專利名稱：作為朊病毒蛋白配體的被取代的三嗪及其檢測和去除朊病毒的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)-配體相互作用領(lǐng)域，特別是與朊病毒蛋白(″朊病毒蛋白配體″)結(jié)合的化合物，及使用該化合物從生物樣本中檢測或去除朊病毒(prion)的方法。
背景技術(shù)：
天然或細(xì)胞的朊病毒蛋白“PrPc”廣泛分布于哺乳動物中，具有特別保守的氨基酸序列和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。傳染性朊病毒被認(rèn)為是由正常細(xì)胞(PrPc)朊病毒蛋白的修飾形式所構(gòu)成，稱為“PrPsc”。朊病毒具有一些與其它傳染性病原體相同的性質(zhì)，但并不顯示含有核苷酸。反而有提議認(rèn)為翻譯后的構(gòu)象變化與非傳染性PrPc轉(zhuǎn)變成為傳染性PrPsc有關(guān)，在這一過程中α-螺旋轉(zhuǎn)換為β-折疊。PrPc含3個α-螺旋，基本不含β-折疊結(jié)構(gòu)；相反，PrPsc富含β-折疊。認(rèn)為PrPc到PrPsc的轉(zhuǎn)變導(dǎo)致了傳染性海綿狀腦病(TSEs)的形成，在這一過程中，PrPsc在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)蓄積并伴有神經(jīng)病理性改變和神經(jīng)機(jī)能障礙。PrPsc，通常是指朊病毒蛋白的“綿羊瘙癢病”型，被認(rèn)為是動物和人的傳染性神經(jīng)變性疾病的傳播和發(fā)病的必要和可能的充分條件。
TSEs的具體例子包括綿羊瘙癢病，它影響綿羊和山羊；牛海綿樣腦病(BSE)，它影響牛；傳染性水貂腦病；貓海綿狀腦??；及長耳鹿、白尾鹿、黑尾鹿及麋鹿的慢性萎縮性疾病(CWD)。在人類，TSE病可表現(xiàn)為庫魯病、克羅伊茨費爾特-雅各布病(CJD)、格-施-沙綜合征(GSS)、致命性失眠和變異性克羅伊茨費爾特-雅各布病(vCJD)。最近出現(xiàn)于人類的 vCJD是英國BSE流行的結(jié)果，很可能是由食用獲自感染了BSE或“瘋牛病”的牛的食品而造成的。在1980年代的中期到1990年代早期，英國有不知數(shù)目的人攝入了可能受到獲自感染了BSE的牛的神經(jīng)組織污染的食物。由于人類經(jīng)口傳播疾病的潛伏期可超過20年，vCJD的真正發(fā)病率可以許多年都不明顯。迄今，已知有超過150人已經(jīng)感染該病，主要是在英國；然而，病例報告也見于加拿大、法國、香港、愛爾蘭、意大利和美國。來自英國的受污染的牛飼養(yǎng)產(chǎn)品的全世界性出口，表明全球出現(xiàn)BSE的可能和由此產(chǎn)生的vCJD的可能性。與這些觀察相一致，在大多數(shù)歐洲國家、加拿大、美國、日本和以色列，檢出了BSE。因此，能夠從包括食品的各種材料中檢測和去除感染性朊病毒蛋白非常重要。
歷史上，TSEs的診斷是基于出現(xiàn)該病的臨床征象，并且只能通過死后的腦組織學(xué)病理檢查才能確診。所有TSEs的一個特征是缺乏可測定的對試劑的宿主免疫應(yīng)答。因而，沒有生產(chǎn)出抗體，也沒有常規(guī)血清學(xué)化驗?zāi)軌蛴糜谠\斷感染了的動物。近來，對腦中異常朊病毒蛋白的鑒別提高了診斷該病的能力。
除攝入來源于牛的感染食品之外，輸血和器官移植代表了另外一種人間傳播vCJD的可能方式。在英國，已有兩例通過輸血傳播vCJD的可疑病例。在人類，通過輸血途徑的vCJD的傳染性目前尚未知，但越來越多的注意到這可能是比攝食更有效的vCJD傳播方式。這與包括從綿羊傳播的實驗性動物模型所得到的數(shù)據(jù)相一致。不同于其它的人TSEs，PrPsc存在于vCJD患者的淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)，從而增加了感染血液中存在的感染原和通過輸血傳播可能性。其它提高了關(guān)于輸血傳播危險的考慮的因素包括，尚未知的，但假定是，許多人接觸BSE并且缺少vCJD的臨床前診斷試驗。而且，隨著靈長類和小鼠的物種適應(yīng)，vCJD的毒性顯示出增強(qiáng)，這提示人與人之間的傳播可能比從牛到人的傳播更為有效。因而，迫切需要一種方法來阻止通過輸血途徑的vCJD傳播。這樣的措施可能包括早期鑒別供體，去除和滅活獲自動物的食品、旨在動物或人消費或應(yīng)用的保健產(chǎn)品、人和牛血液制品和器官移植中的TSE因子。不幸的是，PrPsc對于化學(xué)和物理滅活方法抵抗力很強(qiáng)，并且難以找到選擇性滅活方法。
通過與配體的特殊相互作用來去除朊病毒顯示出更大的希望。已經(jīng)鑒別出許多與朊病毒蛋白相結(jié)合的配體。對組合的多肽庫進(jìn)行篩選，尋找與所有已知哺乳動物中均發(fā)現(xiàn)的朊病毒蛋白的八肽重復(fù)序列(PHGGGWGQ)相結(jié)合的配體，發(fā)現(xiàn)了一系列配體，見WO 01/77687。其它材料包括多種聚合物，如通常獲自TosoBioSep離子交換樹脂的氨基聚甲基丙烯酸酯(見Gawryl等的專利號為5,808,011的美國專利)，與淀粉樣蛋白斑相互作用的配體如剛果紅(Ingrosso等，J.Virology69506-508(1995))，4-碘，4-脫氧阿霉素(Tagliavini等，Science2761119-1122(1997))，兩性霉素B，吡咯紫質(zhì)和酞菁(Priola等，Science 2871503-1506(2000))，金屬(Stockel等，Biochemistry，37.7185-7193(1998))，肽與PrP相互作用形成復(fù)合物(見Prusiner等和Soto等的專利號為5,750,361的美國專利，Lancet，355192-197(2000))，肝素和其它多硫酸化多聚陰離子(Caughey等，Binding of the Protease-sensitive form of prion protein PrP toSulphated Glycosaminoglycan and Congo Red，J.Virology682135-2141(1994))，抗體(Kascsak等，Immunological Invest.26259-268(1997))，以及其它蛋白質(zhì)，如纖溶酶原(Fischer等，Nature 408479-483(2000))。盡管有些可以在特殊環(huán)境下有用(見Gawryl等的專利號為5,808,011的美國專利)，但目前沒有配體已經(jīng)充分顯示出或者發(fā)現(xiàn)能夠在多種介質(zhì)中與朊病毒結(jié)合。
迄今為止，人TSE病100％致命。不幸的是，盡管已經(jīng)報告有許多化合物作為未來的治療試劑，包括兩性霉素、硫酸化多聚陰離子、剛果紅染料和蒽環(huán)類抗生素，所有這些均證明僅有微小的阻止朊病毒增殖的可能性，并且無一表現(xiàn)出任何去除感染宿主的預(yù)成朊病毒的作用。因而，仍然迫切需要新的治療試劑。
正?？扇艿鞍踪|(zhì)進(jìn)行組合和分解，發(fā)生構(gòu)象變化及形成不溶形式，被認(rèn)為是許多其它疾病中的成因性過程，這些疾病中的多數(shù)是神經(jīng)系統(tǒng)疾病。對于疾病發(fā)生與正常蛋白質(zhì)到構(gòu)象改變的轉(zhuǎn)變之間的關(guān)系，知之甚少。除朊病毒外，這種不溶蛋白質(zhì)的例子包括阿爾茨海默氏病和腦淀粉樣血管病(CAA)的淀粉樣蛋白斑中的β-淀粉狀蛋白肽；帕金森氏病的向心性多層圓形小體中的α-突觸核蛋白沉淀；額顳癡呆和匹克氏病的神經(jīng)原纖維纏結(jié)中的tau蛋白；肌萎縮性側(cè)索硬化中的超氧化物歧化酶和亨廷頓氏病中的huntingtin蛋白。
通常這些高度不可溶蛋白質(zhì)形成聚集物，聚集物包括不分支原纖維，具有共同的β-折疊片構(gòu)象特征。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，淀粉狀蛋白可存在于腦和腦膜血管(腦血管沉積)和腦實質(zhì)中(斑塊)。人和動物模型神經(jīng)病理學(xué)研究指出，與淀粉樣沉淀物相鄰近細(xì)胞的正常功能受到妨礙。
神經(jīng)斑塊形成的精確機(jī)制，以及斑塊形成和與疾病相關(guān)的神經(jīng)變性過程間的關(guān)系，大部分未知。需要能夠容易的分離或區(qū)分兩個或多個不同蛋白構(gòu)象形式，如PrPc和PrPsc，的方法，來理解轉(zhuǎn)變的過程，并發(fā)現(xiàn)能夠與疾病相關(guān)的形式有特定相互作用的結(jié)構(gòu)。目前用于分離或區(qū)分亞型的方法包括在促溶劑如尿素存在下的聚丙稀酰胺凝膠，即橫向尿素梯度(TUG)凝膠劑中移動性的不同；對蛋白酶處理敏感性的差異，如蛋白酶K(PK)和檢測出PrPsc的抗PK消化產(chǎn)物即PrPres；不同的溫度穩(wěn)定性；在非離子型去污劑中的相對溶解度；纖維結(jié)構(gòu)結(jié)合特定化學(xué)試劑的能力，如剛果紅和異黃素(isoflavin)S。然而，能夠與構(gòu)象改變的蛋白質(zhì)以及與和疾病相關(guān)的形式特殊高度親和的試劑，仍未鑒別出。這種試劑可用于建立診斷試劑盒，分離和純化不同形式的蛋白質(zhì)，去除治療劑、生物制品、疫苗和食物中的疾病傳染性形式，以及用于治療。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明的第一個方面，發(fā)明提供了具有如下結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的用途 其中R1和R2相同或不同，均為任選被取代的烷基、任選被取代的環(huán)烷基、任選被取代的芳基或任選被取代的雜芳基；R3是氫或芳基取代基或者R3是任選經(jīng)由間隔基連接的固體載體；Z代表氧原子、硫原子或NR4；Y代表氧原子、硫原子或NR5；其中R4和R5可以相同或不同，表示氫，任選被取代的含1-6個碳原子的烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的芐基或任選被取代的β-苯乙基；和X1和X2中的一個表示氮原子，X1和X2中另一個表示氮原子或CR6，其中R6表示氫或芳基取代基；用于朊病毒蛋白的親和結(jié)合。
具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物可用于檢測或去除樣品中的朊病毒蛋白，如生物液體或環(huán)境樣品。該化合物用于檢測或去除樣品中的所有朊病毒蛋白，或者可以選擇性的檢測或去除朊病毒蛋白的單個形式，從而可以用于區(qū)分來自感染了人TSEs患者和感染了綿羊瘙癢病、BSE或CWD的動物樣本中的傳染性和非傳染性朊病毒蛋白。該化合物用于檢測樣本中朊病毒蛋白的方法，如獲自人或動物的生物液體和環(huán)境樣本，以及用于診斷、治療朊病毒的方法。例如，本發(fā)明中的化合物可以用于治療或診斷病理改變，如CJD、vCJD、GSS、致命性失眠、綿羊瘙癢病、BSE和CWD及其它TSEs，采用全血、血液成分、細(xì)胞、血清、血漿、血漿衍生物、腦脊液、尿、淚、扁桃體、闌尾和其它組織。該化合物也可以用于去除樣本中的朊病毒蛋白，如血樣、血液成分、細(xì)胞、血清、血漿、血漿衍生物、腦脊液、尿、淚、扁桃體、闌尾和其它材料。
另一方面，本發(fā)明提供了一種在樣本中檢測朊病毒蛋白，和/或從樣本中去除朊病毒蛋白的方法，該方法包括用如上文所定義的具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物接觸樣本。
未與固體載體結(jié)合，但其中R3代表氫或取代基時，具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物也可以用于治療或延緩受試者中與朊病毒相關(guān)的病理發(fā)展。例如，本發(fā)明中的配體可用于治療病理改變?nèi)鏑JD、vCJD、GSS、致命性失眠、綿羊瘙癢病、BSE和CWD。不打算局限于任何理論，這些配體可以通過抑制PrPsc聚合或通過抑制PrPsc和PrPc相互作用從而減慢PrPsc的進(jìn)一步發(fā)展而起作用。
因而，在本發(fā)明的進(jìn)一步的方面，提供了一種治療或延緩在人或動物受試者中朊病毒相關(guān)病理發(fā)展的方法，該方法包括給予受試者治療有效量的未結(jié)合固體載體的具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物。
類似的，本發(fā)明進(jìn)一步提供了未結(jié)合固體載體的具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物在制備用于治療朊病毒相關(guān)病理的藥物中的用途。
本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點將在下文的詳細(xì)描述和優(yōu)選實施例中體現(xiàn)。
發(fā)明詳述定義此處所用的術(shù)語“一種(a)”、“一種(an)”和“該(the)”定義為表示“一或多”，除非與上下文不相適宜，也包括復(fù)數(shù)。
術(shù)語“3F4”指特異性針對PrPc，而非PrPsc或PrPres的自然形式的單克隆抗體。抗體對于倉鼠和人類的PrPc、PrPsc和PrPres的變性形式有特異性。
術(shù)語“烯基”指含有碳-碳雙鍵的脂肪族烴基，可以是直的或分支的。優(yōu)選鏈上有2-12個碳原子的烯基基團(tuán)，更優(yōu)選鏈上有2-6個碳原子的烯基基團(tuán)，如丙烯基、正烯基、異-丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正-戊烯基和庚烯基。術(shù)語“環(huán)烯基”和“雜環(huán)烯基”類似。
術(shù)語“烷氧基”指烷基-O-基團(tuán)，其中烷基如本申請描述。例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基和戊氧基。
此處所用的術(shù)語“烷基”，單用或聯(lián)用，指直鏈或支鏈、具有1-15個碳原子的飽和烴。優(yōu)選具有1-6個碳原子的低級烷基，如甲基、乙基、正-丙基、異丙基、n-丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正-戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正-己基、4-甲基戊基、新戊基和2，2-二甲丙基。當(dāng)烷基被描述為“可任選被取代”時，該基團(tuán)可以被一個或多個取代基取代，特別是被此處所定義的一個或多個“烷基取代基”取代。
術(shù)語“烷基取代基”，除另有定義，指羥基、氨基、烷基、鹵素、羥烷基、酰胺、?；Ⅴ０被?、烷氧基、烷氧羰基、亞烷二氧基、烷基亞磺?；?、烷基磺酰基、烷硫基、芳酰基、芳酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基烷氧羰基、芳基烷硫基、芳氧基、芳氧基羰基、芳基亞磺?；?、芳基磺酰基、芳硫基、羧基(或酸生物等排物)、氰基、雜芳酰基、雜芳基、雜芳烷氧基、雜芳酰氨基、雜芳氧基、硝基或三氟甲基。
術(shù)語“芳?；敝阜蓟?CO-基團(tuán)，其中芳基如本申請所述，如苯甲?；?-和-2-萘甲酰基。
術(shù)語“芳基”作為基團(tuán)或基團(tuán)的一部分是指a)6-18個碳原子的可任選被取代的單環(huán)或多環(huán)芳香族碳環(huán)部分，如苯、萘、醋蒽烯、苊、醋亞菲基、甘菊環(huán)、蔗、引達(dá)省、茚、氟、非那烯和菲；或b)可任選被取代的部分飽和的多環(huán)芳香族碳環(huán)部分，其中芳基和環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基或雜環(huán)烯基稠合在一起形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，如二氫吲哚基、四氫化萘基、茚基或茚滿基環(huán)。
優(yōu)選的芳基是可任選被取代的苯基。
當(dāng)芳基被描述為“可任選被取代”時，該基團(tuán)可被一個或多個取代基取代，特別是被此處所定義的一個或多個“芳基取代基”所取代。
“芳基取代基”，除非另有定義，指羥基、氨基、烷基、鹵素、羥烷基、酰胺、酰基、酰氨基、烷氧基、烷氧羰基、亞烷二氧基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；⑼榱蚧?、芳?；?、芳酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基烷氧羰基、芳基烷硫基、芳氧基、芳氧基羰基、芳基亞磺基、芳基磺?；?、芳硫基、羧基(或酸生物等排物)、氰基、雜芳酰基、雜芳基、雜芳烷氧基、雜芳酰氨基、雜芳氧基、硝基、氧或三氟甲基。
如此處的使用，術(shù)語“獲自血液的成分”意味著包括全血、紅細(xì)胞濃縮液、血漿、血清、富血小板的和貧血小板部分、血小板濃縮液、白細(xì)胞、血漿沉淀、血漿分離沉淀物和上清液、免疫球蛋白制劑包括IgA、IgE、IgG和IgM，純化的凝結(jié)因子濃縮物、纖維蛋白原濃縮物，或各種獲自人或動物的其它成分。它也包括純化的或通過任何本領(lǐng)域中的常規(guī)方法，包括離子交換、親和、凝膠滲透和/或疏水色譜法或示差沉淀(differential precipitation)，而制得的獲自血液的蛋白質(zhì)。
術(shù)語“組合庫”指通過化學(xué)固相組合技術(shù)所合成的化學(xué)試劑的收集。這一定義包括使用分裂-配對-重組方法產(chǎn)生數(shù)百萬的隨機(jī)化合物，或者可以設(shè)計成包括所定義的結(jié)構(gòu)。標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建單元可以是三嗪骨架，及類似物。
術(shù)語“環(huán)烷基”指3-12個碳原子的飽和單環(huán)、二環(huán)或多環(huán)環(huán)狀系統(tǒng)，有或沒有側(cè)鏈，可任選被-(C＝O)-間斷。優(yōu)選的環(huán)烷基是單環(huán)烷烴，如環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基；在一個碳上連接的二環(huán)烷烴，如螺壬烷；飽和的橋環(huán)系統(tǒng)包括在兩個碳上連接的二環(huán)烷烴類，如降冰片烷、二環(huán)[4.3.2]十一烷、二環(huán)[4.1.0]庚烷和萘烷，及多環(huán)橋系統(tǒng)，如金剛烷。更優(yōu)選的，環(huán)烷基是單環(huán)烷烴或橋環(huán)系統(tǒng)。最優(yōu)選的，環(huán)烷基是環(huán)己基、降冰片烷或金剛烷。
當(dāng)環(huán)烷基被描述為″可任選被取代″時，該基團(tuán)可以被一種或多種取代基取代，特別是被此處所定義的一個或多個“烷基取代基”所取代。
術(shù)語“鹵素”指氟、氯、溴或碘。
術(shù)語“雜芳基”作為基團(tuán)或基團(tuán)的一部分是指a)可任選被取代的單環(huán)芳基，其中環(huán)的一個或多個成員是非碳元素，如N、O或S，優(yōu)選的例子是單環(huán)或二環(huán)，如苯并咪唑基、苯并噻唑基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、中氮茚基、異唑基、異喹啉基、異噻唑基、二唑基、吡喃基、吡嗪基、噠嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、1，3，4-噻二唑基、噻唑基、噻吩基和三唑基基團(tuán)，除非另有定義，可任選被一個或多個此處所定義的芳基取代基取代；或b)可任選被取代的部分飽和的多環(huán)的雜碳環(huán)部分，其中雜芳基和環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基或雜環(huán)烯基基團(tuán)稠合在一起，形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)(這種基團(tuán)的例子包括4-氮雜全氫茚基，除非另有定義，可任選被一個或多個此處所定義的芳基取代基任意取代)。
當(dāng)雜芳基被描述為″可任選被取代″時，該基團(tuán)可以被一個或多個取代基取代，特別是被此處所定義的一個或多個“芳基取代基”所取代。
術(shù)語“雜環(huán)烷基”指至少一個環(huán)碳原子被雜原子或含雜原子的基團(tuán)所代替的環(huán)烷基，所述雜原子或含雜原子的基團(tuán)如O、S、N或NR7，R7是氫或烷基。優(yōu)選的雜環(huán)烷基含有一個或多個N原子，如咪唑烷、哌啶、嗎啉、哌嗪、吡咯烷酮、吡唑烷和奎寧環(huán)。更優(yōu)選的例子是具有一個或多個N原子的雜單環(huán)烷烴，如哌啶和哌嗪。當(dāng)雜環(huán)烷基被描述為″可任選被取代″時，該基團(tuán)可以被一個或多個取代基取代，特別是被此處所定義的一個或多個“烷基取代基”所取代。
術(shù)語“疏水基”指一個通常為電中性和非極性的親脂性基團(tuán)。疏水基優(yōu)選中性和非極性溶劑或分子環(huán)境，與水性溶劑或環(huán)境相反。因此，在正常生理環(huán)境下，疏水基對于其它疏水基有親和力。疏水基的例子通常包括烷基和環(huán)烷基，優(yōu)選非取代的基團(tuán)，以及芳基。
本發(fā)明所描述的化合物通常在與生理pH值相同或相近的pH下使用。化合物的疏水性，或者這些化合物中特定部分的疏水性，將取決于所考慮的部分在該pH值下是否帶電荷。例如，在生理pH值，氮不帶電，1-(2-氨乙基)哌啶是疏水基。
術(shù)語“配體”指與蛋白質(zhì)、肽或多肽結(jié)合的分子。本發(fā)明中的配體是被取代的雜芳族化合物，如三嗪。
術(shù)語“PrPc”指天然朊病毒蛋白分子，在哺乳動物體內(nèi)有天然和廣泛的表達(dá)。它的結(jié)構(gòu)高度保守，并與疾病狀態(tài)不相關(guān)聯(lián)。
術(shù)語“PrPsc”指PrPc分子的構(gòu)象改變形式，被認(rèn)為有傳染性，與TSE/朊病毒病相關(guān)，包括vCJD、CJD、庫魯病、致命性失眠、GSS、綿羊瘙癢病、BSE、CWD，和其它捕獲和實驗動物中罕見的TSEs。它與正常的細(xì)胞PrPc有相同的氨基酸序列，但一些α-螺旋轉(zhuǎn)變成了β-折疊，并且與疾病狀態(tài)相關(guān)。
術(shù)語“PrPres”指27-30 kDa的PrPsc蛋白質(zhì)的蛋白水解酶抵抗衍生物，它保持伴隨有PK的PrPsc的部分消化。
術(shù)語“PrP”指一般而言的朊病毒蛋白。
術(shù)語“間隔基”指將親和配體與載體基質(zhì)相連接的可任選的部分。一類優(yōu)選的間隔基由結(jié)構(gòu)通式(II)代表-T-[-L-V-]a- (II)其中T代表O、S或NR7；V代表-O-、-S-、-COO-、-CONH-或-NHCO-、-PO3H-、-NH-亞芳基-SO2-CH2CH2-或-NR7-；L代表含2-20個碳原子的可任選被取代的烴連接基；以及
a是0或1。
術(shù)語“載體基質(zhì)”指任何的化合物或材料，不論微?；蚍俏⒘?、可溶或不可溶、多孔或非多孔，可以根據(jù)本發(fā)明用于形成親和配體-基質(zhì)軛合物，并且提供方便的在溶液中將親和配體從溶質(zhì)分離的方法。因此，載體基質(zhì)可以采用例如柱、珠、小顆粒、薄膜或篩的形式。
載體基質(zhì)的例子包括可溶性載體基質(zhì)，諸如天然聚合物，如多肽或蛋白質(zhì)，如交聯(lián)白蛋白或多糖如瓊脂糖、藻朊酸鹽、角叉菜膠、幾丁質(zhì)、纖維素、葡聚糖或淀粉；合成的聚合物如聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯醛、聚乙烯醇、聚丙烯酸甲酯、全氟化碳；無機(jī)化合物諸如硅石、玻璃、硅藻土、礬土、鐵氧化物或其它金屬氧化物，或包括兩種或多種天然聚合物、合成聚合物或無機(jī)化合物的任意組合的共聚物。
載體基質(zhì)的定義中也包括可溶性載體基質(zhì)，包含聚合物如右葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯醇或水解淀粉，提供用于液體分配的親和-配體基質(zhì)軛合物；或固體載體基質(zhì)包括諸如全氟萘烷化合物，提供用于親和乳液形成中的親和配體-基質(zhì)軛合物。
在載體基質(zhì)的定義中進(jìn)一步包括載體基質(zhì)，諸如瓊脂糖、纖維素、葡聚糖、淀粉、藻朊酸鹽、角叉菜膠、合成的聚合物、硅石、玻璃和金屬氧化物，先于或在配體結(jié)合過程中，采用活化劑已經(jīng)或被修飾。
載體基質(zhì)優(yōu)選可任選被活化的瓊脂糖、硅石、纖維素、玻璃、異丁烯酸酯、羥乙基甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、苯乙烯二乙烯基苯、Hyper D或全氟化碳。最優(yōu)選的載體基質(zhì)是異丁烯酸酯材料，用于銷售的商品名為Toyopearl(可獲自Tosoh Bioscience LLC，156Keystone Drive，Montgomeryville，PA 18936，USA)。
WO 97/10887描述了將親和配體連接到載體基質(zhì)的方法，如使用活化方法，以及經(jīng)由間隔基將親和配體連接到基質(zhì)的方法，如通過縮合反應(yīng)，形成親和配體-基質(zhì)軛合物。
優(yōu)選X1和X2均為氮原子的結(jié)構(gòu)式(I)化合物。
優(yōu)選Z和Y均為NR4的結(jié)構(gòu)式(I)化合物，更優(yōu)選R4為氫者。
優(yōu)選R1和R2中至少一個為可任選被取代烷基。
在第一組尤其優(yōu)選的結(jié)構(gòu)通式(I)的化合物中，是指具有結(jié)構(gòu)式(Ia)的化合物R3同上文定義；X1和X2同上文定義；Y同上文定義；Z同上文定義；R1代表-(CH2)m-Q1基團(tuán)，其中m為從0-7，Q1代表-CR11R12R13或-NR11R12，其中R11、R12和R13獨立代表氫、烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，或者R11、R12和R13中的兩個與它們所連接的碳或氮原子一起形成可任選被取代的環(huán)烷基或可任選被取代的雜環(huán)烷基；和R2代表-(CH2)n-Q2基團(tuán)，其中n為從0-7，Q2代表-CR21R22R23或-NR21R22，其中R21、R22和R23獨立代表氫、烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，或者R11、R12和R13中的兩個與它們所連接的碳或氮原子一起形成任選被取代的環(huán)烷基或任選被取代的雜環(huán)烷基。
在結(jié)構(gòu)式為(Ia)的化合物中a)X1和X2均優(yōu)選氮；b)Z和Y均優(yōu)選為NR4，特別是當(dāng)R4為氫時；c)m優(yōu)選為0-4，更優(yōu)選0-3，最優(yōu)選1-3；
d)Q1優(yōu)選-NR11R12；R11和R12優(yōu)選與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)烷基；e)n優(yōu)選為0-4，更優(yōu)選0-2，最優(yōu)選0；和f)R21和R22優(yōu)選與它們所連接的碳原子或氮原子一起形成環(huán)烷基或雜環(huán)烷基；更優(yōu)選的基團(tuán)，Q2可以代表包括疏水環(huán)烷基和雜環(huán)烷基，特別是具有包括至少有6個原子的環(huán)系統(tǒng)。這種基團(tuán)的例子包括環(huán)己基、哌啶基，特別是1-哌啶基，和橋接碳環(huán)體系，如降冰片基。這樣的基團(tuán)優(yōu)選未取代的，特別是不被任何極性取代基取代。
特殊基團(tuán)中Q1可以是包括雜環(huán)烷基，特別是哌啶基，特別是1-哌啶基，和哌嗪基，特別是1-哌嗪基。
在第二組更優(yōu)選的結(jié)構(gòu)通式(I)的化合物中，是指具有結(jié)構(gòu)式(Ib)的化合物R3同上文定義；X1和X2同上文定義；Y同上文定義；Z同上文定義；R1代表亞烷基鏈-(CH2)p-CH3，其中p為0-6，被一個或多個羧基取代，以及任選的被一個或多個額外烷基取代基取代；和R2代表基團(tuán)-(CH2)q-Ar，其中q為0-7，Ar代表可任選被取代的芳基。
在結(jié)構(gòu)式為(Ib)的化合物中a)X1和X2均優(yōu)選氮；b)Z和Y均優(yōu)選為NR4，特別是當(dāng)R4為氫時；c)p優(yōu)選為0-4，更優(yōu)選0-3；
d)R1優(yōu)選被一個或兩個羧基取代，這些羧基中至少有一個被亞烷基鏈-(CH2)p-CH3的末端碳原子所攜帶；e)q優(yōu)選為0-4，更優(yōu)選0-3，最優(yōu)選1或2；和f)Ar優(yōu)選單環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)芳族基團(tuán)，可任選被一個或多個取代基所取代，這些取代基選自苯基、苯氧基、甲苯基、氯芐基、甲氧芐基、氟芐基、吡啶基和吲哚基。Ar更優(yōu)選苯基、苯氧基或吡啶基。
R1可以代表的更優(yōu)選的基團(tuán)為羧甲基、4-羧基丁基和1-(1，3-二羧基)丙基。
Ar可以代表的更優(yōu)選的基團(tuán)包括苯基、4-羥基苯基和吡啶基，特別是2-吡啶基。
具有結(jié)構(gòu)式(Ia)和(Ib)的化合物具有新穎性，代表了本發(fā)明的另一方面。
發(fā)現(xiàn)可用于本發(fā)明的一組特殊的結(jié)構(gòu)式(I)化合物為結(jié)構(gòu)式(Ia)化合物，其中R3同上文定義；X1和X2均為N；Y和Z均代表NH；m代表2；Q1代表哌啶基或哌嗪基；n代表0或2；和Q2代表1-哌啶基或金剛烷基。
發(fā)現(xiàn)可用于本發(fā)明的另一組特殊結(jié)構(gòu)式(I)化合物為結(jié)構(gòu)式(Ib)化合物，其中R3同上文定義；
X1和X2均為N；Y和Z均代表NH；R1代表羧甲基、4-羧基丁基和1-(1，3-二羧基)丙基；q代表2；和Ar代表苯基、2-吡啶基或4-羥基苯基。
具體實施例方式
本發(fā)明優(yōu)選的實施方案，參見以下的方法和例子，將僅以舉例的方式進(jìn)行描述。
合成配體具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的制備方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。如，參見WO97/10887中所披露的合成方法。
可以制備具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的一種方法中涉及了具有結(jié)構(gòu)通式(II)的化合物與含有胺的載體基質(zhì)的反應(yīng) 其中R1、Z、R2、Y、X1和X2同上文與結(jié)構(gòu)式(I)有關(guān)的定義。
可以制備具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的另一種方法涉及到具有結(jié)構(gòu)通式(III)的化合物與含胺的載體基質(zhì)的反應(yīng)
其中R1、Z、X1和X2同上文與結(jié)構(gòu)式(I)有關(guān)的定義，形成具有結(jié)構(gòu)式(IV)的化合物 其中R1、Z、X1和X2同上文與結(jié)構(gòu)式(I)有關(guān)的定義，R3代表可任選經(jīng)由間隔基連接的載體基質(zhì)，然后進(jìn)行結(jié)構(gòu)式(IV)化合物與結(jié)構(gòu)式H-Y-R2的化合物的反應(yīng)。
在進(jìn)一步的一般制備方法中，結(jié)構(gòu)式(V)的化合物依次與結(jié)構(gòu)式H-Z-R1和H-Y-R2的化合物反應(yīng) 其中X1和X2同上文與結(jié)構(gòu)式(I)有關(guān)的定義，R3代表可任選經(jīng)由間隔基連接的載體基質(zhì)。
配體鑒別配體可如下進(jìn)行鑒別。合成模擬庫并篩選結(jié)合朊病毒分析物的能力。采用常規(guī)方法，如通過標(biāo)識對朊病毒蛋白的特異性抗體，朊病毒分析物通過柱，并檢測結(jié)合的分析物。分析物所結(jié)合的微粒被鑒定為合適的配體。
使用配體去除朊病毒結(jié)合朊病毒或朊病毒片段的配體對多種分析、制備和診斷應(yīng)用有用。朊病毒結(jié)合配體可以在串珠或薄膜載體上固定，用于從樣本中結(jié)合和去除朊病毒。在足以造成朊病毒-配體復(fù)合物形成以及樣本中的朊病毒蛋白與配體相結(jié)合的條件下，使與配體結(jié)合的固相接觸樣本，如生物液體。然后從樣本中分離出固相，從而從樣本中去除結(jié)合了連接在固相上的配體的朊病毒蛋白。例如，現(xiàn)有技術(shù)中已知的樹脂和薄膜去除污染物的方法，見Baumbach等的專利號為5,834,318的美國專利和WO 01/77687。
生物樣本的例子包括但不限于，血液、獲自血液的成分和血清。另外的生物樣本包括腦脊液、尿、唾液、乳、導(dǎo)管液、淚或精液。其它樣本可以包括膠原、腦和腺體提取物。
現(xiàn)有技術(shù)中已知許多在各種固體表面固定分子的方法。例如，固體表面可以是薄膜(如硝基纖維素)、微量滴定皿(如PVC，聚丙稀或聚苯乙烯)、試管(玻璃或塑料)、浸漬片(如玻璃、PVC、聚丙稀、聚苯乙烯、乳膠等)、微量離心管，或玻璃、二氧化硅、塑料、金屬或聚合物串珠。所希望的組件可以是共價連接，或通過非特異性連接的非共價連接。
多種有機(jī)和無機(jī)聚合物，天然和合成的，可以用作固體表面材料。聚合物的例子包括聚乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚(對苯二甲酸亞乙酯)、人造絲、尼龍、聚(丁酸乙烯基酯)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、硅樹脂、聚甲醛、纖維素、醋酸纖維素、硝基纖維等?？刹捎玫钠渌牧?，包括紙、玻璃、陶瓷、金屬、非金屬、半導(dǎo)體材料、結(jié)合劑等。另外，可以使用形成凝膠的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)(如明膠劑)、脂多糖、硅酸鹽、瓊脂糖和聚丙烯酰胺。形成幾種水相的聚合物也適用，如葡聚糖、聚亞烷基二醇或表面活性劑、如磷脂、長鏈(12-24碳原子)烷基銨鹽等。當(dāng)固體表面為多孔時，根據(jù)系統(tǒng)的性質(zhì)可以采用各種孔徑。另外，在固體表面的聚合作用過程中，可以合并使用肽。
在表面的制備中，可以采用多種不同材料，如疊層，以獲得各種性質(zhì)。例如，蛋白涂層，諸如明膠可用于避免非特異連接、簡化共價結(jié)合和增強(qiáng)信號檢測等。
如果希望化合物和表面間為共價結(jié)合，表面將通常為多功能的或能夠多功能化的。可出現(xiàn)于表面并用于連接的功能基團(tuán)包括羧酸、醛、氨基、氰基、烯基、羥基、巰基等。多種化合物與多種表面的連接方法是公知的，并在文獻(xiàn)中有詳細(xì)說明。
通過使用親和色譜法，朊病毒蛋白也可在樣本中從其它蛋白質(zhì)中分離出來。根據(jù)本發(fā)明的配體可以連接到固體載體上，如樹脂或薄膜，并用于從溶液中結(jié)合和去除朊病毒。在這種情況下，配體可以與固體載體偶聯(lián)，如薄膜或樹脂這樣的惰性載體，朊病毒蛋白結(jié)合到固定試劑上。固定試劑/朊病毒可以通過抗體方法檢測到。如果希望，獲自起始篩選的一種或多種序列可以固定在樹脂上，如聚甲基丙烯酸酯或瓊脂糖?？梢允褂玫钠渌愋偷臉渲ǎ绛傊悄z、交聯(lián)瓊脂糖、復(fù)合交連多糖、次乙酰塑料、PVDF、丙烯酸酯、聚苯乙烯和纖維素。也可使用膜，例如尼龍和纖維素。樹脂可以是聚甲基丙烯酸酯樹脂。
使用配體檢測朊病毒此處所描述的配體也用于在生物樣本中檢測朊病毒蛋白的存在或定量的方法。在足以造成朊病毒蛋白和配體間的復(fù)合物形成的條件下，用配體接觸上文所列出的那些生物樣本，但不僅限于這些樣本。然后通過常規(guī)方法檢測復(fù)合物，從而檢測生物樣本中朊病毒的存在。
復(fù)合物的檢測通過標(biāo)識配體，將標(biāo)識的配體和樣本結(jié)合，檢測被標(biāo)識的配體-朊病毒復(fù)合物來進(jìn)行。配體在配體的產(chǎn)生過程中被標(biāo)識，如在肽的合成過程中，或通過以共價或非共價形式將標(biāo)記連接到配體上來結(jié)合標(biāo)記?？晒┻x擇的是，標(biāo)識配體的特異性結(jié)合分子，如抗體，間接的檢測到復(fù)合物。已知多種標(biāo)記和結(jié)合技術(shù)，報告于大量的科學(xué)和專利文獻(xiàn)中。適用的標(biāo)記包括放射性核苷酸、酶、底物、輔助因子、抑制劑、熒光部分、化學(xué)發(fā)光部分、磁粉等。
檢測可以任何已知方法進(jìn)行，如免疫印跡法、western blot技術(shù)、凝膠可動性變速測定、熒光原位雜交分析(FISH)、放射示蹤或生物發(fā)光標(biāo)記示蹤、核磁共振、電子順磁共振、停流光譜學(xué)、柱色譜法、毛細(xì)管電泳，或其它根據(jù)大小和/或電量變更示蹤分子的方法。測定中使用的特定標(biāo)記或可探測基團(tuán)不是本發(fā)明的關(guān)鍵方面?？商綔y基團(tuán)可以是具有可探測的物理或化學(xué)性質(zhì)的任何材料。這種可探測標(biāo)記已得到了良好發(fā)展，一般任何這種方法中使用的標(biāo)記均可應(yīng)用于本發(fā)明的方法中。因而，標(biāo)記是任何可以被分光計、光化學(xué)、生物化學(xué)、免疫化學(xué)、電、光學(xué)或化學(xué)手段檢測到的成分。本發(fā)明中的有用的標(biāo)記包括熒光染料(如異硫氰酸熒光素、得克薩斯紅色、若丹明等)、放射示蹤(如3H、125I、35S、14C、或32P)、酶(LacZ，CAT、辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶及其它在EIA或ELISA中通常用作可檢測酶的酶)，色度法標(biāo)記如膠態(tài)金或有色玻璃或塑料(如聚苯乙烯、聚丙烯、乳液等)珠粒。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中熟知的方法，標(biāo)記可以與所希望的組分直接或間接偶聯(lián)。如上文所指出的，可以使用多種標(biāo)記，標(biāo)記的選擇取決于所要求的分析敏感性、化合物結(jié)合的容易程度、穩(wěn)定性要求、可利用的儀器和處理規(guī)定。
非放射性標(biāo)記通常以間接手段連接。一般的，配體分子(如生物素)共價結(jié)合于分子。然后配體連接到本身即可檢測到的或共價結(jié)合到信號系統(tǒng)的抗-配體(如抗生蛋白鏈菌素)分子上，如可檢測到的酶、熒光化合物或化學(xué)發(fā)光化合物。許多配體和抗-配體可以使用。當(dāng)配體有天然的抗-配體時，如生物素、甲狀腺素和皮質(zhì)醇，它可在與標(biāo)識的、天然的抗-配體的結(jié)合中使用?？蛇x擇的，任何半抗原或抗原化合物可在與抗體的結(jié)合中使用。
分子也可直接連接到信號產(chǎn)生化合物，如通過酶素或熒光發(fā)色團(tuán)的結(jié)合。作為標(biāo)記物的酶素主要是水解酶，特別是磷酸酶、酯酶和糖苷酶，或氧化還原酶，特別是過氧化物酶。熒光化合物包括熒光素及其衍生物、若丹明及其衍生物、丹酰、傘形酮等。化學(xué)發(fā)光化合物包括熒光素和2，3-二氫酞嗪二酮，如魯米諾。
檢測標(biāo)記的方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是熟知的。因而，例如，當(dāng)標(biāo)記為放射性標(biāo)記時，檢測方法包括閃爍計數(shù)器或照相膠片，如放射自顯影術(shù)。當(dāng)標(biāo)記是熒光標(biāo)記時，可以通過用適當(dāng)波長的光激發(fā)熒光并檢測所造成的熒光來進(jìn)行檢測，如通過顯微鏡檢查法、目檢、經(jīng)照相膠片，通過使用電子探測器如電荷耦合器件(CCDs)或光電倍增管等。類似地，酶標(biāo)記通過提供適當(dāng)?shù)拿缸饔玫孜?，檢測所得反應(yīng)產(chǎn)物來檢測。最后，簡單的色度法標(biāo)記可以通過觀察與標(biāo)記相關(guān)的顏色來檢測。因此，在多種浸漬片測定法中，結(jié)合的金通常顯示粉紅色，而各種結(jié)合的珠粒顯示珠粒的顏色。
本發(fā)明中的配體也可用于檢測從固體材料中提取進(jìn)入溶液的目標(biāo)物。例如，可以用水、有機(jī)溶劑或臨界液提取固體樣本，產(chǎn)生的上清液接觸配體。固體樣本的例子包括獲自動物的產(chǎn)品，特別是那些曾暴露于傳播朊病毒的試劑者，如獲自牛的骨粉。在一些實施方案中配體可用于檢測土壤中存在的朊病毒蛋白。其它固體樣本包括腦組織、角膜組織、糞便、骨粉、牛肉副產(chǎn)品、羊、羊副產(chǎn)品、鹿和麋鹿、鹿和麋鹿的副產(chǎn)品，及其它動物和獲自動物的產(chǎn)品。
可供選擇的是，朊病毒-配體復(fù)合物可以用PK處理。PrPc對PK高度敏感，而PrPsc被部分消解形成PrPres。PrPres分子本身對蛋白水解作用高度抵抗。因而，PK處理將消解PrPc，并將對PK敏感的PrPsc轉(zhuǎn)變?yōu)镻rPres。伴隨PK的去除，PrPres可變性并被抗體如3F4檢測到。
在另一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的配體可用于從PrPc中選擇性濃縮PrPsc。
用配體定量朊病毒配體-朊病毒復(fù)合物，或可替代的，配體或配體-朊病毒復(fù)合物的抗體可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的大量方法中的任何方法檢測和定量。這些包括分析生化法，如分光光度測定法、射線照相術(shù)、電泳、毛細(xì)管電泳、高效液相色譜法(HPLC)、薄層色譜分析法(TLC)、超擴(kuò)散色譜法等，和各種免疫學(xué)方法，如液體或凝膠沉淀反應(yīng)、免疫擴(kuò)散(單倍或雙倍)、免疫電泳、放射免疫測定(RIAs)、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISAs)、螢光免疫檢驗法的試驗等。
非特異性結(jié)合的還原本領(lǐng)域技術(shù)人員將會認(rèn)識到，在測定中和在從樣本中去除分析物的過程中，常常希望還原非特異性結(jié)合。當(dāng)測定涉及配體或其它固定于固體底物上的捕獲劑時，希望使與固體底物的非特異性結(jié)合的量減至最少。這種還原非特異性結(jié)合的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。典型的，這涉及用蛋白質(zhì)性質(zhì)的組分涂敷底物。特別地，蛋白質(zhì)組分如牛和人血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉和明膠被廣泛使用。
其它分析方法Western blot分析也可以用于檢測和定量樣本中存在的朊病毒蛋白。該技術(shù)一般涉及通過在SDS的存在下，根據(jù)分子量通過凝膠電泳分離樣本產(chǎn)品，轉(zhuǎn)移分離的蛋白質(zhì)到適當(dāng)?shù)墓腆w載體(如硝基纖維素濾器、尼龍濾器或衍生的尼龍濾器)，并用此處所描述的配體孵育結(jié)合的樣本。配體特異結(jié)合到固定在固體載體上的朊病毒肽。這些配體被直接標(biāo)記，或者，可供選擇的，它們可以采用特異結(jié)合到配體的標(biāo)記抗體而被隨后檢測到。
其它分析方法包括脂質(zhì)體免疫測定(LIAs)，它使用設(shè)計的脂質(zhì)體來結(jié)合特定分子(如配體)，并釋放被包裹的試劑或標(biāo)記。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)繼而檢測到所釋放的化學(xué)試劑。
藥物組合物此處所描述的不與載體基質(zhì)偶聯(lián)的配體可用于治療和預(yù)防通過感染有朊病毒組織的哺乳動物所造成的TSEs。通過抑制PrPsc到PrPsc的結(jié)合，配體可以阻止PrPsc的聚合作用。另外，它可以阻止PrPsc到PrPc的抑制性結(jié)合，從而減少PrPsc介導(dǎo)的PrPc到PrPsc的轉(zhuǎn)化，因而延緩了臨床癥狀的出現(xiàn)。此外，配體本身可以通過添加活性劑來將分子定位于PrPsc積聚的位置來修飾其自身。這種組合物適用于各種遞藥系統(tǒng)。
依據(jù)該方法所治療的疾病包括，但不限于BSE、傳染性水貂腦病、貓海綿狀腦病、CWD、CJD、GSS，致命性失眠和vCJD。
藥物組合物設(shè)計為胃腸外、局部(topical)、口服或局限(local)給藥。優(yōu)選藥物組合物為胃腸外給藥，如經(jīng)靜脈、皮下、皮內(nèi)、鼻內(nèi)或肌肉給藥。本發(fā)明從而提供了胃腸外給藥的組合物，該組合物含有上文所描述的溶解或混懸于可接受的載體中的藥劑溶液，優(yōu)選含水載體。多種含水載體可以使用，如水、緩沖液、0.4％鹽水、0.3％甘氨酸、透明質(zhì)酸、纖維蛋白粘合劑等。這些組合物可以通過常規(guī)的、已知的滅菌技術(shù)滅菌，或可以過濾除菌。所產(chǎn)生的含水溶液可以包裝使用，或者凍干，給藥前，凍干制劑與滅菌溶液結(jié)合。根據(jù)所要求接近的生理學(xué)情況，組合物可以包含藥學(xué)上接受的輔料，如pH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑、張力調(diào)節(jié)劑、濕潤劑等，例如，醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、單月桂酸山梨醇酐酯、油酸三乙醇胺酯等。
對于固體組合物，可以使用常規(guī)的無毒固體載體，包括，如藥物等級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂等。對于口服給藥，藥學(xué)上可接受的無毒組合物通過采用任何常規(guī)輔料制成，如那些先前所列出的載體，通常為1-95％的活性成分，更優(yōu)選的濃度為25％-75％。
對于氣霧給藥，活性成分優(yōu)選與表面活性劑和推進(jìn)劑一起以精確等分的形式提供。當(dāng)然，表面活性劑必須是無毒的，優(yōu)選能溶于推進(jìn)劑中。代表性的這種試劑是含6-22個碳原子的脂肪酸，如己酸、辛酸、月桂酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、olesteric、油酸與脂族多元醇或其環(huán)酐的酯或偏酯。也可采用混合酯，如混合或天然的甘油酯。如果希望的話，也可包含載體，如用于鼻內(nèi)遞藥的卵磷脂。
給藥量根據(jù)所正在給予的(藥物)、接受治療的哺乳動物的狀態(tài)和給藥方式而不同。在治療應(yīng)用中，給予已經(jīng)遭受朊病毒感染的哺乳動物足以抑制朊病毒傳播的組合物用量，或者至少是部分阻止疾病及其并發(fā)癥癥狀的量。能夠?qū)崿F(xiàn)這一作用的量被定義為“治療有效量”。這一用途的有效量取決于疾病的嚴(yán)重程度、特定制劑和體重及服用者的一般狀態(tài)。一般的，對于70kg的患者，劑量將在大約1mg-大約5mg每天的范圍內(nèi)，優(yōu)選大約100mg每天。
實施例1朊病毒-結(jié)合配體的鑒別下面表中所描述的朊病毒-結(jié)合配體的定義見下文。
合成模擬庫在環(huán)氧化物活化的Purabead 6XL上，合成了兩個8×8組合的模擬配體庫(庫A和庫B)。PuraBead 6XL是交聯(lián)耐用的多孔串珠狀瓊脂糖載體。合成的方法與WO 97/10887中所描述的相似，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易的重復(fù)。簡言之，合成完成后，每個庫的成員含有通過柔韌的胺化間隔基連接到Purabead 6XL的三嗪部分。每個庫成員的三嗪組件進(jìn)一步用兩個另外的胺取代。
庫A該庫的柔韌胺化間隔基是三個碳原子長，通過交聯(lián)Purabead 6XL與氯甲代氧丙環(huán)和氨的依次反應(yīng)引入的。表1概述了合并到每個庫成員的三嗪上的兩個其它胺，這些胺對應(yīng)于結(jié)構(gòu)式(I)中的-Z-R1和-Y-R2基團(tuán)。胺通過下列數(shù)字被指代，被識別為1/1的配體含有兩個2-金剛胺基團(tuán)，被識別為2/1者含有一個4-(2-氨乙基)-嗎啉基和一個2-金剛胺基團(tuán)，等1＝2-金剛胺
2＝4-(2-氨乙基)-嗎啉3＝1-(2-氨乙基)-哌啶4＝1-(2-氨乙基)-哌嗪5＝(+/-)-2-氨基降冰片烷6＝1-(2-氨基丙烷)-2-吡咯烷酮7＝3-氨基喹寧環(huán)8＝1-(2-羥乙基)-哌嗪9＝N，N-二甲基氨乙二胺表1

設(shè)定的樹脂上載荷配體的量是12mmol/g，根據(jù)通過在加入胺化間隔基后測定游離氨基，及測定向胺化間隔基中加入三氯三嗪后氯化物的釋放確定。
庫B該庫的柔韌胺化間隔基是十個碳原子長，通過交聯(lián)Purabead 6XL與1，4-丁二醇二環(huán)氧甘油醚和氨依次反應(yīng)引進(jìn)。表2概述了合并到每個庫成員的三嗪上的兩個其它的胺。胺通過下列數(shù)字被指代10＝β-丙氨酸11＝2-氨乙基-吡啶12＝3-氨基苯甲醇13＝苯乙胺14＝酪胺15-4-氟芐胺16-4-甲基芐胺17-2-(4-氯苯)-乙胺18-色胺19-甘氨酸20-L-谷氨酸21-DL-纈氨酸22-5-氨基戊酸23-4-氨基丁酸24-L-酪氨酸25-ε-氨己酸表2

設(shè)定的樹脂上載荷配體的量是19mmol/g，根據(jù)通過在加入胺化間隔基后測定游離氨基，和測定向胺化間隔基中加入三氯三嗪后氯化物的釋放確定。
模擬庫結(jié)合篩選庫經(jīng)過了幾次翻轉(zhuǎn)，使得通過重力沉降和引流，然后用1mL水洗滌兩次和1mL 10mM PBS洗滌1次，每孔的pH值為7.4。密封儲器并向每個儲器中加入0.5mL PBS。庫冷藏保存過夜。兩個含1.8mL 10％倉鼠腦組織勻漿(HaBH)的試管從液氮儲存中取出并解凍。向每個試管中加入180μL5％肌氨酰。室溫下滾動孵育混懸液30分鐘，隨后在臺式微量離心機(jī)中以13,400rpm離心10分鐘。收集上清液，用PBS稀釋至1∶10(HaBH最終稀釋成1∶100)。經(jīng)重力對庫進(jìn)行引流，每個儲器中加入500μL HaBH溶液，并經(jīng)重力引流至收集皿中。一旦儲器引流完成，每個儲器用另外500μL PBS清洗，并收集在同一個收集皿中。該收集皿被標(biāo)注為‘非結(jié)合’。將500μL含1M NaCl的PBS加入到每個孔中，收集在另一個標(biāo)記為‘鹽洗脫’的收集皿中，隨后用500μL2％醋酸溶液，也收集在一個標(biāo)記為‘醋酸洗脫’的收集皿中。每個樹脂的26μL等分液被轉(zhuǎn)移至微量離心管中，儲存并用于分析剩余的結(jié)合朊病毒。非結(jié)合、鹽洗脫和醋酸洗脫溶液在收集皿中冷凍。
最終濃度為1∶200和1∶500的HaBH溶液稀釋液用作SDS-PAGE和western blot技術(shù)的對照。
未結(jié)合合部分的western blot和SDS PAGE分析將每個‘未結(jié)合’樣本的50μL加入到50μL2X樣本緩沖/還原劑(Invitrogen NuPAGE LDS樣本緩沖液4X(25μL)、InvitrogenNuPAGE樣本還原劑(10μL)和ACS級水(15μL)的混合物)。每個試管在90℃加熱10分鐘。
對雙份凝膠劑進(jìn)行實驗測定，對全蛋白質(zhì)進(jìn)行western blot和SDSPAGE分析。17個儲器凝膠中每個樣本的信息如下

用去離子水漂洗17-儲器NuPAGE凝膠夾盒。去除白色條帶和梳子(comb)，用1X NuPAGE MES電泳緩沖液(Cat#NP0002)沖洗泳道，將夾盒置于Xcell Mini-Gel Module(或適合的)的凝膠貯器中。中心貯器填充以200mL含500μLNuPAGE抗氧劑(Cat#NP0005)的1XNuPAGE MES電泳緩沖液。檢查滲漏后，以1X NuPAGE MES電泳緩沖液(未加抗氧劑)填充外部貯器。將Mini-Gel Module連接到適合的電源，在持續(xù)200V下凝膠電泳大約45分鐘，直至染料前沿(dye front)在凝膠底部的0.5cm之內(nèi)。
SDS PAGE將凝膠從凝膠夾盒中去除，并用ACS水沖洗(25mL，5分鐘)。在用ACS水洗滌脫色(25mL，1小時)前，用Invitrogen SimplyBlueSafestain將凝膠染色1小時以上。
western blot技術(shù)用去離子水沖洗17-儲器的NuPAGE凝膠夾盒(cat.#NP0349)，并用1X NuPAGE電泳緩沖液沖洗泳道。凝膠放置于Xcell Mini-GelModule(Invitrogen cat#EI0001)或適合的裝置中。下電泳槽從儲備溶液(Invitrogen 20X NuPAGE MES電泳緩沖液cat#NP0002或#NP0002-02)中填充1X電泳緩沖液。上電泳槽填充以含抗氧劑的1X電泳緩沖液(Invitrogen cat#NP0005)。
向每一樣本中加入含還原劑的樣本緩沖液(Invitrogen cat#NP0007和cat#NP0004)，并將樣本在90℃加熱10分鐘，短暫離心，每個樣本負(fù)荷5μL。也負(fù)荷5μL分子量標(biāo)記物(Invitrogen cat#LC5925)。在恒定200V下，凝膠電泳45分鐘。電泳結(jié)束后，從裝置中去除凝膠夾盒，打開，去除凝膠。將凝膠在冷凍轉(zhuǎn)移電泳緩沖液中浸漬5分鐘。
在甲醇中浸濕轉(zhuǎn)移膜，轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)移電泳緩沖液，攪動孵育2×10分鐘。從儲備溶液中的電極轉(zhuǎn)移電泳緩沖液(Invitrogen cat#NP0006-1)是通過加入20％甲醇和抗氧劑制備的，使用前冷卻。以冷卻電極轉(zhuǎn)移電泳緩沖液半填充轉(zhuǎn)移室貯器(BioRad cat#170-4070)。用足夠量的冷卻電極轉(zhuǎn)移電泳緩沖液來準(zhǔn)備塑料BioRad轉(zhuǎn)移儲片夾托盤中的BioRad轉(zhuǎn)移單元夾盒。轉(zhuǎn)移夾層通過在海綿、濾紙、PVDF轉(zhuǎn)移膜(Invitrogen cat.#LC2005)、凝膠、濾紙和海綿序列中層疊而制備。夾盒被折疊并夾閉。在腔內(nèi)為室溫下，以恒定100V轉(zhuǎn)移凝膠45分鐘。
轉(zhuǎn)移后，在室溫下，在獲自抗-小鼠Invitrogen Western Breeze化學(xué)發(fā)光試劑盒(cat.# WB7104)的25mL Western Breeze阻斷劑中，將膜置于干凈的盤子并在搖動臺上孵育1小時。
然后，在冷凍下，在濃度為1∶10000的Signet 3F4主要抗體3F4小鼠單克隆抗體(SIGNET，cat#9620)原液的20mL新鮮WesternBreeze主要抗體稀釋液中的稀釋液中，將膜在搖動臺上孵育過夜。將印跡在20mL Western Breeze抗體洗液中漂洗3次，然后，在室溫下，在濃度為1∶10,000的KPL-AP二級抗體(KPL，cat.#075-1802)的20mL Western Breeze Primary Antibody Diluent溶液中，將膜在搖動臺上孵育60分鐘。按上文方法沖洗印跡，然后在室溫下，用20mL 20mM Tris-HCl、1mM MgCl2在pH9.8下洗滌10分鐘。將膜轉(zhuǎn)移至干燥干凈的盤中，并在輕微攪動下用5mL Western Breeze預(yù)混化學(xué)發(fā)光底物(CDP Star)浸漬5分鐘。使堿性磷酸酶反應(yīng)30分鐘以上。在折疊保護(hù)器中將印跡轉(zhuǎn)移至膠片盒并在室溫下暴露于膠片(Amersham cat.#RPN-3130K)5分鐘，在顯影劑中顯影。
實施例2用連接于瓊脂糖的配體5/4捕獲紅細(xì)胞濃縮物中的PrPc按照實施例1中所描述的方法合成含連接于基礎(chǔ)基質(zhì)Purabead6XL的配體5/4的吸附劑從而提供了具有結(jié)構(gòu)式(VI)的化合物
瓊脂糖 解凍濃度為10％w/v的正常倉鼠腦組織勻漿的PBS緩沖液(100μl)樣本，加入10μl 10％(w/v)的十二烷基肌氨酸鈉，渦旋混合并在濕冰中保存30分鐘。在+4℃下，以14,000rpm離心混合物5分鐘，去除上清液。將人紅細(xì)胞濃縮物(RBCC；250ml)與Adsol(110ml)混合，并通過倒轉(zhuǎn)輕柔混合。去除稀釋的RBCC(1.8ml)，并與0.2ml倉鼠腦組織勻漿溶液混合。
將化合物(VI)混懸于40mM pH7.0的枸櫞酸鹽緩沖液/280mM NaCl的1∶1混懸液(400μl)，加入到1.0ml微型柱，并使得在重力下引流。將RBCC中的倉鼠腦組織勻漿(1ml)移液至設(shè)定的親和吸附劑中并允許引流。隨后用1ml混懸緩沖劑洗滌吸附劑并使得引流。收集兩個流動通過部分，合并、于-20℃儲存。
通過混懸于0.5ml混懸緩沖劑中并轉(zhuǎn)移到冷凍小瓶，從柱上去除親和吸附劑。在讓小瓶內(nèi)容物沉淀及調(diào)節(jié)上清液體積以提供1∶1的漿液后，記錄所轉(zhuǎn)移的親和吸附劑的體積。將樣本(200μl)轉(zhuǎn)移至微量離心管中，用于如實施例1中所描述的結(jié)合朊病毒的SDS-PAGE和Western blot技術(shù)分析。
通過Western blot技術(shù)與倉鼠PrPc相應(yīng)的強(qiáng)譜帶的存在表明，連接于Purabead 6XL(珠粒狀瓊脂糖基質(zhì))的配體5/4能夠從人紅細(xì)胞濃縮物中選擇性結(jié)合PrPc。
實施例3連接于聚甲基丙烯酸酯樹脂珠粒的朊病毒結(jié)合配體的制備本實施例描述了多種在庫A和B中使用的含胺配體的制備，其是在胺化聚甲基丙烯酸酯載體上(Toyopearl 650M)，而不是瓊脂糖。
3.1胺化Toyopearl 650M的二氯三嗪衍生物將Toyopearl AF-氨基-650M(36g)用10份(36mL)RO-水在燒結(jié)漏斗上洗滌，然后將凝膠引流并在1M磷酸氫二鉀pH7.0(36mL)中重懸浮。將凝膠引流并隨后在1M磷酸二氫鉀pH7.0(27mL)和RO-水(27mL)中重混懸。將這一混合物攪拌轉(zhuǎn)移至玻璃反應(yīng)器，加入54mL丙酮。將混合物冷卻至0℃，然后加入溶解于冷(0℃)丙酮(27mL)中的氰尿酰氯(2.7g)，0-4℃下攪拌混合物1小時。將所形成的活性產(chǎn)物二氯三嗪漿液倒在燒結(jié)玻璃漏斗上，并用含水丙酮(50％v/v，180mL)、RO-水(180mL)、含水丙酮(50％v/v，180mL)和RO-水(360mL)洗滌。
3.2中間產(chǎn)物單氯三嗪如下由二氯三嗪-活化的Toyopearl 650M制備各種中間產(chǎn)物單氯三嗪3.2.1 1-(2-氨乙基)哌啶(胺3)的單氯三嗪胺化Toyopearl 650M加合物是這樣制備的通過在RO-水(28.8mL)中溶解1-(2-氨乙基)哌啶(0.47g)并將溶液冷卻至4℃。將該混合物加入到7g已在燒結(jié)玻璃漏斗上引流水的二氯三嗪-活化的胺化Toyopearl中，轉(zhuǎn)移至塑料反應(yīng)器并冷卻至4℃。在4℃將混合物震搖2h，然后將混合物倒入燒結(jié)玻璃漏斗，用含水DMF(50％v/v，35mL)、RO-水(70mL)洗滌，然后在燒結(jié)漏斗上引流。
3.2.2 (+/-)2-氨基降冰片烷(胺5)的單氯三嗪胺化Toyopearl650M加合物是這樣制備的通過在含水DMF(13.3％v/v，57.68mL)中溶解(+/-)2-氨基降冰片烷(0.82g)，并將溶液冷卻至4℃。將該混合物加入到14g已在燒結(jié)玻璃漏斗上流水的二氯三嗪-活化的胺化Toyopearl中，轉(zhuǎn)移至塑料反應(yīng)器并冷卻至4℃。在4℃將混合物震搖2h，然后將混合物倒入燒結(jié)玻璃漏斗，用含水DMF(50％v/v，70mL)、RO-水(140mL)洗滌，然后在燒結(jié)物上引流。
3.2.3 L-谷氨酸(胺20)的單氯三嗪胺化Toyopearl 650M加合物是這樣制備的在含水DMF(50％v/v，28.0mL)和含水氫氧化鈉(10M，0.7mL)中溶解L-谷氨酸(0.515g)，然后將溶液冷卻至4℃。將該混合物加入到已在燒結(jié)玻璃漏斗上引流水的二氯三嗪-活化的胺化Toyopearl(7g)中，轉(zhuǎn)移至塑料反應(yīng)器并冷卻至4℃。在4℃將混合物震搖70分鐘，然后將混合物倒入燒結(jié)玻璃漏斗，用含水DMF(50％v/v，70mL)、RO-水(140mL)洗滌，然后在燒結(jié)漏斗上引流。
3.2.4 5-氨基戊酸(胺22)的單氯三嗪胺化Toyopearl 650M加合物是這樣制備的在含水DMF(50％v/v，28.5mL)和含水氫氧化鈉(10M，0.35mL)中溶解5-氨基戊酸(0.41g)，并將溶液冷卻至4℃。將該混合物加入到7g已在燒結(jié)玻璃漏斗上引流水的二氯三嗪-活化的胺化Toyopearl中，轉(zhuǎn)移至塑料反應(yīng)器并冷卻至4℃。在4℃將混合物震搖60分鐘，然后將混合物倒入燒結(jié)玻璃漏斗，用含水DMF(50％v/v，70mL)、RO-水(140mL)洗滌，然后在燒結(jié)漏斗上引流。
3.2.5甘氨酸(胺19)的單氯三嗪胺化Toyopearl 650M加合物是這樣制備的在含水DMF(50％v/v，61.4mL)和含水氫氧化鈉(10M，0.75mL)中溶解甘氨酸(0.563g)，并將溶液冷卻至4℃。將該混合物加入到15g已在燒結(jié)玻璃漏斗上引流水的二氯三嗪-活化的胺化Toyopearl中，轉(zhuǎn)移至塑料反應(yīng)器并冷卻至4℃。在4℃將混合物震搖60分鐘，然后將混合物倒入燒結(jié)玻璃漏斗，用含水DMF(50％v/v，75mL)、RO-水(150mL)洗滌，然后在燒結(jié)漏斗上引流。
3.3最終產(chǎn)物用于第二步反應(yīng)的胺溶液的制備如下3.3.1將1-(2-氨乙基)哌啶(胺3；0.94g)溶于RO-水(10.8mL)中。
3.3.2將1-(2-氨乙基)哌嗪(胺4；1.90g)溶于RO-水(21.6mL)中，然后分成兩份(每份11.8mL)。
3.3.3將2-(2-氨乙基)吡啶(胺11；0.84mL)溶于含水DMF(50％v/v，10.9mL)中。
3.3.4將苯乙胺(胺13；0.88mL)溶于含水DMF(50％v/v，10.9mL)中，制成兩等份。
3.3.5將酪胺(胺4；0.96g)溶于DMF(10.8mL)中。
在塑料反應(yīng)器中，通過將適當(dāng)?shù)膯温热褐虚g產(chǎn)物和第二步的胺相組合而配制反應(yīng)混合物，反應(yīng)器中含有單氯三嗪中間產(chǎn)物(7g)和所述胺溶液，總?cè)軇w積為35mL，包括在7g單氯三嗪中間產(chǎn)物中的5.75ml RO-水。每個反應(yīng)器在60℃翻轉(zhuǎn)24h。然后用含水DMF(50％v/v，35mL)、RO-水(35mL)、0.1M鹽酸(35ml)、含氫氧化鈉(0.2M)的含水異丙醇(30％v/v)(35ml)、RO-水(70mL)和含水乙醇(20％v/v，21mL)洗滌凝膠，并于4℃儲存在含水乙醇(20％v/v)中。
實施例4用連接于疑甲基丙烯酸酯樹脂的朊病毒結(jié)合配體捕獲紅細(xì)胞濃縮物中的PrPsc如實施例3中所述合成包含連接于珠粒狀聚甲基丙烯酸酯基質(zhì)(Toyopearl)的親和配體的化合物。采用所描述的正常倉鼠腦組織勻漿方法(實施例2)，制備感染了綿羊瘙癢病的、加標(biāo)到人紅細(xì)胞濃縮物(RBCC)中的倉鼠腦提取物(1％w/v)。PrPsc通過聚甲基丙烯酸酯親和吸附劑的結(jié)合，通過將吸附劑漿料填入1ml微型柱中并采用實施例2中所記載的方法以加標(biāo)RBCC進(jìn)行激發(fā)的方式來評價。從親和吸附劑提取的樣本的SDS-PAGE和western blot分析如實施例1中所述進(jìn)行，但其中第二組樣本等份液在與SDS-PAGE還原緩沖液混合之前，用蛋白酶K處理。
Western blot分析表明含配體5/4、19/13、5/3、22/13和19/14|的聚甲基丙烯酸酯樹脂均顯示出在人紅細(xì)胞濃縮物中對PrPsc的高度親和力。通過+/-蛋白酶K處理所得western blot結(jié)合帶型的對照，證實了PrPsc的結(jié)合。與非處理樣本相比，蛋白酶K處理的樣本中，清楚可見的低分子量帶的存在，確認(rèn)了PrP的蛋白酶K抵抗形式(傳染性形式)的結(jié)合。
實施例5用連接于疑甲基丙烯酸酯樹脂的朊病毒結(jié)合配體捕獲紅細(xì)胞濃縮物中的人散發(fā)性CJD成因朊病毒用1％(w/v)人散發(fā)性CJD腦組織勻漿加標(biāo)的RBCC重復(fù)實施例4中所描述的實驗。Western blot分析表明含配體5/4、19/13、5/3、22/13和3/4的聚甲基丙烯酸酯樹脂均顯示出在人紅細(xì)胞濃縮物中對人散發(fā)性CJK腦中的PrP的高度親和力。
實施例6用連接于聚甲基丙烯酸酯樹脂珠粒的配體5/4捕獲人血漿和人血中的PrPsc如實施例3中所述合成包含連接于珠粒狀聚甲基丙烯酸酯基質(zhì)(Toyopearl)的配體5/4的親和吸附劑。采用所描述的正常倉鼠腦組織勻漿和RBCC方法(實施例2)，制備感染了綿羊瘙癢病的、加標(biāo)到人混合血漿和人全血中的倉鼠腦提取物(1％w/v)。PrPsc通過聚甲基丙烯酸酯親和吸附劑的結(jié)合，通過將吸附劑漿料填入1ml微型柱中并采用實施例2中所記載的方法以加標(biāo)血漿和全血進(jìn)行激發(fā)的方式來評價。從親和吸附劑提取的樣本SDS-PAGE和western blot分析如實施例1中所述進(jìn)行，但其中第二組樣本在與SDS-PAGE還原緩沖液混合之前，用蛋白酶K處理。
Western blot分析表明含配體5/4的聚甲基丙烯酸酯樹脂顯示出在人血漿和全血中對PrPsc的高度親和力。通過+/-蛋白酶K處理所得western blot結(jié)合帶型的對照，證實了PrPsc的結(jié)合。與非處理樣本相比，蛋白酶K處理的樣本中，清楚可見的低分子量帶的存在，確認(rèn)了PrP的蛋白酶K抵抗形式(傳染性形式)的結(jié)合。
對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，即，配體5/4和此處所描述的連接于載體基質(zhì)如聚甲基丙烯酸酯的其它配體對于從多種血液成分，包括全血、RBCC和血漿中捕獲和濃縮多種朊病毒蛋白極為有用。因而，這種材料對于從這些成分中去除PrP，以及作為濃集PrP的手段來幫助后繼的檢測和定量，都有很大價值。
盡管與此處所描述的方法和材料相似或等同者也可用于實踐或檢驗本發(fā)明，但適合的方法和材料見于上文的描述。所有公開出版物、專利申請、此處所提到的專利和其它文獻(xiàn)，全部引入作為參考。另外，材料、方法和實施例僅作為舉例說明而非意圖加以限制。
上述說明用于描述與本發(fā)明相關(guān)的各種具體實施方式
。對于這些實施方式和/或結(jié)構(gòu)可做各種變化、增加和刪除，而不脫離本發(fā)明的范圍和主旨。
權(quán)利要求
1.具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的用途 其中R1和R2相同或不同，各自為任選被取代的烷基、任選被取代的環(huán)烷基、任選被取代的芳基或任選被取代的雜芳基；R3是氫或芳基取代基或者R3是任選經(jīng)由間隔基連接的固體載體；Z代表氧原子、硫原子或NR4；Y代表氧原子、硫原子或NR5；其中R4和R5可以相同或不同，表示氫，任選被取代的含1-6個碳原子的烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的芐基，或任選被取代的β-苯乙基；和X1和X2中的一個表示氮原子，X1和X2中另一個表示氮原子或CR6，其中R6表示氫或芳基取代基；用于與朊病毒蛋白的親和結(jié)合。
2.一種檢測、和/或去除樣本中朊病毒蛋白的方法，該方法包括用具有權(quán)利要求1中所定義的結(jié)構(gòu)式(I)的化合物接觸樣本。
3.一種治療或延緩人或動物受試者中朊病毒相關(guān)病理進(jìn)展的方法，該方法包括給予受試者治療有效量的如權(quán)利要求1所定義的具有結(jié)構(gòu)式(I)的未與固體載體結(jié)合的化合物。
4.具有如權(quán)利要求1所定義的結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的應(yīng)用，在制造用于治療朊病毒相關(guān)病理的藥物中不與固體載體相結(jié)合。
5.權(quán)利要求1中所定義的具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物，其中R3的定義同權(quán)利要求1；X1和X2的定義同權(quán)利要求1；Y的定義同權(quán)利要求1；Z的定義同權(quán)利要求1；R1代表-(CH2)m-Q1基團(tuán)，其中m為0-7，Q1代表-CR11R12R13或-NR13R12，其中R11、R12和R13獨立代表氫、烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，或者R11、R12和R13中的兩個與它們所連接的碳或氮原子一起形成可任選被取代的環(huán)烷基或可任選被取代的雜環(huán)烷基；和R2代表-(CH2)n-Q2基團(tuán)，其中n為0-7，Q2代表-CR21R22R23或-NR21R22，其中R21、R22和R23獨立代表氫、烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，或者R11、R12和R13中的兩個與它們所連接的碳或氮原子一起形成任選被取代的環(huán)烷基或任選被取代的雜環(huán)烷基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中a)X1和X2均為氮；b)Z和Y均為NR4，特別是當(dāng)R4為氫時；c)m為0-4，更優(yōu)選0-3，最優(yōu)選1-3；d)Q1為-NR11R12；R11和R12優(yōu)選與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)烷基；e)n為0-4，更優(yōu)選0-2，最優(yōu)選0；和f)R21和R22與它們所連接的碳原子或氮原子一起形成環(huán)烷基或雜環(huán)烷基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5和6的化合物，其中Q2代表疏水環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，特別是包括至少有6個原子的環(huán)系統(tǒng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求5-7任一項所述的化合物，其中Q1代表雜環(huán)烷基、特別是哌啶基、特別是1-哌啶基，或哌嗪基，特別是1-哌嗪基。
9.權(quán)利要求1所定義的具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物，其中R3的定義同權(quán)利要求1；X1和X2的定義同權(quán)利要求1；Y的定義同權(quán)利要求1；Z的定義同權(quán)利要求1；R1代表亞烷基鏈-(CH2)p-CH3，其中p為0-6，被一個或多個羧基取代，以及任選地被一個或多個額外烷基取代基取代；和R2代表基團(tuán)-(CH2)q-Ar，其中q為0-7，Ar代表可任選被取代的芳基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中a)X1和X2均為氮；b)Z和Y均為NR4，特別是當(dāng)R4為氫時；c)p為0-4，更優(yōu)選0-3；d)R1被一個或兩個羧基取代，這些羧基中至少有一個被亞烷基鏈-(CH2)p-CH3的末端碳原子所攜帶；e)q為0-4，更優(yōu)選0-3，最優(yōu)選1或2；和f)Ar為單環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)芳族基團(tuán)，可任選被一個或多個取代基所取代，這些取代基選自苯基、苯氧基、甲苯基、氯芐基、甲氧芐基、氟芐基、吡啶基和吲哚基。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R1為羧甲基、4-羧基丁基或1-(1，3-二羧基)丙基。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11的化合物，其中Ar是苯基、4-羥基苯基或吡啶基，特別是2-吡啶基。
13.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中R3的定義同權(quán)利要求1；X1和X2均為N；Y和Z均代表NH；m代表2；Q1代表哌啶基或哌嗪基；n代表0或2；和Q2代表1-哌啶基或金剛烷基。
14.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中R3的定義同權(quán)利要求1；X1和X2均為N；Y和Z均代表NH；R1代表羧甲基、4-羧基丁基和1-(1，3-二羧基)丙基；q代表2；和Ar代表苯基、2-吡啶基或4-羥基苯基。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項所要求保護(hù)的用途或方法，其中具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物為權(quán)利要求5-14任一項中所要求保護(hù)的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有結(jié)構(gòu)式(I)的化合物的用途其中R
文檔編號A61K31/53GK101023066SQ200580031622
公開日2007年8月22日 申請日期2005年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月27日
發(fā)明者J·C·皮爾遜, H·R·塔頓, P·V·格蓋爾 申請人:普羅米蒂克生物科學(xué)有限公司