專利名稱：一種長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物、其制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物提取物，尤其是涉及一種長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物、其制備方法及其在制備抗血管生成和/或抗腫瘤藥物中的用途。
背景技術(shù)：
針對(duì)抗血管生成的生物治療策略，尤其是直接針對(duì)腫瘤血管自身的治療策略，具有藥物易于到達(dá)腫瘤部位、不易產(chǎn)生耐藥性及不受瘤種限制等優(yōu)勢(shì)，故這一策略被認(rèn)為是最具前景的抗腫瘤策略之一，業(yè)已成為近年腫瘤生物治療研究的熱點(diǎn)。目前已開發(fā)的抗血管生成藥物達(dá)30余種(Zetter，B.R.et al.Ann.Rev.Med.1998，49407-424.)，大多正在進(jìn)行I/II期臨床試驗(yàn)。他們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上各異，包括類固醇、多肽、抗生素和帶負(fù)電荷的多糖如肝素、硫酸化類肝素等。研究發(fā)現(xiàn)肝素、硫酸化類肝素類極易與許多生長(zhǎng)因子(如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子FGF1、FGF2、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子VEGF、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子等)結(jié)合(Digabreiele，A.D.et al.Nature，1998，393812-817.)。除此之外，硫酸化類肝素對(duì)于腫瘤生長(zhǎng)也有其他間接作用。
盡管肝素、硫酸化類肝素具有這些重要的功能，是很好的血管生成抑制劑，但其最大的缺點(diǎn)是常導(dǎo)致難以控制的出血，從而限制了其作為臨床抗腫瘤血管生成抑制劑的廣泛應(yīng)用。目前科學(xué)家正試圖通過兩條途徑來解決一是通過化學(xué)降解或全合成的方式獲得小分子量肝素類似物；一是從其他來源分離純化獲得具有高的血管生成抑制活性而沒有或只有很低的抗凝血活性的多糖。在前一途徑中科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了一些活性高于肝素的小分子量的肝素或硫酸化肝素，并全合成了活性遠(yuǎn)高于肝素的一些寡糖(Digabreiele，A.D.et al.Nature，1998，393812-817；Ram，S.et al.Nature ReviewCancer.2002，2521-528.)，但通過該途徑獲得抗血管生成抑制劑的成本太高。
我們?cè)趯?duì)紅藻中多糖成分的研究中發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖不但具有抗凝血作用，而且還具有較強(qiáng)的抗血管生成作用和抗腫瘤作用。有關(guān)長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖的結(jié)構(gòu)及其抗腫瘤活性與抗血管生成活性均未見文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種具有抗血管生成和抗腫瘤作用的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物。本發(fā)明還提供了一種制備長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物的方法。本發(fā)明還提供長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物在制備抗血管生成和/或抗腫瘤藥物中的用途。
本發(fā)明的技術(shù)方案為一種長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物，含有如下重量比成份(重量單位為克)67～87％半乳糖、1～20％3，6-脫水半乳糖和1～7％6-甲基半乳糖。該提取物還含有0.5～6.5％木糖和0.5～6.5％葡萄糖。特別是，本發(fā)明的提取物含有如下重量比成分77.2％半乳糖、10.5％3，6-脫水半乳糖、3.9％6-甲基半乳糖、3.5％木糖和3.5％葡萄糖。
本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物可由如下方法制得將長(zhǎng)葉蜈蚣藻粉碎后用熱水提取1～3小時(shí)，溫度控制在90～100℃，溶液pH控制在5～7之間，得一提取液；將所述提取液經(jīng)離心后留上清液，攪拌下加入1～3倍量的乙醇，再次離心留沉淀物；和將所述沉淀物溶于水后冷凍干燥得到蜈蚣藻多糖提取物。
優(yōu)選將所述溶液的pH控制在6～7之間。
本發(fā)明的另一方面是提供了一種制備長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物的方法，包括如下步驟將長(zhǎng)葉蜈蚣藻粉碎后用熱水提取1～3小時(shí)，溫度控制在90～100℃，溶液pH控制在5～7之間，得一提取液；將所述提取液經(jīng)離心后留上清液，攪拌下加入1～3倍量的乙醇，再次離心留沉淀物；和將所述沉淀物溶于水后冷凍干燥得到蜈蚣藻多糖提取物。
優(yōu)選將所述溶液的pH控制在6～7之間。
本發(fā)明的另一方面是提供了長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物在制備抗血管生成和/或抗腫瘤藥物中的用途。特別是在制備抗白血病、肺癌或S-180肉瘤的藥物中的用途。
本發(fā)明各個(gè)方面的細(xì)節(jié)將在隨后的章節(jié)中得以詳盡描述。通過下文及其權(quán)利要求的描述，本發(fā)明的其他特點(diǎn)、目的和優(yōu)勢(shì)將會(huì)更為明顯。


圖1長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物A(GLP)對(duì)血管新生抑制作用示意圖A不加藥對(duì)照組；B GLP 25μg/egg；C GLP 50μg/egg圖2長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物A(GLP)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成抑制作用示意圖A不加藥對(duì)照組，內(nèi)皮細(xì)胞形成完整的管腔結(jié)構(gòu)；B GLP 0.313mg/ml，內(nèi)皮細(xì)胞聚集性變差，細(xì)胞有偽足伸出，但未排列成管腔結(jié)構(gòu)；C GLP1.25mg/ml，內(nèi)皮細(xì)胞散在且無變形，未有偽足伸出，無形成管腔的跡象；圖3長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物A(GLP)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移抑制作用示意圖A陰性對(duì)照；B陽(yáng)性對(duì)照； C GLP 0.313mg/ml；D GLP 1.25mg/ml； E GLP 2.5mg/ml； F GLP 5.0mg/ml；具體實(shí)施方式
本發(fā)明的問世部分是基于這樣一個(gè)發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物具有抗血管生成和抗腫瘤作用。
本發(fā)明的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物中可加入可藥用載體以促進(jìn)其給藥。較佳的，本發(fā)明的藥物組合物含有0.1-99.9％重量比的提取物?！翱伤幱幂d體”不會(huì)破壞蜈蚣藻多糖提取物的藥學(xué)活性，同時(shí)其有效用量，即能夠起到藥物載體作用時(shí)的用量對(duì)人體無毒。
“可藥用載體”包括但不限于離子交換材料、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、自乳化藥物傳遞系統(tǒng)(SEDDS)如d-α-維生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯、吐溫(Tweens)或其他類似聚合介質(zhì)等藥物制劑用的表面活化劑、血清蛋白如人血清白蛋白、緩沖物質(zhì)如磷酸鹽、氨基乙酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸部分甘油酯混合物、水、鹽、電解質(zhì)如硫酸鹽精蛋白、磷酸氫二納、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、硅膠、硅酸鎂等。聚乙烯吡咯酮、纖維素物質(zhì)、聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙稀酸酯、乙烯-聚氧乙烯-嵌段聚合物和羊毛酯、環(huán)糊精如α-、β-及γ-環(huán)糊精或其經(jīng)化學(xué)修飾的衍生物如2-和3-羥丙基-β-環(huán)糊精等羥烷基環(huán)糊精或其他可溶性衍生物等均可用于促進(jìn)本發(fā)明的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物的藥物傳遞。
其他可藥用輔料如填充劑(如無水乳糖、淀粉、乳糖珠粒和葡萄糖)、粘合劑(如微晶纖維素)、崩解劑(如交聯(lián)羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙基纖維素和交聯(lián)PVP)、潤(rùn)滑劑(如硬酯酸鎂)、吸收促進(jìn)劑、香味劑、甜味劑、稀釋劑、賦形劑、潤(rùn)濕劑、溶劑、增溶劑和著色劑等也可加入本發(fā)明的藥物組合物中。
上述蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物可通過腸道或者非腸道途徑給藥。腸道給藥制劑包括丸劑、顆粒劑、膠囊劑、懸浮液或溶液。非腸道給藥制劑包括注射劑、霜?jiǎng)?、膏劑、貼劑或噴霧劑。非腸道給藥途徑包括皮下、皮內(nèi)、動(dòng)脈、靜脈、肌肉、關(guān)節(jié)、滑液、胸骨、鞘內(nèi)、病灶內(nèi)、顱內(nèi)注射或滴注。其它給藥途徑可包括局部、直腸、經(jīng)鼻、經(jīng)頰、陰道、舌下、粘膜、氣管或尿道。蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物還可以通過氣霧吸入或植入蓄積或針刺等方式給藥。
蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物的口服制劑包括但不限于膠囊、片劑、乳劑、水懸浮劑、膠體液、溶液、微膠囊、丸劑、錠劑、顆粒劑、粉劑。常用于片劑的可藥用載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還會(huì)加入硬脂酸鎂等潤(rùn)滑劑。常用于膠囊劑的可藥用載體包括乳糖和干玉米淀粉。當(dāng)制成口服水懸浮劑和/或乳劑時(shí)，蜈蚣藻多糖提取物可懸浮或溶解于油相里并與乳化劑或懸浮劑相結(jié)合。如果需要，也可以加入一些甜味劑和/或香味劑和/或增色劑。
本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物可被制成無菌注射劑，如無菌水相或油相懸浮液。該懸浮液可按本領(lǐng)域的常規(guī)方法即使用適宜的分散劑或濕潤(rùn)劑(如Tween 80)及懸浮劑等制得。其還可以是在可腸道外給藥的無毒稀釋劑或溶劑中的水溶液或懸浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。相關(guān)的可用載體或溶劑包括甘露醇、水、林格氏液、等滲氯化鈉等。另外，無菌的固定油常被作為溶劑或懸浮劑的媒介，因而包括合成甘油單酯或甘油二酯在內(nèi)的多種柔和的固定油(bland fixed oil)均適用。脂肪酸，如十八烯酸及其甘油酯衍生物(如橄欖油或蓖麻油，特別是其聚氧乙烯基衍生物)等可用于制備所述注射劑。所述油溶液或懸浮液還可包含一種長(zhǎng)鏈的乙醇稀釋劑或分散劑或羧甲基纖維素或類似的其他分散劑，此類物質(zhì)常用于制備可藥用乳劑和/或懸浮劑。其它一些制劑常用的表面活性劑如Tweens或Spans和/或其他類似的乳化劑或生物利用度促進(jìn)劑等也同樣可用于制備本制劑。
本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物可制成栓劑通過直腸給藥，方法是將蜈蚣藻多糖提取物與適宜的非刺激性賦形劑混合，后者在室溫下為固體而在直腸溫度下為液體，因而該栓劑可融解于直腸中并釋放出活性成份。此類賦形劑包括但不限于可可油、蜂蠟和聚乙烯。本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物的局部給藥制劑(如油膏)可直接用于患處。此類局部制劑含有活性成份及可藥用載體，后者包括但不限于礦物油、液體石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯或聚氧丙稀化合物、乳化臘或水。另外，本發(fā)明的藥物組合物還可制成洗劑或油劑。適用的載體包括但不限于礦物油、三梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鯨臘酯、十六烷醇、2-十八烷醇、苯甲基乙醇或水。本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物還可制成灌腸劑等用于直腸局部給藥。局部透皮貼劑亦在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物亦可經(jīng)鼻噴霧或者吸入給藥，即按本領(lǐng)域的常規(guī)方法，使用苯甲基乙醇或其他防腐劑、吸收促進(jìn)劑、碳氟化合物和/或其他增溶劑或分散劑制得鹽溶液。
本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物還可通過植入給藥。采用植入給藥方式可達(dá)到在給藥對(duì)象體內(nèi)持續(xù)，定時(shí)釋放本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物的效果。另外，植入給藥還能在局部組織和器官定位給藥(Negrin et al.，Biomaterials 22(6)563，2001)定時(shí)釋放技術(shù)亦可用于本發(fā)明蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物的給藥中，如基于聚合體技術(shù)的定時(shí)釋藥膠囊、緩釋技術(shù)和制劑包裹技術(shù)(如聚合體和脂質(zhì)體)等。
貼劑同樣包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。其包括基層(如聚合體、布、紗和繃帶)和本發(fā)明的藥物組合物。基層的一邊可設(shè)有一保護(hù)層以防止活性成份的流出。所述貼劑還可含有一用于固定的粘合劑，后者可以是一種自然的或者合成的物質(zhì)，當(dāng)其與給藥對(duì)象的皮膚接觸時(shí)可暫時(shí)粘附于皮膚上。粘合劑可以是防水的。
當(dāng)本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物和制劑可與一種或多種附加的治療藥物或預(yù)防藥物混合。附加藥劑可作為獨(dú)立的劑型與本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物、及其藥物組合物分別給藥。附加藥劑也可和本發(fā)明的蜈蚣藻多糖提取物及其藥物組合物一起以單一劑型給藥。
為了便于理解本發(fā)明，特列舉以下實(shí)施例。其作用應(yīng)被理解為是對(duì)本發(fā)明的詮釋而絕非對(duì)本發(fā)明的任何形式的限制。上文所列的各參考文獻(xiàn)均以全文引入本申請(qǐng)作為參考。
實(shí)施例1制備蜈蚣藻多糖提取物A(GLP)長(zhǎng)葉蜈蚣藻300g粉碎，然后加入90℃水6升提取1小時(shí)，期間加入冰醋酸控制提取液的pH值為6.2。離心得上清液5升，攪拌下加入95％乙醇15升，離心，棄去上清液。沉淀物溶于水3升，冷凍干燥得長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖30g(A提取物，GLP)。
實(shí)施例2制備蜈蚣藻多糖提取物B長(zhǎng)葉蜈蚣藻1.5kg粉碎，然后加入沸水50升提取2小時(shí)，期間加入冰醋酸控制提取液的pH值為6.8。離心得上清液濃縮至30升，攪拌下加入95％乙醇60升，離心，棄去上清液。沉淀物溶于水10升，冷凍干燥的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖160g(B提取物)。
實(shí)施例3制備蜈蚣藻多糖提取物C長(zhǎng)葉蜈蚣藻1.0kg粉碎，然后加入70℃水30升提取3小時(shí)，期間加入冰醋酸控制提取液的pH值為5.5。離心得上清液濃縮至15升，攪拌下加入95％乙醇15升，離心，棄去上清液。沉淀物溶于水10升，冷凍干燥的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖105g(C提取物)。
實(shí)施例4長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物A(GLP)體外/體外抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)GLP對(duì)小鼠白血病腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，在1mg/ml時(shí)抑制率為100％。GLP對(duì)人肺腺癌腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)同樣具有明顯的抑制作用，在1mg/ml時(shí)抑制率為95.3％。
實(shí)驗(yàn)小鼠移植S-180肉瘤后第二天按200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg靜脈給藥，連續(xù)7天，測(cè)定實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組平均瘤重，結(jié)果表明200mg/kg時(shí)GLP對(duì)小鼠移植性S-180肉瘤具有明顯的抑制作用(p＜0.01)(表1)。
表1 GLP對(duì)小鼠S-180肉瘤的抑制作用

實(shí)施例5 長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物A(GLP)對(duì)血管新生抑制實(shí)驗(yàn)(CAM)受精雞胚若干枚置于38℃、濕度為95％的孵化箱中孵化6天(氣室端向上)，靜置15分鐘后在靜置雞胚的上方劃一2×2cm大小的開窗位置，然后用剪刀磨切開窗，吹去蛋殼上磨切的粉塵，揭去開窗處的蛋殼。用虹膜刀切破殼膜，暴露出絨毛尿囊膜。將GLP 5ul加在經(jīng)高壓消毒的0.5×0.5cm大小的Whatman濾紙上，然后將濾紙放在尿囊膜血管較少部位，設(shè)置相應(yīng)的溶媒及不加藥對(duì)照。滅菌透明膠帶封窗后放入孵化箱中孵化兩天。揭開透明膠帶，用鑷子輕輕夾開Whatman濾紙。解剖顯微鏡下觀察血管新生情況，并攝像。隨著給藥濃度的增加，血管分支新生有明顯的減少趨勢(shì)(箭頭所示為新生小血管)，當(dāng)給藥濃度達(dá)到50μg/egg時(shí)，大血管右側(cè)加藥處同左側(cè)相比，血管新生數(shù)量有明顯減少，血管抑制能力為++，無血管新生區(qū)大于6mm(附圖1)。
實(shí)施例6長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物A(GLP)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成實(shí)驗(yàn)4℃預(yù)冷的Matrigel 60μL/孔加入96孔板，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱穩(wěn)定40分鐘待其凝固。HMEC用完全培養(yǎng)液稀釋并種入96孔板(5×108cells.L-1、5×104cells.well-1)，GLP用生理鹽水溶解，設(shè)5個(gè)濃度(5、2.5、1.25、0.625和0.313mg/ml)，每個(gè)濃度設(shè)兩個(gè)復(fù)孔，并設(shè)置相應(yīng)的不加藥空白對(duì)照。孵育8小時(shí)后在相差顯微鏡下拍照觀察管腔網(wǎng)絡(luò)形成狀況。結(jié)果表明GLP在1.25mg/ml時(shí)無形成管腔跡象(附圖2)。
實(shí)施例7長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物A(GLP)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)1％明膠處理的transwell經(jīng)無血清的MCDBl31培液于培養(yǎng)箱中平衡1小時(shí)后，上室加入100μl用serum-free MCDBl31稀釋的5×104/孔的HMEC及不同濃度的GLP，下室加入0.6ml serum-free的MCDBl31培液及20％FCS刺激遷移，同時(shí)設(shè)置相應(yīng)陰性及陽(yáng)性對(duì)照，置于CO2培養(yǎng)箱中作用8小時(shí)，然后棄去孔中培液，用90％酒精常溫固定30分鐘，0.1％結(jié)晶紫常溫染色10分鐘，清水漂凈，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞，顯微鏡(Olympus，DP50，Japan)。下觀察并拍照，最后用10％乙酸100μl/孔抽提10分鐘，于600nm處測(cè)定OD值。
抑制率計(jì)算公式為
抑制率(％)＝[(OD值給藥組-OD值無刺激陰性對(duì)照)/(OD值不加藥陽(yáng)性對(duì)照-OD值無刺激陰性對(duì)照)]×100％隨著GLP作用濃度的增大，遷入Transwell下室的細(xì)胞數(shù)呈減少趨勢(shì)。當(dāng)濃度達(dá)到2.5mg/ml時(shí)，抑制率達(dá)到60％，5mg/mlGLP抑制率為81.1％，同批實(shí)驗(yàn)10-5M Suramin抑制率為25.9％，放大倍率×100(附圖3)。
實(shí)施例8 血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)使用SRB法測(cè)定，即將HMEC或HUVEC細(xì)胞(1×108cells.L-1，1×104cells.well-1)置入96孔板培養(yǎng)24小時(shí)使之貼壁后加藥，GLP用生理鹽水溶解，設(shè)5個(gè)濃度(5，2.5，1.25，0.625和0.313mg/ml)，每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)復(fù)孔，并設(shè)相應(yīng)的調(diào)零孔及空白對(duì)照。藥物作用72小時(shí)后，倒掉培養(yǎng)液，加入100μ10％三氯醋酸(TCA)/孔于4℃固定1小時(shí)，倒掉固定液，用蒸餾水洗5次，自然干燥。再加入100μL 4mg/ml SRB(Sigma)/孔，室溫染色15分鐘，棄之，用1％冰醋酸(HAC)洗5次，自然干燥。最后加入150μL Tris base buffer(10mM)/孔，搖勻。酶標(biāo)儀(VERSAmax)540nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值。
抑制率(％)＝(OD值對(duì)照孔-OD值給藥孔)/OD值對(duì)照孔×100％根據(jù)各濃度抑制率，采用LOGIT法計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。以上每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，求出3次實(shí)驗(yàn)的平均IC50值作為抑制能力的最終指標(biāo)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算得GLP對(duì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞HMEC-1增殖的影響IC50平均值為0.86mg/ml(表2)。
表2 GLP對(duì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞HMEC-1增殖的影響

GLP對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC增殖的影響IC50平均值為0.63mg/ml(表3)。
表3 GLPA對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC增殖的影響


實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明GLP對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率存在較好的量效關(guān)系。
本發(fā)明所涉及的多個(gè)方面已做如上闡述。然而，應(yīng)理解的是，在不偏離本發(fā)明精神之前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可對(duì)其進(jìn)行等同變換和修飾。它們的范圍也包括在所附的權(quán)利要求中。
權(quán)利要求
1.一種長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物，含有如下重量比成份半乳糖67～87％、3，6-脫水半乳糖1～20％和6-甲基半乳糖1～7％。
2.權(quán)利要求1的提取物，它還含有木糖0.5～6.5％和葡萄糖0.5～6.5％。
3.權(quán)利要求1或2的提取物，它含有如下重量比成分半乳糖77.2％、3，6-脫水半乳糖10.5％、6-甲基半乳糖3.9％、木糖3.5％和葡萄糖3.5％。
4.權(quán)利要求3的提取物，其特征在于，它可由如下方法制得將長(zhǎng)葉蜈蚣藻粉碎后用熱水提取1～3小時(shí)，溫度控制在90～100℃，溶液pH控制在5～7之間，得一提取液；將所述提取液經(jīng)離心后留上清液，攪拌下加入1～3倍量的乙醇，再次離心留沉淀物；和將所述沉淀物溶于水后冷凍干燥得到蜈蚣藻多糖提取物。
5.權(quán)利要求4的提取物，其中所述溶液pH控制在6～7之間。
6.一種具有抗血管生成作用的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物，其特征在于，它可由如下方法制得將長(zhǎng)葉蜈蚣藻粉碎后用熱水提取1～3小時(shí)，溫度控制在90～100℃，溶液pH控制在5～7之間，得一提取液；將所述提取液經(jīng)離心后留上清液，攪拌下加入1～3倍量的乙醇，再次離心留沉淀物；和將所述沉淀物溶于水后冷凍干燥得到蜈蚣藻多糖提取物。
7.權(quán)利要求6的提取物，其中所述溶液pH控制在6～7之間。
8.權(quán)利要求6或7的提取物，其特征在于，所述提取物含有半乳糖、3，6-脫水半乳糖、6-甲基半乳糖、木糖和葡萄糖。
9.一種制備長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物的方法，包括如下步驟將長(zhǎng)葉蜈蚣藻粉碎后用熱水提取1～3小時(shí)，溫度控制在90～100℃，溶液pH控制在5～7之間，得一提取液；將所述提取液經(jīng)離心后留上清液，攪拌下加入1～3倍量的乙醇，再次離心留沉淀物；和將所述沉淀物溶于水后冷凍干燥得到蜈蚣藻多糖提取物。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述溶液pH控制在6～7之間。
11.權(quán)利要求1的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物在制備抗血管生成藥物中的用途。
12.權(quán)利要求1的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
13.權(quán)利要求12的用途，其中所述腫瘤為白血病、肺癌或S-180肉瘤。
14.權(quán)利要求6的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物在制備抗血管生成藥物中的用途。
15.權(quán)利要求6的長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
16.權(quán)利要求15的用途，其中所述腫瘤為白血病、肺癌或S-180肉瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種長(zhǎng)葉蜈蚣藻多糖提取物、其制備方法及其在制備抗血管生成和/或抗腫瘤藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1810842SQ20051002355
公開日2006年8月2日 申請(qǐng)日期2005年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月25日
發(fā)明者王順春, 王崢濤 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)