專利名稱：：治療或預(yù)防炎癥性疾病的組合物和方法本申請是申請日為1997年12月2日的中國專利申請97181581.X的分案申請，原申請的發(fā)明名稱為“治療或預(yù)防炎癥性疾病的組合物和方法”。本發(fā)明涉及治療或預(yù)防炎癥性疾病的組合物和方法。炎癥性疾病，無論急性還是慢性，代表著健康衛(wèi)生行業(yè)一個基本問題。簡言之，慢性炎癥被認(rèn)為是期間延長(數(shù)周或數(shù)月)的炎癥，在此期間活動性炎癥、組織破壞和試圖治愈同時進(jìn)行著(RobbinsPathologicalBasisofDisease由R.S.Cotran，V.Kumar，和S.L.Robbins編著，W.B.SaundersCo.，第75頁，1989)。盡管慢性炎癥可能是急性炎癥演變而來，但是它也可以開始于一個隨時間發(fā)展的隱匿過程，例如，做為頑固性感染(如，結(jié)核、梅毒、肺部感染)的結(jié)果，它引起遲發(fā)型過敏反應(yīng)，延長暴露于內(nèi)源性(如，升高血脂)或外源性(如二氧化硅、石棉、焦油、手術(shù)縫線)毒素，或針對自體組織的自身免疫反應(yīng)(如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、牛皮癬)。因此慢性炎癥性疾病包括許多常見的醫(yī)學(xué)情況，如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、再狹窄、牛皮癬、多發(fā)性硬化、手術(shù)粘連、結(jié)核、和慢性炎癥性肺部疾病(如哮喘、塵肺、慢性阻塞性肺部疾病、鼻息肉和肺纖維化)。牛皮癬牛皮癬是一種常見的慢性炎癥性皮膚病，它以癢、灼傷、刺痛及易出血的隆起、發(fā)炎、增厚和有鱗屑的損害為特征。大約10％的病人，牛皮癬伴有與風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎所見改變類似的確切的關(guān)節(jié)癥狀，。大約2-3％的美國人患有牛皮癬，每年有25,000例新病例被確診。目前牛皮癬的原因尚不清楚，盡管有相當(dāng)多的證據(jù)表明它是一種多基因自身免疫性障礙。此外，當(dāng)前牛皮癬不能治愈?？尚械闹委煱ň植恐委熑珙惞檀妓蛙浉唷⒚航褂秃偷剌旆?，和系統(tǒng)治療如類固醇、紫外線B、PUVA、氨甲蝶呤和環(huán)孢菌素。然而，大多數(shù)抗-牛皮癬治療表現(xiàn)為不令人滿意的緩解率和/或潛在的嚴(yán)重副作用。在美國，每年用于治療牛皮癬的總費(fèi)用據(jù)估計達(dá)30～50億美元，使得牛皮癬成為一個主要的衛(wèi)生健康問題。多發(fā)性硬化多發(fā)性硬化，美國有350,000人(女性與男性比例為2∶1)患病，同時每年有8,000例新病例發(fā)生，是累及神經(jīng)系統(tǒng)的最常見的慢性炎癥性疾病。典型地，MS臨床表現(xiàn)為在數(shù)年多的期間不利的神經(jīng)缺損反復(fù)發(fā)作。粗略地有半數(shù)MS病人可發(fā)展成更為慢性階段。盡管該病在早期不會導(dǎo)致死亡或認(rèn)知功能障礙，但是它可通過視敏度障礙；刺激性復(fù)視；干擾運(yùn)動功能影響行走和手的使用；產(chǎn)生腸道和膀胱失禁；強(qiáng)直狀態(tài)；和感覺缺損(觸、痛和溫度覺)而使病人致殘。MS原因不明，盡管有可觀的的證據(jù)表明它是一種自身免疫性疾病。當(dāng)前，不能有效治愈多發(fā)性硬化，而且目前的治療原則僅僅是部分成功。例如，盡管化療藥物如氨甲蝶呤、環(huán)孢菌素和硫唑嘌呤已用于控制那些對治療不敏感的進(jìn)展性疾病的病人，但迄今為止，證實其遠(yuǎn)期有益效果甚微。近來被許可的其它治療方法包括用于能夠行走的復(fù)發(fā)-緩解型MS病人的干擾素-α(Paty等，Neurology43662-667，1993)，特別地，Betaseron(重組干擾素α-1αβ；17位點取代的人干擾素α，CysSer；Berlex/Chiron)或Avonex(重組干擾素α-1α；產(chǎn)生于哺乳細(xì)胞的糖基化人干擾素α；Biogen)。不幸的是，盡管Betaseron提供了多發(fā)性硬化病人生活質(zhì)量的提高，但是疾病進(jìn)展沒有呈現(xiàn)明顯改善。與Betaseron治療有關(guān)的不利經(jīng)驗包括注射部位反應(yīng)(炎癥、疼痛、過敏和壞死)，和流感-樣綜合征(發(fā)熱、寒戰(zhàn)、焦慮和精神混亂)。風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種衰弱性慢性炎癥性疾病，1～2％的世界人口患病。該病引起機(jī)體多個關(guān)節(jié)疼痛、腫脹和破壞并且也可導(dǎo)致其它器官如肺和腎損害。該病晚期病人的死亡率高于某些癌癥，正由于此，治療原則已經(jīng)轉(zhuǎn)向攻克為減少不可逆關(guān)節(jié)損害可能性設(shè)計的早期藥物治療。美國風(fēng)濕病學(xué)會的最近推薦(ArthritisandRheumatism39(5)713-722，1996)包括對于任何確診和有進(jìn)展癥狀病人進(jìn)行早期開始的減輕-疾病的抗-風(fēng)濕藥物(DMARD)治療?？拱┧幬镆呀?jīng)成為絕大多數(shù)病人的第一線治療藥物，而化療藥物，氨甲蝶呤成為60-70％的風(fēng)濕病學(xué)家的選擇藥物。疾病的嚴(yán)重程度常常使該藥不確定每周地使用，且使用氨甲蝶呤治療一些病人的疾病仍進(jìn)展(超過50％的病人)，這樣第二線化療藥物如環(huán)孢菌素和硫唑嘌呤(單獨或聯(lián)合)被經(jīng)常使用。再狹窄再狹窄是一種導(dǎo)致管壁增厚和使供應(yīng)組織血管的血流損失的慢性血管損傷形式。它發(fā)生于對血管重建過程的反應(yīng)，包括實際上任何試圖消除血管阻塞的操作，并且是限制侵入性治療血管疾病有效性的主要因素。在過去的15年，再狹窄對心血管研究是一個主要挑戰(zhàn)。據(jù)1994年估計(美國心臟和發(fā)作(stroke)基金會)，超過6千萬美國人患有一種或多種形式的心血管疾病。在同一年這些疾病奪去大約1百萬人的生命(占美國死亡人數(shù)的41％)并且被認(rèn)為是發(fā)達(dá)國家致死和致殘的主導(dǎo)原因。目前，不存在技術(shù)許可的有效預(yù)防人類再狹窄的治療。已研究的系統(tǒng)治療包括直接針對內(nèi)皮缺失治療的物質(zhì)、抗-血小板物質(zhì)(如，阿司匹林)、血管舒張藥(如，鈣通道阻滯劑)、抗血栓形成劑(如，肝素)、抗-炎癥物質(zhì)(如，類固醇)、阻止血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增生物質(zhì)(如，秋水仙堿)和內(nèi)皮再生促進(jìn)劑(如，血管內(nèi)皮生長因子)。已研究的局部治療包括局部藥物釋放(如，肝素)和β與γ射線。所有在人類的使用均令人失望，主要是由于它們似乎作用于再狹窄過程的一個局限部位。系統(tǒng)治療也遭遇另外的問題，即在疾病部位如何達(dá)到藥物充分吸收并停留以提供持續(xù)生物作用而不引起不利的系統(tǒng)并發(fā)癥和毒性。炎癥性腸道疾病炎癥性腸道疾病(IBD)是指在小腸和大腸引起炎癥和潰瘍的慢性疾病(主要指克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)。簡要講，在美國大約有2百萬人患有IBD，男女比例患病均等?；疾≈饕叻逶?5-30歲之間，第二個高峰據(jù)報道在55-60歲之間。盡管有許多流行的證明模式，但它仍是一種原因不明的疾病。IBD通常的特點是緩解與不可預(yù)測的且嚴(yán)重程度不同的復(fù)發(fā)或突發(fā)交替出現(xiàn)，。大約50％的病人持續(xù)緩解，大多數(shù)患者在10年內(nèi)至少復(fù)發(fā)一次。此外，該病常伴有許多系統(tǒng)并發(fā)癥，以關(guān)節(jié)炎最為常見，有四分之一IBD患者發(fā)生關(guān)節(jié)炎癥狀。關(guān)節(jié)炎癥狀最經(jīng)常在疾病進(jìn)程中結(jié)腸受累時出現(xiàn)，在腸道疾病最活動時發(fā)作。此類型炎癥性關(guān)節(jié)炎不會引起永久性畸形，且時間短暫。該病的其它并發(fā)癥包括眼部炎癥(虹膜炎、結(jié)膜炎和鞏膜外層炎)、口腔炎癥(粘膜炎)、皮膚炎癥(結(jié)節(jié)性紅斑和壞疽性膿皮病)，骨骼肌異常(關(guān)節(jié)強(qiáng)直性脊椎炎)、腎的并發(fā)癥(腎結(jié)石和尿道瘺)、膽石癥和其它肝臟疾病(如肝炎)和膽系統(tǒng)疾病(硬化性膽管炎)。不幸的是，在許多病例中，長病程疾病(大于10年)可能導(dǎo)致更為嚴(yán)重的并發(fā)癥如結(jié)腸癌和腸外癌癥。目前還不能治愈IBD，許多現(xiàn)行的治療藥物集中于通過抑制與疾病有關(guān)的炎癥來控制疾病癥狀。治療IBD的基本藥物是對氨基水楊酸和皮質(zhì)類固醇，以及對使用這些藥物反應(yīng)不好的一些病人，也可以使用抗生素和免疫抑制藥物。盡管藥物治療對于70-80％的病人有效，但對于患更為活動疾病的病人則常常需要手術(shù)治療。與活動疾病如腸道梗阻、穿孔、膿腫或出血有關(guān)的慢性癥狀和并發(fā)癥可以通過手術(shù)干預(yù)而得以減輕和糾正。盡管該病手術(shù)治療不能永久性治愈疾病且復(fù)發(fā)率高，但是它減輕了活動期癥狀。手術(shù)粘連手術(shù)粘連形成，正常分離的機(jī)體組織長在一起的復(fù)雜過程，最常發(fā)生于手術(shù)創(chuàng)傷結(jié)束時。這些術(shù)后粘連主要發(fā)生在經(jīng)歷了婦科大手術(shù)60-90％的病人中，在工業(yè)化世界代表著腸道梗阻最常見的原因之一。這些粘連是手術(shù)治療失敗的主要原因，也是導(dǎo)致腸梗阻和不育癥的主要原因。其它粘連-處置并發(fā)癥包括慢性骨盆疼痛、尿道梗阻、和排泄機(jī)能障礙。目前，預(yù)防性治療是術(shù)后給藥4-5天用來阻止粘連形成。已檢驗了預(yù)防粘連的各種模式，包括(1)預(yù)防纖維沉積，(2)減少局部組織炎癥和(3)消除纖維沉積。通過使用機(jī)械的或由粘性溶液構(gòu)成的物理屏障來預(yù)防纖維沉積。盡管許多研究者正在使用粘連預(yù)防屏障，但存在著許多技術(shù)上的困難。通過給藥如皮質(zhì)類固醇和非甾體類抗炎藥可減少炎癥。然而，由于炎癥反應(yīng)程度和全身副作用所致劑量的限制，在動物模型中使用這些藥物的結(jié)果，并非令人鼓舞。最后，研究了通過使用蛋白水解酶和纖維蛋白分解酶消除纖維沉積。臨床使用這些酶的一個潛在并發(fā)癥是出血過多的可能性。炎癥性肺部疾病慢性炎癥性肺部疾病，包括例如，哮喘、塵肺、慢性阻塞性肺部疾病、鼻息肉和肺纖維化，影響著全世界許多人。典型地，此類疾病以侵入性炎癥過程和受累組織增厚為特征。例如，鼻息肉以增厚的鼻基膜組織為特征。息肉可發(fā)生于呼吸系統(tǒng)疾病如，哮喘、囊纖維化、原發(fā)性纖毛運(yùn)動障礙和免疫缺乏。鼻息肉被認(rèn)為是發(fā)生于上呼吸道的一個慢性炎癥過程表現(xiàn)。36％的不能耐受阿司匹林的病人中發(fā)現(xiàn)有鼻息肉，7％哮喘病人、0.1％的兒童和大約20％囊纖維化病人有鼻息肉。與鼻息肉有關(guān)的其它情況是Churg-Strauss癥狀、過敏性真菌竇炎和纖毛運(yùn)動障礙綜合征和Young’s癥狀。大約40％鼻息肉切除術(shù)病人復(fù)發(fā)。(Settipane，AllergyAsthmaProc.17(5)231-236，1996)。鼻息肉病的主要癥狀是鼻腔阻塞和嗅覺障礙。醫(yī)學(xué)治療鼻息肉病的目的是，(1)去除鼻息肉和鼻炎癥狀，(2)重新建立鼻腔呼吸和嗅覺和(3)預(yù)防復(fù)發(fā)。由少數(shù)大的息肉所致的鼻道閉塞，可以用簡單的鼻息肉切除術(shù)治療以來幫助病人通過鼻腔呼吸。手術(shù)治療的目的是，盡可能清除通道內(nèi)的息肉以恢復(fù)鼻生理性能和引流感染的鼻竇。然而，鼻息肉復(fù)發(fā)是臨床鼻學(xué)科最常見的未解決問題之一。由于手術(shù)不能治療粘膜疾病的炎癥成分，故息肉病的補(bǔ)充醫(yī)學(xué)治療總是必要的。最廣泛使用的治療是局部應(yīng)用皮質(zhì)類固醇，以減小息肉和預(yù)防術(shù)后復(fù)發(fā)。類固醇類減少鼻炎、改善鼻呼吸、減小息肉大小和降低復(fù)發(fā)率，但是，它們對嗅覺和鼻竇病理學(xué)具有不足取的作用。然而，對多發(fā)息肉，類固醇類可與感染性并發(fā)癥所需的抗生素聯(lián)合應(yīng)用。其它治療鼻息肉病的藥物包括H1受體拮抗劑(如氮斯汀HCL)和抗利尿劑(如，速尿)。這些治療不總是有效而且復(fù)發(fā)率仍很高。鼻息肉現(xiàn)行的治療是利用皮質(zhì)類固醇來減輕疾病癥狀，但對疾病病理學(xué)基礎(chǔ)沒有作用。此外，疾病復(fù)發(fā)和類固醇治療的抗藥性已經(jīng)在鼻息肉病人中觀察到。移植排斥移植排斥是宿主免疫系統(tǒng)將移植組織識別為異物的復(fù)雜過程。以形態(tài)學(xué)和基本機(jī)制為基礎(chǔ)，排斥反應(yīng)分成三種類型超急性、急性和慢性。冒著感染的危險，用免疫抑制治療消除或控制了早期(急性)排斥，慢性排斥已經(jīng)成為移植機(jī)能障礙和最終失敗的不斷增加的重要原因。目前，慢性血管排斥是接受心臟移植者第一年內(nèi)死亡或移植失敗的首要原因。簡要講，本發(fā)明提供治療或預(yù)防炎癥性疾病的方法，包括向炎癥部位釋放抗-微管物質(zhì)。這些物質(zhì)代表性例子包括taxanes(如，紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、促微管積聚蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起的細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)制成更進(jìn)一步地包括聚合物的制劑?？芍委煹难装Y性疾病的代表性例子包括多發(fā)性硬化、牛皮癬、關(guān)節(jié)炎、狹窄、移植排斥、手術(shù)粘連、炎癥性腸道疾病和炎癥性肺部疾病。本發(fā)明的一些實施例中，抗-微管物質(zhì)可與其它化合物或組合物一起被制成如，乳液、軟膏、霜、洗液、凝膠、噴霧劑等。一些實施例中，化合物或組合物起載體功能，所述載體是聚合物或是非-聚合物。聚合物載體代表性例子包括聚(乙烯醋酸-乙烯酯)、乳酸和羥基乙酸的共聚物、聚己內(nèi)酯、聚(乳酸)、聚(乳酸)和聚(己內(nèi)酯)共聚物、明膠、透明質(zhì)酸、膠原基質(zhì)和白蛋白。其它適宜載體的代表性例子包括，但不限于乙醇；乙醇和乙二醇類(例如，乙二醇或丙二醇)的混合物；乙醇和肉豆蔻酸異丙酯混合物或乙醇、肉豆蔻酸異丙基酯及水的混合物(例如55∶5∶40)。乙醇和eineol或D-檸檬烯(含或不含水)的混合物；乙二醇類(例如，乙二醇或丙二醇)和乙二醇類混合物如丙二醇和水、磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、Transcutol或萜品油烯；肉豆蔻酸異丙基酯和1-己基-2-吡咯烷酮、N-十二烷基-2-二乙哌啶酮(piperidione)或1-己基-2-吡咯烷酮的混合物。本發(fā)明還有一方面，抗-微管物質(zhì)可制成包含在手術(shù)或醫(yī)療裝置或植入體之內(nèi)，或制成適于通過手術(shù)或醫(yī)療裝置或植入體釋放的制劑，例如，斯藤特氏印模、縫線、留置導(dǎo)管、假體，等等。參考下面詳細(xì)描述和附圖，本發(fā)明的這些和其它方面將被證實。此外，更為詳細(xì)地描述一定過程、裝置或組合物的各種參考在下面陳述，并由此將之全文引入?yún)⒄?。附圖簡述圖1A是顯示中性粒細(xì)胞(5×106細(xì)胞/ml)對血漿調(diào)理的CPPD結(jié)晶(50mg/ml)的化學(xué)熒光反應(yīng)曲線。紫杉醇(也認(rèn)為是“紫杉酚”)的作用(o)代表無紫杉醇，(·)4.5μM，(Δ)14μM，(▲)28μM，(□)46μM；n＝3。圖1B是顯示紫杉醇抑制血漿調(diào)理CPPD結(jié)晶誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光的濃度依賴性對時間曲線。圖1C是顯示由化學(xué)熒光測試的氟化鋁對調(diào)理的酵母多糖-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞活化作用影響的曲線圖。圖1D顯示由化學(xué)熒光測試的甘氨酸乙酯對調(diào)理酵母多糖-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞活化作用曲線圖。圖1E顯示LY290181對調(diào)理酵母多糖-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光作用曲線圖。圖2是顯示溶菌酶從對血漿調(diào)理DPPD結(jié)晶(50mg/ml)反應(yīng)的中性粒細(xì)胞(5×106細(xì)胞/ml)中釋放的曲線圖。紫杉醇的作用(o)代表無紫杉醇，(·)28μM，(Δ)對照(僅有細(xì)胞)，(▲)對照(細(xì)胞和28μM紫杉醇)；n＝3。圖3A是顯示對血漿調(diào)理DPPD結(jié)晶(50mg/ml)反應(yīng)的中性粒細(xì)胞(5×106細(xì)胞/ml)產(chǎn)生超氧陰離子曲線圖。紫杉醇的作用(o)代表無紫杉醇，(·)28μM，(Δ)對照(僅有細(xì)胞)；n＝3。圖3B是表示紫杉醇抑制血漿調(diào)理CPPD結(jié)晶誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞生成超氧陰離子的濃度依賴性對時間曲線。圖3C是顯示LY290181對CPPD結(jié)晶誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞超氧陰離子生成作用直方圖。圖4A是中性粒細(xì)胞(5×106細(xì)胞/ml)對血漿調(diào)理的酵母多糖(1mg/ml)反應(yīng)的的化學(xué)熒光反應(yīng)曲線。紫杉醇的作用(o)無紫杉醇，(·)28μM；n＝3。圖4B是顯示血漿調(diào)理的酵母多糖-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞超氧陰離子生成曲線圖。圖5A是顯示髓過氧化物酶從對血漿調(diào)理CPPD結(jié)晶(50mg/ml)反應(yīng)的中性粒細(xì)胞(5×106細(xì)胞/ml)中釋放的曲線圖。紫杉醇的作用(o)無紫杉醇，(·)28μM；(Δ)對照(僅有細(xì)胞)；(▲)對照(細(xì)胞和28μM紫杉醇)；n＝3。圖5B顯示紫杉醇抑制髓過氧化物酶從對血漿調(diào)理CPPD結(jié)晶(50mg/ml)反應(yīng)的中性粒細(xì)胞中釋放的濃度依賴性曲線圖；n＝3。圖5C和5D是顯示LY290181溶菌酶和髓過氧化物酶自CPPD結(jié)晶-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞釋放圖。圖6是描述不同濃度紫杉醇時滑膜細(xì)胞增生曲線圖。圖7描述體外實驗時紫杉醇對角質(zhì)細(xì)胞作用的曲線圖。圖8A和8B表示紫杉醇對星狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)作用。電子顯微鏡圖像揭示轉(zhuǎn)基因?qū)φ談游镄切图?xì)胞厚的、排列整齊的細(xì)絲狀突起，而紫杉醇治療的轉(zhuǎn)基因動物星型細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生改變。相對于未治療動物，紫杉醇誘導(dǎo)星型細(xì)胞變圓，窄化細(xì)胞加工和降低細(xì)胞漿細(xì)絲。圖9是描述用大于10-8M濃度紫杉醇處理的EOMA細(xì)胞活性曲線圖。圖10是描述用濃度不斷增高的紫杉醇處理的培養(yǎng)基中EOMA細(xì)胞程序性死亡百分比的直方圖。圖11A-11F是描述各種抗-微管物質(zhì)24小時后對滑膜細(xì)胞作用曲線圖。圖12A-12H是顯示各種抗-微管物質(zhì)抑制膠原酶表達(dá)作用的印跡。圖13A-13H是顯示各種抗-微管物質(zhì)對蛋白聚糖表達(dá)作用的印跡。圖14A和14B是用對照(未負(fù)載)熱糊劑處理的患腫瘤CAM的兩幅照片。簡要地，圖14A中央白色物質(zhì)是腫瘤組織。注意豐富的血管從CAM各個方向進(jìn)入腫瘤。腫瘤誘導(dǎo)宿主脈管系統(tǒng)通過“血管形成因子”的產(chǎn)生而向腫瘤內(nèi)生長。腫瘤組織沿著供應(yīng)它的血管向遠(yuǎn)側(cè)膨脹。圖14B是15A所示CAM的底面視圖。簡要講，該視圖描述進(jìn)入腫瘤的血管基本表現(xiàn)象車輪的輪輻。注意腫瘤附近血管密度大于正常CAM組織周圍的密度。圖14C和14D是用負(fù)載20％紫杉醇熱糊劑處理的患腫瘤CAM的兩幅照片。簡要地，圖14C中央白色物質(zhì)是腫瘤組織。注意腫瘤組織附近少量血管?？?微管物質(zhì)持續(xù)釋放能夠克服由腫瘤產(chǎn)生的血管形成刺激物。腫瘤本身缺乏血管形成和進(jìn)行性尺寸減小。圖14D是14C所示CAM底部的圖片，描述與對照腫瘤組織相比進(jìn)入腫瘤的血流中斷。注意腫瘤附近的血管密度下降和較CAM正常周圍組織的密度稀疏。圖15A是顯示無-殼蛋培養(yǎng)第6天的圖片。圖15B是數(shù)字化計算機(jī)-顯示的用立體顯微鏡拍攝的活的、未染色的毛細(xì)血管圖像(1040×)。圖15C顯示由大的、基層血管(箭頭；1300×)流入的絨毛膜尿囊膜(CAM)微脈管系統(tǒng)侵蝕鑄塑圖片。圖15D是描述橫斷CAM切下的0.5mm厚塑料切片的圖片，并在光學(xué)顯微鏡水平記錄。該圖片顯示CAM組成，包括外面的雙-層外胚層(Ec)、含毛細(xì)血管(箭頭)和散在外膜細(xì)胞的中胚層(M)，和單層內(nèi)胚層(En)(400×)。圖15E是電子顯微鏡水平(3500×)的圖片，其中顯示典型的毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)存在薄-壁內(nèi)皮細(xì)胞(箭頭)和結(jié)合的的周皮細(xì)胞。圖16A、16B、16C和16D是與每10ml甲基纖維素10μg紫杉醇反應(yīng)48小時拍攝的4種不同的、未染色CAMs系列數(shù)字化圖像。含紫杉醇透明甲基纖維素盤(*)存在于每一個CAM且位于單一無血管區(qū)(A)與周圍血島(Is)上。這些無血管區(qū)伸出盤外且典型地具有大約6mm直徑。圖16D描述無論小的還是大的血管由無血管區(qū)周邊改變方向的典型“肘”效應(yīng)(箭頭)。圖17A是顯示直接外緣到無血管區(qū)的毛細(xì)血管(箭頭)展現(xiàn)無數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞停滯于有絲分裂的圖片(＝400×)。外胚(Ec)；中胚(M)；外胚(En)。圖17B(＝400×)顯示無血管區(qū)內(nèi)固有的典型毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)已經(jīng)消除和有無數(shù)外滲血細(xì)胞(箭頭)。圖17C(＝400×)顯示在無血管區(qū)中央?yún)^(qū)域，紅細(xì)胞分散于整個中胚層。圖18A(＝2,200×)顯示位于下鄰?fù)馀邔?Ec)的小毛細(xì)血管有3個內(nèi)皮細(xì)胞停滯于有絲分裂(*)。幾個在外胚層或中胚層的其它類型細(xì)胞也停滯于有絲分裂。圖18B(＝2,800×)顯示早期無血管區(qū)包含下鄰?fù)馀邔拥耐鉂B血細(xì)胞；這些血細(xì)胞與預(yù)期的內(nèi)皮細(xì)胞(*)和它們的混雜過程。降解性細(xì)胞空泡(箭頭)。圖18C(＝2,800×)顯示對紫杉醇反應(yīng)，外胚-中胚界面已變?yōu)榫劬又芗张莺皖w粒(箭頭)的各個降解階段細(xì)胞。圖19A按照圖式描述基質(zhì)金屬蛋白酶轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)調(diào)節(jié)。圖19B是描述IL-1刺激AP-1轉(zhuǎn)錄活性的印跡。圖19C是顯示從紫杉醇預(yù)處理的軟骨細(xì)胞釋出的溶解產(chǎn)物IL-1誘導(dǎo)的結(jié)合活性降低曲線圖。圖20是顯示IL-1誘導(dǎo)膠原酶和溶基質(zhì)素在軟骨細(xì)胞RNA水平的增加，和此誘導(dǎo)可被紫杉醇預(yù)處理抑制的印跡。圖21是描述體外實驗紫杉醇對正常軟骨細(xì)胞活性作用曲線圖。圖22是繪制觀測到的紫杉醇(20μgml-1在37℃pH分別為3.7和4.9的10％HPβCD和10％HPγCD溶液)準(zhǔn)一級動力學(xué)降解曲線圖。圖23是顯示環(huán)糊精和紫杉醇在37℃水中溶解相曲線圖。圖24是顯示37℃紫杉醇與γCD、HPβCD或HPγCD二級絡(luò)合曲線圖。圖25是顯示PDLLA-PEG-PDLLA組合物的熔化溫度、焓、分子量、多分散性和特性粘度的表。圖26是描述PDLLA-PEG-PDLLA和PEG的DSC熱分析圖。加熱速率10℃/分。熔化溫度和焓見圖30。圖27是描述紫杉醇在37℃從負(fù)載20％紫杉醇PDLLA-PEG-PDLLA柱狀體向PBS白蛋白緩沖液累積釋放曲線圖。誤差棒代表4個樣本標(biāo)準(zhǔn)差。由于降解40％PEG柱狀體于第4天中斷。圖28A、28B和28C是描述負(fù)載20％紫杉醇的PDLLA-PEG-PDLLA柱狀體在體外實驗時37℃釋放紫杉醇過程中維度、長度(A)、直徑(B)和濕重(C)變化曲線圖。圖29是顯示PDDLA-PEG-PDLLA柱狀體(負(fù)載20％紫杉醇)在37℃向PBS白蛋白緩沖液釋放過程中團(tuán)塊消減和聚合物成分變化表。圖30是表示負(fù)載20％紫杉醇PDDLA-PEG-PDLLA柱狀體(20％PEG，1mm直徑)向37℃PBS白蛋白緩沖液釋放過程中凝膠滲透色譜圖。圖31A、31B、31C和31D是紫杉醇釋放前和釋放期間干燥的PDDA-PEG-PDLLA柱狀體(負(fù)載20％紫杉醇，1mm直徑)的SEMs。A20％PEG，0天；B30％PEG，0天；C20％PEG，69天；D30％PEG，69天。圖32是描述紫杉醇在37℃從負(fù)載20％紫杉醇PDDA∶PCL混合物和PCL向PBS白蛋白緩沖液累積釋放曲線圖。誤差棒代表4個樣本的標(biāo)準(zhǔn)差。圖33是描述，在一定時間過程，紫杉醇在37℃從PCL糊劑向PBS緩沖液釋放曲線圖。該P(yáng)CL糊劑含紫杉醇微粒和#140篩制備的各種添加劑。誤差棒代表3個樣本的標(biāo)準(zhǔn)差。圖34是描述紫杉醇在37℃從紫杉醇-明膠-PCL糊劑向PBS緩沖液釋放時程曲線圖。該圖顯示明膠濃度(#140篩)和使用#140或#60篩制備的紫杉醇-明膠(1∶1)微粒的大小的作用。誤差棒代表3個樣本的標(biāo)準(zhǔn)差。圖35A和35B是描述添加劑(17A；#140篩)和微粒大小(17B；#140或#60篩)及添加劑比例(#140篩)對含20％紫杉醇PCL糊劑懸浮于37℃蒸餾水后腫脹行為影響的曲線圖。由于基質(zhì)的崩解，對紫杉醇-明膠中用270μm微粒制備的糊劑和含30％明膠糊劑的測定4小時后中斷。誤差棒代表3個樣本的標(biāo)準(zhǔn)差。圖36A、36B、36C和36D代表20％紫杉醇-明膠-PCL(20∶20∶60)糊劑在懸浮于37℃蒸餾水前(36A)和懸浮后6小時(36B)的掃描電子顯微圖。顯微圖36C和36D是36B的高倍放大，顯示紫杉醇(桿狀)和明膠基質(zhì)的密切聯(lián)系。圖37A和37B代表用明膠-PCL(37A)和紫杉醇-明膠-PCL(20∶20∶60；37B)糊劑處理的CAMs顯微圖片，顯示紫杉醇處理的CAM中的無血管區(qū)。圖38是顯示環(huán)糊精和紫杉醇糊劑在37℃水中溶解相曲線圖。圖39是顯示紫杉醇在37℃與γCD、HPβCD或HPγCD二級絡(luò)合曲線圖。圖40是顯示在37℃紫杉醇和羥丙基-β-環(huán)糊精在50∶50水∶乙醇溶液中相溶解度曲線圖。圖41是顯示紫杉醇在37℃0、5、10或20％HPγCD溶液中溶解速率概況曲線圖。圖42是顯示繪制觀測到的紫杉醇在37℃pH分別為3.7和4.9的10％HPβCD和10％HPγCD溶液中準(zhǔn)一級動力學(xué)降解曲線圖。圖43A和43B是分別表示一定時間紫杉醇從EVA膜釋放，和紫杉醇在同一膜中殘留比例的兩幅圖。圖43C是顯示不含紫杉醇EVA/F127膜隨時間膨脹的曲線圖。圖43D是表示不合紫杉醇EVA/Span80膜隨時間膨脹的曲線圖。圖43E是描述各種EVA/F127混合物的應(yīng)力對應(yīng)變曲線圖。圖44是顯示血漿調(diào)理的聚合物微球?qū)χ行粤＜?xì)胞對PCL微球(20mg/ml微球在0.5ml細(xì)胞(濃度為5×10-6細(xì)胞/ml)中)化學(xué)熒光效應(yīng)影響曲線圖。圖45是顯示血漿預(yù)包覆+/-2％消泡F127對中性粒細(xì)胞(5×10-6細(xì)胞/ml)對PCL微球化學(xué)熒光效應(yīng)影響曲線圖。圖46是顯示血漿預(yù)包覆+/-2％消泡F127對中性粒細(xì)胞(5×10-6細(xì)胞/ml)對PMMA微球化學(xué)熒光效應(yīng)影響曲線圖。圖47是顯示血漿預(yù)包覆+/-2％消泡F127對中性粒細(xì)胞(5×10-6細(xì)胞/ml)對PLA微球化學(xué)熒光效應(yīng)影響曲線圖。圖48是顯示血漿預(yù)包覆+/-2％消泡F127對中性粒細(xì)胞(5×10-6細(xì)胞/ml)對EVA:PLA微球化學(xué)熒光效應(yīng)影響曲線圖。圖49是顯示用IgG(2mg/ml)預(yù)包覆或先用2％消泡F127然后用IgG(2mg/ml)預(yù)包覆對中性粒細(xì)胞對PCL微球化學(xué)熒光效應(yīng)影響曲線圖。圖50是顯示用IgG(2mg/ml預(yù)包覆)或先用2％消泡F127然后用IgG(2mg/ml)預(yù)包覆對中性粒細(xì)胞對PMMAL微球化學(xué)熒光效應(yīng)影響曲線圖。圖51是顯示用IgG(2mg/ml)預(yù)包覆或先用2％消泡F127然后用IgG(2mg/ml)預(yù)包覆對中性粒細(xì)胞對PVA微球化學(xué)熒光效應(yīng)影響曲線圖。圖52是顯示用IgG(2mg/ml)預(yù)包覆或先用2％消泡F127然后用IgG(2mg/ml)預(yù)包覆對中性粒細(xì)胞對EVA∶PCL微球化學(xué)熒光效應(yīng)影響曲線圖。圖53A是顯示37℃從含1％、2％、5％、或10％紫杉醇聚己內(nèi)酯微球向磷酸緩沖鹽水釋放速率概貌曲線圖。圖53B是顯示用對照微球處理的CAM圖片。圖53C是顯示用負(fù)載5％紫杉醇微球處理的CAM圖片。圖54是描述對照微球(PLLA∶GA-85∶15)顆粒大小范圍的曲線圖。圖55是描述負(fù)載20％紫杉醇微球(PLLA∶GA-85∶15)顆粒大小范圍的曲線圖。圖56是描述對照微球(PLLA∶GA-85∶15)顆粒大小范圍的圖。圖57是描述負(fù)載20％紫杉醇微球(PLLA∶GA-85∶15)顆粒大小范圍的圖。圖58A、58B和58C是描述紫杉醇從不同大小范圍微球和PLLA與GA不同比值中釋放速率概況曲線圖。圖59A和59B是顯示紫杉醇從具有PLLA與GA不同比值的微球中釋放速率概況曲線圖。圖60A和60B是顯示紫杉醇從具有PLLA與GA不同比值的微球中釋放速率概況曲線圖。圖61A、61B和61C是描述紫杉醇從不同大小和PLLA與GA不同比值微球中釋放速率概況曲線圖。圖62是描述紫杉醇從紫杉醇-尼龍微膠囊中釋放速率概況曲線圖。圖63A和63B是粘連蛋白包覆的PLLA微球在膀胱組織(63A)，和聚(L-賴氨酸)微球在膀胱組織的照片。圖64顯示在膠原-誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠模型紫杉醇微膠粒改善每日平均關(guān)節(jié)炎評分的曲線圖。圖65A-65D顯示在膠原-誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠模型膠束紫杉醇作用的系列x-線。圖66A-66C是大鼠踝關(guān)節(jié)掃描電子顯微圖。圖67是顯示膠原-誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠模型的組織學(xué)放大視圖。圖68A和68B是顯示膠原-誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠模型滑膜血管組織病理學(xué)放大視圖。圖69是描述唑酮誘導(dǎo)小鼠耳接觸性過敏反應(yīng)的圖。在抗原攻擊同時和此后每日一次用1％紫杉醇凝膠或載體治療。通過與攻擊前耳厚度比較測量耳腫脹從而定量皮膚炎癥。數(shù)據(jù)代表均值+/-SD(n＝5)。**p＜0.01；***p＜0.001。圖70是描述唑酮誘導(dǎo)小鼠耳接觸性過敏反應(yīng)的圖。在抗原攻擊后24小時即開始和此后每日一次用1％紫杉醇凝膠或載體治療。通過與攻擊前耳厚度比較測量耳腫脹從而定量皮膚炎癥。數(shù)據(jù)代表均值+/-SD(n＝5)。*p＜0.05；**p＜0.01。圖71是描述局部應(yīng)用PMA誘導(dǎo)小鼠耳炎癥的圖。在用PMA后1小時即開始和此后每日一次用1％紫杉醇凝膠或載體治療。通過與攻擊前耳厚度比較測量耳腫脹從而定量皮膚炎癥。數(shù)據(jù)代表均值+/-SD(n＝5)。*p＜0.05；***p＜0.001。圖72是描述局部應(yīng)用PMA誘導(dǎo)小鼠耳炎癥的圖。在用PMA后24小時即開始和此后每日一次用1％紫杉醇凝膠或載體治療。通過與攻擊前耳厚度比較測量耳腫脹從而定量皮膚炎癥。數(shù)據(jù)代表均值+/-SD(n＝5)。*p＜0.05；***p＜0.001。圖73描述局部應(yīng)用PMA誘導(dǎo)小鼠耳炎癥的圖。用1％紫杉醇凝膠(右耳)或載體(左耳)預(yù)處理。用PMA后48小時攝取圖像。注意與紫杉醇-處理的右耳相比，載體-處理的左耳紅和血管充血。共5只小鼠觀察到同樣的結(jié)果。圖74是描述紫杉醇對DM20轉(zhuǎn)基因小鼠體重的影響。轉(zhuǎn)基因小鼠用載體或紫杉醇(2.0mg/kg)每周治療3次共24天然后在第27天殺死。結(jié)果是2只紫杉醇治療的動物和1只未治療動物的結(jié)果。紫杉醇治療的動物表現(xiàn)出很小體重下降，而對照動物體重下降30％，從29g到22g。圖75是描述紫杉醇高劑量間歇療法對轉(zhuǎn)基因小鼠臨床癥狀進(jìn)展的作用。轉(zhuǎn)基因小鼠用20mg/kg每周一次共4周治療(0、1、2和3)并觀察10周，每2天對每項癥狀測定評分。數(shù)據(jù)代表紫杉醇治療轉(zhuǎn)基因小鼠(n＝5)和對照小鼠(n＝3)的平均分(所有癥狀累積分)。紫杉醇減輕DM20在轉(zhuǎn)基因小鼠過度表達(dá)引起的衰退，而對照小鼠衰退極為迅速3只動物中有2只未能生存到試驗方案(如指示)的最后。圖76A和76B顯示在大鼠頸動脈模型血管周應(yīng)用(用于血管外膜)紫杉醇糊劑。用2.5mg或者對照糊劑(76A)或者負(fù)載20％紫杉醇糊劑(76B)處理左總頸動脈外膜表面。由于平滑肌細(xì)胞過度增生對照動脈表現(xiàn)出動脈壁厚度增加，而負(fù)載紫杉醇糊劑治療動脈未顯示出內(nèi)膜增厚跡象。圖77A和77B描述在大鼠頸動脈模型血管周應(yīng)用紫杉醇糊劑的近接效應(yīng)。紫杉醇-負(fù)載糊劑直接用到鄰接避免再狹窄血管的血管周區(qū)域；然而，當(dāng)糊劑不直接鄰接血管壁時則新內(nèi)膜明顯充血。圖78A、78B和78C顯示紫杉醇對星型細(xì)胞GFAP染色的作用。取自正常動物和載體或紫杉醇治療的轉(zhuǎn)基因動物(發(fā)展為一種類似多發(fā)性硬化的神經(jīng)疾病)的大腦切片用GFAP(有活力星型細(xì)胞的標(biāo)識物染色)并進(jìn)行組織學(xué)檢測。與正常大腦切片相比，對照轉(zhuǎn)基因小鼠星型細(xì)胞數(shù)量和總GFAP水平增加。然而，細(xì)胞組織學(xué)相似。與未治療轉(zhuǎn)基因動物相比，紫杉醇治療轉(zhuǎn)基因動物的大腦切片顯示星型細(xì)胞數(shù)量和總GFAP水平下降。組織學(xué)上，細(xì)胞變圓和星型細(xì)胞的星狀突起變細(xì)。圖79A和79B是顯示paclitaxe抑制T-細(xì)胞對髓磷脂堿性蛋白多肽(GP68-88)和伴刀豆球蛋白反應(yīng)刺激曲線圖。GP68-88(A)或伴刀豆球蛋白(B)作為刺激物RT-1的T-細(xì)胞增生培養(yǎng)48-小時。在抗原刺激開始或24小時后以梯度濃度加入紫杉醇和其載體(微膠粒)。無論任何刺激物，紫杉醇在0.02μM這樣低的濃度抑制T-細(xì)胞增生。圖80A、80B、80C和80D，是顯示塊菌素和紫杉醇抑制無論IL-1還是TNF-誘導(dǎo)的NF-KB活性的直方圖。圖81A和81B是表示濃度不斷增加的紫杉醇或喜樹堿濃度對人前列腺癌細(xì)胞(LNCaP)(2×103/孔)生長作用直方圖，用龍膽紫染色，測定492nm吸收度。用％表示相對于對照組的增長百分比，給出的是8個結(jié)果的平均值。闡述發(fā)明前，對將要使用的一些術(shù)語的限定進(jìn)行陳述有助于理解發(fā)明。這里使用的“炎癥性疼病”指以血管變化水腫和中性粒細(xì)胞浸潤(如，急性炎癥反應(yīng))；單核細(xì)胞組織浸潤；炎癥細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞和它們的細(xì)胞產(chǎn)物的組織破壞；結(jié)締組織代替的試圖修復(fù)(如，慢性炎癥反應(yīng))為特征的任何數(shù)量的疾病。這類疾病代表性的實例包括許多常見醫(yī)學(xué)情況如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣硬化、牛皮癬、感染性腸道疾病、多發(fā)性硬化、手術(shù)粘連、再狹窄、結(jié)核、移植排斥和慢性炎癥性呼吸系統(tǒng)疾病(如，哮喘、肺炎、慢性阻塞性肺部疾患、鼻息肉和肺纖維化)?！翱刮⒐芩帯崩斫鉃榘ㄓ绊懳⒐芄δ艿娜魏蔚鞍踪|(zhì)、多肽、化學(xué)品或其它分子，例如，通過預(yù)防或穩(wěn)定集聚反應(yīng)。各種方法可用于測定特定化合物的抗微管活性，包括例如，由Smith等(CancerLett79(2)213-219，1994)和Mooberry等(CancerLett96(2)261-266，1995)描述的測定方法。正如上面提到的，本發(fā)明提供治療或預(yù)防炎癥性疾病的方法，包括向炎癥部位釋放抗微管物質(zhì)的步驟。簡言之，各種藥物可釋到炎癥部位(或潛在的炎癥部位)，無論有或沒有載體(如，聚合物或軟膏)，以治療或預(yù)防炎癥性疾病。這樣的藥物代表性的實例包括taxanes[如紫杉醇(將在下面詳細(xì)討論)和docetaxel][Schiff等，Nature277665-667，1979；Long和Fairchild，CancerResearch544355-4361，1994；Ringel和Horwitz，J.Natl.CancerInst.83(4)288-291，1991；Pazdur等，CancerTreat.Rev.19(4)351-385，1993]，喜樹堿(campothecin)、elentherobin(如美國專利5,473,057)、sarcodictyins(包括sarcodictyinA)、epothilonesA和B(Bollag等，CancerResearch552325-2333，1995)、discodermolide(ter和Haar等，Biochemistry35243-250，1996)、氧化氘(D2O)(James和Lefebvre，Genetics130(2)305-314，1992；Sollott等，J.Clin.Invest.951869-1876，1995)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)(Oka等，CellStruct.Funct，16(2)125-134，1991)、塊菌素(7-deazaadenosine)(Mooberry等，CancerLett.96(2)261-266，1995)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)(Panda等，J.Biol.Chem.272(12)7681-7687，1997)；Wood等，Mol.Pharmacol.52(3)437-444，1997)、氟化鋁(Song等，J.Cell.Sci.Suppl.14147-150，1991)、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)(succinimidylsuccinate)(Caplow和Shanks，J.Biol.Chem.265(15)8935-8941，1990)、甘氨酸乙酯(Mejillano等，Biochemistry31(13)3478-3483，1992)、單克隆抗特異反應(yīng)抗體(Leu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91(22)10690-10694，1994)、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)(Hwang等，Biochem.Biophys.Res.Commun.208(3)1174-1180，1995)、低滲狀態(tài)(190mosmol/L)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)(Haussinger等，Biochem.Cell.Biol.72(1-2)12-19，1994)引起的細(xì)胞水腫，結(jié)合動力蛋白(Ohba等，Biochem.Biophys.Acta.1158(3)323-332，1993)、赤霉素(Mita和Shibaoka，Protoplasma119(1/2)100-109，1984)、XCH01(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))(Yonetani等，Mol.Biol.Cell7(suppl)211A，1996)、溶血磷脂酸(Cook等，Mol.Biol.Cell6(suppl)260A，1995)、鋰離子(Bhattacharyya和Wolff，Biochem.Biophys.Res.Commun.73(2)383-390，1976)、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)(Akashi等，Planta182(3)；363-369，1990)、甘油緩沖液(Schilstra等，Biochem.J.277(PT.3)839-847，1991；Farrell和Keates，Biochem.Cell.Biol.68(11)1256-1261，1990；Lopez等，J.Cell.Biochem.43(3)281-291，1990)、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液(Brown等，J.CellSci.104(Pt.2)339-352，1993；Safiejko-Mroczka和Bell，J.Histochem.Cytochem.44(6)641-656，1996)、微管聯(lián)系蛋白(例如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)(Burgess等，CellMoil.Cytoskeleton20(4)；289-300，1991；Saoudi等，J.Cell.Sci.108(Pt.1)357-367，1995；Bulinski和Bossler，J.cell.Sci.107(Pt.10)2839-2849，1994；Ookata等，J.CellBiol.128(5)849-862，1995；Boyne等，J.Conp.Neurol.358(2)279-293，1995；Ferreira和Caceres，J.Neurosci.11(2)392-400，1991；Thurston等，Chromosoma105(1)20-30，1996；Wang等，BrainRes.Mol.BrainRes.38(2)200-208，1996；Moore和Cyr，Mol.Biol.Cell7(suppl)221-A，1996；Masson和Kreis，J.CellBiol.123(2)，357-371，1993)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)(Saoudi等，J.Cell.Sci.108(Pt.1)；357-367，1995；Simerly等，J.CellBiol.111(4)1492-1504，1990)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP髓蓋)(Dye等，CellMotil.Cytoskeleton21(3)171-186，1992；Azhar和Murphy，CellMotil.Bytoskeleton15(3)159-161，1990；Walker等，J.CellBiol.114(1)73-81，1991；Drechsel和Kirschner，Curr.Biol.4(12)1053-1061，1994)、穩(wěn)定的小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)(Prrollet等，Biochim.Biophys.Acta1160(1)113-119，1992；Pirollet等，Biochemistry31(37)8849-8855，1991；Bosc等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93(5)2125-2130，1996；Mrgolis等，EMBOJ.9(12)4095-4102，1990)和來自有絲分裂的張力(Nicklas和Ward，J.CellBiol.126(5)1241-1253，1994)，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。這些化合物可以通過解聚微管(例如，秋水仙鹼和長春花鹼)，或者通過穩(wěn)定微管結(jié)構(gòu)(例如，紫杉醇)起作用。本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，治療物質(zhì)是紫杉醇，該化合物通過與微管蛋白結(jié)合形成異常的有絲分裂紡錘休而分列微管結(jié)構(gòu)。簡要地，紫杉醇是從紫杉屬brevifolia(太平洋yew)和TaxomycesAndreanae和太平洋yew內(nèi)生植物真菌(Stierle等，Science60214-216，1993)的果實和干樹皮中提取的高度衍生的雙萜類(Wani等，J.Am.Chem.Soc.932325，1971)。“紫杉醇”(應(yīng)當(dāng)理解為包括前藥(produrg)、類似物和衍生物如，TAXOL、TAXOTERE、Docetaxel、紫杉醇的10-去乙酰類似物和紫杉醇的3’N-去苯乙?；?3’N-叔丁氧基羰基類似物)可按照本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)很方便地制備(參見例如，Schiff等，Nature277665-667，1979；Long和Fairchild，CancerResarch544355-4361，1994；Ringel和Horwitz，J.Natl.CancerInst.83(4)288-291，1991；Pazdur等，CancerTreat.Rev.19(4)351-386，1993；WO94/07882；WO94/07881；WO94/07880；WO94/07876；WO93/23555；WO93/10076；WO94/00156；WO93/24476；EP590267；WO94/20089；U.S.專利5,294,637；5,283,253；5,279,949；5,274,137；5,202,448；5,200,534；5,229,529；5,254,580；5,412,092；5,395,850；5,380,751；5,350,866；4,857,653；5,272,171；5,411,984；5,248,796；5,422,364；5,300,638；5,294,637；5,362,831；5,440,056；4,814,470；5,278,324；5,352,805；5,248,796；5,411,984；5,059,699；4,942,184；TetrahedronLetters35(52)9709-9712，1994；J.Med.Chem.354230-4237，1992；J.Med.Chem.34992-998，1991；J.NaturalProd.57(10)1404-1410，1994；J.NaturalProd.57(11)1580-1583，1994；J.Am.Chem.Soc.1106558-6560，1988)，或由各種商品獲得，包括例如，SigmaChemical公司，St.Louis，Missouri(T7402-來自紫杉屬brevifolia)。紫杉醇衍生物或類似物的代表性例子包括7-脫氧-docetaxol、7，8-環(huán)丙烷taxane、7，8-cyclopropataxanes、N-取代的2-氮雜環(huán)丁烷酮、6，7-環(huán)氧紫杉醇s、6，7-修飾的紫杉醇、10-去乙酸基紫杉酚、10-去乙酰紫杉酚(來自10-去乙酰漿果赤霉素III)、紫杉酚的膦酸和碳酸衍生物、紫杉酚2’，7-二(1，2-苯二羧酸鈉，10-去乙酰氧-11，12-二氫紫杉酚-10，12(18)-二烯烴衍生物，10-去乙酰氧基紫杉酚、protaxol(2’-和/或7-O-酯衍生物)，2’-和/或-7-O-碳酸衍生物)、紫杉酚側(cè)鏈的不對稱合成、氟紫杉酚、9-去氧紫杉烷、(13-乙?；?去氧漿果赤霉素_III，9-脫氧紫杉醇，7-去氧-9-脫氧紫杉醇，10-去乙酸-7-脫氧-9-脫氧紫杉醇，含氫或乙?；土u基和叔丁氧基羰基胺衍生物、硫酸2’-丙烯?；仙挤雍土蛩?’-O-?；嶙仙挤友苌?、琥珀酰紫杉酚、2’-γ-氨基丁酰紫杉酚甲酸鹽、2’-乙酰紫杉酚、7-乙酰紫杉酚、7-甘氨酸氨基甲酸紫杉酚、2’-羥-PEG(5000)氨基甲酸紫杉酚、2’-苯甲?；?’，7-二苯甲?；仙挤友苌铮渌八?2’-乙酰紫杉酚；2’，7-二乙酰紫杉酚；2’琥珀酰紫杉酚；2’-(β-丙氨酰-紫杉酚)；2’γ-氨基丁酰紫杉酚甲酸鹽；2’琥珀酰紫杉酚的乙二醇衍生物；2’-戊酰紫杉酚；2’-(N，N-二甲基甘氨?；?紫杉酚；2’-(2-(N，N-二甲氨基)丙酰)紫杉酚；2’鄰羧基苯甲?；仙挤?；紫杉酚的2’脂肪族羧基衍生物；前藥{2’-(N，N-二乙氨基丙酰基)紫杉酚、2’-(N，N-二甲基甘氨?；?紫杉酚、7(N，N-二甲基甘氨酰基)紫杉酚、2’，7-二-(N，N-二甲基甘氨酰基)紫杉酚、7(N，N-二乙氨基丙?；?紫杉酚、2’7-二-(N，N-二甲基甘氨酰基)紫杉酚、2’-(L-甘氨?；?紫杉酚、7’-(L-甘氨酰)紫杉酚、2’，7-二-(L-甘氨酰)紫杉酚、2’-(L-丙氨酰)紫杉酚、7-(L-丙氨酰)紫杉酚、2’，7-二-(L-丙氨酰)紫杉酚、2’-(L-亮氨酰)紫杉酚、7-(L-亮氨酰紫杉酚、2’，7-二-(L-亮氨酰)紫杉酚、2’-(L-異亮氨酰紫杉酚、7-(L-異亮氨酰紫杉酚、2’，7-二-(L-異亮氨酰)紫杉酚、2’-(L-纈氨酰紫杉酚、7-(L-纈氨酰紫杉酚、2’，7-二-(L-纈氨酰紫杉酚、2’-(L-苯丙氨酰紫杉酚、7-(L-苯丙氨酰)紫杉酚、2’，7-二-(L-苯丙氨酰)紫杉酚、2’-(L-脯氨酰)紫杉酚、7-(L-脯氨酰)紫杉酚、2’，7-二-(L-脯氨酰)紫杉酚、2’-(L-賴氨酰)紫杉酚、7-(L-賴氨酰)紫杉酚、2’，7-二-(L-賴氨酰)紫杉酚、2’-(L-谷氨酰)紫杉酚、7-(L-谷氨酰)紫杉酚、2’，7-二-(L-谷氨酰)紫杉酚、2’-(L-胍基戊氨酰)紫杉酚、7-(L-胍基戊氨酰)紫杉酚、2’，7-二-(L-胍基戊氨酰)紫杉酚}，苯基異絲氨酸側(cè)鏈修飾的紫杉酚類似物，taxotere，(N-脫苯甲?；?N-正-(丁氧基蒈酮)-10-去乙?；仙挤?，和紫杉烷(例如，漿果赤霉素III、三尖杉寧堿、10-去乙?；鶟{果赤霉素III、短葉、yunantaxusin、紫杉素)。微管解聚(或使不穩(wěn)定或分解)物質(zhì)的代表性例子包括諾考達(dá)唑(Nocodazole)(Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990；Dotti等，J.CellSci.Suppl.1575-84，1991；Oka等，Struct.Funct.16(2)125-134，1991；Wiemer等，J.CellBiol.136(1)71-80，1997)；細(xì)胞松弛素B(Illinger等，Biol.Cell73(2-3)131-138，1991)；長春花鹼(Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990；Dirk等，Neurochem.Res.15(11)1135-1139，1990；Illinger等，Biol.Cell73(2-3)131-138，1991；Wiemer等，J.CellBiol.136(1)71-80，1997)；長春新堿(Dirk等，Neurochem.Res.15(11)1135-1139，1990；Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990)；秋水仙鹼(Allen等，Am.J.Physiol.261(4Pt.1)L315-L321，1991；Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990；Gonzalez等，Exp.Cell.Res.192(1)10-15，1991；Stargell等，Mol.Cell.Biol.12(4)1443-1450，1992)；CI980(秋水仙鹼類似物)(Garcia等，AnticancerDrugs6(4)533-544，1995)；秋水仙胺(Barlow等，Cell.Motil.Cytoskeleton19(1)9-17，1991；Meschini等，J.Microsc.176(Pt.3)204-210，1994；Oka等，CellStruct.Funct.16(2)125-134，1991)；鬼臼毒素(Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990)；苯菌靈(Benomyl)(Hardwick等，J.CellBiol.131(3)709-720，1995；Shero等，GenesDev.5(4)549-560，1991)；Oryzalin(Stargell等，Mol.Cell.Biol.12(4)1443-1450，1992)；Majusculamide(大酰胺)C(Moore，J.Ind.Microbiol.16(2)134-143，1996)；脫乙酰甲基秋水仙鹼(VanDolah和Ramsdell，J.Cell.Physiol.166(1)49-56，1996；Wiemer等，J.Cell.Biol.136(1)71-80，1997)；和甲基-2-苯并咪唑氨基甲酸酯(MBC)(Brown等，J.Cell.Biol.123(2)387-403，1993)。制劑如上面提到的，這里描述的抗-微管治療物質(zhì)可被制成各種方式，并且可另外包括載體。在這方面，廣泛的各種載體可選自聚合的或者非-聚合的起始物。例如，在本發(fā)明的一個實施例中，可使用各種聚合物載體以包含和/或釋放上面討論的一種或多種治療物質(zhì)，包括例如生物降解和非生物降解組合物。代表性的生物降解組合物包括白蛋白、膠原、明膠、透明質(zhì)酸、淀粉、纖維素(甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素、鄰苯二甲酸乙酸纖維素、琥珀酸纖維素、鄰苯二甲酸羥基丙基甲基纖維素)、酪蛋白、右旋糖酐、多糖、纖維蛋白原、聚(D，L交酯-共-乙交酯)、聚乙交酯、聚羥丁酸酯、聚烷基碳酸酯和聚原酸酯、聚酯、聚戊酸、聚二噁烷酮、聚(乙烯對苯二酸酯)、聚馬來酸、聚羥基丙二酸、聚酐、含磷氮鏈聚合物、聚氨基酸和它們的共聚物(一般參見，Illum，L.，Davids，S.S.(編著)“PolymersinControlledDrugDelivery”Wright，Bristol，1987；Arshady，J.ControlledRelease171-22，1991；Pitt，Int.J.Phar.59173-196，1990；Holland等，J.ControlledRelease4155-0180，1986)。非生物降解聚合物的代表性例子包括聚(乙烯醋酸乙烯酯)(“EVA”)共聚物、硅膠、丙烯酸聚合物(聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚甲基異丁烯酸酯、聚甲基犬丙烯酸酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚胺(尼龍6，6)、聚氨酯、聚氨乙酯、聚氨醚酯、聚(酯-脲)、聚[聚(氧乙烯)、聚(氧丙烯)、消泡s和聚(四甲基甘油)]乙酯，、硅膠和乙烯聚合物(聚乙烯比咯烷酮、聚(乙烯醇)、聚(鄰苯二甲酸醋酸乙烯酯)。聚合物可以是陰離子的(如，藻酸鹽、角叉菜膠、羧甲基纖維素和聚丙烯酸)或陽離子的(如，殼聚糖、聚-L-賴氨酸、聚乙烯亞胺和聚(丙烯胺))。(一般參見Dunn等，J.AppliedPolymerSci.50353-365，1993；Cascone等，J.MaterialsSci.MaterialsinMedicine5770-774，1994；Shiraishi等，Biol.Pharm.Bull.16(11)1164-1168，1993；Thacharodi和Rao，Int’l.J.Pharm.120115-118，1995；Miyazaki等，Int’lJ.Pharm.118257-263，1995)。特別優(yōu)選的聚合物載體包括聚(乙烯醋酸乙烯酯)、聚(D，L-乳酸)的寡聚物和聚合物、聚(L-乳酸)的寡聚物和聚合物、聚羥基乙酸、乳酸和羥基乙酸的共聚物、聚己內(nèi)酯、聚戊內(nèi)酯、聚酐、聚己內(nèi)酯或聚(乳酸)與聚乙二醇甘油的共聚物(如，MePEG)，以及它們的混合物。具有所需釋放特性和/或特定需要性質(zhì)的聚合物載體可制成各種形式。例如，聚合物載體可制成暴露于特定觸發(fā)條件如pH(參見例如，Heller等，“ChemicallySelf-RegulatedDrugDeliverySystems，”inPolymerinMedicineIII，ElsevierSciencePublishersB.V.，阿姆斯特丹，1988，175-188頁；Kang等，J.AppliedPolymerSci.48343-354，1993；Dong等，J.Controlled19171-178，1992；Dong和Hoffmam，J.ControlledRelease15141-152，1991；Kim等，J.ControlledRelease28143-152，1994；Comejo-Bravo等，J.ControlledRealease33223-229，1995；Wu和Lee，Pharm.Res.10(10)1544-1547，1993；Serres等，Pharm.Res.13(2)196-201，1996；Peppas，“FundamentalsofpH-andTemperature-SensitiveDeliverySystems”，Gurny等(編著)的PulsatileDrugDelivery，WissenschaftlicheVerlagsgesellschaftmbH，Stuttgart，1993，41-55頁；Doelker，“纖維素衍生物”，1993，在Peppas和Langer(編著)，BiopolymersI，Springer-Verlag，柏林)。pH敏感聚合物代表性例子包括聚(丙烯酸)和它的衍生物(包括例如，均聚物如聚(氨基羧酸)；聚(丙烯酸)；聚(甲基丙烯酸)，這些均聚物的共聚物，和聚(丙烯酸)共聚物和如上面討論的丙烯醛基單體的共聚物。其它pH敏感聚合物包括多糖如鄰苯二甲酸乙酸纖維素；鄰苯二甲酸羥基丙基甲基纖維素；琥怕酸乙酸羥基丙基甲基纖維素；1，2，4-苯三酸酯乙酸纖維素；和殼聚糖。還有其它pH敏感聚合物包括pH敏感聚合物和水溶性聚合物的混合物。同樣地，聚合物載體可被制成溫度敏感形式(參見例如，Chen等，”NovelHydrogelsofatemperature-Sensitive消泡GraftedtoaBioadhesivePolyacrylicAcidBackboneforVaginalDrugDelivery，”在Proceed.Intern.Symp.Control.Rel.BioactMater.22167-168，ControlledReleasesociety，Inc.，1995；Okano，”MolecularDesignofStimuli-ResponsiveHydrogelsforTemporalControlledDrugDeliery，”在Proceed.Intern.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.22111-112，ControlledReleaseSociety，Inc.，1995；Johnston等，Pharm.Res.9(3)425-433，1992；Tung，Int’lJ.pharm.10785-90，1994；HarshandGehrke，J.ControlledRelease17175-186，199l；Bae等，Pharm.Res.8(4)531-537，1991；Dinarvand和D’Emanuele，J.ControlledRelease36221-227，1995；Yu和Grainger“NovelThermo-sensitiveAmphiphilicGelsPolyN-isopropylacrylamide-co-sodiumacrylate-co-n-N-alkylacrylamideNaetworkSynthesisandPhysicochemicalCharacterization”，Dept.ofChemical&BiologicalSci.，OregonGraduateInstituteofScience&Technology，Beaverton，OR，820-821頁；Zhou和Smid，“PhysicalHydrogelsofAssociativeStarPolymers，”PolymerResearchInstitute，Dept.ofChemistry，CollegeofEnvironmentalScienceandForestry，StateUniv.ofNewYork，Syracuse，NY，822-823頁；Hoffman等，“CharacterizingPoreSizesandWater‘Structure’inStimuli-ResponsiveHydrogels，”CenterforBioengineering，Univ.ofWashington，Seattle，WA，828頁；Yu和Grainger，“Thermo-sensitiveSwellingBehaviorinCrosslinkedN-isopropylacrylamideNetworksCationic，AnionicandAmpholyticHydrogels，”Dept.ofChemical&BiologicalSci.，OregonGraduateInstituteofScience&Technology，Beaverton，OR，829-830頁；Kim等，Pharm.Res.9(3)283-290，1992；Bae等，Pharm.Res.8(5)624-628，1991；Kono等，J.ControlledRelease3069-75，1994；Yoshida等，J.ControlledRelease3297-102，1994；Okano等，J.ControlledRelease36125-133，1991；Hoffman，“ThermallyReversibleHydrogelsContainingBiologicallyActiveSpecies，”inMigliaresi等(編著)，PolymersinMedicineIII，ElsevierSciencePublishersB.V.，阿姆斯特丹，1988，161-167頁；Hoffman，“ApplicationsofThermallyReversiblePolymersandHydrogelsinTherapeuticsandDiagnostics，”inThirdInternationalSymposiumonRecentAdvancesinDrugDeliverySystems，SaltLakecity，UT，2月24-27，1987，297-305頁；Gutowska等，J.ControlledRelease2295-104，1992；Palasis和Gehrke，J.ControlledRelease181-12，1992；Paavola等，Pharm.Res.12(12)1997-2002，1995。代表性熱凝凝聚合物和它們的明膠溫度(LCST(℃))的例子包括均聚物如聚(N-甲基-N-n-丙基丙烯酰胺)，19.8；聚(N-n-丙基丙烯酰胺)，21.5；聚(N-甲基-N-異丙基丙烯酰胺)，22.3；聚(N-n-丙基異丁烯酰胺)，28.0；聚(N-異丙基丙烯酰胺)，30.9；聚(N，n-二乙基丙烯酰胺)，32.0；聚(N-異丙基異丁烯酰胺)，44.0；聚(N-環(huán)丙基丙烯酰胺)，45.5；聚(N-乙基甲基丙烯酰胺)，50.0；聚(N-甲基-N-乙基丙烯酰胺)，56.0；聚(N-環(huán)丙基異丁烯酰胺)，59.0；聚(N-乙基丙烯酰胺)，72.0。此外，熱凝凝聚合物可由上述單體制備共聚物，或者這些均聚物與其它水溶性聚合物如丙烯醛單體(例如，丙烯酸和它們的衍生物如異丁烯酸、丙烯酸酯和它們的衍生物如丁基異丁烯酸酯、丙烯酰胺、和N-n-丁基丙烯酰胺)混合。其它熱凝凝聚合物的代表性例子包括纖維素酯衍生物如羥丙基纖維素，41℃；甲基纖維素，55℃；羥丙基甲基纖維素，66℃；和乙基羥乙基纖維素，和消泡s如F-127，10-15℃；L-122，19℃；L-92，26℃；L-81，20℃；和L-61，24℃。本發(fā)明聚合物載體可被制成各種形式，包括例如，桿-狀裝置、小丸、片或膠囊(參見例如，Goodell等，Am.J.Hosp.Pharm.431454-1461，1986；Langer等，“Controlledreleaseofmacromoleculesfrompolymers”，inBiomedicalPolymers，PolymericMaterialsandPharmaceuticalsforBiomedicalUse，Goldberg，E.P.，Nakagim，A.(編著)AcademicPress，113-137頁，1980；Rhine等，J.Pharm.Sci.69265-270，1980；Brown等，J.Pharm.Sci.721181-1185，1983；和Bawa等，J.ControlledRelease1259-267，1985)。治療物質(zhì)可通過包藏于聚合物基質(zhì)、由共價鍵連接，或裝入微膠囊連接。在本發(fā)明特定實施例中，治療組合物以非-膠囊制劑如微球(大小范圍從毫微米到微米)、糊劑、不同大小的絲、膜和噴霧劑形式提供。優(yōu)選地，本發(fā)明治療組合物被制成適宜于想要使用的樣式。本發(fā)明的特定方面，治療組合物應(yīng)是生物適合性的，并且在數(shù)天到數(shù)月的期間內(nèi)釋放一種或多種治療藥。例如，提供7～10天的期間內(nèi)釋放大于治療藥物10％、20％或25％(重量/體積)的“速釋”或“脈沖”治療組合物。在特定實施例中，這樣的“速釋”組合物應(yīng)能夠釋放化療量(合適的)的所需藥物。在其它實施例中，提供在7～10天期間內(nèi)釋放小于治療藥物1％(重量/體積)的“緩釋”治療組合物。還有，本發(fā)明治療組合物優(yōu)選數(shù)月內(nèi)穩(wěn)定并且能夠在無菌條件下制備和保存。本發(fā)明的一些方面，根據(jù)特定用途，治療組合物可制成50nm～500μm范圍內(nèi)的任意大小，取決于特別應(yīng)用?；蛘?，組合物可制成能固化形成膜或包衣的隨時應(yīng)用的“噴霧劑”。這樣的噴霧可由廣泛大小序列的微球制備，包括例如，0.1μm～3μm，10μm～30μm，和30μm～100μm。本發(fā)明治療組合物也可制備成不同的“糊或凝膠形式。例如，在本發(fā)明一實施例中，制備的治療組合物在一定溫度(例如，溫度大于37℃，如40℃、45℃、50℃、55℃或60℃)呈液態(tài)。這樣的“熱糊劑”按照本公開所述可以很方便地制備。本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明治療組合物可制成膜劑，優(yōu)選地，膜劑厚度一般小于5、4、3、2或1mm，更優(yōu)選小于0.75mm或0.5mm，和最優(yōu)選小于500μm～100μm。該膜劑優(yōu)選地具有良好張力柔順性(例如，大于50，優(yōu)選大于100，和更優(yōu)選大于150或200N/cm2)、良好的粘附性(即，方便地粘附于潮的或濕的表面)，和具有受控的滲透性。本發(fā)明更有一方面，本發(fā)明治療組合物是局部應(yīng)用制劑。代表性例子包括乙醇；乙醇和乙二醇的混合物(例如，乙二醇或丙二醇)；乙醇和肉豆蔻酸異丙酯的混合物或乙醇、肉豆蔻酸異丙基酯和水的混合物(例如55∶5∶40)；乙醇和eineol或D-檸檬烯(含或不含水)混合物；乙二醇類(例如，乙二醇或丙二醇)和乙二醇類混合物如丙二醇和水、磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、Transcutol或萜品油烯；肉豆蔻酸異丙基酯和1-己基-2-吡咯烷酮、N-月桂基-2-二乙哌啶酮(piperidione)或1-己基-2-吡咯烷酮的混合物。其它賦形劑也可加入到上述制劑中，包括例如，酸類如油酸和亞油酸，和肥皂如十二烷基磺酸鈉。對上述更詳細(xì)的描述，一般參見，Hoelgaardetal.，J.Contr.2111，1985；Liu等.，Pharm.Res.8938，1991；Roy等，J.Pharm.Sci.83126，1991；Ogiso等，J.Pharm.Sci.84482，1995；Sasaki等，J.Pharm.Sci.80533，1991；Okabe等，J.Contr.Rel32243，1994；Yokomizo等，J.Contr.Rel.38267，1996；Yokomizo等，J.Contr.Rel.4237，1996；Mond等，J.Contr.Rel.3372，1994；Michniak等，J.Contr.Rel.32147，1994；Sasaki等，J.Pharm.Sci.80533，1991；Baker&Hadgraft，Pharm.Res.12993，1995；Jasti等，AAPSProceedings，1996；Lee等，AAPSProceedings，1996；Ritschel等，SkinPharmacol.4235，1991；和McDaid&Deasy，Int.J.Pharm.13371，1996。本發(fā)明一些實施例中，治療組合物也可包含其它成分如表面活性劑(例如，消泡s如F-127、L-122、L-192、L-81和L-61。本發(fā)明更一方面，提供適宜包含和釋放一種疏水化合物的聚合物載體，該載體包含與碳水化物、蛋白質(zhì)或多肽結(jié)合的疏水化合物。一些實施例中，聚合物載體包含或包括一種或多種疏水化合物的區(qū)域、口袋或小粒。例如，在本發(fā)明一實施例中，疏水化合物摻進(jìn)含有疏水化合物的基質(zhì)中，然后將基質(zhì)與聚合物載體整合。此中可使用各種基質(zhì)，包括例如，碳水化合物和多糖如淀粉、纖維素、葡聚糖、甲基纖維素，和透明質(zhì)酸、蛋白質(zhì)或多肽如白蛋白、膠原和明膠。在二者擇一的另一實施例中，疏水化合物可包含一個疏水芯，和該芯包含在一個親水殼中?？捎糜诎歪尫疟景l(fā)明所述治療物質(zhì)的其它的載體包括羥丙基β環(huán)糊精(Cserhati和Hollo，Int.J.Pharm.10869-75，1994)、脂質(zhì)體(參見例如，Sharma等，CancerRes.535877-5881，1993；Sharma和Straubinger，Pharm.Res.11(60)889-896，1994；WO93/18751；US專利5,242,073)、脂質(zhì)體/凝膠(WO94/26254)、毫微膠囊(Bartoli等，J.Microencapsulation7(2)1191-197，1990)、微膠粒(Alkan-Onyuksel等，Pharm.Res.11(2)206-212，1994)、植入體(Jampel等，Invest.Ophthalm.Vis.Science34(11)3076-3083，1993；Walter等，CancerRes.542217-2212，1994)、毫微顆粒(Violante和LanzafamePAACR)、改性的毫微顆粒(美國專利5,399,363)、紫杉酚乳劑/溶液(美國專利5,407,683)、微膠粒(表面活性劑)(美國專利5,403,858)、合成的磷脂化合物(美國專利4,534,899)、氣壓彌散劑(美國專利5,301,664)，乳液、泡沫、噴霧、凝膠、洗劑、霜、軟膏、分散囊、氣溶膠顆?；蚬腆w-或-液體小滴、微乳劑(美國專利5,330,756)，聚合物殼(毫微或微膠囊)(美國專利5,439,686)，在表面-活性劑中的taxoid為主組合物(美國專利5,438,072)、乳劑(Tarr等，Pharm.Res.462-165，1987)、毫微球(Hagan等，Proc.Intern.Symp.ControlRel.Bioact.Mater.22，1995；Kwon等，PharmRes.12(2)192-195；Kwon等，PharmRes.10(7)970-974；Yokoyama等，J.Contr.Rel.32269-277，1994；Gref等，Science2631600-1603，1994；Bazile等，J.Pharm.Sci.84493-498，1994)和植入體(美國專利4,882,168)。正如下面將要更詳細(xì)地討論，本發(fā)明治療物質(zhì)，任選地整合到本發(fā)明描述的一種或多種載體中以形成治療組合物，可被制備和用于治療或預(yù)防多種疾病。治療或預(yù)防炎癥性疾病上面已經(jīng)提到，本發(fā)明提供治療或預(yù)防多種炎癥性疾病，包括給予病人一種抗-微管物質(zhì)的步驟?？芍委煹难装Y性疾病的代表性例子包括，例如，萎縮性胃炎、感染性溶血性貧血、移植排斥、炎癥性中性白細(xì)胞減少、大皰天皰瘡、腹腔疾病、脫髓鞘神經(jīng)病、皮肌炎、感染性腸道疾病(潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病)、心肌炎、肌炎、鼻息肉、慢性鼻竇炎、普通天皰瘡、原發(fā)性腎小球性腎炎、牛皮癬、手術(shù)粘連、狹窄或再狹窄、鞏膜炎、硬皮病、濕疹(包括特異反應(yīng)性皮炎、刺激性皮炎、過敏性皮炎)和I型糖尿病。其它炎癥性疾病包括結(jié)節(jié)性脈管炎[例如，巨細(xì)胞動脈炎(暫時性動脈炎，高安氏病)、結(jié)節(jié)性多脈管炎、過敏性脈管炎和肉芽腫病(Churg-Strauss病)、多脈管炎重疊并發(fā)癥、過敏性結(jié)節(jié)性脈管炎(Henoch-Schonlein紫癜)、血清病、藥物引起的結(jié)節(jié)性脈管炎、感染性結(jié)節(jié)性脈管炎、贅生性結(jié)節(jié)性脈管炎、與結(jié)締組織疾病有關(guān)的結(jié)節(jié)性脈管炎、與先天性補(bǔ)體系統(tǒng)缺陷有關(guān)的結(jié)節(jié)性脈管炎、韋格內(nèi)氏肉芽腫病、kawasaki’s病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)節(jié)性脈管炎、血栓閉塞性脈管炎和系統(tǒng)性硬化)]；胃腸道疾病(例如，胰腺炎、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、潰瘍性直腸炎、原發(fā)性硬化性膽管炎、各種原因包括自發(fā)性引起的良性狹窄(例如，膽道、食管、十二指腸、小腸或結(jié)腸的狹窄)；呼吸道疾病(如哮喘、過敏性肺炎、石棉肺、矽肺和其它形式的肺炎、慢性支氣管炎和慢性阻塞性氣道疾病)；鼻淚管疾病(例如，各種原因包括原發(fā)性引起的狹窄)；以及咽鼓管疾病(各種原因包括原發(fā)性引起的狹窄)。為了進(jìn)一步理解這些疾病，代表性的炎癥性疾病詳細(xì)描述如下。1.炎癥性皮膚疾病(例如，牛皮癬、濕疹)應(yīng)用本發(fā)明藥物、組合物和方法，多種炎癥性皮膚疾病可以很容易治療或預(yù)防。例如，本發(fā)明的一個實施例中，通過向炎癥位點(或潛在的炎癥位點)釋放抑制微管功能的藥物，皮膚炎癥性疾病如牛皮癬或濕疹得以治療或預(yù)防。簡要地，皮膚細(xì)胞沿兩種可能程序-正常生長或傷口愈合遺傳編程。正常生長時，皮膚細(xì)胞產(chǎn)生于基底細(xì)胞層，然后穿過表皮到達(dá)皮膚表面。死細(xì)胞以與新細(xì)胞生成相同的速度從健康皮膚脫落。正常細(xì)胞的更新周期(即細(xì)胞生成到死亡的時間)大約為28天。在傷口愈合時，觸發(fā)了生長和修復(fù)的加速導(dǎo)致皮膚細(xì)胞更新周期(取代或修復(fù)傷口)加快、血液供應(yīng)增加(以滿足與生長有關(guān)的增加的代謝需要)和局限炎癥反應(yīng)。在很多方面，牛皮癬與過度的傷口愈合過程相似。皮膚細(xì)胞(稱之“角質(zhì)細(xì)胞”)在2-4天這樣短的時間內(nèi)生成并到達(dá)皮膚表面。皮膚表面不能足夠快地剝離死亡細(xì)胞和過量角質(zhì)細(xì)胞堆積而形成高的、有鱗屑的損害。生長由真皮(表皮下的支持組織)中建立的用以提供支持過度增生角質(zhì)細(xì)胞所必需養(yǎng)分的新血管支持。同時，淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組織浸潤，產(chǎn)生炎癥、腫脹和痛苦，以及可能產(chǎn)生促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞迅速增生的生長因子。所有這些細(xì)胞(角質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞)產(chǎn)生組織分解酶或蛋白酶由此加重疾病進(jìn)程和周圍組織破壞。應(yīng)用上面提供的組合物，炎癥性皮膚損害可以得到迅速治療。特別是，將抗微管物質(zhì)直接用于炎癥位點(或潛在的炎癥位點)，以治療或預(yù)防該病。適宜的抗微管物質(zhì)已在上面詳細(xì)討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起的細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，抗微管物質(zhì)是紫杉醇、喜樹堿或epothilone之外的藥物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物給藥，或者以前述或下面詳細(xì)討論的脂質(zhì)體、霜或軟膏制劑給藥。本發(fā)明優(yōu)選地實施例中，物質(zhì)或組合物以局部給藥或者皮下給藥。對牛皮癬的有效抗微管治療將取得至少下述之一效果減少皮損數(shù)量和嚴(yán)重度，降低活動性疾病加重發(fā)作的頻率或病程，延長緩解期間(即病人無癥狀的期間)和/或減輕相關(guān)癥狀的嚴(yán)重程度或期間(例如，關(guān)節(jié)疼痛和腫脹、軸性骨骼疼痛、腸道癥狀)。臨床治療效果是減少皮損的大小或數(shù)量、減低皮膚癥狀(受損皮膚的疼、灼痛和出血)和/或減輕相關(guān)癥狀(如，關(guān)節(jié)紅、熱、腫，腹瀉，腹痛)?？刮⒐芪镔|(zhì)至少產(chǎn)生下述之一的病理學(xué)效果抑制角質(zhì)細(xì)胞增生，減少皮膚炎癥(例如，通過作用于趨化和生長因子、抗原呈遞、產(chǎn)生活性氧類和基質(zhì)金屬蛋白酶)，和抑制真皮血管生成?？刮⒐芪镔|(zhì)以任意方式給藥可達(dá)到上述終點，但優(yōu)選的方法包括局部和系統(tǒng)給藥。局部患病的病人可以直接在牛皮癬皮損處使用外用paclitaxe霜、軟膏或潤滑藥。例如，含0.01％～10％重量比紫杉醇的外用paclitaxe霜，根據(jù)疾病的嚴(yán)重度和病人對治療的反應(yīng)給藥。在一優(yōu)選的實施例中，含0.1％～1％重量比紫杉醇的外用制劑用于牛皮癬皮損?；蛘?，將在適宜藥學(xué)載體的紫杉醇直接皮下注射以控制個別皮損。對具有多種疾病或皮膚癥狀嚴(yán)重的病人(如，牛皮癬關(guān)節(jié)炎、萊特爾氏綜合征、相關(guān)的脊椎炎、相關(guān)炎癥性腸道疾病)，可進(jìn)行紫杉醇系統(tǒng)治療給藥。例如，以10-75mg/m2的劑量靜脈注射紫杉醇制劑的間歇治療給藥，劑量取決于治療反應(yīng)和病人的耐受性；同等的口服制劑也適于這樣的指征。其它抗微管物質(zhì)可以按照“相當(dāng)于紫杉醇”劑量的效力和可耐受性調(diào)整給藥。其它可從局部用抗-微管物質(zhì)受益的情況包括濕疹疾病(特異性皮炎、接觸性皮炎、濕疹)、免疫性大皰疾病、惡化前的表皮腫瘤、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、角化棘皮瘤、惡化的黑色素瘤、病毒性疣。含0.01％～10％重量比紫杉醇的外用霜、軟膏、和乳液適宜于控制這些狀況。2.多發(fā)性硬化本發(fā)明的另一方面，抗-微管物質(zhì)可用于治療或預(yù)防多發(fā)性硬化。簡要地，多發(fā)性硬化(MS)是人中樞神經(jīng)系統(tǒng)的破壞性脫髓鞘疾病。盡管它的病因和發(fā)病機(jī)理不明，據(jù)信與遺傳、免疫和環(huán)境因子有關(guān)。在疾病進(jìn)程中，MS病人大腦進(jìn)行性脫髓鞘導(dǎo)致運(yùn)動功能喪失。盡管脫髓鞘的確切機(jī)制不明，但在髓鞘損害區(qū)域有星形膠質(zhì)細(xì)胞增生和聚集。在這些部位，巨噬細(xì)胞-樣活性和增加的蛋白酶活性至少部分地與髓鞘的降解有關(guān)?？?微管物質(zhì)可用于炎癥部位(或潛在的炎癥部位)，以治療或預(yù)防該疾病。適宜的抗微管物質(zhì)已在上面詳細(xì)討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源性微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細(xì)討論的脂質(zhì)體形式給藥。在一些實施例中，藥物或組合物可口服、靜脈內(nèi)給藥，或者直接向疾病部位(優(yōu)選地在超聲、CT、熒光鏡、MRI或內(nèi)窺鏡指導(dǎo)下)給藥。對多發(fā)性硬化的有效抗微管治療將取得下述一種或多種效果減輕癥狀嚴(yán)重程度；縮短疾病惡化期間；增加疾病緩解/無癥狀期間的頻率和時間；預(yù)防永久性損害和殘疾；和/或預(yù)防/減弱疾病的慢性進(jìn)程。臨床上，將取得改善視覺癥狀(視覺喪失，復(fù)視)、步態(tài)蹣跚(虛弱，站立不穩(wěn)，感覺缺失，強(qiáng)直，反射亢進(jìn)，精細(xì)動作喪失)、上肢機(jī)能障礙(虛弱，強(qiáng)直，感覺喪失)、膀胱機(jī)能喪失(尿急，尿失禁，排尿困難，不完全排空)、抑郁、情感不穩(wěn)定和認(rèn)知障礙的效果。病理學(xué)上，治療減輕下述一種或多種損害，如髓鞘脫失、血腦屏障破壞、單核細(xì)胞血管外浸潤、免疫學(xué)異常、膠質(zhì)瘢痕形成和星型細(xì)胞增生、髓鞘蛋白酶產(chǎn)生，和傳導(dǎo)速度損害?？?微管物質(zhì)以能達(dá)到終點的任何方式給藥，但優(yōu)選的給藥方法包括靜脈注射、口服，或皮下、肌內(nèi)或鞘內(nèi)注射?？刮⒐芪镔|(zhì)可按慢性低治療量給藥用于預(yù)防疾病進(jìn)展、延長疾病緩解期，或者減輕活動期疾病癥狀?；蛘?，治療藥物可用更高劑量的“脈沖”治療以誘導(dǎo)急性活動期疾病進(jìn)入緩解期?？墒褂眠_(dá)到這些終點的最小劑量給藥并且可依病人、疾病嚴(yán)重程度、給予的藥物制劑、和給藥途徑的不同而不同。例如，使用紫杉醇，根據(jù)治療反應(yīng)每1-4周以10-50mg/m2的紫杉醇連續(xù)慢性低治療量系統(tǒng)給藥；可按每1-21天50-250mg/m2應(yīng)用1-6個循環(huán)的高劑量“脈沖”治療系統(tǒng)給藥。其它抗微管物質(zhì)可按相當(dāng)于此劑量的效力和耐受性調(diào)整給藥。3.關(guān)節(jié)炎炎癥性關(guān)節(jié)炎是發(fā)達(dá)國家嚴(yán)重的健康問題，特別是年長個體患病數(shù)量增加。例如，一種炎癥性關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是不明原因的多系統(tǒng)慢性、復(fù)發(fā)性、炎癥性疾病。盡管許多器官受累，但RA主要是有時導(dǎo)致受累及關(guān)節(jié)破壞和強(qiáng)直的嚴(yán)重慢性滑膜炎的形式(RobbinsPathologicalBasisofDisease，由R.SCotran，V.Kumar，和S.L.Robbins，W.B.SaundersCo.，1989)。病理學(xué)上，該病以明顯增厚的形成絨毛狀突起伸向關(guān)節(jié)腔的滑膜為特征，多層滑膜細(xì)胞基膜(滑膜細(xì)胞增生)，白細(xì)胞滑膜浸潤(巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和淋巴濾泡，稱為“炎性滑膜炎”)，以及壞死細(xì)胞和纖維蛋白沉積于滑膜。此過程的結(jié)果是稱為肉芽組織的組織形成并且肉芽組織逐漸生長充填關(guān)節(jié)腔。肉芽組織通過血管生成過程產(chǎn)生演化為滑膜炎的必要的廣泛新血管網(wǎng)。肉芽組織細(xì)胞釋放的消化酶(基質(zhì)金屬蛋白酶(如，膠原酶，溶基質(zhì)素))和其它炎癥介質(zhì)(如，過氧化氫、過氧化物、溶菌酶、花生四烯酸代謝產(chǎn)物)導(dǎo)致軟骨組織進(jìn)行性破壞。肉芽入侵關(guān)節(jié)軟骨引起軟骨組織的侵蝕和斷裂。逐漸地，軟骨下骨侵蝕伴纖維性關(guān)節(jié)強(qiáng)硬并最終導(dǎo)致受累及關(guān)節(jié)骨質(zhì)性關(guān)節(jié)強(qiáng)硬。一般認(rèn)為，但不是結(jié)論性觀點，RA是自身免疫性疾病，許多不同的關(guān)節(jié)基因刺激激活了免疫遺傳學(xué)上易感宿主的免疫反應(yīng)。無論外源性感染物質(zhì)(Ebstein-Barr病毒、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、肝炎病毒、人T-細(xì)胞嗜淋巴細(xì)胞病毒、支原體和其它)還是內(nèi)源性蛋白質(zhì)(膠原、蛋白多糖、改變的免疫球蛋白)均被推斷為觸發(fā)不適當(dāng)宿主免疫反應(yīng)的病原體。除所述這些物質(zhì)外，自身免疫在疾病進(jìn)程中起一定作用。特別是，相關(guān)抗原被抗原呈遞細(xì)胞(滑膜上的巨噬細(xì)胞或樹狀細(xì)胞)攝取，加工，和呈遞給T淋巴細(xì)胞。T細(xì)胞引發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)和刺激B淋巴細(xì)胞增生和分化程成為漿細(xì)胞。最后的結(jié)果是產(chǎn)生針對宿主組織的過度不適當(dāng)免疫反應(yīng)(如，針對II型膠原的抗體、針對自體IgG的Fc片段(稱為“類風(fēng)濕因子”)的抗體)。免疫反應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大和加速軟骨組織破壞。級聯(lián)反應(yīng)一旦啟動，無數(shù)軟骨組織破壞介質(zhì)參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的形成。因此，本發(fā)明的一個方面是，提供治療或預(yù)防炎癥性關(guān)節(jié)炎(如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的方法，包括施予患者治療有效量的抗-微管物質(zhì)的步驟。炎癥性關(guān)節(jié)炎包括各種不同的情況包括但不限于，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化(硬皮病)、混和性結(jié)締組織病、斯耶格倫綜合征、強(qiáng)直性脊椎炎、貝切特氏綜合征、肉樣瘤病和骨關(guān)節(jié)炎-所有這些的特征是以關(guān)節(jié)紅腫、疼痛為主要癥狀。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施例中，抗-微管物質(zhì)可直接關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥、手術(shù)糊劑或以其它途徑給藥，例如，系統(tǒng)或口服給藥。適宜的抗-微管物質(zhì)已在上面詳細(xì)討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源性微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細(xì)討論的脂質(zhì)體形式給藥。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)是紫杉醇、喜樹堿和epothilone之外的物質(zhì)?？?微管物質(zhì)對炎癥性關(guān)節(jié)炎的有效治療將取得下述一種或多種效果(i)減輕癥狀嚴(yán)重程度(疼、腫和受累及關(guān)節(jié)觸痛；晨起僵硬、虛弱、疲勞、食欲不振、體重下降)；(ii)減輕疾病臨床表征的嚴(yán)重程度(關(guān)節(jié)囊增厚、滑膜肥大、關(guān)節(jié)積液、軟組織攣縮、運(yùn)動受限、關(guān)節(jié)強(qiáng)硬、永久性關(guān)節(jié)變形)；(iii)降低本病關(guān)節(jié)外表現(xiàn)(風(fēng)濕結(jié)節(jié)、結(jié)節(jié)性脈管炎、肺結(jié)節(jié)、間質(zhì)纖維化、心包炎、鞏膜外層炎、虹膜炎、費(fèi)耳提氏綜合征、骨質(zhì)疏松)；(iv)增加疾病緩解期/無癥狀期間的頻率和期限；(v)預(yù)防永久性損害和殘疾；和/或(vi)預(yù)防/減弱疾病的慢性進(jìn)程。病理學(xué)上，對炎癥性關(guān)節(jié)炎的有效抗-微管治療將產(chǎn)生至少下述之一的效果(i)降低炎癥反應(yīng)，(ii)中斷炎癥性細(xì)胞因子的活性(如IL-1、TNFα、FGF、VEGF)，(iii)抑制滑膜細(xì)胞增生，(iv)阻滯基質(zhì)金屬蛋白酶活性，和/或(v)抑制血管生成。抗-微管物質(zhì)可按能夠取得上述效果的最小劑量系統(tǒng)給藥(口服、靜注、或肌注或皮下注射)。對于只有少數(shù)關(guān)節(jié)受累及，或者疾病較顯著地累及少數(shù)關(guān)節(jié)的患者，抗-微管物質(zhì)可直接注射(關(guān)節(jié)內(nèi)注射)到受累關(guān)節(jié)內(nèi)。4.植入體和手術(shù)或醫(yī)療器械，包括斯滕特氏印模和移植物各種植入體、手術(shù)器械或斯滕特氏印模，可用本發(fā)明提供的任何一種抗-微管物質(zhì)包覆或者就制成包含和/或釋放本發(fā)明任何一種抗-微管物質(zhì)的器具。代表性的實例包括心血管裝置(如，可植入性靜脈導(dǎo)管、靜脈口、靜脈導(dǎo)管管道、慢性浸劑線或端口，包括肝動脈輸入導(dǎo)管、起搏器導(dǎo)線，可植入性除纖顫器)；神經(jīng)/神經(jīng)手術(shù)裝置(如心室腹膜分流器、心室心房分流器、神經(jīng)刺激器裝置、硬腦脊膜修補(bǔ)片和預(yù)防椎板切除術(shù)后硬膜外纖維化的植入體、持續(xù)蛛網(wǎng)膜下腔輸入裝置)；胃腸道裝置(如，長期留置導(dǎo)管、飼管、門靜脈系統(tǒng)分流器、腹水引流器、釋藥腹膜植入體、腹膜透析導(dǎo)管、用于疝的可植入篩網(wǎng)、預(yù)防手術(shù)粘連的懸浮液或固體植入體，包括篩網(wǎng))；泌尿生殖系統(tǒng)裝置(如，子宮植入體，包括子宮內(nèi)裝置(IUDs)和預(yù)防子宮內(nèi)膜增生裝置、輸卵管植入體，包括可逆性絕育裝置、輸卵管斯滕特氏固定模、用于尿失禁的人工括約肌和尿道周植入體、輸尿管引流器、慢性留置導(dǎo)管、膀胱增大，或輸精管吻合術(shù)的包裹或夾板)；眼科植入體(例如，新血管性青光眼的multino植入體和其它植入體、翼狀胬肉的接觸晶狀體藥物洗脫、淚囊鼻腔造口術(shù)(dacrocystalrhinostomy)失敗后使用的夾板、角膜新血管的接觸晶狀體藥物洗脫、糖尿病性視網(wǎng)膜病植入體、高風(fēng)險角膜移植的接觸晶狀體藥物洗脫)；耳鼻喉科裝置(如，化膿耳或慢性耳炎的小骨植入體或咽鼓管夾板、斯滕特氏印模以代替transtempanic引流)；成形手術(shù)植入體(如預(yù)防乳房切除術(shù)或次全切除術(shù)后對含凝膠-或含鹽-的胸肌下或胸腺下乳房植入體的反應(yīng)性纖維化攣縮，或頦植入體)，和整形手術(shù)的植入體(如，粘固粉矯形假體)。適宜的抗-微管物質(zhì)已在上面詳細(xì)討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細(xì)討論的脂質(zhì)體形式給藥。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)是紫杉醇、喜樹堿和epothilone之外的物質(zhì)。植入體或其它手術(shù)或醫(yī)療裝置可用本發(fā)明任意形式的抗-微管組合物或抗-微管因子包覆(或另外適于釋放)，包括例如(a)將抗-微管物質(zhì)或組合物直接添加到植入體或裝置中(如，或者向植入體或裝置噴敷一層聚合物/藥物膜，或者將植入體或裝置浸入聚合物/藥物溶液，或者其它共價或非共價結(jié)合方式)；(b)用含藥的可輪流吸收抗-微管組合物(或上述抗-微管因子)的物質(zhì)如水凝膠包覆植入體或裝置；(c)將抗-微管組合物絲(或聚合物本身成絲)交織到植入體或裝置中；(d)將植入體或裝置嵌入由抗-微管物質(zhì)構(gòu)成或包覆的套管或篩網(wǎng)中；(e)植入體或裝置本身由抗-微管物質(zhì)或組合物構(gòu)成；(f)其它適于植入體或裝置釋放抗-微管物質(zhì)的方式。本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，儲存期間和植入時組合物應(yīng)牢固地附著在植入體或裝置上。抗-微管物質(zhì)或組合物也優(yōu)選地在儲存期間、植入前、或者植入機(jī)體(需要時)后加熱到體溫時不降解。此外，優(yōu)選光滑和平坦地包覆植入體或裝置，抗-微管物質(zhì)均勻分布，而不改變斯藤特氏印模的外形。本發(fā)明的優(yōu)選實施例，一旦使用了植入體或裝置，抗-微管物質(zhì)或組合物應(yīng)向植入體或裝置周圍組織提供均勻、可預(yù)測的、延長釋放的抗-微管因子。對血管斯藤特氏印模，除了具備上述性質(zhì)外，組合物還不應(yīng)使斯藤特氏印模形成血栓(引起血凝塊形成)，或引起明顯的血液湍流(較不包覆斯藤特氏印模本身更易引起)。對于斯藤特氏印模的情況，多種斯藤特氏印模可制成包含和/或釋放本發(fā)明提供的抗-微管物質(zhì)，包括食管斯藤特氏印模、胃腸斯藤特氏印模、血管斯藤特氏印模、膽道斯藤特氏印模、結(jié)腸斯藤特氏印模、胰斯藤特氏印模、輸尿管斯藤特氏印模、尿道斯藤特氏印模、淚腺斯藤特氏印模、咽鼓管斯藤特氏印模、輸卵管斯藤特氏印模、氣管/支氣管斯藤特氏印模。斯藤特氏印?？煞奖愕赜缮唐穪碓传@得，或者按照公知技術(shù)制成。斯藤特氏印模的代表性實例包括那些在美國專利4,786,523題為“HydrogelAdhesive”；美國專利4,776,337，題為“ExpandableIntraluminalGraft，andMethodandApparatusforImplantingandExpandableIntraluminalGraft”；美國專利5,041,126，題為“EndovascularStentandDeliverySystem”；美國專利5,052,998，題為“IndwellingStentandMethodofUse”；美國專利5,064,435，題為“Self-ExpandingProsthesisHayingStableAxialLength”；美國專利5,089,606，題為“Water-insolublePolysaccharideHydrogelFoamforMedicalApplications”；美國專利5,147,370，題為“NitinolStentforHollowBodyConduits”；美國專利5,176,626，題為“IndwellingStent”；美國專利5,213,580，題為“BiodegradablePolymericEndoluminalSealingProcess”；美國專利5,328,471，題為“MethodandApparatusforTreatmentofFocalDiseaseinHollowTubularOrgansandOtherTissueLumers?！北景l(fā)明的另一方面，提供擴(kuò)充機(jī)體腔道的方法，包括將斯藤特氏印模植入通道，所述斯藤特氏印模具有通常的管狀結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)表面用一種抗-微管組合物(或者，單獨一種抗-微管因子)包覆(或相反適于釋放)，由此使通道擴(kuò)大。下面描述不同的實施例，其中機(jī)體腔道被擴(kuò)充以便清除膽道、胃腸道、食管、氣管/支氣管、尿道或血管阻塞。一般地，斯藤特氏印模以相似的方式植入，而不考慮部位或所治療的疾病。簡要地，為了確定斯藤特氏印模植入的適宜位置，通常的第一步操作是植入前檢查。所述植入前檢查，是通常的診斷成像過程、內(nèi)窺鏡檢查或手術(shù)時直接造影。然后導(dǎo)引絲前進(jìn)穿過損傷面或計劃植入的部位，以及在此導(dǎo)引下遞送一輸送導(dǎo)管，該導(dǎo)管允許斯藤特氏印模以折疊形式植入。典型地，斯藤特氏印模可被壓縮，以便于它們能通過小導(dǎo)管的微腔而被植入，一旦到達(dá)所需的特定區(qū)域，它們就擴(kuò)張為較大直徑。一旦擴(kuò)張，斯藤特氏印模物理性地迫使通道分離并保持開放狀態(tài)。于是，它們能夠通過小開口植入，而且還能使大直徑腔或通道保持開放。斯藤特氏印?？梢允亲陨?膨脹性(如，Wallstent和Gianturco斯藤特氏印模)、氣囊樣膨脹(如，Palmaz斯藤特氏印模和Strecker斯藤特氏印模)，或者植入后隨溫度變化(如，Nitinol斯藤特氏印模)。斯藤特氏印模典型地是在放射學(xué)或直接視覺控制下操作植入的，特別小心地精確地將斯滕特氏印模穿越被治療器官的狹窄部位放置，然后移走輸送導(dǎo)管，留下斯滕特氏印模象腳手架樣獨自支撐。植入后檢查，通常的x-線，常用來確定是否植入到合適部位。本發(fā)明一個優(yōu)選的實施例，提供消除膽道阻塞的方法，包括膽道內(nèi)植入一個膽道斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)表面包覆(或相反適于釋放)一種如上所述的抗-微管物質(zhì)或組合物，由此膽道阻塞得以消除。簡要地，總膽管腫瘤過度生長導(dǎo)致有損于生命健康膽汁郁積型黃疸。通常，將膽汁從肝臟排泄到十二指腸的膽道系統(tǒng)最常見的阻塞原因是(1)膽管細(xì)胞腫瘤(膽管腫瘤)，(2)侵犯膽管的腫瘤(如，胰腺癌)，或者(3)施加外部壓力和壓迫膽管的腫瘤(如，增大的淋巴結(jié)節(jié))。不論原發(fā)性膽道腫瘤，還是其它引起膽管樹壓迫的腫瘤，使用本發(fā)明所述斯滕特氏印模均可得到治療。一種原發(fā)性膽道癌的例子是腺癌(當(dāng)位于總肝管分叉處時又稱Klatskin腫瘤)。膽總管血管癌、膽道系統(tǒng)腺癌，這些腫瘤也看作膽道腫瘤。影響膽管的良性腫瘤(如，膽道系統(tǒng)的腺瘤)，和極罕見的，膽管鱗狀細(xì)胞癌和膽囊的腺癌，也可引起膽管樹的壓迫并由此導(dǎo)致膽道阻塞。膽道樹壓迫最常由肝臟和胰腺腫瘤引起，肝臟和胰腺腫瘤壓迫并致膽管阻塞。多數(shù)胰腺腫瘤出現(xiàn)在胰管細(xì)胞。這是一種非常致命的癌癥(所有癌癥死亡的5％；美國每年新增患病人數(shù)26,000)，平均存活期6個月，一年存活率僅為10％。這些腫瘤位于胰頭時常引起膽道阻塞，并嚴(yán)重影響患者的生命質(zhì)量。雖然所有的胰腺腫瘤統(tǒng)稱為“胰腺癌”，但組織學(xué)亞型包括腺癌、腺鱗癌、囊腺癌，和腺泡細(xì)胞癌。肝臟腫瘤，如上所討論的，也可引起膽道樹壓迫，并由此導(dǎo)致膽道阻塞。本發(fā)明的一個實施例中，首先按以下數(shù)種方式之一將膽道斯滕特氏印模植入膽道通過一個針頭穿過腹壁和穿過肝臟(經(jīng)皮肝穿刺膽管造影照片或“PTC”)從頂端植入；通過一個內(nèi)窺鏡穿越口腔、胃和十二指腸從膽管的底端植入插套管(一種內(nèi)窺鏡逆行膽管造影照片或“ERCP”)；或者手術(shù)過程中直接切口植入。植入前檢查，一般進(jìn)行PTC、ERCP，或手術(shù)時直接造影，以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置。然后導(dǎo)引絲向前穿過損傷面或計劃植入的部位，以及在此導(dǎo)引下遞送一個允許斯藤特氏印模以折疊形式植入的輸送導(dǎo)管。如果診斷性檢查是PTC，導(dǎo)引絲和輸送導(dǎo)管通過腹壁植入，如果最初檢查是ERCP，斯滕特氏印?？赏ㄟ^口腔植入。斯藤特氏印模在放射學(xué)、內(nèi)窺鏡或直接視覺控制下定位，特別小心地精確地將斯滕特氏印模穿越膽管的狹窄部位放置，然后移走輸送導(dǎo)管，留下斯滕特氏印模象腳手架樣獨自支撐。植入后檢查，再進(jìn)行膽道造影照片，用來證實斯滕特氏印模植入到合適位置。本發(fā)明另一個實施例，提供消除食管阻塞的方法，包括向食管內(nèi)植入一個食管斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)表面包覆有(或相反適于釋放)一種如上所述的抗-微管物質(zhì)或組合物，由此食管阻塞得以消除。簡要地，食管是從口腔運(yùn)送食物和液體到胃的中空管。食管癌或相鄰器官癌(如胃或肺的癌癥)侵襲導(dǎo)致食物或唾液吞咽困難。在此實施例中，植入前檢查，通常進(jìn)行鋇餐吞咽或內(nèi)窺鏡檢查以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置。一導(dǎo)管或內(nèi)窺鏡穿過口腔，一個導(dǎo)引絲向前穿過阻塞處。在放射學(xué)或內(nèi)窺鏡控制下輸送導(dǎo)管越過導(dǎo)引絲遞送斯滕特氏印模，斯滕特氏印模精確地穿越食管狹窄部位放置。植入后檢查，通常利用x-線鋇餐吞咽造影，以證實植入的合適位置。本發(fā)明的又一實施例，提供結(jié)腸阻塞的清除方法，包括向結(jié)腸內(nèi)植入一個結(jié)腸斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)表面包覆(或相反適于釋放)一種如上所述的抗-微管物質(zhì)或組合物，由此結(jié)腸阻塞得以消除。簡要地，結(jié)腸是將消化過的食物和廢物從小腸運(yùn)送到肛門的中空管。直腸和/或結(jié)腸癌或相鄰器官癌(如子宮、卵巢或膀胱癌)侵襲導(dǎo)致糞便從腸道排出困難。在此實施例中，植入前檢查，通常進(jìn)行鋇灌腸或結(jié)腸鏡檢查以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置。然后將一導(dǎo)管或內(nèi)窺鏡穿過肛門，一個導(dǎo)引絲向前穿過阻塞處。在放射學(xué)或內(nèi)窺鏡控制下輸送導(dǎo)管越過導(dǎo)引絲遞送斯滕特氏印模，斯滕特氏印模精確地穿越結(jié)腸或肛門狹窄部位放置。植入后檢查，通常利用鋇灌腸x-線造影，以證實植入的合適位置。本發(fā)明另一實施例，提供消除氣管/支氣管阻塞的方法，包括向氣管或支氣管內(nèi)植入一個氣管/支氣管斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)表面包覆(或相反適于釋放)一種如上所述的抗-微管物質(zhì)或組合物，由此氣管/支氣管阻塞得以消除。簡要地，氣管/支氣管是將口腔和鼻腔的空氣攜帶進(jìn)入肺的中空管。氣管癌堵塞或相鄰器官癌(如肺癌)侵襲，或軟骨軟化(環(huán)狀軟骨減弱)導(dǎo)致呼吸困難。在此實施例中，植入前檢查，通常進(jìn)行內(nèi)窺鏡鏡檢查以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置。然后將一導(dǎo)管或內(nèi)窺鏡穿過口腔放置，一個導(dǎo)引絲向前穿過阻塞處。然后。在放射學(xué)或內(nèi)窺鏡控制下，斯滕特氏印模精確地穿越狹窄部位放置。接著去除輸送導(dǎo)管留下斯滕特氏印模象三角架樣獨自支撐。植入后檢查，通常利用支氣管鏡，以證實植入的合適位置。本發(fā)明另一實施例，提供消除尿道阻塞的方法，包括向尿道內(nèi)植入一個尿道斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)表面包覆(或相反適于釋放)一種如上所述的抗-微管物質(zhì)或組合物，由此尿道阻塞得以消除。簡要地，尿道是穿過陰莖排空膀胱的管道。穿越前列腺部分的外尿道的狹窄，起因于前列腺肥大，幾乎60歲以上的每個男人均存在前列腺肥大，于是造成進(jìn)行性排尿困難。在此實施例中，植入前檢查，通常進(jìn)行內(nèi)窺鏡或尿道造影以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置，適宜位置是下末端的尿道括約肌之上，上部末端關(guān)閉使膀胱頸充盈，然后穿過陰莖開口放置一個內(nèi)窺鏡或?qū)Ч芗耙粋€導(dǎo)引絲向前穿過阻塞處。接著，一個輸送導(dǎo)管越過導(dǎo)引絲以便于斯滕特氏印模植入，隨后去除輸送導(dǎo)管，斯滕特氏印模在適當(dāng)?shù)奈恢脭U(kuò)張。植入后檢查，通常利用內(nèi)窺鏡或逆行性尿道造影，以證實植入的合適位置。本發(fā)明另一實施例，提供消除血管阻塞的方法，包括向血管內(nèi)植入一個血管斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)表面包覆(或相反適于釋放)一種如上所述的抗-微管物質(zhì)或組合物，由此血管阻塞得以消除。簡要地，植入片可放置到一批大的血管中，動脈和靜脈均可，用于預(yù)防血管成形術(shù)后的再狹窄，用于治療使用血管成形術(shù)有可能失敗的狹窄，以及用于治療手術(shù)-后狹窄(如，透析移植再狹窄)。適宜部位的代表性例子包括回腸動脈、腎動脈和冠脈、上腔靜脈，和透析移植。在一實施例中，首先進(jìn)行血管造影以確定斯滕特氏印模植入的部位。典型地通過一個導(dǎo)管向一動脈或靜脈注射不透X線的對照物然后拍x-線片而完成。然后將一導(dǎo)管經(jīng)穿刺或經(jīng)手術(shù)插入股動脈、肱動脈、股靜脈，或肱靜脈，并且在熒光鏡的引導(dǎo)下控制導(dǎo)管經(jīng)過血管系統(tǒng)進(jìn)入合適的血管，接著將斯滕特氏印模穿過狹窄處放置。植入后仍進(jìn)行血管造影，以證實植入的合適位置。再狹窄研究常用動物模型是大鼠頸動脈模型，其中通過外頸動脈引入的氣囊導(dǎo)管的管腔內(nèi)通道使頸總動脈的內(nèi)皮剝脫(Clowes等，Lab.Invest.49(2)208-215，1983)。2周時，由于平滑肌細(xì)胞收縮使頸動脈明顯變窄，但2～12周期間內(nèi)膜的加倍增厚導(dǎo)致腔徑變小。5.炎癥性腸道疾病使用本發(fā)明提供的物質(zhì)、組合物和方法，多種腸道炎癥性疾病得以治療或預(yù)防。炎癥性腸道疾病一般指一組病因不明的累及胃腸道的慢性炎癥性疾病。慢性IBD分為兩組潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病。在西歐和美國，每100,000人有6～8人患潰瘍性結(jié)腸炎。雖然疾病的原因尚未明了，但已提出與遺傳、感染、免疫和心理因素有關(guān)。在潰瘍性結(jié)腸炎，涉及結(jié)腸粘膜的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致粘膜表面潰瘍。常見中性粒細(xì)胞浸潤和反復(fù)的炎癥發(fā)作引起纖維化和結(jié)腸縮短。長期發(fā)作的潰瘍性結(jié)腸炎，表皮發(fā)育異常并最終惡性變?？肆_恩氏病以蔓延到小腸壁各層的慢性炎癥為特征。隨著疾病進(jìn)展，腸道變厚和腔出現(xiàn)狹窄。粘膜潰瘍出現(xiàn)和潰瘍可穿透粘膜下層和肌層形成瘺管和裂隙?？?微管物質(zhì)可以數(shù)種方式用于治療炎癥性腸道疾病。特別是，為了治療疾病，抗-微管物質(zhì)可向炎癥部位(或潛在的炎癥部位)給藥。適宜的抗-微管物質(zhì)已在上面詳細(xì)討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOPl45和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細(xì)討論的脂質(zhì)體形式給藥。研究IBD的理想模型應(yīng)是基本上與人所患疾病相同的自然發(fā)生或誘導(dǎo)的動物疾病。目前，只有兩種自然發(fā)生的小腸炎癥模型，均是在靈長類，尚未找到致病生物體。第一種，棉花-頂(cotton-top)胥(tamarin)，沒有相關(guān)明確病原體的自發(fā)性結(jié)腸炎高度流行，與人一樣，疾病過程自發(fā)地加重或緩解(Madara等，Gastroenterology8813-19，1985)。另一種自發(fā)性慢性結(jié)腸炎也出現(xiàn)在幼年的恒河猴獼猴(Adler等，Gastroenterology98A436，1990)。有許多試驗性誘導(dǎo)的結(jié)腸炎動物模型。在小鼠、大鼠、天竺鼠和兔子，通過硫酸多糖(角叉菜膠支鏈淀粉硫酸酯、葡聚糖硫酸酯)灌胃(Marcus和Watt，Lancet2489-490，1969)、直腸注射化學(xué)刺激劑(稀醋酸)(MacPherson和Pfeiffer，Digestion17135-150，1978)可誘發(fā)結(jié)腸炎和對二硝基氯苯(Glick和Falchuk.，Gut22120-125，1981)或硫酸三硝基苯(Rabin和Rogers，Gastroenterology7529-33，1978)的遲發(fā)性過敏反應(yīng)。由于IBD沒有病理基因組特征或特異性實驗診斷，抗-微管物質(zhì)對疾病的有效控制根據(jù)臨床判定?？?微管物質(zhì)對IBD的有效治療將達(dá)到至少下述之一的效果降低發(fā)作頻率、延長緩解期、(即，病人沒有癥狀的期間)和/或減輕相關(guān)癥狀(膿腫形成、瘺管形成、結(jié)腸癌、小腸穿孔、中毒性巨結(jié)腸、肢端關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊椎炎、膽石病、硬化性膽管炎、肝硬化、結(jié)節(jié)性紅斑、虹膜炎、眼色素層炎、鞏膜外層炎、靜脈血栓形成)的嚴(yán)重程度或期間。特異地，癥狀如血性腹瀉、腹痛、發(fā)熱、體重下降、直腸出血、里急后重、和腹脹將減輕或緩解?？?微管物質(zhì)以能達(dá)到上述終點效果的任何方式給藥。但優(yōu)選的方法包括口服、直腸或管周(peritubular)給藥(優(yōu)選地在超聲、CT、熒光鏡、MRI或內(nèi)窺鏡指導(dǎo)下；也可在腹腔手術(shù)時直接給藥)。在一些病人，也使用靜注、皮下注射或肌注方式治療疾病。對具有廣泛或腸外癥狀的病人，系統(tǒng)治療(如，口服、靜注、皮下注射、肌注)是適宜的。在一優(yōu)選的實施例，根據(jù)治療反應(yīng)和病人的耐受性紫杉醇可按每1～4周10～75mg/m2劑量口服。為治療嚴(yán)重急性加劇病人，可按照50～250mg/m2高劑量口服(或靜注)紫杉醇進(jìn)行“脈沖”治療?；季植恐蹦c疾病的病人(95％潰瘍性結(jié)腸炎的患者累及直腸)，局部用紫杉醇可以直腸霜或栓劑給藥。例如，含0.01％～10％重量紫杉醇的局部用霜劑可根據(jù)疾病的嚴(yán)重程度和病人對治療的反應(yīng)用藥。在一優(yōu)選的實施例中，含0.1％～1％重量紫杉醇的外用制劑可根據(jù)需要每天用藥。紫杉醇管外給藥(即，將藥物用于腸道外面或腸系膜表面)可用于治療疾病活動的腸道區(qū)域。在一優(yōu)選的實施例中，用在一定期間內(nèi)釋放的0.5％～20％重量紫杉醇負(fù)載到聚合物載體上(如在實施例中描述)以“糊劑”、“膜”或“包覆”形式用于腸系膜表面”。在所有的實施例中，其它抗-微管物質(zhì)可按照相當(dāng)于此劑量的效力和耐受性調(diào)整給藥。6.手術(shù)過程正如上面所提到的，抗-微管物質(zhì)和組合物可在多種手術(shù)過程中使用。例如，本發(fā)明的一個方面，為了將正常組織與惡變組織隔離，和/或預(yù)防疾病向周圍組織擴(kuò)散，可將一種抗-微管物質(zhì)或組合物(例如，以噴霧或膜的形式)包覆或噴霧一個腫瘤切除前的區(qū)域。本發(fā)明的另一方面，抗-微管物質(zhì)或組合物(如，噴霧形式)可通過內(nèi)窺鏡過程輸送以覆蓋腫瘤，或?qū)⒓膊∫种频剿Ｍ木植?。本發(fā)明還有一方面，用本發(fā)明抗-微管物質(zhì)或組合物包覆或適于釋放抗-微管物質(zhì)或組合物的手術(shù)篩網(wǎng)可用于使用手術(shù)篩網(wǎng)的任何手術(shù)過程中。例如，本發(fā)明的一個實施例中，負(fù)載了一種抗-微管組合物的手術(shù)篩網(wǎng)在腹部癌瘤切除術(shù)(如，結(jié)腸切除術(shù)后)中使用，以提供結(jié)構(gòu)支撐，和釋放一定量的抗-微管因子。本發(fā)明進(jìn)一步的方面是，提供腫瘤切除部位的治療方法，包括向切除術(shù)后的腫瘤切除邊緣給予一種上述抗-微管物質(zhì)或組合物，由此抑制腫瘤在這些部位復(fù)發(fā)。本發(fā)明的一個實施例中，抗-微管組合物(或單一抗-微管因子)直接向腫瘤切除術(shù)部位給藥(如，用抗-微管組合物或因子刷漿、刷涂或包覆腫瘤切除術(shù)邊緣)?；蛘?，在公知的手術(shù)糊劑給藥之前先將抗-微管組合物或因子摻入手術(shù)糊劑劑中。本發(fā)明特別優(yōu)選的實施例，抗-微管組合物在惡性腫瘤的部分乳房切除術(shù)，和神經(jīng)手術(shù)手術(shù)后應(yīng)用。本發(fā)明的一個方面，抗-微管組合物(如上所述)可用于各種腫瘤切除邊緣，包括例如，胸、頭和頸部腫瘤、結(jié)腸、腦和肝臟腫瘤。例如，本發(fā)明的一個實施例，抗-微管物質(zhì)或組合物可用于神經(jīng)腫瘤切除后的部位，由此抑制腫瘤的復(fù)發(fā)。簡要地，大腦是高度功能性定位器官；即，每一解剖區(qū)域特異地執(zhí)行著特殊功能。因此腦的病理學(xué)位置常較其類型更為重要。關(guān)鍵區(qū)域相對小的損害可較不重要區(qū)域的很大損害更具毀滅性。類似地，腦表面的損害可很容易地手術(shù)切除，而位于腦深部的同樣腫瘤可能不易切除(將不得不切開太多的致命結(jié)構(gòu)才能到達(dá))。還有，即使良性腫瘤也可能是危險的，原因有數(shù)種它們可能生長在關(guān)鍵區(qū)域并引起明顯的損害；盡管它們可經(jīng)手術(shù)切除而治愈，但手術(shù)不可能進(jìn)行；最終地，如果未加抑制的保留，它們將引起顱內(nèi)壓增高。頭顱是一個不能夠擴(kuò)大的封閉的腔。因此，如果某物質(zhì)在一個部位生長，那么另一部位的某物質(zhì)必定受到擠壓-結(jié)果是增加顱骨壓力或增加顱內(nèi)壓。如果這種狀況不加以治療，致命性結(jié)構(gòu)可能受到壓迫，導(dǎo)致死亡。中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)惡性腫瘤發(fā)生率為每100,000人8-16例。腦原發(fā)性惡性腫瘤的預(yù)后令人低沉的，即使進(jìn)行了手術(shù)切除，中等存活期小于一年。這些腫瘤，特別是神經(jīng)膠質(zhì)瘤，突出地是一種局部疾病，手術(shù)切除后它在原發(fā)灶2厘米的范圍內(nèi)復(fù)發(fā)?？捎帽景l(fā)明物質(zhì)、組合物和方法治療的腦腫瘤的代表性實例包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤(如退行性星形細(xì)胞瘤、多形惡性膠質(zhì)瘤、纖維狀細(xì)胞星形細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、室管膜瘤、粘液乳頭瘤(myxopapillary)室管膜瘤、亞室管膜瘤(subependymoma)、脈絡(luò)膜帕尼扎氏叢乳頭狀瘤)；神經(jīng)元腫瘤(如，成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤和成神經(jīng)管細(xì)胞瘤)；松果體腺體腫瘤(如成松果體細(xì)胞瘤和松果體細(xì)胞瘤)；腦脊膜腫瘤(如，腦脊膜瘤、血管外皮細(xì)胞瘤、腦脊膜肉瘤)；神經(jīng)鞘細(xì)胞腫瘤(如，schwanoma、neurolemma和神經(jīng)纖維瘤)；淋巴瘤(如，何杰金氏細(xì)胞和非何杰金氏細(xì)胞淋巴瘤(包括無數(shù)亞型，無論原發(fā)還是繼發(fā)))；畸形(malformative)腫瘤(如，craniopharyngioma、表皮樣囊腫、皮樣囊腫和膠樣囊腫)；和轉(zhuǎn)移的腫瘤(事實上可衍生自任何腫瘤，最常見來自肺、胸、乳腺、腎和胃腸道腫瘤)。適宜的抗-微管物質(zhì)已在上面詳細(xì)討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細(xì)討論的脂質(zhì)體形式給藥。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)是紫杉醇、喜樹堿和epothilone之外的物質(zhì)。7.手術(shù)粘連本發(fā)明其它發(fā)明，提供通過給予病人一種抗-微管物質(zhì)而治療和/或預(yù)防手術(shù)粘連的方法。簡要地，手術(shù)粘連形成是一個復(fù)雜的過程，其中正常狀態(tài)應(yīng)分離的機(jī)體組織生長在以一起。手術(shù)后粘連常發(fā)生在60％～90％的進(jìn)行了重大婦科手術(shù)的患者。手術(shù)創(chuàng)傷，作為組織干燥、局部缺血、熱傷害、感染或存在異物的結(jié)果，早已被認(rèn)為是形成組織粘連的刺激因素。粘連是手術(shù)治療失敗的主要原因并是引起腸梗阻和不育癥的主導(dǎo)原因。其它手術(shù)粘連并發(fā)癥包括慢性骨盆痛、尿道阻塞和排空機(jī)能障礙。一般地，粘連形成是一種炎癥反應(yīng)，反應(yīng)中炎癥因子釋放，增加血管通透性并導(dǎo)致纖維蛋白原流出和纖維沉積。這種沉積成為連接鄰接組織的基質(zhì)。成纖維細(xì)胞聚集、附著到基質(zhì)，膠原沉積和引發(fā)血管生成。如果術(shù)后4～5天內(nèi)能夠預(yù)防這種級聯(lián)反應(yīng)，則粘連形成將被抑制。如上所述，本發(fā)明提供治療和/或預(yù)防手術(shù)粘連的方法。使用多種動物模型以評價特定治療組合物或治療方案。簡要地，受到嚴(yán)重創(chuàng)傷的動物發(fā)生腹膜外粘連，所述創(chuàng)傷通常涉及兩個鄰接面。創(chuàng)傷可是機(jī)械性的，由于局部缺血或是引入異物的結(jié)果。機(jī)械損傷包括使腸道破裂(Choate等，Arch.Surg.88249-254，1964)和剝離或刮除腸壁外層(Gustavsson等，ActaChir.Scand.109327-333，1955)。將小腸主要大血管分為袢造成局部缺血(James等，J.Path.Bact.90279-287，1965)。可引入的異物包括滑石粉(Green等，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.133544-550，1970)、紗布綿拭(Lehman和Boys，Ann.Surg111427-435，1940)、毒性化學(xué)品(Chancy，Arch.Surg.601151-1153，1950)、細(xì)菌(Moin等，Am.J.Med.Sci.250675-679，1965)和糞便(Jackson，Surgery44507-518，1958)。目前，典型的粘連預(yù)防模型包括涉及刮擦兔子宮內(nèi)膜的兔子宮角模型(Linsky等，J.Reprod.Med.32(1)17-20，1987)，涉及子宮內(nèi)膜刮擦和血液供應(yīng)阻斷的兔子宮角、血液供應(yīng)阻斷改變模型(Wiseman等，J.InvestSurg.7527-532，1994)以及涉及切除腹膜壁斑片加上刮擦盲腸的兔盲腸側(cè)壁模型(Wiseman和Johns，F(xiàn)ertil.Steril.Suppl25s，1993)。適宜的抗-微管物質(zhì)已在上面詳細(xì)討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)，喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothiloneA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細(xì)討論的脂質(zhì)體形式給藥。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)是紫杉醇、喜樹堿和epothilone之外的物質(zhì)。使用本發(fā)明提供的物質(zhì)、組合物和方法，可以治療或預(yù)防多種手術(shù)粘連和手術(shù)并發(fā)癥。粘連形成或不需要的疤痕組織積聚/包裹使手術(shù)過程變得復(fù)雜。如上所述，事實上手術(shù)粘連使腹腔或盆腔的任何切開或內(nèi)窺鏡手術(shù)過程變得復(fù)雜。手術(shù)植入體的包裹覆也使乳房重建手術(shù)、關(guān)節(jié)置換手術(shù)、疝修補(bǔ)手術(shù)、如果血管移植手術(shù)，和神經(jīng)手術(shù)手術(shù)變得復(fù)雜。在任何情況，植入體被纖維結(jié)締組織囊包裹，折中或損害手術(shù)植入體的功能(如，乳腺植入體、人工關(guān)節(jié)、手術(shù)篩網(wǎng)、血管移植、硬腦脊膜修補(bǔ)片)。在糾正慢性竇炎或清除其它區(qū)域慢性炎癥(如，異物、感染(真菌，分直桿菌屬))的手術(shù)期間也發(fā)生慢性炎癥和疤痕化。抗-微管物質(zhì)以能達(dá)到上述終點的任何方式給藥。但優(yōu)選的方法包括管周(peritubular)給藥(或者手術(shù)時直接給藥或者在內(nèi)窺鏡、超聲、CT、MRI，或熒光鏡指導(dǎo)下給藥)；“包覆手術(shù)植入體”；和在手術(shù)部位放置一個藥物-洗脫性聚合物植入體。在一優(yōu)選的實施例中，用在一定期間內(nèi)釋放的0.5％～20％重量紫杉醇負(fù)載到聚合物載體上(如在下面的實施例中描述)并象“糊劑”、“膜”或“包覆”形式用于管周(腸系膜)表面，由此可以降低手術(shù)粘連發(fā)生率。紫杉醇-聚合物制劑可以“噴霧”形式使用，在內(nèi)窺鏡檢查過程中通過內(nèi)窺鏡的輸出端口施于腹腔腸系膜，和手術(shù)過程中處理的盆腔器官。在一特別優(yōu)選的實施例，特定組合物是0.1％～5％重量紫杉醇。在另一優(yōu)選的實施例中，含0.1％～20％重量紫杉醇的聚合物包衣用于手術(shù)植入體的表面(如，乳房植入體、人工關(guān)節(jié)、血管移植)以預(yù)防在植入體附近的囊化/不適合的疤痕形成。還有一優(yōu)選的實施例，含0.1％～20％重量紫杉醇的聚合物植入體直接用于手術(shù)部位(如，直接用于竇、胸腔、腹腔，或神經(jīng)手術(shù)手術(shù)部位)，由此降低炎癥復(fù)發(fā)、粘連形成或疤痕。在所有實施例中，其它的抗-微管物質(zhì)可按相當(dāng)于此劑量的效力和耐受性調(diào)整給藥。8.呼吸道慢性炎癥性疾病本發(fā)明的其它方面，抗-微管物質(zhì)(和組合物)可用于治療或預(yù)防疾病如呼吸道慢性炎癥性疾病。特別是，為了治療疾病，抗-微管物質(zhì)可施向炎癥部位(或潛在的炎癥部位)。適宜的抗-微管物質(zhì)已在上面詳細(xì)討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細(xì)討論的脂質(zhì)體形式給藥。在本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，抗-微管物質(zhì)或組合物可鼻內(nèi)給藥、經(jīng)吸入系統(tǒng)給藥、局部給藥(如，鼻息肉的情況)，或竇腔內(nèi)給藥。哮喘本發(fā)明的特定方面，抗-微管物質(zhì)可用于治療或預(yù)防哮喘。簡要地，哮喘是以反復(fù)發(fā)作的氣道阻塞為特征的狀態(tài)，哮喘可自發(fā)地或經(jīng)過治療而消除。盡管它的確切病因不明，但過度的支氣管收縮藥和炎癥反應(yīng)刺激物可使5％的人群發(fā)病?？?微管物質(zhì)對哮喘的有效治療將改變哮喘狀態(tài)的一種或多種病理特征，如降低炎癥細(xì)胞(T-細(xì)胞、桿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞)浸潤和活性，減少氣道上皮的增生和增厚、抑制氣道壁平滑肌細(xì)胞增生和高敏性、降低氣道腔粘液分泌、阻斷誘導(dǎo)和維持炎癥的炎癥性細(xì)胞因子(IL-3、IL-4、IL-5、GMSF)的活性，以及抑制氣道分泌腺體充血和肥大。臨床上，對哮喘的有效抗-微管治療將取得下述一種或多種效果降低癥狀嚴(yán)重程度、縮短發(fā)作時間、增加疾病緩解期的頻率和期間、預(yù)防永久性損傷和機(jī)能障礙以及預(yù)防呼吸困難、咳嗽和喘鳴的慢性進(jìn)程；同時改善缺氧、FEV1(一秒鐘用力呼氣量)、氣流阻力和低碳酸血癥/呼吸性鹼中毒，以及降低V∶Q(換氣∶血流)不匹配?？?微管物質(zhì)以能達(dá)到上述終點的任何方式給藥。但優(yōu)選的給藥方法包括吸入(如，通過劑量-計吸入器、霧化器，通過一個endothacheal管，吸入微粒)和系統(tǒng)治療(靜注、皮下注射或肌注或口服制劑)。系統(tǒng)治療用于患嚴(yán)重呼吸困難或不適宜吸入治療的的病人。使用能達(dá)到臨床或病理改善效果的最小劑量。例如，紫杉醇，根據(jù)反應(yīng)，紫杉醇可按每1～4周10～50mg/m2進(jìn)行慢性低劑量系統(tǒng)治療；對急性病人，可按照50～250mg/m2高劑量“脈沖”治療。對于吸入治療，0.01％～1％紫杉醇可通過上面提到的釋放載體/制劑直接吸入。這將直接向呼吸道釋放1～50mg/m2的紫杉醇。該劑量可根據(jù)反應(yīng)進(jìn)行滴定測量。其它抗-微管物質(zhì)可按相當(dāng)于此劑量的效力和耐受性調(diào)整給藥。慢性阻塞性肺病(COPD)COPD包括各種導(dǎo)致慢性呼吸道阻塞的狀況(慢性支氣管炎、喘息性支氣管炎、慢性阻塞性支氣管炎和肺氣腫)。這些狀況可引起嚴(yán)重的機(jī)能障礙，在美國居主要死亡原因之第四位。臨床上，均以呼吸困難、咳嗽、哮鳴、和呼吸道反復(fù)感染為特征。疾病表征包括FEV1降低、殘氣容積增加、V:Q不匹配和低氧癥。病理上，粘液分泌增加、粘液腺充血、蛋白酶(主要是彈性蛋白酶)活性增加、氣道炎癥和肺泡壁破壞。雖然有廣泛的病因(吸煙最為常見)，但上述任一癥狀、表征或病理過程的改善將對此產(chǎn)生有益影響；因此，對COPD的有效抗-微管治療是改變至少上述一個方面。抗-微管物質(zhì)的治療可按照前述哮喘的治療給藥吸入的紫杉醇按1～50mg/m2給藥，如果需要可以重復(fù)用藥；紫杉醇系統(tǒng)治療時，可按每1～4周10～50mg/m2慢性低劑量給藥；或者對急性病人按照50～250mg/m2高劑量“脈沖”給藥。其它抗-微管物質(zhì)可按臨床上相當(dāng)劑量給予。9.狹窄，贅生性疾病和梗阻如上所述，本發(fā)明提供治或預(yù)防多種與機(jī)體腔道阻塞有關(guān)疾病的方法，包括例如，血管疾病、贅生性阻塞、炎癥性疾病，和感染性疾病。例如，本發(fā)明一個方面是本發(fā)明所述多種抗-微管物質(zhì)和組合物可用于治療引起血管系統(tǒng)阻塞的血管疾病。此類疾病代表性的實例包括所有血管的動脈粥樣硬化(圍繞任何動脈、靜脈或移植物)，所述血管包括但不限于冠狀動脈、主動脈、髂動脈、頸總動脈、股淺動脈、腘動脈和移植吻合術(shù)部位血管；血管痙攣(如，冠脈痙攣和雷諾氏病)；再狹窄(原來進(jìn)行過如氣囊血管成形術(shù)、旁路手術(shù)、斯滕特氏印模植入和移植植入部位的血管阻塞)；炎癥性和自身免疫性疾病(如，顳動脈炎、結(jié)節(jié)性脈管炎)。簡要地，血管疾病如動脈粥樣硬化，白細(xì)胞，尤其是)單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞附著于血管內(nèi)皮細(xì)胞，特別是動脈分支處。附著于內(nèi)皮后，對化學(xué)刺激物反應(yīng)，白細(xì)胞穿過內(nèi)皮細(xì)胞基底膜遷移，與平滑肌細(xì)胞一起在動脈壁內(nèi)膜聚集。動脈粥樣硬化發(fā)展的最初損害是“脂質(zhì)條紋”。脂質(zhì)條紋中的單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞；巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞攝取脂質(zhì)和脂蛋白變?yōu)榕菽?xì)胞。隨著巨噬細(xì)胞聚集，覆在其上面的內(nèi)皮機(jī)械性破裂并被巨噬細(xì)胞釋放的氧化脂質(zhì)、氧衍生自由基和蛋白酶化學(xué)性改變。泡沫細(xì)胞侵蝕內(nèi)皮表面造成血管壁微小-潰瘍。潛在地形成血栓的內(nèi)皮下組織(如膠原和蛋白質(zhì))暴露于血流成分導(dǎo)致血小板粘附于破損的內(nèi)皮。血小板粘附和其它因素觸發(fā)生長因子包括PDGF、血小板刺激因子(PAF)、IL-1和IL-6的加工和向環(huán)境釋放。認(rèn)為旁分泌因子刺激血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)游移和增生。正常(無病)血管壁，VSMCs具有收縮表型和低指數(shù)有絲分裂活性。然而，在血小板、巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子和生長因子的影響下，VSMC發(fā)生表型改變，從成熟的收縮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為未成熟的分泌細(xì)胞。轉(zhuǎn)化后的VSMC在血管壁中層增生、游移進(jìn)入內(nèi)膜，在內(nèi)膜繼續(xù)增生并產(chǎn)生大量細(xì)胞外基質(zhì)。這使受累的血管損傷處轉(zhuǎn)化為纖維斑塊。被分泌型VSMC變得復(fù)雜的細(xì)胞外基質(zhì)包括膠原、彈力纖維、糖蛋白和糖胺聚糖，以膠原為粥樣斑細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分。彈力纖維和糖胺聚糖聯(lián)合脂蛋白也助于損害加重。纖維斑塊由包含平滑肌細(xì)胞的不同厚度密集的結(jié)締組織纖維帽和覆蓋的巨噬細(xì)胞組成。除了PDGF，IL-1和IL-6，血管壁浸潤細(xì)胞還產(chǎn)生其它致有絲分裂因子包括TGFβ、FGF、，糖蛋白G、5-羥色胺、血栓烷A2、去甲腎上腺素和抗血管緊張素II。這導(dǎo)致更多細(xì)胞聚集，更多細(xì)胞外基質(zhì)復(fù)雜化和更多脂質(zhì)聚集。動脈粥樣損害進(jìn)行性擴(kuò)大直到明顯侵占管腔。開始，血流通過管腔受阻只是在血流量需要增加時引起末梢組織局部缺血-以后隨著損害進(jìn)一步堵塞動脈，休息時也出現(xiàn)局部缺血。動脈粥樣硬化斑中的巨噬細(xì)胞釋放氧化脂質(zhì)、自由基和引起鄰近組織細(xì)胞損傷和壞死的膠原酶。損傷發(fā)展為一個枯斑芯并轉(zhuǎn)變?yōu)閺?fù)合斑。復(fù)合斑是可以脫落引起栓塞的不穩(wěn)定損傷斑；局部出血(損傷斑迅速膨脹導(dǎo)致血管腔阻塞由此繼發(fā)供應(yīng)損傷斑的血管滋養(yǎng)血管破裂)；或潰瘍和裂隙形成(形成血栓的枯斑芯暴露于血流產(chǎn)生局部血栓或末梢栓塞)。即使沒有后遺癥出現(xiàn)，附壁血栓可組織起來合并到損傷斑中，由此加速它的增大。進(jìn)一步，隨著纖維蛋白原和纖維蛋白酶局部濃度增加，刺激肌層血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)膜增生；此過程也最終導(dǎo)致血管腔更為狹窄。正常動脈的內(nèi)膜和肌層進(jìn)行氧合和由動脈腔或外膜血管滋養(yǎng)血管供應(yīng)養(yǎng)分。隨著動脈粥樣硬化損傷斑的發(fā)展，來自外膜血管滋養(yǎng)血管的微血管延伸進(jìn)入增厚的內(nèi)膜和肌層。該血管網(wǎng)隨著損傷斑的增大趨于更為廣泛并隨著斑的消失而消退。微血管出血可加速與動脈斷裂、潰瘍或栓塞有關(guān)的斑的突然膨脹和破裂。還有一個假說是，微血管血漿蛋白酶的漏出可吸引炎性細(xì)胞進(jìn)入?yún)^(qū)域浸潤，這些炎性細(xì)胞與動脈粥樣硬化斑的快速增大和相關(guān)并發(fā)癥(通過局部水腫和炎癥)有關(guān)。為了治療血管疾病，如上面所討論的，一種抗-微管物質(zhì)(有或沒有載體)可釋放到機(jī)體腔道的外部，或者通過機(jī)體腔道的外膜釋放到平滑肌細(xì)胞。在這方面特別優(yōu)選的抗-微管物質(zhì)包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothiloneA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)是紫杉醇、喜樹堿和epothilone之外的物質(zhì)。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)與聚合物載體一起作為組合物，或者以在前或在后詳細(xì)討論的脂質(zhì)體制劑釋放。本發(fā)明一些實施例中，抗-微管物質(zhì)或組合物可通過氣囊導(dǎo)管、口服、血管周給藥，通過斯滕特氏印模系統(tǒng)給藥。本發(fā)明的其它方面，本發(fā)明描述的抗-微管治療物質(zhì)或組合物可用于治療贅生性阻塞。簡要地，本發(fā)明所言“贅生性阻塞”，理解為包括機(jī)體管道任何贅生性(良性或惡性)阻塞，而不考慮管道的部位或惡變所屬組織學(xué)類型。代表性實例包括胃腸道疾病[如，口-咽喉癌腺癌、食管癌(鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、淋巴瘤、黑素瘤)、胃癌(腺癌、皮革狀胃、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、小腸腫瘤(腺瘤、平滑肌瘤、脂肪瘤、腺癌、淋巴瘤、類癌瘤)、結(jié)腸癌(腺癌)和肛門直腸癌]；膽道疾病(如，引起膽道阻塞的贅生物如胰腺癌(導(dǎo)管腺癌、小島細(xì)胞腫瘤、囊腺癌)、膽管癌和肝細(xì)胞癌)；肺部疾病(如，肺和/或氣管/支氣管癌(小細(xì)胞肺癌、非-小細(xì)胞肺癌))；女性生殖系統(tǒng)疾病(如，輸卵管惡性腫瘤、子宮癌、宮頸癌、陰道癌)；男性生殖系統(tǒng)疾病(如，睪丸癌、附睪癌、輸精管腫瘤、前列腺癌、良性前列腺肥大)；尿道疾病(如，腎細(xì)胞癌、腎盂腫瘤、尿液收集系統(tǒng)腫瘤如過渡型細(xì)胞癌、膀胱癌，和良性狹窄或惡性腫瘤引起的尿道阻塞)。作為一個實例，良性前列腺充血(BPH)是前列腺增大，特別在包繞輸尿管的腺體中央部分，這是對長時間雄性激素刺激反應(yīng)而出現(xiàn)的。它影響著大于80％的50歲以上的男性。增大引起穿過前列腺的輸尿管部分受壓，導(dǎo)致膀胱流出管道阻塞，即產(chǎn)生尿流需要異常高的膀胱壓。1980年，作為治療BPH的手段，美國進(jìn)行了367,000例跨尿道前列腺切除術(shù)。其它治療包括藥物、跨尿道括約肌切開術(shù)、跨尿道激光或微波治療、跨尿道高溫治療、跨尿道超聲、跨尿道微波、跨尿道高溫、跨尿道超聲和手術(shù)切除。所有療法均有缺點包括括約肌機(jī)能障礙導(dǎo)致尿失禁和狹窄形成。為了治療贅生性疾病，廣泛的各種治療物質(zhì)(有或沒有聚合物載體)可釋放到機(jī)體腔道的外部，或通過機(jī)體腔道外膜釋放到平滑肌細(xì)胞。例如，在一優(yōu)選的實施例中，在超聲指導(dǎo)下通過跨尿道途徑(或者兩者擇一地transperineally)將一根探針或?qū)Ч芤氲脚c尿道鄰接的前列腺內(nèi)并通過探針或?qū)Ч茚尫胖委熚镔|(zhì)，優(yōu)選地在腺體的數(shù)個象限，特別是輸尿管周圍。探針或?qū)Ч芤部芍苯釉谟|診或內(nèi)窺鏡、熒光鏡、CT或MRI的指導(dǎo)下放入，并間歇給藥。作為替代方法，通過導(dǎo)管或套管針放置小丸也可完成給藥。上述過程可單獨完成或與斯藤特氏印模植入尿道前列腺部結(jié)合完成。通過避免尿道器械或損傷尿道，括約肌機(jī)能保留完整無損，避免尿失禁，和極少可能狹窄。本發(fā)明其它方面，提供治療或預(yù)防影響或引起機(jī)體腔道阻塞的炎癥性疾病的方法。炎癥性疾病包括導(dǎo)致各種機(jī)體腔道阻塞的急性或慢性炎癥。代表性例子包括結(jié)節(jié)性脈管炎(如，巨細(xì)胞動脈炎(顳動脈炎、高安氏病)、結(jié)節(jié)性多發(fā)脈管炎、過敏性脈管炎和肉芽腫病(Churg-Strauss病)、多發(fā)脈管炎重疊綜合征、過敏性結(jié)節(jié)性脈管炎(Henoch-Schonlein紫癜)、血清病、藥物引起的結(jié)節(jié)性脈管炎、感染性結(jié)節(jié)性脈管炎、贅生性結(jié)節(jié)性脈管炎、與結(jié)締組織疾病有關(guān)的結(jié)節(jié)性脈管炎、與先天性補(bǔ)體系統(tǒng)缺陷有關(guān)的結(jié)節(jié)性脈管炎)、韋格內(nèi)氏肉芽腫病、kawasaki’s病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)節(jié)性脈管炎、血栓閉塞性脈管炎和系統(tǒng)性硬化)；胃腸道疾病(例如，胰腺炎、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、潰瘍性直腸炎、原發(fā)性硬化性膽管炎、各種原因包括自發(fā)性引起的良性狹窄(例如，膽道、食管、十二指腸、小腸或結(jié)腸的狹窄)；呼吸道疾病(如哮喘、過敏性肺炎、石棉肺、矽肺，和其它形式的肺炎、慢性支氣管炎和慢性阻塞性氣道疾病)；鼻淚管疾病(例如，各種原因包括原發(fā)引起的狹窄)；以及咽鼓管疾病(各種原因包括原發(fā)引起的狹窄)。為了治療炎癥性疾病，如上面所討論的，一種抗-微管物質(zhì)(有或沒有載體)可向機(jī)體腔道的外部釋放，或者通過機(jī)體腔道外膜向平滑肌細(xì)胞釋放。本發(fā)明還有其它方面，提供治療或預(yù)防與機(jī)體腔道阻塞有關(guān)或是其成因的感染性疾病。簡要地，感染性疾病包括導(dǎo)致機(jī)體腔道阻塞的數(shù)種急性和慢性感染過程，所述機(jī)體腔道阻塞包括例如，男性生殖道阻塞(如，尿道炎、附睪炎、前列腺炎)；女性生殖道阻塞(如，陰道炎、子宮頸炎、盆腔炎癥性疾病(如結(jié)核、淋病球菌、chlamydia、腸球菌和梅毒))；尿道阻塞(如，膀胱炎、尿道炎)；呼吸道阻塞(如，慢性支氣管炎、結(jié)核、其它分支桿菌感染(MAI等)、厭氧菌感染、霉菌感染和寄生蟲感染)；和心血管阻塞(霉菌性動脈瘤和感染性心內(nèi)膜炎)。為治療感染性疾病，如上面所討論的，廣泛的各種治療物質(zhì)(有或沒有載體)可釋放到機(jī)體腔道外部，或通過機(jī)體腔道外膜釋放到平滑肌細(xì)胞。在這方面特別優(yōu)選的治療物質(zhì)包括上面討論的抗-微管物質(zhì)。10.移植排斥前述抗-微管物質(zhì)和組合物同樣地可用于治療或預(yù)防移植排斥。簡要地，慢性移植/器官排斥兩種主要組織學(xué)表現(xiàn)是炎癥和動脈粥樣硬化。如同心移植(Johnson等，J.HeartTransplantation8349，1989)、肝移植(Demetris等，Am.J.Pathol118151，1985)和肺移植(Burke等，LancetI5171986)一樣，在長-存活期的腎同種移植物可以觀察到neointimal充血(Hume等，J.Clin.Invest.34327，1955；Busch等，Humanpathol.2253，1971)。由于心肌依賴于冠脈血流，心臟移植對腔的縮小極為敏感。許多動物模型已經(jīng)用于慢性心臟同種移植物排斥的研究。Lewis-F344大鼠心臟移植術(shù)模型產(chǎn)生以動脈粥樣硬化損傷形成為特征的心臟同種移植物慢性排斥。該模型是有用的，因為超過80％的接受者存活3周多，90％顯示冠脈初期損傷(Adams等，Transplantation531115-1119，1992)。除了顯示高的死亡率和重度損傷，由于該系統(tǒng)不需要免疫抑制劑，所以炎癥發(fā)展階段相當(dāng)容易識別。盡管單核細(xì)胞浸潤的程度和壞死更為嚴(yán)重，但該模型中動脈損傷與臨床移植動脈粥樣硬化極為相似。對移植排斥的有效抗-微管治療應(yīng)取得至少下述之一效果(i)延長移植的生命，(ii)減輕與免疫抑制治療有關(guān)的副作用，和(iii)降低與移植術(shù)有關(guān)的加速的動脈粥樣硬化。適宜的治療移植排斥的抗-微管物質(zhì)包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)與聚合物載體一起作為組合物，或者以在前或在后詳細(xì)討論的脂質(zhì)體制劑釋放?？刮⒐芪镔|(zhì)以能達(dá)到上述終點的任何方式給藥。但優(yōu)選的方法包括口服或靜注、皮下或肌內(nèi)注射?？刮⒐芪镔|(zhì)可按慢性低治療量給藥以預(yù)防慢性移植排斥或用較高劑量以預(yù)防急性移植排斥。例如，使用紫杉醇，根據(jù)治療反應(yīng)每1～4周以10～50mg/m2的紫杉醇慢性低劑量治療；按每1～21天50～250mg/m2高劑量“脈沖”治療，如果需要可重復(fù)6個循環(huán)。其它抗微管物質(zhì)可按藥物效力和耐受性調(diào)整為相當(dāng)劑量給藥。11.系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是病因不明的以多器官系統(tǒng)炎癥為特征的疾病，所述炎癥與產(chǎn)生與細(xì)胞核、細(xì)胞漿和細(xì)胞膜抗原反應(yīng)的抗體有關(guān)。SLE是十分常見的疾病，在某些人群以高達(dá)每2500中1人患病的比例流行(Michet等，MayoClini.Proc.60105，1985)。SLE主要在女性發(fā)病，10歲到64歲女性中發(fā)病率為每700名有1人患病，且女性與男性發(fā)病率比值為9∶1。易感人群SLE平均年發(fā)生率為每100,000人約6～35新病例發(fā)生。SLE表現(xiàn)為多因素引發(fā)的綜合病癥，由遺傳、激素和環(huán)境因子之間相互作用協(xié)調(diào)激活輔助T和B細(xì)胞從而導(dǎo)致分泌數(shù)種自體抗體。SLE常被劃分為自身免疫性疾病，以直接的特別針對核抗原(抗核抗體-ANAs)和磷脂的自體抗體數(shù)量增加為特征。20～40％的狼瘡患者存在抗磷脂抗體并已發(fā)現(xiàn)與一定數(shù)量的陰離子磷脂起反應(yīng)。SLE形態(tài)學(xué)變化差異極大，反映患者個體的臨床表現(xiàn)和疾病過程的差異性。最具特征性損害是由免疫復(fù)合物沉積引起，并于血管、腎、結(jié)締組織和皮膚發(fā)現(xiàn)免疫復(fù)合物。盡管皮膚和肌肉最常受累，但涉及小的動脈和小動脈的急性壞死性結(jié)節(jié)性脈管炎可存在于任何組織。受到小血管結(jié)節(jié)性動脈炎累及的器官，最早損害通常以粒細(xì)胞浸潤和動脈周紅斑為特征。纖維蛋白元在血管壁沉積也是動脈炎的特征。慢性階段，血管發(fā)生纖維性增厚與管腔變細(xì)。在脾臟，血管損害涉及中央動脈并以明顯的血管周纖維化為特征，產(chǎn)生所謂的洋蔥皮損害。治療SLE適宜的抗-微管物質(zhì)包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹堿、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘并(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應(yīng)抗體、微管積聚促進(jìn)蛋白(紫杉酚-樣蛋白質(zhì)，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態(tài)、胰島素(100nmol/L)或谷酰胺(10nmol/L)引起細(xì)胞腫脹、結(jié)合動力蛋白、赤霉素、XCHO1(驅(qū)動蛋白-樣蛋白質(zhì))、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細(xì)胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩沖液、三硝基甲苯X-100微管穩(wěn)定緩沖液、微管聯(lián)系蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細(xì)胞質(zhì)(例如，組蛋白H1，髓磷脂鹼蛋白和著絲點)、內(nèi)源性微管結(jié)構(gòu)(例如，基因絲結(jié)構(gòu)，填充物和GTP帽)、穩(wěn)定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細(xì)討論的脂質(zhì)體制劑給藥。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)是紫杉醇、喜樹堿和epothilone之外的物質(zhì)。在一些實施例中，抗-微管物質(zhì)與聚合物載體一起作為組合物形式釋放，或者以在前或在后詳細(xì)討論過的脂質(zhì)體形式釋放。本發(fā)明特別優(yōu)選的實施例中，抗-微管物質(zhì)或組合物可鼻內(nèi)給藥、經(jīng)吸入系統(tǒng)給藥、或局部給藥(如，在鼻息肉的情況)。制劑和給藥如上面所提到的，本發(fā)明抗-微管物質(zhì)可制備成各種形式(如，微球、糊劑、膜、噴霧、洗液、霜、凝膠，等)。更進(jìn)一步，本發(fā)明組合物可制備成含多于一種抗-微管物質(zhì)，含有各種其它化合物，具有特定物理特性(如，彈性、特定熔點，或特定釋放速率)制劑。本發(fā)明一些實施例中，為了達(dá)到所需效果，組合物可聯(lián)合用藥(如，為取得既快速又慢速或延長釋放一種或多種抗-微管物質(zhì)的效果，數(shù)種微球制劑可以聯(lián)合)?？?微管物質(zhì)可單獨，或與藥學(xué)或生理學(xué)適宜載體、賦型劑或稀釋劑結(jié)合形式給藥。一般地，載體應(yīng)當(dāng)在所使用的劑量和濃度對接受治療者無毒。通常，這種組合物制劑需要使治療物質(zhì)與緩沖液、抗氧化劑如抗壞血酸、低分子量(小于10個殘基)多肽、氨基酸、碳水化物如葡萄糖或葡聚糖、螫合劑如EDTA、谷胱甘肽和其它穩(wěn)定劑與賦形劑聯(lián)合。與非特異血清白蛋白混合的中性緩沖等滲液或生理鹽水是示范性適宜的稀釋劑。如上面提到的，本發(fā)明抗-微管物質(zhì)、組合物，或這里所提供的藥學(xué)組合物可制備成用于各種不同途徑給藥，包括例如，局部給予炎癥部位、口服、直腸、顱內(nèi)、鞘內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、靜注、皮下、腹膜、肌注、舌下、膀胱內(nèi)給藥。其它代表性給藥途徑包括直接(優(yōu)選在超聲、CT、熒光鏡、MRI或內(nèi)窺鏡指導(dǎo)下)向疾病部位給藥。本發(fā)明治療物質(zhì)、治療組合物和藥學(xué)組合物可與提供材料使用注意事項的包裝材料一起放置于容器內(nèi)。一般地，所述注意事項包括描述試劑濃度的明確表達(dá)，以及在一定實施例中，對于重新組成抗-微管物質(zhì)、抗-微管組合物或藥學(xué)組合物所必要的賦型劑組分或稀釋劑(如，水、生理鹽水或PBS)的相對用量。下面的實施例以例證方式提供，但不局限于此。實施例如上面所討論的，慢性炎癥是以白細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞，和漿細(xì)胞)組織浸潤、炎性細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物(活性氧類、組織降解酶如金屬蛋白酶)組織破壞和結(jié)締組織反復(fù)試圖替代(血管生成和纖維變性)為特征的過程。為了評價抗-微管物質(zhì)對于慢性炎癥的效力，以下述病理學(xué)/生物學(xué)為終點(1)抑制引發(fā)炎癥級聯(lián)的白細(xì)胞反應(yīng)(巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和T細(xì)胞)；(2)抑制間質(zhì)細(xì)胞(成纖維細(xì)胞、滑膜細(xì)胞，等增生)；(3)抑制引起組織破壞的基質(zhì)金屬蛋白酶產(chǎn)生/活性；(4)阻斷可增強(qiáng)炎癥反應(yīng)和提供纖維組織生長和發(fā)展所必需代謝支持的血管生成；和(5)所有這些必須達(dá)到而對正常實質(zhì)細(xì)胞基本沒有實質(zhì)毒性或不會損害基質(zhì)組分(如，膠原和蛋白聚糖)的正常合成。正如下面詳細(xì)陳述，檢測了穩(wěn)定微管物質(zhì)如，例如，紫杉醇在數(shù)個組織和炎癥疾病狀態(tài)的活性。這些物質(zhì)顯示出改變許多上述疾病參數(shù)的效力。實施例1抗-微管物質(zhì)對中性粒細(xì)胞活性的影響本實施例描述抗-微管物質(zhì)對受調(diào)理CPPD結(jié)晶或受調(diào)理酵母多糖刺激的中性粒細(xì)胞反應(yīng)的作用。如下實驗所闡述，通過測定中性粒細(xì)胞對血漿調(diào)理過的微晶或酵母多糖反應(yīng)的化學(xué)螢光、過氧化物陰離子生成和脫粒，表明抗-微管物質(zhì)是微粒-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞活化的強(qiáng)的抑制劑。A.材料和方法研究全部使用pH7.4的Hanks緩沖生理鹽水溶液(HBSS)。除非另外聲明，所有化學(xué)藥品購自希格瑪化學(xué)制劑公司(SigmaChemicalCo)(St.Louis，Mo)。除非另外聲明，所有實驗在37℃進(jìn)行。1.結(jié)晶的制備和特性制備CPPD(三斜晶系的)結(jié)晶。結(jié)晶大小分布是約33％小于10μm，58％在10與20μm之間和9％大于20μm。在上述條件下制備的無致熱原結(jié)晶和在無菌、無致熱原條件下生產(chǎn)的結(jié)晶，與在正常、未滅菌實驗室條件下生產(chǎn)的結(jié)晶產(chǎn)生同樣數(shù)量的中性粒細(xì)胞反應(yīng)。2.結(jié)晶和酵母多糖的調(diào)理所有研究在紫杉醇存在時中性粒細(xì)胞對結(jié)晶或酵母多糖反應(yīng)的實驗，是在使用血漿調(diào)理的CPPD或酵母多糖的條件下進(jìn)行。用50％肝素化血漿以每毫升50％血漿75mgCPPD或12mg酵母多糖的濃度調(diào)理結(jié)晶或酵母多糖。結(jié)晶或酵母多糖與血漿在37℃孵育30分鐘，然后用過量的HBSS沖洗。3.中性粒細(xì)胞制備中性粒細(xì)胞從枸櫞酸抗凝人全血新近采集制備。簡要地，400ml血與80ml4％葡聚糖T500(PhamaciaLKB，BiotechnologyABUppsala，Sweden)在HBSS中混合并放置1小時。連續(xù)采集血漿，5ml用于盛有5mlFicollpaque(Phamacia)的15ml聚乙烯管(Coming，NY)中。500轉(zhuǎn)離心30分鐘，洗滌通過20秒低滲震蕩去除了紅細(xì)胞的中性粒細(xì)胞團(tuán)。用HBSS重新懸浮中性粒細(xì)胞，冰中保存并在3小時內(nèi)用于實驗。中性粒細(xì)胞活性和純度大于90％。4.用抗-微管物質(zhì)孵育中性粒細(xì)胞(a)紫杉醇每次實驗前用二甲基亞砜(DMSO)新鮮配制12mM紫杉醇原液。用DMSO將此原液稀釋成濃度范圍1～10mM的溶液。在中度渦旋中將稀釋后的紫杉醇溶液等體積加到每毫升5,000,000個細(xì)胞的中性粒細(xì)胞液中使在0.5％終濃度的DNSO中濃度為0～50μM。在加入結(jié)晶或酵母多糖之前，細(xì)胞于33℃孵育20分鐘然后在37℃孵育10分鐘。(b)氟化鋁用HBSS新鮮配制1M氟化鋁(ALF3)原液。用HBSS將原液稀釋成濃度范圍5～100mM的溶液。將稀釋后的ALF3溶液等體積加到每毫升5,000,000個細(xì)胞的中性粒細(xì)胞液中并在37℃孵育15分鐘。加入魯米諾(Luminol)(1μM)和然后加入20μl調(diào)理的酵母多糖(終濃度＝1mg/ml)用以激活細(xì)胞。(c)甘氨酸乙酯用HBSS新鮮配制100mM甘氨酸乙酯原液。用HBSS將原液稀釋成濃度范圍0.5～10mM的溶液。將稀釋后的甘氨酸乙酯溶液等體積(50μl)加到每毫升5,000,000個細(xì)胞的中性粒細(xì)胞液中并在37℃孵育15分鐘。加入魯米諾(1μM)和然后加入20μl調(diào)理酵母多糖(終濃度＝1mg/ml)用以激活細(xì)胞。(d)LY290181用HBSS新鮮配制100μMLY290181原液。用HBSS將原液稀釋成濃度范圍0.5～50μM的溶液。將稀釋后的LY290181溶液等體積(50μl)加到每毫升5,000,000個細(xì)胞的中性粒細(xì)胞液中并在37℃孵育15分鐘。加入魯米諾(1μM)和然后加入20μl調(diào)理酵母多糖(終濃度＝1mg/ml)用以激活細(xì)胞。5.化學(xué)螢光分析所有化學(xué)螢光研究使用CPPD(50mg/ml)在細(xì)胞濃度5,000,000個細(xì)胞/ml的HBSS溶液中進(jìn)行。所有實驗中，在1.5ml帶蓋Eppendorf管中，將0.5ml細(xì)胞加入到25mgCPPD或0.5mg酵母多糖。加入溶解了10μl魯米諾的25％DMSOHBSS溶液使終濃度為1μM，混合樣本以使結(jié)晶或酵母多糖激發(fā)中性粒細(xì)胞活性?；瘜W(xué)螢光分析使用LKB發(fā)光計(型號1250)的監(jiān)測器在37℃檢測20分鐘，測定前即時搖動使結(jié)晶或酵母多糖重新懸浮。對照管含有細(xì)胞、藥物和魯米諾(不含結(jié)晶)。6.過氧化物陰離子生成使用過氧化物歧化酶可抑制性還原細(xì)胞色素C分析方法測定過氧化物陰離子濃度。簡要地，25mg結(jié)晶或0.5mg酵母多糖放入1.5ml帶蓋Eppendorf管中并加熱到37℃。在37℃將0.5ml細(xì)胞與細(xì)胞鐵色素C(終濃度為1.2mg/ml)一起加入，搖動加蓋的小管以激活細(xì)胞。在適當(dāng)時間將小管以10,000g離心10秒種，收集上清液測定分析550nm吸收度。每毫升含600單位超氧歧化酶的對照管按相同條件制備。7.中性粒細(xì)胞脫粒分析含有或者25mgCPPD或者1mg酵母多糖的1毫升和0.5毫升Eppendorf管預(yù)熱到37℃。在37℃加入細(xì)胞0.5ml，接著劇烈振蕩以激發(fā)反應(yīng)。適當(dāng)時間，將小管以10,000g離心10秒種，取0.4ml上清液儲存于-20℃供以后分析用。通過溶壁微球菌懸浮液在450nm吸收度下降測定溶菌酶。簡要地，溶壁微球菌以0.1mg/ml懸浮于pH6.2的65mM磷酸鉀緩沖液中，通過稀釋調(diào)整到450nm吸收度為0.7個單位。結(jié)晶(或酵母多糖)和細(xì)胞上層清液(100μl)加入2.5ml微球菌懸浮液，檢測吸收度的降低。制備范圍在0～2000單位/ml的溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品(雞蛋白)并繪制不同濃度溶菌酶在450nm吸收度下降率的標(biāo)準(zhǔn)曲線。伴隨聯(lián)茴香胺氧化于450nm吸收的增加測定髓過氧化物酶(MPO)活性。通過超聲處理將7.8mg聯(lián)茴香胺溶于100ml0.1M枸櫞酸緩沖液，pH5.5，濃度3.2mM。往1ml比色杯中，加入0.89ml聯(lián)茴香胺溶液，然后加入50μl1％三硝基甲苯x100、10μl0.05％過氧化氫水溶液和50μl結(jié)晶-細(xì)胞上清液。根據(jù)每分種吸收度(450nm)的變化，Δ450，測定MPO活性，使用下面的公式氧化聯(lián)茴香胺(nmol/分)＝50×Δ4508.中性粒細(xì)胞生存性為了解抗-微管物質(zhì)對中性粒細(xì)胞生存性的作用，測定了細(xì)胞漿標(biāo)志酶，乳酸脫氫酶(LDH)的釋放。脫粒實驗使用的含有細(xì)胞和藥物(不含結(jié)晶)對照管也用于LDH分析。B.結(jié)果所有實驗使用Studentst-檢驗進(jìn)行顯著性統(tǒng)計，p＜0.05為具有顯著性。所示誤差棒表示n個數(shù)值給出平均值的標(biāo)準(zhǔn)差。1.中性粒細(xì)胞生存性(a)紫杉醇用46μM紫杉醇在37℃處理1小時的中性粒細(xì)胞顯示出LDH釋放水平(一般小于總量的5％)與對照相比無任何增加，說明紫杉醇沒有引起細(xì)胞死亡。(b)氟化鋁用5～100mM濃度范圍的氟化鋁在37℃處理1小時的中性粒細(xì)胞顯示出LDH釋放水平與對照相比無任何增加，說明氟化鋁沒有引起細(xì)胞死亡。(c)甘氨酸乙酯用0.5～20mM濃度范圍的甘氨酸乙酯在37℃處理1小時的中性粒細(xì)胞顯示出LDH釋放水平與對照相比無任何增加，說明甘氨酸乙酯沒有引起細(xì)胞死亡。2.化學(xué)熒光(a)紫杉醇如圖1A、1B和2A分別所示，28μM紫杉醇對血漿調(diào)理的CPPD和血漿調(diào)理的酵母多糖-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光具有強(qiáng)的抑制作用。對CPPD和酵母多糖化學(xué)熒光反應(yīng)抑制高峰分別是52％(+/-12％)和45％(+/-11％)。28μM紫杉醇對血漿調(diào)理的CPPD和血漿調(diào)理的酵母多糖-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光的抑制作用在3～16分鐘的所有時間點均具有顯著性(圖1和圖4A)。圖1A和1B顯示紫杉醇對血漿調(diào)理CPPD-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光抑制作用的濃度依賴性。所有實驗的對照樣本從未產(chǎn)生大于5mV的化學(xué)熒光值并且加入實驗使用的各個濃度紫杉醇對對照樣本化學(xué)熒光值無影響。(b)氟化鋁如圖1C所示，5～100mM濃度的氟化鋁對血漿調(diào)理酵母多糖-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光具有強(qiáng)的抑制作用。該圖顯示出ALF3抑制血漿調(diào)理酵母多糖-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光的濃度依賴性。加入實驗使用的各個濃度ALF3對對照樣本化學(xué)熒光值無影響。(C)甘氨酸乙酯如圖1D所示，0.5～20mM濃度的甘氨酸乙酯對血漿調(diào)理酵母多糖-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光具有強(qiáng)的抑制作用。該圖顯示出甘氨酸乙酯抑制血漿調(diào)理酵母多糖-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光的濃度依賴性。加入實驗使用的各個濃度甘氨酸乙酯對對照樣本化學(xué)熒光值無影響。(d)LY290181如圖1E所示，0.5～50μM濃度的LY290181對血漿調(diào)理酵母多糖-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光具有強(qiáng)的抑制作用。該圖顯示出LY290181抑制血漿調(diào)理酵母多糖-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞化學(xué)熒光的濃度依賴性。加入實驗使用的各個濃度LY290181對對照樣本化學(xué)熒光值無影響。3.過氧化物生成通過過氧化物歧化酶(SOD)可抑制性還原細(xì)胞色素C測定血漿調(diào)理CPPD結(jié)晶誘導(dǎo)-過氧化物陰離子生成的時間過程用圖3表示。用28μM紫杉醇處理的細(xì)胞在所有時間過氧化物生成量均下降。如圖3A所示，在所有時間的下降均具有顯著性。圖3B顯示抑制作用的濃度依賴性。調(diào)理酵母多糖(圖4B)對過氧化物陰離子生成的刺激作用顯示出與CPPD-誘導(dǎo)激活作用相似的時間過程。圖4B所示，28μM紫杉醇對酵母多糖-誘導(dǎo)過氧化物陰離子生成的抑制作用沒有對CPPD激活作用的抑制那么明顯，但在所有時間的抑制作用均具有顯著性。用17μMLY290181處理CPPD-誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞也產(chǎn)生降低過氧化物生成量的作用(圖3C)。4.中性粒細(xì)胞脫粒由血漿調(diào)理的CPPD結(jié)晶-誘導(dǎo)髓過氧化物酶和溶菌酶的釋放或血漿調(diào)理酵母多糖-誘導(dǎo)髓過氧化物酶的釋放檢測中性粒細(xì)胞脫粒。當(dāng)用血漿包覆的CPPD結(jié)晶刺激中性粒細(xì)胞時，顯示出有足夠數(shù)量的兩種酶釋入細(xì)胞外間質(zhì)，而不需要另外向細(xì)胞中加入細(xì)胞松弛素B。圖5和圖2分別表示MPO和溶菌酶從血漿-包覆CPPD刺激的中性粒細(xì)胞中釋放的時間過程。圖5A表示紫杉醇抑制結(jié)晶-細(xì)胞孵育開始9分鐘內(nèi)髓過氧化物酶自血漿調(diào)理CPPD激活的中性粒細(xì)胞中的釋放。如圖5A所示，在所有時間紫杉醇顯著性地抑制CPPD-誘導(dǎo)的髓過氧化物酶的釋放。圖5B表示紫杉醇對CPPD-誘導(dǎo)髓過氧化物酶釋放抑制作用的濃度依賴性。如圖2所示，28μM紫杉醇減少溶菌酶釋放并且此脫粒抑制作用在所有時間均有顯著性。調(diào)理酵母多糖刺激的中性粒細(xì)胞僅有少量MPO和溶菌酶釋放。盡管這些酶的水平低，但檢測到28μM紫杉醇存在時孵育9分鐘后MPO釋放50％抑制是具有統(tǒng)計學(xué)顯著性(p＜0.05)的(數(shù)據(jù)沒有顯示)。用17μMLY290181處理CPPD結(jié)晶-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞降低了溶菌酶和髓過氧化物酶自細(xì)胞的釋放(圖5C和5D)。C.討論這些實驗表明紫杉醇和其它抗-微管物質(zhì)是結(jié)晶-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞活化的強(qiáng)抑制劑。此外，在中性粒細(xì)胞對另一特異激活劑，調(diào)理后酵母多糖，的反應(yīng)中所顯示出的相似抑制水平可以看出，紫杉醇和其它抗-微管物質(zhì)的抑制活性不局限于中性粒細(xì)胞對結(jié)晶的反應(yīng)。這也表明紫杉醇、氟化鋁、甘氨酸乙酯和LY290181是對酵母多糖-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞活化的強(qiáng)抑制劑而不引起細(xì)胞死亡。LY290181顯示出降低過氧化物陰離子生成和CPPD結(jié)晶-誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞脫粒作用。實施例2T細(xì)胞對抗原刺激反應(yīng)為了測定紫杉醇是否影響T-細(xì)胞對刺激物反應(yīng)的活化作用，使用髓磷脂堿性蛋白多肽，GP68-88或者植物凝血素，伴刀豆球蛋白(伴刀豆球蛋白)，在不含紫杉醇或含遞增濃度微紫杉醇的膠束制劑下刺激TR1T-細(xì)胞克隆48小時。用多肽或伴刀豆球蛋白開始刺激細(xì)胞或刺激后24小加入紫杉醇。測定摻入的氚標(biāo)記胸腺嘧啶核甙作為測量T-細(xì)胞對多肽或伴刀豆球蛋白刺激反應(yīng)增生的指標(biāo)。結(jié)果表明，多肽GP68-88和伴刀豆球蛋白刺激T-細(xì)胞增加。在對照用聚合物微膠粒存在下，對兩種激動劑反應(yīng)的T-細(xì)胞刺激無變化。然而，用紫杉醇微膠粒處理，無論開始還是刺激后24小時，T細(xì)胞反應(yīng)呈濃度依賴性降低。在兩種情況下，0.02μM紫杉醇完全抑制T-細(xì)胞增生(圖79)。這些數(shù)據(jù)表明，紫杉醇是抗原-誘導(dǎo)刺激T-細(xì)胞增生的有力抑制劑。實施例3紫杉醇對滑膜細(xì)胞增生作用的體外研究進(jìn)行兩個實驗以評價不同濃度紫杉醇對體外氚標(biāo)記胸腺嘧啶核苷摻入(測試滑膜細(xì)胞DNA合成)和細(xì)胞增生的影響。A.材料與方法1.3H-胸腺嘧啶核苷摻入滑膜細(xì)胞滑膜細(xì)胞與不同濃度(10-5M，10-6M，10-7，和10-8M)紫杉醇體外連續(xù)孵育6或24小時。在這些時間點，將1×10-6cpm的3H-胸腺嘧啶核苷加入細(xì)胞培養(yǎng)基中并于37℃孵育2小時。將細(xì)胞置入細(xì)胞收集器，沖洗通過濾膜，切下濾膜，測定濾膜切片中所含射線量。一旦確定了摻入細(xì)胞的氚標(biāo)記胸腺嘧啶核苷的量，將其用于測定細(xì)胞增生速率。實驗重復(fù)3次并校準(zhǔn)數(shù)據(jù)。2.滑膜細(xì)胞增生小?；ぜ?xì)胞在不含和含不同濃度(10-5M，10-6M，10-7M，和10-8M)紫杉醇的條件下生長24小時。到時間后，通過胎盤蘭染色排除法計數(shù)，憑視力測定有活力滑膜細(xì)胞的總數(shù)。實驗重復(fù)4次并校準(zhǔn)數(shù)據(jù)。B.結(jié)果1.3H-胸腺嘧啶核苷摻入滑膜細(xì)胞研究表明，低至10-8M濃度的紫杉醇抑制3H-胸腺嘧啶核苷摻入滑膜細(xì)胞(和廣泛的DNA合成)。孵育6小時，高濃度和低濃度紫杉醇的抑制程度無顯著性差異(圖8)。然而，孵育24小時，低濃度藥物(10-8M)的某些作用消失，但仍基本上低于對照動物中的。2.滑膜細(xì)胞增生研究表明，紫杉醇呈濃度依賴性地對滑膜成纖維細(xì)胞增生具有細(xì)胞毒性。紫杉醇在低至10-7M的濃度仍能夠抑制滑膜細(xì)胞增生(圖9)。較高濃度紫杉醇(10-6M和10-5M)對體外滑膜成纖維細(xì)胞具有毒性。C.討論上述研究表明，體外實驗時相對較低濃度紫杉醇能夠抑制滑膜細(xì)胞衍化的成纖維細(xì)胞增生。因此，基于結(jié)締組織在慢性炎癥進(jìn)展中的作用和在炎癥性疾病病理期間的表現(xiàn)，阻斷細(xì)胞增生會對體內(nèi)疾病結(jié)果產(chǎn)生有益影響。實施例4紫杉醇對體外人表皮角質(zhì)細(xì)胞的活性特征研究了紫杉醇對活化增殖人正常角質(zhì)細(xì)胞和HaCAT角質(zhì)細(xì)胞(自發(fā)性永久性人表皮角質(zhì)細(xì)胞)的時間和劑量-依賴性作用。A.材料與方法通過測定細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞摻入的3H-胸腺嘧啶核苷評價紫杉醇對角質(zhì)細(xì)胞的作用。胸腺嘧啶核苷摻入，在倍增期用0～10-4M濃度紫杉醇處理于平皿中的低密度角質(zhì)細(xì)胞(DMEM添加10％FCS，谷氨酰胺，抗體)6小時。向細(xì)胞中加入3H-胸腺嘧啶核苷并再孵育6小時。收集細(xì)胞測定放射活性。為測定細(xì)胞總數(shù)，角質(zhì)細(xì)胞置于平皿中，在含或不含紫杉醇中孵育4天。孵育后，收集細(xì)胞并用臺盼蘭排出法計數(shù)。B.結(jié)果測定了活細(xì)胞占未處理對照細(xì)胞數(shù)的百分比。紫杉醇濃度為10-9M時，細(xì)胞活力大于未處理對照組的100％，濃度10-8M時，活力略低于87％(圖7)。紫杉醇濃度10-7M或更高時，細(xì)胞生存力顯著下降。C.討論紫杉醇在低至10-7M濃度時對人角質(zhì)細(xì)胞極具毒性。牛皮癬，角質(zhì)細(xì)胞是異常增生細(xì)胞，由于紫杉醇穩(wěn)定微管，可以預(yù)期它對牛皮癬有絲分裂活動系統(tǒng)有效。另一研究發(fā)現(xiàn)紫杉醇對增生性滑膜細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，但對非-增生性軟骨細(xì)胞無影響。所以，紫杉醇可作用于牛皮癬損害的高度增生性細(xì)胞而對正常表皮細(xì)胞無毒。實施例5紫杉醇對星型細(xì)胞增生的作用已經(jīng)確定，MS病灶中有許多纖維星型細(xì)胞數(shù)量增加，這被認(rèn)為是通過產(chǎn)生細(xì)胞因子和基質(zhì)金屬蛋白酶而參與髓磷脂破壞(Mastronardi等，J.Neurosci.Res.36315-324，1993；Chandler等，J.Neuroimmunol.72155-161，1997)。纖維狀星型細(xì)胞具有高含量作為纖維性星型細(xì)胞增生生物化學(xué)標(biāo)識物的神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白(GFAP)。用脫髓鞘疾病轉(zhuǎn)基因小鼠模型評價膠束紫杉醇對星型細(xì)胞增生的抑制能力。A.材料與方法臨床發(fā)病之初(約4個月)開始紫杉醇連續(xù)皮下注射治療(2mg/kg；每周3次，總共注射10次)。5只動物接受膠束紫杉醇，2只小鼠作對照；一只為不治療正常小鼠和一只為不治療轉(zhuǎn)基因小鼠。由于實驗室已經(jīng)很好地確立了該疾病過程，所以只使用一只轉(zhuǎn)基因小鼠為對照。在MS神經(jīng)病理起始表征明顯時，給4個月齡的動物注射膠束紫杉醇。第十次注射后3天，終止實驗，對大腦組織進(jìn)行組織學(xué)分析。光學(xué)顯微鏡下，福爾馬林固定組織和石蠟包埋。切片用抗-GFAP抗體(DACO)著色，洗滌和然后與偶合了HPP的第二抗體反應(yīng)。切片HPP著色和計數(shù)蘇木精染色細(xì)胞。電子顯微鏡，組織用2.5％戊二醛和磷酸緩沖鹽水(pH7.2)固定，1％四氧化鋨固定。制備切片并用JEOL1200II傳輸EM(透射式電子顯微鏡)觀測。B.結(jié)果作為神經(jīng)病理學(xué)進(jìn)展，轉(zhuǎn)基因小鼠大腦GFAP水平升高；認(rèn)為這反映纖維性星型細(xì)胞數(shù)量增加。相反，用紫杉醇治療的轉(zhuǎn)基因小鼠GFAP水平基本正常(表1)。數(shù)據(jù)提示紫杉醇可抑制體內(nèi)星型細(xì)胞增生，這將有助于預(yù)防MS脫髓鞘。表1腦勻漿中GFAP含量組GFAP(ng)GFAP(ng/μg勻漿蛋白質(zhì))正常小鼠轉(zhuǎn)基因小鼠紫杉醇治療的轉(zhuǎn)基因小鼠0.64±0.021.80+/-0.100.69+/-0.0512.836.013.8進(jìn)一步分析大腦組織中GFAP進(jìn)行組織學(xué)評價。圖78描述正常小鼠、未用紫杉醇治療對照轉(zhuǎn)基因小鼠和用紫杉醇治療對照轉(zhuǎn)基因小鼠的大腦切片。盡管對照轉(zhuǎn)基因小鼠纖維性星型細(xì)胞數(shù)量更多，但星型細(xì)胞形態(tài)學(xué)與在正常動物觀到的相似(粗的星狀突起自細(xì)胞體伸出)。然而，用紫杉醇治療對照轉(zhuǎn)基因小鼠的纖維性星型細(xì)胞顯著降低。還有，觀察到兩種形態(tài)學(xué)變化纖維性星型細(xì)胞的細(xì)胞體顯得變圓(已證明將導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞程序性死亡)和細(xì)胞體周圍的細(xì)胞突起很細(xì)。使用電子顯微鏡進(jìn)一步超微結(jié)構(gòu)分析證實，轉(zhuǎn)基因小鼠星型細(xì)胞以起源于細(xì)胞體的濃厚著色的星狀細(xì)胞突起為特征。廣泛突起包含著排列整齊的細(xì)絲表明細(xì)胞是存活的激活細(xì)胞。然而，用紫杉醇治療轉(zhuǎn)基因小鼠星型細(xì)胞形態(tài)學(xué)以細(xì)胞變圓、細(xì)絲狀突起和細(xì)胞內(nèi)細(xì)絲蛋白質(zhì)耗減和結(jié)構(gòu)破壞為特征(圖80)。C.結(jié)論數(shù)據(jù)證實紫杉醇引起體內(nèi)纖維狀星型細(xì)胞變化，纖維狀星型細(xì)胞是MS損害中增生最活躍的細(xì)胞類型。很可能紫杉醇也抑制星型細(xì)胞突起的功能并且，因此，可改變與髓磷脂破壞有關(guān)的細(xì)胞內(nèi)過程。實施例6紫杉醇對內(nèi)皮細(xì)胞增生的作用為了確定紫杉醇是否抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生，EOMA細(xì)胞(一種內(nèi)皮細(xì)胞系)低密度鋪板并在不含和含遞增濃度紫杉醇的條件下孵育48小時。孵育后，用臺盼蘭排出分析法計數(shù)活細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果(圖9)顯示紫杉醇濃度為10-8M時抑制50％以上的內(nèi)皮細(xì)胞增生，濃度為10-7M或更高時完全抑制細(xì)胞增生。這些數(shù)據(jù)證明，紫杉醇是內(nèi)皮細(xì)胞增生的強(qiáng)抑制劑。所有細(xì)胞毒性分析進(jìn)行3次，和每次一式三份獨立測量。為了確定紫杉醇對內(nèi)皮細(xì)胞周期和細(xì)胞程序性死亡的作用，EOMA細(xì)胞在不含和含有遞增濃度紫杉醇的條件下孵育24小時。細(xì)胞用3.7％甲醛磷酸緩沖鹽水固定20分鐘，用1μg/mlDAPI(4’-6-二氨基-2-苯基吲哚)染色，在40倍目鏡的表面螢光光鏡下檢測。用細(xì)胞核片段和凝結(jié)的染色質(zhì)給細(xì)胞評分來評價程序性死亡細(xì)胞。數(shù)據(jù)顯示紫杉醇濃度大于10-8M時引起內(nèi)皮細(xì)胞程序性死亡(圖10)。實施例7增生分析試驗(MTT)第1天，按每孔5-10×104滑膜細(xì)胞制板(96孔板)。第1列孔不加入細(xì)胞(空白)。第2天，輕彈平板棄去介質(zhì)，加入200μl含不同濃度藥物的介質(zhì)，細(xì)胞與藥物作用6小時、24小時或4天。第1列和第2列孔不加藥(分別為空白和不處理對照)。棄去含藥介質(zhì)并加入200μl不含藥新鮮介質(zhì)。細(xì)胞再繼續(xù)生長3～4天。第5天，加入20μl二甲噻唑聯(lián)苯四唑鎓溴鹽(MTT)(5mg/mlPBS)并于37℃孵育4小時。輕輕倒出介質(zhì)，加入200μlDMSO。振蕩平板30分鐘，在562nm處讀取吸光度。結(jié)果數(shù)據(jù)用未處理對照的第2列孔中存活細(xì)胞數(shù)(分析前細(xì)胞數(shù)取自一個標(biāo)準(zhǔn)化處理值)除以處理后存活細(xì)胞數(shù)表示存活％。IC50，殺死50％細(xì)胞的藥物濃度，可從圖11A-E以內(nèi)插值替換。作用24小時，發(fā)現(xiàn)LY290181化合物是降低和抑制細(xì)胞增生的最強(qiáng)的抗-微管物質(zhì)，其IC50小于5nM(圖C)。paclitaxe、epothiloneB和塊菌素作用稍弱，IC50分別為30nM(圖A)、45nM(圖F)和45nM(圖B)上下。最后，氟化鋁(ALF3)和己二醇的IC50顯著高出，分別為32μM(圖E)和64mM(圖D)。實施例8紫杉醇和其它抗-微管物質(zhì)對基質(zhì)金屬蛋白酶產(chǎn)生的作用A.材料與方法1.紫杉醇抑制IL-1刺激的AP-1轉(zhuǎn)錄活性軟骨細(xì)胞用含AP-1驅(qū)動CAT報告基因的構(gòu)造轉(zhuǎn)染，并用IL-1刺激，加入IL-1(50ng/ml)，在不含和含不同濃度紫杉醇的條件下孵育24小時。紫杉醇處理呈濃度依賴性地降低CAT活性(平均值±SD)。根據(jù)t-檢驗，帶一個星號(*)的數(shù)據(jù)表示與IL-1誘導(dǎo)的CAT活性比較具有顯著性，p＜0.05。所示結(jié)果代表3個獨立實驗。2.紫杉醇對IL-1誘導(dǎo)的AP-1DNA結(jié)合活性的影響，AP-1DNA用放射性標(biāo)記的人AP-1序列探針和凝膠移位分析方法分析結(jié)合活性。IL-1β(20ng/ml)之后不用或用不同量紫杉醇(10-7～10-5M)處理的軟骨細(xì)胞提取液與過量探針在冰中孵育30分鐘。，接著進(jìn)行非-變性凝膠電泳。“共同的”泳道含有過量的未標(biāo)記AP-1寡核苷酸。結(jié)果代表3個獨立實驗。3.紫杉醇對IL-1誘導(dǎo)的MMP-1和MMP-3mRNA表達(dá)的影響細(xì)胞用不同濃度紫杉醇(10-7～10-5M)處理24小時。然后，在紫杉醇存在的條件下用IL-1β(20ng/ml)再處理18小時。提取總RNA，用Northern印跡分析法測定MMP-1mRNA水平。隨后剝離印跡并用32P-放射標(biāo)記的大鼠GAPDHcDNA再探針，GAPDHcDNA常用作管家基因。結(jié)果代表4個獨立實驗。定量膠原酶-1和溶基質(zhì)素-表達(dá)mRNA水平。MMP-1和MMP-3表達(dá)水平用GAPDH校準(zhǔn)。4.其它抗-微管劑對膠原酶表達(dá)的影響原代軟骨培養(yǎng)細(xì)胞取自新鮮腓腸軟骨。在100×20mm培養(yǎng)皿按每毫升2.5×106將細(xì)胞鋪板并于37℃在含5％FBS的Ham’sF12介質(zhì)中孵育過夜。細(xì)胞在不含血清的介質(zhì)中饑鋨過夜，然后用不同濃度抗-微管物質(zhì)處理6小時。每個培養(yǎng)皿中均加入IL-1(20ng/ml)并再孵育18小時。使用酸化胍異硫氰酸鹽法提取總RNA，并進(jìn)行變性凝膠電泳。用1％變性凝膠進(jìn)行凝膠電泳、轉(zhuǎn)移到尼龍膜和用32p-標(biāo)記的膠原酶cDNA探針雜交對變性的RNA樣本(15μg)進(jìn)行分析。32p-標(biāo)記的甘油醛磷酸脫氫酶(GAPDH)cDNA探針作為內(nèi)標(biāo)以確保負(fù)載大致相同。掃描曝光的膜并用ImageQuant定量分析。B.結(jié)果1.基質(zhì)金屬蛋白酶家族的促進(jìn)劑圖19A顯示除明膠酶B以外所有基質(zhì)金屬蛋白酶含有轉(zhuǎn)錄因子AP-1和PEA-3。早已證實基質(zhì)金屬蛋白酶如膠原酶和溶基質(zhì)素的表達(dá)依賴于轉(zhuǎn)錄因子AP-1的激活。所以AP-1抑制劑將抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)。2.紫杉醇對AP-1轉(zhuǎn)錄活性的作用如圖19B所示，IL-1刺激AP-15-倍的轉(zhuǎn)錄活性。用紫杉醇短暫預(yù)處理轉(zhuǎn)染的軟骨細(xì)胞降低了IL-1誘導(dǎo)AP-1報告基因CAT的活性。因此，紫杉醇呈濃度依賴性地降低軟骨細(xì)胞中IL-1誘導(dǎo)的AP-1活性。這些數(shù)據(jù)證明，紫杉醇是軟骨細(xì)胞AP-1活性的強(qiáng)抑制劑。3.紫杉醇對DNA結(jié)合活性的影響為確定紫杉醇抑制AP-1活性不是非特異性作用所致，利用軟骨細(xì)胞核溶解產(chǎn)物研究了紫杉醇對IL-1誘導(dǎo)的AP-1與寡核苷酸結(jié)合作用的影響。如圖19C所示，10-7～10-5M濃度紫杉醇預(yù)處理24小時的軟骨細(xì)胞溶解產(chǎn)物使IL-1誘導(dǎo)的結(jié)合活性降低。紫杉醇抑制轉(zhuǎn)錄活性與AP-1與DNA的結(jié)合下降密切相關(guān)。4.紫杉醇對膠原酶和溶基質(zhì)素表達(dá)的作用既然紫杉醇是AP-1活性的強(qiáng)抑制劑，所以對紫杉醇或IL-1誘導(dǎo)的膠原酶和溶基質(zhì)素表達(dá)作用進(jìn)行了研究，膠原酶和溶基質(zhì)素是與炎癥性疾病有關(guān)的兩種重要基質(zhì)金屬蛋白酶。概要地，如圖20所示，IL-1誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞膠原酶和溶基質(zhì)素mRNA水平升高。用紫杉醇預(yù)處理軟骨細(xì)胞24小時膠原酶和溶基質(zhì)素mRNA水平顯著降低。結(jié)果表明紫杉醇在與抑制AP-1活性相同的濃度時完全抑制了兩種基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)。5.其它抗-微管劑對膠原酶表達(dá)的影響圖12A-H證實，抗-微管物質(zhì)抑制膠原酶表達(dá)。加入作為前炎癥性細(xì)胞因子的IL-1刺激膠原酶表達(dá)。用不同抗-微管物質(zhì)，特別是LY290181、己二醇、二氧化氘、甘氨酸乙酯、ALF3、塊菌素epothilone、和乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)預(yù)處理軟骨細(xì)胞，在低至10-7M的濃度均阻止IL-1誘導(dǎo)膠原酶表達(dá)。C.討論體外實驗時10-6M紫杉醇能夠抑制膠原酶B和溶基質(zhì)素表達(dá)。由于該抑制可解釋為抑制了AP-1活性，因此需要誘導(dǎo)除明膠酶以外的所有基質(zhì)金屬蛋白酶這一步驟，紫杉醇有望能夠抑制其它Ap-1依賴性基質(zhì)金屬蛋白酶。這些基質(zhì)金屬蛋白酶在所有的炎癥性疾病中水平均升高并且在分解基質(zhì)、細(xì)胞遷移和增生，以及血管生成中起主要作用。實施例9抗-微管物質(zhì)對蛋白聚糖表達(dá)的影響原代軟骨培養(yǎng)細(xì)胞取自新鮮腓腸軟骨。在100×20mm培養(yǎng)皿按每毫升2.5×106細(xì)胞鋪板并于37℃在含5％FBS的Ham’sF12介質(zhì)中孵育過夜。細(xì)胞在不含血清的介質(zhì)中饑鋨過夜，然后用不同濃度抗-微管物質(zhì)(10-7M，10-6M，10-5M和10-4M)處理6小時。每個平皿中均加入IL-1(20ng/ml)并再孵育18小時。使用酸化胍異硫氰酸鹽法提取總RNA，并進(jìn)行變性凝膠電泳。用1％變性凝膠進(jìn)行凝膠電泳、轉(zhuǎn)移到尼龍膜和用32p-標(biāo)記的蛋白聚糖(聚集蛋白聚糖)cDNA探針雜交對變性的RNA樣本(15μg)進(jìn)行分析。32P-標(biāo)記的甘油醛磷酸脫氫酶(GAPDH)cDNA探針作為內(nèi)標(biāo)以確保負(fù)載大致相同。掃描曝光的膜并用ImageQuant定量分析。結(jié)果圖13A-H顯示對膠原酶表達(dá)具有抑制作用的抗-微管物質(zhì)(實施例8)，特別是LY290181、己二醇、二氧化氘、甘氨酸乙酯、ALF3、塊菌素epothilone、和乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)，在所有實驗濃度并不影響聚集蛋白聚糖表達(dá)，所述聚集蛋白聚糖是軟骨基質(zhì)的一種主要組分。實施例10NF-kB活性(基于細(xì)胞)分析IL-1和TNF均被確定為刺激基因轉(zhuǎn)錄的前炎癥性細(xì)胞因子，基因轉(zhuǎn)錄由也參與炎癥過程的稱為NF-kB的轉(zhuǎn)錄因子驅(qū)動。因此可通過分析報告基因(NF-kB)對IL-1和TNF刺激的反應(yīng)而對間接分析IL-1和TNF的炎癥性作用。第1天，按每孔(24孔板)5×104個用NF-kB報告結(jié)構(gòu)(Luciferase，Promega公司)穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染了的NIH-3T3(鼠成纖維細(xì)胞)制板。一旦融合(第3-4天)，全部細(xì)胞介質(zhì)用1ml不含血清的介質(zhì)替代使細(xì)胞饑餓。24小時饑餓之后，在加入IL-1(20ng/ml)和TNF(20ng/ml)之前先用不同濃度抗-微管物質(zhì)處理細(xì)胞6小時。細(xì)胞與IL-1和TNF反應(yīng)1小時和16小時，24小時之后測定NF-kB活性。第5天，棄去介質(zhì)，PBS輕洗細(xì)胞一次。然后用250μl細(xì)胞溶解緩沖液(Promega公司，Wisconsin)抽提細(xì)胞15分鐘。向盛有2.5μl細(xì)胞提取液的試管中加入25μl螢蟲素酶底物以分析NF-kB轉(zhuǎn)錄活性。試管立即插入發(fā)光計(TurnerDesigns)中并測定光發(fā)射10秒種。接著用蛋白質(zhì)濃度校準(zhǔn)熒光素酶數(shù)據(jù)。結(jié)果數(shù)據(jù)表達(dá)了抗-微管物質(zhì)所顯示出的對NF-kB誘導(dǎo)(合并誘導(dǎo))的干擾作用。如圖80A、80B、80C和80D所示，塊菌素和紫杉醇對IL-1和TNF誘導(dǎo)的NF-kB活性均有抑制作用。塊菌素和紫杉醇6小時和24小時的抑制作用分別在10μM和2μM左右。實施例11紫杉醇抑制腫瘤血管生成受精家養(yǎng)雞胚去除殼之前孵育4天。剝除空腔部位周圍的殼、分離殼內(nèi)膜、穿破殼對面頂端并允許卵內(nèi)容物從平端輕輕流出，從而倒出卵內(nèi)容物。內(nèi)容物倒入園底無菌玻璃碗中，蓋上陪替氏培養(yǎng)皿蓋并在90％相對濕度和3％二氧化碳條件下孵育。MDAY-D2細(xì)胞(一種小鼠淋巴腫瘤)注入小鼠并使腫瘤生長至0.5-1.0g。殺死小鼠，乙醇擦拭腫瘤部位、切除、置入無菌組織培養(yǎng)基中，并在層流通風(fēng)櫥中切成1mm小方塊。在將切割的腫瘤植入9-天大的雞胚之前，用30號針頭輕輕刮擦CAM表面，以確保腫瘤的植入。然后將腫瘤植入孵育8天的CAM(開殼后4天)，并允許在CAM生長4天以建立血管供應(yīng)。用此方法制備4個胚胎，每個胚胎接受3塊腫瘤。第12天，胚胎中3個腫瘤的每一個腫瘤或者接受負(fù)載20％紫杉醇熱糊劑或者接受未負(fù)載熱糊劑或者不經(jīng)治療。記錄結(jié)果之前繼續(xù)治療2天。接種的MDAY-D2腫瘤分泌血管生成因子，血管生成因子使毛細(xì)血管(源于CAM)向腫瘤內(nèi)生長并使腫瘤繼續(xù)長大。既然所有腫瘤血管源出CAM，而所有腫瘤源自外植體，因此，分別分析對兩種過程的治療干擾作用是可能的。通過測定負(fù)載紫杉醇熱糊劑對(a)抑制腫瘤的血管形成和(b)抑制腫瘤細(xì)胞自身生長的影響進(jìn)行分析。體內(nèi)直接立體顯微鏡評價和對本實驗固定組織組織學(xué)檢驗表明用負(fù)載20％紫杉醇熱糊劑治療的腫瘤，供應(yīng)腫瘤的血管數(shù)量減少(圖14C和14D)，腫瘤內(nèi)血管數(shù)量減少，和腫瘤周圍(典型地實體腫瘤最高度血管化的區(qū)域)血管數(shù)量減少。在研究進(jìn)行的2天內(nèi)，腫瘤尺寸和團(tuán)塊開始減小。另外，可看到無數(shù)的內(nèi)皮細(xì)胞停滯在細(xì)胞分裂期，證明內(nèi)皮細(xì)胞增生受到影響。也常見到腫瘤細(xì)胞停滯在有絲分裂期。所有4個胚胎一致顯示出負(fù)載20％紫杉醇熱糊劑抑制腫瘤血管形成而未負(fù)載熱糊劑者則無抑制作用。通過對比，未負(fù)載熱糊劑治療的CAMs，腫瘤血管形成良好，與正常周圍組織相比血管數(shù)量和密度增加，與負(fù)載紫杉醇熱糊劑治療的腫瘤相比，血管引人注目地增多。新形成血管象輪幅附著于車輪中央似地由各個角度向腫瘤中央集中(圖14A和14B)。治療過程中腫瘤大小和團(tuán)塊繼續(xù)增大。組織學(xué)上，可看到腫瘤周圍組織有無數(shù)擴(kuò)張的薄壁毛細(xì)血管和很少看到內(nèi)皮細(xì)胞分裂。腫瘤組織具有良好的血管形成和整個組織處于活動期。作為一個實施例，兩個相同大小(起始，植入時)腫瘤放置于相同CAM，得到下列數(shù)據(jù)。用負(fù)載20％紫杉醇熱糊劑治療的腫瘤，測得腫瘤330mm×597mm；腫瘤中度邊界有14條血管，腫瘤團(tuán)塊僅有3-4條小毛細(xì)血管。用未負(fù)載熱糊劑處理的腫瘤，腫瘤尺寸為623mm×678mm；腫瘤中度邊界有54條血管，腫瘤團(tuán)塊有12-14條小血管。另外，CAM自身的周圍較紫杉醇-治療腫瘤周圍含有更多的血管。本研究證實熱糊劑釋放足量的紫杉醇抑制伴隨腫瘤生長和發(fā)展的病理性血管形成。在腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的能夠引導(dǎo)毛細(xì)血管從周圍組織向腫瘤團(tuán)塊內(nèi)生長的血管形成因子存在的情況下，最大地刺激了血管形成。負(fù)載20％紫杉醇熱糊劑能夠阻斷這一過程并限制腫瘤組織保持充足的血供。既通過藥物對腫瘤細(xì)胞本身的細(xì)胞毒性作用又通過剝奪腫瘤組織生長和擴(kuò)大所需養(yǎng)分的作用，結(jié)果是腫瘤塊縮小。實施例12紫杉醇抑制血管形成A.雞絨毛膜尿囊膜(“CAM”)分析受精的家養(yǎng)雞胚在去殼培養(yǎng)之前孵育3天。剝除空腔部位的殼、分離殼內(nèi)膜、穿破殼對面頂端并允許卵內(nèi)容物從平端輕輕流出，經(jīng)此過程，倒出卵內(nèi)容物。卵內(nèi)容物倒入圓底無菌玻璃碗中，蓋上陪替氏培養(yǎng)皿蓋并在90％相對濕度和3％二氧化碳條件下孵育3天。紫杉醇(Sigma，St.Louis，MI)的濃度按0.25、0.5、1、5、10、30μg與每份10μl等份試樣的0.5％水溶性甲基纖維素混合。由于紫杉醇不溶于水，所以使用玻璃珠來產(chǎn)生細(xì)微顆粒。10μl等份試樣的溶液在石蠟?zāi)ど细稍?小時形成直徑2mm的盤。然后將含紫杉醇干燥盤小心地放到孵育6天的每一個CAM生長邊緣。在同一時間將不含紫杉醇的甲基纖維素盤放置于同樣時程的CAMs作為對照。反應(yīng)2天后(孵育第8天)借助立體顯微鏡檢查血管。將LiposynII，一種白色不透明溶液，注射到CAM內(nèi)以增加血管細(xì)節(jié)的可視性。未染色血管，活的雞胚用帶電視攝象機(jī)(Dage-MTIInc.，MichiganCity，IN)界面的Zeiss立體顯微鏡成像。電視信號放大160倍顯示并用成像分析系統(tǒng)(Vidas，Kontron；Etching，德國)捕獲圖像。然后在圖示記錄器(型號3000；MatrixInstruments，Orangeburg，NY)上制成圖像底片。8天大的無殼胚胎的膜用2％戊二醛的0.1M甲胂酸鈉緩沖液灌流；附加的固定液注射到CAM下面。在原位10分鐘后，取出CAM并置入新鮮固定液中，室溫下2小時。用含6％蔗糖的二甲胂酸鈉緩沖液沖洗組織過夜。感興趣區(qū)域用1％四氧化鋨在4℃固定1.5小時。用梯度乙醇將組織脫水，與氧化丙烯溶劑交換，并用Spurr樹脂包埋。用金剛石刀切片，置于銅柵條上，染色，和Joel1200EX電子顯微鏡檢測。相似地，切下0.5mm切片用甲苯蘭染色和光學(xué)顯微鏡檢查。養(yǎng)至第11天的雞胚被用于腐蝕侵蝕鑄塑技術(shù)。使用30號皮下注射針頭將Mercox樹脂(TedPella，Inc.，Redding，CA)注入CAM血管。鑄塑材料由2.5克MercoxCL-2B聚合物和0.05克具有5分鐘聚合時間的催化劑(55％過氧化苯甲酰)組成。注射后塑料在室溫下原位停留1小時，然后在65℃烤箱過夜。接著將CAM放進(jìn)50％氫氧化鈉水溶液消化所有有機(jī)組分。塑料鑄塑體在蒸餾水中廣泛沖洗，風(fēng)干，金/鎵包衣，用飛利浦501B掃描電子顯微鏡觀測。上述實驗結(jié)果示于圖15-18。概要地，圖15A顯示正常缺殼雞卵培養(yǎng)的一般性質(zhì)。孵育第6天，胚胎中央輻射狀擴(kuò)張血管網(wǎng)；CAM鄰接胚胎發(fā)展。這些生長血管接近表面并可方便地觀測到，使得該系統(tǒng)成為研究血管生成的理想模型。CAM未染色的活的毛細(xì)血管網(wǎng)，可使用立體顯微鏡無損傷成像。圖15B描述使用電視/計算機(jī)界面記錄的這樣一個血管區(qū)域，其中毛細(xì)血管內(nèi)有血液細(xì)胞組分。三維體系結(jié)構(gòu)的CAM毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)通過侵蝕鑄塑方法顯示并在掃描電子顯微鏡下觀測(圖15C)。這些鑄塑揭示了底部血管向CAM表面投射從而在CAM表面形成吻合的毛細(xì)血管。CAM橫斷面顯示外胚層由雙細(xì)胞層組成，寬闊的中胚層含有下鄰?fù)饽?、外膜?xì)胞的毛細(xì)血管，和單內(nèi)皮細(xì)胞層內(nèi)膜(圖15D)。在電子顯微鏡水平上，CAM毛細(xì)血管典型結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)被闡明。典型地，血管與外胚層的內(nèi)細(xì)胞層緊密相連(圖15E)。與濃度為0.25、0.5、1、5、10、或30μg紫杉醇反應(yīng)48小時后，使用裝配了電視/計算機(jī)界面的立體顯微鏡在活體條件下檢查每一個CAM以評價對血管形成的作用。160倍放大影像使得可以直接看到毛細(xì)血管內(nèi)的血液細(xì)胞；因此很容易評定和記錄感興趣區(qū)域的血流。此研究中，血管形成的抑制限定為CAM缺乏毛細(xì)血管網(wǎng)和血管血流的一個區(qū)域(測得直徑2-6mm)。整個實驗，無血管區(qū)域按4個無血管等級評價(表1)。分級代表總體抑制程度，最大抑制用無血管等級3表示。根據(jù)其濃度，紫杉醇非常一致地在48小時內(nèi)引起最大無血管區(qū)(直徑6mm或無血管等級3)。表1無血管等級0--正常多血管狀態(tài)1--缺少一些微血管運(yùn)動2*--直徑大約2mm的小無血管區(qū)3*--無血管區(qū)超出盤(直徑6mm)*-表示抗血管形成的正效應(yīng)劑量-依賴性，各種治療物質(zhì)不同濃度時作用的實驗數(shù)據(jù)示于表2。表2物質(zhì)釋放載體濃度抑制/n紫杉醇甲基纖維素(10μl)0.25μg2/11甲基纖維素(10μl)0.5μg6/11甲基纖維素(10μl)1μg6/15甲基纖維素(10μl)5μg20/27甲基纖維素(10μl)10μg16/21甲基纖維素(10μl)30μg31/31PCL糊劑(3mg)0.05％0/9PCL糊劑(3mg)0.10％1/8PCL糊劑(3mg)0.25％5/7PCL糊劑(3mg)0.5％4/4PCL糊劑(3mg)1％8/8PCL糊劑(3mg)2％10/10PCL糊劑(3mg)5％10/10PCL糊劑(3mg)10％9/9PCL糊劑(3mg)20％6/620％明膠60％PCL20％5/6糊劑(3mg)明膠(1mg)20％17/17眼用懸浮液(2×10μl)0.3％1/12眼用懸浮液(2×15μl)0.3％3/3眼用懸浮液(1×15μl)0.3％15/15眼用的微球懸浮液10％4/4(15μl)斯滕特氏印模包衣2.5％5/5(～1mg)斯滕特氏印包衣10％1/1(～1mg)斯滕特氏印包衣33％3/3(～1mg)環(huán)糊精溶液(10μl)10％5/5膠束干制劑(1mg)10％非常毒膠束溶液(10μl)10％非常毒膠束溶液(10μl)4μg1/1-非常毒cremophor紫杉酚4μg1/1-非常毒4PCL∶1MePEG20％10/13片劑(1mg)PCL∶MePEG糊劑(3mg)20％6/9微球(粘膜粘膜)20％7/7微球(EVA)0.6％2/2微球(30-100μm)20％11/11-慢釋微球(30-100μm)10％1/8-慢釋微球(10-30μm)20％5/6-中釋微球(10-30μm)10％5/9-中釋微球(1-10μm)20％8/11-速釋微球(1-10μm)10％9/9-速釋漿果赤霉素糊劑(2mg)2μg2/3甲基纖維素(5ml)5μg4/7甲氨蝶呤PCL糊劑(3mg)1％0/13PCL糊劑(3mg)2％0/3PCL糊劑(3mg)20％0/1PCL∶MePEG糊劑(3mg)2％1/195PCL∶5MePEG糊劑1％0/6(3mg)95PCL∶5MePEG糊劑10％0/5(3mg)甲基纖維素(10μl)2μg0/8醋酸潑尼松眼用懸浮液(2×10μl)1％3/4龍眼用懸浮液(2×15μl)1％1/1原花色甙甲基纖維素(10μl)10μg1/18(proanthocyanidin)PCL糊劑(3mg)15％1/2PCL糊劑(3mg)30％非常毒vero細(xì)胞毒甲基纖維素(10μl)10ng0/8素甲基纖維素(10μl)675ng0/2硫酸肝素片甲基纖維素(10μl)0.2μg0/6段(1)硫酸肝素片甲基纖維素(10μl)0.4μg0/7段(2)釩酸鹽微球(1mg)5％0/5硫酸氧釩PCL糊劑(3mg)2.5％0/3BMOVPCL糊劑(3mg)10％非常毒PCL糊劑(3mg)25％非常毒PCL糊劑(3mg)35％非常毒BEOVPCL糊劑(3mg)10％非常毒s-膦酸80％PLA∶20％MePEG20％非常毒糊劑(1mg)PCL糊劑(1mg)2％2/7PCL糊劑(3mg)1％0/9PCL糊劑(3mg)2％0/6PCL糊劑(3mg)4％0/3PCL糊劑(3mg)8％1/9三苯氧胺甲基纖維素(10μl)5μg0/2鯊魚軟骨粉N/A1mg0/5雌二醇氮芥PCL糊劑(3mg)5％0/6磷酸鈉PCL糊劑(3mg)10％0/6長春花堿甲基纖維素(10μl)9μg非常毒甲基纖維素(10μl)2μg非常毒PCL糊劑(3mg)0.25％4/6PCL糊劑(3mg)0.5％0/4PCL糊劑(3mg)1％2/3PCL糊劑(3mg)2％非常毒長春新堿甲基纖維素(10μl)9μg非常毒甲基纖維素(10μl)1μg非常毒PCL糊劑(3mg)0.05％1/1-非常毒PCL糊劑(3mg)0.1％2/2-非常毒PCL糊劑(3mg)0.25％1/1-非常毒PCL糊劑(3mg)0.5％非常毒PCL糊劑(3mg)1％非常毒PCL糊劑(3mg)2％非常毒雙萜-1甲基纖維素(10μl)3μg0/5雙萜-2甲基纖維素(10μl)3μg0/5薰草菌素-CPCL糊劑(3mg)10％0/14PCL糊劑(3mg)20％0/10MDHC(酪氨PCL糊劑(3mg20％0/8酸抑制劑)erbstatinPCL糊劑(3mg)20％0/5-非常毒金雀異黃素PCL糊劑(3mg)10％0/7PCL糊劑(3mg)20％0/4殺草菌素PCL糊劑(3mg)2％3/4PCL糊劑(3mg)0.5％1/1喜樹堿PCL糊劑(3mg)0.25％3/4PCL糊劑(3mg)1％2/3PCL糊劑(3mg)5％4/5蘇拉明和醋甲基纖維素(10μl)20μg/70μg2/4酸可的松甲基纖維素(10μl)50μg/40μg5/14甲基纖維素(10μl)50μg/50μg3/26甲基纖維素(10μl)20μg/50μg0/24甲基纖維素(10μl)70μg/70μg0/9蘇拉明和硫甲基纖維素(10μl)50μg/50μg0/6酸四氫S魚精蛋白甲基纖維素(10μl)50μg0/10甲基纖維素(10μl)100μg1/10TIMP甲基纖維素(10μl)15μg0/5秋水仙鹼甲基纖維素(10μl)3μg1/1-非常毒典型的紫杉醇-治療的CAMs也顯示直徑6mm無血管區(qū)，超出了透明甲基纖維素盤的中心位置。稍加放大，周圍的無血管區(qū)清楚明了(圖16C)；周圍功能血管通過改變方向遠(yuǎn)離紫杉醇源(圖16C和圖16D)。在正常狀態(tài)下從未觀測到這樣使血流改變方向的角。紫杉醇作用的另一特征是在代表血細(xì)胞聚集的無血管區(qū)形成血島。紫杉醇-處理的CAM有關(guān)的形態(tài)學(xué)改變在光學(xué)和電子顯微鏡水平下可輕易地見到。為了方便描述起見，顯示了由正常到無血管狀態(tài)總過渡的三個截然不同的階段。無血管區(qū)邊緣附近CAM以三個胚層豐富的有絲分裂細(xì)胞為特征標(biāo)志(圖17A和圖18A)。也觀測到毛細(xì)血管內(nèi)皮血管細(xì)胞有絲分裂增強(qiáng)。然而，內(nèi)皮細(xì)胞保持連接完整的沒外滲血細(xì)胞。隨著進(jìn)一步退化，CAM以毛細(xì)血管破潰和溶解為特征(圖17B和18B)。推定內(nèi)皮細(xì)胞，典型地停滯在有絲分裂期，與血細(xì)胞仍保持緊密的間隙聯(lián)接并位于外胚的下部；然而，這些細(xì)胞不是接合連接。無血管區(qū)最中心部分以增厚的外胚和內(nèi)膜層為特征(圖17C和圖18C)。盡管這些層增厚，細(xì)胞接合保持完整無損及胚層保持它們的結(jié)構(gòu)特征。中胚層內(nèi)，散布豐富的停滯在有絲分裂期的細(xì)胞；這些細(xì)胞未顯示在前一時相觀察到的內(nèi)皮細(xì)胞極化。而且，整個無血管區(qū)，退化細(xì)胞共同的特點是顯著的電子密集空泡和細(xì)胞碎片(圖18C)?？傊?，研究表明將紫杉醇用于CAM48小時后，血管形成受到抑制。血管形成抑制代表了紫杉醇作用的三個過渡相的無血管區(qū)。在中央，無血管區(qū)最受影響區(qū)域含有伴有紅細(xì)胞外滲的破潰毛細(xì)血管；說明內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞間接合缺損。內(nèi)胚層和外胚層細(xì)胞保持它們的細(xì)胞間接合和因此胚層完整無損；然而，它們輕度增厚?？拷Ｑ軈^(qū)域，血管保持接合組合因而也完整無損。紫杉醇-處理區(qū)域周邊，血管生長也被抑制，這即是血管改變方向或“肘”效應(yīng)的典型例證(圖16D)。紫杉醇-處理的無血管區(qū)也揭示了CAM所有三個胚層大量細(xì)胞停滯于有絲分裂期；這對紫杉醇-而言是獨一無二的，因為以前的研究未曾闡述過這樣的結(jié)果。由于停滯于有絲分裂期，內(nèi)皮細(xì)胞不能進(jìn)行參與血管生成的正常代謝功能。與此相比，用蘇拉明和醋酸可的松治療的無血管區(qū)，不產(chǎn)生CAM細(xì)胞停滯于有絲分裂期；它們僅僅阻止血管長入腫瘤區(qū)。所以，即使這些物質(zhì)是抗-血管形成劑，也有許多點可靶向血管形成。觀察了48小時期間紫杉醇的作用。在觀察期間，注意到早至用藥后9小時即出現(xiàn)血管形成抑制。組織學(xué)切片顯示相似的形態(tài)學(xué)變化，如見于圖17A和18A所示48小時無血管區(qū)第一過渡時相的變化。而且，也觀察到原來無血管區(qū)內(nèi)血管再形成過程。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肝素和血管生成類固醇形成的無血管區(qū)在用藥后60小時血管再形成。一個研究中，紫杉醇-處理的無血管區(qū)至少在用藥后7天內(nèi)沒有血管再形成，意味著具有更強(qiáng)的長效作用。實施例13紫杉醇和喜樹堿對LNCaP細(xì)胞增生的作用材料與方法LNCaP細(xì)胞以每個孔2×103和1×103細(xì)胞的濃度分別種到96孔板上。48小時后，向每個培養(yǎng)孔加入不同濃度的紫杉醇或喜樹堿(25μl)，板在37℃孵育5天。孵育后，用1％戊二醛溶液固定細(xì)胞，用0.5％龍膽紫染色5分鐘。用100μl緩沖溶液連續(xù)洗脫染料，在TitertekMultiskan微板閱讀器讀取492mm波長的吸收度。細(xì)胞生長用相對于不含化合物對照孔(設(shè)為100％)的百分比表示。結(jié)果紫杉醇抑制LNCaP細(xì)胞生長，EC50大約0.09nM。使用DNA片段分析法對紫杉醇處理后的孔中細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞程序性死亡實驗。觀測到大量細(xì)胞程序性死亡說明紫杉醇是通過細(xì)胞程序性死亡機(jī)制的細(xì)胞毒性物質(zhì)。喜樹堿對LNCaP細(xì)胞極具毒性作用。喜樹堿在0.001nM濃度可毒死60％以上的細(xì)胞。因此，該藥物對LNCaP細(xì)胞的EC50必定在毫微微摩爾(femtomolar)濃度范圍。表1N紫杉醇(nM)492nm吸收度生長％1616888880.0010.010.050.11101000.049±0.050.40±0.030.36±0.020.20±0.030.025±0.010.027±0.010.033±0.01100817340556對照492nm吸收度＝0.49±0.06表2N喜樹堿(nM)492nm吸收生長％168888150.0010.050.11101000.169±0.050.14±0.040.10±0.020.10±0.020.088±0.020.038±0.0136292121178對照492nm吸收度＝0.47±0.05實施例14其它抗-微管物質(zhì)的抗-血管形成作用除了紫杉醇，其它抗-微管物質(zhì)也可摻入聚合物載體。下面提供的代表性實施例包括喜樹堿和長春堿類如長春新堿和長春花堿，以及微管穩(wěn)定劑如塊菌素、氟化鋁和LY290181。A.將物質(zhì)摻入PCL用乳缽和杵棒研磨物質(zhì)使顆粒小于5微米。然后以干粉末形式與聚己內(nèi)酯(分子量18,000伯明翰聚合物，ALUSA)。加熱混合物到65℃5分鐘，攪拌溶化的聚合物/物質(zhì)混合物5分鐘，調(diào)勻為糊劑。溶化糊劑裝入1ml注射器中，擠壓成3mg小丸。將小丸放置到受孕6天的CAM上，以評價它們的抗-血管形成性能。B.負(fù)載喜樹堿PCL對CAM的作用與對照PCL小丸相比，負(fù)載喜樹堿的熱糊劑能有效抑制血管形成。負(fù)載5％藥物時，試驗的4/5CAMs顯示出強(qiáng)的血管形成抑制作用。另外，負(fù)載量為1％和0.25％時，分別有2/3和3/4的CAMs顯示出血管形成抑制作用。因此，這些結(jié)果證明喜樹堿從PCL熱糊劑充分釋放并具有抗-血管形成的療效。C.負(fù)載長春花鹼和長春新堿PCL糊劑對CAM的作用通過測試作用于CAM的制劑，藥物從PCL小丸足量釋放以產(chǎn)生生物學(xué)作用是顯然的。與對照PCL熱糊劑小丸相比，在CAM試驗中長春花堿和長春新堿均能產(chǎn)生抗-血管形成作用。負(fù)載藥物濃度為0.5％和0.1％時，長春新堿在所有測試CAMs中均產(chǎn)生血管形成抑制作用。當(dāng)實驗濃度超過2％，達(dá)到中毒藥物水平并發(fā)生胚胎意外死亡。長春花堿在0.25％、0.5％和1％濃度時對CAM血管形成也有抑制作用。但是，濃度超過2％，長春花堿對胚胎具有毒性作用。D.負(fù)載塊菌素PCL糊劑對CAM作用與對照PCL小丸相比，負(fù)載塊菌素的糊劑能有效抑制血管形成。負(fù)載1％藥物時，塊菌素對1/3的試驗CAMs產(chǎn)生血管形成抑制作用。然而，更大的5％負(fù)載藥物濃度時，塊菌素在2/3的CAMs產(chǎn)生強(qiáng)的血管形成抑制作用。因此，這些結(jié)果證明塊菌素從PCL熱糊劑充分釋放并具有強(qiáng)的抗-血管形成的活性。E.負(fù)載氟化鋁PCL糊劑對CAM作用與對照小丸相比，負(fù)載氟化鋁(ALF3)的PCL糊劑在負(fù)載20％藥物時能有效抑制血管形成。負(fù)載20％藥物時，2/4的CAMs表現(xiàn)血管形成抑制，測得無血管區(qū)直徑2～6mm。然而，較低的藥物負(fù)載，1％和5％，血管形成抑制作用不明顯(分別為0/6和0/5CAMs)。因此，氟化鋁只是在較高藥物濃度產(chǎn)生抑制血管形成的效果。F.負(fù)載LY290181PCL糊劑時CAM作用分析負(fù)載5％LY290181PCL糊劑對CAM的作用，顯示LY290181能使1/3的試驗CAMs產(chǎn)生血管形成抑制作用。然而，1％負(fù)載藥物時，LY290181不產(chǎn)生血管形成抑制效應(yīng)(n＝2)。實施例15紫杉醇對非-增生細(xì)胞生存的作用雖然治療疾病藥物能夠強(qiáng)力抑制慢性疾病進(jìn)程中出現(xiàn)的各種過量不適宜細(xì)胞活性(增生、炎癥、蛋白水解酶產(chǎn)生)是重要的，但必須不能對正常組織具有毒性。特別嚴(yán)格的是正常細(xì)胞不能受損，因為正常細(xì)胞受損將導(dǎo)致疾病進(jìn)展。本實施例，利用培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞生長融合，檢測了紫杉醇體外試驗時對正常非-分裂細(xì)胞活性的作用。概要地，軟骨細(xì)胞在含紫杉醇(10-5M、10-7M和10-9M)或不含紫杉醇(對照)條件下孵育72小時。此期間結(jié)束時，用盼蘭排出計數(shù)法測定活細(xì)胞總數(shù)。試驗進(jìn)行4次并校準(zhǔn)數(shù)據(jù)。試驗結(jié)果示于圖21。簡要講，由圖21中可以看出，體外試驗時紫杉醇不影響正常非-增生細(xì)胞的活性，即使是高濃度的紫杉醇(10-5M)。更特異的是，即使在前面實施例所述足以阻斷病理進(jìn)程的藥物濃度時，對正常軟骨細(xì)胞無毒性作用。實施例16局部紫杉醇制劑的滲透增強(qiáng)劑選擇A.紫杉醇在各種增強(qiáng)劑中的溶解度檢測了下述滲透增強(qiáng)劑Transcutol、乙醇、丙二醇、肉豆蔻酸異丙酯和油酸Transcutol∶肉豆蔻酸異丙酯(9∶1體積比)。取各種增強(qiáng)劑各1毫升裝入玻璃小瓶預(yù)熱到37℃并加入過量紫杉醇。從每個小瓶中取0.5ml液體樣本在37℃以13000轉(zhuǎn)/分離心2分鐘。將上清液等份試樣(0.1ml)由離心管轉(zhuǎn)移至容量燒瓶中并用甲醇稀釋。用高壓液相色譜儀(HPLC)分析紫杉醇含量。B.分配系數(shù)將特定量紫杉醇溶于加熱到37℃的一定容積增強(qiáng)劑中。溶液等分試劑(1ml)加到盛有1ml辛醇的4ml玻璃試管中。然后加入磷酸緩沖鹽水(1ml)(pH7.4)并渦旋試管產(chǎn)生乳化。試管置入37℃烘箱16小時，然后從每個試管取0.1ml辛醇相并用9.9ml甲醇稀釋。對于水相，0.5ml樣本取自油酸和肉豆蔻酸異丙酯試管及0.5ml樣本取自丙二醇試管并用0.5ml甲醇稀釋。取自Transcutol試管的0.1ml樣本用9.9ml50∶50乙醇∶PBS稀釋，取自乙醇試管的0.1ml樣本用9.9ml50∶50乙醇∶PBS稀釋。HPLC分析紫杉醇含量。每次測定一式三份進(jìn)行。C.結(jié)果37℃紫杉醇在每個增強(qiáng)劑中的溶解度列于表1。表1各種滲透增強(qiáng)劑中紫杉醇飽和濃度紫杉醇濃度(mg/ml)增強(qiáng)劑均值標(biāo)準(zhǔn)差Transcutol乙醇丙二醇肉豆蔻酸異丙酯油酸Transcutol∶肉豆蔻酸異丙酯(9∶1體積比)346.8568.9121.560.430.31353.932.593.490.110.010.010.42辛醇/水分配系數(shù)Ko/w列于表2。表2紫杉醇在各種增強(qiáng)劑中辛醇/水分配系數(shù)增強(qiáng)劑Ko/w標(biāo)準(zhǔn)差Transcutol乙醇丙二醇肉豆寇酸異丙酯油酸25.256.8837.13∞∞0.270.132.48--為有效發(fā)揮作用，紫杉醇必須穿透皮膚到達(dá)有活力表皮的下層。已經(jīng)確定，藥物要穿透有活力表皮，它們必須具有接近100的辛醇/水分配系數(shù)(HadgraftJ.H.和WaltersK.，Drugabsorbtionenhancements，A.G.deBoers編著，HarwoodPublishers，1994)。基于表1和2的結(jié)果，丙二醇和Transcutol顯示了溶解紫杉醇和增加它從油相向水相分配的最佳結(jié)合。然而，Transcutol和丙二醇的Ko/w仍有些低，它們與Ko/w無限的肉豆蔻酸異丙酯結(jié)合以試圖增加紫杉醇在辛醇相的溶解度。肉豆蔻酸異丙酯在室溫很易溶解于Transcutol。為形成均相，丙二醇和肉豆蔻酸異丙酯也與乙醇混合，丙二醇∶乙醇∶肉豆蔻酸異丙酯混合比例為4∶3.5∶0.5。Ko/w結(jié)果示于表3。表3紫杉醇在聯(lián)合增強(qiáng)劑中辛醇/水分配系數(shù)增強(qiáng)劑Ko/w標(biāo)準(zhǔn)差Transcutol∶肉豆寇酸異丙酯(9∶1)丙二醇∶乙醇∶肉豆寇酸異丙酯(4.0∶3.5∶0.5)43.4542.390.431.66肉豆蔻酸異丙酯加入Transcutol導(dǎo)致分配系數(shù)顯著增加。然而，丙二醇∶乙醇∶肉豆蔻酸異丙酯溶液與單獨丙二醇相比，并未引起分配系數(shù)明顯改善。這后一結(jié)果，和已經(jīng)發(fā)現(xiàn)乙醇加劇牛皮癬狀況的事實，足以將此聯(lián)合增強(qiáng)劑排出在進(jìn)一步的考慮之外。再者，加入肉豆蔻酸異丙酯確實使紫杉醇溶解度高于單獨Transcutol時的溶解度。紫杉醇在Transcutol溶解度為346.9mg/ml，Transcutol∶肉豆蔻酸異丙酯聯(lián)合時溶解度增至353.9mg/ml。因此，選用此聯(lián)合增強(qiáng)劑用于皮膚研究。實施例17局部紫杉醇制劑的制備和分析A.紫杉醇軟膏A的制備Transcutol(3.2g)，肉豆蔻酸異丙酯(0.3g)，labrasol(2.5g)，紫杉醇(0.01g)和0.5mCi/ml3H-紫杉醇(0.3ml)在20ml閃爍管中結(jié)合。另一閃爍管中，labrafil(2.5g)，arlacel165(1.2g)和compritol(0.3g)結(jié)合并加熱到70℃直至全部熔化。將第一閃爍管的內(nèi)容物加到內(nèi)容物熔化的后一試管中，渦旋直至均勻然后冷卻。B.紫杉醇軟膏B的制備Transcutol(2.5g)，肉豆蔻酸異丙酯(1.0g)，labrasol(2.5g)，紫杉醇(0.01g)和0.5mCi/ml3H-紫杉醇(0.3ml)在20ml閃爍管中結(jié)合。另一閃爍管中，labrafil(2.5g)，arlacel165(1.2g)和compritol(0.3g)結(jié)合并加熱到70℃直至全部熔化。將第一閃爍管的內(nèi)容物加到內(nèi)容物熔化的后一試管中，渦旋直至均勻然后冷卻。C.皮膚制備和穿透性研究切除的Yucatan小豬皮膚-70℃冷凍儲存直至使用。使用10號軟木塞鉆孔器從冷凍皮膚中盤狀沖壓制備皮膚樣本。皮膚樣本用鏈霉素-青霉素漂凈并置于冷凍袋中-70℃儲存。皮膚切片在Franz滲濾池封固，切下角質(zhì)層。底部受體溶液是于逆滲透(R.O.)水中的0.05％阿莫西林溶液。供體細(xì)胞夾到每一塊皮膚表面。加熱紫杉醇軟膏直至熔化(40～50℃)并抽入注射器。仍為熔化狀態(tài)時，向每塊皮膚表面擠出0.1ml。用玻璃盤蓋住供體細(xì)胞并將該集合裝配放置24小時。24小時后，細(xì)胞松解，除去多余的軟膏并儲于閃爍管中。用3ml二氯甲烷(DCM)迅速沖洗細(xì)胞表面并干燥。DCM洗液存于盛有過量軟膏的同一試管中。皮膚切片和受體溶液分開放置于閃爍管中。在-30℃將皮膚冷凍切片為30μm的切片并放置于不同試管。最初的刮屑和剩余皮膚也收集到不同玻璃試管。向每一個皮膚切片樣本試管中加入0.5ml組織溶解劑使樣本溶解。樣本留置過夜以在室溫下溶解。次日，向試管中加入3ml閃爍合劑。對于DCM洗液，取100μl移至盛有1ml乙腈試管中，然后加入3ml閃爍合劑。使用β計數(shù)儀測定所有這些溶液的放射活性。皮膚細(xì)胞在Franz滲濾池封固并分為三組。相應(yīng)地處理每一樣本(不處理或軟膏B處理或不含紫杉醇的軟膏處理)。24小時后，移出樣本使用標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)技術(shù)進(jìn)行加工。D.結(jié)果組織學(xué)切片，未處理皮膚角質(zhì)層切片厚度為50～120μm，而有活力表皮厚度為400～700μm。對于含3％重量比肉豆蔻酸異丙酯軟膏(軟膏A)，皮膚中紫杉醇濃度在角質(zhì)層和整個表皮層基本上恒定于1μg/ml(1.2×10-6M)。對于含10％重量比肉豆蔻酸異丙酯軟膏(軟膏B)，角質(zhì)層和表皮層紫杉醇濃度恒定，但角質(zhì)層更高(6μg/ml，表皮為2μg/ml)。每一個軟膏試驗中，受體溶液均沒有放射性，說明紫杉醇完全不通過皮膚部分。使用含紫杉醇軟膏未發(fā)現(xiàn)肉眼能看到的差異。實施例18開發(fā)紫杉醇治療牛皮癬的系統(tǒng)給藥制劑對牛皮癬嚴(yán)重的病例，認(rèn)為攻擊性治療是可以接受的，因此可接受與紫杉醇系統(tǒng)治療有關(guān)的毒性作用。紫杉醇系統(tǒng)給藥制劑由在水溶液中形成微膠粒的兩親二嵌段共聚物構(gòu)成，所述微膠粒在水中由疏水芯和親水殼組成。二嵌段共聚物聚(DL-交酯)-嵌-甲氧基聚乙烯乙二醇(PDLLA-MePEG)、聚己內(nèi)酯-嵌-甲氧基聚乙烯乙二醇(PCL-MePEG)和聚(DL-交酯-共聚-聚己內(nèi)酯)-嵌-甲氧基聚乙烯乙二醇(PDLLACL-MePEG)可用整體熔化聚合方法或相似的方法合成。簡要講，在通氮氣和攪拌狀態(tài)下，將一定量的DL-交酯、己內(nèi)酯和不同分子量的甲氧基聚乙烯乙二醇單體加熱(130℃)熔化。催化劑辛酸亞錫(0.2％w/w)加入熔化的單體中。聚合反應(yīng)進(jìn)行4小時。分子量、臨界微膠粒濃度和紫杉醇最大負(fù)載量分別用GPC、熒光和溶解試驗測定(圖22)。獲得紫杉醇的高包合容量。紫杉醇溶解取決于共聚物的組成和濃度(圖22和23)。PDLLA-MePEG溶解的紫杉醇最穩(wěn)定(圖23和24)。聚合物微膠粒內(nèi)芯的強(qiáng)締合呈現(xiàn)包含疏水藥物如紫杉醇的高容量環(huán)境。藥物可共價結(jié)合于嵌段共聚物形成微膠粒結(jié)構(gòu)或可物理性摻進(jìn)微膠粒疏水芯內(nèi)。藥物從微膠粒釋放機(jī)制包括從芯擴(kuò)散和在單聚合物鏈和微膠粒之間的交換。小的微膠粒(正規(guī)地小于100nm)將消除注射較大顆粒時遇到的困難。實施例19熱糊劑制備過程5g分子量10,000～20,000的聚己內(nèi)酯(Polysciences，WarringtonPenn.USA)；20ml玻璃閃爍管置于盛有稱重的50ml水的600ml燒杯中。將燒杯逐漸加熱到65℃并在此溫度保持20分鐘直至聚合物熔化。已知重量的紫杉醇，或其它血管形成抑制劑在65℃與熔化的聚合物徹底混合。將熔化聚合物傾到預(yù)熱(60℃烘箱)的模具中并冷卻直至聚合物凝固。將聚合物切成小片(大約2mm×2mm大小)并置于1ml玻璃針筒中。然后將玻璃針筒垂直放置(帶蓋子一端在下)于盛有65℃(?；療岚?蒸餾水的500ml燒杯中直至聚合物完全熔化。然后針筒中插入活塞以擠壓熔化聚合物使在筒底端形成粘性物質(zhì)。針筒加蓋并室溫冷卻。為了應(yīng)用，注射器重新加熱到60℃，以液體給藥，冷卻至體溫是凝固。實施例20紫杉醇從使用PDLLA-PEG-PDLLA和低分子量聚(d，l乳酸)熱糊劑中釋放的改進(jìn)A.制備PDLLA-PEG-PDLLA和低分子量PDLLADL-交酯購自Aldrich。分子量8,000的聚乙二醇(PEG)、辛酸亞錫和DL-乳酸購自Sigma。分子量20,000的聚-ε-己內(nèi)酯(PCL)購自BirminghamPolymers(Birmingham，AL)。紫杉醇購自HauserChemicals(Boulder，CO)。窄分子量分布的聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品購自Polysciences(Warrington，PA)。乙腈和二氯甲烷是HPLC分析級(FisherScientific)。PDLLA-PEG-PDLLA三嵌共聚物通過開環(huán)聚合反應(yīng)合成。DL-交酯單體和PEG以不同比例混合并加入0.5％辛酸亞錫。聚合反應(yīng)在在150℃進(jìn)行3.5小時。低分子量PDLLA通過DL-乳酸縮聚反應(yīng)合成。反應(yīng)在輕輕通氮氣、機(jī)械攪拌和加熱180℃的條件下在玻璃燒瓶中進(jìn)行1.5小時。通過滴定羧酸末端基團(tuán)測得PDLLA分子量約800。B.生產(chǎn)糊劑制劑負(fù)載20％或30％紫杉醇與PDLLA-PEG-PDLLA共聚物徹底混合或與90∶10、80∶20和70∶30PDLLA∶PCL混合，在60℃熔化。紫杉醇-負(fù)載糊劑稱重后分裝于1ml針筒4℃保存。C.PDLLA-PEG-PDLLA和糊劑混合物的特征使用GPC測定PDLLA-PEG-PDLLA共聚物分子量和分散性，其中GPC使用一個ShimadzuLC-10ADHPLC泵和連接一個10AHewlettPackardPl凝膠柱的ShimadzuRID-6A折射指數(shù)的檢測器(Kyoto，日本)。流動相是氯仿，流速1ml/分。0.2％聚合物濃度(重量/體積)時進(jìn)樣體積20μl。測定相對于聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品的聚合物分子量。使用Cannon-Fenske粘度計測定25℃PDLLA-PEG-PDLLA在氯仿中的特性粘度。使用TAInstruments2000調(diào)節(jié)器和DuPont910SDSC(Newcastle，Delaware)的差異掃描測熱法(DSC)進(jìn)行共聚物熱力學(xué)分析。加熱速率10℃/分鐘，紫杉醇/共聚物基質(zhì)樣本稱重(3-5mg)，置于卷縮打開的鋁樣本盤中。1H核磁共振(NMR)用于測定聚合物的活性組成。在CDCL3中使用NMR設(shè)備(Bruker，AC-200E)在200MHz測定負(fù)載紫杉醇的PDLLA-PEG-PDLLA的1HNMR波譜。聚合物濃度為1-2％。使用掃描電子顯微鏡(SEM)(HitachiF-2300)進(jìn)行紫杉醇/PDLLA-PEG-PDLLA的形態(tài)學(xué)研究。用Hummer設(shè)備(Technics，USA)將樣本用60％Au和40％Pd包衣(厚度10-15nm)。D.紫杉醇體外釋放負(fù)載20％紫杉醇的PDLLA∶PCL糊劑(約2mg)小丸或負(fù)載20％紫杉醇的PDLLA∶PEG∶PDLLA糊劑柱狀體(通過針頭擠出溶化糊劑)置入帶塞的盛有10ml磷酸緩沖鹽液(pH7.4)和0.4g/L白蛋白的14ml玻璃試管中。試管于37℃旋轉(zhuǎn)混合溫育。定期取上清液進(jìn)行紫杉醇分析并補(bǔ)充以新鮮PBS/白蛋白緩沖液。用1ml二氯甲烷萃取上清液(10ml)。輕輕倒出水相，在60℃氮氣流吹干二氯甲烷相。吹干的殘渣用40∶60水∶乙腈混合物重新溶解并以10,000g離心約1分鐘。HPLC分析上清液中紫杉醇含量。HPLC分析使用110A泵和C-8超微球柱(Beckman)，和波長設(shè)為232nmSPD-6A紫外檢測器，SIL-9A自動進(jìn)樣器和C-R3A積分儀(Shimadzu)。進(jìn)樣體積20μl和流速為1ml/分。流動相為58％乙腈、5％甲醇和37％蒸餾水。E.結(jié)果與討論使用GPC，測定了相對于聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品PDLLA-PEG-PDLLA的分子量和分子量分散(圖30)。使用Canon-Fenske粘度計測定了共聚物在25℃CHCL3的特性粘度。分子量和特性粘度隨著PEG含量增加而降低。PEG含量為10％-40％時PDLLA-PEG-PDLLA多分散性為2.4～3.5。然而，含70％PEG共聚物具有窄的分子量分散，多分散性為1.21。這可能由于高含量PEG減少諸如可導(dǎo)致聚合物分子量廣泛分散的酯交換副反應(yīng)的機(jī)會。或者，該疏水-親水嵌合共聚物盤繞結(jié)構(gòu)可能導(dǎo)致人為的低多分散性值。DSC掃描純PEG和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物結(jié)果示于圖25和26。PEG與PEG含量為70％和40％的PDLLA-PEG-PDLLA共聚物表現(xiàn)出吸熱峰焓值隨著共聚物中PEG含量降低而降低。PEG含量為70％和40％的共聚物的吸熱峰大概由于PEG區(qū)域溶化所致，說明發(fā)生相分離。而純PEG具有尖的熔化峰，PEG含量70％和40％共聚物顯示寬峰，70％PEG含量共聚物有清楚的肩峰。寬的溶化峰可能由于PDLLA干擾PEG結(jié)晶。70％PEG共聚物肩峰可能表示PDLLA區(qū)域的玻璃轉(zhuǎn)化。PEG含量10％、20％和30％的共聚物在10-250℃溫度范圍未發(fā)生熱力學(xué)變化，說明沒有出現(xiàn)明顯的結(jié)晶(因此可能是相分離)。PDLLA∶PCL(70∶30，80∶20，90∶10)未與紫杉醇混合或與20％紫杉醇混合的DSC熱分析圖顯示吸熱峰在60℃，是PCL溶化的結(jié)果。由于PDLLA吸熱性質(zhì)和它的低分子量(800)，未觀測到PDLLA溶化和玻璃轉(zhuǎn)化。PEG含量20％和30％的PDLLA-PEG-PDLLA共聚物被選作糊劑最適制劑材料，原因如下10％PEG含量的PDLLA-PEG-PDLLA在60℃左右溫度時不會溶化；40％和70％PEG含量的PDLLA-PEG-PDLLA在60℃很易溶化，而20％和30％PEG共聚物在50℃～60℃變?yōu)檎承砸后w；以及40％和70％PEG共聚物在水中的高度腫脹將極易導(dǎo)致糊劑在水中迅速分散。體外實驗時紫杉醇從PDLLA-PEG-PDLLA柱狀體釋放概貌由圖27所示。從40％PEG柱狀體釋放的測試實驗被終止，是由于柱狀體高度腫脹(一天內(nèi)約200％水?dāng)z取)且很短幾天就分解。30％PEG柱狀體釋放紫杉醇逐漸增加超過70天。從20％PEG柱狀體釋放的紫杉醇緩慢增加至30天然后突然增加，接著是另一逐漸增加過程。紫杉醇釋放存在的顯著不同到這樣的程度以致于每個柱狀體(20％PEG)顯示出突然變化。在突然增加之前，紫杉醇釋放部分低于相同直徑(1mm)的低PEG含量共聚物柱狀體的釋放。40％和30％PEG柱狀體顯示出較20％PEG柱狀體更高的紫杉醇釋放速率。例如，30％PEG柱狀體30天釋放17％紫杉醇，而20％PEG柱狀體只釋出2％。小直徑柱狀體導(dǎo)致快的釋放速率(如，直徑0.65mm和1mm的30％PEG柱狀體30天分別釋放26％和17％紫杉醇(圖27))。上述觀察結(jié)果可用紫杉醇自柱狀體釋放機(jī)制解釋。紫杉醇以在光鏡下觀察到的結(jié)晶形式分散于聚合物中。發(fā)熱期顯微鏡觀察到結(jié)晶170℃開始溶于共聚物基質(zhì)至180℃時完全溶解。負(fù)載20％紫杉醇PDLLA-PEG-PDLLA(30％PEG)糊劑DSC熱力分析圖揭示紫杉醇一小的結(jié)晶放熱曲線(16J/g，190℃)和一個溶化吸熱曲線(6J/g，212℃)(圖25)，說明來自共聚物180℃溶化的紫杉醇再結(jié)晶。在這種藥物/聚合物基質(zhì)中，紫杉醇可通過擴(kuò)散和/或聚合物侵蝕釋放。在擴(kuò)散控制情況中，藥物可通過分子在聚合物內(nèi)擴(kuò)散和/或通過所形成的連接藥物顆粒的開放通道釋放。因此，20％負(fù)載時，一些紫杉醇顆粒是獨立的，紫杉醇可通過擴(kuò)散溶解于聚合物而釋放。其它紫杉醇顆粒可形成連接于表面的簇而通過通道擴(kuò)散釋放。對于兩種情況，小直徑柱狀體由于擴(kuò)散途徑短而提供更快的藥物釋放(圖27)。記錄釋放期間柱狀體尺度變化和水?dāng)z取(圖28)。30％PEG柱狀體長度、直徑和濕重變化迅速增加2天內(nèi)達(dá)最大，15天保持不變，然后逐漸減小。柱狀體起始直徑不影響腫脹性質(zhì)。20％PEG柱狀體，在1天內(nèi)長度減少10％并穩(wěn)定，而直徑和水?dāng)z取一直逐漸增加。由于共聚物中PEG越多則水?dāng)z取越多而便于紫杉醇擴(kuò)散，于是觀察到快速釋放(圖27)。用GPC檢測PDLLA-PEG-PDLLA糊劑共聚物分子量降解。20％PEG柱狀體，洗脫體積峰位置隨時間增加說明在實驗釋放期間聚合物分子量降低(圖30)。第69天時觀察到分子量雙相分布。30％PEG柱狀體(1mm和0.65mm)聚合物的分子量也降低，但未觀察到雙相分布。NMR波譜揭示PEG峰在3.6ppm而PDLLA峰在1.65ppm和5.1ppm。69天后PEG峰區(qū)下降相對于共聚物中PDLLA更為顯著(圖29)，說明PEG與PDLLA分離后溶解。也記錄了柱狀體干基質(zhì)損失(圖29)，顯示降解速率按以下順序遞減30％PEG-0.65mm＞30％PEG-1mm＞20％PEG-1mm。使用SEM觀察了紫杉醇釋放前和釋放期間干柱狀體形態(tài)學(xué)變化(圖31)。簡要講，觀察了釋放前的固體紫杉醇柱狀體和無-孔聚合物基質(zhì)(圖31A和31B)。釋放69天后，未觀測到紫杉醇結(jié)晶及由于聚合物降解和水?dāng)z取而使基質(zhì)含有許多孔(圖31C和31D)。30％PEG柱狀體在水中僅2天就顯示廣泛腫脹(圖28)因此對分離的水溶性PEG塊和降解的PDLLA(即，DL-乳酸低聚物)的擴(kuò)散阻礙作用下降。由于30％PEG柱狀體的團(tuán)塊損耗和降解繼續(xù)，侵蝕釋放作用逐漸增加導(dǎo)致持續(xù)釋放而沒有任何突然變化(圖27)。20％PEG柱狀體，起始低腫脹導(dǎo)致降解產(chǎn)物低擴(kuò)散(圖28)。因而降解產(chǎn)物主要停留在內(nèi)部區(qū)域同時由于短的擴(kuò)散途徑故外部區(qū)域很少有降解產(chǎn)物。由于低聚物羧酸末端基團(tuán)催化水解降解，所以降解產(chǎn)物加速降解速率。這將導(dǎo)致正如雙相共聚物分子量分散圖所顯示的高分子量殼和低分子量內(nèi)部(圖30，第69天)。由于殼破裂依賴于如殼的強(qiáng)度、厚度和缺損等因素以及內(nèi)部降解產(chǎn)物，內(nèi)部降解產(chǎn)物的攻擊和損耗程度就極為不同。因為殼破裂不一致和聚合物中藥物顯微鏡下非均質(zhì)性，所以4個測試樣本的釋放脈沖時間點和脈沖程度不同(圖27)。paclitacel自PDLLA和PCL混合物和純PCL的釋放由圖32表示。簡要講，釋放部分隨著混合物中PDLLA含量增加而增加。例如，10天內(nèi)，PDLLA∶PCL為80∶20、70∶30和0∶100時，紫杉醇釋放分別為17％、11％和6％。關(guān)于80∶20PDLLA∶PCL糊劑，觀察到第一天小脈沖之后，接近恒定速率釋放。釋放期間未見顯著腫脹。PDLLA∶PCL混合物，由于PDLLA分子量很低約為800，它迅速水解為不能長時間停留在塊損耗的水溶性產(chǎn)物。PCL作為“保持”材料以維持糊劑不至于迅速降解。因此，由于促進(jìn)降解作用，混合物中PDLLA含量增加使釋放速率增加。PDLLA不間斷侵蝕控制紫杉醇釋放并導(dǎo)致恒定釋放。由于PCL降解速率慢(1-2年)，紫杉醇從純PCL的釋放可能由擴(kuò)散控制。在負(fù)載20％紫杉醇90∶10PDLLA∶PCL糊劑的釋放研究中遇到了困難，因為糊劑小丸在孵育24小時內(nèi)降解。簡要講，孵育的前12小時期間，每小時取樣本以便確定紫杉醇釋放消弱情況。10小時內(nèi)紫杉醇自90∶10糊劑釋放25-35％。含30％紫杉醇90∶10PDLLA∶PCL糊劑較含20％紫杉醇90∶10PDLLA∶PCL糊劑釋放的紫杉醇更多。因此，通過調(diào)節(jié)聚合物和化療物質(zhì)性質(zhì)或者通過調(diào)節(jié)給藥部位，調(diào)節(jié)紫杉醇釋放速率，在開發(fā)局部治療制劑中是重要的。實施例21制備含水溶性添加劑和紫杉醇的聚合組合物A.聚合組合物制備制備紫杉醇/添加劑的助沉淀微粒并隨后加到PCL中形成糊劑。概要地，紫杉醇(100mg)溶于0.5ml乙醇(95％)并與預(yù)先溶解或分散在1.0ml蒸餾水的添加劑(100mg)混合。研磨混合物直至形成勻滑糊劑。將糊劑鋪放在陪替氏培養(yǎng)皿37℃空氣干燥過夜。用乳缽和杵臼磨碎干塊并用#140篩(106μm)過篩(EndecottsTestSievesLtd.，London，England)。然后按紫杉醇20％負(fù)載量將微粒(40％)摻入65℃溶化的PCL(65％)。本實驗使用的添加劑是明膠(B型，100bloom，F(xiàn)isherScientific)、甲基纖維素(BritishDrugHouses)、葡聚糖、T500(Pharmacia，Sweden)、白蛋白(FisherScientific)和氯化鈉(FisherScientific)。紫杉醇和明膠或白蛋白顆粒按前述方法制備但要通過#60(270μm)篩(EndecottsTestSievesLtd.，London，England)以評價顆粒大小對紫杉醇從糊劑釋放的影響。也制備PCL中含10、20或30％明膠和20％紫杉醇的糊劑以研究添加劑比例對藥物釋放的影響。除非另外說明，制備分散于PCL含量為20％紫杉醇的糊劑作為釋放速率研究的對照。B.藥物釋放研究約2.5mg負(fù)載紫杉醇糊劑小丸懸浮于盛有50ml10mMPBS(pH7.4)的帶螺旋-蓋試管中。37℃試管頭尾倒置翻滾，在一定時間間隔取出49.5ml上清液，0.45μm過濾膜過濾，留作紫杉醇分析用。每個試管取代等體積PBS使在整個研究中保持滲透狀態(tài)。為了分析，用3×1ml二氯甲烷(DCM)萃取濾液，在氮氣流下蒸發(fā)干燥DCM萃取液并用1ml乙腈溶解殘渣。HPLC分析，流動相為水∶甲醇∶乙腈(37∶5∶58)，流速1ml/分(BeckmanIsocratic泵)，C18反相柱(Beckman)，和232nmUV檢測器(ShimadzuSPDA)。C.膨脹研究紫杉醇/添加劑/PCL糊劑，使用#140篩(和只用#60明膠)大小的紫杉醇-添加劑顆粒制備，擠出形成柱狀體，切成小片，稱重，用測微計(MitutoyioDigimatic)測量每一小片的直徑和長度。小片懸浮于37℃蒸餾水(10ml)中，按預(yù)定時間間隔棄去水，測量柱狀小片的直徑和長度及稱重樣本。使用掃描電子顯微鏡(SEM)(HitachiF-2300)檢測樣本(懸浮于水之前和之后)的形態(tài)學(xué)。使用Hummer設(shè)備(Technics，USA)將樣本用60％Au和40％Pd包衣(厚度10-15nm)。D.雞胚尿囊絨毛膜(CAM)研究受精的家養(yǎng)雞胚在去殼培養(yǎng)之前孵育4天。卵內(nèi)容物在90％相對濕度和3％二氧化碳條件下孵育，孵育第6天，1mg負(fù)載紫杉醇糊劑小片(含6％紫杉醇，24％明膠和70％PCL)或?qū)φ?PCL中30％明膠)糊劑直接放置于CAM表面。作用2-天后，用帶電視攝相機(jī)界面的立體顯微鏡檢測血管形成；然后將電視信號在計算機(jī)上顯示并打印圖像。E.結(jié)果與討論紫杉醇與明膠或白蛋白助沉淀微粒既硬又脆很方便摻入PCL，其它添加劑生產(chǎn)在制備糊劑過程中易于破碎的軟顆粒。圖33顯示紫杉醇從含20％紫杉醇PCL糊劑或20％紫杉醇、20％添加劑和60％PCL糊劑釋放時間過程。紫杉醇從含或不含添加劑的PCL釋放呈現(xiàn)雙-相釋放模式；紫杉醇從糊劑快速釋放的起始階段認(rèn)為是位于表面的紫杉醇溶解或紫杉醇從糊劑表面區(qū)域擴(kuò)散的結(jié)果。隨后的慢釋放相歸因于藥物與緩沖液接觸的有效表面區(qū)域減少，緩沖液緩慢進(jìn)入聚合物基質(zhì)或藥物通過聚合物基質(zhì)的通道途徑的擴(kuò)散增加。明膠、白蛋白和甲基纖維素親水性添加劑存在時紫杉醇從PCL釋放的兩個釋放相均產(chǎn)生藥物釋放速率的最大增加(圖33)。當(dāng)使用大的紫杉醇-添加劑顆粒(270μm)制備的糊劑，與使用小的紫杉醇-添加劑顆粒(106μm)相比，紫杉醇從聚合物基質(zhì)的釋放進(jìn)一步增加(圖34)。增加添加劑量(如，明膠)，藥物釋放相應(yīng)地增加(圖34)。圖35A顯示含20％紫杉醇、20％添加劑和60％PCL糊劑的腫脹情況。腫脹速率順序如下明膠＞白蛋白＞甲基纖維素＞葡聚糖＞氯化鈉。另外，向糊劑中加入高比例水溶性聚合物，腫脹速率增加(圖35B)。含明膠或白蛋白的糊劑在前8-10小時快速腫脹，隨后當(dāng)樣本體積變化大于40％時腫脹速率下降。使用大(270μm)紫杉醇-明膠顆粒制備的糊劑腫脹速率快于使用小(106μm)紫杉醇-明膠顆粒。當(dāng)體積增加大于50％時，所有糊劑降解。SEM研究顯示，糊劑膨脹伴隨著基質(zhì)斷裂(圖36)。高倍放大時(圖36C和36D)，在糊劑表面有明顯的針-或桿-狀紫杉醇結(jié)晶并且與明膠后繼腫脹密切相關(guān)(圖36C和36D)。滲透的或腫脹的親水物質(zhì)以分散顆粒包埋在疏水聚合物中導(dǎo)致藥物以基質(zhì)侵蝕、通過聚合物基質(zhì)擴(kuò)散，和/或通過水溶性添加劑溶解產(chǎn)生的小孔擴(kuò)散和/或?qū)α鞯慕Y(jié)合方式釋放。分散于疏水聚合物的滲透物質(zhì)和可膨脹聚合物將吸取水(作為燈芯物質(zhì))，溶解或膨脹和施加充盈壓使顆粒交界隔膜(聚合物層)破裂，產(chǎn)生微通道和由此便于藥物分子通過擴(kuò)散或?qū)α髅撘莸酵庵芙橘|(zhì)中。糊劑基質(zhì)的膨脹和斷裂(圖36)導(dǎo)致貫穿基質(zhì)內(nèi)部的微通道的形成。聚合物不同腫脹速率和程度(圖35)可解釋觀察到的紫杉醇釋放速率的不同(圖33和34)。圖37顯示對照明膠-PCL糊劑(圖37A)和20％紫杉醇-明膠-PCL糊劑(圖37B)處理的CAMs。CAMs表面糊劑在圖中用箭頭表示。對照糊劑處理的CAM顯示正常毛細(xì)血管網(wǎng)體系結(jié)構(gòu)。紫杉醇糊劑處理的CAM始終如一地顯示血管退化和缺少毛細(xì)血管網(wǎng)區(qū)域。糊劑中摻入添加劑明顯增加無血管區(qū)的直徑(圖37)。體外研究顯示，向PCL基質(zhì)中摻入紫杉醇/親水聚合物微粒可以增加紫杉醇從PCL釋放。評價治療小鼠皮下腫瘤制劑效果的體內(nèi)研究也顯示，紫杉醇/明膠/PCL糊劑顯著減小腫塊。水溶性物質(zhì)類型、微粒大小和添加劑比例等因素影響藥物釋放特性。實施例22制備毫微糊劑過程毫微糊劑是微球懸浮在親水凝膠中。本發(fā)明的一個方面，作為負(fù)載藥物微球定位貼緊靶組織的方法，可將凝膠或糊劑涂敷在組織上。作為水基，糊劑很快被體液稀釋引起糊劑粘度下降和微球趨向于沉積到附近組織。因此包封的藥物微球池定位貼緊靶組織。實驗中使用的試劑和設(shè)備包括玻璃燒杯、carbopol925(制藥級，GoodyearChemicalCo.)、蒸餾水、氫氧化鈉水溶液(1M)、氫氧化鈉水溶液(5M)、0.1lm～0.3lm大小以20％重量/體積比懸浮于水中的微球(見前面)。1.制備5％聚羧乙烯(carbopol)凝膠足量的聚羧乙烯加到1M氫氧化鈉中制得5％重量/體積比溶液。聚羧乙烯溶于1M氫氧化鈉，混合物放置約1小時。在此期間攪拌混合物和，1小時后，用5M氫氧化鈉調(diào)pH為7.4直至聚羧乙烯完全溶解。一旦pH達(dá)7.4，封蓋凝膠并放置2～3小時。2.制備毫微糊劑過程足量0.1μm～0.3μm微球加到水中制得20％微球懸浮液。聚羧乙烯凝膠(5％重量/體積8ml)放入玻璃燒杯中，加入2ml20％微球懸浮液。攪拌混合物使微球徹底分散于凝膠?；旌衔?℃儲存。實施例23紫杉醇環(huán)糊精組合物A.材料紫杉醇得自HauserChemicalsInc.(Boulder，Colorado)。磷酸二鈉(Fisher)、檸檬酸(BritishDrugHouses)、羥丙基-β-環(huán)糊精(HPβCD)、γ-環(huán)糊精(γ-CD)和羥丙基-γ-環(huán)糊精(HPγγCD)得自美國Maize-Products公司(Hammond，Indiana)并按來樣計算使用。B.方法1.溶解度研究過量紫杉醇(5mg)加入含有不同濃度γ-CD、HPγ-CD、或HPβ-CD水溶液中，于37℃輕輕翻轉(zhuǎn)24小時。懸浮液平衡等份試樣經(jīng)0.45μm過濾膜(Millipore)過濾，適當(dāng)稀釋并用HPLC分析。流動相由乙腈、甲醇和水的混合物(58∶5∶37)組成，流速1.0ml/分。也研究了紫杉醇在50∶50水和乙醇(95％)組成的含不同濃度，最高達(dá)10％的HPβ-CD溶劑中的溶解度。另外，紫杉醇溶解速率研究通過將2mg紫杉醇(按來樣計算)加到0、5、10、或20％HPγ-CD溶液或2mg預(yù)先水合的紫杉醇(在水中懸浮7天)加到純水中并置于37℃輕輕翻轉(zhuǎn)。不同時間間隔取等份試樣分析紫杉醇。2.穩(wěn)定性研究含20％HPβCD或HPγCD溶液的pH值分別為3.9和5.2。通過分析37℃或55℃不同時間間隔含10或20％HPβCD或HPγCD或水或50∶50水-乙醇混合物溶液中的紫杉醇，研究紫杉醇在環(huán)糊精溶液的穩(wěn)定性。此外，也測定了紫杉醇于55℃在含1％、2％或5％HPβCD溶液(1μg/ml)的穩(wěn)定性。C.結(jié)果1.溶解度研究在實驗的CD濃度范圍內(nèi)紫杉醇溶解度不斷增加；紫杉醇在HPβ-CD溶解度增加最大(圖38)。溶解度曲線提示化學(xué)計量為此1∶1絡(luò)合更高的數(shù)量級。紫杉醇與HPβ-CD和HPγ-CD均形成AP型曲線，而與γ-CD形成AN型曲線。紫杉醇于37℃在50％HPβ-CD溶液的溶解度為3.2mg/ml，該濃度約高出紫杉醇在水中溶解度的200倍。估算的γ-CD、HPγ-CD和HPβ-CD的紫杉醇-環(huán)糊精一級絡(luò)合穩(wěn)定常數(shù)(從圖39)分別是3.1、5.8和7.2M-1，γ-CD、HPγ-CD和HPβ-CD的二級絡(luò)合穩(wěn)定常數(shù)分別為0.785×103、1.886×103和7.965×103M-1。觀測到的穩(wěn)定常數(shù)值提示紫杉醇與環(huán)糊精形成的包合絡(luò)合物主要是二級絡(luò)合物。如在純水中觀察到的絡(luò)合，紫杉醇在50∶50水∶乙醇混合物中的穩(wěn)定性隨著環(huán)糊精濃度增加而增加(圖40)。紫杉醇和HPβ-CD在存在50％乙醇(26.57M-1)時的絡(luò)合表觀穩(wěn)定常數(shù)顯著低于(約300倍)不含乙醇時的穩(wěn)定常數(shù)。該低的穩(wěn)定常數(shù)可能有助于在乙醇存在時改變?nèi)軇┑慕殡姵?shù)和極性。紫杉醇在0、5、10和20％γ-CD溶液中的溶解概貌(圖41)說明在純水或環(huán)糊精溶液中紫杉醇亞穩(wěn)態(tài)溶液形成；溶液中紫杉醇量逐漸增加，達(dá)最大值隨后下降。使用預(yù)先懸浮于水中48小時的水合紫杉醇樣本的溶解度研究未顯示亞穩(wěn)態(tài)溶液形成。另外，水合紫杉醇(室溫下真空烘箱干燥)DSC分析顯示在60和110℃之間兩個寬的吸熱峰。這些峰伴有約4.5％的重量損失(通過熱重量分析測定)指示水合的存在。約2.1％的重量損失提示紫杉醇單水合物形成。因此，60和110℃之間DSC峰的出現(xiàn)和約4.5％的重量損失指示水合的存在。約2.1％的重量損失提示存在二水合物。紫杉醇樣本按來樣計算，沒有明顯的60℃與110℃之間吸熱峰或重量損失(TGA結(jié)果)。所以，(按來樣計算)紫杉醇是無水的并懸浮于水中溶解形成過飽和溶液，過飽和溶液以低溶解度水合物再結(jié)晶(圖41)。2.穩(wěn)定性研究紫杉醇降解依賴于環(huán)糊精濃度并按照準(zhǔn)-一級降解動力學(xué)(如，圖42)。紫杉醇在55℃含1％HPβ-CD溶液降解速率快于(k＝3.38×10-3h-1)高濃度環(huán)糊精溶液的溶解度。觀測到紫杉醇在10％HPβ-CD和HPγ-CD中的降解速率常數(shù)分別為1.78×10-3h-1和0.96×10-3h-1。含2、4、6或8％HPβ-CD的紫杉醇溶液(1μg/ml)的降解速率與10或20％HPβ-CD溶液(20μg/ml)的未有顯著差異。乙醇的存在并不逆向影響紫杉醇在環(huán)糊精溶液的穩(wěn)定性。D.結(jié)論研究表明，紫杉醇穩(wěn)定性可通過與環(huán)糊精絡(luò)合而增加。這些水-基環(huán)糊精制劑可用于治療各種炎癥性疾病。實施例24紫杉醇濃度增加的聚合組合物PDLLA-MePEG和PDLLA-PEG-PDLLA是具有疏水(PDLLA)和親水(PEG或MePEG)區(qū)域的二嵌共聚物。以適當(dāng)分子量和化學(xué)組成，它們可形成疏水PDLLA芯和親水MePEG殼的細(xì)小集合物。紫杉醇可負(fù)載于疏水芯中，因而提供“溶解度”增加的紫杉醇。A.材料D，L-交酯購自Aldrich，辛酸亞錫、聚(乙二醇)(分子量8,000)、MePEG(分子量2,000和5,000)購自Sigma。MePEG(分子量750)購自UnionCarbide。使用辛酸亞錫為催化劑通過環(huán)打開聚合工藝合成共聚物(Deng等，J.Polym.Sci.，PolymLett.28411-416，1990；Cohn等，J.Biomed，Mater.Res.22993-1009，1988)。為合成PDLLA-MePEG，將DL-交酯/MePEG/辛酸亞錫混合物加到10毫升玻璃安瓿中。安瓿連接真空泵并用火焰封口。150℃油浴孵育3小時完成聚合。為合成PDLLA-PEG-PDLLA，將DL-交酯/MePEG/辛酸亞錫混合物轉(zhuǎn)移到玻璃燒瓶中，橡皮塞封口，150℃烘箱中加熱3小時。共聚物的起始組合物列于表1和2。所有實例中，辛酸亞錫的量為0.5％-0.7％。B.方法聚合物溶于乙腈，于10,000g離心5分鐘，棄去所有不溶解雜質(zhì)。然后向每個聚合物溶液中加入紫杉醇乙腈溶液制成10％重量比的紫杉醇(紫杉醇+聚合物)溶液。在氮氣流和60℃溫度下，去除乙腈溶劑得到澄清的紫杉醇/PDLLA-MePEG基質(zhì)。加入4倍于基質(zhì)重量的蒸餾水、0.9％NaCl生理鹽水、或5％葡聚糖。在渦旋混合和周期性60℃加熱的協(xié)助下，基質(zhì)最終“溶解”。所有實例均得到澄清溶液。用亞微米粒度計(NICOMP型號270)測得粒子均小于50nm。制劑列于表1。表1PDLLA-MePEG溶解介質(zhì)紫杉醇負(fù)載(紫杉醇終濃度)2000/50/50水10％(20mg/ml)2000/40/60水10％(20mg/ml)2000/50/500.9％生理鹽水5％(10mg/ml)2000/50/500.9％生理鹽水10％(20mg/ml)2000/50/505％葡萄糖10％(10mg/ml)2000/50/505％葡萄糖10％(20mg/ml)PDLLA-PEG-PDLLA情況中(表2)，由于共聚物不溶于水，紫杉醇和聚合物共同-溶于丙酮。逐漸向紫杉醇和聚合物中加入水或水/丙酮混合物從而形成紫杉醇/聚合物球。表2.PDLLA-PEG-PDLLA組合物共聚物名稱PEG重量(g)D，L-交酯重量(g)PDLLA-PEG-PDLLA90/1019PDLLA-PEG-PDLLA80/2028PDLLA-PEG-PDLLA70/3037PDLLA-PEG-PDLLA60/4046PDLLA-PEG-PDLLA30/70146*PEG分子量.8,000.C.結(jié)果許多PDLLA-MePEG組合物在水、0.9％NaCl生理鹽水、或5％葡聚糖中形成澄清溶液，說明納米范圍細(xì)小集合物形成。紫杉醇成功負(fù)載到PDLLA-MePEG微膠粒中。例如，以％負(fù)載時(表示1ml紫杉醇/PDLLA-MePEG/含水系統(tǒng)有10mg紫杉醇)，2000-50/50和2000-40/60配比得到澄清溶液。粒子大小約60nm。實施例25膜生產(chǎn)過程術(shù)語膜指聚合物形成的多種幾何形狀之一。膜可以是薄的、有彈性聚合物薄片或是2mm厚聚合物盤，兩者均可用于組織表面以預(yù)防繼后的疤痕和粘連形成。膜被設(shè)計成放置于暴露組織表面以便于任何包封藥物在組織位點可從聚合物長時間釋放。膜可由數(shù)種過程制備，包括例如，鑄塑，和噴涂。鑄塑技術(shù)，聚合物或者溶化后倒入成型機(jī)或者溶解于二氯甲烷再倒入成型機(jī)。然后聚合物分別或冷卻固化或通過溶劑蒸發(fā)固化。噴涂技術(shù)，聚合物溶于溶劑并噴霧到玻璃上，溶劑蒸發(fā)聚合物在玻璃固化。重復(fù)噴霧制成可從玻璃剝落的聚合物膜。這些實驗使用的試劑和設(shè)備包括一個小的燒杯、Corning熱板攪拌器、鑄塑模具(如，50ml離心管蓋)和模具支撐裝置、20ml帶蓋玻璃閃爍管(塑料插入型)、TLC噴霧器、氮氣罐、聚己內(nèi)酯(“PCL”-分子量10,000～20,000；Polysciences)、紫杉醇(Sigma純度95％)、乙醇、“洗脫的”(見前面)乙烯醋酸乙烯酯(“EVA”)、聚(DL)乳酸(“PLA”-分子量15,000～25,000；Polysciences)、DCM(HPLC級；FisherScientific)。1.膜制備過程-溶化鑄塑盛有已知重量紫杉醇的小燒杯放到大的盛有水(作水浴用)的燒杯中，放在70℃熱板上直至聚合物完全溶化。向溶化的聚合物中加入已知重量的藥物并徹底攪拌混合物。將溶化的聚合物倒入模具然后冷卻。2.膜制備過程-溶劑鑄塑已知重量PCL稱重后直接加入20ml玻璃閃爍管中，加入足量DCM以制得10％重量/體積比溶液。向溶液中加入足量紫杉醇后混合溶液以達(dá)所需的紫杉醇終濃度。渦旋溶液使紫杉醇溶解，放置1小時(減少空氣泡的存在)然后緩慢倒入模具。將模具置于通風(fēng)櫥過夜，使DCM蒸發(fā)。3.膜制備過程-噴涂法足量聚合物稱重后直接加入20ml玻璃閃爍管中，加入足量DCM制得2％重量/體積比溶液?；旌先芤菏咕酆衔锶芙狻Ｊ褂米詣游抗軐⑦m當(dāng)體積(最少5ml)2％聚合物溶液移至另一個玻璃閃爍管中。向溶液中加入足量紫杉醇，搖動振蕩蓋塞試管使紫杉醇溶解。為產(chǎn)生噴霧，去除試管塞并將TLC噴霧器桶浸入聚合物溶液。氮氣罐連接噴霧器的進(jìn)氣口，逐漸增加壓力直至霧化和開始噴霧。使用5秒往復(fù)振蕩噴霧，噴霧之間15秒干燥時間，將模具噴涂。噴霧繼續(xù)進(jìn)行直至適宜厚度的聚合物沉積在模具上。實施例26負(fù)載治療物質(zhì)的乙烯醋酸乙烯酯和表面活性劑組成的聚合物膜本實驗研究兩種膜負(fù)載紫杉醇的純EVA膜和負(fù)載紫杉醇的EAV/表面活性劑混合膜。實驗的表面活性劑是兩種疏水表面活性劑(Span80和消泡L101)和一種親水表面活性劑(消泡F127)。消泡表面活性劑本身是聚合物，它們具有吸引力的性質(zhì)是因為它們可與EVA混合而使不同藥物釋放特性達(dá)到最佳。Span80是小分子它可分散于聚合物基質(zhì)，并不形成混合物。表面活性劑對于調(diào)節(jié)紫杉醇從膜的釋放速率是有宜的，并且使膜的一些物理參數(shù)得到優(yōu)化。顯示藥物釋放速率可以控制的表面活性劑混合膜的一個方面是改變化合物在水中的膨脹速率和程度的能力。水?dāng)U散進(jìn)入聚合物-藥物基質(zhì)是藥物從載體釋放的關(guān)鍵。圖43C和43D顯示膜的膨脹程度受到混合物中表面活性劑水平的影響。純EVA膜在2個多月時間內(nèi)膨脹程度不明顯。然而，提高加入EVA中的表面活性劑水平很可能增加化合物膨脹程度，并由此通過提高親水性而使膨脹加劇。這些膜實驗結(jié)果示于圖43A-E。簡要講，圖43A顯示紫杉醇從純EVA膜的超時釋放(mg計)。圖43B顯示同一膜中殘留藥物百分比。從這兩個圖可看出，紫杉醇負(fù)載增加(即，紫杉醇重量百分比增加)，藥物釋放速率增加，顯示預(yù)期的濃度依賴性。隨著紫杉醇負(fù)載增加，膜中紫杉醇?xì)埩舭俜直纫苍黾?，說明高負(fù)載量對于長-期釋放制劑更具吸引力。測試了膜的物理強(qiáng)度和彈性并展示于圖43E。簡要講，圖43E表示純EVA膜和EVA/表面活性劑混合膜的應(yīng)力/張力曲線。此粗糙的應(yīng)力測試說明膜的彈性隨著消泡127的加入而增加，和拉伸強(qiáng)度(斷開應(yīng)力)對于加入消泡127呈濃度依賴性增加。設(shè)計膜時彈性和強(qiáng)度是重點考慮的內(nèi)容，膜必須能夠在不引起化合物永久變形的情況下為特定臨床應(yīng)用所使用。上述數(shù)據(jù)表明，一些表面活性劑可控制藥物釋放速率和改變載體的物理特性。實施例27制備毫微噴霧劑毫微噴霧是小微球懸浮于生理鹽水。如果微球特別小(即，直徑小于1μm)，它們形成膠體懸浮而不會在重力作用下沉降。如下面將要詳述的，通過laproscopic干預(yù)，或通過指壓泵氣溶膠(如，局部釋放)，制備適宜在手術(shù)時(如，血管粘連)直接氣霧化沉降到組織的0.1μm～1μm微球懸浮液。制備毫微噴霧劑的設(shè)備和材料包括200ml水夾層燒杯(Kimax或Pyrex)，Haake循環(huán)水浴，架空攪拌器和2英寸直徑調(diào)節(jié)器(4葉片螺旋槳型不銹鋼攪拌器；Fisher牌)，500ml玻璃燒杯，熱板攪拌器(Corning牌)，4×50ml聚乙烯離心管(Nalgene)，帶塑料插塞的玻璃閃爍管，臺式離心機(jī)(Bechman)，高速離心機(jī)-落地型(JS21Beckman)，Mettler分析天平(AJ100，0.1mg)，Mettler數(shù)字顯示的自頂裝入式天平(AE163，0.01mg)，自動吸量管(Gilson)，無菌移液管管尖，泵作用氣溶膠(Pfeifferpharmaceuticals)20ml，層流通風(fēng)櫥，PCL(分子量10,000～20,000；Polysciences，Warrington，PennsylvaniaUSA)，“洗脫的”(見前面)EVA，PLA(分子量15,000～25,000；polysciences)，聚乙烯醇(“PVA”-分子量124,000～186,000；99％水解的；AldrichChemicalCo.，MilwaukeeWIUSA)，DCM或“二氯甲烷”；HPLC級Fisherscientific)，蒸餾水，無菌生理鹽水(Becton和Dickenson或等價物)。1.制備5％(重量/體積比)聚合物溶液為了制備聚合物溶液，下述物質(zhì)稱重后直接加到20ml玻璃閃爍管中1.00gPCL或PAL或者0.50gPLA和0.5g洗脫的EVA。經(jīng)量筒測量，加入20mlDCM并蓋緊試管塞。試管室溫(25℃)放置直至聚合物溶化。2.制備3.5％(重量/體積比)的PVA原液溶液按下述過程制備，或通過稀釋制備微球時(見實施例28)制備的5％(重量/體積)PVA原液制備。簡要地，17.5gPVA稱重后直接加到600ml玻璃燒杯中，并加入500ml蒸餾水。燒杯蓋好后放入盛有300ml水的2000ml玻璃燒杯中。85℃以300轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢柚敝罰VA完全溶解。3.毫微噴霧劑制備過程簡要地，100ml3.5％PVA溶液放入盛有200ml水連接Haake水浴的夾層燒杯中。以3000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢锜瓋?nèi)容物并使用5ml自動吸量管在2分鐘的時期間將10ml聚合物溶液(使用的聚合物溶液基于所制備毫微噴霧的類型)滴入攪拌的PVA中。3分鐘后，攪拌速度調(diào)至2500轉(zhuǎn)/分(+/-200轉(zhuǎn)/分)2.5小時。2.5小時后，從毫微噴霧制劑中移走攪拌葉片，用10ml蒸餾水漂凈葉片并將漂洗溶液加到毫微制劑中。微球制劑倒入500ml燒杯。用70ml蒸餾水沖洗夾層水浴并將這70ml漂洗液加入微球制劑。此180ml微球制劑用玻璃棒攪拌和等量倒入4個50ml聚乙烯離心管中，在10,000g(+/-1000g)離心10分鐘。PVA溶液從微球小丸中離出并將之棄掉。每個離心管中加入蒸餾水(5ml)并渦旋。該4個微球懸浮液倒入一個盛有20ml蒸餾水的離心管中以10,000g(+/-1000g)離心10分鐘。棄掉從微球小丸中離出的上清液，加入40ml蒸餾水并渦旋微球制劑(此過程重復(fù)3次)。然后將微球制劑轉(zhuǎn)移至預(yù)先稱重的玻璃閃爍管中。試管在室溫(25℃)放置1小時使直徑2μm和3μm的微球在重力作用下沉降。1小時后，取出上面9ml懸浮液，放入一無菌帶蓋50ml離心管，以10,000g(+/-1000g)離心10分鐘。棄掉上清液，用20ml無菌生理鹽水重新懸浮小丸，以10,000g(+/-1000g)離心懸浮液10分鐘。棄上清液，用無菌生理鹽水重新懸浮小丸。生理鹽水用量取決于所需懸浮液濃度(一般為10％重量/體積)。將毫微噴霧劑加入氣溶膠。實施例28制備微球用于制備微球的設(shè)備包括200ml水夾層燒杯(Kimax或Pyrex)，Haake循環(huán)水浴，架空攪拌器和2英寸直徑調(diào)節(jié)器(4葉片螺旋槳型不銹鋼攪拌器；Fisher牌)，500ml玻璃燒杯，熱板攪拌器(Corning牌)，4×50ml聚乙烯離心管(Nalgene)，帶塑料插塞的玻璃閃爍管，臺式離心機(jī)(Bechman)，高速離心機(jī)-落地型(JS21Beckman)，Mettler分析天平(AJ100，0.1mg)，Mettler數(shù)字顯示的自頂裝入式天平(AE163，0.01mg)，自動吸量管(Gilson)。試劑包括PCL(分子量10,000～20,000；Polysciences，Warrington，PennsylvaniaUSA)，“洗脫的”(見后面方法“洗脫”)EVA，PLA(分子量15,000～25,000；polysciences)，聚乙烯醇(“PVA”-分子量124,000～186,000；99％水解；AldrichChemicalCo.，MilwaukeeWI，USA)，DCM或“二氯甲烷”；HPLC級Fisherscientific和蒸餾水。A.制備5％(重量/體積)聚合物溶液DCL(1.00g)或PLA，或PLA和洗脫的EVA各0.50g稱重后直接加到20ml玻璃閃爍管中。加入20mlDCM。試管加蓋并于室溫(25℃)存放1小時(偶爾使用搖動)，或直至所有聚合物溶解。溶液可于室溫存放至少2周。B.制備5％(重量/體積比)的PVA原液25gPVA稱重后直接加到600ml玻璃燒杯中，并沿聚四氟乙烯包衣的3英寸攪拌棒加入500ml蒸餾水。用玻璃覆蓋燒杯以減少蒸發(fā)損失，放入盛有300ml水的2000ml玻璃燒杯中。85℃以300轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?Corning熱板攪拌器)PVA2小時或直至完全溶解。目測PVA溶解情況；溶液應(yīng)當(dāng)澄清。將溶液移至上端帶螺扣的玻璃儲存容器中并于4℃最多儲存2個月。然而，使用或稀釋前溶液必須加熱到室溫。C.微球制備過程基于要制備微球的大小(見表1)，100mlPVA溶液(濃度列于表1)放進(jìn)200ml水夾層燒杯中。Haake循環(huán)水浴與夾層燒杯連接，內(nèi)容物在27℃(+/-1℃)平衡10分鐘?；谝苽湮⑶虼笮?見表1)，設(shè)定高位攪拌器的起始速度，高位攪拌器的葉片浸于PVA溶液的中部。啟動攪拌器，然后使用5ml自動吸量管用2分鐘時間向攪拌的PVA溶液中加入10ml聚合物溶液(使用的聚合物溶液基于要制備微球的類型)。3分鐘后調(diào)整攪拌速度(見表1)，再攪拌溶液2.5小時。從微球制劑中移出攪拌葉片，并用10ml蒸餾水漂洗以便于將漂洗溶液倒入微球制劑。接著將微球制劑倒入500ml燒杯，用70ml蒸餾水沖洗夾層水浴，洗液也倒入微球制劑。用玻璃棒攪拌此180ml微球制劑，并等量倒入4個50ml聚乙烯離心管。試管蓋塞，離心10分鐘(離心力在表1給出)。每個微球小丸離出45mlPVA溶液。表1PVA濃度，攪拌速度，和每種直徑范圍微球所需離心力制造階段微球直徑范圍30μm～100μm10μm～30μm0.1μm～3μmPVA濃度2.5％(重量/體積)(即，用蒸餾水稀釋5％原液)5％(重量/體積)(即，不稀釋原液)3.5％(重量/體積)(即，用蒸餾水稀釋5％原液))起始攪拌速度500轉(zhuǎn)/分+/-50轉(zhuǎn)/分500轉(zhuǎn)/分+/-50轉(zhuǎn)/分3000轉(zhuǎn)/分+/-200轉(zhuǎn)/分調(diào)整的攪拌速度500轉(zhuǎn)/分+/-50轉(zhuǎn)/分500轉(zhuǎn)/分+/-50轉(zhuǎn)/分2500轉(zhuǎn)/分+/-200轉(zhuǎn)/分離心力1000g+/-100g(臺式)1000g+/-100g(臺式)10000g+/-1000g(高速式)然后，5ml蒸餾水加入每一個離心管并渦旋使微球重新懸浮。該4個微球懸浮液同20ml蒸餾水一起倒入離心管中再離心10分鐘(離心力在表1中給出)。此過程重復(fù)2次總共3次洗滌。然后最后一次離心微球并用10ml蒸餾水重新懸浮。最后洗滌后，將微球制劑轉(zhuǎn)移至預(yù)先稱重的玻璃閃爍管中。試管加蓋并于室溫(25℃)過夜以使微球在重力作用下沉降。由于0.1μm～0.3μm大小的微球不受重力作用沉降，所以它們留在10ml懸浮液中。D.干燥直徑10μm～30μm或30μm～100μm微球微球置于室溫過夜后，上清液從沉降微球離出。放在一個抽屜中在不加蓋小瓶中的微球干燥一周或直至它們完全干燥(小瓶重量恒定)。將小瓶置于通風(fēng)櫥中在慢的氮氣流(流速約10ml/分)下可加速完成干燥。完全干燥后(小瓶重量恒定)，稱重小瓶并加蓋。標(biāo)記的加蓋小瓶室溫儲存于一抽屜中。微球正常儲存不超過3個月。E.測定直徑0.1μm～0.3μm微球懸浮液濃度此大小范圍的微球不沉降，所以它們在4℃留在懸浮液中最多達(dá)4周。為測定10ml懸浮液中微球的濃度，將200ml懸浮液樣本用吸量管移至預(yù)先稱重的1.5mlmicrofuge管。管在10,000g(Eppendorf臺式頂部放置式microfuge)下離心，移走上清液，管在50℃過夜干燥。重新稱重小管以測定管內(nèi)干燥微球的重量。F.生產(chǎn)負(fù)載紫杉醇微球為制備包含紫杉醇的微球，稱重的適量紫杉醇(基于要包封的紫杉醇百分比)直接置于20ml玻璃閃爍管。然后向含紫杉醇試管中加入10ml適宜聚合物溶液，接著渦旋直至紫杉醇溶解。然后基本上按照上述(C)到(E)步驟制備包含紫杉醇微球。實施例29表面活性劑包衣的微球A.材料與方法基本上按前面描述的方法由聚(DL)乳酸(PLA)、聚甲基異丁烯酸酯(PMMA)、聚己內(nèi)酯(PCL)和50∶50乙烯基醋酸乙烯酯(EVA)∶PLA制備微球。大小范圍直徑10～100μm，平均直徑45μm。由健康志愿者得到人血。使用葡聚糖沉降和Ficoll海帕克(Hypaque)離心技術(shù)從血中分離中性粒細(xì)胞(白細(xì)胞)。每mlHBSS懸浮5百萬個白細(xì)胞。用化學(xué)螢光法測定活性氧類生成從而測定中性粒細(xì)胞活化水平。特別是，使用1μM熒光增強(qiáng)劑的LKB熒光計測定化學(xué)熒光。通過將10mg微球懸浮于0.5ml血漿并于37℃翻轉(zhuǎn)30分鐘，進(jìn)行血漿預(yù)包覆(或調(diào)理素作用)微球。用1mlHBSS微球沖洗微球，離心的微球小丸在時間t＝0時加到37℃中性粒細(xì)胞懸浮液中。通過將10mg微球在37℃于0.5ml2％重量/重量消泡F127HBSS溶液中懸浮30分鐘，將微球表面用稱為消泡F127(BASF)的表面活性劑改性。在將微球加入中性粒細(xì)胞或血漿進(jìn)行下一步預(yù)包覆之前，用1mlHBSS沖洗微球表面。B.結(jié)果圖44顯示未處理微球的化學(xué)熒光值小于50mV。這些值表示中性粒細(xì)胞低活化水平。經(jīng)過比較，炎性微結(jié)晶產(chǎn)生的值可接近1000mV，溶解的化學(xué)激活劑產(chǎn)生的值可接近5000mV。然而，用血漿預(yù)包覆微球，化學(xué)熒光值增大到100～300mV(圖44)。此水平中性粒細(xì)胞反應(yīng)或活化認(rèn)為是中度炎癥。PMMA產(chǎn)生最大反應(yīng)可認(rèn)為是最重度炎癥。血漿預(yù)處理后(或調(diào)理素作用)PLA和PCL兩者激活中性粒細(xì)胞作用增加3～4倍，但在此方面兩種聚合物之間差異很小。由于微球難以干燥和重新懸浮于含水緩沖液中，EVA∶PLA不可能用于制備血管形成制劑。血漿的這種作用被稱為調(diào)理素作用，是抗體或補(bǔ)體分子吸附到表面的結(jié)果。這些吸附物質(zhì)與白細(xì)胞受體相互作用引起增強(qiáng)的細(xì)胞活化。圖45-48描述血漿分別預(yù)包覆PCL、PMMA、PLA和EVA∶PLA微球的效果以及血漿預(yù)包覆之前先用消泡F127預(yù)包覆微球的效果。所有圖均顯示同樣結(jié)果(1)血漿預(yù)包覆使反應(yīng)增強(qiáng)；(2)消泡F127預(yù)包覆對其本身無影響；(3)由血漿預(yù)包覆增強(qiáng)的中性粒細(xì)胞反應(yīng)可被2％消泡F127預(yù)處理微球表面而強(qiáng)烈抑制。使用電泳對來自血漿的吸附蛋白類的性質(zhì)也進(jìn)行了研究。使用該方法，顯示消泡F127預(yù)處理微球表面抑制抗體吸附到聚合物表面。圖49-52同樣地顯示用IgG(2mg/ml)或者先用2％消泡F127再用IgG(2mg/ml)預(yù)包覆PCL、PMMA、PLA和EVA∶PLA微球(分別地)的效果。如圖中所見，由IgG預(yù)包覆微球的增強(qiáng)反應(yīng)可被消泡F127處理抑制。這些結(jié)果顯示，用消泡F127預(yù)處理微球的所有4種類型聚合物表面，中性粒細(xì)胞對微球的“炎癥”反應(yīng)可被抑制。實施例30聚(ε-己內(nèi)酯)微球包封治療物質(zhì)負(fù)載紫杉醇微球抑制CAM血管形成作用分析本實施例評價紫杉醇置于CAM上時其從聚(ε-己內(nèi)酯)(PCL)生物降解微球中體外釋放速率概貌并說明從微球中釋出的紫杉醇的體內(nèi)抗-血管形成活性。試驗中使用的試劑PCL(分子量35,000～45,000；購自Polysciences，(Warrington，PA))；DCM購自FisherScientificCo.，加拿大；聚乙烯醇(PVP)(分子量12,000～18,000；99％水合)購自AldrichChemicalCo.，(Milwaukee，Wis.)，和紫杉醇購自SigmaChemicalCo.(St.Louis，MO)。除非另外特別聲明，所有化學(xué)品和試劑由供應(yīng)商提供。整個過程使用蒸餾水。A.制備微球基本上按照實施例28描述的使用溶劑蒸發(fā)方法制備微球。簡要地，通過將10mg紫杉醇和190mgPCL溶于2mlDCM，加入100ml1％PVP含水溶液并在25℃1000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?小時，制得負(fù)載5％重量/重量紫杉醇微球。微球懸浮液1000g離心10分鐘(BeckmanGPR)，移走上清液，用水將微球沖洗3次。洗滌后的微球空氣-干燥過夜并室溫儲存。按上述方法制備對照微球(不含pacitaxel)。同時制備含1％和2％紫杉醇的微球。用帶鏡臺測微計的光學(xué)顯微鏡測量微球大小。B.包封效果已知重量的負(fù)載藥物微球(約5mg)溶于8ml乙腈，加入2ml水以沉淀聚合物。混合物在1000g離心10分鐘，通過測定上清液在UV分光光度計(Hewlett-Packard8452A二極管陣列分光光度計)232nm處的吸收度計算包封的紫杉醇量。C.藥物釋放研究約10mg負(fù)載紫杉醇微球懸浮于盛有20ml10mMPBS(pH7.4)的帶螺扣-蓋試管中。37℃翻滾試管，在預(yù)定時間間隔取出19.5ml上清液(待微球沉在管底后)，0.45μm濾膜過濾并留作紫杉醇分析用。每個試管補(bǔ)充等體積PBS使整個研究過程保持消減狀態(tài)。用3×1mlDCM萃取濾液，DCM萃取液在氮氣流下蒸發(fā)干燥，1ml乙腈溶解殘渣并進(jìn)行HPLC分析，HPLC使用流動相為水∶甲醇∶乙腈(37∶5∶58)，流速1ml/分(BeckmanIsocratic泵)，C8反相柱(Beckman)，和UV檢測器(ShimadzeSPDA)波長232nm。D.CAM研究受精的家養(yǎng)雞胚去殼培養(yǎng)前孵育4天。孵育第6天，將1mg負(fù)載5％紫杉醇或?qū)φ?不含紫杉醇)微球的等份試樣直接放置于CAM表面。作用2天后，使用有電視攝象機(jī)介面的立體顯微鏡檢測血管形成情況；電視信號在計算機(jī)上顯示并打印。E.掃描電子顯微鏡微球置于樣品容器，用金濺射涂膜然后放進(jìn)飛利浦50lBSEM，在15kV操作。F.結(jié)果微球樣本大小為30～100μm，盡管每一批負(fù)載紫杉醇和對照微球中均有一些微球明顯落在此范圍之外。所有藥物負(fù)載研究中，PCL微球負(fù)載紫杉醇效率一般大于95％。電子顯微鏡掃描顯示微球均呈球形且表面粗糙或有許多麻點?？瓷先ノ⑶虮砻鏇]有明顯的固體藥物。紫杉醇從負(fù)載1％、2％和5％的PCL微球釋出時間過程由圖53A表示。釋放速率概貌呈雙相。所有負(fù)載藥物均有一個紫杉醇起始快速釋放或“脈沖相”。1％和2％負(fù)載量微球脈沖相出現(xiàn)1-2天，而5％負(fù)載量微球脈沖相出現(xiàn)3-4天。起始快速釋放相之后是顯著變慢的藥物釋放相。含1％或2％紫杉醇微球在21天后不再有藥物釋放。負(fù)載5％紫杉醇，21天后微球釋放總藥量的20％。圖53B顯示用對照PCL微球處理的CAMs，圖53C顯示負(fù)載5％紫杉醇微球處理的CAMs。用對照微球處理的CAM顯示正常毛細(xì)血管網(wǎng)結(jié)構(gòu)體系。用紫杉醇-PCL微球處理的CAM顯示明顯的血管退化和缺乏毛細(xì)血管網(wǎng)區(qū)。G.討論溶劑蒸發(fā)方法制備的負(fù)載紫杉醇微球包封效率極高且在95-100％之間。這是由于紫杉醇水溶性差和它的疏水性質(zhì)有益于分配于包含聚合物的有機(jī)溶劑相。對許多從生物降解聚合物基質(zhì)釋出的藥物來說，紫杉醇雙相釋放概貌是典型的釋放模式。聚(ε-己內(nèi)酯)是可在生理條件下水解降解的脂肪族聚合物并且它是無毒及組織適合性的。PCL降解顯著慢于廣泛研究的乳酸和羥基乙酸的聚合物和共聚物，因此PCL適于長期藥物釋放系統(tǒng)設(shè)計。認(rèn)為紫杉醇釋放的起始快速或脈沖相是由于藥物從微球表面(接近微球表面)區(qū)域擴(kuò)散釋放所致。釋放概貌第二相(慢速)紫杉醇釋放不可能是由于PCL降解或侵蝕所致，因為研究已經(jīng)顯示，水中進(jìn)行的體外試驗時在7.5周的期間PCL沒有顯著的重量損失或表面侵蝕。紫杉醇釋放慢速相大概是由于因為溶于聚合物基質(zhì)流體填充的小孔中并通過小孔擴(kuò)散。高紫杉醇負(fù)載量時更快釋放可能是聚合物基質(zhì)內(nèi)有更廣泛小孔網(wǎng)絡(luò)的結(jié)果。5％負(fù)載量的紫杉醇微球放置于CAM時已經(jīng)顯示出釋放足量藥物產(chǎn)生廣泛的血管形成抑制。抑制血管生長導(dǎo)致無血管區(qū)示于圖53C。實施例31制備PLGA微球由乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)制備微球。A.方法用標(biāo)準(zhǔn)方法制備大小為0.5～10μm、10-20μm和30-100μm微球(聚合物溶于二氯甲烷和按照前面PCL或PDLLA微球制備方法中描述的在聚乙烯醇溶液中攪拌乳化)。使用PLLA與GA不同比值作為不同分子量聚合物(見內(nèi)部粘性(IV))。B.結(jié)果由下面起始聚合物成功地制備了微球。PLLA∶GAI.V50∶500.7450∶500.7850∶501.0665∶350.5575∶250.5585∶150.5610％或20％負(fù)載量的紫杉醇成功地?fù)饺敫鞣N微球。一種起始聚合物(85∶15，IV＝0.56)大小分布的實例示于圖54-57。使用不同大小和不同組合物微球進(jìn)行紫杉醇釋放實驗。釋放速率見圖58-61。實施例32紫杉醇包封于尼龍微膠囊治療物質(zhì)也可包封于廣泛不同的載體，所述載體可制成所選用的形式或器具，例如，下面將要詳述，紫杉醇可摻入尼龍微球制成人工心臟瓣膜、血管移植、手術(shù)篩網(wǎng)，或縫線。A.制備負(fù)載紫杉醇微球使用界面聚合技術(shù)將紫杉醇包封于尼龍微球。簡要講，100mg紫杉醇和100mg消泡F-127溶于1mlDCM并加入0.4ml(約500mg)己二酰二氯(ADC)。使用Polytron勻漿器(1副)將溶液在2％PVA溶液中勻化15秒種。勻漿過程中滴狀加入溶于5ml蒸餾水的1，6-己烷-二胺(HMD)溶液。加入HMD溶液后將混合物再勻漿10秒種。混合物移至一個燒杯中并用磁力攪拌器攪拌3小時稀釋。離心混合物，收集并用1ml蒸餾水重新懸浮。B.包封效果/紫杉醇負(fù)載約0.5ml懸浮液過濾并加入微球。稱重約2.5mg微膠囊并懸浮于10ml乙腈24小時。用上清液分析紫杉醇且結(jié)果用紫杉醇百分比表示。初步研究顯示，紫杉醇可以高負(fù)載量(高達(dá)60％)和高包封效率(大于80％)包封于尼龍微膠囊。C.紫杉醇釋放研究約2.5mg紫杉醇-尼龍微球懸浮于分別含1M氯化鈉和1M尿素的50ml水中并定期分析。紫杉醇從微膠囊釋放快，72小時后大于95％的藥物釋放(圖62)。實施例33生物粘著微球A.制備生物粘著微球由直徑10-60μm粒徑100kg/molPLLA制備微球。微球在氫氧化鈉溶液孵育以通過水解聚酯在表面上產(chǎn)生羧酸基團(tuán)。反應(yīng)以氫氧化鈉濃度和測量表面電荷確定的孵育時間為特征。0.1M氫氧化鈉孵育45分鐘后反應(yīng)完全。堿處理后，將微球懸浮于DEC乙醇溶液從而將微球用二甲胺基氨基丙?；蓟啺?DEC)包衣，DEC是一種交聯(lián)劑，以及將混合物干燥制成可分散的粉。微球與DEC重量比是9∶1。微球干燥后，它們攪拌分散于2％重量/體積的聚(丙烯酸)(PAA)溶液，DEC與PAA反應(yīng)在微球表面形成不溶于水的交聯(lián)PAA網(wǎng)。掃描電子顯微鏡用于確定微球表面PAA的存在。堿處理前后微球的不同掃描測熱法揭示，用SEM觀測到整體熱性質(zhì)(Tg，熔點和結(jié)晶度)未發(fā)生變化。B.體外紫杉醇釋放速率制備相同粒徑的紫杉醇-負(fù)載微球(負(fù)載10％和30％重量/重量)并在體外于PBS中釋放10天的釋放概貌。釋放與藥物負(fù)載成比例，10天內(nèi)從5mg30％負(fù)載量微球釋出400μg紫杉醇，而相同期間從10％負(fù)載量微球釋出1500μg。包封效率約為80％。紫杉醇-負(fù)載微球在0.1M氫氧化鈉孵育45分鐘，氫氧化鈉孵育前后測定電動電勢。堿處理前后紫杉醇-負(fù)載微球表面電荷均低于不負(fù)載紫杉醇微球。C.制備聚賴氨酸或粘連蛋白包覆的PLLA及對其體外評價制備含1％蘇丹黑(使微球著色)PLLA微球。微球懸浮于2％(重量/體積)聚賴氨酸(Sigmachemicals-Hydrlbromellform)或粘連蛋白(Sigma)溶液10分鐘。微球用緩沖液沖洗一次并放置于新鮮制備的大鼠膀胱內(nèi)表面。膀胱放置10分鐘然后在緩沖液中沖洗3次。此過程后膀胱壁存在殘留(結(jié)合)微球，因此表明粘連蛋白和聚-1-賴氨酸包衣微球均發(fā)生生物粘附。(圖63A和63B)。實施例34紫杉醇預(yù)防CIA大鼠模型中關(guān)節(jié)炎發(fā)病A.材料與方法給120～150g純種雌性Louvain大鼠注射用0.1M醋酸溶解并在FIA(Difco，Detroit，MI)乳化的天然雞膠原II(Genzyme，Boston，MA)0.5mg。免疫后約9天，動物發(fā)展為伴肉芽組織形成和軟骨侵蝕組織學(xué)變化的多發(fā)性關(guān)節(jié)炎?？偣?5只大鼠分為4組方案1個只接受載體的對照組(n＝17)和3個紫杉醇治療組，其中1個預(yù)防方案組和2個抑制方案組。為評價紫杉醇作用，免疫后2天(預(yù)防方案)或關(guān)節(jié)炎發(fā)病第9天(抑制方案)將紫杉醇(溶于1∶1稀釋的乙醇和CremophorE.L.(Sigma)中并加入生理鹽水使紫杉醇在5％重量/體積乙醇和CremophorE.L.的終濃度為4.8mg/ml)腹膜內(nèi)給藥(i.p.)。預(yù)防方案組(n＝8)，于第2天開始按1mg/kg體重紫杉醇給藥并于第5、7、9、12和14天給藥5次。高劑量抑制方案組(n＝10)，紫杉醇(1mg/kg體重)自第9天開始隔日給藥。低劑量抑制方案組(n＝10)，紫杉醇以1mg/kg體重于第9、11和13天給藥，然后以75％該劑量水平(0.75mg/kg體重)隔日給藥至21天。由不了解治療組的人員通過臨床和放射照片來評價對照和實驗動物疾病嚴(yán)重程度。每日評價各個肢體炎癥程度并基于標(biāo)準(zhǔn)的腫脹度和特異性紅斑評分(正常為0分，嚴(yán)重為4分)。實驗第28天評價動物放射照片。雙后肢放射照片按照軟組織腫脹、關(guān)節(jié)腔狹窄、骨骼破壞，和骨膜新骨形成程度評分。每個肢體按0-3級表示(0＝正常，1＝軟組織腫脹，2＝早期骨侵蝕，3＝嚴(yán)重骨骼破壞和/或關(guān)節(jié)強(qiáng)硬)。在實驗?zāi)┪餐瓿申P(guān)節(jié)組織學(xué)評價。第28天完成測定CII遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的耳放射測量分析。放射測量耳指數(shù)≥1.4表示對CII反應(yīng)顯著。用酶-聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定抗-CII抗體的存在。取自第26天的血清樣本按1∶2,560稀釋，結(jié)果用一式四份等份試樣在490nm的平均光密度表示。此稀釋度時正常大鼠血清本底水平為0，且很易區(qū)別于膠原-免疫大鼠血清。B.結(jié)果在本模型中，與載體對照組比較，關(guān)節(jié)炎發(fā)病前開始紫杉醇治療完全阻止了所有治療大鼠的疾病發(fā)展(甚至中止紫杉醇治療后)。對照動物疾病臨床癥狀進(jìn)行性加重直至出現(xiàn)畸形和關(guān)節(jié)功能喪失。關(guān)節(jié)炎發(fā)病后接受高-或低-劑量紫杉醇的動物表現(xiàn)了顯著的臨床改善。平均講，臨床評分與起始治療組的相等，說明紫杉醇具有預(yù)防疾病臨床進(jìn)展的作用。接受紫杉醇動物能夠負(fù)重和走動并顯示極少毒性，若治療有毒性作用的話。觀察到治療動物接種部位的傷口愈合和皮毛重新生長。與對照組相比，紫杉醇-治療動物體重增加。紫杉醇關(guān)節(jié)炎預(yù)防方案組沒有一只大鼠表現(xiàn)出任何放射線照片變化或臨床關(guān)節(jié)炎。高-和低-紫杉醇組放射照片顯示疾病明顯少于對照組。進(jìn)一步組織學(xué)分析顯示對照組大鼠表現(xiàn)出明顯的肉芽組織伴有骨和軟骨侵蝕，然而，紫杉醇-治療大鼠則很少，即使有的話，并保護(hù)關(guān)節(jié)的軟骨。ELISA測定，紫杉醇-治療大鼠的抗膠原II型IgG抗體顯著低于對照組；預(yù)防方案組大鼠IgG抗體顯著低于高和低劑量紫杉醇抑制方案組。C.討論免疫后但在關(guān)節(jié)炎發(fā)病前給藥，紫杉醇阻斷疾病進(jìn)程，因此它是關(guān)節(jié)炎和可能其類型自身免疫性疾病有效治療劑。結(jié)果表明，如果CII免疫后2天開始給藥，紫杉醇可以完全消除關(guān)節(jié)炎發(fā)病。用紫杉醇治療的兩個抑制方案組，紫杉醇給藥期間關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度持續(xù)下降但在停止治療后第4天開始加重。然而，紫杉醇早期干預(yù)看來可以減少連續(xù)治療的需要。實施例35使用紫杉醇消退膠原-誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎膠束紫杉醇制劑系統(tǒng)給藥在CIA模型顯示疾病-改善作用。為了評價紫杉醇疾病-改善作用效力，給臨床可察覺關(guān)節(jié)炎發(fā)病(第9天)的免疫動物按5mg/kg體重(第1組)或10mg/kg體重(第2組)每4天(q.o.d.)腹腔內(nèi)注射(i.p.)膠束紫杉醇(Cremophor-free)一次。整個評價期給予紫杉醇。作為標(biāo)準(zhǔn)治療對照，第3組在關(guān)節(jié)炎發(fā)病后第0、5和10天接受氨甲蝶呤0.3mg/kg腹腔注射(相當(dāng)于人的劑量)。第4組接受氨甲蝶呤(0.3mg/kg)和膠束紫杉醇(10mg/kg)聯(lián)合治療。由不了解治療組的人員通過臨床和放射線照片評價對照(第5組)和實驗動物的疾病嚴(yán)重程度。每日評價各個肢體炎癥程度并基于標(biāo)準(zhǔn)的腫脹度和特異性紅斑評分(正常為0分，嚴(yán)重為4分)。實驗第28天評價動物放射線照片。雙后肢放射線照片按照軟組織腫脹、關(guān)節(jié)腔狹窄、骨骼破壞，和骨膜新骨形成程度評分。每個肢體按0-3級表示(0＝正常，1＝軟組織腫脹，2＝早期骨侵蝕，3＝嚴(yán)重骨骼破壞和/或關(guān)節(jié)強(qiáng)硬)(Brahn等，ArhtritisRheum.37839-845，1994；Oliver等，Cell.Immunol.，157291-299，1994)。在本模型中，關(guān)節(jié)炎發(fā)病前開始膠束紫杉醇治療完全阻止了所有治療大鼠的疾病發(fā)展甚至在中止紫杉醇治療之后。在對照動物，疾病臨床癥狀進(jìn)行性加重(圖64)直至出現(xiàn)畸形和關(guān)節(jié)功能喪失。與對照動物相比，接受氨甲蝶呤治療的動物沒有統(tǒng)計學(xué)顯著改善(圖64和表1)。關(guān)節(jié)炎發(fā)病后接受低劑量膠束紫杉醇(5mg/kg)的動物表現(xiàn)出一些改善，但接受高劑量膠束紫杉醇(10mg/kg)的動物表現(xiàn)出高度顯著性(p＜0.0002)臨床改善(圖64)。平均講，臨床評分與起始治療組的相等，說明膠束紫杉醇具有預(yù)防該疾病臨床進(jìn)展的作用(表1)。表1膠束紫杉醇改善膠原-誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型臨床指數(shù)第10天關(guān)節(jié)指數(shù)關(guān)節(jié)評分最大均值抗膠原II抗體關(guān)節(jié)對照(n＝11)6.1±0.66.4±0.50.199±0.0042氨甲蝶呤(0.3mg/kg)(n＝5)5.4±0.6(p＝NS)5.7±0.6(p＝NS)0.182±0.0034(p＜0.03)膠束紫杉醇(5mg/kg)(n＝4)4.3±1.8(p＝NS)4.3±1.8(p＝NS)0.176±0.0042(p＜0.01)膠束紫杉醇(10mg/kg)(n＝5)2.0±0.7(p＝0.0002)3.8±0.7(p＝0.0002)0.162±0.0194(p＜0.02)膠束紫杉醇(10mg/kg)/氨甲蝶呤(0.3mg/kg)聯(lián)合(n＝7)1.1±0.5(p＝0.0001)3.6±0.9(p≤0.0001)0.164±0.0090(p＜0.001)·由腫脹和關(guān)節(jié)周紅腫定量的關(guān)節(jié)炎指數(shù)，以0代表正常和4代表嚴(yán)重，后肢總分最大可能是8分。關(guān)節(jié)炎發(fā)病后第10天，藥物-治療大鼠與對照膠原-誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠比較進(jìn)行T-檢驗?！ぷ仙即?治療動物臨床評分明顯低于對照動物且相當(dāng)于起始治療組所見到的，說明預(yù)防疾病進(jìn)展的能力?！S＝無顯著性。接受紫杉醇動物能夠負(fù)重和走動并且未顯示治療有任何毒性。觀察到治療動物接種部位的傷口愈合和皮毛重新生長。膠束紫杉醇-治療動物相對于未治療對照組體重增加。與對照相比(圖64)，同時接受膠束紫杉醇和氨甲蝶呤組對治療耐受性好并顯示出令人印象深刻的臨床改善(p≤0.0001)。ELISA測定，paclitaxe-和聯(lián)合(紫杉醇/氨甲蝶呤)-治療大鼠的抗膠原II型IgG抗體顯著低于對照組。放射線照片研究也顯示紫杉醇治療顯著改善疾病。對照和氨甲蝶呤-治療組動物表現(xiàn)放射照片上明顯的軟組織腫脹、關(guān)節(jié)腔狹窄、骨骼破壞和骨膜新骨形成，而紫杉醇-治療組動物x-光片則顯示基本正常的關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)(圖65)。事實上，僅小比例(17％～18％)的單獨接受紫杉醇(10mg/kg)或與氨甲蝶呤聯(lián)合治療的動物發(fā)展軟骨侵蝕。軟骨侵蝕作為疾病進(jìn)展/結(jié)果重要標(biāo)識，對照或單獨接受氨甲蝶呤動物的發(fā)生頻率(72％)為接受膠束紫杉醇治療動物的4倍多(表2)。表2膠束紫杉醇改善膠原-誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠放射線照片指數(shù)發(fā)生侵蝕的動物比例放射線照片評分關(guān)節(jié)對照(n＝32)72％4.31±0.45氨甲蝶呤(0.3mg/kg)(n＝17)76％(p＝NS)4.25±0.64(p＝NS)膠束紫杉醇(5mg/kg)(n＝8)50％(p＝NS)3.25±1.60(p＝NS)膠束紫杉醇(10mg/kg)(n＝18)17％(p＝0.0005)1.78±0.60(p＜0.003)膠束紫杉醇(10mg/kg)/氨甲蝶呤(0.3mg/kg)聯(lián)合(n＝22)18％(p＝0.0003)1.45±0.39(p＜0.0001)·膠原-誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠雙后肢放射照片通過組織腫脹、關(guān)節(jié)腔變窄、骨破壞和骨膜新骨形成進(jìn)行評分。0～3整數(shù)級用于量化每一側(cè)肢體，兩側(cè)肢體總分最大可能分值是6?！す乔治g存在，疾病進(jìn)展的重要標(biāo)識，在對照動物出現(xiàn)頻率(72％)是接受膠束治療動物(18％)的4倍。掃描電子顯微鏡證實體內(nèi)紫杉醇治療的軟骨保護(hù)效果。正常關(guān)節(jié)表面以一層薄滑膜基膜包繞光滑完整軟骨基質(zhì)為特征(圖66A)。在CIA，軟骨表面被肉芽組織和發(fā)炎的滑膜產(chǎn)生的MMP侵蝕(圖66B)。表面的軟骨基質(zhì)被消化，暴露軟骨細(xì)胞或它們曾占據(jù)的間隙(圖66B插圖)。臨床關(guān)節(jié)炎發(fā)病后接受紫杉醇治療的患CIA動物，關(guān)節(jié)表面保持完好無損(圖66C)和軟骨基質(zhì)大多正常，甚至在高倍放大時觀察(圖66C插圖)也一樣。紫杉醇-治療組未見肉芽組織形成和滑膜肥大。組織學(xué)上，CIA以明顯的滑膜肥大、滑膜炎癥細(xì)胞浸潤和軟骨破壞為特征(圖67A)。紫杉醇-治療動物，滑膜看上去正常，只有1-2層滑膜細(xì)胞且沒有炎癥細(xì)胞浸潤(圖67B)。侵蝕鑄塑也用于評價紫杉醇能否阻斷患CIA動物的滑膜血管形成。以100mmHg的壓力將Mercox聚合物注入死亡動物股骨動脈內(nèi)，使在原位固化，組織隨后消化產(chǎn)生注塑的下肢體脈管系統(tǒng)?；糃IA動物注塑滑膜脈管系統(tǒng)掃描電子顯微圖片顯示，盲-端毛細(xì)血管向關(guān)節(jié)腔蔓延(圖68A)。這些血管形態(tài)學(xué)上與實體腫瘤和其它血管形成狀況時所描述的成長血管形成相似(圖68A插圖)。相反，紫杉醇-治療動物的滑膜血管呈毛細(xì)血管袢(圖68B)沒有明顯的新血管分支。膠束紫杉醇/MTX動物的血管增生退化和形態(tài)學(xué)血管結(jié)構(gòu)與陰性對照相似。這些研究提示膠束紫杉醇和紫杉醇/氨甲蝶呤治療，可退化新血管形成、抑制炎癥進(jìn)程、使滑膜炎恢復(fù)正常和預(yù)防關(guān)節(jié)破壞。已經(jīng)證實，系統(tǒng)給予紫杉醇可有效治療關(guān)節(jié)炎。疾病的自然病程是發(fā)作和緩解，每一次后續(xù)發(fā)作引起損害加重最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞。使用短-期、高劑量、系統(tǒng)治療以引導(dǎo)疾病緩解或持續(xù)低劑量治療維持疾病控制是可能的。對于1～2個關(guān)節(jié)為主的病人，紫杉醇可選擇方法包括直接將藥物注射到受損關(guān)節(jié)內(nèi)。實施例36在牛皮癬動物模型評價紫杉醇制劑A.皮膚血管生成模型新的動物模型用于研究皮膚-特異性血管生成。免疫缺陷SCID小鼠作為用血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)定向或反向轉(zhuǎn)染的人角質(zhì)細(xì)胞株表面移植的受體。通過使用改性硅酮移植室試驗將角質(zhì)細(xì)胞移植到受體小鼠皮膚上。角質(zhì)細(xì)胞分化和誘導(dǎo)皮膚血管生成。然后系統(tǒng)或局部(霜、軟膏、洗劑、凝膠)施予紫杉醇，對不治療或治療組血管數(shù)量和大小進(jìn)行形態(tài)測量。B.皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)小鼠模型皮膚遲發(fā)型過敏反應(yīng)小鼠模型用于研究紫杉醇對誘導(dǎo)的皮膚炎癥的作用。概要講，皮膚局部涂抹唑酮使小鼠致敏。5天后，耳部皮膚(左耳唑酮，右耳僅載體)局部涂抹唑酮攻擊小鼠，引起皮膚炎癥，“遲發(fā)型過敏”反應(yīng)。通過測量48小時期間所引起的耳腫脹來量化炎癥程度(見圖69和70)。Epon-包埋，吉姆沙染色，1μm組織切片評價存在的炎癥細(xì)胞、存在的組織肥大細(xì)胞和它們的活化狀態(tài)，以及表皮充血程度。系統(tǒng)或局部給予紫杉醇以定量它對此體內(nèi)模型皮膚炎癥反應(yīng)的作用。C.結(jié)果本研究表明在治療實驗-誘導(dǎo)的小鼠皮膚炎癥中1％給藥與單獨使用載體相比，紫杉醇對皮膚炎癥產(chǎn)生抑制作用。在實驗性-誘導(dǎo)的遲發(fā)-型過敏反應(yīng)，與單獨載體處理相比，用1％紫杉醇局部治療的耳腫脹明顯下降。局部應(yīng)用1％紫杉醇制劑顯著抑制局部使用PMA(佛波醇12-肉豆蔻13-醋酸酯)誘導(dǎo)的耳腫脹和皮膚紅斑(紅色)(見圖71和72)。如圖73所示，與對照(左耳)相比紫杉醇治療耳(右耳)外觀正常。所有5只小鼠均取得相似的結(jié)果。為評價和單獨用載體相比對皮膚的刺激作用，每日將這兩種制劑以20μl分別用于兩耳共8天。8天后，不論單獨使用載體還是使用1％紫杉醇制劑用于正?；虬l(fā)炎鼠耳皮膚后均沒有可察覺的皮膚刺激。實施例37動物模型慢性排斥評價加速形成的動脈粥樣硬化出現(xiàn)在大多數(shù)心臟移植接受者并限制長期移植物存活。Lewis-F344異位大鼠心臟移植慢性排斥模型是特別適用的試驗?zāi)Ｐ?，因為在中和長期存活同種移植物中它產(chǎn)生各階段動脈粥樣硬化損害。Lewis-F344模型的優(yōu)點是(i)長-存活移植物動脈粥樣硬化的發(fā)生率和嚴(yán)重程度特別高；和(ii)由于該系統(tǒng)不需用免疫抑制劑，所以損害發(fā)展的炎癥階段容易辨認(rèn)。成年雄性Lewis大鼠作為供體，F(xiàn)344大鼠作為接受者。在麻醉的受者腹中線制造一長切口暴露主動脈和下腔靜脈，將20個心臟異位腹腔嫁接移植。將兩血管與周圍結(jié)締組織分離，小血管鉗夾住血管。在每個血管的吻合部位制造長方形切口(2～3mm)。打開麻醉的供體大鼠腹腔，向下腔靜脈內(nèi)注射300單位含水肝素。打開胸壁暴露心臟。結(jié)扎腔靜脈，接著橫切上行的主動脈和肺主動脈，保留依附于心臟的2～3mm起始血管。分離結(jié)扎線遠(yuǎn)側(cè)端的腔靜脈，將結(jié)扎線放在左心房和肺靜脈周圍。分離結(jié)扎線肺側(cè)端的血管并取出心臟。供體心臟放置于受者腹腔，在受者血管切口部位縫合主動脈。類似地，以同樣方式將肺動脈連接在下腔靜脈切口處。放松血管鉗(腔靜脈近心端、腔靜脈和主動脈遠(yuǎn)心端和主動脈近心端)以減少從針眼出血。移植后，經(jīng)冠狀動脈外表面一定長度的心外膜給10只大鼠注射紫杉醇(33％)聚己內(nèi)酯(PCL)糊劑(n＝10)或單獨PCL糊劑(n＝10)，于是動脈區(qū)域包埋在余留的未治療心肌層。嫁接時所有接受者肌注一次盤尼西林G(100,000單位)。每日門診同種移植物并按其功能分為1～4級，其中4代表正常心跳而0代表缺乏力學(xué)活動。于14天每組殺死5只大鼠，28天殺死剩下的5只。觀察到大鼠體重下降和其它系統(tǒng)性疾病的癥候。14或28天后，以與起始試驗相同的方式將動物麻醉并暴露心臟。分離包覆和未包覆的冠狀動脈，用10％甲醛緩沖液固定并進(jìn)行組織學(xué)檢測。起始試驗可于移植后在冠狀動脈腔改用紫杉醇/EVA膜或包覆的斯滕特氏印模。以與上述相似的方式將EVA膜用于冠狀動脈腔外表面，而包覆斯滕特氏印模植入腔內(nèi)。另外，這些研究可進(jìn)一步擴(kuò)展除嫁接移植(如，靜脈，皮膚)外也包括其它器官移植。實施例38在MS動物模型上紫杉醇作用驗證了紫杉醇微膠粒抑制脫髓鞘轉(zhuǎn)基因小鼠模型(Mastronardi等，J.Neurosci.Res.36315-324，1993)MS癥狀進(jìn)展和發(fā)病。這些轉(zhuǎn)基因小鼠包含70對轉(zhuǎn)基因DM20，一個髓磷脂蛋白脂質(zhì)。臨床上，3月齡前動物表現(xiàn)正常。3個月后，出現(xiàn)神經(jīng)病狀，如驚厥、顫抖、后肢松動、步態(tài)不穩(wěn)、尾無力、搖擺步態(tài)和活動度下降，表現(xiàn)和嚴(yán)重程度進(jìn)行性增加直至動物在6～8月齡死亡。臨床征候與組織學(xué)上脫髓鞘和大腦纖維星型細(xì)胞增生相關(guān)(Mastronardi等，J.Neurosci.Res.36315-324，1993)。A.材料與方法使用兩組動物進(jìn)行研究，臨床發(fā)病初(接近4月齡)即開始的皮下注射低劑量紫杉醇的連續(xù)治療方案(2.0mg/kg；每周3次，共10次)或者皮下注射高劑量紫杉醇的“脈沖”治療方案(20mg/kg；每周1次，共4次)。低劑量方案組，5只動物接受膠束紫杉醇，兩只小鼠作對照；1只不治療正常小鼠和1只不治療轉(zhuǎn)基因產(chǎn)仔小鼠。只用1只轉(zhuǎn)基因小鼠作對照是因為在實驗室已很好地建立了該疾病過程。當(dāng)MS起始征兆已達(dá)上述癥狀分類1+分時，給4月齡動物注射膠束紫杉醇。治療時程24天(2.0mg/kg紫杉醇，每周3次，共10次)。每個注射日記錄體重和臨床癥候。B.結(jié)果接受紫杉醇的5只動物未顯示體重下降。然而，不治療轉(zhuǎn)基因顯示體重下降30％，從29g降至22g(圖74)，這正常地與疾病進(jìn)展有關(guān)。每日監(jiān)測MS臨床標(biāo)識癥候，如顫抖、后肢松動、驚厥、頭震顫、步態(tài)不穩(wěn)、尾無力和活動度下降。開始治療時，動物主要癥候分類為1+分。在以后的27天內(nèi)不治療動物的一些癥候從1+進(jìn)展到4+分；3+以平衡差為特征，平衡差是疾病的一個主要特征。紫杉醇治療組，在相同的期間所有5只動物的上述監(jiān)測癥候保持為1+分(表1)。表1低劑量連續(xù)紫杉醇對轉(zhuǎn)基因小鼠多發(fā)性硬化癥狀的作用小鼠年齡(月)驚厥顫抖后肢麻痹頭震顫體重下降(％)轉(zhuǎn)基因動物(不治療)361+2+-3+1+2+-3+1+2+-4+1+3+030％轉(zhuǎn)基因動物(紫杉醇-治療)361+1+1+1+1+1+1+1+05-10％對照動物(紫杉醇-治療)360000000000-5％·不治療轉(zhuǎn)基因動物在27天癥狀進(jìn)行性加重而紫杉醇-治療動物在同樣期間神經(jīng)癥狀很少?！?+分表示癥候明確但很輕；4+表示瀕死。高劑量方案組，象用于腫瘤病人一樣紫杉醇20mg/kg每周一次共4周治療動物以減少化療間歇脈沖(胸部和卵巢癌每月給藥)。監(jiān)測動物10周，每2天對每一個癥狀測定評分。3個不治療動物，在試驗過程中神經(jīng)癥狀急劇進(jìn)展并有2只死亡(第5周和第9周)；3只存活動物臨床癥狀嚴(yán)重。5只發(fā)病后開始接受紫杉醇治療的轉(zhuǎn)基因動物，第1周監(jiān)測MS評分相對低于對照，因此，沒有觀察到進(jìn)一步的神經(jīng)退化。這些動物，沒有觀察到疾病進(jìn)展，并且不論是治療期間(0～3周)還是隨后停止藥物治療(4～10周)動物保持臨床緩解(圖75)。C.結(jié)論低或高劑量紫杉醇均能阻止MS動物模型觀測到的神經(jīng)癥狀的迅速進(jìn)展。這些數(shù)據(jù)提示紫杉醇是脫髓鞘疾病的有效治療劑。實施例39紫杉醇和其它微管穩(wěn)定劑治療鼻息肉的評價上皮細(xì)胞培養(yǎng)和/或鼻息肉組織培養(yǎng)用于評價包含紫杉醇或其它物質(zhì)的制劑治療鼻息肉的效果。該研究是基于內(nèi)皮細(xì)胞釋放細(xì)胞因子并有助于鼻息肉以及鼻炎和哮喘可測得慢性炎癥，且長時間釋放藥物將預(yù)防嗜酸性細(xì)胞增多及抑制細(xì)胞因子基因表達(dá)。紫杉醇制劑包括溶液(使用環(huán)糊精)或包含用粘膜附著聚合物包封的紫杉醇的懸浮液用作鼻噴霧劑，和/或紫杉醇的粘膜附著聚合物微-膠囊用作吸入劑。這些制劑用于下面詳述的研究。A.體外試驗紫杉醇作用組織處理-正常鼻粘膜(NM)標(biāo)本取自無鼻炎臨床跡象和皮膚-劃痕試驗陰性的鼻重建手術(shù)患者。鼻息肉(NP)標(biāo)本取自皮膚-劃痕試驗陽性和陰性和接受鼻息肉切除術(shù)的病人。鼻樣本置入添加了100UI/ml盤尼西林、100μg/ml鏈霉素和2μg/ml兩性霉素B的Ham’sF12介質(zhì)中并立即轉(zhuǎn)移到實驗室。上皮細(xì)胞培養(yǎng)-用如下蛋白酶消化分離來自NM和NP的鼻內(nèi)皮細(xì)胞。組織樣本用添加了100UI/ml盤尼西林、100μg/ml鏈霉素和2μg/ml兩性霉素B的Ham’sF12沖洗2-3次，然后在4℃0.1％XIV型Ham’sF12孵育過夜。孵育后，加入10％FBS中和蛋白酶活性及輕輕振蕩使上皮細(xì)胞分散。細(xì)胞懸浮液通過60目分離篩過濾和室溫下以500g離心10分鐘。細(xì)胞團(tuán)在含下列試劑的激素限定的Ham’sF12培養(yǎng)介質(zhì)(Ham’sHD)重新懸浮100UI/ml盤尼西林、100μg/ml鏈霉素和2μg/ml兩性霉素B、150μg/ml谷酰胺、5μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferin)、5μg/ml胰島素、25ng/ml表皮生長因子、15μg/ml內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑、200pM三碘甲狀腺氨酸和100nM氫化可的松。然后將細(xì)胞懸浮液(105細(xì)胞/孔)于包覆了膠原的盛有2mlHam’sHD孔上制板并于5％CO2潮濕大氣下于37℃培養(yǎng)。當(dāng)天和以后隔日換培養(yǎng)介質(zhì)。培養(yǎng)6-10天后單層細(xì)胞融合。人上皮條件培養(yǎng)介質(zhì)(HECM)傳代-上皮細(xì)胞培養(yǎng)融合后，Ham’sHD切換成添加了100UI/ml盤尼西林、100μg/ml鏈霉素和2μg/ml兩性霉素B、150μg/ml谷酰胺和25mMHepes緩沖液(RPMI10％)的RPMI1640介質(zhì)(Irvin，Scotland)。從培養(yǎng)基中收集與RPMI(10％)孵育48小時后傳代的HECM，室溫(RT)下400g離心10分鐘，0.22μm過濾膜過濾滅菌，于-70℃儲存至使用。嗜酸性細(xì)胞存活和紫杉醇作用-從外周血分離嗜酸性細(xì)胞，以兩種方式檢測不論取自NM還是取自NP的HECM對嗜酸性細(xì)胞存活的影響時間-過程和劑量反應(yīng)分析。在時間-過程試驗中，濃度約為250,000/ml嗜酸性細(xì)胞在6個含或不含(陰性對照)50％HECM的孔組織培養(yǎng)孵育，于第2、4、6和8天評價存活指數(shù)。其它試驗用1～50％HECM進(jìn)行。在測試藥物(例如，紫杉醇)對HECM-誘導(dǎo)嗜酸性細(xì)胞存活作用的試驗中，加入HECM之前，0.1nM～10μM藥物(紫杉醇)與嗜酸性細(xì)胞在37℃孵育1個多小時。每一個試驗，通常對陰性對照(僅有培養(yǎng)介質(zhì))和陽性對照(含HECM培養(yǎng)介質(zhì))孔進(jìn)行評價。為研究藥物是否有任何毒性作用，比較了24小時期間與藥物(不同濃度)孵育的嗜酸性細(xì)胞和與單獨10％RPMI培養(yǎng)的嗜酸性細(xì)胞的活性。B.紫杉醇對細(xì)胞因子基因表達(dá)和從上皮細(xì)胞釋放的作用取自鼻息肉和正常鼻粘膜的上皮細(xì)胞培養(yǎng)融合，含或不合紫杉醇(或其它物質(zhì))人上皮細(xì)胞條件介質(zhì)傳代，用ELISA測定上清液。用Mullol等在ClinicalandExperimentalAllergy25607-615，1995描述的反轉(zhuǎn)錄-聚合物鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測細(xì)胞因子基因表達(dá)。結(jié)果顯示紫杉醇是否以調(diào)節(jié)細(xì)胞因子基因表達(dá)作為抑制嗜酸性細(xì)胞存活的方式。使用原代細(xì)胞培養(yǎng)的主要缺點是細(xì)胞達(dá)到融合需要10天，割斷了細(xì)胞功能與局部melieu以及系統(tǒng)作用的關(guān)系，這將導(dǎo)致把疾病放在首位。然而，這是研究生長因子調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)細(xì)胞功能和增生的極好的體內(nèi)/體外模型并由此闡明粘膜炎癥的一些方面。C.人鼻息肉化學(xué)介質(zhì)的免疫釋放紫杉醇或其它物質(zhì)調(diào)節(jié)-手術(shù)切除時取鼻息肉，用Tyrode’s緩沖液重新5次，用小剪刀將碎片切成200mg濕重的平行切片。平行切片懸浮于3ml37℃含不同濃度紫杉醇緩沖液中，并用0.2μg/mlE抗原攻擊(5分鐘后)。與抗原孵育15分鐘后，移走滲出液和將組織在新鮮緩沖液中煮10分鐘以提取殘留的組織胺。使用HPLC測定組織胺和SRS-A。實施例40破壞微管功能物質(zhì)的血管外給藥該研究是為了評價負(fù)載紫杉醇-喜樹堿的手術(shù)糊劑(PCL)和/或EVA膜作為再狹窄的血管周治療的效果。A.材料與方法給250～300gWISTAR大鼠肌注哌啶醇(0.33ml/kg)麻醉。一旦安靜再用氟烷麻醉。全身麻醉后，剪去頸部毛，鉗夾皮膚用聚烯吡酮碘擦試。在左頸動脈上作一垂直切口并暴露頸動脈遠(yuǎn)端。圍繞頸動脈遠(yuǎn)端放置兩根結(jié)扎線并作橫向動脈切開術(shù)。然后向頸動脈引入2號FrenchFogarty氣囊導(dǎo)管并進(jìn)入左頸總動脈，氣囊內(nèi)充入生理鹽水。將充脹的氣囊在頸動脈內(nèi)上下拉動3次以剝脫內(nèi)皮細(xì)胞。然后移走導(dǎo)管并且放松左頸動脈遠(yuǎn)端結(jié)扎線。大鼠隨機(jī)分為10組，不接受治療、單獨聚合物(EVA膜或PCL糊劑)，或聚合物加20％紫杉醇。聚合物混合物(2.5mg)以圓周樣圍繞頸動脈放置。然后關(guān)閉傷口。每組5只大鼠于14天殺死，另外5只于28天殺死。其間，觀察體重下降或系統(tǒng)疾病的其它表征。14天或28天后，麻醉動物分離左頸動脈，用10％甲醛緩沖液固定并進(jìn)行組織學(xué)檢測。作為預(yù)試研究，兩只大鼠用負(fù)載10％喜樹堿的EVA膜治療14天以評價喜樹堿在此疾病模型的效果。B.結(jié)果這些研究揭示負(fù)載紫杉醇(20％)聚合物完全預(yù)防了再狹窄，對照動物和接受單獨聚合物的動物于氣囊損傷后14天和28天發(fā)展28％和55％腔危害(圖76A和76B)。徹底抑制了接觸紫杉醇的血管壁內(nèi)膜充血。然而，如紫杉醇作用不均衡，所證實的作用極為局限是由于藥物不能與血管壁保持鄰接(圖77A和77B)。初步數(shù)據(jù)顯示負(fù)載喜樹堿EVA膜有效預(yù)防再狹窄動物模型中是有效的。喜樹堿完全抑制兩種動物模型的內(nèi)膜充血。實施例41紫杉醇對手術(shù)粘連動物模型的作用驗證了使用負(fù)載palitaxelEVA膜減少兔子宮角模型粘連形成。麻醉新西蘭雌性白兔和腹中線切口剖腹。暴露子宮角，使用解剖刀刀片擦傷兩側(cè)子宮角，刮擦要足以去除絨膜，導(dǎo)致斑點出血。兔隨機(jī)設(shè)為對照組或紫杉醇治療組和術(shù)后2、4、和8周評價期。紫杉醇治療組，刮擦后用負(fù)載紫杉醇EVA膜包裹每側(cè)子宮角。縫合肌腹膜層和用皮釘釘合皮膚層。術(shù)后2、4、或8周評價動物粘連形成情況。人道地將動物安樂死并進(jìn)行尸體剖檢。對子宮角進(jìn)行大體檢查和用標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡技術(shù)組織學(xué)檢查。大體上，使用基于子宮角損傷5cm的事實的標(biāo)準(zhǔn)評分系統(tǒng)對粘連評級；于是，通過測量包含粘連區(qū)域的長度確定粘連形成程度。使用如下評級系統(tǒng)0＝無粘連，1＝25％區(qū)域粘連，2＝50％區(qū)域粘連和3＝累及全面粘連。粘連嚴(yán)重程度如下測量0＝分離無阻力，0.5＝有一些阻力(需要適度力量)，和1＝需要利刃切開。總等級是累積的，粘連評分范圍0-4代表程度和嚴(yán)重度。實施例42膠束紫杉醇治療炎癥性腸道疾病(IBD)炎癥性腸道疾病(IBD)，稱為克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，以周期性復(fù)發(fā)和緩解為特征。最適用的IBD模型是給大鼠結(jié)腸內(nèi)注射溶于乙醇和生理鹽水溶液的2，4，6-三硝基苯磺酸(TNB)(Morris等，Gastroenterology，96795-803，1989)。單次注射引起持續(xù)數(shù)周的急性和慢性炎癥。然而，藥理學(xué)上顯示兔結(jié)腸較鼠與人結(jié)腸更為相似(Gastroenterology，9913424-1332，1990)。所有實驗使用雌性新西蘭兔。靜注(i.v)注射苯巴比妥麻醉動物。直腸插入嬰兒飼管，尖端距肛門20cm，以便注射TNB(0.6ml；40mg溶于25％乙醇生理鹽水中)。注射TNB一周后，將兔隨機(jī)分為3個治療組。這時，動物或者不治療、或單獨接受微膠粒(i.v.)或者接受膠束紫杉醇(i.v.)。每4天重復(fù)一次共治療4次。研究過程中，每周在如上所述全麻下使用兒科支氣管鏡對兔進(jìn)行內(nèi)窺鏡檢查。由內(nèi)窺鏡醫(yī)師(不了解實驗分組)按下述程度評分0，沒有異常；1，炎癥，但無潰瘍；2，炎癥和1個位點潰瘍(＜1cm)；3，2個或更多位點炎癥和潰瘍或沿結(jié)腸長度一個主要位點炎癥和潰瘍(＞1cm)。最后一次治療后，于24小時和1、2、4和6天將兔安樂死。沿逆-腸系膜邊緣分離、切除和打開整個結(jié)腸，用生理鹽水沖洗并置于盛有抗體的Hank’s平衡鹽溶液中。立體顯微鏡檢測結(jié)腸并根據(jù)與內(nèi)窺鏡相同的標(biāo)準(zhǔn)評分。同樣，尸體解剖時選擇結(jié)腸樣本，從肛門上至結(jié)腸整個長度中既選擇明顯發(fā)炎和潰瘍區(qū)域也選擇正常結(jié)腸。組織用10％甲醛固定和進(jìn)行石蠟包埋；切5mm片和用溶血毒素和伊紅染色。組織學(xué)檢測有IBD和無IBD的玻片。初始實驗時可于兔結(jié)腸內(nèi)注射TNB誘導(dǎo)結(jié)腸炎后改用口服紫杉醇。動物隨機(jī)分為3組，不治療、接受單獨載體或口服紫杉醇。實施例43紫杉醇對系統(tǒng)性紅斑狼瘡動物模型的作用用膠束紫杉醇治療雌性NZB/NZWF1小鼠(B/W)檢測紫杉醇對系統(tǒng)性紅斑狼瘡的效果。小鼠這種勞損發(fā)展為類似人SLE的疾病。1個月齡時，與正常小鼠相比，這些小鼠脾B-細(xì)胞水平升高自發(fā)分泌免疫球蛋白。2月齡時出現(xiàn)高水平的抗-ssDNA抗體。5月齡時，免疫球蛋白沿小球毛細(xì)血管壁聚集。進(jìn)展為嚴(yán)重的腎小球性腎炎并在9月齡時，50％的B/W小鼠死亡。A.材料與方法雌性B/W小鼠購自Jackson實驗室(BarHarbor，ME，USA)。5月齡雌性B/W小鼠隨機(jī)分為治療組和對照組。治療組或接受低劑量連續(xù)膠束紫杉醇(2.0mg/kg；每周3次，共10次)或接受高劑量“脈沖”膠束紫杉醇(20mg/kg；每周1次，共4次)。對照組僅接受對照微膠粒。檢測前每隔一定時間，殺死相同月齡的紫杉醇治療和不治療對照B/W小鼠，取出小鼠脾臟防腐處理和制備淋巴細(xì)胞計數(shù)的單細(xì)胞懸浮液。為分辨脾淋巴細(xì)胞亞型，使用熒光分析。使用ELISA測定每百萬脾B-細(xì)胞中自發(fā)分泌免疫球蛋白(IgG、IgM、和總免疫球蛋白)或抗-ssDNA-抗體的細(xì)胞數(shù)。通過前述，應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會，盡管為了闡明目的這里已經(jīng)描述了本發(fā)明的特異實施例，但可進(jìn)行不背離本發(fā)明精神和范圍的各種改變。因此，發(fā)明不限于除附加的權(quán)利要求之外的發(fā)明。權(quán)利要求1.抗-微管物質(zhì)用于制備治療或預(yù)防多發(fā)性硬化的藥物的用途。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)是紫杉醇，或它的類似物或衍生物。4.抗-微管物質(zhì)用于制備治療或預(yù)防牛皮癬的藥物的用途。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。6.權(quán)利要求5所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)是局部給藥。7.抗-微管物質(zhì)用于制備治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎的藥物的用途，條件是所述抗-微管物質(zhì)不是紫杉醇，或它的類似物或衍生物。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)系統(tǒng)或關(guān)節(jié)內(nèi)給藥。10.抗-微管物質(zhì)用于制備治療再狹窄的藥物的用途，條件是所述抗-微管物質(zhì)不是紫杉醇，或它的類似物或衍生物。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。12.根據(jù)權(quán)利要求10所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)系統(tǒng)或血管周給藥。13.根據(jù)權(quán)利要求10所述用途，其中抗-微管物質(zhì)以包覆于醫(yī)療器具形式給藥。14.根據(jù)權(quán)利要求13所述用途，其中所述醫(yī)療器具是斯滕特氏印模、斯藤特氏移植物、血管移植物或留置導(dǎo)管。15.根據(jù)權(quán)利要求10所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)通過腔內(nèi)器具給藥。16.抗-微管物質(zhì)用于制備治療移植排斥的藥物的用途。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)選自紫杉醇、epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。18.抗-微管物質(zhì)用于制備治療或預(yù)防手術(shù)粘連的藥物的用途，條件是所述抗-微管物質(zhì)不是紫杉醇，或它的類似物或衍生物。19.權(quán)利要求18所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。20.抗-微管物質(zhì)用于制備治療炎癥性腸道疾病的藥物的用途。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)選自紫杉醇、epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。22.抗-微管物質(zhì)用于制備治療或預(yù)防慢性炎癥性肺部疾病的藥物的用途。23.根據(jù)權(quán)利要求20所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)選自紫杉醇、epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀酰亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。24.根據(jù)權(quán)利要求22所述用途，其中所述抗-微管物質(zhì)是鼻內(nèi)給藥。25.根據(jù)權(quán)利要求1、4、6、8、14或16任一所述用途，所述物質(zhì)進(jìn)一步包括聚合物。26.根據(jù)權(quán)利要求25所述用途，其中所述聚合物形成平均大小為0.5～200μm的微球。27.根據(jù)權(quán)利要求25所述用途，其中聚合物是乳酸和羥基乙酸的共聚物。28.根據(jù)權(quán)利要求25所述用途，其中所述聚合物包括聚(己內(nèi)酯)。29.根據(jù)權(quán)利要求25所述用途，其中所述聚合物包括聚(乳酸)。30.根據(jù)權(quán)利要求25所述用途，其中所述聚合物是聚(乳酸)和聚(己內(nèi)酯)的共聚物。31.根據(jù)權(quán)利要求25所述用途，其中所述聚合物包括乙烯醋酸乙烯酯。32.根據(jù)權(quán)利要求25所述用途，其中所述聚合物包括肉豆蔻酸異丙基酯。33.根據(jù)權(quán)利要求25所述用途，其中所述聚合物包括Transcuol。34.根據(jù)權(quán)利要求25所述用途，其中所述聚合物是是二嵌或三嵌共聚物。全文摘要本發(fā)明提供治療或預(yù)防炎癥性疾病如牛皮癬或多發(fā)性硬化的方法，包括向炎癥部位釋放抗－微管物質(zhì)，或它們的類似物或衍生物的步驟。文檔編號A61K31/519GK1679937SQ200510054770公開日2005年10月12日申請日期1997年12月2日優(yōu)先權(quán)日1996年12月2日發(fā)明者W·L·亨特申請人:血管技術(shù)國際股份公司