)合變體。
過敏原能夠以相同的摩爾數(shù)量存在或所存在的過敏原的比例可以優(yōu)選波動到1∶20。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述低IgE結(jié)合過敏原是如WO99/47680，WO 02/40676或WO 03/096869 A2所述的過敏原。
典型的增量劑量脫敏作用，其中，將快速分散固體劑型形式的過敏原的劑量加大到能最大限度減輕過敏反應(yīng)癥狀的數(shù)量。所述劑型的單位劑量的優(yōu)選效力為150-1000000SQ-u/劑型，更優(yōu)選的效力為500-500000SQ-u/劑型，更優(yōu)選的效力為1000-250000SQ-u/劑型，更優(yōu)選1500-125000SQ-u/劑型，最優(yōu)選1500-75000SQ-u/劑型。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述劑型是重復(fù)的單一劑量，優(yōu)選在1500-75000SQ-u/劑型范圍內(nèi)。
含氧金屬鹽在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述含氧金屬鹽的金屬陽離子選自下列一組Al，K，Ca，Mg，Zn，Ba，Na，Li，B，Be，F(xiàn)e，Si，Co，Cu，Ni，Ag，Au和Cr。
所述含氧化合物的陰離子可以是任何含氧陰離子，包括有機或無機陰離子，或有機和無機陰離子的組合。合適的含氧金屬鹽的例子有，例如，其中，所述陰離子選自下列一組的金屬鹽硫酸鹽，氫氧化物，磷酸鹽，硝酸鹽，碘酸鹽，溴酸鹽，碳酸鹽，水合物，乙酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽和酒石酸鹽，以及它們的混合形式。所述含氧金屬鹽還包括配位絡(luò)合物。例如，配位絡(luò)合物的定義，可以參見The Handbook ofChemistry and Physics 56Ed.，Section B，Chapter 7(197576)。
在本文中，短語“混合形式”表示包括各種陰離子的組合，以及與例如，氯化物和硫化物的組合。
本發(fā)明的含氧金屬鹽的例子有氫氧化鋁，磷酸鋁，硫酸鋁，醋酸鋁，硫酸鋁鉀，磷酸鈣，酒石酸鈣，Maalox(氫氧化鋁和氫氧化鎂的混合物)，氫氧化鈹，氫氧化鋅，碳酸鋅，硫酸鋅，和硫酸鋇。
最優(yōu)選的是氫氧化鋁，磷酸鋁，醋酸鋁，磷酸鈣，酒石酸鈣和硫酸鋅。
含氧金屬鹽的pI通常在2-11的范圍內(nèi)。過敏原蛋白的pI通常在4-9的范圍內(nèi)。優(yōu)選的是，所述過敏原和含氧金屬鹽是經(jīng)過選擇的，以便所述過敏原的pI低于所述含氧金屬鹽的pI。
例如，在用氫氧化鋁作為含氧金屬鹽時，所述制劑中氫氧化鋁的濃度優(yōu)選為0.035-1000mg/ml，更優(yōu)選0.10-100mg/ml，更優(yōu)選0.25-10mg/ml，最優(yōu)選0.5-5mg/ml。對于其他含氧金屬鹽來說，所述金屬鹽的濃度優(yōu)選為0.035-1000mg/ml，更優(yōu)選0.35-100mg/ml，更優(yōu)選0.7-50mg/ml，最優(yōu)選1.0-20mg/ml。所述制劑中所述過敏原的濃度優(yōu)選為0.01-100mg/ml，更優(yōu)選0.1-10mg/ml。含氧金屬鹽與過敏原的比例優(yōu)選為0.1∶100，更優(yōu)選為1∶20。過敏原在吸附在含氧金屬鹽上的程度通常占添加數(shù)量的5-99％，更優(yōu)選10-99％。含氧金屬鹽對過敏原的吸附取決于緩沖系統(tǒng)，以及反應(yīng)條件，包括進行吸附時的溫度和反應(yīng)時間。
口腔粘膜給藥通過口腔和舌下給藥過敏原進入免疫系統(tǒng)是已知的給藥途徑。給藥還可以通過將疫苗制劑放置在舌頭下面，并且使它短時間保持在這里，例如，30-60秒進行。
口腔粘膜給藥包括任何給藥方法，其中，所述制劑部分或完全與患者的口腔和/或咽喉粘膜接觸?？谇徽衬そo藥方法包括舌下給藥和頰粘膜給藥。
在本發(fā)明的一種實施方案中，所述對象接受了疫苗接種方案，包括每天服用所述疫苗。在本發(fā)明的另一種實施方案中，所述疫苗接種方案包括每兩天，每三天，或每四天服用一次疫苗。例如，所述疫苗接種方案包括服用所述疫苗超過4周，優(yōu)選超過8周，更優(yōu)選超過12周，更優(yōu)選超過16周，更優(yōu)選超過20周，更優(yōu)選超過24周，更優(yōu)選超過30周，最優(yōu)選超過36周。
給藥時段可以是連續(xù)時段。另外，給藥時段是被一個或多個不給藥時段打斷的不連續(xù)的時段。優(yōu)選的是，不給藥的(總)時段比給藥的(總)時段短。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，每天給患者服用一次疫苗?；蛘?，每天給所述患者服用兩次疫苗。所述疫苗可以是單一劑量的疫苗。
液體疫苗制劑含氧金屬鹽的水溶液通常具有凝膠形式。如上文所述，所述制劑中氫氧化鋁的濃度優(yōu)選為0.035-1000mg/ml，更優(yōu)選0.10-100mg/ml，更優(yōu)選0.25-10mg/ml，最優(yōu)選0.5-5mg/ml。不過，本發(fā)明的制劑還可以具有高濃縮凝膠或凝膠樣制劑的形式。
在本發(fā)明的特定實施方案中，本發(fā)明的制劑還包括增強劑。增強劑是一種物質(zhì)，它能提高藥物學(xué)活性物質(zhì)的生物利用度，i)通過打開細(xì)胞旁(paracellular)通道(緊密連接)增強活性物質(zhì)穿透生物膜的能力，即增強活性物質(zhì)的吸收，和/或ii)通過所述增強劑的生物體附著性，它能延長吸收時間。
增強劑的例子有醇類，例如，乙醇，殼聚糖，幾丁質(zhì)，丙二醇，甘油，二甲亞砜，二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，優(yōu)選甘油。所述增強劑的用量優(yōu)選為20％-80％(v/v)，更優(yōu)選為30％(v/v)-70％(v/v)，最優(yōu)選為40％(v/v)-60％(v/v)。
應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的制劑還包括適合所述制劑類型的其他佐劑和其他賦形劑。所述其他佐劑和賦形劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，并且包括，例如，溶劑，乳化劑，濕潤劑，增塑劑，著色物質(zhì)，填料，防腐劑，黏度調(diào)節(jié)劑，緩沖劑，和黏膜黏性物質(zhì)等。配制方法的例子為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。
所述其他佐劑可以是任何常規(guī)佐劑，包括熱不穩(wěn)定性腸毒素(LT)，霍亂毒素(CT)，霍亂毒素B亞基(CTB)，聚合化脂質(zhì)體，突變型毒素，例如，LTK63和LTR72，微囊劑，白細(xì)胞介素(例如，IL-1β，IL-2，IL-7，IL-12，INFγ)，GM-CSF，MDF衍生物，CpG寡核苷酸，LPS，MPL，phosphophazenes，Adju-Phos，葡聚糖，抗原制劑，脂質(zhì)體，DDE，DHEA，DMPC，DMPG，DOC/明礬復(fù)合物，弗氏不完全佐劑，ISCOMs，LT Oral佐劑，胞壁酰二肽，單磷酰脂質(zhì)A，胞壁酰三肽，和磷脂酰乙醇胺。
本發(fā)明的制劑可以通過將含氧金屬鹽以及其他佐劑和其他賦形劑(如果有的話)溶解在溶劑中，優(yōu)選溶解在水中，添加過敏原，并且使所述過敏原和含氧金屬鹽反應(yīng)一段時間制備。所述反應(yīng)時間為0.1-48小時，優(yōu)選12-24小時。反應(yīng)優(yōu)選在4-45℃，更優(yōu)選4-20℃的溫度下進行。
定義術(shù)語″口腔粘膜給藥″表示將所述劑型放置在舌頭下面或口腔中的任何地方的給藥途徑，使得活性成分與患者口腔或咽喉的粘膜接觸，以便獲得所述活性成分的局部或系統(tǒng)性作用?？谇徽衬そo藥途徑的例子是舌下給藥。
術(shù)語″舌下給藥″表示給藥途徑，其中，將劑型放置在舌頭下面，以便獲得活性成分的局部或系統(tǒng)作用。
術(shù)語″液體″表示以任何濃度溶解或添加到溶劑中的含氧金屬鹽，包括具有低和高黏度的溶液和凝膠。
術(shù)語″SQ-u″表示SQ-單位SQ-單位是按照ALK-Abell óA/S′s″SQ生物效能″-標(biāo)準(zhǔn)化方法測定的，其中100,000SQ單位等于標(biāo)準(zhǔn)的皮下維持劑量。通常，1mg的提取物含有100,000-1,000,000SQ-單位，這取決于過敏原的來源和所使用的生產(chǎn)方法?？梢酝ㄟ^免疫測定確定確切的過敏原含量，即總的主要過敏原含量和總的過敏原活性。
術(shù)語″治療″表示部分或完全治愈，減輕癥狀或抑制癥狀的病因。
術(shù)語″預(yù)防″表示預(yù)防治療的類型。
具體實施例方式
例1用氫氧化鋁和梯牧草花粉過敏原(gross allergen PhleumPratense)(Phl p)的液體制劑對小鼠進行舌下治療治療方法小鼠接受的治療方案包括由三次腹膜內(nèi)(i.p.)注射構(gòu)成的敏化處理和SLIT治療，SLIT治療包括在六周時間內(nèi)，每周五天每日一次服用具有下列配方之一的液體制劑1)5,000SQ-u Phl p和無氫氧化鋁(7只小鼠)；2)5,000SQ-u和氫氧化鋁(Alhydrogel1.3％)，濃度相當(dāng)于1.25mg Al/ml(8只小鼠)；3)500SQ-u和氫氧化鋁(Alhydrogel1.3％)，濃度相當(dāng)于1.25mg Al/ml(10只小鼠)；和4)無牧草過敏原和無氫氧化鋁(10只小鼠)。對于SLIT治療來說，每種劑量包括體積為5μl的液體制劑，即每一個劑量包括量為1.25/20mg Al。對于腹膜內(nèi)注射來說，每一個劑量包括體積為0.25ml的液體制劑，即每一個劑量包括量為1.25/4mg Al。第二次i.p.注射是在第一次注射兩周之后進行，而第三次注射是在第二次注射一周之后進行。所述SLIT治療是在第三次i.p.治療之后一周開始。
所述液體制劑是通過將Phl p添加到可可脂中，并且與氫氧化鋁混合制備的。用從Brenntag獲得的Alhydrogel1.3％的溶液(灰分殘余物(Al2O3)的含量1.3％w/w；含量相當(dāng)于Al(OH)31.99％w/w；鋁的含量6.25mg Al/ml±5％)將氫氧化鋁稀釋5倍。可可脂含有0.5％(w/v)氯化鈉和0.25％(w/v)碳酸氫鈉。
在治療方案結(jié)束時，對每一只小鼠進行支氣管肺泡灌洗(BAL)，以便獲得樣品，并且用以下分析方法測定BAL中IgA抗體的含量IgA分析結(jié)合在山羊抗小鼠IgA上的Estapore磁珠(Estapore IB-MR/0，86)與BAL一起培養(yǎng)。然后洗滌并且用生物素化的過敏原培養(yǎng)。然后洗滌并且用抗生物素蛋白鏈菌素標(biāo)記的LITE制劑進行培養(yǎng)，并且在洗滌之后，用光度計(Magic Lite Analyser EQ)測定發(fā)光。
結(jié)果結(jié)果如

圖1所示。從圖1中可以看出，使用氫氧化鋁可以將針對過敏原劑量的BAL IgA含量顯著提高5,000SQ-u。
權(quán)利要求
1.包括過敏原和選自含氧金屬鹽的佐劑的組合物生產(chǎn)通過口腔粘膜給藥在對象體內(nèi)預(yù)防或治療過敏反應(yīng)的液體制劑的用途。
2.如權(quán)利要求1的用途，其中，所述含氧金屬鹽選自下列一組氫氧化鋁，磷酸鋁和磷酸鈣。
3.如權(quán)利要求1的用途，其中，所述含氧金屬鹽是氫氧化鋁。
4.如權(quán)利要求3的用途，其中，所述含氧金屬鹽的濃度為0.035-1000mg/ml，更優(yōu)選0.10-100mg/ml，更優(yōu)選0.25-10mg/ml，最優(yōu)選0.5-5mg/ml。
5.如權(quán)利要求1-4中任意一項的用途，其中，所述過敏原的濃度為0.01-100mg/ml，更優(yōu)選0.1-10mg/ml。
6.如上述權(quán)利要求中任意一項的用途，其中，所述過敏原選自下列一組青草花粉過敏原，塵螨過敏原，豚草屬過敏原，雪松花粉或貓過敏原和樺樹過敏原。
7.如上述權(quán)利要求中任意一項的用途，其中，所述口腔粘膜給藥是舌下給藥。
8.如上述權(quán)利要求中任意一項的用途，其中，所述制劑還包括增強劑。
9.如權(quán)利要求8的用途，其中，所述增強劑是甘油。
10.在對象體內(nèi)預(yù)防或治療過敏反應(yīng)的方法，包括通過口腔粘膜給藥給所述對象服用包括過敏原和選自含氧金屬鹽的佐劑的液體制劑。
11.制備通過口腔粘膜給藥在對象體內(nèi)預(yù)防或治療過敏反應(yīng)的液體制劑的方法，所述制劑包括過敏原和選自含氧金屬鹽的佐劑，所述方法包括將所述含氧金屬鹽溶解在溶劑中，添加所述過敏原，并且使所述過敏原和含氧金屬鹽反應(yīng)一段時間。
全文摘要
包括過敏原和選自含氧金屬鹽的佐劑的組合物用于生產(chǎn)通過口腔粘膜給藥在對象體內(nèi)預(yù)防或治療過敏反應(yīng)的液體制劑的用途，以及通過用所述液體制劑進行口腔粘膜給藥在對象體內(nèi)預(yù)防和治療過敏反應(yīng)的方法。
文檔編號A61K39/39GK101048176SQ200580036410
公開日2007年10月3日 申請日期2005年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月27日
發(fā)明者J·布里莫奈斯, J·基爾德斯加德 申請人:阿爾克-阿貝洛有限公司