專利名稱：制備錸－188標(biāo)記顆粒的方法和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及制備放射性同位素錸-188(Re-188)標(biāo)記顆粒的方法以及實(shí)施該方法的試劑盒。該放射性標(biāo)記的顆?？捎糜谒幬铮瑑?yōu)選用于腫瘤學(xué)和核醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，以進(jìn)行腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移的放療。
用放射性標(biāo)記顆粒對(duì)腫瘤或它們的轉(zhuǎn)移進(jìn)行放療是已知的。通常，為此目的，將導(dǎo)管插入通向腫瘤的血管中。然后，將放射性標(biāo)記顆粒通過(guò)該導(dǎo)管局部供給到腫瘤組織。放射性標(biāo)記顆粒的大小能夠保證，當(dāng)?shù)谝淮谓?jīng)過(guò)腫瘤滲透的毛細(xì)血管系統(tǒng)時(shí)，它們可以留在腫瘤的毛細(xì)血管內(nèi)。該方法能夠在目標(biāo)腫瘤組織內(nèi)達(dá)到非常高的放射性劑量，而同時(shí)患者的周圍組織或其它器官受到保護(hù)。與例如放射性標(biāo)記的抗體、肽和其它低分子量化合物的系統(tǒng)靜脈給藥相比，該方法取得了在腫瘤組織中明顯更高的放射劑量。
近年來(lái)，放射性核素Y-90、Re-188和Ho-166主要用于標(biāo)記適當(dāng)?shù)念w粒。具有相對(duì)短的17小時(shí)半衰期的beta射線發(fā)射源Re-188尤其適于以高放射性核素劑量多次向同一患者施用的治療方法。
但是，現(xiàn)有的Re-188標(biāo)記方法和顆粒并不令人滿意。
由于不同的化學(xué)性質(zhì)，特別是不同的氧化還原電勢(shì)，以相關(guān)化學(xué)元素例如锝有效進(jìn)行的標(biāo)記方法不適用于以Re-188進(jìn)行標(biāo)記的情況。
核醫(yī)學(xué)中用于放射性核素輸送的優(yōu)選載體材料是人血清蛋白的微球([99mTc]HSA微球B20，Rotop Pharmaka，Radeberg，Deutschland；Wunderlich G.et al.，Applied Radaition and Isotopes 52(2000)S.63-68)。這些蛋白質(zhì)顆粒在生物體內(nèi)可降解，因此微球僅暫時(shí)堵塞毛細(xì)血管并且可以多次向患者灌注。當(dāng)為锝開發(fā)的標(biāo)記方法用于Re-188標(biāo)記時(shí)，由于氧化還原電勢(shì)的差異，只得到了小于5％的標(biāo)記產(chǎn)率。
Wunderlich et al.中所述的方法的缺點(diǎn)在于，經(jīng)過(guò)大于90分鐘的反應(yīng)時(shí)間后，只有70％至最多90％的Re-188結(jié)合到顆粒上。為防止未反應(yīng)的Re-188對(duì)患者生物體造成不利的輻射暴露，有必要通過(guò)幾個(gè)洗滌步驟除去多余的Re-188。這些洗滌步驟需要對(duì)放射性液體直接處理，因此使人員暴露于高輻射。
Wang S.J.et al.(Journal of Nuclear Medicine 1998，39(10)S.1752-1757，Nuclear Medicine Communications 1998，19S.427-433)也公開了用Re-188標(biāo)記微球的方法。這些微球由塑料樹脂組成。不利地，在這些方法中，用Re-188標(biāo)記后，也必須通過(guò)除去上清液和在鹽溶液中再懸浮來(lái)洗滌微球。在該方法中，為標(biāo)記20mg的微球，需要200mg的錫鹽和強(qiáng)酸性的pH值。大量錫的缺點(diǎn)在于患者接受了額外的藥物暴露。由于強(qiáng)酸性的pH值，該方法不適于蛋白質(zhì)顆粒，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)會(huì)由于所采用的強(qiáng)酸性0.2N HCl而被水解。
Grilenberger K.G.et al.公開了Re-188標(biāo)記的羥基磷灰石和硫膠體(Nuclear Medicine 1997，36S.71-75)。然而，由該標(biāo)記方法得到的產(chǎn)率低于80％。
用Re-188標(biāo)記顆粒的已知方法是費(fèi)時(shí)的。所得的標(biāo)記產(chǎn)率極大地取決于所采用的原材料。
在核醫(yī)學(xué)中為對(duì)醫(yī)護(hù)人員而言，需要一種用Re-188標(biāo)記顆粒的簡(jiǎn)化方法。對(duì)高放射性劑量的錸-188的處理時(shí)間應(yīng)盡量短，以將人員的輻射暴露保持在可接受的范圍內(nèi)。因此期望有一種可以省去洗滌步驟的方法。
本發(fā)明的目的是提供用錸-188標(biāo)記顆粒的簡(jiǎn)易方法以及實(shí)施該方法的試劑盒。特別地，該方法和試劑盒應(yīng)減少人員的輻射暴露以及實(shí)施該方法所需的時(shí)間。
根據(jù)本發(fā)明，所述目的通過(guò)制備錸-188(Re-188)標(biāo)記顆粒的方法而實(shí)現(xiàn)，其中顆粒首先懸浮于酸性溶液中并加熱，經(jīng)過(guò)一定的加熱時(shí)間后，提高pH值。
此處，溶液的pH值為pH 1至pH 3，并且含有a)錫-II鹽，和b)Re-188高錸酸鹽。
該步驟中優(yōu)選的反應(yīng)體積是1-5ml，尤其優(yōu)選2-4ml，尤其有利的是3ml。已知的Re發(fā)生器釋放至少2ml的洗脫物。有利地，通過(guò)本發(fā)明的方法中的反應(yīng)體積，Re發(fā)生器的所有洗脫物都可以被利用。
加熱30-240分鐘，優(yōu)選45-79分鐘后，提高pH值。從而將pH值調(diào)節(jié)為大于pH 5，優(yōu)選在pH 6.5與pH 8.5之間。
出入意料地，通過(guò)在加熱結(jié)束時(shí)提高pH，用Re-188標(biāo)記顆粒的產(chǎn)率(Ausbeute)提高至大于95％。通過(guò)由此實(shí)現(xiàn)的用Re-188來(lái)有效標(biāo)記顆粒，最終產(chǎn)物不再需要進(jìn)一步處理。特別地，不再需要洗滌步驟。通過(guò)升高pH值得到的懸浮液可以直接用于患者的放療。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，總反應(yīng)時(shí)間顯著縮短。通過(guò)省去洗滌步驟，除了節(jié)省時(shí)間外，對(duì)人員的輻射保護(hù)也顯著改善，因?yàn)榈玫娇勺⑸洚a(chǎn)品所需的操作更少。
通過(guò)該方法得到了比放射性(標(biāo)記(Beladung)顆粒)，其顯著高于前面Wunderlich et al.(2001)提到的標(biāo)記顆粒2500MBq/mg相對(duì)于500MBq/mg。
通過(guò)加入緩沖溶液提高pH值，所述緩沖溶液優(yōu)選乙酸溶液、檸檬酸溶液或酒石酸溶液，尤其優(yōu)選酒石酸鉀鈉溶液。
將緩沖溶液加入經(jīng)加熱的溶液后，其最終濃度優(yōu)選為15-50mmol/l，尤其優(yōu)選為25mmol/l。
錫-II鹽優(yōu)選為水溶性錫-II鹽，例如SnCl2×2H2O或SnF2，在該方法開始時(shí)其在溶液中的濃度為10-50mmol/l，尤其優(yōu)選為17mmol/l。
通過(guò)該方法，起初以氧化態(tài)+VII作為高錸酸鹽(ReO4-)存在的Re-188由于錫-II鹽的還原性而被還原。由此，氧化態(tài)+4(ReO2×H2O)的Re-188的氧化物與所產(chǎn)生的難溶氫氧化錫一起沉淀在微球上。由共沉淀產(chǎn)生的層具有約1μm的厚度。
根據(jù)本發(fā)明的方法，標(biāo)記所需的錫-II鹽的量可以比現(xiàn)有技術(shù)(Wang et al.)減少10個(gè)百分點(diǎn)(Faktor)。已發(fā)現(xiàn)，相對(duì)每10mg微球10-12mg錫(II)鹽的量出人意料地足以用來(lái)標(biāo)記微球。
因?yàn)殄a-II鹽當(dāng)加熱時(shí)在水溶液中相對(duì)不穩(wěn)定，所以向溶液中加入穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑。該絡(luò)合劑優(yōu)選為有機(jī)羧酸，尤其優(yōu)選2，5-二羥基苯甲酸(龍膽酸)。其它優(yōu)選的絡(luò)合劑為乙酸、檸檬酸、丙二酸、葡糖酸、乳酸、羥基異丁酸、抗壞血酸、酒石酸、琥珀酸、上述酸的鹽、或葡庚糖鹽。用于穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑在溶液中的濃度優(yōu)選為15-30mmol/l，尤其優(yōu)選20mmol/l。
使用龍膽酸是有利的，因?yàn)辇埬懰崾亲杂苫宄齽?Radikalfaenger)，因此在制備過(guò)程中起到防輻射的作用。而且，龍膽酸已被批準(zhǔn)為藥物添加劑。
溶液優(yōu)選加熱至低于沸點(diǎn)的在80℃-100℃范圍內(nèi)的溫度。
待標(biāo)記的顆粒優(yōu)選為球形或接近圓形。這種顆粒稱作微球，有利地，其直徑應(yīng)足夠地小，以致微球可以通過(guò)正常的血管運(yùn)輸，但其直徑又應(yīng)足夠地大，以致它們可以停留在毛細(xì)血管內(nèi)。它們的直徑優(yōu)選為10μm-100μm，尤其優(yōu)選為15μm-30μm。
顆粒優(yōu)選由有機(jī)聚合物或生物聚合物組成。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，顆粒由不能體內(nèi)降解的聚合物組成，優(yōu)選弱陽(yáng)離子交換樹脂(例如，Bio-Rex 70、BioRad，Deutschland)、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA，例如得自Heraeus Kulzer，Deutschland)、甲基丙烯酸酯共聚物(例如，MacroPrep、BioRad，Deutschland)或聚乙烯醇縮甲醛(Polyvinylformaldehyd)(例如，Drivalon Nycomed-Amersham，Deutschland)。
然而特別優(yōu)選的顆粒是可在人體組織內(nèi)新陳代謝并降解的材料的微球，因而顆粒在應(yīng)用后僅暫時(shí)堵塞毛細(xì)血管。有利地，這導(dǎo)致顆粒的多個(gè)可能的應(yīng)用。該可降解顆粒的優(yōu)選例子為人血清蛋白的微球([99mTc]HSA微球B20，Rotop Pharmaka，Radeberg，Deutschland)。該[99mTc]HSA微球B20已批準(zhǔn)用锝99m標(biāo)記使用。
使用不同生物降解材料顆粒的對(duì)比例顯示，根據(jù)本發(fā)明的方法用人血清蛋白的微球比用其它亦可體內(nèi)降解的材料得到了出人意料的明顯更高的Re-188標(biāo)記產(chǎn)率和更高的體內(nèi)穩(wěn)定性。例如，使用大顆粒清蛋白的顆粒(MAA，Nycomed-Amersham，Deutschland)、膠原蛋白顆粒(Angiostat，Regional Therapeutics，USA)以及聚乙酸酯顆粒(PLA，Micromod，Deutschland)所得的標(biāo)記產(chǎn)率明顯較低。
標(biāo)記過(guò)程中顆粒的濃度優(yōu)選為每毫升2百萬(wàn)至3百萬(wàn)個(gè)顆粒，優(yōu)選2.5百萬(wàn)個(gè)，或每毫升0.5百萬(wàn)至10百萬(wàn)個(gè)顆粒。
購(gòu)買相應(yīng)的放射性核素發(fā)生器后(Oak Ridge National Laboratory，TN，USA或Schering AG，Deutschland)，可以在數(shù)月內(nèi)提供幾乎無(wú)限量的用于標(biāo)記的β射線發(fā)射源(Betastrahler)錸-188，并且其特別適于對(duì)類似患者以高劑量放射性核素多次施用進(jìn)行治療。在該發(fā)生器中，通過(guò)應(yīng)用0.9％的鹽溶液，Re-188以高錸酸鹽(Re-188的氧化態(tài)VII)的形式洗脫。由此得到的Re-188發(fā)生器洗脫物的放射性優(yōu)選為1000MBq至60000MBq，更優(yōu)選為10000MBq至20000MBq。
根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的比放射性(標(biāo)記顆粒)優(yōu)選為1500-3000MBq/mg。有利地，可以根據(jù)患者通過(guò)所使用的Re-188發(fā)生器洗脫物的量來(lái)調(diào)節(jié)比放射性至所需的放療劑量。
有利地，根據(jù)本發(fā)明的方法因而適于用治療范圍內(nèi)的放射性來(lái)標(biāo)記微球。由此以及由于前述的方法步驟的簡(jiǎn)化，有利地，開發(fā)藥用試劑盒是可能的。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是實(shí)施本發(fā)明方法的藥用試劑盒。用于制備錸-188標(biāo)記微球的試劑盒包括下列成分a)容器，其中有一定量的各自以粉末形式或溶液存在的水溶性錫-II鹽和穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑，c)第二容器，其中有人血清蛋白的微球，以及c)第三容器，其中有以粉末形式或溶液存在的用于提高pH值的物質(zhì)或溶液。
用于提高pH值的物質(zhì)以固體形式或在水溶液中存在，并且使溶液的pH值為pH 6.5至pH 8.5。
優(yōu)選地，成分分散到不同的容器中。在本實(shí)施方案中，每次向患者給藥，試劑盒含有所述三種容器中的至少一種。
在本發(fā)明特別有利的一處實(shí)施方案中，為提高pH值，使用乙酸鹽、檸檬酸鹽或酒石酸鹽，優(yōu)選使用酒石酸鉀鈉。對(duì)于每次向患者給藥，試劑盒優(yōu)選含有用于提高pH值的0.1mmol至0.2mmol的物質(zhì)，尤其優(yōu)選30mg至50mg的酒石酸鉀鈉×4H2O。
錫-II鹽優(yōu)選為水溶性錫-II鹽，例如，二水合氯化錫(II)或SnF2。對(duì)于每次向患者給藥，試劑盒優(yōu)選含有0.02mmol至0.1mmol的水溶性錫-II鹽，尤其優(yōu)選5mg至20mg的二水合氯化錫(II)。
因?yàn)殄a-II鹽當(dāng)加熱時(shí)在水溶液中相對(duì)不穩(wěn)定，試劑盒優(yōu)選含有用于穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑。該絡(luò)合劑優(yōu)選為有機(jī)羧酸或有機(jī)羧酸的鹽。容器中含有絡(luò)合劑與錫-II鹽。
用于穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑尤其優(yōu)選為2，5-二羥基苯甲酸(龍膽酸)。其它優(yōu)選的絡(luò)合劑為乙酸鹽、檸檬酸鹽、丙二酸鹽、葡糖酸鹽、蘋果酸鹽、乳酸鹽、羥基異丁酸鹽、焦磷酸鹽、抗壞血酸鹽、酒石酸鉀鈉或葡庚糖鹽。對(duì)于每次向患者給藥，相對(duì)每mol錫-II鹽，試劑盒優(yōu)選含有0.5-2mol，尤其優(yōu)選1mol的用于穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑。這相當(dāng)于5mg至20mg的龍膽酸。
試劑盒還含有作為其它成分的待標(biāo)記的顆粒。這些顆粒優(yōu)選為圓形或近似圓形。有利地，這種顆粒，微球，其直徑足夠地小以使微球可以經(jīng)過(guò)通常的血管輸送，但以足夠地大，從而卡在毛細(xì)血管內(nèi)。優(yōu)選地，它們的直徑為10μm至50μm，尤其優(yōu)選10μm至30μm。
試劑盒于額外的容器(b)中優(yōu)選含有0.5-10百萬(wàn)個(gè)，尤其優(yōu)選1-5百萬(wàn)個(gè)，有利的1-2百萬(wàn)個(gè)顆粒。
顆粒優(yōu)選由在人體組織內(nèi)新陳代謝和降解的材料，從而當(dāng)給藥時(shí)這些顆粒僅暫時(shí)阻塞毛細(xì)血管。有利地，以該方式，顆粒的多次施用是可能的。該可降解顆粒的優(yōu)選例子為人血清蛋白的微球([99mTc]HSA微球B20，Rotop Pharmaka，Radeberg，Deutschland)。該[99mTc]HSA微球B20已批準(zhǔn)用锝99m標(biāo)記使用。
在試劑盒中，顆粒優(yōu)選包含于含水或醇的濃懸浮液中。為提高顆粒的分散度，有利地，向該懸浮液中加入非離子表面活性劑。優(yōu)選地，使用聚乙烯型的，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯(Tween80)的非離子表面活性劑。
懸浮液中所含非離子表面活性劑的量相對(duì)每1mg顆粒優(yōu)選為0.15mg至0.3mg。
為制備Re-188標(biāo)記的微球，在第一容器中將錫-II鹽和穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑溶于無(wú)菌水中，并加入到含有微球的第二容器中，并將微球懸浮于溶液中。將含有放射性錸-188的發(fā)生器洗脫物加入到懸浮液中并將懸浮液加熱至80℃至100℃。經(jīng)過(guò)45至70分鐘的加熱后，通過(guò)使懸浮液與第三容器所含的用于提高pH值的物質(zhì)混合來(lái)將pH值調(diào)節(jié)至pH 5至pH 8.5?，F(xiàn)在使懸浮液冷卻，優(yōu)選至體溫，然后可以無(wú)需洗滌步驟直接向患者給藥。
本發(fā)明還涉及用本發(fā)明的方法制備的顆粒和根據(jù)本發(fā)明的試劑盒以及它們癌或其轉(zhuǎn)移的放療中的用途。
本發(fā)明的另一部分是用這些顆粒對(duì)腫瘤、癌或其轉(zhuǎn)移進(jìn)行放療的方法。在本方法中，通過(guò)上述方法制備Re-188標(biāo)記的顆粒。將導(dǎo)管插入通向癌的局部血管中。然后，將pH值調(diào)節(jié)至pH 5到pH 8.5的放射性標(biāo)記顆粒的懸浮液通過(guò)該導(dǎo)管局部供給到腫瘤組織(無(wú)需顆粒的中間洗滌步驟)。放射性標(biāo)記顆粒的大小能夠保證，當(dāng)?shù)谝淮谓?jīng)過(guò)腫瘤滲透的毛細(xì)血管系統(tǒng)時(shí)，它們可以留在腫瘤的毛細(xì)血管內(nèi)。為此目的，顆粒的直徑優(yōu)選為10μm至50μm，尤其優(yōu)選10μm至30μm。
有利地，本方法確保非常高的放射性劑量達(dá)到目標(biāo)腫瘤組織內(nèi)，而同時(shí)患者的周圍組織及其它器官受到了保護(hù)。與例如放射性標(biāo)記的抗體、肽和其它低分子量化合物的系統(tǒng)靜脈給藥相比，本方法取得了在腫瘤組織中明顯更高的放射劑量(100-150Gy)。
使用人血清蛋白的微球的優(yōu)點(diǎn)在于顆?？梢栽隗w內(nèi)降解。當(dāng)給藥時(shí)微球僅暫時(shí)阻塞毛細(xì)血管。因此多次給藥是可能的。
優(yōu)選以動(dòng)脈方式注入來(lái)進(jìn)行顆粒的給藥。為此，優(yōu)選將0.5-10百萬(wàn)個(gè)，尤其優(yōu)選1-5百萬(wàn)個(gè)，有利的1-2.5百萬(wàn)個(gè)顆粒(相當(dāng)于1-20mg，優(yōu)選3-10mg)懸浮于20-100ml，優(yōu)選50ml輸液(例如，無(wú)菌等滲壓鹽溶液)中并注入。
優(yōu)選地，微球降解的生物半衰期大于200小時(shí)，優(yōu)選8-15天。微球的生物半衰期因此在Re-188的生物半衰期的范圍中。有利地，通過(guò)將Re-188固定在微球上，使Re-188固定于施用部位(＞90％在那里停留數(shù)日)。
有利地，根據(jù)本發(fā)明用Re-188標(biāo)記的微球特別適于肝癌以及其它癌的肝轉(zhuǎn)移的治療。
下面結(jié)合實(shí)施例更詳細(xì)的說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1如下通過(guò)人血清蛋白(HSA)的標(biāo)記來(lái)說(shuō)明用Re-188標(biāo)記顆粒將9.3mg的2，5-二羥基苯甲酸(龍膽酸)溶于2ml水中用于注射，然后加入11.4mg SnCl2×H2O，并將溶液無(wú)菌過(guò)濾到含有人血清蛋白(HSA)微球(MS B20，Rotop Pharmaka，Radeberg，Deutschland)的瓶中。將瓶中的顆粒調(diào)成漿并轉(zhuǎn)移至另一試劑盒瓶(Kit-Flasche)MS B20中并然后至第三試劑盒瓶中。于是在第三個(gè)瓶中含有1.5百萬(wàn)個(gè)MSB 20顆粒。向其中加入無(wú)菌過(guò)濾的溶于0.9％NaCl中的Re-188高錸酸鹽(10000-20000MBq)。然后將含有顆粒的試劑盒瓶插入加熱器中并將加熱器在95℃下振蕩55分鐘。然后，加入0.6ml無(wú)菌過(guò)濾的酒石酸KNa溶液(42mg/ml)并停止加熱。又振蕩5分鐘后，所制備產(chǎn)品可用于注射。
如此標(biāo)記的顆粒的標(biāo)記產(chǎn)率(放射化學(xué)純度)是≥95％。
實(shí)施例2用Re-188標(biāo)記顆粒(此處為人血清蛋白(HSA)微球)的優(yōu)選試劑盒由3個(gè)瓶組成，其中的成分見表1。
表1
**超高純度氮?dú)庥米鞫栊詺怏w試劑盒設(shè)計(jì)用于患者的治療。
實(shí)施例3使用實(shí)施例2的試劑盒按照下列步驟標(biāo)記顆粒(此處為人血清蛋白(HSA)微球)試劑盒瓶1的成分(2，5-二羥基苯甲酸-龍膽酸和二水合氯化錫(II))溶于2ml無(wú)菌無(wú)致熱原的水中用于注射目的，并向試劑盒瓶2中加入HSA微球A20。加入溶液后，為壓力平衡用注射器從瓶1和2中除去相同體積的氮?dú)狻Ｍㄟ^(guò)輕微振動(dòng)伴以橡膠塞(Gummilyostopfens)潤(rùn)溫，使HSA微球懸浮。
將在無(wú)菌等滲壓無(wú)致熱原氯化鈉溶液中的[188Re]高錸酸鈉(188Re發(fā)生器洗脫物(10000-20000MBq)，體積1ml)轉(zhuǎn)移到安置在鉛屏蔽中的瓶2中。加入188Re發(fā)生器洗脫物后，為壓力平衡，從瓶2中除去相同體積的氮?dú)狻?br>
為進(jìn)行反應(yīng)，將瓶2在加熱振蕩器中于95℃下振蕩55分鐘。從振蕩器中取下瓶2并將瓶3中的0.6ml(酒石酸K/Na溶液)轉(zhuǎn)移到瓶2中。加入溶液后，為壓力平衡，從瓶2中除去相同體積的氮?dú)狻Ｍㄟ^(guò)輕微振動(dòng)伴以橡膠塞潤(rùn)溫，使[188Re]HSA微球懸浮。
通過(guò)使用振蕩器在室溫下使瓶中的制備產(chǎn)物繼續(xù)反應(yīng)5分鐘，然后該制備產(chǎn)物可用于注射。根據(jù)所需的濃度，已標(biāo)記的[188Re]HSA微球B20的懸浮液可以用氯化鈉溶液稀釋以用于注射。標(biāo)記后，[188Re]HSA微球的懸浮液可以最長(zhǎng)使用2小時(shí)。
實(shí)施例4如下制備實(shí)施例2的試劑盒為向150個(gè)1號(hào)瓶中充料，將1.395g的龍膽酸(2，5-二羥基苯甲酸)和1.710g的二水合氯化錫(II)溶于150ml水中用于注射。將溶液分配到150個(gè)瓶中并凍干。
為向200個(gè)2號(hào)瓶中充料，將2.0g的HSA微球A20(RotopPharmaka GmbH，Deutschland)和0.48g的Tween80懸浮于下列物質(zhì)的溶液中-360ml丙酮-40ml氫氧化鈉溶液(0.1mol/l)-40ml鹽酸(0.1mol/l)-240ml乙醇abs.
向該懸浮液中加入少量的孟加拉粉紅(Bengalrosa)染料。將懸浮液直空濃縮至400ml并分配到200個(gè)瓶中。然后，通過(guò)真空干燥除去丙酮和乙醇。
為向150個(gè)3號(hào)瓶中充料，將6.3g的酒石酸鉀鈉溶于150ml水中用于注射。將該溶液分配到150個(gè)瓶中。
實(shí)施例5根據(jù)實(shí)施例1的步驟，用Re-188標(biāo)記不同材料的顆粒S1弱聚丙烯酸酯陽(yáng)離子交換樹脂(Bio-Rex 70，BioRad，Deutschland)S2聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA，Heraeus Kulzer，Deutschland)S3甲基丙烯酸酯共聚物(MarcoPrep Q，BioRad，Deutschland)S4聚乙烯醇縮甲醛(Drivalon，Nycomed-Amersham，Deutschland)S5大顆粒清蛋白的顆粒(MAA，Nycomed-Amersham，Deutschland)S6人血清蛋白(HSA B20，ROTOP Pharmaka GmbH，Deutschland)S7膠原蛋白顆粒(Angiostat，Regional Therapeutics，USA)，S8聚乙酸酯顆粒(PLA，Micromod，Deutschland)分別使用2-3mg顆粒(相當(dāng)于大約0.5百萬(wàn)個(gè)顆粒)。
在標(biāo)記之前和之后，通過(guò)單顆粒光散射根據(jù)ISO 13323-1確定粒度分布。在無(wú)顆粒的水中稀釋后，在流量試管(Durchflussküvette)的測(cè)量區(qū)中對(duì)顆粒依次進(jìn)行測(cè)量。根據(jù)ISO 9276-2將粒度分布重新計(jì)算成表面積基分布，因?yàn)檫@樣更好地表征了Re-188在標(biāo)記顆粒表面上的分布。
表2提供了根據(jù)ISO 1998的累積分布值(Q2)，其表示90％的表面積基總分布。
在標(biāo)記后，通過(guò)將顆粒懸浮液離心，并在gamma檢測(cè)儀(Gamma-Probenwechsler)(Cobra II，Packard，USA)中測(cè)量上清液和沉淀物的放射性，來(lái)確定標(biāo)記產(chǎn)率。
表2
用Re-188標(biāo)記后，可生物降解的HSA微球B20(在顯微鏡下為可辨識(shí)的球形)具有15μm和37μm之間的(平均值21μm)幾乎不變的分布。
與此相較，標(biāo)記后大顆粒聚集的HSA(MAA)具有寬的顆粒分布。這是由于MAA顆粒不是以圓形顆粒而是以本領(lǐng)域中類似海綿體(Schwmmchen)的不規(guī)則形狀存在而造成的。MAA顆粒在高溫下不是很穩(wěn)定，并且，由于其較大的表面積，在體內(nèi)也會(huì)被酶更快地攻擊并降解。
Drivalon(S4)、Angiostat(S7)和PLA(S8)在所需的高反應(yīng)溫度下也不能很好的承受標(biāo)記過(guò)程，即，細(xì)粒材料增加并且顆粒的公布明顯變寬。盡管如此，所有顆粒制劑的體外標(biāo)記是相當(dāng)穩(wěn)定的。
為測(cè)定體外穩(wěn)定性，用人血漿培育標(biāo)記的顆粒樣品。在37℃下培育3小時(shí)后，或在室溫下培育24小時(shí)和48小時(shí)后，并在gamma檢測(cè)儀(Cobra II，Packard，USA)中確定離心后Re-188在顆粒上的吸附性以及測(cè)定放射性。
表3總結(jié)了標(biāo)記顆粒的體外穩(wěn)定性的結(jié)果。
表3
可以認(rèn)為所有顆粒制劑的體外穩(wěn)定性都是令人滿意的，因?yàn)榻?jīng)過(guò)48小時(shí)后75-90％的Re-188仍與顆粒結(jié)合(表3)。
在對(duì)Wistar鼠靜脈注射后，體內(nèi)檢測(cè)不同顆粒的生物分布，其中肺作為有良好血液供應(yīng)的腫瘤的模型。
注射標(biāo)記有20MBq Re-188的顆粒后，在常規(guī)核醫(yī)學(xué)成像技術(shù)的協(xié)助下，用Gamma照相機(jī)(Picker CX 250)于48小時(shí)期間內(nèi)檢測(cè)顆粒的生物分布。在Gamma照相機(jī)檢測(cè)結(jié)束后，將動(dòng)物殺死，除去選定的器官并用Gamma檢測(cè)儀確定它們的放射性，與整個(gè)動(dòng)物以及與所注射的放射性相比。
在注射入8周大的Wistar鼠(n＝3-6)的尾部靜脈后，于48小時(shí)測(cè)定對(duì)于每種材料，標(biāo)記顆粒在肝和肺中的體內(nèi)生物分布(分別以在整個(gè)器官中的注射劑量表示)。
為確定不同的顆粒制劑的體內(nèi)穩(wěn)定性，肺中的生物半衰期(Tb1/2)用作標(biāo)準(zhǔn)，得到的值為45小時(shí)至超過(guò)200小時(shí)。此處，200小時(shí)的生物半衰期相應(yīng)于對(duì)Re-188而言15.4小時(shí)的有效半衰期。由于經(jīng)過(guò)5個(gè)有效的半衰期(即，77小時(shí))后，只有約3％的最初放射性存在于體內(nèi)并且可以治療性地工作，所得的穩(wěn)定性可以認(rèn)為是令人滿意的。
表4總結(jié)了體內(nèi)生物分布和體內(nèi)穩(wěn)定性的結(jié)果。
表4
生物分布研究顯示制劑S1至S3以及S6的體內(nèi)穩(wěn)定性非常好，其特征在于肺中的放射性非常緩慢地降低并且非目標(biāo)組織(例如，肝，除了S2的情況外，表4)中放射性吸收最小。S2在原材料中已有相對(duì)大量的細(xì)粒材料，其導(dǎo)致顆粒在肝中沉積，其中顆粒在實(shí)驗(yàn)的整個(gè)期間都停留在肝中并且保持不變。
小顆粒(＜10μm，例如，樣品S2)在肝和脾的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)中收集。當(dāng)細(xì)粒材料在標(biāo)記過(guò)程中產(chǎn)生時(shí)，它們?cè)陟o脈(i.v.)注射后見于這些器官中(樣品S4、S7和S8)。因此，這些顆粒，即使它們的生物半衰期相對(duì)長(zhǎng)(＞120h)，它們也不適于人體的動(dòng)脈內(nèi)腫瘤治療。
MAA大顆粒(S5)不適于人體的動(dòng)脈內(nèi)腫瘤治療，因?yàn)樗鼈兊纳锇胨テ?45.4h)相對(duì)短。
與Mantravadi 1981(Mantravadi RV，Spigos DG，Tan WS，F(xiàn)elix EL，Intraarterial yttrium-90 in the treatement of hepatic malignancy，Radiology1981；142783-786)報(bào)道的當(dāng)使用未與顆粒理想結(jié)合的長(zhǎng)壽命Beta發(fā)射源(Y-90)而導(dǎo)致的致命的醫(yī)療結(jié)果相比，應(yīng)用以短壽命發(fā)射源Re-188標(biāo)記的顆粒，其危險(xiǎn)性顯著較低。顆粒所釋放的Re-188不在至關(guān)重要的器官中累積，而是在短時(shí)間內(nèi)通過(guò)腎排出。
使用Re-188制劑的另一優(yōu)點(diǎn)是現(xiàn)有的放射性核素發(fā)生器可在任何時(shí)間使用以制備Re-188制劑，因此無(wú)需長(zhǎng)的等待時(shí)間即可回應(yīng)醫(yī)生的要求而且成本很具吸引力。
使用不同顆粒材料的實(shí)施例的比較結(jié)果可總結(jié)如下根據(jù)本發(fā)明的方法，不同的顆粒材料可以用Re-188以高產(chǎn)率進(jìn)行標(biāo)記，并且可以理想地用于體內(nèi)放療(endoradiotherapeutisch)領(lǐng)域。
用Re-188標(biāo)記的HSA微球B20，尤其是由于顆粒的生物相容性、它們均勻的粒度、以及產(chǎn)品的高的體內(nèi)穩(wěn)定性，而成為在供血血管的選擇性導(dǎo)管插入術(shù)后對(duì)局部腫瘤治療最具吸引力的核醫(yī)學(xué)試劑。
權(quán)利要求
1.制備錸-188標(biāo)記顆粒的方法，其中有機(jī)聚合物或生物聚合物的顆粒懸浮于溶液中并加熱至80℃-100℃，其中溶液的初始pH值為pH 1至pH 3，并且包括a)水溶性錫-II鹽，b)Re-188高錸酸鹽，其放射性為1000MBq至60000MBq，其特征在于，加熱45分鐘至70分鐘后，pH值升高并且調(diào)節(jié)為pH5至pH 8.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，為提高pH值，使用檸檬酸溶液、乙酸溶液、或酒石酸溶液，優(yōu)選酒石酸鉀鈉溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中的一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，溶液中含有用于穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑，其選自2，5-二羥基苯甲酸、乙酸、檸檬酸、丙二酸、葡糖酸、乳酸、羥基異丁酸、抗壞血酸、酒石酸、琥珀酸、上述酸的鹽、或葡庚糖鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，2，5-二羥基苯甲酸用作穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中的一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，顆粒的直徑為10μm至30μm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中的一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在方法開始時(shí)，溶液中存在的水溶性錫-II鹽的濃度為10mmol/l至50mmol/l。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中的一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，顆粒由人血清蛋白組成。
8.用于制備Re-188標(biāo)記顆粒的藥用試劑盒，包括a)第一容器，其中有一定量的水溶性錫-II鹽和用于穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑，其選自2，5-二羥基苯甲酸、乙酸、檸檬酸、丙二酸、葡糖酸、乳酸、羥基異丁酸、抗壞血酸、酒石酸、琥珀酸、上述酸的鹽、或葡庚糖鹽，b)第二容器，其中有由有機(jī)聚合物或生物聚合物制成的顆粒，c)第三容器，其中有以固體形式或在水溶液中存在的用于提高pH值的一定量的選自檸檬酸、乙酸或酒石酸的物質(zhì)，并且使溶液中的pH值為pH 6.5至pH 8.5。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥用試劑盒，其特征在于，2，5-二羥基苯甲酸是用于穩(wěn)定錫-II鹽的絡(luò)合劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的藥用試劑盒，其特征在于，用于提高pH值的物質(zhì)是酒石酸鉀鈉。
11.根據(jù)權(quán)利要求8-10中的一項(xiàng)所述的藥用試劑盒，其特征在于，顆粒的直徑為10μm至30μm。
12.根據(jù)權(quán)利要求8-11中一項(xiàng)所述的藥用試劑盒，其特征在于，對(duì)于每次向患者給藥，試劑盒含有0.02mmol至0.1mmol的錫-II鹽。
13.根據(jù)權(quán)利要求8-12中一項(xiàng)所述的藥用試劑盒，其特征在于，顆粒由人血清蛋白組成。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-6中的一項(xiàng)所述的方法制備的錸-188標(biāo)記顆粒。
15.權(quán)利要求14的錸-188標(biāo)記顆粒在腫瘤、癌或它們的轉(zhuǎn)移的放療中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及制備放射性同位素錸－188(Re－188)標(biāo)記顆粒的方法以及實(shí)施該方法的試劑盒。這種帶放射性的顆?？捎糜卺t(yī)學(xué)，優(yōu)選用于腫瘤學(xué)和核醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，進(jìn)行腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移的放療。根據(jù)該方法，顆粒懸浮于溶液中并加熱，其中溶液的初始pH值為pH1至pH3，并且含有錫－II鹽和Re－188高錸酸鹽。加熱45－70分鐘后，升高pH值。升高pH后得到的懸浮液可以直接用于患者的放療。由于洗滌步驟已不必要，以及節(jié)省了時(shí)間，對(duì)人員的輻射保護(hù)顯著改善。另外，標(biāo)記所需的錫－II鹽減少并且標(biāo)記產(chǎn)率提高。
文檔編號(hào)A61K51/12GK1913926SQ200580003730
公開日2007年2月14日 申請(qǐng)日期2005年1月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月29日
發(fā)明者格爾德·文德利希, 安特耶·德魯茲 申請(qǐng)人:羅托普制藥有限責(zé)任公司