專利名稱：治療眼高壓和青光眼的他汀類的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及青光眼的治療以及控制或降低患者眼內(nèi)壓。本發(fā)明更加特別地涉及用于治療青光眼以及控制或降低眼內(nèi)壓的藥物組合物的應(yīng)用。青光眼的視神經(jīng)病(青光眼)是一種特征在于由視神經(jīng)不可逆損傷而引起視覺功能永久性喪失的疾病。一些形態(tài)或功能類型不同的青光眼的典型特征是眼內(nèi)壓(IOP)增高，其被認(rèn)為是涉及該疾病的病理過程。眼高壓是一種IOP增高的病癥，但是不發(fā)生視覺功能的明顯喪失；這種患者被認(rèn)為極有可能最終發(fā)展為伴隨青光眼的視覺喪失。一些青光眼視域喪失的患者IOP相對較低。這些正常眼壓或低眼壓的青光眼患者也可得益于降低和控制IOP的藥劑。如果青光眼或眼高壓能夠盡早發(fā)現(xiàn)并以有效降低增高的眼內(nèi)壓的藥物迅速治療，則視覺功能喪失或其惡化進(jìn)程通常會得以改善。已被證實有效降低眼內(nèi)壓的藥物療法包括減少房水產(chǎn)生的藥劑和增加流出的藥劑。IOP的持續(xù)增高與視網(wǎng)膜的逐漸退化和視覺功能的喪失相關(guān)。因此，為了減少青光眼視網(wǎng)膜病的可能性或者其嚴(yán)重程度，降低IOP可能成為治療青光眼患者的目標(biāo)。不幸的是，許多個體以現(xiàn)有的青光眼療法治療時并不產(chǎn)生良好的響應(yīng)。本發(fā)明主要涉及一類顯示HMG-CoA還原酶抑制活性的藥物。術(shù)語“他汀類”通常用于描述“HMG-CoA還原酶抑制劑”。出于多種目的，他汀類在不同的藥物研究中被應(yīng)用或評價。這些研究中的一部分記載在下面。然而，所有這些研究均未認(rèn)識到他汀類對治療青光眼和/或控制或降低眼內(nèi)壓有效。他汀類屬于3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑類，臨床已知其具有促使血清脂質(zhì)減少的性質(zhì)。促使血清脂質(zhì)減少的性質(zhì)是由于他汀類能夠抑制HMG-CoA還原酶，防止3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢u戊酸，這一過程是膽固醇合成中的限速步驟。然而，他汀類也能夠發(fā)揮與抑制膽固醇生物合成可能無關(guān)的作用。例如，除其它的效應(yīng)外，已經(jīng)報道他汀類還能夠抑制多種粘合素的表達(dá)，抑制超氧陰離子的產(chǎn)生，干擾Rho蛋白的異戊二烯化，以及作為自由基清除劑(Wassmann和Nickenig，Endothelium，2003，1023-33；Mason JC，Clin Sci(Lond)2003，105251-66)。另外已經(jīng)報道了他汀類的抗炎和心臟保護(hù)活性(Yoshida M J.Atheroscelrosis Thromb 2003，10(3)，140-4；Luo JD和Chen AF Curr Med Chem 2003，10(16)，1593-601)。其它關(guān)于他汀類用于非青光眼目的的研究例子在美國專利申請2003/0065020中有所描述，該申請涉及應(yīng)用HMG-CoA還原酶抑制劑他汀類治療或者預(yù)防黃斑變性。另外，美國專利No.6,569,461涉及應(yīng)用某些二羥基開放酸他汀類的緩釋制劑治療糖尿病性視網(wǎng)膜病。Schmidt等(Ophthalmic Res.1994，26，352-60)報道患者口服洛伐他汀或辛伐他汀至少一年進(jìn)行治療，其眼內(nèi)壓沒有明顯的臨床變化。氯貝丁酯，能夠適度降低LDL膽固醇和甘油三酯的過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)激動劑的貝特類中的一員，還被報道能夠降低IOP。本發(fā)明者通過一些重要研究發(fā)現(xiàn)了用HMG-CoA還原酶抑制劑如他汀類治療青光眼和/或控制或降低眼內(nèi)壓的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個特征是應(yīng)用化學(xué)穩(wěn)定性增強(qiáng)并且可以用于降低和控制正常的或升高的眼內(nèi)壓和/或治療青光眼的化合物。本發(fā)明的另一個特征是應(yīng)用提供降低和控制正常或升高的眼內(nèi)壓和/或治療青光眼的所需治療活性水平的化合物。本發(fā)明另一個方面提供一種治療或預(yù)防青光眼的方法，該方法提供神經(jīng)保護(hù)作用。本發(fā)明還有一個特征是提供一種顯著減少小梁網(wǎng)(TM)細(xì)胞產(chǎn)生結(jié)締組織生長因子(CTGF)而治療或預(yù)防青光眼的方法。本發(fā)明還有一個特征是提供一種顯著減少TM細(xì)胞分泌纖維結(jié)合素而治療或預(yù)防青光眼的方法。本發(fā)明其它的特征和優(yōu)點一部分記載在下面的說明書中，一部分是由說明書顯而易見的得出，或者可以通過實施本發(fā)明而獲知。通過說明書和附加的權(quán)利要求特別指出的要素和組合將實現(xiàn)和達(dá)到本發(fā)明的目的和其它優(yōu)點。如本文具體化及概括性描述的，為獲得這些和其它的優(yōu)點并且合乎本發(fā)明的目的，本發(fā)明涉及包含至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑的組合物治療青光眼和/或降低或控制正常的或升高的IOP，如與正常眼壓性青光眼和/或眼高壓有關(guān)的IOP的應(yīng)用。組合物可以是優(yōu)選的藥物組合物，例如，適于局部遞送至眼部的藥物組合物。應(yīng)該理解，前面的概括描述和接下來的詳細(xì)描述均是示范性的，示例的意圖僅僅在于提供對于本發(fā)明主張的更進(jìn)一步的解釋。
附圖簡述

圖1-3是表示他汀類對于培養(yǎng)的人類小梁網(wǎng)細(xì)胞中基礎(chǔ)的和TGFβ2-誘導(dǎo)的CTGF基因表達(dá)的作用的圖。圖4是表示H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激在HTM-35D細(xì)胞生存能力中作用的柱狀圖。細(xì)胞在存在或者不存在測驗試劑的無血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘(37℃，5％CO2)，然后用無血清的培養(yǎng)基清洗和置換2天。然后通過中性紅攝取法評估生存能力。圖中的柱表示兩個獨立實驗的平均值和SEM，每個試驗重復(fù)三次。圖5表示洛伐他汀對于GTM-3細(xì)胞纖維結(jié)合素分泌和生存能力影響的柱狀圖。轉(zhuǎn)化的人類小梁網(wǎng)(GTM-3)細(xì)胞在存在或不存在測驗試劑的無血清DMEM培養(yǎng)基中孵育24小時(37℃，5％CO2)。然后用ELISA分析細(xì)胞上清液中的纖維結(jié)合素含量，用中性紅攝取法分析細(xì)胞單層的生存能力。
發(fā)明詳述本發(fā)明一部分涉及一種治療人類患者或其它哺乳動物青光眼的方法。本發(fā)明還涉及一種降低或控制人類患者或其它哺乳動物的正常的或者升高的IOP的方法。這些方法包括施用包含至少一種3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑的組合物。換言之，本發(fā)明涉及至少一種具有HMG-CoA還原酶抑制活性的物質(zhì)的用途。已知一組適用于本發(fā)明的HMG-CoA還原酶抑制劑是他汀類。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，這里所使用的“他汀類”是HMG-CoA抑制劑。這些藥物由于能夠抑制HMG-CoA還原酶，防止3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢u戊酸，此轉(zhuǎn)化過程是膽固醇合成中的限速步驟，因而可能具有促使血清脂質(zhì)減少的性質(zhì)。HMG-CoA還原酶抑制劑的例子包括但是不限定于，康帕丁、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀、氟伐他汀、羅蘇伐他汀、阿伐他汀、匹伐他汀、西立伐他汀、柏伐他汀、達(dá)伐他汀、格侖伐他汀、RP61969、SDZ-265859、BMS-180431、CP-83101、二氫洛伐他汀、L-669262或其組合。化學(xué)名如下康帕丁(美伐他汀，(2S)-2-甲基丁酸(1S，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氫-7-甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氫-4-羥基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)，洛伐他汀(2(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氫-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氫-4-羥基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)，辛伐他汀(2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氫-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氫-4-羥基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)，普伐他汀((βR，δR，1S，2S，6S，8S，8aR)-1，2，6，7，8，8a-六氫-β，δ，6-三羥基-2-甲基-8-[(2S)-2-甲基-1-氧代丁氧基]-1-萘庚酸)，氟伐他汀((3R，5S，6E)-rel-7-[3-(4-氟苯基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-2-基]-3，5-二羥基-6-庚烯酸)，羅蘇伐他汀((3R，5S，6E)-7-[4-(4-氟苯基)-6-(1-甲基乙基)-2-[甲基(甲磺酰)氨基]-5-嘧啶基]-3，5-二羥基-6-庚烯酸)，阿伐他汀((βR，δR)-2-(4-氟苯基)-β，δ-二羥基-5-(1-甲基乙基)-3-苯基-4-[(苯基氨基)羰基]-1H-吡咯-1-庚酸)，匹伐他汀((3R，5S，6E)-7-[2-環(huán)丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3，5-二羥基-6-庚烯酸)，西立伐他汀((3R，5S，6E)-7-[4-(4-氟苯基)-5-(甲氧甲基)-2，6-二(1-甲基乙基)-3-吡啶基]-3，5-二羥基-6-庚烯酸)，柏伐他汀((R*，S*-(E)-7-(4-(4-氟苯基)螺(2H-1-苯并吡喃-2，1′-環(huán)戊)-3-基)-3，5-二羥基-乙酯)，達(dá)伐他汀((4R，6S)-rel-6-[(1E)-2-[2-(4-氟-3-甲基苯基)-4，4，6，6-四甲基-1-環(huán)己烯-1-基]乙烯基]四氫-4-羥基-，2H-吡喃-2-酮)，格侖伐他汀((4R，6S)-6-[(1E)-2-[4-(4-氟苯基)-2-(1-甲基乙基)-6-苯基-3-吡啶基]乙烯基]四氫-4-羥基-2H-吡喃-2-酮)，RP 61969([2S-[2α(E)，4β]]-；4-(4-氟苯基)-2-(1-甲基乙基)-3-[2-(四氫-4-羥基-6-氧代-2H-吡喃-2-基)乙烯基]-1(2H)-異喹啉酮)，BMS-180431((3R，5S，6E)-rel-9，9-二(4-氟苯基)-3，5-二羥基-8-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-6，8-壬二烯酸)，CP-83101((3R，5S，6E)-rel-3，5-二羥基-9，9-二苯基-6，8-壬二烯酸甲酯)，二氫洛伐他汀((2S)-2-甲基-丁酸(1S，3S，4a R，7S，8S，8aS)-1，2，3，4，4a，7，8，8a-八氫-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氫-4-羥基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)，L-669262(2，2-二甲基-丁酸(1S，7R，8R，8aR)-1，2，6，7，8，8a-六氫-3，7-二甲基-6-氧代-8-[2-[(2R，4R)-四氫-4-羥基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)。一些優(yōu)選的HMG-CoA還原酶抑制劑的具體結(jié)構(gòu)如下 康帕丁(2S)-2-甲基-丁酸(1S，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氫-7-甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氫-4-羥基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯 洛伐他汀2(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氫-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氫-4-羥基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯 辛伐他汀2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氫-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氫-4-羥基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯
普伐他汀(βR，δR，1S，2S，6S，8S，8aR)-1，2，6，7，8，8a-六氫-β，δ，6-三羥基-2-甲基-8-[(2S)-2-甲基-1-氧代丁氧基]-1-萘庚酸 氟伐他汀(3R，5S，6E)-rel-7-[3-(4-氟苯基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-2-基]-3，5-二羥基-6-庚烯酸 阿伐他汀(βR，δR)-2-(4-氟苯基)-β，δ-二羥基-5-(1-甲基乙基)-3-苯基-4-[(苯基氨基)羰基]-1H-吡咯-1-庚酸 西立伐他汀(3R，5S，6E)-7-[4-(4-氟苯基)-5-(甲氧甲基)-2，6-二(1-甲基乙基)-3-吡啶基]-3，5-二羥基-6-庚烯酸 羅蘇伐他汀(3R，5S，6E)-7-[4-(4-氟苯基)-6-(1-甲基乙基)-2-[甲基(甲磺酰)氨基]-5-嘧啶基]-3，5-二羥基-6-庚烯酸除了上述例子，其它可用于本發(fā)明中的適宜的HMG-CoA還原酶抑制劑的例子包括那些具有結(jié)構(gòu)A-B的化合物，其中A和B代表構(gòu)成符合本發(fā)明目的的適宜的HMG-CoA還原酶抑制劑的化合物的組成部分。下面結(jié)構(gòu)中的彎曲線表示A和B之間共價鍵即C-C鍵所在之處。優(yōu)選地，該A-B鍵是β構(gòu)型?？山Y(jié)合于任意組合中的A和B的適宜的例子如下
結(jié)構(gòu)B部分可以以上面第一個結(jié)構(gòu)所示的開放的二羥基酸、酯、酰胺或醇的形式存在，或者以上面第二個結(jié)構(gòu)所示的內(nèi)酯形式存在。在此處被稱作“結(jié)構(gòu)A”和“結(jié)構(gòu)B”部分的上述結(jié)構(gòu)中，取代基可分別如下R1＝CO2R，CONR5R6或CH2OR7，或者R1和R3可形成內(nèi)酯；R＝H或者陽離子鹽部分，或者CO2R形成藥學(xué)可接受的酯部分；R2，R3，R4＝相同或者不同＝H，C(O)R8或者C(O)NR5R6；R5，R6＝相同或者不同＝H或者烷基；R7＝H或者C(O)R8；以及R8＝烷基。
術(shù)語“烷基”包括具有總數(shù)為1-10個原子的直鏈、支鏈和環(huán)烷基或者(環(huán)烷基)烷基基團(tuán)。烷基可以是非取代的，或者被其它基團(tuán)如鹵素或者羥基所取代。
公認(rèn)上述化合物可以包含一個或者多個手性中心。本發(fā)明涵蓋所有的對映體、非對映體或其混合物。用于本發(fā)明的HMG-CoA還原酶抑制劑還包括具有或包含上述結(jié)構(gòu)B的部分與除上述結(jié)構(gòu)A部分之外的部分相結(jié)合的化合物。上述化合物的藥學(xué)可接受的鹽和溶劑化物以及前藥形式也可以用于本發(fā)明的方法中。而且，上述化合物的衍生物也可以用于本發(fā)明的方法中。衍生物包括羧酸衍生物(例如羧酸鹽、酯、內(nèi)酯、酰胺、異羥肟酸、醇、酯化醇和烷化醇(醇鹽))以及醇衍生物(例如酯、氨基甲酸酯類、內(nèi)酯、碳酸鹽、醇鹽、縮醛、縮酮、磷酸鹽和磷酸酯)。就上述化合物而言，一些化合物在一個或多個芳香環(huán)上包含氟，因此除了氟，其它任何鹵素均可使用。而且，替代上述化合物中的氫或烷基，也可以使用不同的烷基基團(tuán)。例如，代替-OH，可使用-O-烷基基團(tuán)。因此，基于這里提出的教導(dǎo)和知識與本領(lǐng)域技術(shù)人員的常識的結(jié)合，可以容易地將多種衍生物用于本發(fā)明中。上述實例既可以商購(如Calbiochem-Novabiochem公司，SST公司，Aceto公司，Tocris Cookson公司，Sigma，和BIOMOL研發(fā)實驗室公司)也可以在本領(lǐng)域技術(shù)人員可以獲知的文獻(xiàn)基礎(chǔ)上合成得到。由于在肝和腸粘膜中廣泛進(jìn)行循環(huán)前消除，因此他汀類的口服生物利用度低(即，通常范圍是5-20％)。另外，多數(shù)他汀類與血漿高度結(jié)合并快速消除(Klotz U Arzneim Forsch(Drug Research)2003，53，605-611)。這些因素大大地限制了口服給藥后到達(dá)眼組織的活性化合物的量。因此在本發(fā)明中眼睛局部給藥應(yīng)用是相當(dāng)優(yōu)選的。然而，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，一些他汀類(如普伐他汀)在眼睛局部給藥后能夠通過角膜的滲透而到達(dá)眼內(nèi)組織，而其它一些他汀類(如阿伐他汀)不容易透過角膜，因此不能通過這種給藥途徑而成為本發(fā)明方法中的可行的治療劑。已經(jīng)證實應(yīng)用反相高壓液相色譜法保留參數(shù)如保留指數(shù)(“RI”)可以預(yù)測進(jìn)入及通過生物膜的分子的比例。(Brent DA.Sabaltks JJ，Minick DJ和Henry DW.Journal of MedicinalChemistry 1983，26，1014-1020)。本發(fā)明者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)RI值可以用于預(yù)測他汀類在眼睛局部給藥后在眼內(nèi)組織中達(dá)到治療濃度的能力。特別是本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)RI值為0.2至0.7的他汀類可以通過眼睛局部給藥施用于患者。RI值可通過下述的步驟加以測定。
保留指數(shù)(“RI”)值的測定檢品溶于溶劑成為15-20μg/mL的溶液。將此溶液和參比溶液(1％的PGF2α異丙酯乙醇液用3mL稀釋溶劑稀釋)直接注入Microsorb-MV ODS反相高壓色譜柱(4.6mm ID×15cm長，5μm)。流動相是pH3.0的磷酸銨緩沖液的水相/乙腈(1∶1)混合物，流速是大約每分鐘1mL。保留指數(shù)(RI)用下列公式計算RI＝RT1/RT2其中RT1＝檢品的保留時間，RT2＝PGF2α異丙酯標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間上述RI值的范圍0.2至0.7適用于本文所述的所有的他汀類。然而，該范圍是基于化合物的二羥基開放酸的形式。因此，結(jié)構(gòu)B在內(nèi)酯構(gòu)型中的他汀類在測定RI值前必須轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的開放酸。本發(fā)明的化合物可以用于降低或者控制IOP，包括與正常眼壓性青光眼、眼高壓以及溫血動物特別是人類的青光眼有關(guān)的IOP。組合物優(yōu)選制成優(yōu)選適于局部遞送如施用于患者眼睛的藥物組合物。組合物可以通過常規(guī)技術(shù)以任何適宜的方式給藥。他汀類可以幫助延緩/抵抗青光眼中常見的小梁網(wǎng)(TM)細(xì)胞質(zhì)的流失。他汀類的抗氧化和自由基清除作用可以抵抗TM中衰老和/或青光眼有關(guān)的氧化損傷/應(yīng)激，盡管其確切機(jī)制還不清楚。之前已經(jīng)注意到青光眼患者TM組織中細(xì)胞質(zhì)的減少(Alvarado等，Ophthalmology，1984，91564-579)。而且，據(jù)報道青光眼患者房水中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物水平增加至少兩倍，伴隨著總的抗氧化能力的降低(Kulysheva等，Vestn Of talmol，1996，1123-5)。自由基水平增加可能正在損傷多種組織，因此他汀類可以幫助延緩/抵抗青光眼中常見的TM細(xì)胞質(zhì)的流失。TM是房水(AH)排水的主要場所，AH經(jīng)由TM外流的不暢可能是青光眼中常見的IOP增高的誘發(fā)因素。用他汀類治療而保留TM細(xì)胞質(zhì)，能夠使AH外流得到改善，IOP降低。因此，本發(fā)明還涉及通過給患者施用藥物有效量的包含至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑的組合物而保護(hù)患者TM的方法。本發(fā)明還能夠防止過量或者不適當(dāng)?shù)募?xì)胞外基質(zhì)累積而堵塞外流通路。在TM的附近細(xì)胞外基質(zhì)物質(zhì)的過度累積也是許多形式青光眼的標(biāo)志。這種增加會導(dǎo)致房水外流阻力增加，從而提高IOP。結(jié)締組織生長因子(CTGF)在與ECM過度累積有關(guān)的病癥如硬化病、纖維增生性疾病和瘢痕化中暗示作為誘發(fā)因素。CTGF可以增加細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)物質(zhì)如膠原I和纖維結(jié)合素的生成。在離體的組織和人類TM細(xì)胞系中均檢測到了CTGF基因產(chǎn)物的存在，培養(yǎng)的人類TM細(xì)胞積極地分泌ECM組分纖維結(jié)合素。他汀類藥物如辛伐他汀、洛伐他汀和美伐他汀(康帕丁)顯著地降低培養(yǎng)的人類TM細(xì)胞的結(jié)締組織生長因子(CTGF)的基因表達(dá)。他汀類還顯著減少培養(yǎng)的人類TM細(xì)胞分泌纖維結(jié)合素。因此，由于抗氧化和自由基清除活性，以及抑制CTGF表達(dá)和纖維結(jié)合素分泌，他汀類藥物代表一種新的降低IOP的潛在手段。作為降低眼壓作用的補(bǔ)充，他汀類可以產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用。在青光眼的視網(wǎng)膜中觀察到了神經(jīng)變性介導(dǎo)物如iNOS、TNFα、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)和活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞水平升高。神經(jīng)保護(hù)的一個方法可以是由于減少神經(jīng)元組織的缺血性損傷。他汀類上調(diào)內(nèi)皮一氧化氮合酶，從而可有助于保持進(jìn)入缺血性組織的血流。他汀類在缺血-再灌注損傷的模型中還顯示出能夠保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)元，這是被一氧化氮合酶抑制劑阻滯的一種作用。而且，他汀類的抗氧化和自由基清除作用可以防止與青光眼有關(guān)的視網(wǎng)膜和視神經(jīng)的氧化損傷/應(yīng)激。青光眼引起視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGC)的死亡。確切的分子機(jī)制尚不清楚。然而，存在三種流行的假說(1)視網(wǎng)膜血管異常導(dǎo)致局部缺血(Flammer等，Prog RetinEye Res，2002，21359-393)，(2)谷氨酸鹽毒性(Dreyer等，ArchOphthalmol，1996，114299-305)和(3)神經(jīng)營養(yǎng)因子戒斷(Quigley等，Arch Ophthalmol，1981，99635-649；Quigley等，ArchOphthalmol，1982，100135-146；Quigley等，Am J Ophthalmol，1983，95674-691)。提出的所有這些機(jī)制均可導(dǎo)致青光眼中對RGC的氧化毒性以及促成RGC的死亡。例如，局部缺血可產(chǎn)生過量的自由基和活性氧物質(zhì)，使ATP產(chǎn)物耗盡，引起線粒體機(jī)能障礙并增加自由基。谷氨酸鹽毒性增加細(xì)胞內(nèi)鈣濃度，激活鈣蛋白酶和NO合酶，產(chǎn)生自由基。神經(jīng)營養(yǎng)因子的戒斷也已顯示出可以引起氧化損傷(Greenlund等，Neuron，1995，14303-315)。基于這些信息，抗氧化劑如他汀類可用作青光眼患者的神經(jīng)保護(hù)劑。本發(fā)明還涉及一種通過給患者施用藥學(xué)有效量的包含至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑的組合物預(yù)防患者青光眼視網(wǎng)膜病的方法。用于本發(fā)明的組合物可以是各種類型的藥物組合物，如給藥于眼中(如局部地、前房內(nèi)或者經(jīng)由植入物)的眼用制劑。組合物優(yōu)選是給藥于眼中的局部眼用制劑。組合物可包括眼科可接受的防腐劑、增粘劑、滲透促進(jìn)劑、緩沖液、氯化鈉和水以形成水性的、無菌眼科用混懸液或者溶液。眼用溶液制劑可將活性成分溶解在生理可接受的等滲水性緩沖液中而制備。此外，眼用溶液可包含眼科可接受的表面活性劑以幫助活性物質(zhì)的溶解。而且，眼用溶液可包含增加粘性的物質(zhì)如羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙甲基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等等以改善制劑在結(jié)膜囊中的貯留。還可用膠凝劑，包括但是不限定于，膠凝糖和黃單胞菌膠。為制備無菌眼膏劑，將活性成分與防腐劑結(jié)合于適當(dāng)?shù)妮d體如礦物油、液體羊毛脂或白凡士林中。根據(jù)已經(jīng)公開的類似眼用制劑的配方，無菌的眼凝膠劑可以將活性成分混懸在由例如卡伯姆-974或等同物的組合制備的親水基質(zhì)中而得到；可以并入防腐劑和張力調(diào)節(jié)劑。用于本發(fā)明的組合物優(yōu)選地配制成局部眼用混懸液或者溶液，pH例如為大約4至大約8。由臨床醫(yī)生確定每個個體的具體給藥劑量方案。這些制劑中通常所包含的活性成分(如他汀)的量為組合物或制劑重量的大約0.01％至大約10％，如大約0.01％至大約5％重量，優(yōu)選大約0.05％至大約2％，最優(yōu)選大約0.1％至大約1.0％重量。劑型可以是溶液劑或者混懸微乳劑。例如，對于局部應(yīng)用而言，根據(jù)有經(jīng)驗的臨床醫(yī)生的判斷，將這些制劑施用于眼睛表面1-2滴，每天大約1-大約4次。本發(fā)明的組合物可以單劑量或者多劑量給藥。本發(fā)明的組合物可以給藥一天或者多天，本發(fā)明的組合物可以連續(xù)若干天給藥或者在不連續(xù)治療時按照計劃進(jìn)行給藥。換言之，治療可以非連續(xù)日進(jìn)行。治療可以進(jìn)行至少兩個連續(xù)日、至少三個連續(xù)日或者更多。而且，同一天、連續(xù)日或者非連續(xù)日內(nèi)均可以多劑量給藥。任何劑量方案的組合均是可以的。組合物也可以與其它治療青光眼的藥劑聯(lián)用，例如但是不限定于，β阻斷劑(如噻嗎洛爾、倍他洛爾、左倍他洛爾、卡替洛爾、左布諾洛爾、普萘洛爾)，碳酸酐酶抑制劑(如布林唑胺和多佐胺)，α1拮抗劑(如nipradolol)，α2激動劑(如阿可樂定和溴莫尼定)，縮瞳藥(如毛果蕓香堿和腎上腺素)，前列腺素類似物(如拉坦前列素、曲伏前列素、比馬前列素、烏諾前列酮及美國專利5,889,052、5,296,504、5,422,368、5,352,708和5,151,444中所述的化合物)，以及神經(jīng)保護(hù)劑(如美國專利4,690,931中的化合物，特別是申請U.S.S.N.60/203,350中所述的依利羅地和R-依利羅地)，以及WO94/13275中的合適的化合物，包括美金剛。下面的實施例是發(fā)明人實現(xiàn)本發(fā)明不同方面所采用的技術(shù)的范例。應(yīng)該理解雖然這些技術(shù)是實施發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案的代表，然而本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本說明書的公開可以認(rèn)識到多種變形并不脫離本發(fā)明的精神和范圍。
實施例1HMG-CoA還原酶抑制測定如美國公開專利申請US 2003/0065020中所描述的，可以用Shefer等[J.Lipid Res 1972，13，402]的下列方法評定HMG-CoA還原酶的活性。完整的測定介質(zhì)總體積為0.8mL，包含100mM pH 7.2的磷酸緩沖液，3mM MgCl2，3mM NADP，3個酶單位的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，50mM還原型谷胱苷肽，0.2mM(0.1μCi)HMG-CoA(戊二酰-3-14C)，和100μL部分純化的酶儲備溶液。將酸鹽形式的測定化合物以選定的濃度加入各個10μL體積測定體系中。在37℃露置于空氣中振搖孵育40分鐘后，加入0.4mL 8N的HCl停止反應(yīng)。如Alberts等[Proc Natl.Acad.Sci.U.S.A.1980，77，3967]所述，于37℃再孵育30分鐘以確保所有的甲羥戊酸內(nèi)酯化成為甲羥戊酸內(nèi)酯，然后將0.2mL混合物加入用蒸餾水潤濕的包含100-200目Bio-Rex 5氯化物形式(Bio-Rad)的0.5×0.5cm柱。用樹脂吸附未反應(yīng)的[C14]HMG-CoA，[C14]甲羥戊酸酯直接用蒸餾水(2×1mL)洗脫進(jìn)入7-mL閃爍瓶。每個瓶中加入5毫升Aquasol-2，在閃爍計數(shù)器中測定放射性。通過繪制抑制百分比對測定化合物濃度的圖并使用最小二乘法擬合結(jié)果數(shù)據(jù)的直線從而確定IC50值。為了估測相對抑制效力，以康帕丁作為標(biāo)準(zhǔn)品并指定其值為100，將測定化合物的IC50值與同時測定的康帕丁的IC50值相比較。
實施例2TGFβ2刺激的CTGF基因表達(dá)的抑制研究了在培養(yǎng)的人類小梁網(wǎng)(TM)細(xì)胞中他汀類對CTGF基因表達(dá)的作用。結(jié)果概括在圖1-3中。在這些實驗中，用定量的逆轉(zhuǎn)錄PCR(QPCR)測定CTGF/18S cDNA水平并進(jìn)行比較。如圖1和2歸納的結(jié)果中所示，檢測三種不同類型的他汀類以確定對控制CTGF水平的作用。如圖中所示，當(dāng)TGFβ2存在于載體中時，CTGF的水平相當(dāng)高。然而，引入一種他汀類時，這些水平顯著降低超過100％的數(shù)量級。洛伐他汀以劑量依賴方式抑制TGFβ2刺激的CTGF表達(dá)，IC50值為75nM(圖3)。該研究的結(jié)果清楚地說明他汀類在培養(yǎng)的人類小梁網(wǎng)細(xì)胞中顯著地作用于CTGF基因表達(dá)。
實施例3防止H2O2介導(dǎo)的TM細(xì)胞死亡在存在及不存在他汀時檢測H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對HTM-35D細(xì)胞(培養(yǎng)的人類TM細(xì)胞株)生存能力的作用。特別地，在存在或者不存在測定試劑時細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘(37℃，5％CO2)，然后用無血清的培養(yǎng)基清洗并置換兩天。然后通過中性紅攝取來評價生存能力。結(jié)果概括在圖4中，其中柱表示兩個單獨實驗的平均值和SEM，每個實驗重復(fù)三次。如圖4所示，當(dāng)他汀存在時，H2O2對HTM-35D細(xì)胞生存能力的作用被抑制或控制到實質(zhì)上可與沒有H2O2存在時的水平相比擬的水平。因此，這些測驗表明他汀類用于治療青光眼和控制或降低IOP的能力。
實施例4TM纖維結(jié)合素分泌的抑制檢測洛伐他汀對于基礎(chǔ)的(載體)和刺激的(TGFβ2)GTM-3(轉(zhuǎn)化的人類TM細(xì)胞株)分泌纖維結(jié)合素的作用。在存在或者不存在檢測試劑時于無血清培養(yǎng)基中孵育GTM-3細(xì)胞24小時(37℃，5％CO2)，然后用ELISA測定細(xì)胞上清液中的分泌的纖維結(jié)合素水平的改變。為了確定檢驗試劑對GTM-3細(xì)胞生存能力的影響，在剩余的細(xì)胞單層上進(jìn)行中性紅攝取試驗。結(jié)果概括在圖5中。從圖5中可以容易地看出，洛伐他汀除抑制基礎(chǔ)分泌外，還抑制TGFβ2-刺激的纖維結(jié)合素分泌，不影響細(xì)胞生存能力。因此，由于能夠降低細(xì)胞外基質(zhì)(如纖維結(jié)合素)的過度累積，他汀類可以用于治療青光眼和控制或降低IOP。
實施例5清醒的短尾猴激光的照射(高壓)眼中的急性IOP響應(yīng)用0.1％丙美卡因造成輕微角膜感覺喪失后，用AlconPneumatonometer測定眼內(nèi)壓(IOP)。每次測定后用生理鹽水清洗眼睛。測定基線IOP后，僅向九只短尾猴的右眼滴注在30μL等分液中的檢測化合物。剩余六只動物的右眼中滴注載體。后續(xù)的IOP測定在第1、3、6小時進(jìn)行。洛伐他汀、氟伐他汀、阿伐他汀和普伐他汀在單次局部眼用300μg后沒有顯著地降低IOP。
實施例6反復(fù)給藥后清醒短尾猴激光照射的(高壓)眼中的響應(yīng)在另外的研究中，用一個五-劑量三天的研究計劃在意識清醒的眼高壓短尾猴中測定洛伐他汀的降低眼內(nèi)壓效果。將30μL等分液中的檢品施用于八只動物的激光照射的(一側(cè)激光小梁成形術(shù))眼中。載體滴注入其余六只動物的激光照射的眼中作為對照。劑量1、3、5于連續(xù)三天的九點鐘滴注；劑量2和4在第1、2天的16:30滴注。在劑量1和5后的第1、3、6小時測定IOP。還在劑量4后的第16小時測定IOP。確定每只動物每次IOP測定相對于零時基線的百分變化。激光照射的猴在第五次局部眼滴注300μg洛伐他汀后，第1、3、6小時激光照射的猴眼的IOP分別平均降低22.8％(8.3mmHg)、21.5％(8.1mmHg)和25.5％(9.5mmHg)。對照組IOP平均降低12.5％。在后續(xù)的研究中，洛伐他汀在五天時間內(nèi)施用九次，IOP降低至多7.4％。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的可以制備下述制劑。
實施例7 雖然以優(yōu)選實施方案的形式描述了本發(fā)明的組合物和方法，然而對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說對本文描述的組合物和/或方法以及方法的步驟或步驟的順序在不脫離本發(fā)明概念、精神和范圍的情況下作一些變更是顯而易見的。更具體而言，某些化學(xué)上及結(jié)構(gòu)上相關(guān)的化合物試劑可以取代本文中描述的試劑獲得類似的結(jié)果也是顯而易見的。如附加的權(quán)利要求所定義的，這些本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的取代和變更被視為在本發(fā)明的精神、范圍和概念之內(nèi)。本文所提及的所有專利、專利申請及其它出版物均全文引入作為參考，構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
權(quán)利要求
1.一種治療患者青光眼的方法，包括向所述患者施用藥物有效量的包含至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑的組合物。
2.如權(quán)利要求1的方法，其中所述的HMG-CoA還原酶抑制劑是至少一種他汀。
3.如權(quán)利要求2的方法，其中所述的至少一種他汀包括康帕丁、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀、氟伐他汀、羅蘇伐他汀、阿伐他汀、匹伐他汀、西立伐他汀、柏伐他汀、達(dá)伐他汀、格侖伐他汀、其前藥，或者其衍生物，或者其組合。
4.如權(quán)利要求2的方法，其中所述的至少一種他汀RI值為0.2-0.7，所述的組合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
5.如權(quán)利要求1的方法，其中所述的HMG-CoA還原酶抑制劑具有式A-B，其中 R1＝CO2R，CONR5R6或CH2OR7，或者R1和R3形成內(nèi)酯；R＝H或者陽離子鹽部分，或者CO2R形成藥學(xué)可接受的酯部分；R2，R3，R4＝相同或者不同＝H，C(O)R8或者C(O)NR5R6；R5，R6＝相同或者不同＝H或者烷基；R7＝H或者C(O)R8；以及R8＝烷基。
6.如權(quán)利要求1的方法，其中所述的HMG-CoA還原酶抑制劑是包含結(jié)構(gòu)B之一的HMG-CoA還原酶抑制劑 其中R1＝CO2R，CONR5R6或CH2OR7，或者R1和R3一起形成內(nèi)酯；R＝H或者陽離子鹽部分，或者CO2R形成藥學(xué)可接受的酯部分；R2，R3＝相同或者不同＝H，C(O)R8或者C(O)NR5R6；R5，R6＝相同或者不同＝H或者烷基；R7＝H或者C(O)R8；以及R8＝烷基。
7.如權(quán)利要求1的方法，其中所述的組合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
8.如權(quán)利要求1的方法，其中所述的HMG-CoA還原酶抑制劑包含大約0.05％至大約2.0％重量的所述組合物。
9.一種控制患者正?；蛟龈叩难蹆?nèi)壓的方法，包括向所述患者施用藥物有效量的包含至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑的組合物。
10.如權(quán)利要求9的方法，其中所述的HMG-CoA還原酶抑制劑是至少一種他汀。
11.如權(quán)利要求10的方法，其中所述的至少一種他汀包括康帕丁、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀、氟伐他汀、羅蘇伐他汀、阿伐他汀、匹伐他汀、西立伐他汀、柏伐他汀、達(dá)伐他汀、格侖伐他汀、其前藥，或者其衍生物，或者其類似物或者其組合。
12.如權(quán)利要求10的方法，其中所述的至少一種他汀RI值為0.2-0.7，所述的組合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
13.如權(quán)利要求9的方法，其中所述的HMG-CoA還原酶抑制劑是 R1＝CO2R，CONR5R6或CH2OR7，或者R1和R3形成內(nèi)酯；R＝H或者陽離子鹽部分，或者CO2R形成藥學(xué)可接受的酯部分；R2，R3，R4＝相同或者不同＝H，C(O)R8或者C(O)NR5R6；R5，R6＝相同或者不同＝H或者烷基；R7＝H或者C(O)R8；以及R8＝烷基。
14.如權(quán)利要求9的方法，其中所述的組合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
15.如權(quán)利要求9的方法，其中所述的HMG-CoA還原酶抑制劑包含大約0.05％至大約2.0％重量的所述組合物。
16.一種保護(hù)患者小梁網(wǎng)的方法，包括向所述患者施用藥物有效量的包含至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑的組合物。
17.如權(quán)利要求16的方法，其中HMG-CoA還原酶抑制劑是至少一種他汀。
18.一種防止眼神經(jīng)變性的方法，包括向所述患者施用藥物有效量的包含至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑的組合物。
19.如權(quán)利要求18的方法，其中所述的HMG-CoA還原酶抑制劑是至少一種RI值為0.2-0.7的他汀，所述的組合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
20.一種防止患者青光眼視網(wǎng)膜病的方法，包括向所述患者施用藥物有效量的包含至少一種HMG-CoA還原酶抑制劑的組合物。
21.如權(quán)利要求20的方法，其中所述的HMG-CoA還原酶抑制劑是至少一種RI值為0.2-0.7的他汀，所述的組合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
22.如權(quán)利要求20的方法，其中所述的組合物眼內(nèi)施用于所述患者的至少一只眼睛。
23.如權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括施用β-阻斷劑、碳酸酐酶抑制劑、α1拮抗劑、α2激動劑、縮瞳藥、前列腺素類似物、神經(jīng)保護(hù)劑或其組合，作為組合物的一部分或者獨立給藥。
24.如權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括施用至少一種碳酸酐酶抑制劑，作為組合物的一部分或者獨立給藥。
25.如權(quán)利要求9的方法，進(jìn)一步包括施用β-阻斷劑、碳酸酐酶抑制劑、α1拮抗劑、α2激動劑、縮瞳藥、前列腺素類似物、神經(jīng)保護(hù)劑或其組合，作為組合物的一部分或者獨立給藥。
26.如權(quán)利要求9的方法，進(jìn)一步包括施用至少一種碳酸酐酶抑制劑，作為組合物的一部分或者獨立給藥。
27.如權(quán)利要求18的方法，進(jìn)一步包括施用β-阻斷劑、碳酸酐酶抑制劑、α1拮抗劑、α2激動劑、縮瞳藥、前列腺素類似物、神經(jīng)保護(hù)劑或其組合，作為組合物的一部分或者獨立給藥。
28.如權(quán)利要求18的方法，進(jìn)一步包括施用至少一種碳酸酐酶抑制劑，作為組合物的一部分或者獨立給藥。
全文摘要
本發(fā)明描述了HMG－CoA還原酶抑制劑(如他汀類)治療青光眼、控制眼內(nèi)壓、保護(hù)小梁網(wǎng)，防止視神經(jīng)變性和/或防止青光眼視網(wǎng)膜病的應(yīng)用。優(yōu)選的HMG－CoA還原酶抑制劑是RI值為0.2－0.7的他汀類(如普伐他汀)，局部施用于患者患病的眼部。
文檔編號A61K31/401GK1946384SQ200580013006
公開日2007年4月11日 申請日期2005年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月26日
發(fā)明者M·R·赫爾伯格, D·L·弗里諾爾, A·謝潑德, 彭玉豪 申請人:愛爾康公司