專利名稱：蟾酥固體脂質(zhì)納米粒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蟾酥納米制劑，特別是一種蟾酥固體脂質(zhì)納米粒及其制備方法。
背景技術(shù)：
蟾酥的有效成分主要包括蟾毒靈、華蟾酥毒基、脂蟾毒配基等多種脂溶性成分。現(xiàn)有蟾酥注射液是蟾酥提取物的水制劑，具有抗腫瘤、抗病毒、提高免疫功能的作用，臨床上已廣泛應(yīng)用于中、晚期腫瘤和慢性乙型肝炎病人。但在臨床應(yīng)用過程中常出現(xiàn)靜脈輸注不暢、輸液部位紅腫、靜脈內(nèi)疼痛等血管刺激性不良反應(yīng)。
而固體脂質(zhì)納米粒(SLN)是二十世紀(jì)九十年代初興起的納米載體之一，它采用與生理相容性好的室溫下呈固態(tài)的類脂材料如脂肪酸、脂肪醇及磷脂等為載體，固體脂質(zhì)納米粒集中了乳劑、脂質(zhì)體、聚合物納米粒載藥系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)，如物理穩(wěn)定性高、對不穩(wěn)定性藥物的保護(hù)、使藥物具緩釋作用，其給藥途徑的研究已包括口服、注射、皮膚、呼吸道給藥的多種形式。同時(shí)，可采用高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)行制備，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
然而，由于SLN技術(shù)尚處于起步階段，對如何提高藥物包封率及載藥量、制劑穩(wěn)定性，安全性等問題，需進(jìn)一步深入研究探討。而現(xiàn)代生物藥劑學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究已證明，當(dāng)給藥體系的粒子在＜200nm，特別是＜100nm水平時(shí)，即納米藥物給藥系統(tǒng)(Nanoparticle Drug Delivery System，NDDS)，給藥體系的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制將發(fā)生質(zhì)的改變，在提高療效、實(shí)現(xiàn)靶向性給藥、緩釋藥物、提高難溶性藥物的生物利用度等方面表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。因此，還需考慮載藥SLN的納米粒粒徑需滿足NDDS的要求。
另一方面，納米中藥是采用納米技術(shù)將中藥有效成分、有效部位、原藥或其復(fù)方多種中藥制成小于100nm的納米粒復(fù)方制劑。其不是簡單的將中藥材進(jìn)行粉碎至納米數(shù)量級，而是針對中藥的有效部位/成分進(jìn)行納米技術(shù)加工處理，達(dá)到NDDS要求。不同于單一的西藥成分，某種中藥，如蟾酥的有效成分或有效部位往往不是單一的化合物，而是一種混合物。因而在制備中藥納米制劑，特別是載有中藥的SLN時(shí)，需考慮中藥中不同活性成分/部位的裝載及釋放，以及其穩(wěn)定性等。值得注意的是，既然納米化后中藥的性能有顯著甚至質(zhì)的變化，那么這種改變將不只是上述的正面效應(yīng)，還需注意其可能產(chǎn)生的負(fù)面效應(yīng)，如毒性反應(yīng)或不良反應(yīng)等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題之一，是提供一種其中納米粒粒徑小于100nm的蟾酥固體脂質(zhì)納米粒。
本發(fā)明的技術(shù)方案為一種蟾酥固體脂質(zhì)納米粒，其含有下列重量份的組分蟾酥提取物0.01～1份，脂質(zhì)材料0.2～20份，脂溶性乳化劑0.2～15份，水溶性乳化劑0.2～10份；該脂質(zhì)材料選自硬脂酸、三硬脂酸甘油酯和山榆酸甘油酯。
本發(fā)明所說的蟾酥提取物是指蟾酥的乙醇提取物，其提取工藝照現(xiàn)有蟾酥注射液工藝(《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第十七冊蟾酥注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn))進(jìn)行，將提取液回收乙醇蒸干即得。
至于所說的脂質(zhì)材料是指在SLN中作為載體材料、與生理相容性好、且室溫下呈固態(tài)的類脂材料，如三酸甘油酯、混合甘油酯、脂肪酸、類固醇、蠟、磷脂等。為使本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒對蟾酥各有效成分具有較高的包封率及載藥量，且考慮到其應(yīng)用到臨床時(shí)，需適于不同施用途徑，特別是經(jīng)血管，如靜脈注射時(shí)能減少局部刺激及全身的副反應(yīng)，以提高安全性，故本發(fā)明經(jīng)諸多試驗(yàn)研究，優(yōu)選適于靜脈制劑的硬脂酸和三硬脂酸甘油酯，并對原用于口服制劑的山榆酸甘油酯制成的SLN進(jìn)行了經(jīng)肌肉、靜脈用藥安全性的考察，發(fā)現(xiàn)其不僅安全，且綜合性能較佳。故本發(fā)明脂質(zhì)材料更優(yōu)選山榆酸甘油酯。其中，脂質(zhì)材料的重量份與包封率有關(guān)，太低，特別是低于0.2份，則包封率低于80％；反之，太高會(huì)造成粒徑變大，如超過20份，粒徑超過100nm。
而本發(fā)明所說的乳化劑是具有乳化、穩(wěn)定、分散作用的藥物輔劑。本發(fā)明乳化劑由脂溶性乳化劑及水溶性乳化劑組成。其中，脂溶性乳化劑選自大豆磷脂和卵磷脂，水溶性乳化劑選自泊洛沙姆(Poloxamer)系列和吐溫(Tween)系列。為更好地適于靜脈用藥，本發(fā)明乳化劑更優(yōu)選大豆磷脂和泊洛沙姆188的組合。當(dāng)乳化劑的含量太低，則藥物不能分散或溶于脂質(zhì)材料中；反之，太高，則會(huì)帶來安全問題，如靜脈使用時(shí)產(chǎn)生溶血等。
本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒較佳地包括下列重量份的組分蟾酥提取物0.05～0.5份，脂質(zhì)材料0.6～8份，脂溶性乳化劑0.4～7份，水溶性乳化劑0.5～5份。
顯然，根據(jù)需要，還可在蟾酥SLN中加入各種添加劑，如作為靜脈注射用制劑或眼用制劑時(shí)需加入的等滲劑甘油、葡萄糖等；如抗氧劑維生素E、維生素C、亞硫酸氫鈉等；如作為不滅菌的口服或外用制劑時(shí)需加入的抑菌劑山梨酸及其鹽、苯甲酸及其鹽等。
本發(fā)明要解決的又一技術(shù)問題是提供上述蟾酥固體脂質(zhì)納米粒的制備方法。
該制備方法的具體技術(shù)方案包括下列步驟①將蟾酥提取物、脂質(zhì)材料及脂溶性的乳化劑加熱至熔融溫度，以溶解或分散于脂質(zhì)中制得熔融物；②將水溶性乳化劑分散于水中，形成均勻的水相；③將步驟①所得的熔融物和步驟②所得的水相在該熔融溫度下混合、攪拌至形成均勻的初乳；④將該初乳在該熔融溫度下、30～120MPa壓力下高壓勻化，迅速冷卻至室溫及以下，即可制得本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒(水分散體系)。
其中，步驟①、③、④中所述熔融溫度通常為高于脂質(zhì)材料熔點(diǎn)5～10℃的溫度。根據(jù)本發(fā)明所選擇的脂質(zhì)材料，該熔融溫度優(yōu)選80～85℃，溫度太高，會(huì)引起蟾酥活性成分的降解，本發(fā)明最優(yōu)選85℃。
至于步驟④中所述高壓勻化通常是采用高壓均質(zhì)機(jī)在所述壓力范圍內(nèi)循環(huán)3～10次來實(shí)現(xiàn)。該壓力太小，則納米粒粒徑超過100nm；而壓力太大，則會(huì)引起納米粒的凝聚。
本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒為一種水分散體系，可根據(jù)制藥時(shí)不同劑型規(guī)格來設(shè)計(jì)。本發(fā)明以100ml水分散體系為例來說明，該水分散體系可直接用于臨床用藥，如靜脈注射或滴注。
為便于保存和運(yùn)輸，本發(fā)明還可通過常規(guī)干燥方法，如噴霧干燥或冷凍干燥將水分散體系制成干粉劑。
本發(fā)明以脂質(zhì)為載體材料，以乳化劑為穩(wěn)定劑，采用熔融法和高壓均質(zhì)相結(jié)合的方法，使藥物包載于脂質(zhì)納米粒中。由于本發(fā)明制備方法不使用有機(jī)溶劑，可減少除去其的步驟及成本，也避免殘留溶劑對機(jī)體的近、遠(yuǎn)期不良反應(yīng)；而機(jī)械高壓勻化則便于工業(yè)化生產(chǎn)。更重要的是，本發(fā)明制成的蟾酥SLN粒徑在10～100nm，包封率及載藥量高，分別為80％以上和1.6％以上；穩(wěn)定性佳；且適于多種途徑用藥，特別是其作為水分散體系可直接用于靜脈用藥，無過敏、溶血等不良反應(yīng)，安全性高，特別是對局部注射部位刺激性小，可能是本發(fā)明的SLN，由包裹著蟾酥的納米粒進(jìn)入靜脈后，蟾酥的活性成分不會(huì)直接與血液接觸，只有當(dāng)其被血液稀釋后，才慢慢被機(jī)體吸收，故避免了現(xiàn)有蟾酥注射液血管刺激性大的不良反應(yīng)。另外，本發(fā)明首次證實(shí)了山榆酸甘油酯作為靜脈制劑輔料的安全性，使采用其作為脂質(zhì)載體材料的本發(fā)明蟾酥SLN額外具有適于靜脈用藥的優(yōu)點(diǎn)，也為以后制備SLN靜脈制劑增加了新的脂質(zhì)載體材料選擇。
具體實(shí)施例方式
下面用實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。
其中，本發(fā)明蟾酥提取物其提取工藝照現(xiàn)有蟾酥注射液工藝(《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第十七冊蟾酥注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn))進(jìn)行，取一定量的蟾酥，用10倍量注射用水浸泡，研磨，加乙醇使含醇量達(dá)75％，攪勻，靜置，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并蒸干即得。
所用的高壓均質(zhì)機(jī)為意大利Niro Soavi公司生產(chǎn)的NS 1001L PANDA 2K型號的高壓均質(zhì)機(jī)。
制得的蟾酥SLN粒徑采用美國PSS公司生產(chǎn)的Nicomp/Pss ZW380型粒度儀動(dòng)態(tài)光散射方法測得，包封率、載藥量采用高速離心超濾方法后，根據(jù)公式(中國藥典2005年版二部附錄)計(jì)算得到。
實(shí)施例1～11及對照實(shí)施例將表1所示各實(shí)施例及對照實(shí)施例中規(guī)定用量的組分，按下列制備方法制得本發(fā)明蟾酥SLN。
1)將蟾酥提取物、脂質(zhì)材料及脂溶性乳化劑，在表2所示溫度條件下加熱，使其成熔融物；2)取水溶性乳化劑分散于100ml注射用水中，形成均勻的水相；3)將步驟1)制備所得的熔融物和步驟2)所得的水相在表2所示溫度條件下混合、攪拌(10000rpm以上)1分鐘，形成均勻的初乳；4)將步驟3)所得的初乳轉(zhuǎn)移到高壓均質(zhì)機(jī)中，在表2所示條件下進(jìn)行均質(zhì)，迅速冷至室溫，即可制得10-100nm的固體脂質(zhì)納米粒(水分散體系)100ml。
表1

a為泊洛沙姆188，b為泊洛沙姆407，c為吐溫-80，d為吐溫-60。
其中對照實(shí)施例是按實(shí)施例4的處方(未投蟾酥提取物)制成的空白固體脂質(zhì)納米粒。
表2


制得的各實(shí)施例蟾酥SLN的納米粒粒徑、包封率及載藥量如下表所示表3

上述實(shí)施例以100ml水分散體系為例來說明本發(fā)明，根據(jù)需要還可制作其它規(guī)格，如將步驟2)中的注射用水增加至120/150/200/250/500ml，則可制得120/150/200/250/500ml的本發(fā)明蟾酥SLN水分散體系。
上述實(shí)施例中的山榆酸甘油酯為法國佳法賽(Gattefosse)產(chǎn)品，商品名Compritol 888 ATO；硬脂酸為瑞安市萬事達(dá)油脂廠產(chǎn)品；三硬脂酸甘油酯(Tristearin)為美國fluka公司產(chǎn)品；大豆磷脂、卵磷脂為上海太偉藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；泊洛沙姆188、泊洛沙姆407為美國Basf公司產(chǎn)品；吐溫-60、吐溫-80為上海申宇化工有限公司產(chǎn)品。
試驗(yàn)實(shí)施例1穩(wěn)定性試驗(yàn)以實(shí)施例4為例對靜脈注射用蟾酥SLN進(jìn)行影響因素和穩(wěn)定性考察，結(jié)果表明本品在光照(4500Lux)、高溫(40℃)、冷藏(4～8℃)條件下各10天的影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)(30℃、RH75％)6個(gè)月和室溫留樣(25℃、RH60％)6個(gè)月的穩(wěn)定性考察，其外觀、平均粒徑與原始數(shù)據(jù)比較均無明顯變化，結(jié)果見表4。
表4

試驗(yàn)實(shí)施例2刺激性試驗(yàn)1.肌肉刺激性試驗(yàn)取體重2kg以上健康的家兔4只，分成2組，一組分別在其左右兩腿股四頭肌內(nèi)無菌操作法各注入實(shí)施例4的本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒水分散體系1ml，另一組分別在其左右兩腿股四頭肌內(nèi)無菌操作法各注入對照實(shí)施例的空白固體脂質(zhì)納米粒1ml，注射后48小時(shí)處死動(dòng)物，解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位刺激反應(yīng)并換算相應(yīng)的反應(yīng)級。然后計(jì)算4塊股四頭肌反應(yīng)級的總和。肌肉刺激性試驗(yàn)觀察結(jié)果表明，兩組4塊股四頭肌反應(yīng)級的總和均＜10，用山榆酸甘油酯制成的空白固體脂質(zhì)納米粒及本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒對局部肌肉刺激性小。
2.血管刺激性試驗(yàn)取家兔4只，分成兩組，每日給家兔靜脈注射(iv)1ml實(shí)施例4的本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米?；?qū)φ諏?shí)施例的空白固體脂質(zhì)納米粒，連續(xù)三天后，解剖動(dòng)物血管作病理切片觀察。結(jié)果表明，兩組動(dòng)物的血管有輕度增生、充血、出血，但血管均無組織變性或壞死等顯著刺激反應(yīng)。
試驗(yàn)實(shí)施例3全身主動(dòng)性過敏反應(yīng)取健康無傷豚鼠6只，體重200-250g，按無菌操作，隔日每只肌肉注射實(shí)施例4制成的本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒水分散體系0.5ml，共3次，將其均分為兩組。一組于首次注射后的第14日，由靜脈注射樣品2ml進(jìn)行攻擊，觀察注射后動(dòng)物有無抓鼻、豎毛、呼吸困難、痙攣、休克甚至死亡等過敏反應(yīng)癥狀。第二組于首次注射后的第21日同法進(jìn)行攻擊，進(jìn)行觀察。兩組豚鼠均無明顯反應(yīng)。
結(jié)論靜脈注射用本發(fā)明蟾酥SLN對豚鼠不產(chǎn)生過敏反應(yīng)。
試驗(yàn)實(shí)施例4溶血試驗(yàn)藥液配制取本發(fā)明實(shí)施例4的本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒和對照實(shí)施例的空白固體脂質(zhì)納米粒分成兩組，觀察溶血反應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)方法抽取家兔全血5ml，用玻璃珠振搖去纖維蛋白原，以0.9％生理鹽水洗3次，至上清液不再呈現(xiàn)紅色為止，以紅細(xì)胞積壓容積用生理鹽水配成2％紅細(xì)胞懸液。
每組取試管7支按表5加入各種溶液，第6管不加供試品加生理鹽水作為空白(陰性)對照，第7管不加供試品，用蒸餾水代替生理鹽水作為完全溶血(陽性)對照，輕輕搖勻置37℃水浴中保溫，1小時(shí)后觀察結(jié)果。
表5每組加入的各種溶液

結(jié)果表明，兩組均無溶血反應(yīng)。
結(jié)論用山榆酸甘油酯制成的空白固體脂質(zhì)納米粒及本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒均無溶血作用。
試驗(yàn)實(shí)施例5毒性試驗(yàn)1.山榆酸甘油酯制成的空白SLN1.1最大耐受量測定取昆明種小鼠20只，18～22g，雌雄各半，經(jīng)預(yù)試無法測出山榆酸甘油酯制成的空白固體脂質(zhì)納米粒的LD50，改用iv不同劑量的山榆酸甘油酯制成的空白固體脂質(zhì)納米粒來測定最大耐受量，同時(shí)用ip(腹腔注射)不同劑量的山榆酸甘油酯對照，共觀察21天。
結(jié)果表明，因受樣品的濃度和給藥體積所限，小鼠的最大耐受量可達(dá)到3.96g/kg。
1.2長期毒性試驗(yàn)取SD大白鼠60只，每只200g，雌雄各半，分為高中低3個(gè)劑量組，每組20只，每日高劑量組iv1ml，中劑量組iv0.5ml，低劑量組iv0.2ml山榆酸甘油酯制成的空白固體脂質(zhì)納米粒，經(jīng)6個(gè)月長期毒性試驗(yàn)表明，山榆酸甘油酯可用作靜脈注射用輔料。
2.本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒實(shí)驗(yàn)方法取實(shí)施例4蟾酥SLN，稀釋成適當(dāng)濃度。將動(dòng)物按體重均勻分組，給藥組雌雄各10只動(dòng)物，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前禁食4小時(shí)，自由飲水。給藥組按動(dòng)物體重每0.4ml/20g體積靜脈注射。給藥后連續(xù)觀察動(dòng)物反應(yīng)并記錄7天時(shí)間內(nèi)動(dòng)物死亡數(shù)。將各劑量組動(dòng)物死亡數(shù)用衛(wèi)生部新藥統(tǒng)計(jì)程序中bliss法計(jì)算出二個(gè)性別的LD50(95％可信限)值。
結(jié)果用Bliss法分別計(jì)算出的LD50(95％可信限)雌性小鼠為8.2mg/kg，雄性小鼠為8.1mg/kg。
結(jié)論本發(fā)明靜脈注射用蟾酥固體脂質(zhì)納米粒小鼠一次靜脈注射急性毒性LD50為雌8.2mg/kg，雄8.1mg/kg。
由上述試驗(yàn)實(shí)施例可見，本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒具有較好的穩(wěn)定性。且其安全性佳，特別是用于靜脈注射時(shí)，無明顯的血管刺激反應(yīng)、全身過敏反應(yīng)及溶血反應(yīng)等不良反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.一種蟾酥固體脂質(zhì)納米粒，其含有下列重量份的組分蟾酥提取物0.01～1份，脂質(zhì)材料0.2～20份，脂溶性乳化劑0.2～15份，水溶性乳化劑0.2～10份；該脂質(zhì)材料選自硬脂酸、三硬脂酸甘油酯和山榆酸甘油酯。
2.如權(quán)利要求1所述的固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于其含有下列重量份的組分蟾酥提取物0.05～0.5份，脂質(zhì)材料0.6～8份，脂溶性乳化劑0.4～7份，水溶性乳化劑0.5～5份。
3.如權(quán)利要求1所述的固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于該脂溶性的乳化劑為大豆磷脂或卵磷脂，該水溶性乳化劑為泊洛沙姆或吐溫。
4.如權(quán)利要求1所述的固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于其為靜脈用制劑。
5.一種如權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的蟾酥固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其包括下列步驟①將蟾酥提取物、脂質(zhì)材料及脂溶性的乳化劑加熱至熔融溫度，以溶解或分散于脂質(zhì)中制得熔融物；②將水溶性乳化劑分散于水中，形成均勻的水相；③將步驟①所得的熔融物和步驟②所得的水相在該熔融溫度下混合、攪拌至形成均勻的初乳；④將該初乳在該熔融溫度下、30～120MPa壓力下高壓勻化，迅速冷卻至室溫及以下，即可制得本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于步驟①、③、④中所述熔融溫度為高于脂質(zhì)材料熔點(diǎn)5～10℃的溫度。
7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于該熔融溫度為80～85℃。
8.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于步驟④中所述高壓勻化是采用高壓均質(zhì)機(jī)在所述壓力范圍內(nèi)循環(huán)3～10次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蟾酥固體脂質(zhì)納米粒，其含有下列重量份的組分蟾酥提取物0.01～1份，脂質(zhì)材料0.2～20份，脂溶性乳化劑0.2～15份，水溶性乳化劑0.2～10份；該脂質(zhì)材料選自硬脂酸、三硬脂酸甘油酯和山榆酸甘油酯。本發(fā)明還公開了其采用熔融法和高壓均質(zhì)相結(jié)合的制備方法。本發(fā)明蟾酥固體脂質(zhì)納米粒的粒徑為10～100nm，不僅藥物包封率及載藥量高，穩(wěn)定性好；且可直接用于臨床靜脈用藥，較現(xiàn)有蟾酥靜脈制劑減輕了靜脈刺激性，并有很高的安全性。
文檔編號A61P31/00GK1951401SQ200510030640
公開日2007年4月25日 申請日期2005年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月19日
發(fā)明者奉建芳, 楊勇, 蘆潔 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院