專利名稱：具有抗生育和抗真菌活性的四氫異喹啉類化合物及其鹽類的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，是一類具有抗生育和抗真菌活性的新型四氫異喹啉類化合物及其加成鹽。
背景技術：
真菌病是常見病、多發(fā)病。近年來，深部真菌感染的發(fā)病率大幅度上升。目前臨床上應用的抗真菌藥物主要是氟康唑、酮康唑等氮唑類藥物。這類藥物的抗真菌作用機制為氮唑類藥物通過其結構中N3或N4原子上的未用電子對與真菌C14α去甲基化酶的血紅素輔基Fe原子結合而抑制該酶活性，從而發(fā)揮抗真菌作用。但由于該酶屬于細胞色素P450超家族蛋白的成員，在人體中普遍存在細胞色素P450酶系，氮唑類藥物也可與人體內的P450酶系的血紅素輔基Fe原子配位結合，從而對人體產生毒性。因此，氮唑類抗真菌藥物毒性大，同時易產生耐藥性，嚴重影響臨床治療。
目前臨床應用的口服避孕藥主要為甾體激素類藥物，該類藥物具有激素類副作用；外用避孕藥主要為非離子型表面活性劑，如壬苯醇醚等，這類藥物的刺激性，粘膜損傷等副作用也限制了其臨床應用。有報道，壬苯醇醚等可使陰道念珠菌等真菌感染增加。
因而研究開發(fā)新的作用機制、新結構類型的抗真菌藥物和抗生育藥物具有重要意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明以真菌C14α去甲基化酶活性腔的三維結構為藥物設計靶點，避開能與氮唑類藥物結合的血紅素輔基Fe原子，以活性腔中氨基酸功能殘基為藥物結合點，設計合成具有抗真菌和抗生育活性的四氫異喹啉類化合物及其藥學上可接受的鹽類。結構通式如下 式中R1表示H，OH，CH3O或CH3COO；R2表示H，OH，CH3O或CH3COO；
R3表示H，OH，CH3O或CH3COO；R4表示H，OH，CH3O或CH3COO；R5表示C3～C16的直鏈或支鏈烷基，C3～C16的直鏈或支鏈烯基，芐基，芳環(huán)上取代芐基；HX表示HCl或HBr。
本發(fā)明化合物及其鹽類，各R基團的優(yōu)選搭配為(1)R1，R4為H；R2，R3為OH或CH3COO；R5為C3～C16的直鏈或支鏈烷基，C3～C16的直鏈或支鏈烯基，芐基，芳環(huán)上取代芐基；(2)R1為H；R2，R3，R4為OH或CH3O或CH3COO；R5為C3～C16的直鏈或支鏈烷基，C3～C16的直鏈或支鏈烯基，芐基，芳環(huán)上取代芐基；(3)R1，R3為OH或CH3COO；R2，R4為H；R5為C3～C16的直鏈或支鏈烷基，C3～C16的直鏈或支鏈烯基，芐基，芳環(huán)上取代芐基；(4)R2，R4為OH或CH3COO；R1，R3為H；R5為C3～C16的直鏈或支鏈烷基，C3～C16的直鏈或支鏈烯基，芐基，芳環(huán)上取代芐基；其優(yōu)選基團為R1為H；R2，R3，R4為OH或CH3COO；R5為-(CH2)11CH3-(CH2)15CH3，-(CH2)5CH3， -(CH2)4CH3，-(CH2)6CH3， -(CH2)11CH3，-(CH2)8CH3，-(CH2)7CH3，芐基，對氯芐基，對溴芐基，2，4-二氯芐基。
本發(fā)明已合成并被證明具有抗生育和抗真菌活性的部分四氫異喹啉類化合物的化學結構及其核磁共振譜數(shù)據(jù)見表1。
表1 化合物結構及其核磁共振譜數(shù)據(jù)


本發(fā)明化合物合成路線如下 操作步驟1、制備中間體B由取代的苯乙胺與甲醛在酸性條件下加熱反應，反應畢，用NaOH溶液堿化，生成中間體B；2、制備中間體C由中間體B在弱堿性條件下與鹵代烷、烯等化合物反應，生成中間體C；3、制備目標化合物D將化合物C與氫溴酸反應，制備目標化合物D。
由取代苯乙胺上各取代基R的不同，生成不同中間體B，中間體B與不同的鹵代烷或鹵代烯烴反應，生成不同的中間體C，進而生成不同的目標化合物。本發(fā)明化合物經抗生育及抗真菌實驗證實具有抗生育活性和抗真菌活性。因此可用于制備抗生育或抗真菌藥物。
具體實施例方式
實施例1、2-十二烷基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽的制備(表1中化合物1)將3，4-二甲氧基-苯乙胺20ml與多聚甲醛3.60g加到無水乙醇中，室溫下攪拌反應至多聚甲醛完全反應，用稀鹽酸調節(jié)溶液pH至2，加熱回流4小時，冷卻，析出固體，過濾，將所得固體加到10％NaOH溶液中，再加入CH2Cl2100ml，振搖，分離CH2Cl2層，無水K2CO3干燥，過濾，減壓除去溶劑，得6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉淡黃色固體。
取上述制得化合物6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉1g、溴化十二烷0.6g，K2CO31g溶于30ml無水乙醇中，攪拌回流8h，放冷，過濾，減壓蒸去溶劑。將殘留物溶于冰醋酸及40％HBr溶液中，回流攪拌10小時，減壓蒸去溶劑，所得固體用無水乙醇重結晶，得目標化合物白色固體。
下列化合物均按實施例1的方法制備由6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉與不同的鹵代烷或鹵代烯烴反應，生成不同的目標化合物。
當鹵代物為氯化芐時，目標化合物為2-芐基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物2)；當鹵代物為對氯氯芐時，目標化合物為2-對氯芐基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物3)；當鹵代物為對溴氯芐時，目標化合物為2-對溴芐基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物5)；當鹵代物為對2，4-二氯氯芐時，目標化合物為2-(2，4-二氯芐基)-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物6)；當鹵代物為氯代十六烷時，目標化合物為2-十六烷基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物7)；當鹵代物為氯代正己烷時，目標化合物為2-正己基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物8)；當鹵代物為氯代異丁烷時，目標化合物為2-異丁基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物9)；當鹵代物為氯代正戊烷時，目標化合物為2-正戊基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物10)；當鹵代物為氯代正庚烷時，目標化合物為2-正庚基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物11)；當鹵代物為2-氯戊烷時，目標化合物為2-(1-甲基丁基)-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物12)；當鹵代物為氯代十四烷時，目標化合物為2-十四烷基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物14)；當鹵代物為氯代烯丙烷時，目標化合物為2-烯丙基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物15)；當鹵代物為氯代癸烷時，目標化合物為2-癸烷基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物16)；當鹵代物為氯代丙烷時，目標化合物為2-丙基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物17)；當鹵代物為氯代壬烷時，目標化合物為2-壬烷基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物18)；當鹵代物為氯代正辛烷時，目標化合物為2-正辛基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物19)。
實施例2、2-十二烷基-6，7-二乙酰氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽的制備(表1中化合物4)取3.5g 6，7-二羥基-2-十二烷基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽加入到5ml吡啶和30ml二氯甲烷溶液中，冰浴冷卻，攪拌下慢慢滴加8ml乙酸酐，加畢，室溫攪拌4h，加熱回流3h。放冷，反應液分別用NaHCO3水溶液和水洗滌。反應液用Na2CO3干燥，蒸去溶劑，得黃色固體。將固體溶于30ml無水乙醇中，在冰浴下通入HCl氣體至飽和，放置，析出固體，過濾，干燥得6，7-二乙酰氧基-2-十二烷基-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽。
下列化合物按實施例2方法制備當2-十六烷基-6，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽進行乙酰化反應時，目標化合物為2-十六烷基-6，7-二乙酰氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(表1中化合物13)；實施例3、2-癸烷基-6，8-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽的制備(表1中化合物22)將3，5-二羥基苯乙胺18g與多聚甲醛3.6g反應，方法同實施例1，制得6，8-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉。
將上述制得的中間體6.1g，溴代癸烷6.2g，無水K2CO35.6g和乙腈150ml，室溫攪拌16小時，減壓除去溶劑，乙酸乙酯溶解，用水洗，干燥，通入HCl氣體，得2-癸烷基-6，8-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽。
實施例4、2-辛烷基-5，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽的制備(表1中化合物23)2，4-二羥基苯乙胺18g與多聚甲醛3.6g反應，方法同實施例1。制得5，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉。
將上述制得的中間體5.9g，溴代辛烷5.8g，無水K2CO35.6g和乙腈150ml，室溫攪拌16小時，減壓除去溶劑，乙酸乙酯溶解，用水洗，干燥，通入HCl氣體，得2-辛烷基-5，7-二羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽。
實施例5、2-十二烷基-6，7，8-三羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽的制備(表1中化合物20)將3，4，5-三甲氧基苯乙胺與多聚甲醛反應，方法同實施例1。
下列化合物的制備方法與實施例1相同當鹵代物為氯代正辛烷時，目標化合物為2-正辛基-6，7，8-三羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物21)；當鹵代物為氯代壬烷時，目標化合物為2-壬基-6，7，8-三羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物24)；當鹵代物為氯代癸烷時，目標化合物為2-癸基-6，7，8-三羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物25)；當鹵代物為氯代十四烷時，目標化合物為2-十四烷基-6，7，8-三羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物26)；當鹵代物為氯代十六烷時，目標化合物為2-十六烷基-6，7，8-三羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物27)；當鹵代物為2，4-二氯氯芐時，目標化合物為2-(2，4-二氯芐基)-6，7，8-三羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物28)；當鹵代物為氯代正辛烷時，目標化合物為2-正辛基-6，7，8-三甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物32)；當鹵代物為氯代壬烷時，目標化合物為2-壬基-6，7，8-三甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物33)；當鹵代物為2，4-二氯氯芐時，目標化合物為2-(2，4-二氯芐基)-6，7，8-三甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物34)；當鹵代物為氯代癸烷時，目標化合物為2-癸基-6，7，8-三甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物29)；當鹵代物為氯代十二烷時，目標化合物為2-十二烷基-6，7，8-三甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽的制備(表1中化合物30)；當鹵代物為氯代十四烷時，目標化合物為2-十四烷基-6，7，8-三甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物31)；當鹵代物為氯代十六烷時，目標化合物為2-十六烷基-6，7，8-三甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉氫溴酸鹽(表1中化合物35)。
抗生育活性測試實驗1、藥物配制方法精密稱取測試化合物，先用DMSO溶解，再加生理鹽水配制成2mg/ml的溶液(DMSO控制在1％)，再用生理鹽水稀釋成1mg/ml，0.5mg/ml，0.25mg/ml，0.125mg/ml，0.0625mg/ml，0.03125mg/ml。
2、精子稀釋液及營養(yǎng)液的配制精子稀釋液取NaHCO33g，甲醛1ml，加蒸餾水100ml配制而成。
精子營養(yǎng)液(Tyrode液)稱取NaCl 8.0g，KCl 0.20g，CaCl20.20g，MgCl2.6H2O0.10g，NaH2PO4.2H2O 0.05g，NaHCO31.0g，Glucose 1.0g，用雙蒸水分次溶解，配至1000ml，溶液配好后密閉，置4℃冰箱保存，一周內使用。
3、精液的采取及計數(shù)將SD雄性大鼠處死后，取附睪置于干凈小燒杯中，生理鹽水清洗，加入Tyrode液3ml，解剖刀劃一十字形切口，置37℃水浴箱孵育10分鐘，取一滴于玻片上，低倍鏡下(10*10)檢查精子活動率，要求活動率≥60％，然后吸取精液0.1ml加入裝有1.9ml精子稀釋液的小試管中，混勻，靜置3分鐘，取一滴于計數(shù)池內，高倍鏡(10*40)下計數(shù)，根據(jù)計數(shù)所測得的密度，加Tyrode液將精液稀釋到107個/ml，置37℃水浴中待用。
4、殺精試驗對3份大鼠精液進行體外殺精試驗，選定所測待篩化合物濃度為1mg/ml，同時以1％DMSO及生理鹽水作為對照。將配制好的不同濃度化合物，DMSO及生理鹽水分裝于小試管置37℃水浴中保溫備用。按照國際計劃生育基金會(IPPF)認可的殺精子試驗方法，取上述選定的精液0.2ml加入到1ml不同濃度的藥物溶液中，立即置震蕩器上混勻5秒鐘，迅速取一滴于載玻片上，室溫下(22℃)下觀察10個高倍視野，以全部精子失活為終點，測出藥物殺精子的最低有效濃度。
結果見表2表2 系列化合物對大鼠精子的作用

由表2可見，所有測試化合物均具有抗生育活性。其中化合物1、16、20、25、26、28具有較強的抗生育活性。
抑菌試驗1、實驗菌株本實驗采用6種常見的深部及淺表致病真菌為測試菌。它們分別是白念珠菌、近平滑念珠菌、新型隱球菌、紅色毛癬菌、煙曲霉菌、羊毛狀小孢子菌(由上海長征醫(yī)院真菌庫提供)。
2、菌液制備球菌在YEPD液體培養(yǎng)基35℃培養(yǎng)16小時，活化兩次，用血細胞計數(shù)板計數(shù)，以RPM1640液體培養(yǎng)基調整至1×103～1×105個/ml；絲菌接種至SDA斜面，35℃，培養(yǎng)一周，活化兩次，使菌落覆蓋SDA斜面，加適量RPMI1640培養(yǎng)液，用吸管吹打菌落，使孢子游離于RPMI 1640培養(yǎng)液中，然后經四層無菌紗布過濾。培養(yǎng)液經血細胞計數(shù)板計數(shù)后，加RPMI 1640培養(yǎng)液調整孢子濃度至1×103～1×105個/ml。
3、藥液制備受試藥物分別用DMSO配成6.4mg/ml。
4、培養(yǎng)及檢測念珠菌屬真菌培養(yǎng)24小時測定結果。絲狀真菌培養(yǎng)7天后測定結果，用酶標分析儀于620nm測各孔OD值，與陽性對照孔比，以OD值下降80％以上的最低濃度孔中的濃度為MIC80。
抗真菌活性見表3。
表3 化合物抗真菌活性(MIC80μg/ml)


由表3可見，所有測試化合物均具有抗真菌活性。其中化合物1、4、14、16、20、21、24、25、26、27、28、29、30、31、32具有較強的抗真菌活性。
本發(fā)明四氫異喹啉類化合物是一類全新結構的具有抗生育和抗真菌活性的化合物，本發(fā)明為深入研究和開發(fā)新的抗生育和抗真菌藥物開辟了新的途徑。
權利要求
1.具有抗真菌和抗生育活性的四氫異喹啉類化合物及其藥學上可接受的加成鹽，結構通式如下 式中R1表示H，OH，CH3O或CH3COO；R2表示H，OH，CH3O或CH3COO；R3表示H，OH，CH3O或CH3COO；R4表示H，OH，CH3O或CH3COO；R5表示C3～C16的直鏈或支鏈烷基、C3～C16的直鏈或支鏈烯基、芐基、芳環(huán)上取代芐基；HX表示HCl、HBr。
2.按權利要求1所述化合物及其加成鹽，其特征在于各R基團作如下搭配(1)R1，R4為H；R2，R3為OH或CH3COO；R5為C3～C16的直鏈或支鏈烷基，C3～C16的直鏈或支鏈烯基，芐基，芳環(huán)上取代芐基；(2)R1為H；R2，R3，R4為OH或CH3O或CH3COO；R5為C3～C16的直鏈或支鏈烷基，C3～C16的直鏈或支鏈烯基，芐基，芳環(huán)上取代芐基；(3)R1，R3為OH或CH3COO；R2，R4為H；R5為C3～C16的直鏈或支鏈烷基，C3～C16的直鏈或支鏈烯基，芐基，芳環(huán)上取代芐基；(4)R2，R4為OH或CH3COO；R1，R3為H；R5為C3～C16的直鏈或支鏈烷基，C3～C16的直鏈或支鏈烯基，芐基，芳環(huán)上取代芐基。
3.按權利要求2所述化合物及其加成鹽，其特征在于各R基團分別為
4.權利要求1或2或3所述的化合物或其加成鹽在制備抗生育藥物或抗真菌藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，是具有抗生育活性和抗真菌活性的一類新型四氫異喹啉類化合物及其藥學上可接受的鹽，經實驗證明，它們抗生育活性強，對深、淺部真菌具有廣譜抗真菌活性，因此可用于制備抗生育藥物和抗真菌藥物。本發(fā)明化合物的結構通式如圖，其中R
文檔編號A61P31/10GK1785978SQ20051011113
公開日2006年6月14日 申請日期2005年12月5日 優(yōu)先權日2005年12月5日
發(fā)明者周有駿, 呂加國, 朱駒, 周曉天 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學