專利名稱：新型雜環(huán)并萘酰亞胺及雙鏈化合物及其在腫瘤細胞中應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一類萘酰亞胺衍生物(或稱吖啶或吩嗪衍生物)及其用途。
背景技術：
芳環(huán)上無并雜環(huán)的吖啶或吩嗪類化合物是一類有抗癌活性的化合物，其中活性最好的DACA，NSC 601316(9-氨基-N-[2-(二甲胺基)乙基]-吖啶-4-羧基胺)，已經(jīng)進入二期臨床試驗(Kestell，P.Dunlop，I.C.McCrystal，M.R.Cancer Chemother，Pharmacol.1999，44，45-50)。這類化合物能嵌插入DNA的堿基對之間，抑制DNA和RNA的合成，并能抑制拓撲異構(gòu)酶II，從而達到抑制腫瘤的目的。
然而已有的吖啶或吩嗪類化合物對DNA的嵌插能力還不強，導致其抗腫瘤活性不高。因此，如何提高該類化合物對DNA的嵌插能力，從而提高它們的抗腫瘤活性成為本發(fā)明需要解決的技術問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)廣泛且深入地研究后發(fā)現(xiàn)如能增大吖啶或吩嗪類化合物的芳香環(huán)平面和增強芳香環(huán)的平面剛性，則可提高其對DNA的嵌插能力，從而提高它們的抗腫瘤活性。據(jù)此，發(fā)明人設計并合成了一類在吖啶或吩嗪類化合物的芳環(huán)上并入雜環(huán)的吖啶或吩嗪類衍生物(或稱萘酰亞胺衍生物)。經(jīng)體外抑制腫瘤細胞生長活性測定，本發(fā)明所述的衍生物對腫瘤細胞生長表現(xiàn)出很強的抑制能力。
本發(fā)明所說的吖啶或吩嗪類衍生物，其具有式(1)所示結(jié)構(gòu)
式中R1為 當X為C時R2為H、鹵素、-S-R6、 或 R3為H；其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12分別選自H或C1-C6烷基中的一種，n、m和p分別為1-6，A為式(2)所示 當X為N時R2為H，R3為H、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
在本發(fā)明中，優(yōu)選的n為1～3，最佳的n為2；優(yōu)選的R4、R5分別選自C1～C3烷基中一種；當X為C時優(yōu)選的R2為H、Cl、Br、-S-R6、 或 其中R6、R7、R8和R9分別選自C1～C3烷基中一種，R10、R11和R12分別選自H和C1～C3烷基中一種，m和p分別為1～3，A為上述式(2)所示結(jié)構(gòu)；當X為N時優(yōu)選的R3為H、C1～C3烷基或C1～C3烷氧基，最佳的R3為H、甲基或甲氧基。
合成本發(fā)明所述衍生物的主要步驟如下
當X為C時，主要中間體的合成路線如下 即以4-溴-1，8萘酐(購于鞍山市惠豐化工有限責任公司)為起始原料，與相應的胺在無水乙醇中反應得式(3)化合物；由式(3)化合物與鄰氨基苯甲酸在有Cu/CuI存在下反應得式(4)化合物；將式(4)化合物在濃硫酸存在下環(huán)化或先將其在三乙胺/咪唑條件下還原為相應醇、然后用二氧化錳再氧化為醛、最后在三氟乙酸存在下環(huán)化得到一類目標化合物(上述合成路線中未標出)；式(4)化合物與POX3反應得到另一類目標(式(5)化合物)；式(5)化合物分別與HS-R6和相應的胺反應得到第三類目標化合物(上述合成路線中未標出)；當X為N時，其合成的主要步驟如下以3-硝基，4-溴-1，8萘酐(購于鞍山市惠豐化工有限責任公司)為起始原料，首先將其與苯胺或由C1～C6烷基或C1～C6烷氧基取代的苯胺在DMF中反應，然后在NaBH4/NaOH條件下環(huán)化，最后再與相應得胺(HN-R1)反應得相應目標化合物。
上述合成過程中所涉及的試劑及原料均為市售品。
具體實施例方式
下面通過實施例對本發(fā)明作進一步的說明，其目的是為更好理解本發(fā)明的內(nèi)容，但所舉的實施例并不限制本發(fā)明的保護范圍實施例18-氯-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-4，6-二酮(化合物1)的合成(1)2.77克4-溴-1，8萘酐(0.01摩爾)，加入無水乙醇中，再向加入1克N，N-二甲基乙二胺。升溫，回流，薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，過濾，稱量固體為2.950克，所得固體抽干放置產(chǎn)率為85％。
(2)取2克由步驟(1)合成的產(chǎn)物，加入10毫升N，N’-二甲基甲酰胺中，再向加入0.8克，2-氨基苯甲酸(6毫摩爾)，0.038克青銅粉(0.6毫摩爾)，0.101克CuI(0.53毫摩爾)，升溫100℃，薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，過濾，所得固體經(jīng)柱層析分離，得2.0克紅色固體。
(3)取1克由步驟(2)合成的產(chǎn)物，加入5毫升三氯氧磷中，升溫110℃，薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，到入含有三乙基胺的冰水中，過濾，干燥，所得固體經(jīng)柱層析分離，得純目標產(chǎn)物(化合物1)0.65克，產(chǎn)率65％，熔點204.8-205.2℃(未校正)。

1H NMR(d6-CDCl3)δ(ppm)2.998(s，6H，NCH3)，3.514(s，2H，NCH2)，4.690-4.720(t，J1＝6.0Hz，J2＝6.0Hz，2H，CONCH2)，7.778-7.816(t，J1＝7.6Hz，J2＝7.6Hz，1H)，7.968-8.035(m，2H)，8.393-8.415(d，J1＝8.8Hz，1H)，8.528-8.549(d，J＝8.4Hz，1H)，8.727-8.746(d，J＝7.6Hz，1H)，9.516(s，1H)，9.771-9.791(d，J＝8.0Hz，1H)IR(KBr)2923，2853，1702，1660，1347cm-1ESI-HRMS；C23H18ClN3O2(M+H+)計算值404.1166，試驗值404.1158.
實施例28-乙硫醇-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-4，6-二酮(化合物2)的合成 稱取1克化合物1(2.48毫摩爾)和0.18克乙硫醇(2.97毫摩爾)，加入10毫升無水乙腈中，升溫，回流，薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，過濾，所得固體經(jīng)柱層析分離，得純品目標產(chǎn)物(化合物2)稱量固體為0.83克，產(chǎn)率76％，熔點161.0-161.4℃(未校正)。1H NMR(d6-CDCl3)δ(ppm)1.192-1.229(t，J1＝7.2Hz，J2＝7.6Hz，3H，SCH2CH3)，2.509(s，6H，NCH3)，2.865(s，2H，NCH2)，3.046-3.101(q，J1＝7.2Hz，J2＝7.6Hz，J3＝7.2Hz，2H，SCH2)，4.438-4.474(t，J1＝7.2Hz，J2＝7.2Hz，2H，CONCH2)，7.747-7.785(t，J1＝8.4Hz，J2＝6.8Hz，1H)，7.938-8.004(m，2H)，8.389-8.411(d，J＝8.8Hz，1H)，8.704-8.724(d，J＝8.0Hz，1H)，8.870-8.892(d，J＝8.8Hz，1H)，9.747-9.767(d，J＝8.0Hz，1H)，9.884(s，1H)IR(KBr)3297，2962，2852，1701，1663，1346cm-1ESI-HRMS；C25H23N3O2S(M+H+)計算值430.1589，試驗值430.1592。
實施例38-N’，N’-二甲基胺基乙胺基-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-4，6-二酮的合成(化合物3)的合成除用N，N-二甲基乙二胺代替乙硫醇外，其它合成及提純方法同實施例2。所得產(chǎn)物0.91g，產(chǎn)率80％(化合物3)，熔點148.9-150.4℃(未校正)。
1H NMR(d6-CDCl3)δ(ppm)2.468(s，6H，N(CH3)2)，2.526(s，6H，N(CH3)2)，2.750-2.778(t，J1＝6.0Hz，J2＝5.2Hz，2H，CH2)，2.871(s，2H，CH2)，4.066-4.095(t，J1＝5.6Hz，J2＝6.0Hz，2H，CH2)，4.422-4.457(t，J1＝6.8Hz，J2＝7.2Hz，2H，CH2)，7.516-7.552(t，J1＝6.8Hz，J2＝7.6Hz，1H)，7.799-7.884(m，2H)，8.132-8.153(d，J＝8.4Hz，1H)，8.199-8.220(d，J＝8.4Hz，1H)，8.617-8.636(d，J＝7.6Hz，1H)，9.355(s，1H)，9.629-9.651(d，J＝8.8Hz，1H)IR(KBr)3397，2924，2854，1692，1653，1347cm-1ESI-HRMS；C23H18ClN3O2(M+2H+/2)計算值228.6239，試驗值228.6231。
實施例48-N-甲基哌嗪基-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-4，6-二酮(化合物4)的合成除用N-甲基哌嗪代替乙硫醇外，其它合成及提純方法同實施2，所得產(chǎn)物(化合物4)，熔點197.6-198.2℃。
1H NMR(d6-DMSO)δ(ppm)1.622(br s，7H，(CH2CH2)2NCH3)，2.605(s，6H，NCH3)，2.935(brs，4H，(CH2CH2)2NCH3)，3.874(s，2H，NCH2)，4.503(s，2H，CONCH2)，7.619(s，1H)，7.855-7.964(m，2H)，8.345-8.366(d，J1＝8.4Hz，1H)，8.424-8.446(d，J1＝8.8Hz，1H)，8.674-8.693(d，J＝7.6Hz，1H)，9.455(s，1H)，9.702-9.724(d，J＝8.8Hz，1H)。
IR(KBr)2937，2819，1698，1657，1377cm-1ESI-HRM S；C23H19N3O2(M+H+)計算值370.1556，試驗值370.1565。
實施例58-oxo-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-4，6(化合物5)的合成
稱取1克由例2步驟(2)合成的產(chǎn)物，加入5毫升98％的濃硫酸，90℃反應2小時，到入水中，過濾，干燥，所得固體經(jīng)柱層析分離，所得產(chǎn)物(化合物5)熔點＞300℃(未校正)。
1HNMR(d6-DMSO)δ(ppm)2.246(s，6H，NCH3)，2.550(s，2H，NCH2)，4.147(s，2H，CONCH2)，7.391-7.425(t，J1＝6.8Hz，J2＝6.8Hz，1H)，7.807-7.844(t，J1＝7.6Hz，J2＝7.2Hz，1H)，7.950-8.022(m，2H)，8.220-8.239(d，J＝7.6Hz，1H)，8.556-8.583(d，J＝6.8Hz，1H)，9.094(s，1H)，9.276-9.298(d，J＝8.8Hz，1H)。
IR(KBr)3327，2959，2817，1699，1656，1396cm-1ESI-HRMS；C23H20N4O2(M+H+)計算值386.1505，試驗值385.1516。
實施例68-H-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-4，6-二酮(化合物6)的合成(1)取114毫克(0.283毫摩爾)由例2步驟(2)合成的產(chǎn)物，加入10毫升無水四氫呋喃，再向其中加入40毫克咪唑(0.588毫摩爾)和76毫克(0.752毫摩爾)三乙基胺，回流24小時，冷卻，將2毫升0℃的水加入其中，攪拌，再向其中加入114毫克(0.632毫摩爾)硼氫化鈉，常溫反應，薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，加入10％的鹽酸中和至PH值為6，然后加入NH3水中和至PH值為9，過濾，得到暗紅色固體。
(2)向所得產(chǎn)品中加入無水丙酮，再向其中加入新制的過量的二氧化錳固體粉末，薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，過濾，丙酮洗滌濾餅，合并濾液。
(3)蒸干丙酮。，所得產(chǎn)品不經(jīng)分離，在氮氣保護下向其中加入2毫升三氟乙酸，薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，到入冰氨水中，過濾，干燥，所得固體經(jīng)柱層析分離，所得產(chǎn)物30.9毫克(化合物6)產(chǎn)率32％。熔點191-193℃(未校正)。
1H NMR(d6-DMSO)δ(ppm)2.458(s，6H，NCH3)，2.805(s，2H，NCH2)，4.412-4.447(t，J1＝6.4Hz，J2＝7.6Hz，2H，CONCH2)，7.817-7.854(t，J1＝7.2Hz，J2＝7.6Hz，1H)，7.941-8.017(m，2H)，8.128-8.150(d，J＝8.8Hz，1H)，8.401-8.423(d，J＝8.8Hz，1H)，8.717-8.737(d，J1＝8.0Hz，1H)，8.968(s，1H)，9.041(s，1H)，9.752-9.773(d，J＝8.4Hz，1H)。
IR(KBr)2926，2854，1735，1632，1384cm-1ESI-HRMS；C23H19N3O2(M+H+)計算值370.1556，試驗值370.1565.。
實施例7N，N’-雙{2-[(4，6-二氧-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-8-)氨基]乙基}胺(化合物7)的合成
稱取2克(4.9毫摩爾)化合物1，加入10毫升己腈中，再向加入0.2克(1.9毫摩爾)二乙烯三胺(NH2(CH2)2NH(CH2)2NH2)，升溫，回流，薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，過濾，所得固體經(jīng)柱層析分離，得2.0克純的目標產(chǎn)品，產(chǎn)率49％，熔點191.3-191.5℃(未校正)1H NMR(d6-DMSO)δ(ppm)2.285(s，4H，2CH2)，2.447(s，12H，2N(CH3)2)，3.186(s，4H，2CH2)，3.713(s，4H，2CH2)，4.020(s，4H，2CH2)，7.325(s，2H)，7.671-7.70(m，4H)，7.782-7.803(d，J＝8.4Hz，2H)，8.226-8.246(d，J＝8.0Hz，2H)，8.279-8.300(d，J＝8.4Hz，2H)，8.955(s，2H)，9.080-9.101(d，J＝8.4Hz，2H)。
IR(KBr)3427，2922，2853，1696，1653，1346cm-1。
ESI-HRMS；C50H47N9O4(M+2H+/2)計算值419.6954，試驗值419.6948。
實施例8N，N’-二{2-[(4，6-二氧-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-8-)氨基]丙基}胺(化合物8)的合成除用N，N-雙(三氨基丙基)胺(NH2(CH2)3NH(CH2)3NH2)替代二乙烯三胺外，其它合成及提純方法同實施例7，得目標化合物8，熔點195.9-196.1℃(未校正)。
1H NMR(d6-CDCl3)δ(ppm)2.177(s，4H，2CH2)，2.325(s，12H，2N(CH3)2)，2.475(s，4H，2CH2)，3.178(s，4H，2CH2)，3.856(s，4H，2CH2)，4.182(s，4H，2CH2)，7.320-7.358(t，J1＝7.2Hz，J2＝8.0Hz，2H)，7.621-7.659(m，4H)，7.768-7.789(d，J＝8.4Hz，2H)，8.017(brs，2H)，8.317-8.337(d，J＝8.0Hz，2H)，8.863(s，2H)，8.978-8.998(d，J＝8.0Hz，2H)IR(KBr)3399，2924，2853，1689，1650，1376cm-1
ESI-用RMS；C52H51N9O4(M+3H+/3)計算值289.4766，試驗值289.4767。
實施例9N，N’-雙{2-[(4，6-二氧-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-8-yl)氨基]丙基}甲基胺(化合物9)的合成除用N，N-雙(三氨基丙基)甲基胺(NH2(CH2)3NCH3(CH2)3NH2)替代二乙烯三胺外，其它合成及提純方法同實施例7，得目標化合物9，熔點213.6-213.8℃(未校正)。
1H NMR(d6-DMSO)δ(ppm)2.149(s，4H，2CH2)，2.301(s，4H，2CH2)，2.317(s，3H，NCH3)，2.417(s，12H，2NCH3)，2.742(s，4H，2CH2)，3.656(s，4H，2CH2)，4.015(s，4H，2CH2)，7.330-7.368(t，J1＝7.6Hz，J2＝7.6Hz，2H)，7.330-7.368(t，J1＝7.6Hz，J2＝7.6Hz，2H)，7.561-7.689(m，6H)，8.125-8.143(d，J＝7.2Hz，2H)，8.282-8.302(d，J＝8.0Hz，2H)，8.713(s，2H)，8.857-8.875(d，J＝7.2Hz，2H)IR(KBr)3431，2922，2854，1691，1652，1395cm-1ESI-HRMS；C53H53N9O4(M+3H+/3)計算值294.1485，試驗值294.1483。
實施例10N，N’-雙{2-[(4，6-二氧-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-8-)氨基]乙基}-1，3-乙二胺(化合物10)的合成除用N，N-雙(3-氨基乙基)乙二胺(NH2(CH2)2NH(CH2)2NH(CH2)2NH2)替代二乙烯三胺外，其它合成及提純方法同實施例7，得化合物10，熔點159.9-160.1℃(未校正)。
1H NMR(d6-DMSO)δ(ppm)2.353-2.387(t，J1＝6.8Hz，J2＝6.8Hz，4H，2CH2)，2.404(s，6H，2NCH3)，2.968(s，4H，2CH2)，3.133(s，4H，2CH2)，3.791(s，4H，2CH2)，3.973(s，4H，2CH2)，7.328(s，2H)，7.569-7.639(m，6H)，8.119-8.136(d，J＝6.8Hz，2H)，8.294-8.314(d，J＝8.0Hz，2H)，8.846(s，2H)，8.922-8.943(d，J＝8.4Hz，2H)，IR(KBr)3419，2926，2852，1693，1650，1392cm-1。
ESI-HRMS；C52H52N10O4(M+2H+/2)計算值441.2165，試驗值441.2179。
實施例11
N，N’-雙{2-[(4，6-二氧-5-(2-(二甲基氨基)乙基)-5H-異喹啉[4，5-bc]吖啶-8-yl)氨基]乙基}-1，3-丙二胺(化合物11)的合成除用N，N-雙(3-氨基丙基)-1，3-丙二胺(NH2(CH2)2NH(CH2)3NH(CH2)2NH2)替代二乙烯三胺外，其它合成及提純方法同實施例7，得化合物11，熔點102.2-102.5℃(未校正)。
1H NMR(d6-DMSO)δ(ppm)2.117-2.135(m，2H CH2)，2.377(s，4H，2CH2)，2.538(s，12H，2N(CH3)2)，2.890(s，4H，2CH2)，3.027(s，4H，2CH2)，3.820(s，4H，2CH2)，3.904(s，4H，2CH2)，7.400(s 2H)，7.600-7.691(m，6H)，8.167-8.186(d，J＝7.6Hz，2H)，8.268-8.288(d，J＝8.0Hz，2H)，8.847(s，2H)，8.978-8.998(dJ＝8.0Hz，2H)IR(KBr)3334，2924，2853，1695，1654，1391cm-1ESI-HRMS；C53H54N10O4(M+2H+/2)計算值448.2243，試驗值448.2260。
實施例125-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹喔啉[5，4-bc]吩嗪-4，6-二酮(化合物12)的合成(1)3.22克3-硝基，4-溴-1，8萘酐(0.01摩爾)和1.1克苯胺(0.012摩爾)，加入N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室溫攪拌。薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，過濾，稱量固體為3.05克，所得固體抽干。
(2)稱取1克NaBH4(0.0263摩爾)和2克步驟(1)中所得產(chǎn)品，加入到100毫升2M濃度的NaOH水溶液中。升溫，回流。薄板層析跟蹤反應，直至反應完全，冷卻，向其中滴6M的HCl至pH值為6，過濾，干燥，然后加入甲醇和三乙胺的混合液中，回流至溶液為均相。冷卻后用醋酸調(diào)節(jié)到pH值到6，過濾，干燥。
(3)稱取0.3毫升N’，N’-二甲基乙二胺和0.6克步驟(2)所得產(chǎn)品，加入30毫升乙醇中升溫，回流。薄板層析跟蹤反應，直至反應完全。所得固體經(jīng)柱層析分離，所得產(chǎn)物(化合物12)熔點198.3-198.5℃(未校正)。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)2.595(s，6H，NCH3)，2.995(s，2H，NCH2)，4.508(s，2H，CONCH2)，7.955-8.075(m，3H)，8.379-8.426(m，2H)，8.764-8.784(d，J＝8.0Hz，1H)，9.215(s，1H)，9.691-9.711(d，J＝8.0Hz，1H)，IR(KBr)2924，2854，1708，1662，and 1336，cm-1。
ESI-HRMSCalcd for C22H18NO2(M+H+)計算值371.1508，試驗值371.1510。
實施例139-甲基-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹喔啉[5，4-bc]吩嗪-4，6-二酮(化合物13)的合成除用3-甲基苯胺代替苯胺外，其它合成及提純方法同實施例12。所得產(chǎn)物產(chǎn)率40％(化合物13)熔點178.1-178.5℃(未校正)。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)2.465(s，6H，NCH3)，2.826(s，2H，NCH2)，2.994(s，3H，CH3)，4.427-4.462(t，J1＝6.8Hz，J2＝7.2Hz，2H，CONCH2)，7.770-7.786(d，J＝6.4Hz，1H)，7.862-7.901(t，J1＝8.0Hz，J2＝7.6Hz，1H)，8.014-8.052(t，J1＝7.6Hz，J2＝7.6Hz，1H)，8.220-8.241(d，J＝8.4Hz，1H)，8.747-8.766(d，J＝7.6Hz，1H)，9.238(s，1H)，9.660-9.680(d，J＝8.0Hz，1H)IR(KBr)2924，2853，1702，1660，1340cm-1。
ESI-HRMSC23H20N4O2(M+H+)計算值385.1665，試驗值385.1671。
實施例149-甲氧基-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹喔啉[5，4-bc]吩嗪-4，6-二酮(化合物14)的合成除用3-甲氧基苯胺代替苯胺外，其它合成及提純方法同實施例12。所得產(chǎn)物產(chǎn)率45％(化合物14)熔點189.6-190.5℃(未校正)。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)2.998(s，6H，NCH3)，3.516(s，2H，NCH2)，4.244(s，3H，OCH3)，4.698(s，2H，CONCH2)，7.259-7.298(t，J1＝7.6Hz，J2＝8.0Hz，1H)，7.912-8.051(m，3H)，8.767-7.784(d，J＝6.8Hz，1H)，9.390(s，1H)，9.687-9.708(d，J＝8.4Hz，1H)，IR(KBr)2924，2853，1702，1660，1340cm-1。
ESI-HRMS，C23H20N4O3(M+H+)計算值401.1614，試驗值401.1595.。
實施例1510-甲基-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹喔啉[5，4-bc]吩嗪-4，6-二酮(化合物15)的合成除用4-甲基苯胺代替苯胺外，其它合成及提純方法同實施例12。所得產(chǎn)物產(chǎn)率75％(化合物15)熔點209.6-210.1℃(未校正)。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)2.485(s，6H，NCH3)，2.722(s，3H，CH3)，2.852(s，2H，NCH2)，4.432-4.467(t，2H，J1＝6.8Hz，J2＝7.2Hz，CONCH2)，7.818-7.843(d，J＝10.0Hz，1H)，8.011-8.050(t，J1＝7.6Hz，J2＝8.0Hz，1H)，8.133(s，1H)，8.280-8.302(d，J＝8.8Hz，1H)，8.740-8.758(d，J＝7.2Hz，1H)，9.182(s，1H)，9.647-9.667(d，J＝8.0Hz，1H)，IR(KBr)2924，2854，1704，1663，1357cm-1。
ESI-HRMS，C23H20N4O2(M+H+)計算值385.1665，試驗值Found385.1664。
實施例1610-甲氧基-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹喔啉[5，4-bc]吩嗪-4，6-二酮(化合物16)的合成除用4-甲氧基苯胺代替苯胺外，其它合成及提純方法同實施例12。所得產(chǎn)物產(chǎn)率85％(化合物16)熔點214.4-215.2℃(未校正)。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)2.610(s，6H，NCH3)，3.010(s，2H，NCH2)，4.088(s，3H，OCH3)，4.512(s，2H，CONCH2)，7.560-7.567(d，J＝2.8Hz，1H)，7.645-7.651(d，J＝2.4Hz，1H)，7.668-7.675(d，J＝2.8Hz，1H)，8.010-8.049(t，J1＝7.6Hz，J2＝8.0Hz，1H)，8.256-8.280(d，J＝9.6Hz，2H)，8.729-8.748(d，J＝7.6Hz，1H)，9.164(s，1H)，9.630-9.650(d，J＝8.0Hz，1H)，IR(KBr)2924，2853，1705，1655，1350cm-1。
ESI-HRMS，C23H20N4O3(M+H+)計算值401.1614，試驗值401.1618。
實施例1712-甲基-5-(2-(N’，N’-二甲基胺基乙基-5H-異喹喔啉[5，4-bc]吩嗪-4，6-二酮(化合物17)的合成除用2-甲基苯胺代替苯胺外，其它合成及提純方法同實施例12。所得產(chǎn)物(化合物17)產(chǎn)率75％熔點185.2-185.5℃(未校正)。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)2.977(s，6H，NCH3)，3.061(s，3H，CH3)，3.497(s，2H，NCH2)，4.698(s，2H，CONCH2)，7.833-7.860(m，2H)，8.053-8.093(t，J1＝8.0Hz，J2＝8.0Hz，1H)，8.200-8.217(d，J＝6.8Hz，1H)，8.753-8.771(d，J＝7.2Hz，1H)，9.226(s，1H)，9.724-9.746(d，J＝8.8Hz，1H)。
IR(KBr)2924，2854，1704，1667，1345cm-1ESI-HRMS，C23H20N4O2(M+H+)計算值385.1665，385.1665，試驗值385.1682。
實施例18體外抑制腫瘤細胞生長活性測定分別用四氮唑鹽(microculture tetrozolium，MTT)還原法對P388小鼠白血病細胞和磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法對A-549人肺腺癌細胞進行抑制試驗。
四氮唑鹽(MTT)還原法的具體操作是按不同腫瘤生長速率，將一定數(shù)量處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞90μl/孔接種于96孔微量培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)24h后加入藥液10μl/孔，對每個細胞株，每個濃度均為三個復孔。另設無細胞調(diào)零孔、如果藥物有顏色要做相應藥物濃度無細胞調(diào)零孔。腫瘤細胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)48小時后，加MTT(Sigma)液5mg/ml用生理鹽水配制20μl/孔；繼續(xù)培養(yǎng)4小時后，加入三聯(lián)液(10％SDS-5％異丁醇-0。01mol/lHCl)50μl/孔，于CO2培養(yǎng)箱中過夜。然后用酶標儀測OD570值。按下列公式計算被測物對癌細胞生長的抑制率腫瘤抑制率＝(對照組OD值-治療組OD值)/對照組OD值×100％。
磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法的具體操作如下根據(jù)細胞生長速率，將處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞以90μl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加藥10μl/孔。每個濃度設三復孔。并設相應濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞調(diào)零孔。腫瘤細胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10％冷TCA固定細胞，4℃放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣中自然干燥。然后加入由1％冰醋酸配制的SRB(Sigma)4mg/ml溶液100μl/孔，室溫中染色15分鐘，去上清液，用1％醋酸洗滌5次，空氣干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶標儀520nm波長下測定A值。按下列公式計算被測物對癌細胞生長的抑制率腫瘤抑制率＝(A540對照孔－A540給藥孔)/A540對照孔×100％。
篩選方法磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法四氮唑鹽(microculture tetrozolium，MTT)還原法*細胞株P388小鼠白血病*A-549人肺腺癌作用時間48h*-72h篩選方法磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法四氮唑鹽(microculture tetrozolium，MTT)還原法*對化合物1～17的體外生測結(jié)果如下化合物1～17對A-549生長的抑制率％
化合物1～17對P388生長的抑制率％ 以上化合物具有廣泛的抗腫瘤活性，尤其是對人肺癌、胃癌、肝癌和白血病等多種不同組織來源的腫瘤細胞的增殖顯示出明顯的抑制活性，且作用效果呈明顯的量效關系。
權(quán)利要求
1.一種萘酰亞胺衍生物，其具有式(1)所示結(jié)構(gòu) 式中 當X為C時R2為H、鹵素、 其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12分別選自H或C1-C6烷基中的一種，n、m和p分別為1-6，A為式(2)所示 當X為N時R2為H，R3為H、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
2.如權(quán)利要求1所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，其中n為1～3，R4、R5分別選自C1～C3烷基中一種。
3.如權(quán)利要求2所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，其中X為N，R3為H、C1～C3烷基或C1～C3烷氧基。
4.如權(quán)利要求2所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，其中當X為C，所說的鹵素為氯或溴，R6、R7、R8和R9分別選自C1～C3烷基中一種，R10、R11和R12分別選自H和C1～C3烷基中一種，m和p分別為1～3。
5.如權(quán)利要求4所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，所述的萘酰亞胺衍生物為化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11。
6.如權(quán)利要求3所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，所述的萘酰亞胺衍生物為化合物12、13、14、15、16或17。
7.如權(quán)利要求1～6所述的任意一種萘酰亞胺衍生物在腫瘤細胞增殖抑制劑方面的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種萘酰亞胺衍生物及其用途，所述的衍生物是在吖啶或吩嗪類化合物的芳環(huán)上并入雜環(huán)后獲得，其結(jié)構(gòu)如式(1)所示。與現(xiàn)有的吖啶或吩嗪類化合物相比，本發(fā)明所述衍生物對DNA的嵌插能力得以提高，從而提高它們的抗腫瘤活性，尤其是對人肺癌、胃癌、肝癌和白血病等多種不同組織來源的腫瘤細胞的增殖顯示出明顯的抑制活性，且作用效果呈明顯的量效關系。
文檔編號A61K31/4427GK1880313SQ20051002678
公開日2006年12月20日 申請日期2005年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月15日
發(fā)明者錢旭紅, 楊鵬 申請人:華東理工大學, 大連理工大學