專利名稱：二苯并色烯衍生物及其作為ERβ選擇性配體的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型的取代5H-二苯并[c，g]色烯(chromene)衍生物、其作為雌激素制劑的用途及其制備方法。
背景技術(shù)：
雌激素在哺乳動物組織中的多效性已有文獻(xiàn)報(bào)道，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)雌激素可以影響許多器官系統(tǒng)[Mendelsohn和Karas，New England Journal ofMedicine 3401801-1811(1999)，Epperson等人，Psychosomatic Medicine61676-697(1999)，Crandall，Journal of Womes Health & Gender BasedMedicine 81155-1166(1999)，Monk和Brodaty，Dementia & GeriatricCognitive Disorders 111-10(2000)，Hurn和Macrae，Journal of CerebralBlood Flow & Metabolism 20631-652(2000)，Calvin，Maturitas 34195-210(2000)，F(xiàn)inking等人，Zeitschrift fur Kardiologie 89442-453(2000)，Brincat，Maturitas 35107-117(2000)，Al-Azzawi，Postgraduate MedicalJournal 77292-304(2001)]。雌激素對組織發(fā)揮作用的方式有數(shù)種。最具特色的作用機(jī)制可能是其與雌激素受體的相互作用，從而導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄的改變。雌激素受體是配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，屬于核激素受體超家族。該家族的其他成員包括孕酮、雄激素、糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素受體。與配體結(jié)合后上，這些受體二聚化并激活基因轉(zhuǎn)錄，所述激活基因轉(zhuǎn)錄為直接結(jié)合于DNA上的特定序列(稱作應(yīng)答元件)上或通過與其他轉(zhuǎn)錄因子(例如AP1)相互作用，后者直接與DNA上的特定序列結(jié)合[Moggs和Orphanides，EMBO Reports 2775-781(2001)，Hall等人，Journal of BiologicalChemistry 27636869-36872(2001)，McDonnell，Principles of MolecularRegulation，第351-361頁(2000)]。一類“共調(diào)節(jié)”蛋白也可以與配體-結(jié)合受體相互作用，進(jìn)一步調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄活性[McKenna等人，EndocrineReviews 20321-344(1999)]。已表明，雌激素受體能以配體-依賴和非配體依賴的方式抑制NFκB-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄[Quaedackers等人，Endocrinology1421156-1166(2001)，Bhat等人，Journal of Steroid Biochemistry &Molecular Biology 67233-240(1998)，Pelzer等人，Biochemical &Biophysical Research Communications 2861153-7(2001)]。
雌激素受體也可以通過磷酸化激活。這種磷酸化是通過如EGF的生長因子介導(dǎo)，在配體缺失的情況下引起基因轉(zhuǎn)錄的改變[Moggs andOrphanides，EMBO Reports 2775-781(2001)，Hall等人，Journal ofBiological Chemistry 27636869-36872(2001)]。
雌激素影響細(xì)胞的另一種不太特異的方式是通過所謂的膜受體。這種受體的存在是有爭議的，但已報(bào)導(dǎo)雌激素能從細(xì)胞激發(fā)非?？焖俚姆腔蚪M應(yīng)答。轉(zhuǎn)導(dǎo)這些效應(yīng)的分子本質(zhì)還不清楚，但有證據(jù)表明其至少與雌激素受體的核形式相關(guān)[Levin，Journal of Applied Physiology 911860-1867(2001)，Levin，Trends in Endocrinology & Metabolism 10374-377(1999)]。
迄今已發(fā)現(xiàn)兩種雌激素受體。第一種雌激素受體在大約15年前被克隆，現(xiàn)稱作ERα[Green等人，Nature 320134-9(1986)]。第二種受體發(fā)現(xiàn)較晚，稱作ERβ[Kuiper等，Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America 935925-5930(1996)]。針對ERβ的早期研究主要集中在確定其對各種配體的親合力，發(fā)現(xiàn)其與ERα有所不同。已繪出Erβ的嚙齒類動物中的組織分布圖，與ERα不一致。如小鼠和大鼠子宮的組織ERα的表達(dá)占優(yōu)勢，而小鼠和大鼠的肺則ERβ的表達(dá)占優(yōu)勢[Couse等人，Endocrinology 1384613-4621(1997)，Kuiper等人，Endocrinology 138863-870(1997)]。即使在同一器官，ERα和Erβ的表達(dá)也會區(qū)室化。例如，在小鼠的卵巢，Erβ在顆粒細(xì)胞高表達(dá)，而ERα則局限與卵泡內(nèi)膜細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞[Sar和Welsch，Endocrinology140963-971(1999)，F(xiàn)itzpatrick等人，Endocrinology 1402581-2591(1999)]。然而，有證據(jù)表明受體可以共表達(dá)，并有體外研究證據(jù)表明ERα和Erβ可形成異源二聚體[Cowley等人，Journal of Biological Chemistry27219858-19862(1997)]。
效力最強(qiáng)的內(nèi)源雌激素是17β-雌二醇。已描述有大量的化合物可以模仿或阻斷17β-雌二醇的活性。具有與17β-雌二醇大致相同的生物學(xué)效應(yīng)的化合物被稱作“雌激素受體激動劑”。當(dāng)與17β雌二醇結(jié)合時(shí)，阻斷其效應(yīng)的化合物被稱作“雌激素受體拮抗劑”。實(shí)際上，在雌激素受體激動劑和雌激素受體拮抗劑活性之間存在連續(xù)區(qū)(continuum)，一些化合物的確在一些組織中作為雌激素受體激動劑，但在另一些組織中作為雌激素受體拮抗劑。這些具有混合活性的這些化合物被稱作選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMS)，在治療上非常有用(例如EVISTA)[McDonnell，Journalof the Society for Gynecologic Investigation 7S10-S15(2000)，Goldstein等人，Human Reproduction Update 6212-224(2000)]。為何相同化合物具有細(xì)胞特異效果的確切原因尚未闡明，但可能是由于受體構(gòu)象和/或共調(diào)節(jié)蛋白周圍環(huán)境的差異。
知曉雌激素受體與配體結(jié)合時(shí)采取不同的構(gòu)象已有一段時(shí)間。但最近才揭示出這些變化的結(jié)果和細(xì)微差異。通過與各種配體共結(jié)晶，已分辨了ERα和ERβ的三維結(jié)構(gòu)，明確在雌激素受體拮抗劑(空間阻礙了受體-共調(diào)節(jié)蛋白相互作用所需要的蛋白質(zhì)序列)存在下螺旋12的重新定[Pike等人，Embo 184608-4618(1999)，Shiau等人，Cell 95927-937(1998)]。此外，已用噬菌體展示技術(shù)來識別不同配體存在下，與雌激素受體相互作用的肽[Paige等人，Proceedings of the National Acedemy of Sciences of theUnited States of America 963999-4004(1999)]。例如，識別出不同與結(jié)合到全雌激素受體激動劑17β-雌二醇上和二乙基己烯雌酚的ERα的肽。另一種肽不同與結(jié)合到ERα和ERβ上的氯芷酚。這些數(shù)據(jù)表明每種配體可使受體呈現(xiàn)獨(dú)特的無法預(yù)測的構(gòu)象，所述構(gòu)象具有不同的生物活性。
如上所述，雌激素影響多種生物過程。此外，在涉及性別差異之處(例如發(fā)病率、對壓力的反應(yīng)等)，其解釋可能涉及雄性和雌性之間雌激素水平的差異。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及下式的化合物或其可藥用鹽 其中R1、R2、R3、R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自氫、羥基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或鹵素；R4是氫、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6烷氧基、-CN、-C2-C8鏈烯基、-CHO、芳基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基和吡啶基；條件是R1-R8中的至少一個(gè)不是H。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包含至少一種上述化合物的藥物組合物。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及上述化合物在治療或防止疾病中的用途。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了式I的化合物。
其中
R1、R2、R3、R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自氫、羥基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或鹵素；R4是氫、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6烷氧基、-CN、-C2-C8鏈烯基、-CHO、芳基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基和吡啶基；條件是R1-R8中的至少一個(gè)不是H；在一些實(shí)施方案中，芳基是任選取代的苯基或萘基。在一些實(shí)施方案中，R5、R7和R8優(yōu)選各自獨(dú)立地為氫或鹵素；R4為氫、含有1-6個(gè)碳原子的烷基、含有1-6個(gè)碳原子的烷氧基、鹵素、含有2-8個(gè)碳原子的鏈烯基、-CN、呋喃基、噻吩基或吡啶基。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，R5、R7和R8各自獨(dú)立地為氫或鹵素；R4為氫、含有1-6個(gè)碳原子的烷基、含有1-6個(gè)碳原子的烷氧基、鹵素、含有2-7個(gè)碳原子的鏈烯基、-CN、呋喃基、噻吩基或吡啶基；且R1、R2、R3和R6各自獨(dú)立地為氫、鹵素或羥基。最優(yōu)選地，在一些實(shí)施方案中，R5、R7和R8各自獨(dú)立地為氫或鹵素；R4為氫、含有1-6個(gè)碳原子的烷基、含有1-6個(gè)碳原子的烷氧基、鹵素、含有2-7個(gè)碳原子的鏈烯基、-CN、呋喃基、噻吩基或吡啶基；R1、R2、R3和R6各自獨(dú)立地為氫、鹵素或羥基；且R1、R2、R3和R6中的至少一個(gè)為羥基。
當(dāng)本發(fā)明的化合物含有堿性部分時(shí)，可藥用鹽可由有機(jī)酸或無機(jī)酸，例如，乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、蘋果酸、鄰苯二甲酸、氫氯酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸、以及類似的已知可接受的酸形成。當(dāng)本發(fā)明的化合物含有酸性部分時(shí)，鹽也可以由有機(jī)和無機(jī)堿，例如堿金屬鹽(例如，鈉、鋰或鉀)、堿土金屬鹽、銨鹽、含1-6個(gè)碳原子的烷基銨鹽或每個(gè)烷基中含有1-6個(gè)碳原子的二烷基銨鹽、以及每個(gè)烷基中含有1-6個(gè)碳原子的三烷基銨鹽形成。
本文所用的術(shù)語“烷基”，無論單獨(dú)使用還是作為另一基團(tuán)(例如烷氧基、芳烷基、烷氧基羰基)的一部分使用，除非另行明確說明，指的是取代或未取代的脂族烴鏈，其包括但不限于含有1至12個(gè)碳原子、優(yōu)選1至6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈。例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基和叔丁基包括在術(shù)語“烷基”中。具體包括在“烷基”定義中的是那些被任選取代的脂族烴鏈。本文的定義中所用的碳數(shù)是指碳骨架和碳支鏈，但不包括取代基(例如烷氧基取代等)的碳原子。
本文所用的術(shù)語“鏈烯基”，無論單獨(dú)使用還是作為另一基團(tuán)的一部分使用，指的是取代或未取代的脂族烴鏈，其包括但不限于含有2至8個(gè)碳原子并含有至少一個(gè)雙鍵的直鏈和支鏈。優(yōu)選地，鏈烯基部分含有1或2個(gè)雙鍵。此類鏈烯基部分可以以E或Z構(gòu)型存在，且本發(fā)明的化合物包括這兩種構(gòu)型。具體包括在“鏈烯基”定義中的是被任選取代的那些脂族烴鏈。連接到鏈烯基上的雜原子(例如O、S或N-R1)不應(yīng)該連接到與雙鍵鍵合的碳原子上。
本文使用的作為基團(tuán)或基團(tuán)的一部分的“芳基”，是指任選取代的芳族5-至13-元單-或雙-碳環(huán)，例如苯基或萘基。優(yōu)選地，含芳基部分的基團(tuán)是環(huán)中含有5至7個(gè)碳原子的單環(huán)。苯基是一種優(yōu)選的芳基。在一些實(shí)施方案中，苯基部分任選被C1-C6烷基、C2-C7鏈烯基、鹵素、羥基、C1-C6烷氧基、-CN、-NO2、氨基、C1-C6烷基氨基、每個(gè)烷基含有1-6個(gè)碳原子的二烷基氨基、硫、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基亞硫酰基、C1-C6烷基磺?；⒑?-7個(gè)碳原子的C2-C7烷氧基羰基、含有2-7個(gè)碳原子的烷基羰基、三氟烷氧基、芐基腈或苯甲?；〈?br> 作為基團(tuán)或基團(tuán)的一部分的雜芳基是指具有一至五個(gè)雜原子(獨(dú)立地為單、氧或硫)的芳族5-至13-元含單-或雙碳環(huán)。優(yōu)選地，含雜芳基部分的基團(tuán)是環(huán)中具有5至7元的單環(huán)，其中，一至兩個(gè)環(huán)元獨(dú)立地選自氮、氧或硫。含芳基或雜芳基部分的基團(tuán)任選如下所述被取代或未取代。雜芳基的例子包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、苯并噻吩基、異苯并噻吩基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、或喹唑啉基。
術(shù)語“鹵素”包括溴、氯、氟和碘。
本文所述的任選取代的取代基，例如烷基、鏈烯基、芳基或雜芳基，可以被一個(gè)或多個(gè)(例如1-5或1-3)取代基取代。合適宜的任選取代基可獨(dú)立地選自硝基、氰基、-N(R11)(R12)、鹵素、羥基、羧基、烷基、炔基(例如含有2-7個(gè)碳原子)、環(huán)烷基(例如，含有5-8個(gè)碳原子)、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、烷基烷氧基、烷氧基羧基、烷氧基烷氧基、全氟烷基、全氟烷氧基、芳烷基、烷芳基、羥基烷基、烷氧基烷基、烷硫基、烷基亞硫酰基、烷基磺酰基、-S(O)2-N(R11)(R12)、-C(＝O)-N(R11)(R12)、(R11)(R12)N-烷基、(R11)(R12)N-烷氧基烷基、(R11)(R12)N-烷基芳氧基烷基、-S(O)s-芳基(其中s＝0-2)或-S(O)s-雜芳基(其中s＝0-2)；其中R11和R12各自獨(dú)立地為氫、未取代的(C1-C6)烷基、未取代的(C3-C7)環(huán)烷基、芳基、芳基-(C1-C3)烷基、烷氧基-(C1-C3)烷基、芳硫基-(C1-C3)烷基、雜芳基、雜芳基-(C1-C3)烷基、雜芳氧基-(C1-C3)烷基或雜芳硫基-(C1-C3)烷基；或如果任選連接在一起可以以亞烷基的形式連接成環(huán)，例如3-8元環(huán)。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，優(yōu)選用于烷基、鏈烯基、炔基或環(huán)烷基的取代基包括硝基、氰基、-N(R11)(R12)、鹵素、羥基、芳基、雜芳基、烷氧基、烷氧基烷基和烷氧基羧基。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，優(yōu)選用于芳基和雜芳基的取代基包括-N(R11)(R12)、烷基、鹵素、全氟烷基、全氟烷氧基、芳烷基和烷芳基。取代的烷基和鏈烯基部分的例子包括1-溴乙烯基、1-氟乙烯基、1，2-二氟乙烯基、2，2-二氟乙烯基、1，2，2-三氟乙烯基、1，2-二溴乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氟-2-溴乙烷、CF2CF3、CF2CF2CF3等。
術(shù)語“低碳烷基”是指含有1至6個(gè)碳原子的烷基，在一些實(shí)施方案中優(yōu)選是1至3個(gè)碳原子。
本文所用的“烷氧基”是指基團(tuán)R-O-，其中R是如上所述的烷基。本文所用的術(shù)語“低碳烷氧基”是指基團(tuán)R-O-，其中R是含有1至6個(gè)碳原子的烷基。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選含有1至3個(gè)碳原子的R。
對于提供本發(fā)明涵蓋的化合物或物質(zhì)，本發(fā)明使用的術(shù)語“提供”是指直接施用這種化合物或物質(zhì)，或施用會在體內(nèi)形成有效量的該化合物或物質(zhì)的前體藥物藥、衍生物或類似物。
本發(fā)明的化合物可作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑，其可用于至少部分由雌激素不足或過量介導(dǎo)的或可使用雌激素制劑治療或抑制的體征、失調(diào)或病狀的治療或抑制。本發(fā)明的化合物尤其可用于治療圍絕經(jīng)、絕經(jīng)或絕經(jīng)后患者，其體內(nèi)產(chǎn)生的內(nèi)源性雌激素水平大大減少。絕經(jīng)通常定義為最后一次自然月經(jīng)期，以卵巢功能的停止為特征，從而導(dǎo)致血流中循環(huán)雌激素的顯著降低。此處所用的絕經(jīng)還包括雌激素產(chǎn)生減少的狀態(tài)，其可能是由外科手術(shù)、化學(xué)或?qū)е侣殉补δ艹墒烨皽p少或停止的疾病引起。
因此，本發(fā)明的化合物可用于治療或抑制骨質(zhì)疏松并抑制骨的脫礦質(zhì)作用，這可由新骨組織的獨(dú)立形成和舊組織再吸收的失調(diào)引起，從而造成骨的凈損失。這種骨損耗在許多個(gè)體，特別是在絕經(jīng)后女性，雙側(cè)卵巢切除的女性、接受或已經(jīng)接受長期皮質(zhì)類固醇療法的個(gè)體、性腺發(fā)育不全的個(gè)體和患有庫欣綜合征的個(gè)體中產(chǎn)生。也可以在具有骨折、缺陷骨結(jié)構(gòu)的個(gè)體中和接受骨相關(guān)手術(shù)和/或植入假體的個(gè)體中，使用這些化合物解決對骨(包括牙齒和口腔骨)替換的特別需求。除了上述問題，這些化合物可用于治療或抑制骨性關(guān)節(jié)炎、低鈣血癥、高鈣血癥、佩吉特病、骨軟化、骨質(zhì)缺乏、多發(fā)性骨髓瘤和對骨組織具有不利作用的其他形式癌癥。
本發(fā)明的化合物也可用于治療或抑制良性或惡性異常組織生長，其包括前列腺肥大、子宮平滑肌瘤、乳腺癌、子宮內(nèi)膜異位(endometriosis)、子宮內(nèi)膜癌、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜息肉、良性乳腺疾病、子宮內(nèi)膜異位(adenomysis)、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、CNS癌如神經(jīng)膠質(zhì)瘤或astioblastomia。
本發(fā)明的化合物是心肌保護(hù)性的，可用于降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)及LDL水平；抑制或治療高膽固醇血癥、高脂血癥、心血管疾病、動脈粥樣硬化、外周血管病、再狹窄和血管痙攣；抑制由細(xì)胞事件引起的血管壁損傷導(dǎo)致的免疫介導(dǎo)血管損傷。當(dāng)用雌激素治療絕經(jīng)后患者以抑制骨質(zhì)疏松時(shí)及當(dāng)在男性中進(jìn)行雌激素療法時(shí)，這些心血管保護(hù)性能非常重要。
本發(fā)明的化合物也是抗氧化劑，因此可用于治療或抑制自由基引發(fā)的病癥。可進(jìn)行抗氧化劑治療的具體狀況是癌癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)、阿爾茨海默氏癥、骨疾病、老化、炎癥、外周血管病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自體免疫性疾病、呼吸窘迫、肺氣腫、防止再灌注損傷、病毒性肝炎、慢性活動性肝炎、結(jié)核、牛皮癬、全身性紅斑狼瘡、成人呼吸窘迫綜合征、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和中風(fēng)。
本發(fā)明的化合物還可用于提供認(rèn)知提高，并且治療或抑制老年癡呆、阿爾茨海默氏癥、認(rèn)知能力降低、神經(jīng)退行性疾病，提供神經(jīng)保護(hù)或認(rèn)知能力提高。
本發(fā)明的化合物還可用于治療或抑制炎性腸道疾病、潰瘍性直腸炎、克隆病和結(jié)腸炎；絕經(jīng)相關(guān)癥狀，例如血管舒縮綜合征，包括熱潮紅、陰道或陰門萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干澀、瘙癢、性交痛、排尿困難、尿頻、尿失禁、尿道感染、血管舒縮綜合征，包括熱潮紅、肌痛、關(guān)節(jié)痛、失眠、過敏等；男性型脫發(fā)；皮膚萎縮；痤瘡；II型糖尿?。还δ苁д{(diào)型子宮出血及不孕。
本發(fā)明的化合物可用于閉經(jīng)是有利的病狀，例如白血病、子宮內(nèi)膜消融、慢性腎和肝病或凝血疾病或紊亂。
本發(fā)明的化合物可用作避孕制劑，特別是與孕酮聯(lián)用時(shí)。
要理解的是，當(dāng)施用于治療或預(yù)防特定病狀或紊亂時(shí)，有效劑量根據(jù)于所用的具體化合物、給藥模式、癥狀及其嚴(yán)重程度、受治療的癥狀以及與治療個(gè)體的各種相關(guān)物理因素而不同。本發(fā)明的化合物口服的有效給藥劑量可以以大約0.1毫克/天至大約1,000毫克/天。優(yōu)選地給藥為大約10毫克/天至大約600毫克/天，更優(yōu)選大約50毫克/天至大約600毫克/天，可為單劑量或兩個(gè)或多個(gè)分劑量。期望計(jì)劃的日劑量隨給藥途徑變動。
這些劑量可用將本發(fā)明的活性化合物導(dǎo)入接受者血流的任何方式給藥，所述方式包括口服、經(jīng)過植入體、胃腸道外(包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下注射)、直腸、鼻內(nèi)、陰道和經(jīng)皮。
包含本發(fā)明活性化合物的口服制劑可以包括任何常規(guī)使用的口服劑型，包括片劑、膠囊劑、含劑、藥片、錠劑和口服液體、混懸劑或溶液劑。膠囊劑可以包含一種或多種活性化合物與惰性填料和/或稀釋劑的混合物，所述惰性填料和/或稀釋如可藥用淀粉(例如，玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉)、糖類、人造甜味劑、粉狀纖維素(例如結(jié)晶纖維素和微晶纖維素)、面粉、明膠、樹膠等。使用的藥片制劑可以通過常規(guī)的壓制、濕法制?；蚋煞ㄖ屏７ㄟM(jìn)行，并使用可藥用稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、表面改性劑(包括表面活性劑)、混懸劑或穩(wěn)定劑，其包括但不限于硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、褐藻酸、阿拉伯樹膠、黃原膠、檸檬酸鈉、復(fù)合硅酸鹽、碳酸鈣、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、高嶺土、甘露醇、氯化鈉、滑石粉、干淀粉和糖粉。優(yōu)選的表面改性劑包括非離子和陰離子表面改性劑。表面改性劑的代表性例子包括但不限于泊洛沙姆188、苯扎氯銨、硬脂酸鈣、十六烷十八醇混合物、聚西托醇乳化蠟、脫水山梨聚糖酯、膠體二氧化硅、磷酸鹽、十二烷基硫酸鈉、硅酸鋁鎂和三乙醇胺。本發(fā)明的口服制劑可以使用標(biāo)準(zhǔn)緩釋或定時(shí)釋放制劑以改變活性化合物的吸收?？诜苿┮部梢园ㄔ谒蚬?根據(jù)需要包含合適的增溶劑或乳化劑)中施用活性成分。
有些情況下，可將化合物以氣溶膠形式直接施用到呼吸道中。
本發(fā)明的化合物也可以在胃腸道外或腹腔內(nèi)施用。自由堿或可藥用鹽形式的這些活性化合物的溶液或混懸液可適當(dāng)?shù)嘏c表面活性劑(例如羥丙基纖維素)混合在水中制備。也可以在甘油、液體聚乙二醇及其在油中的混合物中制備分散體。在常規(guī)貯存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑來防止微生物生長。
適于注射的可藥用形式包括無菌水溶液或分散體或用于無菌注射溶液或分散體的即時(shí)制備的無菌粉末。在所有情況下，該劑型必須是無菌的，并必須是易于注射程度的流動。在常規(guī)的制備和貯存條件下必須是穩(wěn)定的，且能夠抗微生物(例如細(xì)菌和真菌)的污染作用。載體可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液體聚乙二醇)及其合適的混合物和植物油的溶劑或分散介質(zhì)。
對于本公開，經(jīng)皮給藥被認(rèn)為包括所有透過體表和體內(nèi)通道內(nèi)層(包括上皮和粘膜組織)的給藥。這些給藥可以在乳液、乳霜、泡沫、貼膏、混懸液、溶液和栓劑(直腸和陰道)中使用本化合物或其可藥用鹽進(jìn)行。
經(jīng)皮給藥可以使用包含活性化合物及對該活性化合物惰性、對皮膚無毒，并使制劑能夠通過皮膚進(jìn)入血流來全身吸收的載體的經(jīng)皮貼膏。載體可以采用任何形式，例如乳霜和軟膏、糊狀物、凝膠和咬合裝置(occlusivedevices)。這些乳霜和軟膏可以是水包油或油包水型粘性液體或半固體乳狀液。包含分散在包含活性成分的石油或親水石油中的吸收粉末的糊狀物也是合適的。可以使用各種咬合裝置將活性成分釋放到血流中，例如覆蓋半透膜的，有或無載體的包含活性成分的儲藏庫，或包含活性成分的基質(zhì)。其他咬合裝置是文獻(xiàn)中已知的。
栓劑可由傳統(tǒng)材料制得，包括可可油、添加或不添加蠟來改變栓劑的熔點(diǎn)、以及甘油。也可以使用水溶性栓劑基料，例如各種分子量的聚乙二醇。
本發(fā)明化合物制備中使用的試劑可以通過商業(yè)途徑獲得或可以通過文獻(xiàn)中所述的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
在下列反應(yīng)方案1-6描述了本發(fā)明的一些代表性例子的制備。
反應(yīng)方案1
反應(yīng)方案2 反應(yīng)方案3 反應(yīng)方案4
反應(yīng)方案5 反應(yīng)方案6 X＝苯基實(shí)施例23X＝2-甲基苯基 實(shí)施例24X＝3-甲基苯基 實(shí)施例25X＝4-甲基苯基 實(shí)施例26X＝4-甲氧基苯基實(shí)施例27X＝4-氯苯基實(shí)施例28X＝4-氟苯基實(shí)施例29X＝2-噻吩 實(shí)施例30X＝3-噻吩 實(shí)施例31X＝3-氟苯基實(shí)施例32X＝3-氯苯基實(shí)施例33X＝3-甲氧基苯基實(shí)施例34X＝2-氯苯基實(shí)施例35X＝3，4-二氟苯基 實(shí)施例36X＝4-吡啶基實(shí)施例37
X＝2-氟苯基實(shí)施例38X＝3，4-二甲基苯基 實(shí)施例39X＝4-氰基苯基 實(shí)施例40X＝3-氟-4-甲基苯基 實(shí)施例41X＝3，4-二甲氧基苯基 實(shí)施例42X＝3-三氟甲基苯基 實(shí)施例43X＝3，5-二氟苯基 實(shí)施例44X＝3，5-二氯苯基 實(shí)施例45X＝3-甲基-4-氟苯基 實(shí)施例46X＝3-呋喃基實(shí)施例47反應(yīng)方案7 現(xiàn)在參照下列具體的非限制性實(shí)施例闡述本發(fā)明。
實(shí)施例12-溴-5-甲氧基芐醇通過使3-甲氧基芐醇(13.82克，0.1摩爾)和NBS(19.58克，0.11摩爾)在乙腈(250毫升)中室溫反應(yīng)3小時(shí)，以制備標(biāo)題化合物。除去溶劑并將所得物質(zhì)在二氯甲烷(250毫升)中制漿并過濾以去除不溶的琥珀酰亞胺副產(chǎn)物。通過色譜法(20％EtOAc-己烷)提純粗材料以提供白色固體(17.69克，81％)，熔點(diǎn)57-58℃。
實(shí)施例22-[(2-溴-5-甲氧基芐基)氧]-7-甲氧基萘在7-甲氧基-2-萘酚(26.92克，0.15摩爾)、2-溴-5-甲氧基芐醇(33.58克，0.15摩爾)和三苯膦(39.3克，0.15摩爾)在無水THF(500毫升)的溶液中，經(jīng)過0.5小時(shí)逐滴加入DEAD(26.10克，0.15摩爾)在THF(100毫升)中的溶液。將溶液在室溫下攪拌過夜，在蒸發(fā)了一半體積后，沉淀出高純度產(chǎn)物。過濾固體并用THF漂洗，然后干燥以產(chǎn)生32.96克(59％)白色固體熔點(diǎn)156-157℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ3.77(3H，s)，3.86(3H，s)，5.18(2H，s)，6.92(1H，dd，J＝3.2Hz，J＝8.7Hz)，7.00(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.7Hz)，7.09(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.9Hz)，7.22(1H，d，J＝3.2Hz)，7.25(1H，d，J＝2.4Hz)，7.35(1H，d，J＝2.4Hz)，7.59(1H，d，J＝8.7Hz)，7.74(1H，d，J＝8.7Hz)，7.76(1H，d，J＝8.7Hz)；MS m/z 373/375([M+H]+).
分析C19H17BrO3計(jì)算值C61.14；H4.59實(shí)測值C61.29；H4.21實(shí)施例33，9-二甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯將2-[(2-溴-5-甲氧基芐基)氧]-7-甲氧基萘(9.35克，25毫摩爾)、二氯雙(三苯膦)鈀(1.75克，2.5毫摩爾)和乙酸鈉(6.15克，75毫摩爾)在無水二甲基乙酰胺(500毫升)中的混合物在氮?dú)庵?30℃攪拌2天。冷卻后，濾除催化劑并真空去除二甲基乙酰胺。將殘余物在甲醇(200毫升)中制漿并過濾分離所需產(chǎn)物，產(chǎn)生2.9克(40％)褐色固體熔點(diǎn)190-191℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.81(3H，s)，3.85(3H，s)，5.14(2H，s)，6.92(1H，d，J＝2.6Hz)，7.00-7.03(2H，m)，7.18(1H，d，J＝2.4Hz)，7.29(1H，s)，7.79(1H，d，J＝9.0Hz)，7.92(1H，d，J＝8.7Hz)，8.26(1H，s)；MS m/z 293([M+H]+).
分析C19H16O3
計(jì)算值C78.06；H5.52實(shí)測值C77.95；H5.34上述結(jié)晶還產(chǎn)生不需要的regioisomer，其獲自甲醇濾液。不需要的regioisomer不是以純凈形式獲得，并且如下對實(shí)施例4所述進(jìn)行脫甲基化。
實(shí)施例45H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在190℃，在鹽酸吡啶鎓鹽(30克，0.26摩爾)中加入3，9-二甲氧基-H-二苯并[c，g]色烯(7.0克，23.9毫摩爾)。將溶液在190℃攪拌3.5小時(shí)，并將混合物冷卻至接近室溫。將混合物倒入水(300毫升)中并攪拌得到固體沉淀。過濾固體，用水充分洗滌并干燥。通過色譜法提純(50％乙酸乙酯-己烷)，產(chǎn)生5.0克(79％)白色固體熔點(diǎn)231-233℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.05(2H，s)，6.68(1H，d，J＝2.3Hz)，6.83(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.4Hz)，6.90(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.7Hz)，6.93(1H，d，J＝2.3Hz)，6.96(1H，d，J＝2.1Hz)，7.13(1H，s)，7.71(1H，d，J＝8.8Hz)，7.78(1H，d，J＝8.5Hz)，9.70(2H，s)；MS m/z 265([M+H]+).
分析C17H12O3計(jì)算值C77.26；H4.58實(shí)測值C77.00；H4.31實(shí)施例55H-二苯并[c，f]色烯-3，11-二醇4使其他regioisomer與desbromo-偶聯(lián)產(chǎn)物的混合物處于與實(shí)施例2相同的脫甲基條件下。通過色譜法提純(50％乙酸乙酯-己烷)粗產(chǎn)物，得到褐色固體0.45克(1％)熔點(diǎn)199-201℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.93(2H，s)，6.83(1H，d，J＝2.5Hz)，6.89(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.4Hz)，6.95-6.99(2H，m)，7.63(1H，d，J＝8.7Hz)，7.73-7.81(3H，m)，9.75(2H，s)；MS m/z 265([M+H]+).
254納米處HPLC表明純度為98.9％。
分析C17H12O3·0.2H2O計(jì)算值C76.22；H4.67
實(shí)測值C76.43；H4.49實(shí)施例68-氯-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇將H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(0.20克，0.76毫摩爾)和N-氯琥珀酰亞胺(0.12克，0.91毫摩爾)在THF(20毫升)中的溶液在室溫下攪拌48小時(shí)。將反應(yīng)溶液濃縮到Florosil上并通過二氧化硅色譜法(30％乙酸乙酯-己烷)提純，產(chǎn)生0.14克(62％)褐色固體。將這種材料進(jìn)一步通過反相制備HPLC提純以產(chǎn)生灰白色固體狀標(biāo)題化合物熔點(diǎn)212-214℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.12(2H，s)，6.70(1H，d，J＝2.37Hz)，6.85(1H，dd，J＝2.43Hz，J＝8.46Hz)，7.13(1H，d，J＝9.06Hz)，7.39(1H，s)，7.73(1H，d，J＝8.91Hz)，7.82(1H，d，J＝8.53Hz)，8.24(1H，s)，9.81(1H，s)，10.39(1H，s)；MS(ESI)m/z 297/299([M-H]-).
分析C17H11ClO3計(jì)算值C68.35；H3.71實(shí)測值C68.17；H3.65實(shí)施例73-(乙酰氧基)-5H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯在吡啶(35毫升)和乙酸酐(35毫升)的混合物中加入(H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇)(5.0克，18.9毫摩爾)，并將混合物在室溫下攪拌。大約1小時(shí)后形成沉淀并再繼續(xù)攪拌5小時(shí)。過濾混合物并將產(chǎn)物用乙酸乙酯洗滌。通過色譜法提純(25％乙酸乙酯-己烷)粗產(chǎn)物以得到白色固體(5.0克，76％)熔點(diǎn)194-195℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.31(3H，s)，2.33(3H，s)，5.20(2H，s)，7.16(1H，d，J＝1.9Hz)，7.19(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，7.25(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.3Hz)，7.44(1H，s)，7.54(1H，d，J＝2.4Hz)，7.95(1H，d，J＝9.3Hz)，8.09(1H，d，J＝8.3Hz)，8.50(1H，s)；MS m/z 349([M+H]+).
分析C21H16O5計(jì)算值C72.41；H4.63
實(shí)測值C72.06；H4.48實(shí)施例83-(乙酰氧基)-7-溴-5H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯在N-溴琥珀酰亞胺(3.1克，17.2毫摩爾)在無水乙腈(400毫升)的混合物中加入3-(乙酰氧基)-H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯(5.0克，14.4毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。過濾固體，用乙腈洗滌并干燥以產(chǎn)生5.9克(96％)淺褐色固體。將該固體的樣品通過色譜法(二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體熔點(diǎn)224-226℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.32(3H，s)，2.35(3H，s)，5.35(2H，s)，7.19(1H，d，J＝2.4Hz)，7.28(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.3Hz)，7.31(1H，dd，J＝2.0Hz，J＝8.8Hz)，7.75(1H，d，J＝2.4Hz)，8.05(1H，d，J＝8.8Hz)，8.12(1H，d，J＝8.8Hz)，8.59(1H，s)；MS m/z 427/429([M+H]+).
分析C21H15BrO5計(jì)算值C59.04；H3.54實(shí)測值C58.87；H3.34實(shí)施例91-氯-7-甲氧基-2-萘酚在冰浴溫度下，在7-甲氧基-2-萘酚在乙腈(100毫升)的溶液中加入N-氯琥珀酰亞胺(1.61克，12.07毫摩爾)。使反應(yīng)混合物在冰浴溫度下攪拌2小時(shí)，并再加入0.1當(dāng)量的N-氯琥珀酰亞胺。使反應(yīng)經(jīng)過1小時(shí)升溫至室溫并倒入水(180毫升)中，用乙酸乙酯(2×300毫升)萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌并經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并在真空下除去溶劑。加入醚并過濾不溶雜質(zhì)。將母液濃縮并色譜分離(1∶4，乙酸乙酯-己烷)以產(chǎn)生淺黃色固體熔點(diǎn)76-78℃。HPLC表明產(chǎn)物純度為98.0％(230納米)。
分析C11H9ClO2計(jì)算值C，63.32 H，4.35實(shí)測值C，63.12 H，4.25
實(shí)施例102-[(2-溴-5-甲氧基-芐基)氧]-1-氯-7-甲氧基萘在實(shí)施例7(3.05克，14.6毫摩爾)、2-溴-5-甲氧基芐醇(3.49克，16.08毫摩爾)和三苯膦(4.22克，16.08毫摩爾)在無水THF(50毫升)的溶液中，在室溫下經(jīng)過15分鐘緩慢加入DEAD(2.8克，16.08毫摩爾)。攪拌40分鐘后，蒸發(fā)THF，并將粗產(chǎn)物用甲醇研制以產(chǎn)生5.31克白色固體產(chǎn)物(89％)熔點(diǎn)126-127℃。
分析C19H16BrClO3計(jì)算值C，55.98 H，3.96實(shí)測值C，55.86 H，4.01實(shí)施例117-氯-3，9-二甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯將實(shí)施例8(3.12克，7.66毫摩爾)、乙酸鈉(1.88克，23.0毫摩爾)和二氯雙(三苯膦)鈀(1.61克，2.3毫摩爾)在二甲基乙酰胺(220毫升)中的混合物130℃加熱3小時(shí)。在高真空下除去溶劑并使用二氯甲烷通過florisil上過濾催化劑。將固體用二氯甲烷-甲醇(1∶2)洗滌以產(chǎn)生2.59克產(chǎn)物。將母液濃縮并色譜分離(10％乙酸乙酯-己烷)并用甲醇以產(chǎn)生另外160毫克白色固體產(chǎn)物?？偖a(chǎn)量2.75克(74.5％)熔點(diǎn)166-168℃。
分析C19H15ClO3計(jì)算值C，69.84 H，4.63實(shí)測值C，69.59 H，4.32實(shí)施例127-氯-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇將實(shí)施例9(2.25克，6.92毫摩爾)和鹽酸吡啶鎓鹽(21.9克，162毫摩爾)的混合物加熱至184℃達(dá)2小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻，倒入水(300毫升)中并用乙酸乙酯(2×200毫升)萃取，用鹽水洗滌并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑并將產(chǎn)物色譜分離(40％乙酸乙酯-己烷)以產(chǎn)生白色固體，將其用二氯甲烷(25毫升)研制以產(chǎn)生1.2克(58％)；熔點(diǎn)230-231℃；分析C16H11ClO3計(jì)算值C，68.35 H，3.71實(shí)測值C，68.02 H，3.57實(shí)施例137-溴-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-3-(乙酰氧基)-H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯(427毫克，1毫摩爾)在甲醇(25毫升)的混合物中，加入在甲醇中的25％甲醇鈉(6毫升)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌0.5小時(shí)，然后用乙酸乙酯(300毫升)和1N HCl(150毫升)稀釋。將乙酸乙酯部分用水(2×100毫升)和鹽水(150毫升)洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥并過濾。在真空下除去溶劑，并將所得固體通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以提供黃色固體(286毫克，83％)熔點(diǎn)(分解)于260℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.19(2H，s)，6.70(1H，d，J＝2.4Hz)，6.86(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.5Hz)，6.99(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.31(1H，d，J＝2.3Hz)，7.79(1H，d，J＝6.3Hz)，7.81(1H，d，J＝6.0Hz)，8.22(1H，s)，9.97(2H，br s)；MS m/z 343/345([M+H]+).
分析C17H11BrO3計(jì)算值C59.50；H3.23實(shí)測值C59.22；H3.29實(shí)施例143，9-二氫-5H-二苯并[c，g]色烯-7-腈在3-(乙酰氧基)-7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯(855毫克，2毫摩爾)和無水二甲基甲酰胺(20毫升)的混合物中，加入氰化銅(1.0克，10毫摩爾)。將混合物加熱至150℃并保持過夜。將混合物冷卻并懸浮在乙酸乙酯和水之間。分離各層，并將乙酸乙酯部分用水(3×50毫升)和鹽水(50毫升)洗滌。將乙酸乙酯經(jīng)無水硫酸鎂干燥，除去溶劑，并將所得固體溶于甲醇(10毫升)中并加入25％甲醇鈉(3毫升)。在攪拌0.5小時(shí)后，加入乙酸乙酯(50毫升)和1N HCl(20毫升)，分離各層并將有機(jī)部分用水(3×30毫升)和鹽水(30毫升)洗滌。經(jīng)無水硫酸鎂干燥后，除去溶劑以提供暗黃色固體，將其通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以提供淺黃色固體(208毫克，36％)熔點(diǎn)＞280℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.32(2H，s)，6.71(1H，d，J＝2.4Hz)，6.87(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.3Hz)，7.06(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.9Hz)，7.18(1H，d，J＝2.4Hz)，7.84(1H，d，J＝8.8Hz)，7.87(1H，d，J＝8.8Hz)，8.50(1H，s)，9.90(1H，br s)，10.32(1H，br s)；MS m/z 288([M-H]-).
254納米處HPLC表明純度為98.5％。
分析C18H11NO3·0.5H2O計(jì)算值C72.48；H4.05；N4.70實(shí)測值C72.31；H3.96；N4.55實(shí)施例157-甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在3-(乙酰氧基)-7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯(427毫克，1毫摩爾)、CuBr(143毫克，1毫摩爾)和無水DMF(6毫升)的混合物中，加入NaOMe/甲醇(3毫升)。將混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻并加入乙酸乙酯(100毫升)和1N HCl(50毫升)。分離各層，并將有機(jī)部分用水(3×50毫升)和鹽水(50毫升)洗滌，然后經(jīng)無水硫酸鎂干燥。蒸發(fā)溶劑，并通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純粗產(chǎn)物以產(chǎn)生黃色固體(260毫克，88％)熔點(diǎn)(分解)240℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.88(3H，s)，5.09(2H，s)，6.70(1H，d，J＝2.4Hz)，6.83(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.3Hz)，6.93(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，7.19(1H，d，J＝2.4Hz)，7.72(1H，d，J＝8.5Hz)，7.77(1H，d，J＝8.8Hz)，7.92(1H，s)，9.75(2H，s)；MS m/z 295([M+H]+).
分析C18H14O4
計(jì)算值C73.46；H4.79實(shí)測值C73.19；H4.62實(shí)施例167-乙烯基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在3-(乙酰氧基)-7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯(300毫克，0.7毫摩爾)、無水甲苯(2毫升)和三丁基乙烯基錫(254毫克，0.8毫摩爾)的混合物中，加入四(三苯膦)鈀(160毫克，0.14毫摩爾)。將混合物加熱至回流并保持4.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻并用水和乙酸乙酯稀釋，并將有機(jī)部分用水和鹽水洗滌。經(jīng)無水硫酸鎂干燥并除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用甲醇(10毫升)和25％甲醇鈉(2毫升)處理。將混合物攪拌0.5小時(shí)，然后加入乙酸乙酯(50毫升)和1N HCl(20毫升)。分離有機(jī)部分并用水(2×20毫升)和鹽水(25毫升)洗滌并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，產(chǎn)生固體，將其通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生褐色固體(45毫克，15％)熔點(diǎn)(分解)195-197℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.07(2H，s)，5.66-5.76(2H，m)，6.69(1H，d，J＝2.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.4Hz)，6.91-7.04(2H，m)，7.34(1H，d，J＝2.4Hz)，7.74(1H，d，J＝8.9Hz)，7.78(1H，d，J＝8.6Hz)，8.10(1H，s)，9.72(2H，s)；MS m/z 291([M+H]+).
分析C19H14NO3·0.2H2O計(jì)算值C77.64；H4.94實(shí)測值C77.63；H4.81實(shí)施例173-(乙酰氧基)-7-甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯在吡啶(8毫升)和乙酸酐(8毫升)的混合物中，加入7-甲氧基-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(1.37克，4.7毫摩爾)，并將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。過濾不溶固體，并用10％乙酸乙酯-己烷漂洗以提供褐色固體(1.6克，90％)。將一部分該固體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以獲得白色固體熔點(diǎn)165-167℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.31(3H，s)，2.33(3H，s)，3.95(3H，s)，5.24(2H，s)，7.18(1H，d，J＝2.4Hz)，7.22(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，7.25(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，7.67(1H，d，J＝2.4Hz)，7.96(lH，d，J＝8.8Hz)，8.08(1H，d，J＝8.8Hz)，8.28(1H，s)；MS m/z 379([M+H]+).
280納米處HPLC表明純度為99.8％。
分析C22H18O6·0.3H2O計(jì)算值C68.85；H4.88實(shí)測值C68.93；H4.72實(shí)施例183-(乙酰氧基)-12-溴-7-甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯在3-(乙酰氧基)-12-溴-7-甲氧基-H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯(570毫克，1.5毫摩爾)在無水乙腈(100毫升)中的混合物中，加入N-溴琥珀酰亞胺(350毫克，1.95毫摩爾)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。除去溶劑并將粗制殘余物通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以獲得淺黃色固體(500毫克，73％)熔點(diǎn)176-177℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.33(3H，s)，2.35(3H，s)，3.96(3H，s)，5.12(2H，s)，7.30(1H，d，J＝2.9Hz)，7.31(1H，s)，7.42(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝9.3Hz)，7.80(1H，d，J＝2.4Hz)，8.35(1H，d，J＝9.3Hz)，8.54(1H，dd，J＝2.0Hz，J＝7.6Hz).
分析C22H17BrO6計(jì)算值C57.79；H3.75實(shí)測值C57.54；H3.63實(shí)施例1912-溴-7-甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在3-(乙酰氧基)-12-溴-7-甲氧基-H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯(260毫克，0.57毫摩爾)在甲醇(25毫升)中的混合物中，加入在甲醇中的25％甲醇鈉(3毫升)并將混合物攪拌0.5小時(shí)。將混合物懸浮在乙酸乙酯(50毫升)和1N HCl(20毫升)之間，并將有機(jī)部分用水(3×50毫升)和鹽水(50毫升)洗滌。將乙酸乙酯經(jīng)無水硫酸鎂干燥，除去溶劑以產(chǎn)生褐色固體，將其通過硅膠色譜法(50％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生95毫克(45％)褐色固體熔點(diǎn)(分解)高于250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.89(3H，s)，4.97(2H，s)，6.82(1H，d，J＝2.4Hz)，6.88(1H，dd，J＝2.7Hz，J＝8.5Hz)，7.12(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝9.3Hz)，7.29(1H，d，J＝2.4Hz)，8.12(1H，d，J＝9.3Hz)，8.29(1H，d，J＝8.3Hz)，9.93(1H，s)，10.06(1H，s)；MS m/z 373/375([M+H]+).
分析C18H13BrO4計(jì)算值C57.93；H3.51實(shí)測值C57.64；H3.34實(shí)施例2012-氯-7-甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在3-(乙酰氧基)-7-甲氧基-H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯(290毫克，0.77毫摩爾)在無水THF(10毫升)中的混合物中，加入N-氯琥珀酰亞胺(133毫克，1.0毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。除去溶劑并加入甲醇(10毫升)和25％甲醇鈉-甲醇(3毫升)。在室溫下攪拌0.5小時(shí)后，加入乙酸乙酯(25毫升)和1N HCl(10毫升)，振蕩混合物，分離各層，并將乙酸乙酯用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌。將混合物經(jīng)無水硫酸鎂干燥，除去溶劑，并將粗制褐色固體通過硅膠色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生166毫克(66％)白色固體熔點(diǎn)(分解)240℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.89(3H，s)，4.99(2H，s)，6.82(1H，d，J＝2.4Hz)，6.88(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，7.12(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，7.29(lH，d，J＝2.4Hz)，8.11(1H，d，J＝9.3Hz)，8.27(1H，d，J＝8.3Hz)，10.00(2H，br s)；MSm/z 329/331([M+H]+)，280納米處HPLC得到99.6％的純度。
分析C18H13ClO4·0.2H2O計(jì)算值C65.05；H4.06實(shí)測值C65.21；H4.12實(shí)施例217-甲基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、無水二甲基甲酰胺(10毫升)和二氯雙(三鄰甲苯基膦)鈀(79毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入四甲基錫(268毫克，1.5毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至80℃并保持3小時(shí)。TLC和MS分析表明是原材料與產(chǎn)物的1∶1混合物。將混合物冷卻至室溫并追加四甲基錫(268毫克，1.5毫摩爾)和催化劑(79毫克，0.1毫摩爾)。將混合物在80℃加熱過夜。將反應(yīng)混合物冷卻并加入乙酸乙酯(50毫升)和水(25毫升)。在分離各層之后，將有機(jī)部分用水(3×20毫升)，然后用鹽水(20毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將粗產(chǎn)物通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生淺黃色固體(117毫克，42％)熔點(diǎn)224-226℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.38(3H，s)，5.06(2H，s)，6.69(1H，d，J＝2.4Hz)，6.83(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.4Hz)，6.93(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.7Hz)，7.08(1H，d，J＝2.3Hz)，7.71(1H，d，J＝8.8Hz)，7.77(1H，d，J＝8.6Hz)，8.01(1H，s)，9.67(2H，s)；MS m/z 279([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.5％純度。
分析C18H14O3(0.2H2O)計(jì)算值C76.69；H5.15實(shí)測值C76.61；H4.99實(shí)施例227-[2-(羥甲基)苯基]-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在3-(乙酰氧基)-7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-9-基乙酸酯(2.03克，4.8毫摩爾)、(2-羥甲基苯基)硼酸二水合物(1.54克，13.3毫摩爾)、碳酸鉀(2.07克，15毫摩爾)、二甲氧基乙烷(100毫升)和水(10毫升)的混合物中，加入四(三苯膦)鈀(600毫克，0.4毫摩爾)。將混合物加熱至回流1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻并懸浮在乙酸乙酯(200毫升)和水(75毫升)之間。將乙酸乙酯用水(2×75毫升)，然后用鹽水(75毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得黃色液體溶于甲醇(100毫升)并加入25％甲醇鈉(10毫升)。將混合物在室溫下攪拌0.5小時(shí)，然后用乙酸乙酯(200毫升)和1N HCl(75毫升)稀釋。將乙酸乙酯用水(3×75毫升)，然后用鹽水(75毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，提供褐色固體，將其通過色譜法(35％乙酸乙酯-己烷)提純以提供白色固體(500毫克，15％)熔點(diǎn)171-173℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.08(1H，dd，J＝3.7Hz，J＝14.3Hz)，4.26(1H，dd，J＝3.6Hz，J＝14.3Hz)，4.92(2H，s)，4.94-4.99(1H，m)，6.36(1H，d，J＝2.0Hz)，6.63(1H，d，J＝2.1Hz)，6.85(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.5Hz)，6.89(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.7Hz)，7.11(1H，d，J＝7.4Hz)，7.36-7.39(1H，m)，7.45-7.49(1H，m)，7.67(1H，d，J＝7.7Hz)，7.78(1H，d，J＝8.9Hz)，7.83(1H，d，J＝8.6Hz)，8.20(1H，s)，9.53(1H，br s)，9.70(1H，br s)；MS m/z 369([M-H]-).
280納米處HPLC得到94.9％的純度。
分析C24H18O4·0.3H2O計(jì)算值C76.71；H4.99實(shí)測值C76.56；H4.95實(shí)施例237-苯基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基乙酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入苯基硼酸(366毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生褐色固體(170毫克，50％)熔點(diǎn)225-227℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.95(2H，s)，6.63(2H，s)，6.85(1H，dd，J＝2.2Hz，J＝8.4Hz)，6.92(1H，dd，J＝2.2Hz，J＝8.7Hz)，7.33(2H，d，J＝7.0Hz)，7.40-7.43(1H，m)，7.49-7.53(2H，m)，7.77(1H，d，J＝8.9Hz)，7.83(1H，d，J＝8.6Hz)，8.19(1H，s)，9.61(1H，br s)，9.69(1H，br s)；MS m/z 341([M+H]+).
280納米處HPLC得到98.2％的純度。
分析C23H16O3·0.5H2O計(jì)算值C79.07；H4.90實(shí)測值C78.68；H4.64實(shí)施例247-(2-甲苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入2-甲苯基硼酸(400毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)2.5小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色固體通過色譜法(5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生黃色固體(150毫克，42％)熔點(diǎn)193-196℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.97(3H，s)，4.92(2H，s)，6.36(1H，d，J＝2.3Hz)，6.62(1H，d，J＝2.4Hz)，6.83-6.92(2H，m)，7.09-7.13(1H，m)，7.27-7.39(3H，m)，7.78(1H，d，J＝8.9Hz)，7.84(1H，d，J＝8.6Hz)，8.20(1H，s)，9.52(1H，s)，9.72(1H，s)；MS m/z 355([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.8％的純度。
分析C24H18O3·0.5H2O
計(jì)算值C79.32；H5.27實(shí)測值C79.04；H5.15實(shí)施例257-(3-甲苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3-甲苯基硼酸(400毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)2小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色油通過色譜法(5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(264毫克，75％)熔點(diǎn)219-222℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.39(3H，s)，4.94(2H，s)，6.61-6.64(2H，m)，6.84(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.5Hz)，6.90(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.09-7.12(2H，m)，7.22(1H，d，J＝9.1Hz)，7.39-7.43(1H，m)，7.77(1H，d，J＝8.9Hz)，7.82(1H，d，J＝8.6Hz)，8.18(1H，s)，9.54(1H，br s)，9.72(1H，s)；MS m/z 355([M+H]+).
254納米處HPLC得到99.3％的純度。
分析C24H18O3·0.1H2O計(jì)算值C80.93；H5.15實(shí)測值C80.81；H5.08實(shí)施例267-(4-甲苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入4-甲苯基硼酸(400毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色油通過色譜法(5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(265毫克，75％)熔點(diǎn)238-240℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.40(3H，s)，4.93(2H，s)，6.64(2H，dd，J＝2.3Hz，J＝7.0Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.5Hz)，6.90(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.20(2H，d，J＝8.0Hz)，7.31(2H，d，J＝8.0Hz)，7.76(1H，d，J＝8.9Hz)，7.82(1H，d，J＝8.6Hz)，8.17(1H，s)，9.54(1H，br s)，9.71(1H，br s)；MS m/z 355([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.9％的純度。
分析C24H18O3·0.3H2O計(jì)算值C80.16；H5.21實(shí)測值C79.99；H5.12實(shí)施例277-(4-甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入4-甲氧基苯基硼酸(500毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得棕色固體通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生白色固體(215毫克，58％)熔點(diǎn)200-203℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.85(3H，s)，4.95(2H，s)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.68(1H，d，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝2.6Hz，J＝8.4Hz)，6.91(1H，dd，J＝2.2Hz，J＝8.8Hz)，7.08(2H，d，J＝8.8Hz)，7.25(2H，d，J＝8.8Hz)，7.77(1H，d，J＝8.7Hz)，7.82(1H，d，J＝8.8Hz)，8.17(1H，s)，9.50(1H，s)，9.69(1H，s)；MS m/z 371([M+H]+).
254納米處HPLC得到98.3％的純度。
分析C24H18O4·0.2H2O計(jì)算值C77.07；H4.96實(shí)測值C76.81；H5.00實(shí)施例287-(4-氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入4-氯苯基硼酸(468毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1.5小時(shí)，然后冷卻，用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色油通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生白色固體(215毫克，58％)熔點(diǎn)239-242℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.96(2H，s)，6.60(1H，d，J＝2.3Hz)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，6.92(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.5Hz)，7.36(2H，d，J＝8.5Hz)，7.58(2H，d，J＝8.4Hz)，7.78(1H，d，J＝8.9Hz)，7.83(1H，d，J＝8.6Hz)，8.21(1H，s)，9.56(1H，s)，9.72(1H，s)；MS m/z 375/377([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.6％的純度。
分析C23H15ClO3·0.2H2O計(jì)算值C73.00；H4.10實(shí)測值C72.89；H4.01實(shí)施例297-(4-氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入4-氟苯基硼酸(420毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)2小時(shí)，然后冷卻，用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得褐色固體通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生白色固體(215毫克，62％)熔點(diǎn)229-232℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.96(2H，s)，6.62(2H，dd，J＝2.4Hz，J＝9.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.5Hz)，6.92(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，7.33-7.43(4H，m)，7.78(1H，d，J＝8.8Hz)，7.83(1H，d，J＝8.5Hz)，8.20(1H，s)，9.56(1H，s)，9.72(1H，s)；MS m/z 359([M+H]+).
280納米處HPLC得到98.1％的純度。
分析C23H15FO3·0.3H2O計(jì)算值C75.94；H4.32實(shí)測值C76.02；H4.29實(shí)施例307-噻吩-2-基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、DMF(5毫升)、水(1毫升)、2N碳酸鈉(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入2-噻吩硼酸(260毫克，2毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃并保持過夜。將混合物冷卻并加入乙酸乙酯(50毫升)和5％氯化銨(25毫升)。將乙酸乙酯用水(2×20毫升)和鹽水(20毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑后，將粗制固體通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生淺黃色固體(84毫克，24％)熔點(diǎn)233-236℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.01(2H，s)，6.65(1H，d，J＝2.5Hz)，6.83-6.88(2H，m)，6.93(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.09(1H，dd，J＝1.0Hz，J＝3.4Hz)，7.24(1H，dd，J＝3.5Hz，J＝5.1Hz)，7.70(1H，dd，J＝1.0Hz，J＝5.1Hz)，7.78(1H，d，J＝8.8Hz)，7.83(1H，d，J＝8.7Hz)，8.24(1H，s)，9.67(1H，s)，9.75(1H，s)；MS m/z 347([M+H]+).
300納米處HPLC得到96.8％的純度。
分析C21H14O3S·0.2H2O計(jì)算值C72.06；H4.15實(shí)測值C71.82；H4.01實(shí)施例317-噻吩-3-基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3-噻吩硼酸(300毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生黃色固體(188毫克，54％)熔點(diǎn)159-161℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.98(2H，s)，6.65(1H，d，J＝2.5Hz)，6.83-6.86(2H，m)，6.92(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.7Hz)，7.18(1H，dd，J＝1.2Hz，J＝4.9Hz)，7.50(1H，dd，J＝1.2Hz，J＝4.9Hz)，7.68(1H，dd，J＝2.9Hz，J＝4.9Hz)，7.76(1H，d，J＝8.8Hz)，7.82(1H，d，J＝8.6Hz)，8.17(1H，s)，9.57(1H，s)，9.70(1H，s)；MS m/z 345([M-H]-).
280納米處HPLC得到99.8％的純度。
分析C21H14O3S·0.5H2O計(jì)算值C70.97；H4.25實(shí)測值C71.06；H3.98實(shí)施例327-(3-氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3-氟苯基硼酸(420毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生白色固體(196毫克，55％)熔點(diǎn)225-227℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.98(2H，s)，6.62-6.64(2H，m)，6.84(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.5Hz)，6.92(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.16-7.29(3H，m)，7.52-7.59(1H，m)，7.77-7.85(2H，m)，8.22(1H，s)，9.59(1H，s)，9.72(1H，s)；MSm/z 359([M+H]+).
210納米處HPLC得到99.2％的純度。
分析C23H15FO3·0.2H2O計(jì)算值C76.32；H4.29實(shí)測值C79.21；H4.22實(shí)施例337-(3-氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3-氯苯基硼酸(468毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(138.6毫克，37％)熔點(diǎn)243-246℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.98(2H，s)，6.59(1H，d，J＝2.3Hz)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.4Hz)，6.93(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.29-7.32(1H，m)，7.38-7.41(1H，m)，7.45-7.58(2H，m)，7.77-7.85(2H，m)，8.22(1H，s)，9.61(1H，s)，9.73(1H，s)；MS m/z 375/377，1Cl，([M+H]+).
280納米處HPLC得到97.5％的純度。
分析C23H15ClO3計(jì)算值C73.70；H4.03實(shí)測值C73.84；H4.15實(shí)施例347-(3-甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3-甲氧基苯基硼酸(456毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色固體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(248.3毫克，67％)熔點(diǎn)220-223℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.79(3H，s)，4.96(2H，s)，6.64(2H，dd，J＝2.3Hz，J＝7.0Hz)，6.82-6.92(4H，m)，6.98(1H，dd，J＝1.5Hz，J＝6.7Hz)，7.40-7.45(1H，m)，7.75-7.84(2H，m)，8.19(1H，s)，9.54(1H，s)，9.70(1H，s)；MS m/z 371([M+H]+).
280納米處HPLC得到98.5％的純度。
分析C24H18O4·0.3H2O計(jì)算值C76.71；H4.99實(shí)測值C76.88；H4.80實(shí)施例357-(2-氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入2-氯苯基硼酸(468毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(85.1毫克，22％)熔點(diǎn)220-222℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.98(2H，s)，6.37(1H，d，J＝2.3Hz)，6.63(1H，d，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.5Hz)，6.92(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，7.33-7.38(1H，m)，7.43-7.53(2H，m)，7.61-7.67(1H，m)，7.78-7.85(2H，m)，8.24(1H，s)，9.58(1H，s)，9.72(1H，s)；MS m/z 375/377，1Cl，([M+H]+).
280納米處HPLC得到97.6％的純度。
分析C23H15ClO3·0.3H2O計(jì)算值C72.65；H4.14實(shí)測值C72.63；H3.83實(shí)施例367-(3，4-二氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3，4-二氟苯基硼酸(474毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)2小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得褐色固體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(162.1毫克，43％)熔點(diǎn)235-237℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.99(2H，s)，6.63(2H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.4Hz)，6.93(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.16-7.21(1H，m)，7.42-7.49(1H，m)，7.53-7.62(1H，m)，7.77-7.84(2H，m)，8.23(1H，s)，9.60(1H，s)，9.73(1H，s)；MS m/z377([M+H]+).
280納米處HPLC得到97.6％的純度。
分析C23H14F2O3·0.1H2O計(jì)算值C73.05；H3.78
實(shí)測值C72.98；H3.63實(shí)施例377-(4-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入4-吡啶基硼酸(370毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)2小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。過濾不溶褐色固體并干燥，然后溶于二氯甲烷甲醇中并經(jīng)助濾劑過濾以去除催化劑。除去溶劑以產(chǎn)生褐色固體(60毫克，18％)熔點(diǎn)＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.99(2H，s)，6.60(1H，d，J＝2.2Hz)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.5Hz)，6.94(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.40(2H，dd，J＝1.5Hz，J＝4.4Hz)，7.79-7.85(2H，m)，8.26(1H，s)，8.71(2H，dd，J＝1.5Hz，J＝4.4Hz)，9.65(1H，s)，9.76(1H.s)；MS m/z 342([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.7％的純度。
分析C22H15NO3·HCl計(jì)算值C69.94；H4.27；N3.71實(shí)測值C70.27；H4.08；N3.58實(shí)施例387-(2-氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入2-氟苯基硼酸(420毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)2小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(120毫克，30％)熔點(diǎn)240-242℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.97(2H，d，J＝2.7Hz)，6.55(1H，s)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.5Hz)，6.93(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.33-7.43(3H，m)，7.45-7.54(1H，m)，7.78-7.85(2H，m)，8.25(1H，s)，9.62(1H，s)，9.72(1H，s)；MS m/z 359([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.2％的純度。
分析C23H15FO3·0.5H2O計(jì)算值C75.20；H4.39實(shí)測值C75.09；H4.22實(shí)施例397-(3，4-二甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3，4-二甲基苯基硼酸(450毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得褐色固體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(95毫克，26％)熔點(diǎn)218-221℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.29(3H，s)，2.31(3H，s)4.92(2H，s)，6.62-6.65(2H，m)，6.82-6.91(2H，m)，7.01-7.05(1H，m)，7.08(1H，s)，7.25(1H，d，J＝7.7Hz)，7.77-7.83(2H，m)，8.16(1H，s)，9.48(1H，s)，9.70(1H，s)；MS m/z 369([M＋H]+).
280納米處HPLC得到97.3％的純度。
分析C25H20O3·0.2H2O計(jì)算值C80.71；H5.53實(shí)測值C80.61；H5.43
實(shí)施例407-(4-氰基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(400毫克，1.2毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(140毫克，0.12毫摩爾)的混合物中，加入4-氰基苯基硼酸(514毫克，3.5毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(282.3毫克，66％)熔點(diǎn)＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.98(2H，s)，6.55(1H，d，J＝2.2Hz)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.5Hz)，6.94(lH，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.57(2H，d，J＝8.3Hz)，7.79-7.85(2H，m)，7.98(1H，d，J＝7.8Hz)，8.25(1H，s)，9.62(1H，s)，9.74(1H，s)；MS m/z 364([M-H]-).
280納米處HPLC得到96.5％的純度。
分析C24H15NO3·0.3H2O計(jì)算值C77.74；H4.24；N3.78實(shí)測值C77.91；H4.07；N3.53實(shí)施例417-(3-氟-4-甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3-氟-4-甲基苯基硼酸(462毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色固體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(226毫克，61％)熔點(diǎn)238-240℃；
1H NMR(DMSO-d6)δ4.97(2H，s)，6.63-6.65(2H，m)，6.84(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.5Hz)，6.91(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.8Hz)，7.04-7.13(2H，m)，7.38-7.43(1H，m)，7.76-7.84(2H，m)，8.20(1H，s)，9.55(1H，s)，9.72(1H，s)；MS m/z 373([M+H]+).
280納米處HPLC得到98.2％的純度。
分析C24H17O3·0.3H2O計(jì)算值C76.30；H4.70實(shí)測值C76.04；H4.60實(shí)施例427-(3，4-二甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3-氟-4-甲基苯基硼酸(546毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(261.1毫克，65％)熔點(diǎn)245-248℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.75(3H，s)，3,84(3H，s)，4.96(2H，s)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.75(1H，dd，J＝2.3Hz)，6.83-6.92(4H，m)，7.09(1H，d，J＝8.2Hz)，7.74-7.83(2H，m)，8.17(1H，s)，9.51(1H，s)，9.70(1H，s)；MS m/z 401([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.4％的純度。
分析C25H20O5·0.5H2O計(jì)算值C73.34；H5.17實(shí)測值C73.24；H4.95實(shí)施例43
7-(3-三氟甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3-氟-4-甲基苯基硼酸(570毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得褐色固體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生白色固體(214毫克，52％)熔點(diǎn)228-231℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.99(2H，d，J＝2.7Hz)，6.55(1H，d，J＝2.2Hz)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.5Hz)，6.94(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.66-7.86(6H，m)，8.25(1H，s)，9.62(1H，s)，9.73(1H，s)；MSm/z 409([M+H]+).
280納米處HPLC得到100％的純度。
分析C24H15FO3計(jì)算值C70.59；H3.70實(shí)測值C70.23；H3.79實(shí)施例447-(3，5-二氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3，5-二氟苯基硼酸(475毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1.5小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生褐色固體(217.4毫克，58％)熔點(diǎn)238-240℃；
1H NMR(DMSO-d6)δ5.01(2H，s)，6.63(2H，dd，J＝2.3Hz，J＝6.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.5Hz)，6.94(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.08-7.14(2H，m)，7.27-7.35(1H，m)，7.78-7.84(2H，m)，8.24(1H，s)，9.65(1H，s)，9.75(1H，s)；MS m/z 375([M-H]-).
280納米處HPLC得到97.5％的純度。
分析C23H14F2O3·0.3H2O計(jì)算值C72.36；H3.85實(shí)測值C72.31；H3.64實(shí)施例457-(3，5-二氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3，5-二氯苯基硼酸(573毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生褐色固體(178.9毫克，44％)熔點(diǎn)252-255℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.01(2H，s)，6.57(1H，d，J＝2.3Hz)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.5Hz，J＝8.5Hz)，6.94(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.42(2H，d，J＝1.9Hz)，7.66-7.70(1H，m)，7.79-7.85(2H，m)，8.25(1H，s)，9.68(1H，s)，9.76(1H，s)；MS m/z 409/411/413，2Cl([M＋H]+).
280納米處HPLC得到97.6％的純度。
分析C23H14Cl2O3計(jì)算值C67.50；H3.45實(shí)測值C67.13；H3.63實(shí)施例467-(3-甲基-4-氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇在7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)、二甲基甲酰胺(5毫升)、2M碳酸鈉(1毫升)、水(1毫升)和四(三苯膦)鈀(116毫克，0.1毫摩爾)的混合物中，加入3-甲基-4-氟-苯基硼酸(486毫克，3毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至120℃達(dá)1小時(shí)，然后冷卻并用乙酸乙酯(25毫升)和5％氯化銨稀釋。將有機(jī)層用水(3×10毫升)和鹽水(10毫升)洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。除去溶劑，并將所得深色液體通過色譜法(2.5％乙腈-二氯甲烷)提純以產(chǎn)生褐色固體(223毫克，60％)熔點(diǎn)185-188℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.31(3H，d，J＝1.2Hz)，4.95(2H，s)，6.62(2H，dd，J＝2.3Hz，J＝10.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝8.5Hz)，6.91(1H，dd，J＝2.3Hz，J＝8.8Hz)，7.13-7.30(3H，m)，7.76-7.84(2H，m)，8.19(1H，s)，9.55(1H，s)，9.73(1H，s)；MS m/z371([M-H]-).
280納米處HPLC得到99.5％的純度。
分析C24H17FO3計(jì)算值C77.41；H4.60實(shí)測值C77.17；H4.54實(shí)施例477-(3-呋喃基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇將7-溴-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(342毫克，1.0毫摩爾)、呋喃-3-硼酸(224毫克，2毫摩爾)和四(三苯膦)鈀(0)(116毫克，0.1毫摩爾)在DMF(20毫升)中的混合物在攪拌的同時(shí)120℃加熱4小時(shí)。將混合物經(jīng)C鹽過濾，用乙酸乙酯(×3)萃取，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，汽提溶劑并通過二氧化硅柱色譜法(18％-25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生200毫克(61％)淡黃色固體狀標(biāo)題化合物熔點(diǎn)216-218℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.00(2H，s)，6.66(2H，m)，6.84(1H，dd，J＝8.45Hz，J＝2.35Hz)，6.93(1H，dd，J＝8.77Hz，J＝2.35Hz)，7.04(1H，d，J＝2.17Hz)，7.76(1H，d，J＝8.83Hz)，7.80-7.85(3H，m)，8.16(1H，s)，9.61(1H，s)，9.71(1H，s)；MS(ESI)m/z329(M-H)-，331(M+H)+.
分析C21H14O4
計(jì)算值C76.36；H4.27實(shí)測值C75.81；H4.32實(shí)施例487-(2-呋喃基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇將7-溴-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(450毫克，1.32毫摩爾)、2-(三丁基甲錫烷基)呋喃(0.622毫升，1.97毫摩爾)和四(三苯膦)鈀(0)(153毫克，0.132毫摩爾)在甲苯(26毫升)中的混合物在攪拌的同時(shí)110℃加熱23小時(shí)。將混合物經(jīng)C鹽過濾，濃縮并通過反相制備HPLC提純以產(chǎn)生280毫克(64％)淺棕色固體狀標(biāo)題化合物。通過用CH2Cl2研制將其進(jìn)一步提純以產(chǎn)生灰色固體熔點(diǎn)158-163℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.04(2H，s)，6.61(1H，d，J＝3.11Hz)，6.67-6.69(2H，m)，6.85(1H，dd，J＝8.47Hz，J＝2.33Hz)，6.95(1H，dd，J＝8.72Hz，J＝2.27Hz)，6.99(1H，d，J＝1.98Hz)，7.77(1H，d，J＝8.77Hz)，7.82(1H，d，J＝8.53Hz)，7.85(1H，d，J＝1.32Hz)，8.24(1H，s)，9.70(1H，s)，9.75(1H，s)；MS(ESI)m/z 329(M-H)-，331(M+H)+.
分析C21H14O4·0.2CH2Cl2計(jì)算值C72.62；H4.06實(shí)測值C72.67；H4.03實(shí)施例497-丁基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇將7-溴-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(420毫克，1.23毫摩爾)、2-三丁基甲錫烷基噻唑(0.95毫升，3.07毫摩爾)和二氯二(三鄰甲苯膦)鈀(II)(97毫克，0.123毫摩爾)在DMF(12毫升)中的混合物在攪拌的同時(shí)在110℃加熱18小時(shí)。將混合物經(jīng)過C鹽過濾，用乙酸乙酯(×3)萃取，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，汽提溶劑并通過二氧化硅柱色譜法(25％乙酸乙酯-己烷)提純以產(chǎn)生200毫克(51％)黃色固體狀標(biāo)題化合物。將分析樣品通過另一二氧化硅柱色譜法(10％-20％乙酸乙酯-己烷)進(jìn)一步提純以產(chǎn)生淡黃色固體熔點(diǎn)187-189℃；1H NMR(DMSO-d6)δ0.94(3H，t，J＝7.17Hz)，1.37-1.44(2H，m)，1.47-1.58(2H，m)，2.92(2H，t，J＝7.00Hz)，5.04(2H，s)，6.73(1H，d，J＝2.36Hz)，6.82(1H，dd，J＝8.44Hz，J＝2.48Hz)，6.92(1H，dd，J＝8.76Hz，J＝2.18Hz)，7.12(1H，d，J＝2.05Hz)，7.71(1H，d，J＝8.88Hz)，7.76(1H，d，J＝8.53Hz)，8.00(1H，s)，9.63(1H，s)，9.67(1H，s)；MS(ESI) m/z 319(M-H)-，321(M+H)+.
分析C21H20O3計(jì)算值C78.73；H6.29實(shí)測值C78.42；H6.27實(shí)施例507-(3-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(686毫克，2毫摩爾)與3-吡啶基硼酸(737毫克，6毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生黃色固體(201毫克，30％)熔點(diǎn)＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.99(2H，s)，6.60(1H，d，J＝2.5Hz)，6.65(1H，d，J＝2.5Hz)，6.86(2H，dd，J＝8.5Hz，J＝2.6Hz)，7.54-7.58(1H，m)，7.78-7.85(3H，m)，8.25(1H，s)，8.55(1H，d，J＝1.4Hz)，8.63(1H，dd，J＝4.8Hz，J＝1.6Hz)，9.62(1H，s)，9.72(1H，s)；MS m/z 342([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.6％的純度。
分析C22H15NO3·0.2H2O計(jì)算值C76.60；N4.50；H4.06實(shí)測值C76.46；N4.53；H3.80實(shí)施例517-(4-甲氧基-3-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與4-甲氧基-3-吡啶基硼酸(168毫克，1.1毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生黃色固體(62.3毫克，17％)熔點(diǎn)＞220℃；
1H NMR(DMSO-d6)δ3.94(3H，s)4.98(2H，s)，6.64-6.67(2H，m)，6.83(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝2.4Hz)，6.93(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.3Hz)，6.98(1H，d，J＝8.5Hz)，7.69(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝2.4Hz)，7.78-7.85(2H，m)，8.13(1H，d，J＝2.2Hz)，8.22(1H，s)，9.60(1H，s)，9.73(1H，s)；MS m/z 372([M+H]+).
280納米處HPLC得到98.9％的純度。
分析C23H17NO4·0.2H2O計(jì)算值C73.67；N4.68；H3.74實(shí)測值C73.71；N4.40；H3.34實(shí)施例527-(嘧啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與嘧啶基硼酸(370毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生褐色固體(84.8毫克，25％)熔點(diǎn)＞250℃；1H NMR(DMSO-d6)δ5.04(2H，s)，6.62(1H，d，J＝2.3Hz)，6.65(1H，d，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝2.6Hz)，6.97(1H，dd，J＝11.8Hz，J＝5.4Hz)，7.82-7.86(2H，m)，8.31(1H，s)，8.87(2H，s)，9.26(1H，s)，9.73(2H，br s)；MS m/z 343([M+H]+).
300納米處HPLC得到96.8％的純度。
分析C21H14N2O3·0.3H2O計(jì)算值C72.53；N4.23；H8.06實(shí)測值C72.48；N4.17；H7.68實(shí)施例537-(5-甲氧基-3-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(515毫克，1.5毫摩爾)與5-甲氧基-3-吡啶基硼酸(306毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生褐色固體(160.4毫克，29％)熔點(diǎn)＞250℃；
1H NMR(DMSO-d6)δ3.88(3H，s)，5.00(2H，s)，6.64(2H，dd，J＝6.2Hz，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝2.6Hz)，6.94(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.3Hz)，7.38(1H，dd，J＝2.9Hz，J＝1.7Hz)，7.81-7.85(2H，m)，8.14(1H，s)，8.25(1H，s)，8.36(1H，s)，9.61(1H，br s)，9.72(1H，br s)；MS m/z 372([M+H]+).
300納米處HPLC得到99.0％的純度。
分析C23H17NO4計(jì)算值C74.38；N4.61；H3.77實(shí)測值C74.27；N4.49；H3.31實(shí)施例547-(2-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(686毫克，2毫摩爾)與2-吡啶基三丁基錫(306毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生褐色固體(46.9毫克，7％)熔點(diǎn)＞220℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.96(2H，s)，6.57(1H，d，J＝2.3Hz)，6.64(1H，d，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝2.4Hz)，6.92(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.40-7.46(1H，m)，7.47(1H，dd，J＝6.9Hz，J＝1.0Hz)，7.78(1H，d，J＝8.8Hz)，7.84(1H，d，J＝8.7Hz)，7.90-7.94(1H，m)，8.23(1H，s)，8.75(1H，d，J＝2.4Hz)，9.52(1H，br s)，9.71(1H，br s)；MS m/z 342([M+H]+).
210納米處HPLC得到99.0％的純度。
分析C22H15NO3·0.5H2O計(jì)算值C75.42；N4.60；H4.00實(shí)測值C75.08；N4.20；H3.80實(shí)施例557-(3，4-二氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與3，4-二氯苯基硼酸(572毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生白色固體(220毫克，54％)熔點(diǎn)143-145℃；
1H NMR(DMSO-d6)δ4.99(2H，s)，6.57(1H，d，J＝2.4Hz)，6.65(1H，d，J＝2.3Hz)，6.84(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝2.6Hz)，6.93(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.35(1H，dd，J＝8.2Hz，J＝2.1Hz)，7.62(1H，d，J＝1.9Hz)，7.77-7.84(3H，m)，8.24(1H，s)，9.59(1H，s)，9.72(1H，s)；MS m/z 407/409([M-H]-).
280納米處HPLC得到97.7％的純度。
分析C22H15NO3·0.3H2O計(jì)算值C66.62；H3.55實(shí)測值C66.40；H3.39實(shí)施例567-(4-甲基苯硫基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與4-甲基苯硫基硼酸(504毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生褐色固體(250毫克，65％)熔點(diǎn)195-198℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.56(3H，s)，4.95(2H，s)，6.65(2H，dd，J＝10.6，J＝2.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝8.5，Hz J＝2.6Hz)，6.91(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.28(2H，d，J＝8.5Hz)，7.39(2H，d，J＝8.5Hz)，7.77(1H，d，J＝8.7Hz)，7.82(1H，d，J＝8.6Hz)，8.18(1H，s)，9.52(1H，s)，9.69(1H，s)；MS m/z 387([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.4％的純度。
分析C24H18SO3·0.3H2O計(jì)算值C73.56；H4.78實(shí)測值C73.66；H4.43實(shí)施例577-(4-氰基甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與4-氰基甲基苯基硼酸(483毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生白色固體(210毫克，55％)熔點(diǎn)240-242℃；
1H NMR(DMSO-d6)δ4.14(2H，s)，4.95(2H，s)，6.63(2H，d，J＝2.3Hz)，6.85(1H，dd，J＝8.5，Hz J＝2.4Hz)，6.92(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.36(2H，d，J＝8.2Hz)，7.49(2H，d，J＝8.3Hz)，7.78(1H，d，J＝8.9Hz)，7.83(1H，d，J＝8.6Hz)，8.20(1H，s)，9.55(1H，s)，9.70(1H，s)；MS m/z 380([M+H]+).
280納米處HPLC得到98.6％的純度。
分析C25H17NO3·0.2H2O計(jì)算值C78.40；N4.58；H3.66實(shí)測值C78.45；N4.30；H3.56實(shí)施例587-(3-三氟甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與3-三氟甲氧基苯基硼酸(618毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生白色固體(140毫克，33％)熔點(diǎn)110-112℃；1H NMR(DMSO-d6)δ4.98(2H，s)，6.61(1H，d，J＝2.3Hz)，6.64(1H，d，J＝1.9Hz)，6.85(1H，dd，J＝8.5，Hz J＝2.4Hz)，6.93(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.3Hz)，7.32(1H，s)，7.38-7.44(2H，m，)，7.64-7.68(1H，m)，7.80(1H，d，J＝8.8Hz)，7.83(1H，d，J＝8.6Hz)，8.23(1H，s)，9.61(1H，s)，9.72(1H，s)；MS m/z 425([M+H]+).
280納米處HPLC得到98.7％的純度。
分析C24H15F3O4·0.5H2O計(jì)算值C66.51；H3.72實(shí)測值C66.57；H3.29實(shí)施例597-(4-三氟甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中 所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與4-三氟甲氧基苯基硼酸(618毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生白色固體(219毫克，52％)熔點(diǎn)245-248℃；
1H NMR(DMSO-d6)δ4.97(2H，s)，6.60(1H，d，J＝2.3Hz)，6.64(1H，d，J＝2.5Hz)，6.85(1H，dd，J＝8.5，Hz J＝2.5Hz)，6.93(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.3Hz)，7.32(1H，s)，7.38-7.44(2H，m，)，7.64-7.68(1H，m)，7.80(1H，d，J＝8.8Hz)，7.83(1H，d，J＝8.6Hz)，8.22(1H，s)，9.60(1H，s)，9.71(1H，s)；MS m/z 425([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.9％的純度。
分析C24H15F3O4計(jì)算值C67.93；H3.56實(shí)測值C67.76；H3.50實(shí)施例607-(4-叔丁基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與4-叔丁基苯基硼酸(534毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生白色固體(144毫克，36％)熔點(diǎn)162-165℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.38(9H，s)，4.94(2H，s)，6.63(1H，d，J＝2.4Hz)，6.68(1H，d，J＝2.2Hz)，6.84(1H，dd，J＝8.5，Hz J＝2.4Hz)，6.90(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.3Hz)，7.27(2H，d，J＝8.2Hz)，7.53(2H，d，J＝8.3Hz)，7.79(1H，d，J＝7.6Hz)，7.82(1H，d，J＝8.6Hz)，8.18(1H，s)，9.54(1H，s)，9.69(1H，s)；MS m/z 397([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.2％的純度。
分析C27H24O3·0.5H2O計(jì)算值C79.98；H6.21實(shí)測值C79.24；H6.29實(shí)施例617-(萘基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與1-萘基硼酸(516毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生白色固體(110毫克，28％)熔點(diǎn)160-162℃；
1H NMR(DMSO-d6)δ4.85(2H，s)，6.24(1H，d，J＝2.4Hz)，6.57(1H，d，J＝2.3Hz)，6.84-6.92(3H，m)，7.26-7.51(4H，m)，7.63-7.68(1H，m)，7.83(1H，d，J＝8.1Hz)，7.88(1H，d，J＝8.5Hz)，8.02(1H，d，J＝8.2Hz)，8.30(1H，s)，9.39(1H，s)，9.70(1H，s)；MS m/z 389([M+H]+).
280納米處HPLC得到95.4％的純度。
分析C27H18O3·0.4H2O計(jì)算值C81.55；H4.76實(shí)測值C81.39；H4.87實(shí)施例627-(4-乙基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與4-乙基苯基硼酸(450毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生白色固體(292毫克，79％)熔點(diǎn)203-205℃；1H NMR(DMSO-d6)δ1.29(3H，t，J＝7.6Hz)，2.71(2H，q，J＝2.2Hz)，4.94(2H，s)，6.65(2H，dd，J＝13.7Hz，J＝2.4Hz)，6.85(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝2.6Hz)，6.90(1H，dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz)，7.25(2H，d，J＝7.9Hz)，7.34(2H，d，J＝8.2Hz)，7.76(1H，d，J＝8.8Hz)，7.82(1H，d，J＝8.6Hz)，8.17(1H，s)，9.51(1H，s)，9.69(1H，s)；MSm/z 369([M+H]+).
280納米處HPLC得到99.8％的純度。
分析C25H20O3·0.5H2O計(jì)算值C79.56；H5.61實(shí)測值C79.86；H5.37實(shí)施例637-(3，5-二甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇如上在實(shí)施例23中所述，使7-溴-H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇(343毫克，1毫摩爾)與3，5-二甲基苯基硼酸(450毫克，3毫摩爾)反應(yīng)以制備標(biāo)題化合物，從而產(chǎn)生白色固體(270毫克，73％)熔點(diǎn)220-223℃；
1H NMR(DMSO-d6)δ2.34(6H，s)，4.93(2H，)，6.62(2H，dd，J＝9.7Hz，J＝2.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝2.4Hz)，6.88-6.91(3H，m)，7.04(1H，s)，7.76(lH，d，J＝8.9Hz)，7.82(1H，d，J＝8.6Hz)，8.16(1H，s)，9.49(1H，s)，9.69(1H，s)；MS m/z 369([M+H]+).
280納米處HPLC得到97.2％的純度。
分析C25H20O3·0.25H2O計(jì)算值C80.52；H5.54實(shí)測值C80.64；H5.32實(shí)施例64與17β-雌二醇競爭ERα和ERβ的能力評測本發(fā)明的代表性實(shí)例與17β-雌二醇競爭ERα和ERβ的能力。該實(shí)驗(yàn)方法提供了測定特定化合物是否結(jié)合到雌激素受體上(并因此是“雌激素的”)和是否對ERα或ERβ具有選擇性的一套方法。這些值表示在下表中并表示為IC50。包含17β-雌二醇作為比較用的標(biāo)準(zhǔn)參照物。下面簡述所用方法。制備表達(dá)人ERα或ERβ的雌激素受體配體結(jié)合區(qū)(D，E，&F)的大腸桿菌(E.coli)的粗裂解物。受體和化合物都在補(bǔ)充了1mM EDTA的1×Dulbecoo’s PBS(DPBS)中稀釋。使用高結(jié)合遮蓋(masked)微量滴定板，100微升受體(1uG/孔)與2mM[3H]-17β-雌二醇和各種濃度的化合物結(jié)合。在室溫下5至15小時(shí)后，將該板用DPBS/1mM EDTA洗滌并用液體閃爍計(jì)數(shù)儀測定結(jié)合的放射活性。IC50定義為將總17β-雌二醇結(jié)合降低50％的化合物的濃度。所得結(jié)果描述在下表中。
表1.5H-二苯并[c，g]色烯衍生物


在標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中獲得的結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物是雌激素化合物，一些對ERβ受體具有強(qiáng)的優(yōu)先親合力。本發(fā)明的化合物涵蓋對ERβ具有高于ERα的高優(yōu)先親合力至對兩種受體具有幾乎相同的親合力。因此，本發(fā)明的化合物至少部分以它們的受體親合力選擇性分布狀況為基礎(chǔ)，跨越一定的活性范圍。此外，由于每種新型的受體配體復(fù)合物是獨(dú)特的，因此其與各種共調(diào)節(jié)蛋白的相互作用也是獨(dú)特的，本發(fā)明的化合物會根據(jù)它們所處的細(xì)胞環(huán)境而表現(xiàn)出不同的調(diào)節(jié)性能。例如，在一些細(xì)胞類型中，化合物可能發(fā)揮雌激素激動劑的作用，而在另一些組織中可能發(fā)揮雌激素拮抗劑的作用。具有這種活性的化合物有時(shí)被稱作SERMs(選擇性激素受體調(diào)節(jié)劑)。然而，與許多雌激素不同，許多SERMs不會引起子宮濕重的增加。這些化合物在子宮中是抗雌激素的，能夠完全拮抗雌激素激動劑在子宮組織中的營養(yǎng)作用。然而，這些化合物在骨、心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中作為雌激素激動劑。由于這些化合物的這種組織選擇性，它們可用于治療或預(yù)防由雌激素缺乏(在如骨或心血管的某些組織中)或雌激素過量(在子宮或乳腺中)引起的或與其相關(guān)的哺乳動物病癥或綜合征。
即使除了這種細(xì)胞特異性調(diào)節(jié)，本發(fā)明的化合物也具有在一種受體類型中充當(dāng)激動劑而在另一種受體類型中充當(dāng)拮抗劑的潛能。例如，已證實(shí)這些化合物可以是ERβ的拮抗劑，同時(shí)是ERα的激動劑(Meyers，MarvinJ.；Sun，Jun；Carlson，Kathryn E.；Katzenellenbogen，Benita S.；Katzenellenbogen，John A..J.Med.Chem.(1999)，42(13)，2456-2468)。這種ERSAA(雌激素受體選擇性激動劑拮抗劑)活性為該系列化合物提供了藥理上截然不同的雌激素活性。
測定給定實(shí)驗(yàn)化合物的活性分布狀況的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法是容易獲得的。下列實(shí)施例簡要概括了數(shù)種典型實(shí)驗(yàn)方法。SERMs的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法也由美國專利4,418,068和5,998,402提供。
實(shí)施例65大鼠親子宮/抗親子宮實(shí)驗(yàn)方法化合物的雌激素和抗雌激素性質(zhì)可以在性不成熟的大鼠親子宮實(shí)驗(yàn)(4天)中測定(如先前由L.J.Black和R.L.Goode所描述，Life Sciences，26，1453(1980))。在6組中測試性不成熟的Sprague-Dawley大鼠(雌性，18天齡)。以50％DMSO/50％鹽水作為注射載體，用10uG化合物、100uG化合物，(100uG化合物+1uG 17β-雌二醇)來檢測抗雌激素性及1uG 17β-雌二醇進(jìn)行每日腹腔注射來處理動物。在第4天，用CO2窒息處死動物，取出它們的子宮，剝離額外的脂質(zhì)，去除任何流體并測定濕重。對一個(gè)子宮角的切片進(jìn)行組織學(xué)研究，并使用剩余物分離總RNA以評測補(bǔ)體組分3的基因表達(dá)。
實(shí)施例666周卵巢切除大鼠實(shí)驗(yàn)方法-骨和心臟保護(hù)卵巢切除或假手術(shù)1天后的Sprague Dawley CD大鼠獲自Taconic農(nóng)場(重量范圍240-275克)。它們以3或4只大鼠/籠圈養(yǎng)于12/12(明/暗)循環(huán)的屋內(nèi)，隨意提供食物(Purina 5K96C大鼠糧)和水。所有研究用處理均在動物到達(dá)后1天開始，根據(jù)指示每周給藥7天，如此進(jìn)行6天。一組年齡相應(yīng)的假手術(shù)大鼠未接受任何處理，作為每次研究中的完整的雌激素充足對照組。
所有處理物都以給定濃度在普通鹽水中的1％tween 80中制備，從而處理量為0.1毫升/100克體重。將17β-雌二醇溶于玉米油(20微克/毫升)，皮下遞送，0.1毫升/大鼠。按照組平均體重測量結(jié)果，以三周為間隔調(diào)節(jié)所有劑量。
在開始處理5周后，研究終止前1周，評測每個(gè)大鼠的骨鹽密度(BMD)。使用XCT-960M(pQCT；Stratec Medizintechnik，Pforzheim，德國)，對麻醉大鼠進(jìn)行近端脛骨的總密度和小梁密度檢測。檢測如下進(jìn)行掃描前15分鐘，用45毫克/千克氯胺酮、8.5毫克/千克甲苯噻嗪和1.5毫克/千克乙酰丙嗪腹腔注射，麻醉每只大鼠。
右后肢通過直徑為25毫米的聚碳酸酯管以踝關(guān)節(jié)90°角、膝關(guān)節(jié)180°捆到丙烯酸支撐架上。聚碳酸酯管固定到滑動平臺上，使其與pQCT的孔徑相垂直。調(diào)節(jié)該平臺以使股骨的遠(yuǎn)端和脛骨的近端位于掃描范圍內(nèi)。二維掃描長度為10毫米，行分辨率為0.2毫米。掃描圖象顯示在監(jiān)視器上后，定位于脛骨的近端。在與該點(diǎn)距離3.4毫米的遠(yuǎn)端開始PQCT掃描。pQCT掃描厚度為1毫米，體素(三維像素值)是0.140毫米，切片由145個(gè)投影組成。
在完成pQCT掃描之后，圖像顯示在監(jiān)視器上。勾畫出包括脛骨但排除腓骨的目的區(qū)域。使用迭代算法自動去除軟組織。剩余骨的密度(總密度)用毫克/立方厘米表示。以同心螺旋形式剝除外層的55％骨頭。剩余骨的密度(小梁密度)用毫克/立方厘米表示。BMD評測后一周，通過二氧化碳窒息使大鼠安樂死，收集血液進(jìn)行膽固醇測定。取出子宮并測量重量。使用Boehringer-Mannheim Hitachi 911臨床分析儀，膽固醇/HP試劑盒測定總膽固醇。使用與Dunnet’s檢驗(yàn)的單向差異分析比較統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。
實(shí)施例67MCF-7/ERE抗增生性實(shí)驗(yàn)方法在DMSO中制備實(shí)驗(yàn)化合物(通常0.1M)的儲液，然后用DMSO稀釋10至100倍來制備1或10mM的工作溶液。將DMSO儲液貯存在4℃(0.1M)或-20℃(＜0.1M)。MCF-7細(xì)胞用生長培養(yǎng)基[D-MEM/F-12培養(yǎng)基，含有10％(v/v)熱滅活胎牛血清、1％(v/v)青霉素-鏈霉素和2mMglutaMax-1]傳代，一周兩次。將細(xì)胞置于通氣的瓶中，在5％CO2/95％濕度的培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。處理前一天，細(xì)胞按照25,000/孔以及生長培養(yǎng)基置于96孔板，37℃培養(yǎng)過夜。
細(xì)胞用50微升/孔1∶10稀釋的腺病毒5-ERE-tk-熒光素酶在實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基[無酚紅的D-MEM/F-12培養(yǎng)基，含有10％(v/v)熱滅活的炭吸附胎牛血清、1％(v/v)青霉素-鏈霉素、2mM glutaMax-1、1mM丙酮酸鈉]中感染37℃。然后用150μλ實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基洗滌孔一次。最后，在每次處理使用8孔的復(fù)制實(shí)驗(yàn)中，用150μλ/孔的載體(≤0.1％v/v DMSO)或以≥1000倍稀釋到實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基中的化合物，將細(xì)胞37℃處理24小時(shí)。
實(shí)驗(yàn)化合物的初篩選以1μM的單劑量進(jìn)行，其單獨(dú)(激動劑模式)或與0.1nM 17β-雌二醇組合(EC80，拮抗劑模式)進(jìn)行。每一96孔板還包含載體對照組(0.1％v/v DMSO)和激動劑對照組(0.1或1nM 17β-雌二醇)。劑量應(yīng)答實(shí)驗(yàn)以激動劑和/或拮抗劑模式對活性化合物進(jìn)行，對數(shù)值升高從10-14至105M。從這些劑量應(yīng)答曲線可以分別獲得EC50和IC50值。在每一處理組中，最后的孔含有5微升3×10-5M ICI-182，780(最終濃度10-6M)作為ER拮抗劑對照。
處理后，細(xì)胞在搖床上用25微升/孔的1×細(xì)胞培養(yǎng)裂解劑(PromegaCorporation)裂解15分鐘。將細(xì)胞溶解物(20微升)轉(zhuǎn)移至96孔光度計(jì)板，在MicroLumat LB 96P光度計(jì)(EG & G Berthold)中使用100微升/孔的熒光素酶底物(Promega Corporation)檢測熒光素酶活性。加入底物之前，對每孔進(jìn)行1秒的背景檢測。加入底物，延遲1秒后檢測熒光素酶活性10秒。將數(shù)據(jù)從光度計(jì)轉(zhuǎn)移到Macintosh個(gè)人電腦中，使用JMP軟件(SAS Institute)分析；這一程序從每孔的熒光素酶檢測中除去背景讀數(shù)，然后計(jì)算每一處理的平均和標(biāo)準(zhǔn)偏差。
熒光素酶數(shù)值取對數(shù)，并用Huber Mestimator使極端轉(zhuǎn)化值的權(quán)數(shù)降低。使用JMP軟件分析轉(zhuǎn)化和加權(quán)數(shù)據(jù)，進(jìn)行單向ANOVA(Dunnett’s檢驗(yàn))。將化合物處理與激動劑模式的載體對照結(jié)果，或拮抗劑模式的陽性激動劑對照物結(jié)果(0.1nM 17β-雌二醇)相比較。對于起始的單劑量實(shí)驗(yàn)，如果化合物處理結(jié)果與適當(dāng)?shù)膶φ彰黠@不同(p＜0.05)，則結(jié)果表示為相對于17β-雌二醇對照的百分比[即，((化合物-載體對照)/(17β-雌二醇對照-載體對照))×100]。JMP軟件還用于從非線性劑量應(yīng)答曲線確定EC50和/或IC50。
實(shí)施例68LDL氧化的抑制-抗氧化活性從屠宰場獲得豬主動脈，洗滌，轉(zhuǎn)入冰的PBS中，收集主動脈內(nèi)皮細(xì)胞。為了收集細(xì)胞，將主動脈的肋間血管結(jié)扎并將主動脈的一端夾緊。將新鮮的無菌過濾的0.2％膠原酶(Sigma I型)置于血管中，然后將血管另一端夾緊，形成封閉系統(tǒng)。將主動脈在37℃孵育15-20分鐘，隨后收集膠原酶溶液，2000xg離心5分鐘。將沉淀重懸在7毫升內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中，其由炭吸附的FBS(5％)、NuSerum(5％)、L-谷氨酰胺(4mM)、青霉素-鏈霉素(1000U/ml，100微克/毫升)和gentimicin(75微克/毫升)補(bǔ)充的無酚紅DMEM/Ham’s F12培養(yǎng)基組成，接種于100毫米的培養(yǎng)皿中，在5％的CO2中37℃培養(yǎng)。20分鐘后，將細(xì)胞用PBS漂洗，然后加入新鮮培養(yǎng)基，24小時(shí)后重復(fù)操作一次。大約1周后細(xì)胞匯合。內(nèi)皮細(xì)胞一周兩次常規(guī)飼養(yǎng)，當(dāng)匯合時(shí)用胰蛋白酶化，按1∶7的比例接種。在待測化合物(5μM)存在的情況下，細(xì)胞介導(dǎo)的12.5微克/毫升LDL的氧化37℃進(jìn)行4小時(shí)。結(jié)果以氧化過程的抑制百分比表示，用分析游離醛(YagiK.，Biochem Med 15212-216(1976))的TBARS(硫代巴比妥酸反應(yīng)物)檢測。
實(shí)施例69D12下丘腦細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法從RCF17親代細(xì)胞系亞克隆D12大鼠下丘腦細(xì)胞，并冷凍貯存。它們在DMEMF12(1∶1)、glutaMAX-1(2Mm)、青霉素(100U/ml)-鏈霉素(100微克/毫升)及10％胎牛血清(FBS)中常規(guī)生長。細(xì)胞以未匯合(subconfluent)密度(1-4×10<6>孔/150毫米皿)置于含有2-10％炭吸附FBS的無酚紅培養(yǎng)基(DMEMF12、glutaMAX、青霉素-鏈霉素)中。24小時(shí)后，在細(xì)胞中再加入含有2％吸附的血清的培養(yǎng)基。為了檢測激動劑活性，用10nM 17β-雌二醇或各種劑量的實(shí)驗(yàn)化合物(1mM，或1pM至1mM)處理細(xì)胞。為了檢測拮抗劑活性，在不存在或存在各種劑量(100pM至1mM)實(shí)驗(yàn)化合物的情況下，用0.1nM 17β-雌二醇處理細(xì)胞。對照皿也用DMSO處理以作為陰性對照。加入激素48小時(shí)后，裂解細(xì)胞并執(zhí)行結(jié)合實(shí)驗(yàn)方法。
對于每一結(jié)合實(shí)驗(yàn)方法，用150微升體積的10nM3H-R5020和100倍過量R5020孵育100-150毫克蛋白質(zhì)。在96孔板中制備重復(fù)三次的反應(yīng)物(三次用R5020，三次不用R5020)。首先加入蛋白質(zhì)提取物，然后加入3H-R5020或3H-R5020及100×未標(biāo)記R5020。該反應(yīng)在室溫下進(jìn)行1-2小時(shí)。加入100毫升冷TE中的5％炭(Norit SX-4)、0.5％dextran 69K(Pharmacia)(pH7.4)終止反應(yīng)。室溫下5分鐘后，離心(5分鐘，1000RCF，4℃)分離結(jié)合和未結(jié)合的配體。取出上清液(大約150毫升)并轉(zhuǎn)入閃爍管。加入閃爍流體(Beckman Ready Protein+)后，樣品在閃爍計(jì)數(shù)儀中對計(jì)數(shù)1分鐘。
實(shí)施例70
CNS視前區(qū)中的孕酮受體切除60天齡的雌Sprague-Dawley大鼠的卵巢。動物圈養(yǎng)于動物看護(hù)設(shè)施，光周期為12小時(shí)明12小時(shí)暗，可以自由接觸自來水和嚙齒動物糧。
將切除卵巢的動物隨機(jī)分成用載體(50％DMSO，40％PBS，10％乙醇載體)、17β-雌二醇(200納克/千克)或待側(cè)化合物注射的組。在注射17β-雌二醇之前1小時(shí)用實(shí)驗(yàn)化合物注射其他動物來評測該化合物的拮抗劑性。皮下注射6小時(shí)后，用致命劑量的CO2使動物安樂死，收集它們的腦并冷凍。
從動物中收集的組織在恒冷箱中-16℃切片并集中在硅烷包被的顯微鏡載玻片上。然后將放有切片的載玻片在保持42℃的載玻片加溫器上干燥并貯存在-80℃的干燥玻片盒中。在處理之前，將干燥的玻片盒緩慢升溫至室溫(-20℃12-16小時(shí)；4℃2小時(shí)；室溫1小時(shí))以消除載玻片上凝結(jié)的形成，并由此使組織和RNA降解降至最低。將干燥的載玻片置于金屬支架上，在4％低聚甲醛(pH9.0)中后固定(postfixed)5分鐘并如上所述進(jìn)行處理。
將含有大鼠PR cDNA 9(配體結(jié)合區(qū)域)的815bp片段的質(zhì)粒線性化，用于產(chǎn)生S 35-UTP標(biāo)記的探針，其與大鼠PR mRNA部分互補(bǔ)。加工過的放有切片的載玻片與含有核糖核酸探針(4-6×106DPM/載玻片)和50％甲酰胺的20毫升雜交混合物雜交，在55℃濕潤室中孵育過夜。早晨將載玻片置于浸在2×SSC(0.5M NaCl，0.015M檸檬酸鈉；pH7.0)/10mM DTT中的金屬支架上。將支架整個(gè)轉(zhuǎn)移到大容器中并用2×SSC/10mM DTT在室溫下在溫和攪拌的同時(shí)洗滌15分鐘。然后將載玻片用RNA酶緩沖液37℃洗滌30分鐘，用RNA酶A(2毫克/毫升)37℃漂洗30分鐘，并室溫用1×SSC漂洗15分鐘。隨后，將載玻片在65℃下，在0.1×SSC中漂洗(2×30分鐘)以去除非特異性標(biāo)記物，在室溫下，用0.1×SSC漂洗15分鐘并用分級系列的醇乙酸乙酯(70％，95％和100％)脫氫?？諝庵懈稍锏妮d玻片放在x-射線膠片對面3天，然后進(jìn)行拍攝處理。將來自所有動物的載玻片一起進(jìn)行雜交、漂洗、曝光及拍攝處理以消除由實(shí)驗(yàn)之間的條件變動引起的差異。
實(shí)施例71大鼠熱潮紅-CNS作用手術(shù)后獲得切除卵巢的雌性60天齡Sprague-Dawley大鼠。手術(shù)至少在第一次處理之前8天進(jìn)行。動物單獨(dú)圈養(yǎng)，12小時(shí)明/暗循環(huán)，給予標(biāo)準(zhǔn)大鼠糧和水。
每一研究中包括兩個(gè)對照組。劑量基于毫克/千克組平均體重，在10％在芝麻油中的DMSO(皮下注射研究)或在鹽水中的1.0％tween 80(口服研究)中制備。以0.01至10毫克/千克組平均體重的劑量對動物施用實(shí)驗(yàn)化合物。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中包含載體和乙炔基雌二醇(EE)對照(0.1毫克/千克皮下注射，或0.3毫克/千克口服)對照組。當(dāng)檢驗(yàn)化合物的拮抗劑活性時(shí)，對于皮下注射或口服研究，分別以0.1或0.3毫克/千克共同施用EE。施用實(shí)驗(yàn)化合物直至到測量尾巴皮膚的白天溫度。
在4天的馴化期后，將動物用目的化合物每天處理一次。每一處理組有10只動物?；衔锏氖┯没蛘咄ㄟ^在后頸部皮下注射0.1毫升，或者通過口服0.5毫升的量進(jìn)行。處理的第三天，在皮下植入嗎啡丸(75毫克硫酸嗎啡)。在處理的第五天，再植入一或兩個(gè)嗎啡丸。在第八天，用氯胺酮(80毫克/千克，肌肉內(nèi))注射大約一半的動物，并將與MacLab DataAcquisition System(API Instruments，Milford，MA)相連的熱電偶捆扎在尾巴上，離尾巴根部大約1英寸。該系統(tǒng)可以連續(xù)測量尾巴皮膚溫度。測量基線溫度15分鐘，然后皮下注射(0.2毫升)納洛酮(1.0毫克/千克)以阻斷嗎啡的作用并在此后1小時(shí)測量尾巴皮膚溫度。在第九天，將剩余動物集中并類似地進(jìn)行分析。
實(shí)施例72分離的大鼠主動脈環(huán)(aortic ring)中的血管舒縮功能將Sprage-Dawley大鼠(240-260克)分成4組
1.正常未切除卵巢的(完整)2.切除卵巢(ovex)，載體處理的3.切除卵巢。17β-雌二醇處理的(1毫克/千克/天)4.切除卵巢，實(shí)驗(yàn)化合物(即，1毫克/千克/天)處理的動物在處理前大約3周將動物的卵巢切除。每一動物通過胃腸管飼法給予懸浮在含有1％tween-80的蒸餾去離子水中的17β-雌二醇硫酸鹽或?qū)嶒?yàn)化合物(1毫克/千克/天)。載體處理過的動物給予適當(dāng)量的在藥物處理組中使用的載體。
CO2吸入和放血后，使動物安樂死。迅速取出它們的胸主動脈，置于37℃具有下列組分(mM)的生理溶液中NaCl(54.7)、KCl(5.0)、NaHCO3(25.0)、MgCl22H2O(2.5)、D-葡萄糖(11.8)和CaCl2(0.2)，這些溶液用CO2-O295％/5％充氣以達(dá)到7.4的最終pH值。從外表面除去外膜，將血管切成2-3毫米寬的環(huán)。將環(huán)懸浮在10毫升組織水浴槽(tissuebath)中，其一端連接到水浴槽的底部，另一端連接到測力傳感器上。對這些環(huán)施加1克的靜止張力。環(huán)平衡1小時(shí)，獲取信號，進(jìn)行分析。
平衡后，將環(huán)暴露在濃度遞增的脫氫腎上腺素(10-8至10-4M)中，記錄張力。然后將水浴槽用新鮮緩沖劑漂洗3次。漂洗后，在組織水浴槽中加入200mM L-NAME，平衡30分鐘。然后重復(fù)脫氫腎上腺素濃度應(yīng)答曲線。
實(shí)施例73八臂放射狀迷宮(Eight Arm Radial Arm Maze)-認(rèn)知提高使用到達(dá)時(shí)重量為200-250克的雄性Sprague-Dawley，CD大鼠(Charles River，Kingston，NY)。每籠六個(gè)大鼠，隨意給予標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室糧和水一周。圈養(yǎng)在保持22℃的群體室(colony room)中進(jìn)行，具有12小時(shí)明/暗循環(huán)，其中在早上6:00開始光照。在適應(yīng)該裝置后，將動物單獨(dú)圈養(yǎng)并保持85％自由喂食重量。一旦達(dá)到穩(wěn)定重量，就將大鼠放入8臂放射狀迷宮中。
迷宮的結(jié)構(gòu)改裝自Peele和Baron的迷宮(Pharmacology，Biochemistry，and Behavior，29143-150，1988)。將迷宮高度升至75.5厘米并包括被從中心互相等距離輻射開的8個(gè)臂包圍的圓形區(qū)域，每一臂是58厘米長×13厘米高。裝有透明的有機(jī)玻璃圓筒，在每次實(shí)驗(yàn)開始之前將動物困在迷宮的中心部分。迷宮的每一臂配有3組與數(shù)據(jù)采集裝置連接的光電池，數(shù)據(jù)采集裝置又與電腦相連。使用光電池追蹤大鼠在迷宮中的活動。當(dāng)臂的外部光電池在給定時(shí)間首次啟動時(shí)，位于每一臂末端的食物杯上方的丸劑進(jìn)料器分配兩個(gè)45毫克的巧克力丸。迷宮位于測試室中，其每一壁上有黑色白色幾何招貼畫作為視覺線索。在所有訓(xùn)練和測試過程中，可聽見白噪聲(大約70db)。
訓(xùn)練方法包括五個(gè)階段，每個(gè)每天持續(xù)5或10分鐘。在將大鼠置于迷宮中心部分及置于升高的圓筒來開始計(jì)時(shí)之間，存在10秒的延遲。在階段I中，將食物受限的大鼠對置于迷宮中10分鐘，在迷宮的8個(gè)臂上散布著45毫克巧克力食品丸。在階段II中，將每只大鼠單獨(dú)放在迷宮中10分鐘，其中丸散布在每個(gè)臂的中間光電池到食物杯之間。在階段III中，將每只大鼠放在迷宮中10分鐘，其中食物丸僅位于每個(gè)臂的食物杯中及其附近。在階段IV中，給每只大鼠10分鐘來獲得每個(gè)臂上的兩個(gè)丸。重新進(jìn)入一個(gè)臂被認(rèn)為是失誤。每天以這樣的方式訓(xùn)練大鼠直至它們在連續(xù)三天訓(xùn)練中達(dá)到小于或等于2次總失誤的表現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)。總馴化和訓(xùn)練時(shí)間大約3周。
實(shí)驗(yàn)化合物在磷酸鹽緩沖鹽水中制備并以1毫克/千克的量施用。莨菪胺HBr(0.3毫克/千克，皮下注射)充當(dāng)損害劑，其導(dǎo)致失誤率提高(記憶受損)。在任一給定實(shí)驗(yàn)天，在第一次進(jìn)行迷宮實(shí)驗(yàn)之前30分鐘，將實(shí)驗(yàn)化合物與莨菪胺同時(shí)通過腹腔施用。
為了評測實(shí)驗(yàn)化合物，設(shè)計(jì)用于重復(fù)測量的8×8平衡拉丁方，從而用至少量的動物實(shí)現(xiàn)高實(shí)驗(yàn)效率用隨機(jī)分配在每一實(shí)驗(yàn)中的8種處理物(載體、莨菪胺、3劑與莨菪胺組合的實(shí)驗(yàn)化合物)進(jìn)行8次實(shí)驗(yàn)，每周兩次。每次處理采用與每一其他處理相同的次數(shù)。因此，可以估算每次處理的殘留效果并從直接處理效果中去除。在ANOVA之后，進(jìn)行Dunnett’s雙面實(shí)驗(yàn)(two sides test)在調(diào)正的平均值上進(jìn)行多重比較。
在第一次實(shí)驗(yàn)過程中在5分鐘內(nèi)沒有作出4次正確選擇的動物，或到第二次實(shí)驗(yàn)最后還沒有作出一共8次選擇的動物，被視為對于該時(shí)間段超時(shí)了。任何在施用了一劑以上的實(shí)驗(yàn)化合物之后“超時(shí)”的動物被排除在分析以外。
實(shí)施例74神經(jīng)保護(hù)在主皮層神經(jīng)元培養(yǎng)物中對細(xì)胞的時(shí)間依賴性死亡的抑制主皮層神經(jīng)元使用Monyer等人，1989，Brain Research 483347-354描述的方法的變通方案從0-1歲齡的大鼠腦獲得。分散的腦組織在DMEM/10％PDHS(pregnant donor horse serum)中生長3天，然后用阿糖胞苷(ARC)處理2天以去除污染的膠質(zhì)細(xì)胞。在第五天，除去ARC培養(yǎng)基，換成DMEM/10％PDHS。將神經(jīng)細(xì)胞在使用之前再培養(yǎng)4-7天。
對照的主神經(jīng)元培養(yǎng)物在培養(yǎng)的第12和18天之間表現(xiàn)出漸進(jìn)性細(xì)胞死亡。在第9天在6個(gè)保持在DMEM和10％PDHS中的培養(yǎng)物中加入實(shí)驗(yàn)化合物并將其余培養(yǎng)物作為對照物，然后在第12和16天評測12種培養(yǎng)物的乳酸脫氫酶(LD)水平。使用Wroblewski等人1955，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.90210-213的方法的變通方案檢測LD。LD是普遍用于臨床和基礎(chǔ)研究來測定組織生存力的細(xì)質(zhì)酶。培養(yǎng)基LD的提高與細(xì)胞死亡直接相關(guān)。
對由低血糖引起的細(xì)胞毒性的神經(jīng)保護(hù)將獲自ATCC的C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞以1×10<6>細(xì)胞/毫升的濃度置于含有FBS的RPMI培養(yǎng)基(在FALCON 25平方厘米組織培養(yǎng)瓶中)中。在低血糖發(fā)作之前的4小時(shí)，棄去保持培養(yǎng)基，將單細(xì)胞層在合適的培養(yǎng)基中漂洗兩次，然后在無血清或無血清加上實(shí)驗(yàn)化合物中37℃培養(yǎng)4小時(shí)。使用Kreb’s Ringer磷酸鹽緩沖劑將單細(xì)胞層漂洗兩次，然后加入合適的葡萄糖處理物。RPMI培養(yǎng)基含有2毫克葡萄糖/毫升；將培養(yǎng)瓶分成6組，各自含有100％葡萄糖(2毫克/毫升)、80％葡萄糖(1.6毫克/毫升)、60％葡萄糖(1.2毫克/毫升)或0％葡萄糖(緩沖劑)或補(bǔ)充了實(shí)驗(yàn)化合物。將所有培養(yǎng)瓶培養(yǎng)20小時(shí)，然后使用臺盼藍(lán)評測總的存活和死亡細(xì)胞數(shù)。
對興奮性神經(jīng)毒性氨基酸的神經(jīng)保護(hù)將含有SK-N-SH成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞的5個(gè)培養(yǎng)皿用實(shí)驗(yàn)化合物處理并將5個(gè)培養(yǎng)皿用RPMI培養(yǎng)基處理。4小時(shí)后，將所有細(xì)胞用NMDA(500mu M)處理5分鐘。然后測定總存活細(xì)胞和死亡細(xì)胞。
對氧-葡萄糖除去的神經(jīng)保護(hù)固縮核的分析以測定細(xì)胞凋亡由E18大鼠胎兒制備皮層神經(jīng)元，并以100,000細(xì)胞/孔的密度置于用聚-D-賴氨酸(10納克/毫升)和血清預(yù)涂布的8孔室玻片上。將細(xì)胞置于含有10％FCS的高葡萄糖DMEM中，并放置在含有10％CO2/90％空氣的37℃培養(yǎng)箱中。第二天，將培養(yǎng)基換成含有B27補(bǔ)充物的高葡萄糖DMEM，從而去除血清，并在沒有進(jìn)一步改變培養(yǎng)基的情況下將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中直至實(shí)驗(yàn)?zāi)翘?。在?天，將載玻片分成兩組；對照組和OGD組。對照組中的細(xì)胞接受有葡萄糖和customB27(沒有抗氧化劑)的DMEM。OGD組中的細(xì)胞接受含有custom B27的無葡萄糖DMEM，其已經(jīng)在真空下脫氣15分鐘。將細(xì)胞在氣密室中用90％N2/10％CO2吹掃10分鐘，并在37℃培養(yǎng)6小時(shí)。6小時(shí)后，將對照組和OGD組細(xì)胞的含載體(DMSO)或?qū)嶒?yàn)化合物的培養(yǎng)基均換成含葡萄糖和custom B27的DMEM。將細(xì)胞送回37℃的含氧量正常的培養(yǎng)箱中。在24小時(shí)后，將細(xì)胞在4％PFA中在4℃固定10分鐘并用Topro(熒光核結(jié)合染料)染色。使用激光掃描血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀通過測量固縮核估定細(xì)胞凋亡。
作為細(xì)胞死亡指征的LDH釋放的測量由E18大鼠胎兒制備皮層神經(jīng)元，并以150,000細(xì)胞/孔的密度置于用聚-D-賴氨酸(10納克/毫升)和血清預(yù)包被的48孔培養(yǎng)板上。將細(xì)胞置于含有10％FCS的高葡萄糖DMEM中，并放置在含有10％CO2/90％空氣的37℃培養(yǎng)箱中。第二天，將培養(yǎng)基換成含有B27補(bǔ)充物的高葡萄糖DMEM，從而去除血清。在第6天，將細(xì)胞分成兩組；對照組和OGD組。對照組中的細(xì)胞接受含有葡萄糖和custom B27(沒有抗氧化劑)的DMEM。OGD組中的細(xì)胞接受含有custom B27的無葡萄糖DMEM，其已經(jīng)在真空下脫氣15分鐘。將細(xì)胞在氣密室中用90％N2/10％CO2吹掃10分鐘，并在37℃培養(yǎng)6小時(shí)。6小時(shí)后，將對照組和OGD組細(xì)胞的含載體(DMSO)或?qū)嶒?yàn)化合物的培養(yǎng)基均換成含葡萄糖和custom B27的DMEM。將細(xì)胞送回37℃的含氧量正常的培養(yǎng)箱中。在24小時(shí)后，通過測量細(xì)胞釋放進(jìn)入培養(yǎng)基中的LDH(乳酸脫氫酶)的來估定細(xì)胞死亡。在LDH檢測中，將50微升培養(yǎng)基的等分試樣轉(zhuǎn)移到96孔板中。在加入140微升0.1M磷酸鉀緩沖劑(pH7.5)和100微升0.2毫克/毫升NADH之后，將板在室溫下在暗處靜置20分鐘。加入10微升丙酮酸鈉以引發(fā)反應(yīng)。立即在Thermomax板讀數(shù)器(Molecular Devices)中在340nM下對板進(jìn)行讀數(shù)。每6秒記錄吸光度(NADH濃度的一個(gè)指數(shù))5分鐘，并用表示NADH消失速率的斜率計(jì)算LDH活性。
LDH活性(U/ml)＝(ΔA/分鐘)(TCF)(20)(0.0833)/(.78)其中0.0833＝比例常數(shù)0.78＝儀表光路徑長度(厘米)實(shí)施例75HLA大鼠實(shí)驗(yàn)方法-克隆病和炎性腸道疾病雄性HLA-B27大鼠獲自Taconic，提供不受限制的食物來源(PMI Lab糧5001)和水。在研究開始時(shí)，大鼠為22-26周齡。
大鼠每天皮下注射下列制劑之一一次，持續(xù)7天。每組中有5只大鼠并且最后一劑在安樂死之前2小時(shí)施用。
●載體(50％DMSO/50％Dulbecco’s PBS)●17α-乙炔基-17β-雌二醇(10微克/千克)●實(shí)驗(yàn)化合物每天觀察糞便質(zhì)量并按照下列標(biāo)準(zhǔn)分級腹瀉＝3；軟糞便＝2；正常糞便＝1。在實(shí)驗(yàn)方法的最后，收集血清并貯存在-70℃。制備結(jié)腸切片用于組織學(xué)分析，分析另一片段的髓過氧物酶活性。
使用下列方法測量髓過氧物酶活性。收取結(jié)腸組織并在液氮中迅速冷凍。使用整個(gè)結(jié)腸的典型樣品以確保樣品之間的一致性。將組織貯存在-80℃直至使用。接著，將組織稱重(大約500毫克)并在1∶15w/v的5mMH2KPO4(pH6)漂洗緩沖劑中勻漿。將組織在Sorvall RC 5B離心機(jī)中，2-8℃下20,000×g離心45分鐘。然后棄去上清液。將組織在2.5毫升含有10mM EDTA和0.5％Hex Ammonium Bromide的(1∶5w/v)50mMH2KPO4中重懸并勻漿以助于胞內(nèi)MPO增溶。將組織在液氮中冷凍，在37℃-水浴中解凍并超聲處理15秒以確保細(xì)胞膜裂解。這一過程重復(fù)3次。然后將樣品在冰上放置20分鐘，并在2-8℃下12,000×g離心15分鐘。在這些步驟之后分析上清液。
在反應(yīng)管中加入2.9毫升含有0.167鄰聯(lián)二茴香胺和0.0005％H2O2的50mM H2KPO4制備實(shí)驗(yàn)混合物。當(dāng)過氧化氫降解時(shí)，鄰聯(lián)二茴香胺氧化并以濃度依賴方式在460納米吸收。將混合物加熱至25℃。在反應(yīng)管中加入100微升組織上清液，在25℃培養(yǎng)1分鐘，然后將1毫升轉(zhuǎn)移到一次性塑料試管中。參比含有2.9毫升反應(yīng)混合物和100微升0.5％溴化銨溶液的空白組，在460納米，每兩分鐘反應(yīng)時(shí)間測量一次OD。
通過將460處的吸光度與用31.1單位/小瓶純化的人MPO制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，量化酶活性單位。重建MPO，用含有10mM EDTA和0.5％Hex Ammonium Bromide的50mM H2KPO4連續(xù)稀釋至四個(gè)已知濃度。將樣品吸光度與這一曲線進(jìn)行比較以確定活性。
如下進(jìn)行組織學(xué)分析。將結(jié)腸組織浸于10％中性緩沖福爾馬林中。將每一結(jié)腸樣品分成四個(gè)樣品以進(jìn)行評測。將福爾馬林固定的組織在真空滲入處理機(jī)中處理來石蠟包埋。將樣品5微米切片，然后用蘇木精和伊紅(H&E)染色，使用Boughton-Smith之后改進(jìn)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行雙盲組織評測。在完成評分后，樣品確定，將數(shù)據(jù)制表并通過帶有多重平均數(shù)比較的ANOVA線性建模進(jìn)行分析。
本文引用的所有專利、出版物和其他文獻(xiàn)由此全部引為參考。
權(quán)利要求
1.下式化合物或其可藥用鹽 其中R1、R2、R3、R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自氫、羥基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或鹵素；R4是氫、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6烷氧基、-CN、-C2-C8鏈烯基、-CHO、芳基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基或吡啶基；條件是R1-R8中的至少一個(gè)不是H；所述烷基、烷氧基、鏈烯基、芳基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基或吡啶基均任選被取代。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R4選自氫、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6烷氧基、-CN、-C2-C7鏈烯基、-CHO、苯基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基和吡啶基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R4選自氫、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6烷氧基、-CN、C2-C7鏈烯基、呋喃基、噻吩基和吡啶基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R5、R7和R8各自獨(dú)立地為氫或鹵素。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R1、R2、R3和R6各自獨(dú)立地為氫、鹵素或羥基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R1、R2、R3和R6中的至少一個(gè)為羥基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R2和R6均是羥基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其是下列之一(a)5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(b)8-氯-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(c)7-氯-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(d)7-溴-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(e)3，9-二羥基-5H-二苯并[c，g]色烯-7-腈；(f)7-甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(g)7-乙烯基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(h)12-溴-7-甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(i)12-氯-7-甲氧基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(j)7-甲基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(k)7-[2-(羥甲基)苯基]-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(l)7-苯基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(m)7-(2-甲苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(n)7-(3-甲苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(o)7-(4-甲苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(p)7-(4-甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(q)7-(4-氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(r)7-(4-氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(s)7-噻吩-2-基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(t)7-噻吩-3-基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(u)7-(3-氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(v)7-(3-氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(w)7-(3-甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(x)7-(2-氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(y)7-(3，4-二氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(z)7-(4-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(aa)7-(2-氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(bb)7-(3，4-二甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(cc)7-(4-氰基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(dd)7-(3-氟-4-甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(ee)7-(3，4-二甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(ff)7-(3-三氟甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(gg)7-(3，5-二氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(hh)7-(3，5-二氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(ii)7-(3-甲基-4-氟苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(jj)7-(3-呋喃基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(kk)7-(2-呋喃基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(ll)7-丁基-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(mm)7-(3-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(nn)7-(4-甲氧基-3-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(oo)7-(嘧啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(pp)7-(5-甲氧基-3-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(qq)7-(2-吡啶基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(rr)7-(3，4-二氯苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(ss)7-(4-甲基苯硫基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(tt)7-(4-氰基甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(uu)7-(3-三氟甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(vv)7-(4-三氟甲氧基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(ww)7-(4-叔丁基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(xx)7-(萘基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；(yy)7-(4-乙基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇；或(zz)7-(3，5-二甲基苯基)-5H-二苯并[c，g]色烯-3，9-二醇。
9.一種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物和藥物載體。
10.一種在需要的哺乳動物中抑制骨質(zhì)疏松的方法，其包括給予所述哺乳動物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物。
11.一種在需要的哺乳動物中抑制骨性關(guān)節(jié)炎、低血鈣癥、高血鈣癥、佩吉特病、骨軟化、骨質(zhì)缺乏、多發(fā)性骨髓瘤或?qū)墙M織具有不利作用的其他形式癌癥的方法，其包括給予所述哺乳動物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物。
12.一種在需要的哺乳動物中抑制良性或惡性異常組織生長的方法，其包括給予所述哺乳動物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述異常組織生長是前列腺肥大、子宮平滑肌瘤、乳腺癌、子宮內(nèi)膜異位、子宮內(nèi)膜癌、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜息肉、良性乳腺癌、子宮內(nèi)膜異位、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌或CNS癌。
14.一種在需要的哺乳動物中降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL水平；或抑制高膽固醇血癥；高脂血癥；心血管疾??；動脈粥樣硬化；外周血管??；再狹窄或血管痙攣；或抑制由細(xì)胞事件引起的血管壁損傷導(dǎo)致的免疫介導(dǎo)血管損傷，其包括給予所述哺乳動物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物。
15.一種在需要的哺乳動物中抑制自由基引發(fā)的病癥的方法，其包括給予所述哺乳動物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物。
16.一種在需要的哺乳動物中提供認(rèn)知提高或神經(jīng)保護(hù)；或治療或抑制老年癡呆、阿爾茨海默氏癥、認(rèn)知能力降低或神經(jīng)退行性疾病的方法，其包括給予所述哺乳動物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物。
17.一種在需要的哺乳動物中抑制炎性腸道疾病、潰瘍性直腸炎、克隆病、結(jié)腸炎、熱潮紅、陰道或陰門萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干澀、瘙癢、性交痛、排尿困難、尿頻、尿失禁、尿道感染、血管舒縮綜合征；男性型脫發(fā)；皮膚萎縮；痤瘡；II型糖尿?。还δ苁д{(diào)型子宮出血或不孕的方法，其包括給予所述哺乳動物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物。
18.一種在需要的哺乳動物中抑制白血病、子宮內(nèi)膜消融、慢性腎或肝病，或凝血疾病或紊亂的方法，其包括給予所述哺乳動物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的化合物作為藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)的雌激素受體調(diào)節(jié)劑，在其結(jié)構(gòu)中，R
文檔編號A61K31/352GK1946707SQ200580013237
公開日2007年4月11日 申請日期2005年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月26日
發(fā)明者R·E·梅碩, R·J·小艾德索 申請人:惠氏公司