專利名稱：葡萄糖調(diào)節(jié)肽的鼻內(nèi)給藥的制作方法
葡萄糖調(diào)節(jié)肽是一組肽，表現(xiàn)在對(duì)胰島素依賴型糖尿病(IDDM)、妊娠型糖尿病或者非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)有潛在療效，對(duì)肥胖癥的治療和對(duì)脂肪代謝障礙癥的治療有潛在療效。參見(jiàn)美國(guó)專利No.6,506,724、美國(guó)專利申請(qǐng)出版No.20030036504A1、歐洲專利No.EP1083924B1、國(guó)際專利申請(qǐng)出版No.WO 98/30231A1和國(guó)際專利申請(qǐng)No.WO 00/73331A2。這些肽包括胰高血糖素樣肽、GLP例如GLP-1、促胰島素分泌肽、特別是促胰島素分泌肽-4，也稱腸促胰島素類似物(exenatide)、和糊精肽、以及糊精類似物如普蘭林肽。然而，到目前為止這些肽只是用注射的形式對(duì)人類給藥。
因此，有必要發(fā)展注射以外的肽給藥模式。


圖1熒光素鈉-腸促胰島素類似物制劑#1(帶有穿越粘膜賦形劑的制劑)和#2(鹽制劑)與PBS對(duì)照和Triton-X對(duì)照孵育1小時(shí)前后的TER的對(duì)比。
圖2顯示熒光素鈉-腸促胰島素類似物制劑#1(帶有穿越粘膜賦形劑的制劑)和#2(鹽制劑)與PBS對(duì)照和Triton-X對(duì)照的MTT數(shù)據(jù)的對(duì)比。
圖3顯示熒光素鈉-腸促胰島素類似物制劑#1(帶有穿越粘膜賦形劑的制劑)和#2(鹽制劑)與PBS對(duì)照和Triton-X對(duì)照的LDH數(shù)據(jù)的對(duì)比。
圖4顯示熒光素鈉-腸促胰島素類似物制劑#1(帶有穿越粘膜賦形劑的制劑)和#2(鹽制劑)與PBS對(duì)照和Triton-X對(duì)照的滲透數(shù)據(jù)的對(duì)比。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明完成前面所述的需要并滿足更多目標(biāo)和優(yōu)勢(shì)，為粘膜，特別是鼻內(nèi)的，提供了新的、有效的方法和組合物，遞送葡萄糖調(diào)節(jié)肽諸如糊精和糊精類似物、促胰島素分泌肽和促胰島素分泌肽類似物和胰高血糖素樣肽(GLP)及其類似物，來(lái)治療糖尿病、高血糖癥、脂代謝障礙癥、肥胖癥，誘發(fā)個(gè)體飽食感并促進(jìn)個(gè)體減去體重。在本發(fā)明的某些方面，葡萄糖調(diào)節(jié)肽以制劑形式遞送到鼻內(nèi)粘膜以致至少大約10％，優(yōu)選地15％，最優(yōu)選地20％或者更多的包含在劑量?jī)?nèi)的葡萄糖調(diào)節(jié)肽被遞送到全身循環(huán)或者用另一種說(shuō)法叫生物有效性。GRP的生物利用度是藥物靜脈注射后到達(dá)全身循環(huán)的劑量部分，此生物利用度是100％。優(yōu)選地葡萄糖調(diào)節(jié)肽是促胰島素分泌肽-4、普蘭林肽或者GLP-1的藥物上可接受的鹽，并且哺乳動(dòng)物是一個(gè)人。藥物上可接受的鹽包括無(wú)機(jī)酸鹽、有機(jī)胺鹽、有機(jī)酸鹽、堿土金屬鹽、以及它們的混合物。藥物上可接受的鹽的合適例子包括但不限制于，鹵化物、葡萄糖胺、烷基葡萄糖胺、硫酸鹽、氫氯化物、碳酸鹽、氫溴酸鹽、N，N’-二苯基乙烯基二胺、三乙醇胺、二乙醇胺、三甲基胺、三乙基胺、吡啶、甲基吡啶、二環(huán)己基胺、磷酸鹽、硫酸鹽、磺酸鹽、安息香酸鹽、醋酸鹽、水楊酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽(tartate)、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽、葡萄糖酸鹽、甲苯磺酸鹽、馬來(lái)酸鹽、延胡索酸鹽、硬脂酸鹽，以及它們的混合物。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，鼻內(nèi)葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑包括穿越粘膜賦形劑，在一個(gè)體外組織滲透試驗(yàn)，結(jié)果葡萄糖調(diào)節(jié)肽滲透與葡萄糖調(diào)節(jié)肽的鹽制劑相比提高了至少10倍，優(yōu)選的至少50倍，最優(yōu)選的100倍，此鹽制劑由水、葡萄糖調(diào)節(jié)肽、氯化鈉及緩沖液組成，兩組制劑有相同的pH和同滲容摩，并且兩組制劑在相同體外組織滲透試驗(yàn)條件下測(cè)試。體外組織滲透試驗(yàn)的合適的例子是“運(yùn)用擴(kuò)散增強(qiáng)劑，熒光素鈉-標(biāo)記的腸促胰島素類似物穿越細(xì)胞屏障的滲透性增加”，描述于實(shí)施例12。
本發(fā)明也是指葡萄糖調(diào)節(jié)肽的鼻內(nèi)制劑，大致沒(méi)有穩(wěn)定制劑的蛋白質(zhì)或者多肽。特別地，優(yōu)選的制劑沒(méi)有例如白蛋白、膠原衍生蛋白例如白明膠這些蛋白質(zhì)。
本發(fā)明的另一些方面，穿越粘膜的葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水和pH2-8的增溶劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，增溶劑是環(huán)糊精。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式，穿越粘膜的葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑由葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水，和優(yōu)選是環(huán)糊精的增溶劑，以及至少一種多元醇，優(yōu)選地2種多元醇組成。可選擇的實(shí)施方式，制劑可以包括一個(gè)或者多個(gè)下列組分螯合劑、表面活性劑和緩沖劑。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式，制劑由葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水、螯合劑和增溶劑組成。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式，制劑由葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水和pH2-8的螯合劑組成。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式，制劑由葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水、螯合劑和至少一種多元醇，例如甘露醇、乳糖、山梨糖醇，優(yōu)選地2種多元醇組成。另外的實(shí)施方式可能包括一個(gè)或更多的以下組分表面活性劑、增溶劑和緩沖劑。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式，制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水和至少兩種多元醇，例如乳糖和山梨糖醇。另外的試劑可以加入制劑，這些試劑包括但不限于增溶劑、螯合劑、一種或多種緩沖劑和表面活性劑。
葡萄糖調(diào)節(jié)肽拮抗劑鼻內(nèi)遞送的提高，依據(jù)本發(fā)明的方法和組合物，提供了這些藥劑對(duì)不同疾病，例如哺乳動(dòng)物受試者的糖尿病和肥胖癥，有效的藥物使用。
本發(fā)明通過(guò)提供水化或脫水的葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑完成了這樣的需要，在此制劑中大致不含為多肽或蛋白質(zhì)的穩(wěn)定劑。液態(tài)葡萄糖調(diào)節(jié)肽(GRP)制劑包括水、GRP和至少一種以下添加劑組分多元醇、表面活性劑、增溶劑和螯合劑。制劑的pH值優(yōu)選地2到大約8.0，優(yōu)選地4.0到大約6.0，最優(yōu)選地大約4.5±0.5。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是本發(fā)明的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，包括水、葡萄糖調(diào)節(jié)肽、多元醇和表面活性劑，在此制劑的pH為大約2到大約8，此制劑中基本不含蛋白質(zhì)或多肽那樣的穩(wěn)定劑。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是本發(fā)明的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，包括水、葡萄糖調(diào)節(jié)肽、多元醇和增溶劑，在此制劑的pH為大約2.0到大約8，此制劑中基本不含蛋白質(zhì)或多肽那樣的穩(wěn)定劑。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是本發(fā)明的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，包括水、葡萄糖調(diào)節(jié)肽、增溶劑和表面活性劑，在此制劑的pH為大約2.0到大約8，此制劑中基本不含蛋白質(zhì)或多肽那樣的穩(wěn)定劑。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是本發(fā)明的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，包括水、葡萄糖調(diào)節(jié)肽、增溶劑，多元醇和表面活性劑，在此制劑的pH為大約2.0到大約8，此制劑中基本不含蛋白質(zhì)或多肽那樣的穩(wěn)定劑。
在本發(fā)明的另一方面，穩(wěn)定水性制劑是脫水的，以產(chǎn)生脫水的葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽和至少一種以下的添加劑多元醇、表面活性劑、增溶劑和螯合劑，在此所述的脫水的葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑基本不含蛋白質(zhì)或多肽例如白蛋白，膠原或膠原-衍生蛋白例如白明膠這些穩(wěn)定劑。脫水可用多種方法完成，例如凍干法、噴霧-干燥法、鹽-誘導(dǎo)沉淀和干燥法、真空干燥法、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法、或超臨界點(diǎn)CO2沉淀法。
在一個(gè)實(shí)施方式，脫水的葡萄糖調(diào)節(jié)肽包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、多元醇和增溶劑，此制劑中基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
在另一個(gè)實(shí)施方式，脫水的葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、多元醇和表面活性劑，此葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑中基本不含蛋白質(zhì)或多肽那樣的穩(wěn)定劑。
在另一個(gè)實(shí)施方式，脫水的葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、表面活性劑和增溶劑，此葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑中基本不含蛋白質(zhì)或多肽那樣的穩(wěn)定劑。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式，脫水的葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、多元醇、表面活性劑和增溶劑，此葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑中基本不含蛋白質(zhì)或多肽那樣的穩(wěn)定劑。
任何增溶劑都可使用，但一個(gè)優(yōu)選的是從此組中選，此組包括羥基丙基-β-環(huán)糊精、磺基丁醚-β-環(huán)糊精、甲基-β-環(huán)糊精和聚氨基葡萄糖。
一般多元醇選自乳糖、山梨醇、海藻糖、蔗糖、甘露醇、甘露糖和麥芽糖、及其衍生物和同系物組成的組。
一種優(yōu)選的表面活性劑選自L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)、聚山梨酸酯20(吐溫20)、聚山梨酸酯80(吐溫80)、聚乙烯乙二醇(PEG)、十六烷醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、羊毛脂醇、失水山梨醇單油酸酯組成的組。
在一種優(yōu)選的制劑，葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑還包括螯合劑例如乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。防腐劑例如氯丁醇或苯扎氯銨(benzylkonium chloride)可以加入制劑來(lái)抑制微生物的生長(zhǎng)。
pH值通常由pH控制劑調(diào)節(jié)，例如一種緩沖體系例如檸檬酸鈉和檸檬酸，或者酒石酸鈉和酒石酸或者，磷酸二氫鈉和磷酸氫鈉，或者醋酸鈉和醋酸或者琥珀酸和氫氧化鈉。
本發(fā)明還包括一種制劑，此制劑的葡萄糖調(diào)節(jié)肽的濃度為0.1-15.0mg/mL，優(yōu)選地1.0-5.0mg/mL，水性溶液的pH為2-8，優(yōu)選地為約4.5±0.5。
本發(fā)明還包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，此制劑中多元醇的濃度在大約0.1％和10％(w/v)之間，附加地此多元醇的濃度在大約0.1％和約3％(w/v)之間。
本發(fā)明還包括含表面活性劑的制劑，此制劑中表面活性劑的濃度在大約0.00001％和大約5％(w/v)之間，優(yōu)選地在大約0.0002％和大約0.1％(w/v)之間。
本發(fā)明還包括含增溶劑的制劑，此制劑中增溶劑的濃度在1％-10％(w/v)之間，優(yōu)選地在1％-5％(w/v)之間。
終溶液可以被過(guò)濾和凍干，低壓凍干，用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法，按凍干設(shè)備制造商的說(shuō)明做。這樣產(chǎn)生無(wú)蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑的脫水葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，本發(fā)明的葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑進(jìn)一步包括至少一種賦形劑，選自下列一組物質(zhì)表面活性劑、增溶劑、多元醇和螯合劑。優(yōu)選地葡萄糖調(diào)節(jié)肽是糊精肽、GLP-1或促胰島素分泌肽。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式，提供了葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其可以提高哺乳動(dòng)物血漿中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的量每mL血漿至少10、20、40、60、80或更多的pmol，當(dāng)100μl或更少的制劑單次鼻內(nèi)給藥于所述哺乳動(dòng)物時(shí)。
在代表性的實(shí)施方式，本發(fā)明增強(qiáng)的遞送方法和組合物提供葡萄糖調(diào)節(jié)肽拮抗劑治療的有效粘膜遞送，以預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物受試者的肥胖癥和飲食失常。在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了適于鼻內(nèi)給藥的藥物制劑，這種制劑包括治療上有效劑量的葡萄糖調(diào)節(jié)肽以及所述一種或多種鼻內(nèi)遞送增強(qiáng)劑，在本發(fā)明的鼻粘膜遞送方法中此制劑是有效的，以預(yù)防哺乳動(dòng)物受試者的肥胖癥和飲食失常的發(fā)生和進(jìn)展。鼻粘膜遞送治療上有效劑量的葡萄糖調(diào)節(jié)肽拮抗劑以及一種或多種鼻內(nèi)遞送增強(qiáng)劑產(chǎn)生提高的葡萄糖調(diào)節(jié)肽拮抗劑受試者治療水平。
本發(fā)明增強(qiáng)的遞送方法和組合物提供了葡萄糖調(diào)節(jié)肽治療的有效粘膜遞送，以預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的多種疾病和情況。葡萄糖調(diào)節(jié)肽能通過(guò)多種粘膜途徑給藥，例如通過(guò)將葡萄糖調(diào)節(jié)肽和鼻粘膜上皮、支氣管的或肺的粘膜上皮，口腔表面或口腔和小腸粘膜表面接觸。在代表性的實(shí)施方式，本方法和組合物是直接對(duì)于鼻內(nèi)遞送或被制備用于鼻內(nèi)遞送(例如鼻粘膜遞送或鼻內(nèi)粘膜遞送)。
上述本發(fā)明粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑和制備和遞送方法提供了改進(jìn)的葡萄糖調(diào)節(jié)肽在哺乳動(dòng)物的粘膜遞送。這些組合物和方法包括聯(lián)合制劑或協(xié)同給藥一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽和一種或多種粘膜遞送增強(qiáng)劑。完成這些制劑和方法的粘膜遞送增強(qiáng)劑選自(A)增溶劑；(B)電荷調(diào)節(jié)劑；(C)pH控制劑；(D)降解酶抑制劑；(E)粘液溶解或粘液清除劑；(F)纖毛穩(wěn)定劑；(G)膜穿透增強(qiáng)劑(例如(i)表面活性劑，(ii)膽鹽，(iii)磷脂或脂肪酸添加劑、混合的膠束、脂質(zhì)體、或載體，(iv)醇，(v)烯胺，(iv)NO供體化合物，(vii)長(zhǎng)鏈兩性分子，(viii)小的疏水滲透增強(qiáng)劑，(ix)水楊酸鈉或水楊酸的衍生物，(x)乙酰乙酸的甘油酯，(xi)環(huán)糊精或β-環(huán)糊精的衍生物，(xii)中鏈脂肪酸，(xiii)螯合劑，(xiv)氨基酸或其鹽，(xv)N-乙酰氨基酸或其鹽，(xvi)降解為選擇的膜組分的酶，(xvii)脂肪酸合成的抑制劑，(xviii)膽固醇合成的抑制劑，或(xiv)任何(i)-(xviii)的膜穿透增強(qiáng)劑的組合)；(H)上皮連接生理調(diào)節(jié)劑，例如一氧化氮(NO)刺激因子、聚氨基葡萄糖、及聚氨基葡萄糖的衍生物；(I)血管擴(kuò)張劑；(J)選擇性的輸導(dǎo)增強(qiáng)劑；和(K)能有效組合、聯(lián)合、包含、膠囊化或結(jié)合葡萄糖調(diào)節(jié)肽以穩(wěn)定增強(qiáng)粘膜遞送的活性劑的穩(wěn)定遞送運(yùn)輸體、載體、支持或形成復(fù)合體的物質(zhì)。
在本發(fā)明的各種實(shí)施方式，葡萄糖調(diào)節(jié)肽與一種、兩種、三種、四種或更多的在(A)-(K)所述的粘膜遞送增強(qiáng)劑組合。這些粘膜遞送增強(qiáng)劑可和葡萄糖調(diào)節(jié)肽混合、單獨(dú)或一起，或與藥物上可接受的制劑或運(yùn)輸體結(jié)合。葡萄糖調(diào)節(jié)肽與一種或多種依據(jù)這里的教導(dǎo)的粘膜遞送增強(qiáng)劑(可選擇的包括任何兩種或多種選自上述(A)-(K)的粘膜遞送-增強(qiáng)劑組合)的制劑提供了葡萄糖調(diào)節(jié)肽在哺乳動(dòng)物受試者的粘膜表面遞送后的增加的生物利用度。
因此，本發(fā)明是在哺乳動(dòng)物中抑制食欲、促進(jìn)減輕體重、減少食物攝入、或治療肥胖和/或糖尿病的一種方法，包括粘膜穿透給藥一種制劑，此制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽。
本發(fā)明進(jìn)一步提供葡萄糖調(diào)節(jié)肽的用途，為生產(chǎn)針對(duì)粘膜穿透給藥的葡萄糖調(diào)節(jié)肽的藥劑，以治療哺乳動(dòng)物的高血糖癥、糖尿病、脂肪代謝障礙，抑制食欲，促進(jìn)體重減少，減少食物攝入，或治療肥胖。
在本發(fā)明的藥物制劑中，葡萄糖調(diào)節(jié)肽的一種粘膜有效劑量包括，例如，在大約0.001pmol和大約100pmol每kg體重之間，在大約0.01pmol和大約10pmol每kg體重之間，或在大約0.1pmol和大約5pmol每kg體重之間。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，糊精的劑量在大約0.5pmol和大約1.0pmol每kg體重之間。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，一個(gè)鼻內(nèi)的劑量為0.1-100μg/kg，或大約7-7000μg，更優(yōu)選的0.5-10μg/kg，或35到700μg。更特殊的鼻內(nèi)GRP劑量范圍從20μg、50μg、100μg、150μg、200μg到400μg。本發(fā)明的藥物制劑可以每天給藥一次或多次，或每周3次或一周一次持續(xù)一周到至少96周或甚至病人或受試者的一生。在特定的實(shí)施方式，本發(fā)明藥物制劑可以給藥每天一次或多次，每天兩次，每天四次，每天六次，或每天八次。
鼻內(nèi)遞送增強(qiáng)劑用于增強(qiáng)糊精進(jìn)入或穿過(guò)鼻粘膜的表面的遞送。對(duì)于被動(dòng)吸收藥物，藥物運(yùn)輸?shù)呐约?xì)胞和穿越細(xì)胞路徑的相對(duì)比例依賴于pKa、分配系數(shù)、分子半徑和藥物的電荷、藥物遞送的腔環(huán)境的pH和吸收表面面積。本發(fā)明的鼻內(nèi)遞送增強(qiáng)劑可以是pH控制劑。本發(fā)明的藥物制劑pH是影響糊精由藥物運(yùn)輸?shù)呐约?xì)胞和穿越細(xì)胞路徑吸收的因素。在一個(gè)實(shí)施方式，本發(fā)明的藥物制劑的pH被調(diào)在大約pH2-8。在進(jìn)一步的實(shí)施方式，本發(fā)明的藥物制劑的pH被調(diào)在大約pH3.0-6.0。在進(jìn)一步的實(shí)施方式，本發(fā)明的藥物制劑的pH被調(diào)在大約pH4.0-6.0。一般地，pH4.5±0.5。
如上所述，本發(fā)明提供了葡萄糖調(diào)節(jié)肽對(duì)哺乳動(dòng)物受試者粘膜遞送改進(jìn)的方法和組合物，以治療或預(yù)防各種疾病和情況。依據(jù)本發(fā)明的方法，哺乳動(dòng)物受試者治療和預(yù)防的合適的例子包括，但不限于人類、非人類靈長(zhǎng)類的動(dòng)物、家禽類，例如馬、牛、綿羊和山羊，和研究與馴養(yǎng)的物種，包括狗、貓、小鼠、大鼠、豚鼠和兔子。
為了有助于更好地理解本發(fā)明，提供如下限定促胰島素分泌肽和促胰島素分泌肽拮抗劑促胰島素分泌肽是多肽，首次從大毒蜥(Gila-monster)，即亞利桑那州發(fā)現(xiàn)的一種蜥蜴，和墨西哥珠蜥(Mexican Beaded Lizard)的唾液分泌物中分離。促胰島素分泌肽-3存在于珠狀毒蜥(Heloderma horridum)的唾液分泌物中，而促胰島素分泌肽-4存在于鈍尾毒蜥(Helodermasuspectum)的唾液分泌物中[Eng，J.等人，J.Biol.Chem.，26520259-62(1990)；Eng.，J.等人，J.Biol.Chem.，2677402-05(1992)]。促胰島素分泌肽有一些序列與胰高血糖素樣肽家族的若干成員相似，有最高同源性53％的成員為GLP-1[7-36]NH.2[Goke等人，J.Biol.Chem.，26819650-55，(1993)]。GLP-1[7-36]NH2，也稱胰高血糖素原(proglucagon)[78-107]，最通常稱為″GLP-1，″有一種促胰島素(insulinotropic)效應(yīng)，刺激胰島素分泌；GLP-1也抑制胰高血糖素的分泌[Orskov等人，Diabetes，42658-61(1993)；D′Alessio等人，J.Clin.Invest.，97133-38(1996)]。GLP-1報(bào)道為抑制胃排空[Williams B等人，J Clin Encocrinol Metab 81(1)327-32(1996)；Wettergren A等人，Dig Dis Sci 38(4)665-73(1993)]，和胃酸分泌[Schjoldager BT等人，Dig Dis Sci 34(5)703-8，(1989)；O′Halloran D J等人，J Endocrinol 126(1)169-73(1990)；Wettergren A等人，Dig Dis Sci 38(4)665-73(1993)]。GLP-1[7-37]，在其羧基末端多了一個(gè)氨基乙酸殘基，在人類GLP-1也刺激胰島素分泌[Orskov等人，Diabetes，42658-61(1993)]。一個(gè)穿膜G-蛋白腺苷酸環(huán)化酶偶聯(lián)(adenylate-cyclase-coupled)受體被認(rèn)為負(fù)責(zé)GLP-1促胰島素的效應(yīng)，此受體被報(bào)道是從一種β-細(xì)胞系克隆來(lái)的[Thorens，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 898641-45(1992)]。
本發(fā)明是指治療妊娠型糖尿病的新方法，包括鼻內(nèi)給藥促胰島素分泌肽，例如促胰島素分泌肽-3His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu GluAla Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly AlaPro Pro Pro Ser(SEQ ID NO1)，或腸促胰島素類似物(促胰島素分泌肽-4)His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu GluAla Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly AlaPro Pro Pro Ser其中C-末端的絲氨酸是酰胺化的(SEQ ID NO2)，或其它有效地與受體結(jié)合的化合物，在此結(jié)合處促胰島素分泌肽發(fā)揮其有利于治療妊娠型糖尿病的作用。為治療糖尿病和預(yù)防高血糖癥，促胰島素分泌肽-3和促胰島素分泌肽-4作為胰島素促進(jìn)劑的用途已公布于美國(guó)專利No.5,424,286。促胰島素分泌肽在調(diào)節(jié)甘油三酸酯水平和治療脂代謝障礙癥中也顯示有作用。
胰高血糖素樣肽(GLP)GLP-1氨基酸序列是由Schmidt等人給出的(Diabetologia 28 704-707(1985)。人GLP-1是一種37氨基酸殘基肽，源于胰高血糖素原前體(preproglucagon)，其合成于回腸末梢的L-細(xì)胞、胰腺和大腦。胰高血糖素原前體修飾成GLP-1(7-36)酰胺、GLP-1(7-37)和GLP-2主要發(fā)生在L-細(xì)胞。盡管GLP-1(7-37)及其類似物有趣的藥理學(xué)的性能近些年吸引了很多注意，對(duì)這些分子的結(jié)構(gòu)卻知道的很少。GLP-1在膠束中的二級(jí)結(jié)構(gòu)Thorton等人已有描述(Biochemistry 33 3532-3539(1994))，但在標(biāo)準(zhǔn)溶液中，GLP-1被認(rèn)為是非常柔性的分子。
GLP-1和GLP-1的類似物以及它們的片段對(duì)治療1型和2型糖尿病以及肥胖癥是有用的。
WO87/06941公開(kāi)GLP-1片段，包括GLP-1(7-37)，及其功能性衍生物，和它們作為胰島素促進(jìn)劑的用法。
WO90/11296公開(kāi)GLP-1片段，包括GLP-1(7-36)，及其功能性衍生物，此衍生物有促胰島素活性，其活性超過(guò)GLP-1(1-36)或GLP-1(1-37)的促胰島素活性，以及它們作為胰島素促進(jìn)劑的用法。
GLP-1(7-36)的氨基酸序列為His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg(序列ID NO3)GLP-1(7-37)為His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly(序列ID NO4)WO 91/11457公開(kāi)GLP-1肽活性類似物7-34、7-35、7-36和7-37，它們作為GLP-1的部分是有用的。
EP 0708179-A2(Eli Lilly & Co.)公開(kāi)GLP-1的類似物和衍生物，它們包括一個(gè)N-末端咪唑基團(tuán)和連接于34位上的賴氨酸殘基的選擇性的一個(gè)無(wú)支鏈的C6-C10?；鶊F(tuán)。
EP 0699686-A2(Eli Lilly & Co.)公開(kāi)GLP-1的某個(gè)N-末端被截短的片段，此片段被報(bào)道是有生物活性的。
糊精肽KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY(序列ID NO5)糊精的拮抗劑包括Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala lle Leu Ser Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO6)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuIle Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO7)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal Arg Thr Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO8)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO9)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu
Val His Ser Asn Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Ser Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO10)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Leu Pro Thr Asp ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO11)；Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu ValHis Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala lle Leu Ser Ser Thr Asn Val GlySer Asn Thr Tyr(序列ID NO12)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Pro Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO13)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn ValGlySerAsnThrTyr(序列IDNO14)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn ValGlySerAsnThrTyr(序列ID NO15)；Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu ValHisArg Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val
Gly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO16)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO17)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro lle Leu Pro Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO18)；Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu ValArg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Ser Asn Val GlySer Asn Thr Tyr(序列ID NO19)；Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu ValHis Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro lle Leu Pro Pro Ser Asn Val GlySer Asn Thr Tyr(序列ID NO20)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO21)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO22)；
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu ValHis Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val GlySer Asn Thr Tyr(序列ID NO23)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO24)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO25)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO26)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuIle His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro lle Leu Pro Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO27)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal Ile Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO28)；
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu IleHis Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val GlySer Asn Thr Tyr(序列ID NO29)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuIle Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO30)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuIle Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Val Leu Ser Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO31)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuIle Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO32)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe LeuVal His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Leu Pro Thr Asp ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO33)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe LeuVal His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Ser Pro Thr Asp ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO34)；Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu Val
His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Val Leu Pro Ser Thr Asp Val GlySer Asn Thr Tyr(序列ID NO35)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Ser Pro Thr Asp ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO36)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ile Leu Pro Pro Thr Asp ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO37)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe LeuVal Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Pro Ala Leu Pro Pro Thr Asp ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO38)；Lys Asp Asn Thr Ala Thr Lys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO39)；Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO40)；Ser Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val
Gly Ser Asn Thr Tyr(序列IDNO41)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala lle Leu Ser Pro Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO42)；Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO43)；Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu ValHis Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val GlySer Asn Thr Tyr(序列ID NO44)；Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu ValHis Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Val Leu Pro Pro Ser Asn Val GlySer Asn Thr Tyr(序列ID NO45)Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn ValGly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO46)；和Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe LeuVal His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Thr AsnVal Gly Ser Asn Thr Tyr(序列ID NO47)，
其中序列ID NO47 C-末端的酪氨酸是酰胺化的。酰胺化的序列IDNO47也稱為醋酸普蘭林肽。醋酸普蘭林肽在2位和7位的半胱氨酸間也有一個(gè)二硫鍵。
根據(jù)本發(fā)明，葡萄糖調(diào)節(jié)肽還包括游離堿、酸加成鹽或金屬鹽，例如肽的鉀或鈉鹽，已被修飾的糊精肽，修飾過(guò)程例如酰胺化、糖基化、酰化、硫酸化、磷酸化、乙酰化、環(huán)化以及其它已知的共價(jià)修飾方法。
因此，根據(jù)本發(fā)明，以上所述肽合并入適于穿越粘膜遞送的制劑，特別是鼻內(nèi)遞送。
粘膜遞送增強(qiáng)劑“粘膜遞送增強(qiáng)劑”是指化學(xué)品及其它賦形劑，當(dāng)加入一種制劑，此制劑包括水、鹽和/或通用緩沖液和葡萄糖調(diào)節(jié)肽(對(duì)照制劑)，產(chǎn)生一種制劑，此制劑產(chǎn)生葡萄糖調(diào)節(jié)肽穿越粘膜的運(yùn)輸?shù)娘@著的增長(zhǎng)，此是由測(cè)量最大量血、血清、或腦脊髓液濃度(Cmax)或在一個(gè)濃度對(duì)時(shí)間的圖中曲線下的面積AUC而得到。粘膜包括鼻的、口腔的、腸的、面頰的、支氣管肺的、陰道的、直腸的粘膜表面，而且實(shí)際包括襯于所有體腔和連接外部的通道的所有粘液分泌膜。粘膜遞送增強(qiáng)劑有時(shí)稱作載體。
無(wú)內(nèi)毒素制劑“無(wú)內(nèi)毒素制劑”是指一種制劑，此制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽和一種或多種粘膜遞送增強(qiáng)劑，此制劑基本不含內(nèi)毒素和/或相關(guān)的引起發(fā)熱的物質(zhì)。內(nèi)毒素包括這樣的毒素，這些毒素限制在一種微生物內(nèi)，僅當(dāng)此微生物崩潰或死亡時(shí)內(nèi)毒素被釋放。引起發(fā)熱的物質(zhì)包括引起發(fā)燒的熱穩(wěn)定的物質(zhì)(糖蛋白)，這些物質(zhì)來(lái)自細(xì)菌和其它微生物的外膜。如果進(jìn)入人體，這兩種物質(zhì)能引起發(fā)燒、低血壓和休克。制備一種無(wú)內(nèi)毒素的制劑需要特別的設(shè)備、特殊技術(shù)人員，與不是無(wú)內(nèi)毒素制劑的制備相比有明顯高出的費(fèi)用。因?yàn)殪o脈給藥GLP或糊精的同時(shí)輸入內(nèi)毒素給嚙齒動(dòng)物顯示出防止低血壓甚至是與內(nèi)毒素單獨(dú)給藥相聯(lián)系的死亡(美國(guó)專利4,839,343)，制備這些治療劑的無(wú)內(nèi)毒素的制劑預(yù)期對(duì)非親本(非注射)給藥是不必要的。
非輸入給藥“非輸入給藥”指不包括直接進(jìn)入動(dòng)脈或靜脈的注射的任何方法的遞送，后者指用力或驅(qū)使(典型地為一種液體)進(jìn)入某物并且特別指引入一個(gè)肢體部位，通過(guò)針頭、注射器或其它侵入方法。非輸入給藥包括皮下注射、肌肉注射、腔內(nèi)注射(intraparitoneal injection)和非注射方法的粘膜遞送。
遞送的方法和組合物改進(jìn)的葡萄糖調(diào)節(jié)肽對(duì)哺乳動(dòng)物受試者粘膜給藥的方法和組合物優(yōu)化了葡萄糖調(diào)節(jié)肽給藥方案。本發(fā)明提供配制有一種或多種粘膜遞送增強(qiáng)劑的葡萄糖調(diào)節(jié)肽的粘膜遞送，其中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的劑量釋放基本標(biāo)準(zhǔn)化和/或持續(xù)在一個(gè)葡萄糖調(diào)節(jié)肽有效遞送階段釋放劑量，此階段從粘膜給藥后大約0.1到2.0小時(shí)；0.4到1.5小時(shí)；0.7到1.5小時(shí)；或0.8到1.0小時(shí)。重復(fù)運(yùn)用本發(fā)明的方法和組合物給藥外源葡萄糖調(diào)節(jié)肽可能有利于葡萄糖調(diào)節(jié)肽的持續(xù)釋放的完成。
持續(xù)釋放的組合物和方法改進(jìn)的葡萄糖調(diào)節(jié)肽對(duì)哺乳動(dòng)物受試者粘膜給藥的方法和組合物優(yōu)化了葡萄糖調(diào)節(jié)肽給藥方案。本發(fā)明提供一種制劑的改進(jìn)的粘膜(例如，鼻的)遞送，此制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽，并混合一起的有一種或多種粘膜遞送增強(qiáng)劑以及一種可選擇的持續(xù)釋放增強(qiáng)劑或試劑。本發(fā)明的粘膜遞送增強(qiáng)劑產(chǎn)生遞送中的有效增加，例如，最大血漿濃度(Cmax)的增加以增加粘膜給藥的葡萄糖調(diào)節(jié)肽的治療活性。影響血漿和CNS中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的治療活性的第二個(gè)因子為滯留時(shí)間(RT)。持續(xù)釋放增強(qiáng)劑，與鼻內(nèi)遞送增強(qiáng)劑結(jié)合，增加葡萄糖調(diào)節(jié)肽的Cmax以及增加其滯留時(shí)間(RT)。本發(fā)明那些產(chǎn)生持續(xù)釋放增強(qiáng)劑制劑，例如聚乙二醇(PEG)，的多聚體遞送工具及其它試劑和方法公布于此。本發(fā)明為治療關(guān)于哺乳動(dòng)物受試者的肥胖癥、結(jié)腸癌、促胰島素分泌肽癌(exendin cancer)、或乳腺癌相關(guān)的癥狀提供一種改進(jìn)的葡萄糖調(diào)節(jié)肽遞送方法和劑型。
在本發(fā)明的膜遞送制劑和方法中，葡萄糖調(diào)節(jié)肽經(jīng)常與用于粘膜遞送的合適的載體或運(yùn)輸工具結(jié)合或協(xié)同給藥。如在此所用，術(shù)語(yǔ)“載體”指藥物上可接受的固體或液體填充物、稀釋劑或膠囊物質(zhì)。一種含水液體載體可以包括藥物上可接受的添加劑，例如酸化劑、堿化劑、抗微生物防腐劑、抗氧化劑、緩沖劑、螯合劑、絡(luò)合劑、增溶劑、保濕劑、溶劑、懸浮和/或粘度增加劑、張度劑、濕潤(rùn)劑、或其它生物相容物質(zhì)。以上種類成分的一個(gè)列表見(jiàn)于U.S.Pharmacopeia National Formulary，1857-1859，(1990)。一些能作為藥物上可接受載體材料的例子為糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉如玉米淀粉、土豆淀粉；纖維素及其衍生物如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；西黃蓍膠粉；麥芽；白明膠；滑石粉；賦形劑如可可脂和栓劑蠟；油如花生油、棉子油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；乙二醇類如丙二醇；多元醇如丙三醇、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；酯如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無(wú)熱原的水；等滲鹽；Ringer′s溶液、乙醇和磷酸緩沖液，以及其它用于藥物制劑的無(wú)毒可相容的物質(zhì)。濕潤(rùn)劑、乳化劑和潤(rùn)滑劑如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂以及染料、分離劑、涂層劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑依據(jù)所要制劑也可加入所述組合物。藥物上可接受的抗氧化劑的例子包括水溶性抗氧化劑例如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、及其類似物；脂溶性抗氧化劑例如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁羥基茴香醚(BHA)、二叔丁基對(duì)甲酚(BHT)、卵磷脂、沒(méi)食子酸丙酯、α-生育酚及其類似物；及金屬螯合劑例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸及其類似物。能結(jié)合載體物質(zhì)產(chǎn)生一單個(gè)劑型的活性組分的量將依據(jù)特定給藥模式變化。
本發(fā)明粘膜遞送組合物和方法中，多種遞送增強(qiáng)劑被運(yùn)用，以此促進(jìn)葡萄糖調(diào)節(jié)肽遞送進(jìn)入或穿過(guò)粘膜表面。在這點(diǎn)上，葡萄糖調(diào)節(jié)肽遞送穿過(guò)上皮粘膜可發(fā)生“跨越細(xì)胞地”或“細(xì)胞旁地”。這些路徑對(duì)葡萄糖調(diào)節(jié)肽的整個(gè)流量和生物有效性的貢獻(xiàn)程度依賴于粘膜的環(huán)境、活性劑的物理化學(xué)性能、以及粘膜上皮的性能。細(xì)胞旁的傳輸只包括被動(dòng)擴(kuò)散，然而細(xì)胞旁的傳輸可被動(dòng)、被協(xié)助或主動(dòng)地發(fā)生。一般地，親水的、被動(dòng)運(yùn)輸?shù)臉O性溶質(zhì)通過(guò)細(xì)胞旁路徑擴(kuò)散，而親脂的溶質(zhì)利用穿越細(xì)胞的路徑。吸收和生物有效性(例如，如滲透系數(shù)或生理學(xué)的分析反映的)，對(duì)不同的、被動(dòng)地和主動(dòng)地吸收的溶質(zhì)，可容易地對(duì)任意選擇的本發(fā)明中葡萄糖調(diào)節(jié)肽，用細(xì)胞旁的或穿越細(xì)胞的組分的方式估計(jì)。對(duì)被動(dòng)吸收的藥物，細(xì)胞旁的和穿越細(xì)胞的路徑對(duì)藥物運(yùn)輸?shù)南鄬?duì)貢獻(xiàn)依賴于pKa、分配系數(shù)、分子半徑和藥物的電荷、藥物所遞送的腔環(huán)境的pH、及吸收表面的面積。細(xì)胞旁的路徑代表鼻粘膜上皮可及表面積的相對(duì)小部分。一般而言，有報(bào)道細(xì)胞膜占據(jù)的粘膜表面面積是幾千倍于細(xì)胞旁的空間所占據(jù)的面積。因此尺寸上和電荷上不利于大分子滲透的較小的可及表面積提示與穿越細(xì)胞的藥物運(yùn)輸遞送相比，細(xì)胞旁路徑會(huì)是一般不利的路徑。令人驚訝的，本發(fā)明的方法和組合物提供了顯著增加通過(guò)細(xì)胞旁路徑進(jìn)入和穿越粘膜上皮的生物治療物的運(yùn)輸。因此，本發(fā)明的方法和組合物成功靶向細(xì)胞旁的和穿越細(xì)胞的路徑，可選擇地或在一個(gè)單一方法或組合物中。
如在此所用“粘膜遞送增強(qiáng)劑”包括這樣的試劑，此試劑提高葡萄糖調(diào)節(jié)肽或其它生物活性復(fù)合物的釋放性或可溶性(例如，從一種制劑遞送運(yùn)輸工具)、擴(kuò)散速率、滲透能力和延時(shí)、攝取、滯留時(shí)間、穩(wěn)定性、有效半衰期、峰值或持續(xù)的濃度水平、清除率及其它期望的粘膜遞送特征(例如，在遞送點(diǎn)或在選擇的活性的靶向點(diǎn)如血流或中樞神經(jīng)系統(tǒng)測(cè)量的粘膜遞送特征)。粘膜遞送的增加因此可發(fā)生于多種機(jī)制，例如由增加葡萄糖調(diào)節(jié)肽的擴(kuò)散、運(yùn)輸、持續(xù)性或穩(wěn)定性，增加膜流動(dòng)性，調(diào)整那些調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞旁的滲透的鈣和其它離子的利用度或活性，增溶粘膜組分(例如，脂質(zhì))，改變粘膜組織非蛋白和蛋白巰基水平，增加穿越粘膜表面的水流量，調(diào)整上皮的連接生理學(xué)，降低覆蓋粘膜上皮的粘液的粘度，降低粘膜纖毛清除率，及其它機(jī)制。
如在此所用，一種“葡萄糖調(diào)節(jié)肽的粘膜有效量”預(yù)期葡萄糖調(diào)節(jié)肽到受試者的一個(gè)藥物活性靶向點(diǎn)有效粘膜遞送，此過(guò)程在個(gè)體中可能包括多種遞送或傳輸路徑。例如，一種給定的活性劑通過(guò)粘膜細(xì)胞間的清除而到達(dá)臨近的血管壁，而通過(guò)其它路徑所述試劑可能，或者被動(dòng)地或主動(dòng)地吸收進(jìn)粘膜細(xì)胞以在細(xì)胞內(nèi)起作用或被釋放出或運(yùn)輸出細(xì)胞而到達(dá)一個(gè)二級(jí)靶點(diǎn)，例如系統(tǒng)循環(huán)。本發(fā)明的方法和組合物可能促進(jìn)活性劑沿一個(gè)或多個(gè)如此選擇性路徑的易位，或直接作用于粘膜組織或臨近的血管組織以促進(jìn)活性劑的吸收或滲透。所述促進(jìn)吸收或滲透不限于這些機(jī)制。
如在此所用，“血漿中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的峰濃度(Cmax)”，“血漿中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的濃度對(duì)時(shí)間曲線下的面積(AUC)”，“血漿中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的最大漿濃度對(duì)應(yīng)的時(shí)間(tmax)”，是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的藥物動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。Laursen等人，Eur.J.Endocrinology，135309-315，1996.所述“濃度對(duì)時(shí)間曲線”測(cè)量受試者血清中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的濃度對(duì)時(shí)間，在給藥一個(gè)劑量的葡萄糖調(diào)節(jié)肽給受試者之后，給藥方式或者通過(guò)鼻內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、或其它腸胃外的路徑?！癈max”是受試者一個(gè)單個(gè)劑量的葡萄糖調(diào)節(jié)肽給藥后，受試者血清中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的最大濃度?！皌max”是受試者一個(gè)單個(gè)劑量的葡萄糖調(diào)節(jié)肽給藥后，受試者血清中葡萄糖調(diào)節(jié)肽到達(dá)最大濃度的時(shí)間。
如在此所用，“血漿中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的濃度對(duì)時(shí)間曲線下的面積(AUC)”依據(jù)直線梯形規(guī)則附加殘余面積計(jì)算。兩個(gè)劑量間減少23％或增加30％檢測(cè)到的概率為90％(第二類誤差β＝10％)?！斑f送率”或“吸收率”是比較到達(dá)最大濃度(Cmax)的時(shí)間(tmax)估計(jì)的。Cmax和tmax是用非參數(shù)方法分析的。比較肌肉內(nèi)、皮下、靜脈和鼻內(nèi)葡萄糖調(diào)節(jié)肽給藥的藥物動(dòng)力學(xué)是用變量分析(ANOVA)完成的。為配對(duì)比較，一個(gè)Bonferroni-Holmes序列程序用于評(píng)價(jià)顯著性。三個(gè)鼻劑量的劑量應(yīng)答關(guān)系是由回歸分析估計(jì)的。P＜0.05被認(rèn)為有顯著性。結(jié)果以平均值+/-SEM給出。
盡管吸收促進(jìn)機(jī)制可能隨本發(fā)明不同的粘膜遞送增強(qiáng)劑而變化，在本文中有用的試劑基本不會(huì)不利于粘膜組織，而且根據(jù)特定的葡萄糖調(diào)節(jié)肽或其它活性或遞送增強(qiáng)劑生物化學(xué)特征而被選擇。在本文，增加粘膜組織的滲透或通透性的遞送增強(qiáng)劑會(huì)經(jīng)常引起粘膜保護(hù)通透性屏障的一些改變。對(duì)本發(fā)明中有價(jià)值的所述遞送增強(qiáng)劑，一般期望那些任何顯著的粘膜通透性的變化，在藥物遞送的合適理想持續(xù)過(guò)程的一個(gè)時(shí)間段中是可逆的。而且，應(yīng)該在長(zhǎng)期使用中，引入粘膜屏障性能無(wú)實(shí)質(zhì)的，蓄積的毒性，或任何永久的有害的變化。
本發(fā)明的某些方面，與本發(fā)明的葡萄糖調(diào)節(jié)肽一起協(xié)同給藥或組合制劑的吸收促進(jìn)劑選自小的疏水分子，包括但不限于二甲基亞砜(DMSO)、二甲基酰胺、乙醇、丙二醇和2-吡咯烷酮?？蛇x擇地，長(zhǎng)鏈兩性分子，例如，去甲酰基亞砜、氮酮、月桂硫酸鈉、油酸和膽酸鹽，可用于增加葡萄糖調(diào)節(jié)肽的粘膜滲透。在另外的方面，表面活性劑(例如，聚山梨酸酯)被用作增加葡萄糖調(diào)節(jié)肽鼻內(nèi)遞送的輔助復(fù)合物、加工處理劑、或制劑添加劑。試劑例如DMSO、聚乙二醇和乙醇，如果以足夠高濃度存在于遞送環(huán)境(例如，通過(guò)預(yù)給藥或合并到一種治療制劑中)，能進(jìn)入粘膜地水相并改變其增溶性能，從而增加葡萄糖調(diào)節(jié)肽從運(yùn)輸工具進(jìn)入粘膜的分配。
另外的粘膜遞送增強(qiáng)劑，它們?cè)诒景l(fā)明協(xié)同給藥和加工處理方法和組合制劑是有用的，這些粘膜遞送增強(qiáng)劑包括，但不限于，混合膠束；烯胺；氧化氮的供體(例如，S-亞硝基-N-乙?；?DL-青霉胺、NOR1、NOR4-最好與NO清除劑例如羧基-PITO或雙氯芬鈉(doclofenac sodium)共同給藥)；水楊酸鈉；乙酰乙酸的甘油酯(例如，甘油-1，3-二乙酰乙酸酯或1，2-異亞丙基甘油-3-乙酰乙酸酯)；及其它釋放擴(kuò)散或上皮內(nèi)-或穿過(guò)上皮-的滲透促進(jìn)劑，所述滲透促進(jìn)劑與粘膜遞送生理相容。其它吸收促進(jìn)劑選自多種增強(qiáng)葡萄糖調(diào)節(jié)肽粘膜遞送、穩(wěn)定性、活性或穿過(guò)-上皮滲透的載體、堿和賦形劑。這些包括，尤其是，環(huán)糊精和β-環(huán)糊精衍生物(例如，2-羥丙基-β-環(huán)糊精)和七(2，6-二-氧-甲基-β-環(huán)糊精)。這些復(fù)合物，任意地連接于一種或多種活性成份和進(jìn)一步任意地制備于油性基質(zhì)之中，在本發(fā)明的粘膜制劑中增加生物有效性。依然，另外適合粘膜遞送的吸收增強(qiáng)劑包括中鏈脂肪酸，包括單-和雙甘油酯(例如椰子油提取物癸酸鈉、Capmul)，和甘油三酯(例如淀粉糊精、Estaram299、Miglyol 810)。
本發(fā)明粘膜治療和預(yù)防組合物可以添加任何合適的滲透促進(jìn)劑以促進(jìn)葡萄糖調(diào)節(jié)肽穿越粘膜屏障的吸收、擴(kuò)散或滲透。滲透促進(jìn)劑可以是任何藥物上可接受的促進(jìn)劑。因此，本發(fā)明組合物的更詳細(xì)的方面提供摻入一種或多種滲透促進(jìn)劑，滲透促進(jìn)劑選自水楊酸鈉和水楊酸衍生物(乙酰水楊酸、膽堿水楊酸、水楊酰胺等)；氨基酸及其鹽(例如單胺羧酸如氨基乙酸、丙氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸等；羥基氨基酸如絲氨酸；酸性氨基酸如天冬氨酸、谷氨酸等；和堿性氨基酸如賴氨酸等-包括它們的堿金屬鹽或堿土金屬鹽)；和N-乙酰氨基酸(N-乙酰丙氨酸、N-乙酰苯丙氨酸、N-乙酰絲氨酸、N-乙酰氨基乙酸、N-乙酰賴氨酸、N-乙酰谷氨酸、N-乙酰脯氨酸、N-乙酰羥脯氨酸等)及它們的鹽(堿金屬鹽和堿土金屬鹽)。也提供了用作本發(fā)明中方法和組合物的滲透促進(jìn)劑，是一般用作乳化劑的物質(zhì)(油基磷酸鈉、月桂磷酸鈉、月桂硫酸鈉、肉豆蔻硫酸鈉、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基酯等)、己酸、乳酸、蘋(píng)果酸和檸檬酸和它們的堿金屬鹽、吡咯烷酮羧酸、烷基吡咯烷酮羧酸酯、N-烷基吡咯烷酮、脯氨酸酰基酯、及類似物。
本發(fā)明的多種方面中，改進(jìn)的鼻粘膜遞送的制劑和方法提供了允許本發(fā)明中葡萄糖調(diào)節(jié)肽和其它治療劑穿越給藥位點(diǎn)和選定的靶向點(diǎn)之間的粘膜屏障遞送。某些制劑特別適合一種選定的靶向細(xì)胞、組織、或器官、或甚至一種特定的疾病狀態(tài)。在其它方面，制劑和方法提供有效的、選擇性的內(nèi)-或穿越細(xì)胞的葡萄糖調(diào)節(jié)肽特定的沿指定的細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間路徑的路徑。典型地，葡萄糖調(diào)節(jié)肽有效地在載體或其它遞送運(yùn)輸工具以有效濃度水平裝載，并且遞送和維持在一種穩(wěn)定的形式，例如，在鼻粘膜和/或在穿越細(xì)胞內(nèi)部分和膜到達(dá)一種遠(yuǎn)距離的藥物活性的靶向點(diǎn)的通道(例如，血流或指定的組織、器官、或細(xì)胞外部分)。葡萄糖調(diào)節(jié)肽可提供在遞送運(yùn)輸工具中或另外被修飾的(例如，一種前藥形式)，其中葡萄糖調(diào)節(jié)肽的釋放和活化啟動(dòng)于一個(gè)生理上的刺激(例如，pH的改變、溶酶體的酶等)。經(jīng)常，葡萄糖調(diào)節(jié)肽是藥理學(xué)惰性的，直到它到達(dá)其活性靶向點(diǎn)。多數(shù)情況，葡萄糖調(diào)節(jié)肽和其它制劑成分是無(wú)毒的和無(wú)免疫原性的。在本文，載體和其它制劑成分是一般依據(jù)它們?cè)谏項(xiàng)l件下能被快速降解和分泌的能力而選擇的。同時(shí)，制劑在為有效儲(chǔ)存的劑型是化學(xué)和物理穩(wěn)定的。
肽和蛋白質(zhì)類似物及模仿物本發(fā)明中用的生物活性肽和蛋白質(zhì)的界定范圍是天然的或合成的、治療或預(yù)防活性的肽(包括兩個(gè)或更多共價(jià)連接的氨基酸)、蛋白質(zhì)、肽或蛋白質(zhì)片段、肽或蛋白質(zhì)的類似物、及活性肽或蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾的衍生物或鹽。廣泛多種的有用的葡萄糖調(diào)節(jié)肽的類似物和模仿物被預(yù)期用于本發(fā)明并且依據(jù)已知方法能被產(chǎn)生和測(cè)試生物活性。經(jīng)常地，本發(fā)明所用葡萄糖調(diào)節(jié)肽的肽或蛋白質(zhì)或其它生物活性肽或蛋白質(zhì)是突變蛋白質(zhì)，突變蛋白質(zhì)由部分取代、加入、或刪除一個(gè)天然發(fā)生的或天然的(例如，野生型、天然發(fā)生的突變、或等位變異)肽或蛋白質(zhì)中的序列中的氨基酸而易于獲得。另外，包括天然肽或蛋白質(zhì)的生物活性片段。如此突變衍生物和片段基本保持天然肽或蛋白質(zhì)希望的生物活性。在肽或蛋白質(zhì)有碳水化合物鏈的情況，標(biāo)記在這些碳水化合物物質(zhì)的變化的生物活性變異體，也包括在本發(fā)明。
如這里所用，術(shù)語(yǔ)“保守氨基酸取代物”指有相似支鏈的一般可互換的氨基酸殘基。例如，通?？苫Q的有脂肪支鏈的氨基酸基團(tuán)是丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；有脂肪羥基支鏈的氨基酸基團(tuán)是絲氨酸和蘇氨酸；有包含酰胺基支鏈的氨基酸基團(tuán)是天冬酰胺和谷氨酰胺；有芳香支鏈的氨基酸基團(tuán)是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；有堿性支鏈的氨基酸基團(tuán)是賴氨酸、精氨酸和組氨酸；有含硫支鏈的氨基酸基團(tuán)是半胱氨酸和甲硫氨酸。保守取代物的實(shí)施例包括非極性(疏水的)殘基例如異亮氨酸、丙氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸等。同樣，本發(fā)明預(yù)期一種極性(親水的)殘基的取代物，例如精氨酸和賴氨酸之間，谷氨酰胺和天冬酰胺之間，及蘇氨酸和絲氨酸之間。另外，本發(fā)明預(yù)期一種堿性殘基的取代物，例如賴氨酸、精氨酸或組氨酸等或酸性殘基的取代物，例如天門(mén)冬氨酸或谷氨酸等。典型的保守氨基酸取代物基團(tuán)是丙氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。通過(guò)任意地比對(duì)一個(gè)肽或蛋白質(zhì)類似物和一個(gè)相應(yīng)的天然肽或蛋白質(zhì)，和通過(guò)用適當(dāng)分析，例如粘附蛋白或受體結(jié)合分析，以確定選擇的生物活性，我們可以容易地分辨可實(shí)施的肽和蛋白質(zhì)類似物，以用于本發(fā)明的方法和組合物?？蓪?shí)施的肽和蛋白質(zhì)類似物和針對(duì)相應(yīng)天然肽或蛋白質(zhì)的抗體是典型地特意性免疫反應(yīng)性的。
本發(fā)明的一種穩(wěn)定固體蛋白制劑的改進(jìn)是增加純化蛋白的物理穩(wěn)定性，例如低壓凍干的，蛋白質(zhì)。這會(huì)抑制通過(guò)疏水相互作用及共價(jià)路徑的聚集，它們?cè)诘鞍踪|(zhì)展開(kāi)時(shí)會(huì)增加。在本文，穩(wěn)定制劑經(jīng)常包括基于聚合物的制劑，例如一種生物可降解水凝膠制劑/遞送系統(tǒng)。如上所述，水對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能和穩(wěn)定性的關(guān)鍵作用是已知的。典型地，蛋白質(zhì)在大量去水的固體狀態(tài)是相對(duì)穩(wěn)定的。但是，固態(tài)治療性蛋白質(zhì)制劑可能在高濕度的儲(chǔ)存中或在從一個(gè)持續(xù)釋放組合物或裝置遞送過(guò)程中變得含水。蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性一般隨水合作用的升高而降低。在固體蛋白質(zhì)聚集中，水也起顯著的作用，例如，通過(guò)增加蛋白質(zhì)的靈活性以提高反應(yīng)基團(tuán)的可及性，通過(guò)提供一種反應(yīng)物移動(dòng)相，和通過(guò)在幾個(gè)有害的過(guò)程例如β-清除和水解中作為一種反應(yīng)物。
含大約6％-28％水的蛋白質(zhì)制劑是最不穩(wěn)定的。低于此水平，結(jié)合水的移動(dòng)性和蛋白質(zhì)內(nèi)部運(yùn)動(dòng)是低的。高于此水平，水的移動(dòng)性和蛋白質(zhì)運(yùn)動(dòng)接近全部水合。高到一個(gè)點(diǎn)，對(duì)固體相聚集敏感性的增加與水化作用的增加在幾個(gè)系統(tǒng)中觀察到。但是，在更高的含水量，觀察到更少的聚集，這是因?yàn)橄♂尩男Ч?br> 依據(jù)這些原理，穩(wěn)定肽和蛋白質(zhì)防止粘膜遞送的固態(tài)聚集的一個(gè)有效方法是控制一種固體制劑的含水量和維持制劑中的水活性于優(yōu)化水平。這個(gè)水平依賴于蛋白質(zhì)的自然屬性，但一般，維持在低于它們“單層”水覆蓋的蛋白質(zhì)會(huì)表現(xiàn)超固態(tài)穩(wěn)定性。
多種添加劑、稀釋劑、堿和遞送運(yùn)輸工具提供于本發(fā)明內(nèi)，有效控制含水量來(lái)增加蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。這些如抗聚集劑有效的試劑和載體物質(zhì)從這個(gè)意思上包括，例如，各種官能性的聚合物，例如聚乙二醇、葡聚糖、二乙基氨乙基葡聚糖和羧甲基纖維素，它們顯著提高穩(wěn)定性和降低與它們混合或與它們連接的肽和蛋白質(zhì)的固體相聚集。在一些情況，蛋白質(zhì)的活性或物理穩(wěn)定性也可以被加入肽或蛋白質(zhì)藥物的水溶液的多種添加劑提高。例如，添加劑，例如多元醇(包括糖)、氨基酸、蛋白質(zhì)例如膠原和白明膠、及多種鹽可以用。
某些添加劑，特別是糖和其它多元醇，也賦予給干燥蛋白質(zhì)顯著的物理的穩(wěn)定性，例如，低壓凍干的蛋白質(zhì)。這些添加劑也能用于本發(fā)明以保護(hù)蛋白質(zhì)防止聚集，不只在凍干法中而且在干態(tài)儲(chǔ)存中。例如蔗糖和聚蔗糖70(一種以蔗糖為單元的聚合體)顯示顯著的保護(hù)作用防止肽或蛋白質(zhì)在多種條件的固相孵育過(guò)程中的聚集。這些添加劑也可以提高包埋于聚合物基質(zhì)的固體蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。
而其它的添加劑，例如蔗糖，穩(wěn)定蛋白質(zhì)防止在高溫的潮濕的環(huán)境中固態(tài)聚集，所述情況可發(fā)生在本發(fā)明的某些持續(xù)釋放制劑。蛋白質(zhì)例如白明膠和膠原也作為穩(wěn)定和膨脹劑以降低在本文的不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)的變性和聚集。這些添加劑可摻入進(jìn)本發(fā)明中多聚融化過(guò)程和組合物。例如多肽微粒能通過(guò)簡(jiǎn)單低壓凍干或噴霧干燥一種包含多種上述穩(wěn)定添加劑的溶液而制備。非聚集肽和蛋白質(zhì)的持續(xù)釋放能在長(zhǎng)期的時(shí)間獲得。
不同的另外的制備組分和方法，以及特定的制劑添加劑，提供在此，它產(chǎn)生傾向聚集的肽和蛋白質(zhì)的粘膜遞送的制劑，其中肽或蛋白質(zhì)用增溶劑穩(wěn)定于一個(gè)基本純的、非聚集的形式。一個(gè)范圍的組分和添加劑預(yù)期用于這些方法和制劑。這些增溶劑的典范是環(huán)糊精(CDs)，它選擇性地結(jié)合多肽的疏水支鏈。這些CDs已被發(fā)現(xiàn)以顯著地抑制聚集的形式結(jié)合蛋白的疏水片段。這種抑制對(duì)CD和蛋白質(zhì)都是選擇性的。此蛋白質(zhì)聚集的選擇性地抑制，提供本發(fā)明鼻內(nèi)遞送方法和組合物更多的優(yōu)點(diǎn)。在本文所用添加劑包括有不同的幾何形狀的CD二聚體、三聚體和四聚體，它們幾何形狀控制于特異性阻斷肽和蛋白質(zhì)聚集的連接子。而合并進(jìn)本發(fā)明的增溶劑和方法包括肽和肽模仿物的使用以選擇性地阻斷蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。在一個(gè)方面，報(bào)道的對(duì)CD多聚體疏水支鏈的特異性結(jié)合是擴(kuò)展到蛋白質(zhì)，通過(guò)那些類似地阻斷蛋白質(zhì)聚集的肽和肽模仿物的使用。寬范圍的合適方法和抗聚集劑合并進(jìn)本發(fā)明的組合物和操作中。
電荷修飾和pH控制劑及方法為改進(jìn)生物活性劑(包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、其它活性肽和蛋白質(zhì)、及大分子和小分子藥物)運(yùn)輸特征以增加穿越疏水粘膜屏障的遞送，本發(fā)明也提供在此所述的選擇的生物活性劑或遞送增強(qiáng)劑的電荷修飾的技術(shù)和試劑。由此考慮，大分子的相對(duì)滲透性是一般和它們的分配系數(shù)有關(guān)的。分子的電離度，依賴于分子的pKa和粘膜表面的pH，也影響分子的滲透性。用于粘膜遞送的包括本發(fā)明的葡萄糖調(diào)節(jié)肽和類似物的生物活性劑的滲透和分布，可由活性劑或滲透劑的電荷改變或電荷擴(kuò)散而促進(jìn)，此過(guò)程可以通過(guò)例如改變帶電荷的官能團(tuán)，或通過(guò)改變遞送活性劑的遞送運(yùn)輸工具或溶液的pH，或通過(guò)與活性劑協(xié)同給藥電荷-或pH-改變?cè)噭┒@得。
與通用知識(shí)一致，帶電大分子物質(zhì)的粘膜遞送，包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽和其它生物活性肽和蛋白質(zhì)，在本發(fā)明方法和組合物中是基本改進(jìn)的，當(dāng)活性劑以基本非電離、或中性的電荷狀態(tài)遞送到粘膜表面。
本發(fā)明中所用粘膜制劑的某些葡萄糖調(diào)節(jié)肽和其它生物活性肽和蛋白質(zhì)成分會(huì)是電荷修飾的，以產(chǎn)生肽或蛋白質(zhì)正電荷密度增加。這些修飾也擴(kuò)展到肽和蛋白質(zhì)共軛物、載體和其它公布于此的遞送形式的陽(yáng)離子化。陽(yáng)離子化提供一種改變本發(fā)明中蛋白質(zhì)和大分子的生物分配和運(yùn)輸性能的方便的方法。陽(yáng)離子化執(zhí)行方式基本保存活性劑的生物活性并且限制潛在的不利副作用，包括組織損傷和毒性。
降解酶抑制劑和方法另一種可能包括在穿越粘膜制劑的賦形劑是降解酶抑制劑。在本發(fā)明粘膜遞送制劑和方法中的典范的粘膜粘附聚合酶抑制復(fù)合物包括，但不限于羧甲基纖維素-胃酶抑素(有抗胃蛋白酶活性)；聚(丙烯酸)-Bowman-Birk抑制劑(抗胰凝乳蛋白酶)；聚(丙烯酸)-糜蛋白酶抑制素(抗胰凝乳蛋白酶)；聚(丙烯酸)彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)；羧甲基纖維素-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)；聚卡波非(Polycarbophil)-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)；殼聚糖-抗痛素(抗胰蛋白酶)；聚(丙烯酸)-桿菌肽素(抗氨基肽酶N)；殼聚糖-EDTA(抗氨基肽酶N、抗羧肽酶A)；殼聚糖-EDTA-抗痛素(抗胰蛋白酶、抗胰凝乳蛋白酶、抗彈性蛋白酶)。如以下的進(jìn)一步說(shuō)明，本發(fā)明某些實(shí)施例會(huì)選擇性地?fù)饺胍粋€(gè)新的衍生的或化學(xué)修飾形式的殼聚糖。一種如此新的在本發(fā)明中用的衍生物表示為β-[1→4]-2-胍基-2-脫氧-D-葡萄糖聚合物(多聚-GuD)任何抑制一種酶的活性以保護(hù)生物活性劑的抑制劑可以用于本發(fā)明的組合物和方法中。有用的保護(hù)生物活性蛋白質(zhì)和肽的酶抑制劑包括，例如，從土豆(馬鈴薯L)根莖類分離的大豆胰蛋白酶抑制劑、促胰島素分泌肽胰蛋白酶抑制劑、胰凝乳蛋白酶抑制劑和胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶抑制劑。可以用抑制劑的一種組合物或混合物。本發(fā)明所用另外的蛋白水解酶的抑制劑包括卵類粘蛋白酶、gabaxate敏使朗(mesylate)、α1-抗胰蛋白酶、抑肽酶、抑氨肽酶素、苯丁抑制素、嘌呤霉素、桿菌肽素、亮肽酶素(leupepsin)、α2-巨球蛋白、胃酶抑素和蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑。這些抑制劑和其它可以單獨(dú)使用或者組合使用。抑制劑可以摻入進(jìn)或結(jié)合到一種載體，例如，一種親水聚合物，涂鋪在接觸鼻粘膜的劑型的表面上，或摻入進(jìn)其表面的表層相，結(jié)合進(jìn)生物活性劑或在一種單獨(dú)給藥(例如，預(yù)給藥)中的制劑。
抑制劑的量，例如，一種可選擇地?fù)饺脒M(jìn)本發(fā)明組合物的蛋白水解酶抑制劑的量隨(a)特定抑制劑的性能，(b)分子中官能團(tuán)的數(shù)量(它們可能反應(yīng)以介導(dǎo)和水凝膠形成單體的共聚作用必須的未飽和烯鍵)和(c)存在于抑制劑分子中凝集素基團(tuán)例如糖苷的數(shù)量，而不同。它也可能依賴于預(yù)期給藥的特定治療劑。一般而言，一種有用的酶抑制劑的量是從大約0.1mg/ml到大約50mg/ml，通常從大約0.2mg/ml到大約25mg/ml，而更通常地從大約0.5mg/ml到大約5mg/ml的制劑(即，一種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑制劑或有抑制劑和生物活性劑的聯(lián)合制劑)。
在胰蛋白酶抑制情況中，合適的抑制劑可選自，例如，抑肽酶、BBI、大豆胰蛋白酶抑制劑、雞卵類粘蛋白、雞卵抑制劑、人促胰島素分泌肽胰蛋白酶抑制劑、甲磺酸卡莫司他(camostat mesilate)、黃酮類抑制劑、抗痛素、亮肽酶素(leupepsin)、對(duì)氨基苯甲脒、AEBSF、TLCK(甲苯磺酰賴氨酸葉綠素甲基酮)、APMSF、DFP、PMSF和聚丙烯酸酯衍生物。在胰凝乳蛋白酶抑制劑的情況中，合適的抑制劑可能選自，例如，抑肽酶、BBI、大豆胰蛋白酶抑制劑、糜蛋白酶抑制素、芐氧羰基-脯氨酸-苯丙氨酸-CHO、FK-448、雞卵抑制劑、蔗糖二苯硼酸復(fù)合物、DFP、PMSF、β-苯丙酸和聚(丙烯酸酯)衍生物。在彈性蛋白酶抑制劑的情況中，合適的抑制劑可能選自，例如，彈性蛋白酶抑制劑、甲氧琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-纈氨酸-氯甲基酮(MPCMK)、BBI、大豆胰蛋白酶抑制劑、雞卵抑制劑、DFP和PMSF。
本發(fā)明中另外的酶抑制劑選自一大范圍的非蛋白質(zhì)抑制劑，它們有不同程度的效能和毒性。如以下進(jìn)一步所述，這些添加劑在基質(zhì)或其它遞送運(yùn)輸工具上的固定，或開(kāi)發(fā)化學(xué)修飾的類似物的發(fā)展，可能易于應(yīng)用以減低或消除毒效應(yīng)。在本發(fā)明這大組酶抑制劑候選物中有有機(jī)磷酸抑制劑，例如異氟磷(diisopropylfluorophosphate)(DFP)和苯甲基磺酰氟化物(PMSF)，它們是潛在的、不可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑(例如，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)。通過(guò)這些復(fù)合物額外的抑制乙酰膽堿酯酶使它們?cè)诜强刂频倪f送設(shè)置中是高毒性。另一種候選抑制劑，4-(2-氨乙基)-苯磺酰氟化物(AEBSF)，有一種與DFP和PMSF相當(dāng)?shù)囊种苹钚裕黠@地毒性減少。(4-胺苯)-甲磺酰氫氯氟化物(APMSF)是另一種潛在的胰蛋白酶抑制劑，但在非控制設(shè)置中有毒性。與這些抑制劑相比，4-(4-異丙哌嗪羰基)苯1，2，3，4-四氫-1-萘甲酸安乃近(methanesulphonate)(FK-448)是低毒物質(zhì)，代表一種潛在的和特異的胰凝乳蛋白酶抑制劑。這組非蛋白質(zhì)的抑制劑候選物的進(jìn)一步的代表物，并且也表現(xiàn)低毒危險(xiǎn)性的，是甲磺酸卡莫司他(N，N’-二甲基氨甲酰甲基-對(duì)(p‘-胍基-苯酰氧基)乙酸苯酯甲烷-磺酸)。
用于本發(fā)明方法和組合物中的另一種酶抑制劑是氨基酸和修飾的氨基酸，它們干擾特殊治療復(fù)合物的酶降解。為在本文使用，氨基和修飾的氨基酸基本是非毒性的和生產(chǎn)低成本的。但是，由于它們是小分子和可溶性好，在粘膜環(huán)境它們易于稀釋和吸收。然而，在合適的條件下，氨基酸能作為蛋白酶可逆的、競(jìng)爭(zhēng)的抑制劑。某種修飾的氨基酸能表現(xiàn)十分強(qiáng)的抑制活性。一種期望的修飾的氨基酸在本文被指為一種‘過(guò)渡態(tài)’抑制劑。這些復(fù)合物的強(qiáng)抑制活性是基于它們的結(jié)構(gòu)和一種基質(zhì)過(guò)渡態(tài)幾何形狀的相似性，而與基質(zhì)本身相比，它們對(duì)酶活性位點(diǎn)有更高的親和作用，由此而選擇它們。過(guò)渡態(tài)抑制劑是可逆的、競(jìng)爭(zhēng)的抑制劑。這種抑制劑的實(shí)施例是α-氨基硼酸衍生物，例如硼亮氨酸、硼纈氨酸和硼丙氨酸。這些衍生物的硼原子可以形成一個(gè)四面體的硼酸鹽離子，它被認(rèn)為在肽的氨基肽酶水解中類似過(guò)渡態(tài)的肽。這些氨基酸衍生物是氨基肽酶有效的和可逆的抑制劑，而且有報(bào)道硼亮氨酸比苯丁抑制素的酶抑制性有效100多倍，比嘌呤霉素有效1000多倍。另一種被報(bào)道的強(qiáng)蛋白酶抑制活性修飾的氨基酸是N-乙酰半胱氨酸，它抑制氨基肽酶N的酶活性。這些添加劑也表現(xiàn)粘液溶解的性能，此性能可用于本發(fā)明方法和組合物以減少粘液擴(kuò)散屏障的影響。
其它用于本發(fā)明協(xié)同給藥方法和聯(lián)合制劑的酶抑制劑仍可選自肽和修飾的肽酶抑制劑。這種抑制劑重要的例子是來(lái)自蘚樣芽胞桿菌的環(huán)十二肽，即桿菌肽素。除了這種肽，某些二肽和三肽對(duì)一些蛋白酶表現(xiàn)弱的、非特異性抑制活性。通過(guò)與氨基酸的類似，它們的抑制活性可通過(guò)化學(xué)修飾來(lái)改進(jìn)。例如，膦酸二肽類似物也是對(duì)氨基肽酶有強(qiáng)抑制活性的‘過(guò)渡態(tài)’抑制劑。它們有報(bào)道用于穩(wěn)定鼻給藥的亮氨酸腦啡肽。另一種過(guò)渡態(tài)類似物的實(shí)例是修飾的戊肽胃酶抑素，它是一種非常有效的胃蛋白酶抑制劑。胃酶抑素結(jié)構(gòu)分析，通過(guò)測(cè)試幾種合成的類似物的抑制活性，顯示負(fù)責(zé)抑制活性分子的主要結(jié)構(gòu)功能特征。另一種特異形式的修飾的肽包括結(jié)構(gòu)中帶有一種末端定位的醛功能的抑制劑。例如，芐氧羰基-脯氨酸-苯丙氨酸-CHO的序列，它實(shí)現(xiàn)已知胰凝乳蛋白酶所需的一級(jí)和二級(jí)特異性，被發(fā)現(xiàn)有效的可逆的抑制靶蛋白酶。帶有一種末端定位的醛功能的進(jìn)一步抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)，例如，抗痛素、亮肽酶素、糜蛋白酶抑制素和彈性蛋白酶抑制劑，也是本領(lǐng)域中已知的，以及其它已知的結(jié)構(gòu)，可逆的、修飾的肽抑制劑，例如磷酸阿米酮、苯丁抑制素、嘌呤霉素和抑氨肽酶素。
由于它們的高分子量，在一種藥物載體基質(zhì)中濃縮遞送，多肽蛋白酶抑制劑比小化合物更順從。本發(fā)明中用于蛋白酶抑制的制劑和方法的添加劑包括絡(luò)合劑的使用。這些試劑通過(guò)清除鼻內(nèi)環(huán)境(或準(zhǔn)備或治療組合物)二價(jià)陽(yáng)離子而介導(dǎo)酶抑制，二價(jià)陽(yáng)離子是許多蛋白酶的輔助因子。例如，絡(luò)合劑EDTA和DTPA作為協(xié)同用藥或聯(lián)合制劑的添加劑，在合適的濃度，能有效地抑制所選的蛋白酶從而提高根據(jù)本發(fā)明的生物活性劑的鼻內(nèi)遞送。這種抑制劑的進(jìn)一步代表是EGTA、1，10-二氮菲和羥基喹啉。另外，由于它們螯合二價(jià)陽(yáng)離子的傾向，這些和其它絡(luò)合劑對(duì)本發(fā)明作為直接的、吸收促進(jìn)劑是有用的。
如在其它地方詳述的，預(yù)期會(huì)用多種聚合物，特別是粘膜粘附聚合物，作為本發(fā)明協(xié)同給藥、多過(guò)程和/或聯(lián)合制劑的方法和組合物的酶抑制劑。例如，聚(丙烯酸酯)衍生物，如聚(丙烯酸)和聚卡波非，能影響多種蛋白酶，包括胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的活性。這些聚合物的抑制效應(yīng)也可基于二價(jià)陽(yáng)離子例如Ca2+和Zn2+的絡(luò)合作用。進(jìn)一步預(yù)期這些聚合物可能作為如上所述另外的酶抑制劑的共軛物配體或載體。例如，一種殼聚糖-EDTA共軛物已被開(kāi)發(fā)并對(duì)本發(fā)明有用，它對(duì)鋅依賴的蛋白酶酶活性展示一種強(qiáng)抑制劑效應(yīng)。在本文共價(jià)附上其它酶抑制劑后的聚合物的粘膜粘附性能不期望被大致危及，也不期望這種聚合物在本發(fā)明的生物活性劑用作遞送運(yùn)輸工具的一般用途被減少。相反，粘膜粘附機(jī)制提供的遞送運(yùn)輸工具和粘膜表面間距離的減少會(huì)減少活性劑的系統(tǒng)前代謝，而共價(jià)結(jié)合的酶抑制劑在藥物遞送點(diǎn)保持濃縮，以減少不希望的抑制劑的稀釋影響和毒性以及其引起的其它副作用。這樣，協(xié)同給藥的酶抑制劑的有效量能由于排除稀釋效應(yīng)而減少。
對(duì)本發(fā)明粘膜制劑和方法有用的典型的粘膜粘附聚合酶抑制劑復(fù)合物包括，但不限于羧甲基纖維素-胃酶抑素(有抗胃蛋白酶活性)；聚(丙烯酸)-Bowman-Birk抑制劑(抗胰凝乳蛋白酶)；聚(丙烯酸)-糜蛋白酶抑制素(抗胰凝乳蛋白酶)；聚(丙烯酸)-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)；羧甲基纖維素-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)；聚卡波非-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)；殼聚糖-抗痛素(抗胰蛋白酶)；聚(丙烯酸)-桿菌肽素(抗氨基肽酶N)；殼聚糖-EDTA(抗氨基肽酶N、抗羧肽酶A)；殼聚糖-EDTA-抗痛素(抗胰蛋白酶、抗胰凝乳蛋白酶、抗彈性蛋白酶)。
粘液溶解和粘液清除劑以及方法生物治療劑通過(guò)鼻內(nèi)給藥的有效遞送必須考慮穿越鼻粘膜保護(hù)性粘液層的藥物運(yùn)輸減少，除了由于結(jié)合到粘液層糖蛋白的藥物損失。一般粘液是一種粘彈性的、類似凝膠的物質(zhì)，由水、電解質(zhì)、粘蛋白、大分子和脫落的上皮細(xì)胞所組成。它主要地作為下層粘膜組織的一種細(xì)胞保護(hù)和潤(rùn)滑覆蓋。粘液是由鼻上皮內(nèi)和其它粘膜上皮中隨機(jī)分布的分泌細(xì)胞分泌的。粘液的結(jié)構(gòu)單位是粘蛋白。此糖蛋白主要負(fù)責(zé)粘液的粘彈性性質(zhì)，雖然其它大分子可能也促成這個(gè)性能。在氣道粘液，這些大分子包括局部產(chǎn)生分泌的IgA、IgM、IgE、溶菌酶和支氣管鐵傳遞蛋白，它們?cè)谧陨砻庖邫C(jī)制中有重要作用。
本發(fā)明的協(xié)同給藥方法可選擇地?fù)饺胗行У恼骋喝芙饣蛘骋呵宄齽?，后者用作降解、變?xì)、或清除鼻內(nèi)粘膜表面的粘液以有利鼻內(nèi)給藥生物治療劑的吸收。這些方法中，粘液溶解或粘液清除劑是作為添加復(fù)合物協(xié)同地給藥的，以提高生物活性劑的鼻內(nèi)遞送。可選擇地，有效量的粘液溶解或粘液-清除劑作為本發(fā)明的一種多加工方法的一種加工劑摻入，或作為本發(fā)明的一種聯(lián)合制劑的添加劑，以提供一種改進(jìn)的制劑，它通過(guò)降低鼻內(nèi)粘液的障礙效應(yīng)，增加生物治療復(fù)合物鼻內(nèi)遞送。
多種粘液溶解或粘液清除劑對(duì)并入本發(fā)明中的方法和組合物的合并是可得的?；谒鼈兊淖饔脵C(jī)制，粘液溶解和粘液清除劑可以通常分為以下組裂解粘蛋白糖蛋白的蛋白核心的蛋白酶(例如，鏈霉蛋白酶、番木瓜蛋白酶)；分開(kāi)粘蛋白二硫鍵的巰基復(fù)合物；和打破粘液中非共價(jià)鍵的去污劑(例如Triton X-100、吐溫20)。在本文另外的復(fù)合物包括，但不限于，膽鹽和表面活性劑，例如，去氧膽酸鈉、?；侨パ跄懰徕c、甘氨膽酸鈉和溶血磷脂膽堿。
膽鹽造成粘液的結(jié)構(gòu)斷裂的有效性依次是脫氧膽酸鹽＞?；悄懰猁}＞甘氨膽酸鹽。依據(jù)本發(fā)明的方法其它減少粘液粘度或粘附以提高鼻內(nèi)遞送的有效劑包括，例如，短鏈脂肪酸，和那些由螯合作用的粘液溶解劑，例如N-?；z原肽、膽汁酸和皂甙(后者的部分功能是螯合Ca2+和/或Mg2+，它們?cè)诰S持粘液層結(jié)構(gòu)中有重要作用)。
本發(fā)明方法和組合物中另外的粘液溶解劑包括N-乙酰-L-半胱氨酸(ACS)，一種有效的粘液溶解劑，它減少支氣管肺粘液的粘度和粘附，并報(bào)道在麻醉的大鼠中適當(dāng)?shù)卦黾尤松L(zhǎng)激素的鼻生物有效性(從7.5到12.2％)。這些和其它粘液溶解或粘液清除劑是與鼻粘膜接觸的，典型地在濃度范圍大約0.2到20mM，與生物活性劑協(xié)同給藥，以減少鼻內(nèi)粘液的極化粘度和/或彈性。
其它粘液溶解或粘液清除劑也可選自一個(gè)范圍的糖苷酶，它們能裂解粘液糖蛋白中的糖苷鍵。α-淀粉酶和β-淀粉酶是這類酶的代表，盡管它們的粘液溶解效應(yīng)是有限的。相反，細(xì)菌糖苷酶允許這些微生物穿過(guò)它們宿主的粘液層。
為與本發(fā)明包括肽和蛋白質(zhì)治療的多數(shù)生物活性劑聯(lián)合運(yùn)用，非電離的去污劑一般也用作粘液溶解或粘液清除劑。這些試劑典型地不會(huì)修飾或基本破壞治療多肽的活性。
纖毛穩(wěn)定劑和方法由于某些粘膜組織(例如，鼻粘膜組織)通過(guò)粘膜纖毛自潔的能力對(duì)保護(hù)性功能(例如，去灰塵、變態(tài)反應(yīng)原和細(xì)菌)是必須的，通常認(rèn)為這種功能基本不應(yīng)被粘膜藥療損傷。呼吸通道的粘膜纖毛運(yùn)輸是一個(gè)特別重要的防衛(wèi)感染的機(jī)制。為完成這項(xiàng)功能，鼻內(nèi)和呼吸通路的纖毛搏動(dòng)沿粘膜移動(dòng)一層粘液以清除吸入的顆粒和微生物。
纖毛穩(wěn)定劑有用于本發(fā)明的方法和組合物以提高粘膜(如鼻內(nèi))給藥的葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物，和其它公布于此的生物活性劑的滯留時(shí)間。特別地，本發(fā)明方法和組合物中的這些試劑的遞送在某些方面顯著地增加，方法是通過(guò)協(xié)同給藥或聯(lián)合制劑一種或多種纖毛穩(wěn)定劑，纖毛穩(wěn)定劑可逆地抑制粘膜細(xì)胞的纖毛活性，以提供一個(gè)暫時(shí)的、可逆的粘膜給藥的活性劑的滯留時(shí)間的增加。為應(yīng)用于本發(fā)明的這些方面，上述的纖毛穩(wěn)定因子，它們的活性或特異性或非直接的，都是在合適的量(依賴濃度、持續(xù)時(shí)間和遞送模式)成功用作纖毛穩(wěn)定劑的候選物，如此它們產(chǎn)生一個(gè)臨時(shí)的(即，可逆的)粘膜纖毛在一個(gè)粘膜給藥位點(diǎn)清除作用的減少或停止，以增加葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物，以及其它公布于此的生物活性劑的遞送，而無(wú)不能接受的不良副反應(yīng)。
在更細(xì)的方面，一種特異的纖毛穩(wěn)定因子是用于有一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物，和/或其它公布于此的生物活性劑的一種聯(lián)合制劑或協(xié)同給藥方案。文獻(xiàn)中分離的和鑒定的多種細(xì)菌纖毛穩(wěn)定因子可用于本發(fā)明的這些實(shí)施例。來(lái)自細(xì)菌綠膿假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)的纖毛穩(wěn)定因子包括吩嗪衍生物、綠膿桿菌素復(fù)合物(2-烷基-4-羥基喹啉)和鼠李糖脂(也稱一種溶血素)。綠膿桿菌素復(fù)合物在濃度為50μg/ml產(chǎn)生纖毛穩(wěn)定，并且無(wú)明顯的超微結(jié)構(gòu)的損傷。吩嗪衍生物也抑制纖毛運(yùn)動(dòng)但是造成一些膜的破壞，盡管在基本更高的濃度400μg/ml。有限暴露氣管的移出物于鼠李糖脂導(dǎo)致纖毛穩(wěn)定，這與變化的纖毛膜有關(guān)。更大暴露于鼠李糖伴隨動(dòng)力蛋白臂從軸絲移去。
表面活性劑和方法本發(fā)明更細(xì)的方面，一種或多種膜滲透增強(qiáng)劑可用于本發(fā)明的粘膜遞送方法或制劑中，以增加葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物，和其它公布于此的生物活性劑的粘膜遞送。在本文膜滲透增強(qiáng)劑能選自(i)表面活性劑，(ii)膽鹽，(iii)磷脂添加劑、混合微膠粒、脂質(zhì)體、或載體，(iv)醇，(v)烯胺，(vi)NO供體化合物，(vii)長(zhǎng)鏈兩性分子，(viii)小的疏水滲透增強(qiáng)劑；(ix)水楊酸鈉或水楊酸衍生物；(x)乙酰乙酸的甘油酯，(xi)環(huán)糊精或β-環(huán)糊精衍生物，(xii)中鏈脂肪酸，(xiii)螯合劑，(xiv)氨基酸或其鹽，(xv)N-乙酰氨基酸或其鹽，(xvi)降解為所選膜組分的酶，(xvii)脂肪酸合成的抑制劑，或(xviii)膽固醇合成的抑制劑；或(xix)(i)-(xix)所述膜滲透增強(qiáng)劑的任何組合。
某些表面活性劑易于摻入本發(fā)明的粘膜遞送制劑和方法，作為粘膜吸收增強(qiáng)劑。這些試劑，它們可與葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物、及其它公布于此的生物活性劑協(xié)同給藥或聯(lián)合制劑，可選自一大范圍的已知表面活性劑組合。表面活性劑，一般分為三類(1)非離子的聚氧乙烯醚；(2)膽鹽例如甘氨膽酸鈉(SGC)和脫氧膽酸鹽(DOC)；和(3)夫西地酸的衍生物例如?；嵌浞蛭鞯厮徕c(STDHF)。這些不同種的表面活性劑的作用機(jī)制典型地包括生物活性劑的增溶作用。對(duì)經(jīng)常聚集的蛋白質(zhì)和肽，這些吸收促進(jìn)劑的表面活性特征能允許與蛋白質(zhì)的相互作用，所以小的單位例如表面活性劑包被的單體可以更容易在溶液中維持。其它表面活性劑的實(shí)例是L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)、聚山梨酸酯80和聚山梨酸酯20。這些單體預(yù)計(jì)比聚集體更易運(yùn)輸。第二個(gè)有效機(jī)制是在粘膜環(huán)境中防止蛋白酶對(duì)肽或蛋白質(zhì)的蛋白水解降解作用。膽鹽和一些夫西地酸衍生物據(jù)報(bào)道以小于或等于增加蛋白吸收所需的濃度抑制蛋白質(zhì)被鼻勻漿物的蛋白水解降解作用。這些蛋白酶抑制對(duì)生物半衰期短的肽是非常重要的。
脂肪酸和膽固醇合成的降解酶和抑制劑本發(fā)明相關(guān)的方面，葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物和其它粘膜給藥的生物活性劑是和滲透增強(qiáng)劑制劑或等同給藥的，滲透增強(qiáng)劑選自脂肪酸、醇或其它所選上皮屏障組分的合成的降解酶、或代謝刺激劑或抑制劑，美國(guó)專利No.6,190,894。例如，降解酶例如磷脂酶、透明質(zhì)酸酶、神經(jīng)氨酶和軟骨素酶可用于增加葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物和其它生物活性劑的粘膜滲透，而不造成粘膜屏障的可逆的損傷。在一個(gè)實(shí)例中，軟骨素酶用于一種所述的方法或組合物，以改變粘膜通透性屏障的糖蛋白或糖脂組分，從而提高粘膜吸收公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物和其它生物活性劑。
關(guān)于粘膜屏障組分合成抑制劑，注意到游離脂肪酸占上皮脂質(zhì)重量的20-25％。游離脂肪酸生物合成的兩種限速酶是乙酰輔酶A羧化酶和脂肪酸合成酶。通過(guò)一系列步驟，游離脂肪酸被代謝為磷脂。因此用在本發(fā)明的方法和組合物的游離脂肪酸合成和代謝的抑制劑，包括，但不限于，乙酰輔酶A羧化酶的抑制劑例如5-十四烷基氧-2-呋喃羧酸(TOFA)；脂肪酸合成酶的抑制劑；磷脂酶A的抑制劑例如戈米辛A、2-(對(duì)戊基肉桂?；?氨基-4-氯苯甲酸、溴代溴苯乙酮、一元胺(monoalide)、7，7-二甲基-5，8-二十碳二烯酸、麥角溴煙酯、千金藤堿、尼卡地平、槲皮素、雙丁酰環(huán)化腺苷酸、R-24571、N-油酰基乙醇胺、N-(7-硝基-2，1，3-重氮芐吡二胺(benzoxadiazol)-4-烴基)磷脂酸絲氨酸、環(huán)胞素A、局部麻醉劑，包括辛可卡因、普尼拉明、類視黃醇、例如全反式和13-順式維生素A酸、W-7、三氟丙拉嗪、R-24571(卡米達(dá)佐)、1-地塞米松(hexadocyl)-3-三氟乙基甘油-sn-2-磷酸薄荷醇(MJ33)；鈣通道阻斷劑包括尼卡地平、維拉帕米、地爾硫卓、硝苯地平和尼莫地平；抗瘧藥包括奎納克林、米帕林、氯喹和羥氯喹；β阻斷劑包括普萘洛爾(propanalol)和拉貝洛爾；調(diào)鈣蛋白拮抗物；EGTA；乙基汞硫代水楊酸鈉(thimersol)；糖皮質(zhì)激素包括地塞米松和去氫氫化可的松；和非類固醇類的抗炎劑包括吲哚美辛和萘普生。
游離醇，主要是膽固醇，占上皮脂質(zhì)重量的20-25％。膽固醇生物合成的限速酶是3-羥基-3-甲基戊二酰(HMG)輔酶A還原酶。本發(fā)明中所用方法和組合物的膽固醇合成的抑制劑包括，但不限于，(HMG)輔酶A還原酶競(jìng)爭(zhēng)抑制劑，例如辛伐他汀、洛伐它汀、fluindostatin(氟伐他汀)、普伐他汀、美伐他汀、及其它的HMG輔酶A還原酶的抑制劑，例如膽固醇油酸酯、膽固醇硫酸酯和磷酸酯，和氧合固醇，例如25-氫氧-和26-氫氧-膽固醇；角鯊烯合成酶抑制劑；角鯊烯環(huán)氧化酶抑制劑；DELTA7或DELTA24還原酶抑制劑例如22，25-重氮膽固醇、20，25-重氮膽甾烯醇、AY9944和三苯乙醇。
每種脂肪酸合成或固醇合成抑制劑可以與一種或多種公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物和其它生物活性劑協(xié)同給藥或聯(lián)合制劑以獲得提高活性劑的上皮滲透。在粘膜遞送治療或添加劑的制劑，固醇抑制劑的一個(gè)有效濃度范圍是一般從總重的大約0.0001％到大約20％，更典型地從大約0.01％到大約5％。
一氧化氮供體劑和方法本發(fā)明的其它相關(guān)方面，一氧化氮(NO)供體被選作膜滲透增強(qiáng)劑以增加一種或多種公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物和其它生物活性劑的粘膜遞送。多種NO供體是本領(lǐng)域中已知的并以有效濃度在本發(fā)明的方法和制劑中有用。NO供體的典范包括，但不限于，硝化甘油、硝普(nitropruside)、NOC5[3-(2-羥基-1-(甲基-乙基)-2-亞硝基聯(lián)氨基)-1-丙烷胺]、NOC12[N-乙基-2-(1-乙基-羥基-2-亞硝基聯(lián)氨基)-乙胺]、SNAP[S-亞硝基-N-乙?；?DL-青霉胺]、NORI和NOR4。在本發(fā)明的方法和組合物中，有效劑量的所選NO供體與一種或多種公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物和其它生物活性劑協(xié)同給藥或聯(lián)合制劑，進(jìn)入或穿越粘膜上皮。
調(diào)整上皮連接結(jié)構(gòu)和/或生理學(xué)的試劑本發(fā)明提供藥物組合物，它們包括一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物、和/或其它生物活性劑，聯(lián)合公布于此的粘膜遞送增強(qiáng)劑，制備用于粘膜遞送的藥物制劑。
透化劑可逆地增強(qiáng)粘膜上皮細(xì)胞旁的運(yùn)輸，典型地通過(guò)在受試者的粘膜上皮表面調(diào)整上皮連接的結(jié)構(gòu)和/或生理學(xué)。這個(gè)效應(yīng)典型地包括由透化劑抑制相鄰上皮細(xì)胞的上皮膜粘附蛋白之間的同型的或異型的結(jié)合。同型的或異型的結(jié)合阻斷的靶蛋白可選自多種相關(guān)的連接粘附分子(JAMs)、咬合因子(occludin)或克勞丁(claudin)。這個(gè)的實(shí)例是抗體、抗體片段或單鏈抗體，它們結(jié)合這些蛋白質(zhì)的胞外域。
在另外的具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供透化肽和肽類似物和模仿物以增強(qiáng)粘膜上皮細(xì)胞旁的運(yùn)輸。受試肽和肽類似物和模仿物典型地與本發(fā)明的組合物和方法一起起作用，是通過(guò)調(diào)整哺乳動(dòng)物受試者上皮連接的結(jié)構(gòu)和/或生理學(xué)。在特定的實(shí)例，肽和肽類似物和模仿物有效地抑制上皮膜粘附蛋白的同型的或異型的結(jié)合，粘附蛋白選自連接粘附分子(JAMs)、咬合因子或克勞丁。
一種如此被廣泛研究的試劑是細(xì)菌毒素，它是來(lái)自霍亂弧腸菌(Vibriocholerae)的細(xì)菌毒素名為“緊密連接毒素”(ZOT)。這種毒素介導(dǎo)增加的腸內(nèi)的粘膜通透性和造成包括被感染體的腹瀉的疾病癥狀。Fasano等人，Proc.Nat.Acad.Sci.，U.S.A.，85242-5246(1991)。當(dāng)在大鼠回腸的粘膜試驗(yàn)時(shí)，ZOT通過(guò)調(diào)整細(xì)胞間的緊密連接結(jié)構(gòu)而增強(qiáng)腸內(nèi)通透性。最近，發(fā)現(xiàn)ZOT能可逆地打開(kāi)腸內(nèi)粘膜的緊密連接。也有報(bào)道ZOT能可逆地打開(kāi)鼻粘膜的緊密連接。美國(guó)專利No.5,908,825。
在本發(fā)明中的方法和組合物中，ZOT以及多種作為ZOT活性的拮抗劑或拮抗物的ZOT的類似物和模仿物，用于增加生物活性劑的鼻內(nèi)遞送-通過(guò)增加細(xì)胞旁吸收進(jìn)和穿越鼻粘膜。在本文，ZOT典型地通過(guò)引起以蛋白ZO1的位置變化為標(biāo)記的緊密連接的結(jié)構(gòu)重組而起作用。本發(fā)明這些方面，ZOT是與生物活性劑在一種有效劑量等同給藥或聯(lián)合制劑，以產(chǎn)生顯著增強(qiáng)的活性劑的吸收，通過(guò)可逆地增加鼻粘膜通透性，基本無(wú)不良副反應(yīng)。
血管擴(kuò)張劑和方法另一種在本發(fā)明方法和組合物的協(xié)同給藥和聯(lián)合制劑中表現(xiàn)有益的用途的吸收促進(jìn)劑是血管活性復(fù)合物，更特異地指血管擴(kuò)張劑。這些復(fù)合物作用于本發(fā)明內(nèi)，以調(diào)節(jié)粘膜下脈管系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和生理學(xué)，增加葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物和其它生物活性劑進(jìn)入或穿過(guò)粘膜上皮和/或進(jìn)入特異的靶向組織或間隔(例如，體循環(huán)或中樞神經(jīng)系統(tǒng))的運(yùn)輸效率。
本發(fā)明所用的血管擴(kuò)張劑典型地引起粘膜下血管舒張，通過(guò)或者胞質(zhì)鈣的降低、一氧化氮(NO)的增高或通過(guò)抑制肌球蛋白輕鏈激酶。它們通常分為9類鈣拮抗物、鉀通道開(kāi)放劑、ACE抑制劑、血管緊張素-II受體拮抗物、α-腎上腺素能的和咪唑受體拮抗物、β1-腎上腺素能的拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑、類花生酸類物質(zhì)和NO供體。
盡管化學(xué)不同，鈣拮抗物的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性能是相似的。進(jìn)入體循環(huán)的吸收是高的，而且這些試劑因此經(jīng)過(guò)相當(dāng)?shù)耐ㄟ^(guò)肝臟的首過(guò)代謝，導(dǎo)致個(gè)體藥物代謝動(dòng)力學(xué)的不同。除了二氫吡啶型的新藥(氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、尼伐地平、尼索地平和尼群地平)，鈣拮抗物的半衰期是短的。因此，維持許多這些藥的有效的藥物濃度需要多劑量的遞送，或控制釋放的制劑，如在它處所述。用鉀通道開(kāi)放劑米諾地爾治療可能也受限制于給藥的方式和水平，由于可能的不良副反應(yīng)。
ACE抑制劑防止血管緊縮素-I到血管緊縮素-II的轉(zhuǎn)變，當(dāng)腎素生成提高時(shí)是最有效的。因?yàn)锳CE與激肽酶-II相同，后者滅活可能的內(nèi)源的血管擴(kuò)張劑卡里丁，ACE抑制引起卡里丁降解作用的降低。ACE抑制劑提供心臟保護(hù)和心臟修復(fù)效應(yīng)更多的好處，通過(guò)防止和逆轉(zhuǎn)動(dòng)物模型心纖維化和心室肥大。多數(shù)ACE抑制劑的主要清除路徑是通過(guò)腎臟排泄。因此，腎損傷引起清除的減少并且建議有中度到嚴(yán)重腎損傷的病人25到50％的劑量減少。
關(guān)于NO供體，這些復(fù)合物特別有用于本發(fā)明，因?yàn)樗鼈儗?duì)粘膜通透性的額外影響。除了上述NO供體，名為NO/親核物質(zhì)的親核物質(zhì)與NO的復(fù)合物，或NO-親核復(fù)合體，當(dāng)溶解于生理pH的水溶液時(shí)自發(fā)地和非酶地釋放NO。相反，硝基血管擴(kuò)張劑例如硝酸甘油需要特異的酶活性以釋放NO。NO-親核復(fù)合體以一個(gè)確定的化學(xué)計(jì)量學(xué)和以可預(yù)計(jì)的速率范圍從對(duì)二乙基胺/NO＜3分鐘到對(duì)二乙烯三胺/NO(DETANO)大致20小時(shí)釋放NO。
本發(fā)明某些方法和組合物中，所選的血管擴(kuò)張劑是(例如，全身地或鼻內(nèi)地，同時(shí)地或有效臨時(shí)聯(lián)合地)與一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物和其它生物活性劑協(xié)同給藥或聯(lián)合制劑的，劑量為能有效地增強(qiáng)活性劑的粘膜吸收，以到達(dá)受試者內(nèi)靶向組織或間隔(例如，肝臟、肝門(mén)靜脈、中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織或流體、或血漿)。
選擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑和方法本發(fā)明的組合物和遞送方法選擇性地?fù)饺脒x擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑，它促進(jìn)一種或多種生物活性劑的運(yùn)輸。這些運(yùn)輸增強(qiáng)劑可用于與一種或多種公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物的一種聯(lián)合制劑或協(xié)同給藥步驟，以協(xié)同地增強(qiáng)一種或多種另外的生物活性劑穿越粘膜運(yùn)輸屏障的遞送，以增強(qiáng)活性劑的粘膜遞送以到達(dá)個(gè)體的靶向組織或間隔(例如，粘膜上皮、肝臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織或流體、或血漿)。另一種選擇，運(yùn)輸增強(qiáng)劑可用于一個(gè)聯(lián)合制劑或協(xié)同給藥步驟以直接增強(qiáng)一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物的粘膜遞送，伴有或不伴有另外的生物活性劑的增強(qiáng)遞送。
用于本發(fā)明這個(gè)方面的選擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑的典范包括，但不限于，糖苷、含糖分子和結(jié)合劑例如凝集素結(jié)合劑，已知它與上皮運(yùn)輸屏障組分特異性反應(yīng)。例如，特異的“生物粘附”配體，包括多種植物和細(xì)菌的凝集素，它們通過(guò)受體介導(dǎo)的相互作用結(jié)合細(xì)胞表面糖部分，能用作載體或共軛的運(yùn)輸介導(dǎo)因子以增強(qiáng)本發(fā)明中生物活性劑的粘膜遞送，例如，鼻遞送。某些用于本發(fā)明的生物粘附配體能介導(dǎo)生物信號(hào)向上皮靶細(xì)胞的傳遞，這觸發(fā)粘附配體通過(guò)特異的細(xì)胞運(yùn)輸過(guò)程(內(nèi)吞作用或跨細(xì)胞作用)的選擇性地?cái)z取。這些運(yùn)輸介導(dǎo)因子因此能用作一個(gè)“載體系統(tǒng)”以刺激或直接選擇性地?cái)z取一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物和其它生物活性劑進(jìn)入和/或穿越粘膜上皮。這些和其它選擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑顯著地增強(qiáng)本發(fā)明中大分子生物藥物(特別是肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸和多核苷酸載體)的粘膜遞送。凝集素是植物蛋白，它們結(jié)合真核細(xì)胞糖蛋白和糖脂表面發(fā)現(xiàn)的特定的糖。凝集素的濃縮溶液有“粘液牽引(mucotractive)”效應(yīng)，多種研究已顯示快速的受體介導(dǎo)的凝集素和凝集素共軛物(例如，連接有膠體金的顆粒的刀豆球蛋白A)的內(nèi)吞作用(RME)穿越粘膜表面。更多的研究報(bào)道凝集素的攝取機(jī)制能用于體內(nèi)腸內(nèi)藥物靶向。在某些這些研究中，聚苯乙烯納米微粒(500nm)共價(jià)配對(duì)到番茄凝集素，并被報(bào)道給大鼠口服后，給藥產(chǎn)生改進(jìn)的全身的攝取。
除了植物凝集素，微生物的粘附和侵入因子提供一個(gè)豐富的候選資源以用作本發(fā)明中粘膜遞送方法和組合物的粘附/選擇性的運(yùn)輸載體。兩個(gè)組分在細(xì)菌粘附過(guò)程中是必須的，一種細(xì)菌‘粘附素’(粘附或集群因子)和宿主細(xì)胞表面上的一種受體。引起粘膜感染的細(xì)菌需要在粘附它們自己于上皮表面之前穿透粘液層。這種粘附通常由細(xì)菌的菌毛或纖毛結(jié)構(gòu)介導(dǎo)，雖然其它細(xì)胞表面組分也可參與此過(guò)程。粘附細(xì)菌寄居于粘膜上皮，通過(guò)繁殖和起始一系列通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制(有或無(wú)毒素的幫助)的靶向細(xì)胞內(nèi)的生物化學(xué)反應(yīng)。聯(lián)合這些侵入機(jī)制，知道了多種來(lái)源于不同細(xì)菌和病毒的生物粘附蛋白(如透明質(zhì)酸酶、內(nèi)化素(internalin))。這些允許這些微生物帶有給人深刻印象的對(duì)宿主種類甚至特定靶組織的選擇性的細(xì)胞外粘附。通過(guò)如此受體-配體相互作用傳遞的信號(hào)激發(fā)完整的、活的微生物進(jìn)入、和最后穿越上皮細(xì)胞，通過(guò)內(nèi)吞和跨越細(xì)胞過(guò)程。如此天然發(fā)生的現(xiàn)象可被利用(例如，通過(guò)絡(luò)合生物活性劑例如有一種外源凝集素的葡萄糖調(diào)節(jié)肽)，依據(jù)在此所述，以增強(qiáng)生物活性復(fù)合物遞送進(jìn)入和穿越粘膜上皮和/或其它設(shè)計(jì)的藥物活性的靶向點(diǎn)。
以一種特異的、凝集素樣的方式結(jié)合上皮表面的多種細(xì)菌和植物毒素也是有用于本發(fā)明的方法和組合物的。例如，白喉(diptheria)毒素(DT)通過(guò)RME迅速進(jìn)入宿主細(xì)胞。同樣大腸桿菌不耐熱的毒素的B亞基以高特異的、凝集素樣方式結(jié)合到腸內(nèi)上皮細(xì)胞的刷狀緣。這些毒素的攝取和跨細(xì)胞作用到腸上皮細(xì)胞基底外側(cè)的在體內(nèi)和體外已有報(bào)道。其它研究已在大腸桿菌以一種麥芽糖結(jié)合融合蛋白表達(dá)了白喉毒素的穿膜域并且將其與高分子量的多聚-L-賴氨酸化學(xué)配對(duì)。合成的復(fù)合物成功地用于介導(dǎo)體外一個(gè)報(bào)告基因的內(nèi)在化。除了這些實(shí)例，金黃色釀膿葡萄球菌(staphylococcus aureus)產(chǎn)生一組蛋白質(zhì)例如葡萄球菌腸毒素A(SEA)、SEB、中毒性休克綜合癥毒素1(TSST-1)，后者既是超級(jí)抗原又是毒素。與這些蛋白質(zhì)有關(guān)的研究已報(bào)道在Caco-2細(xì)胞中SEB和TSST-I劑量依賴性促進(jìn)的跨細(xì)胞作用。
病毒血細(xì)胞凝集素包含運(yùn)輸劑的另一類，以促進(jìn)本發(fā)明中的方法和組合物的生物活性劑的粘膜遞送。許多病毒感染的初始步驟是結(jié)合表面蛋白(血細(xì)胞凝集素)于粘膜細(xì)胞。對(duì)多數(shù)病毒已經(jīng)鑒定了結(jié)合蛋白，包括輪狀病毒、水痘帶狀皰疹病毒、西門(mén)利克(semliki)森林病毒、腺病毒、馬鈴薯卷葉病毒和呼吸道腸道病毒。這些和其它典范的病毒血球凝集素可用于與一種或多種公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物聯(lián)合制劑(例如，一種混合物或共軛物制劑)或協(xié)同給藥步驟中，以協(xié)同地增強(qiáng)一種或多種另外的生物活性劑的粘膜遞送。二中擇一的，病毒血球凝集素可用于一種聯(lián)合制劑或協(xié)同給藥步驟以直接增強(qiáng)一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物的粘膜遞送，無(wú)論伴有或不伴有另外的生物活性劑增強(qiáng)的遞送。
多種內(nèi)源的、選擇性的運(yùn)輸-介導(dǎo)因子也可用于本發(fā)明。哺乳動(dòng)物細(xì)胞已發(fā)展一種分配機(jī)制以促進(jìn)特異的物質(zhì)內(nèi)在化和靶向這些到確定的間隔?？偠灾?，這些膜變形的過(guò)程名為‘內(nèi)吞作用’并包含吞噬作用、胞飲作用、受體-介導(dǎo)的內(nèi)吞作用(籠形蛋白-介導(dǎo)的RME)，和細(xì)胞攝液作用(非籠形蛋白-介導(dǎo)的RME)。RME是高特異的細(xì)胞生物過(guò)程，通過(guò)它，如其名字所示，多種配體結(jié)合到細(xì)胞表面受體以及后來(lái)在細(xì)胞內(nèi)內(nèi)在化和通過(guò)運(yùn)輸(traffick)。在許多細(xì)胞，此內(nèi)吞作用過(guò)程非?；钴S以至整個(gè)膜表面在不到半個(gè)小時(shí)被內(nèi)在化和取代?；谒鼈?cè)诩?xì)胞膜的定向，兩類受體被提出；I類受體的氨基末端位于膜的細(xì)胞外側(cè)，II類受體在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境有同樣的末端蛋白。
本發(fā)明的其它實(shí)例利用鐵傳遞蛋白作為粘膜遞送的生物活性劑的RME載體或刺激劑。鐵傳遞蛋白，一種80kDa離子運(yùn)輸糖蛋白，通過(guò)RME有效地吸收進(jìn)入細(xì)胞。鐵傳遞蛋白受體在多數(shù)增殖細(xì)胞表面能找到，在有核紅細(xì)胞和許多腫瘤細(xì)胞上數(shù)量增加。鐵傳遞蛋白(Tf)和鐵傳遞蛋白共軛物的跨細(xì)胞作用據(jù)報(bào)道在存在布雷菲德菌素A(BFA)，一種真菌代謝產(chǎn)物，時(shí)增強(qiáng)。在其它研究中，BFA治療被報(bào)道能快速增加蓖麻毒素和HRP在MDCK細(xì)胞中的頂端內(nèi)吞作用。因此，BFA和那些刺激受體-介導(dǎo)運(yùn)輸?shù)钠渌噭┛捎糜诒景l(fā)明的方法作為聯(lián)合制劑(例如，共軛的)和/或協(xié)同給藥的試劑以增強(qiáng)包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物的生物活性劑的受體-介導(dǎo)的運(yùn)輸。
多聚體的遞送運(yùn)輸工具和方法在本發(fā)明的某些方面，公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物、其它生物活性劑，和上面所述的遞送-增強(qiáng)劑，是單獨(dú)地或聯(lián)合地在粘膜(例如，鼻的)給藥制劑中摻入的，該制劑包括作為載體或基質(zhì)的一種生物相容的聚合體。如此聚合物載體包括多聚體的粉末、基質(zhì)或微?；倪f送運(yùn)輸工具，以及其它聚合物形式。聚合物可以是植物的、動(dòng)物的、或合成起源的。通常聚合物是交聯(lián)的。而且，在這些遞送系統(tǒng)中，葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物或模仿物，可被以一種方式官能化，在此官能化中共價(jià)地結(jié)合到聚合物并通過(guò)簡(jiǎn)單的洗滌致使與聚合物分不開(kāi)。在其它實(shí)例中，聚合物是被可降解或滅活生物活性劑和/或遞送增強(qiáng)劑的酶或其它試劑的抑制劑化學(xué)修飾的。在某些制劑中，聚合物是部分或完全水不溶的、但是水可膨脹的聚合物，例如，水凝膠。本發(fā)明這方面有用的聚合物的特性是期望水相互作用的和/或親水的以吸收顯著量的水，而且當(dāng)放置接觸水或水性介質(zhì)足夠的一段時(shí)間而達(dá)到水飽和時(shí)它們經(jīng)常形成水凝膠。在更具體的實(shí)例聚合物是水凝膠，當(dāng)把它放置接觸充分的水時(shí)，當(dāng)在室溫下接觸水在飽和時(shí)吸收至少兩倍重量的水，美國(guó)專利No.6,004,583。
基于生物可降解的聚合物的藥物遞送系統(tǒng)在許多生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中是優(yōu)選的，因?yàn)檫@種體系可通過(guò)或者水解作用或酶反應(yīng)變成非毒性分子而被破壞。降解作用的速率是通過(guò)調(diào)節(jié)生物可降解聚合物基質(zhì)的組合物而控制的。這類體系能因此為生物活性劑的長(zhǎng)期釋放用于某個(gè)設(shè)置。生物可降解聚合物例如聚(羥基乙酸)(PGA)、聚-(乳酸)(PLA)和聚(D，L-乳酸-共-羥基乙酸)(PLGA)，作為可能的藥物遞送載體已經(jīng)受到相當(dāng)?shù)年P(guān)注，因?yàn)檫@些聚合物的降解產(chǎn)物被發(fā)現(xiàn)是低毒的。在正常的機(jī)體代謝功能，這些聚合物降解為二氧化碳和水。這些聚合物也呈現(xiàn)很好的生物相容性。
為延長(zhǎng)公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物和其它生物活性劑以及可選的遞送-增強(qiáng)劑的生物活性，這些試劑可以摻入進(jìn)多聚體的基質(zhì)，例如，聚原酸酯、聚酐、或聚酯。這產(chǎn)生活性劑，例如，通過(guò)聚合物基質(zhì)的降解作用而定的持續(xù)的活性和釋放。雖然包括在合成聚合物內(nèi)的生物治療分子的膠囊化可能在儲(chǔ)存和遞送時(shí)穩(wěn)定它們，基于聚合物的釋放技術(shù)的最大的障礙是在制劑過(guò)程中治療分子的活性喪失，此過(guò)程通常包括加熱、聲裂法或有機(jī)溶劑。
預(yù)期用于本發(fā)明的吸收促進(jìn)聚合物包括化學(xué)或物理修飾的上述類聚合物的衍生物，除了其它天然發(fā)生或合成的聚合物、樹(shù)膠、樹(shù)脂和其它試劑，以及這些物質(zhì)間或這些物質(zhì)與其它聚合物的混合物，只要變化、修飾或混合不會(huì)不利地影響期望的性能，例如水吸收、水凝膠形成、和/或有用的應(yīng)用的化學(xué)穩(wěn)定性。在本發(fā)明更細(xì)的方面，聚合物例如尼龍、丙烯酸酯(acrylan)和其它通常疏水的合成聚合物，可能通過(guò)反應(yīng)充分修飾而變成水可膨脹的和/或在水性介質(zhì)中形成穩(wěn)定的膠。
本發(fā)明的吸收-促進(jìn)聚合物包括由基于以下乙烯單體多種組合的同-和共-聚合物的組的聚合物丙烯酸和甲基丙烯酸、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、羥基乙基丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯、乙烯吡咯烷酮、以及聚乙烯醇和其共-和三聚合物、聚醋酸乙烯、和它與以上所述單體的共-和三聚合物以及2-丙烯酰胺基-2-甲基-丙磺酸(AMPS)。非常有用的還有以上所述單體與可共聚物官能的單體的共聚物，所述單體例如丙烯酰基或異丁烯酰胺丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯，其中酯基團(tuán)來(lái)自直鏈或支鏈烷基，烷基最多有四個(gè)芳香環(huán)其中包括1-6個(gè)碳的烷基取代物；甾體的、硫酸的、磷酸的或陽(yáng)離子單體例如N，N-二甲氨基烷基(甲基)丙烯酰胺、二甲氨基烷基(甲基)丙烯酸酯、(甲基)丙烯氧烷基三甲基氯化銨、(甲基)丙烯氧烷基二甲基苯氯化銨。
本發(fā)明所用另外的吸收-促進(jìn)聚合物被分為葡聚糖、糊精、從物質(zhì)分類分作天然的樹(shù)膠和樹(shù)脂，或從天然的聚合物類例如加工的膠原、甲殼質(zhì)、殼聚糖、普拉蘭(pullalan)、阻隔蘭(zooglan)、藻朊酸鹽和修飾的藻朊酸鹽例如“可口勞得(Kelcoloid)”(聚丙二醇修飾的藻朊酸鹽)、膠凝糖樹(shù)膠例如“(可口膠Kelocogel)”、愛(ài)卡那散(Xanathan)樹(shù)膠例如“可儲(chǔ)(Keltrol)”、谷胱甘肽(estastin)、α-羥基丁酸酯及其共聚物、透明質(zhì)酸及其衍生物、聚乳酸和羥乙酸。
一類有用的可用于本發(fā)明的聚合物是烯屬的非飽和羧酸，包括至少一個(gè)活性的碳到碳的烯屬的雙鍵，和至少一個(gè)羧基基團(tuán)；即一種酸或能轉(zhuǎn)化成酸的官能團(tuán)，包括一個(gè)在聚合中易起作用的烯屬的雙鍵，因?yàn)樗嬖谟趩误w分子，或者是相對(duì)于一個(gè)羧基基團(tuán)的α-β位置或者是一個(gè)末端亞甲基基團(tuán)的部分。這類烯屬的非飽和酸包括這些物質(zhì)，以丙烯酸為特征的丙烯酸自身、α-氰丙烯酸、β-甲基丙烯酸(巴豆酸)、α-苯丙烯酸、β-丙烯酰氧丙酸、肉桂酸、對(duì)氯肉桂酸、1-羧基-4-苯丁二烯-1，3，-亞甲基丁二酸、順甲基丁烯二酸、甲基反丁烯二酸、戊烯二酸、丙烯三羧酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸和三羧基乙烯。如在此所用，名詞“羧酸”包括聚羧酸和那些酸酐，例如順式丁烯二酸酐，其中酐基團(tuán)是通過(guò)從位于同一羧酸分子的兩個(gè)羧基基團(tuán)除去一個(gè)水分子而形成的。
本發(fā)明用作吸收-促進(jìn)劑的代表性的丙烯酸酯包括丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸異丙酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸異丁酯、甲基丙烯酸甲酯、乙基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、丙烯酸辛酯、丙烯酸庚酯、甲基丙烯酸辛酯、甲基丙烯酸異丙酯、2-甲基丙烯酸乙基己酯、丙烯酸壬酯、丙烯酸己酯、甲基丙烯酸正己酯和類似物。更高烷基的丙烯酸的酯類是丙烯酸癸酯、甲基丙烯酸異癸酯、丙烯酸月桂酯、丙烯酸硬脂酰酯、丙烯酸二十二酯和丙烯酸三十酯和它們的甲基丙烯酸酯。兩種或三種或更長(zhǎng)鏈丙烯酸酯的混合物可成功與一種羧基單體聚合。其它共單體包括烯烴，包括α-烯烴、乙烯醚、乙烯酯和它們的混合物。
其它亞乙烯基單體，包括丙烯腈，也可用作本發(fā)明中的方法和組合物的吸收-促進(jìn)劑以增強(qiáng)一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物和其它生物活性劑的遞送和吸收，包括增強(qiáng)活性劑到個(gè)體的一個(gè)靶向組織或間隔(例如，肝臟、肝門(mén)靜脈、中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織或流體、或血漿)的遞送。有用的有3-10碳原子的α-、β-烯屬的非飽和腈是優(yōu)選的單體烯屬的非飽和腈，例如丙烯腈、甲基丙烯腈和類似物。最優(yōu)選的是丙烯腈和甲基丙烯腈。從3到35碳原子的丙烯酸的酰胺包括單烯屬的非飽和酰胺也能使用。代表性的酰胺包括丙烯酰胺、異丁烯酰胺、N-叔丁基丙烯酰胺、N-環(huán)己基丙烯酰胺、更高的烷基的酰胺，其中氮上的烷基基團(tuán)包含從8到32的碳原子，丙烯酸的酰胺包括α-、β-烯屬的非飽和羧酸的N-羥基酰胺，包括那些有從4到10碳原子的，例如N-羥甲基丙烯酰胺、N-丙醇丙烯酰胺、N-羥甲基異丁烯酰胺、N-羥甲基順丁烯二酰亞胺、N-羥甲基馬來(lái)酰胺酸酯、N-羥甲基-對(duì)乙烯基苯甲酰胺和類似物。
更多有用的吸收促進(jìn)物質(zhì)是α-烯烴，包括從2到18碳原子，更優(yōu)選地從2到8碳原子；二烯包括從4到10碳原子；乙烯酯和烯丙酯例如醋酸乙烯酯；乙烯基芳族化合物例如苯乙烯、甲基苯乙烯和氯苯乙烯；乙烯和烯丙基醚和酮例如乙烯甲基醚和甲基乙烯酮；氯丙烯酸酯；氰烷基丙烯酸酯例如α-氰甲基丙烯酸酯，和α-、β-和γ-氰丙基丙烯酸酯；烷氧基丙烯酸酯例如甲氧乙基丙烯酸酯；鹵素丙烯酸酯如氯乙基丙烯酸酯；鹵乙烯和氯乙烯，二氯乙烯和類似物；二乙烯、二丙烯酸酯和其它聚合官能性單體例如二乙烯醚、二甘醇二丙烯酸酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯、亞甲基-雙-丙烯酰胺、烯丙基季戊四醇和類似物；和雙(β-鹵素烷基)烯基磷酸酯例如雙(β-氯乙基)乙烯磷酸酯和類似物作為本領(lǐng)域已知的技術(shù)。其中含羧基的單體是少數(shù)組分，和其它以多數(shù)組分存在的亞乙烯基單體的共聚物易于用公布于此的方法制備。
當(dāng)水凝膠是作為本發(fā)明的吸收促進(jìn)劑，這些可以由合成的共聚物組成，共聚物選自丙烯酸和甲基丙烯酸、丙烯酰胺、異丁烯酰胺、羥基乙基丙烯酸酯(HEA)或甲基丙烯酸酯(HEMA)、和與水相互作用的和水可膨脹的乙烯吡咯烷酮組成的組。有用的聚合物特定的說(shuō)明實(shí)例，特別是對(duì)肽或蛋白遞送，是以下類聚合物(甲基)丙烯酰胺和0.1到99wt.％(甲基)丙烯酸；(甲基)丙烯酰胺和0.1-75wt％(甲基)丙烯酰氧乙基三甲基氯化銨；(甲基)丙烯酰胺和0.1-75wt％(甲基)丙烯酰胺；丙烯酸和0.1-75wt％烷基(甲基)丙烯酸酯；(甲基)丙烯酰胺和0.1-75wt％AMPS.RTM.(Lubrizol Corp.的商標(biāo))；(甲基)丙烯酰胺和0到30wt％烷基(甲基)丙烯酰胺和0.1-75wt％AMPS.RTM.；(甲基)丙烯酰胺和0.1-99wt.％HEMA；(甲基)丙烯酰胺和0.1到75wt％HEMA和0.1到99％(甲基)丙烯酸；(甲基)丙烯酸和0.1-99wt％HEMA；50mole％乙烯醚和50mole％馬來(lái)酸酐；(甲基)丙烯酰胺和0.1到75wt％(甲基)丙烯基氧烷基二甲基苯甲基氯化銨；(甲基)丙烯酰胺和0.1到99wt％乙烯吡咯烷酮；(甲基)丙烯酰胺和50wt％乙烯吡咯烷酮和0.1-99.9wt％(甲基)丙烯酸；(甲基)丙烯酸和0.1到75wt％AMPS.RTM.和0.1-75wt％烷基(甲基)丙烯酰胺。在以上的實(shí)例中，烷基指C1到C30，優(yōu)選地C1到C22，直線的和分枝的和C4到C16環(huán)狀的；其中(甲基)是被用于指包括有或無(wú)甲基基團(tuán)的單體。其它非常有用的水凝膠聚合物是水可膨脹的、但不可溶的聚(乙烯吡咯烷酮)淀粉、羧甲基纖維素和聚乙烯醇。
在本發(fā)明中有用的另外的多聚體的水凝膠物質(zhì)包括(聚)羥基烷基(甲基)丙烯酸酯；陰離子的和陽(yáng)離子的水凝膠；聚(電解質(zhì))復(fù)合物；有低醋酸殘基的聚(乙烯醇)；可膨脹的交聯(lián)的瓊脂和交聯(lián)的羧甲基纖維素的混合物；可膨脹的組合物包括甲基纖維素混合一種略微交聯(lián)的瓊脂；水可膨脹的產(chǎn)生于馬來(lái)酸酐與苯乙烯、乙烯、丙烯、或異丁烯精細(xì)分開(kāi)的共聚物的分散相的共聚物；水可膨脹的N-乙烯內(nèi)酰胺的聚合物；可膨脹的羧甲基纖維素的鈉鹽；及其類似物。
用于形成本發(fā)明中用于生物活性劑粘膜遞送的親水的水凝膠的其它可變成膠的、流體吸液和保留的聚合物包括果膠；多糖例如瓊脂、阿拉伯膠、梧桐膠、菱百(tragacenth)、藻膠和瓜耳樹(shù)膠和它們的交聯(lián)物；丙烯酸聚合物、共聚物和鹽衍生物、多聚丙烯酰胺；水可膨脹的茚馬來(lái)酸酐聚合物；淀粉接枝共聚物；有大約2到400倍其原重的水吸收能力的丙烯酸酯類聚合物和共聚物；聚葡萄糖的二酯；交聯(lián)的多聚(乙烯醇)和多聚(N-乙烯-2-吡咯烷酮)的混合物；聚氧丁烯-多聚乙烯嵌段共聚物膠；豆角膠；多聚酯膠；多聚尿素膠；多聚醚膠；聚酰胺膠；聚酰亞胺膠；多肽膠；多聚氨基酸膠；多聚纖維質(zhì)膠；交聯(lián)的茚-馬來(lái)酸酐丙烯酸酯聚合物；和多糖。
用于本發(fā)明中的合成的水凝膠聚合物由幾種單體以幾種比例的一個(gè)無(wú)限聯(lián)合制備。水凝膠能交聯(lián)并且一般有能力浸滲和吸收液體并膨脹或伸展成放大平衡狀態(tài)。水凝膠典型地在到鼻的粘膜表面時(shí)膨脹或伸展，吸收大約2-5、5-10、10-50、到50-100或更多倍自身重量的水。給定的水凝膠的最好程度的膨脹性決定于不同的生物活性劑，依賴于這些因子例如活性劑的分子量、大小、溶解性和滲透特征，活性劑運(yùn)載于或包容于或封裝于聚合物，并依賴于與每種聚合物有關(guān)的特異的間隔和協(xié)同鏈運(yùn)動(dòng)。
本發(fā)明有用的親水的聚合物是水不可溶的但水可膨脹的。這樣的水膨脹聚合物典型地指水凝膠或膠。這樣的膠從水溶聚合物通過(guò)利用合適的交聯(lián)劑的交聯(lián)聚合物過(guò)程容易地制備。但，穩(wěn)定的水凝膠可從特異的聚合物在確定的pH、溫度和/或離子濃度的條件下依據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)形成。典型地聚合物是交聯(lián)的，那是說(shuō)，交聯(lián)到某程度以至聚合物擁有好的親水的性能，有改進(jìn)的物理整體性(與相同或相似類的非交聯(lián)的聚合物比較)并且展示改進(jìn)維持在膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中的共給藥的感興趣的生物活性劑和另外的復(fù)合物的能力，另外的復(fù)合物例如細(xì)胞因子或酶抑制劑，同時(shí)維持在適當(dāng)?shù)牡攸c(diǎn)和時(shí)間釋放活性劑的能力。
通常用于本發(fā)明的水凝膠聚合物是與雙官能性交聯(lián)劑以交聯(lián)劑的從0.01到25重量百分?jǐn)?shù)的量交聯(lián)的，基于形成共聚物的單體重量，和更優(yōu)選地從0.1到20重量百分?jǐn)?shù)和更經(jīng)常的從0.1至15重量百分?jǐn)?shù)。另一種交聯(lián)劑的有用劑量是0.1到10重量百分?jǐn)?shù)。三、四或更高多官能性交聯(lián)劑也可使用。當(dāng)這種試劑被用時(shí)，要求更少的劑量以獲得相等的交聯(lián)密度，即，交聯(lián)的程度，或足夠有效包含生物活性劑的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)性能。
交聯(lián)能是共價(jià)的、離子的或氫鍵，與在含水液體存在時(shí)有膨脹的能力的聚合物相連。這樣的交聯(lián)子和交聯(lián)反應(yīng)對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員是已知的，并在許多情況依賴聚合物體系。因此交聯(lián)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可通過(guò)自由基的非飽和單體的共聚合而形成。多聚體的水凝膠也可通過(guò)交聯(lián)預(yù)先形成的聚合物而形成，通過(guò)把在聚合物上發(fā)現(xiàn)的官能團(tuán)反應(yīng)，這些反應(yīng)官能團(tuán)例如帶有乙二醛、甲醛、或戊二醛、雙酐和類似物等基團(tuán)的醇、酸、胺。
聚合物也可交聯(lián)于任何聚烯，例如癸二烯或三乙烯環(huán)己烷；丙烯酰胺，例如N，N-亞甲基-雙(丙烯酰胺)；多聚官能性丙烯酸酯，例如三羥甲基丙烷三丙烯酸酯；或多聚官能性亞乙烯基單體包括至少2個(gè)末端的CH2＜基團(tuán)，包括，例如，雙乙烯苯、雙乙烯萘、烯丙基丙烯酸酯和類似物。某些實(shí)施例中，用于制備共聚物的交聯(lián)單體是每個(gè)分子有一個(gè)以上烯基醚基團(tuán)的多聚烯基多聚醚，它能選擇性地?fù)碛邢┗鶊F(tuán)，烯基基團(tuán)中一個(gè)烯屬的雙鍵連接于一個(gè)末端的亞甲基基團(tuán)(例如，包括至少2個(gè)碳原子和至少2羥基基團(tuán)的多元醇的醚化而制備)。這類化合物可通過(guò)將烯基鹵化物與一種或多種多元醇的強(qiáng)堿性的水溶液反應(yīng)來(lái)生產(chǎn)，烯基鹵化物例如烯丙基氯化物或烯丙基溴化物。產(chǎn)物可以是帶有不同數(shù)量醚基團(tuán)的多聚醚的復(fù)合混合物。多聚醚交聯(lián)劑的效率隨分子上潛在可聚合基團(tuán)的數(shù)量而增加。典型地，每個(gè)分子包括平均兩個(gè)或多個(gè)烯基醚基團(tuán)的多聚醚被使用。其它交聯(lián)單體包括例如，雙烯丙基酯、雙甲代烯丙基醚、烯丙基或甲代烯丙基丙烯酸酯和丙烯酰胺、四乙烯硅烷、多聚烯基甲烷、雙丙烯酸酯和雙甲基丙烯酸酯、雙乙烯復(fù)合物例如雙乙烯苯、多聚烯丙基磷酸酯、雙烯丙基氧基復(fù)合物和亞磷酸酯和類似物。典型的試劑是烯丙基季戊四醇、烯丙基蔗糖、三羥甲基丙烷三丙烯酸酯、1，6-己二醇雙丙烯酸酯、三羥甲基丙烷雙烯丙基醚、季戊四醇三丙烯酸酯、四亞甲基雙甲基丙烯酸酯、乙烯雙丙烯酸酯、乙烯雙甲基丙烯酸酯、三乙二醇雙甲基丙烯酸酯和類似物。烯丙基季戊四醇、三羥甲基丙烷雙烯丙基醚和烯丙基蔗糖提供合適的聚合物。當(dāng)存在交聯(lián)劑時(shí)，多聚體的混合物通常包含大約0.01到20之間的重量百分?jǐn)?shù)，例如，基于總羧酸單體加上其它單體的重量1％、5％、或10％或更多的交聯(lián)單體。
在本發(fā)明更細(xì)的方面，公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物和其它生物活性劑的粘膜遞送通過(guò)保持活性劑于一種緩慢釋放或酶地或生理地保護(hù)的載體或運(yùn)輸工具而增強(qiáng)，例如保護(hù)活性劑不受降解酶活性作用的水凝膠。在某些實(shí)例，活性劑通過(guò)化學(xué)方式連接于載體或運(yùn)輸工具，后者也可以和添加劑例如酶抑制劑、細(xì)胞因子等混合或結(jié)合。活性劑可選擇性的通過(guò)在載體或運(yùn)輸工具中，例如聚合物基質(zhì)，的足夠的物理包容而固定。
用于本發(fā)明的聚合物例如水凝膠可摻入官能性連接劑例如糖苷，其化學(xué)摻入進(jìn)聚合物以提高制備的活性劑的鼻內(nèi)生物有效性。這樣糖苷的實(shí)例是葡萄糖苷、果糖苷、半乳糖苷、阿糖胞苷、甘露糖苷和它們的烷基取代衍生物和天然的糖苷例如熊果酚甙、根皮苷、苦杏仁苷、洋地黃皂甙、皂角甙和吲哚甙。典型糖苷可以多種方式結(jié)合于聚合物。例如，糖苷或其它相似碳水化合物的羥基基團(tuán)的氫可以被水凝膠聚合物的烷基基團(tuán)取代而形成醚。而且在原位，糖苷的羥基基團(tuán)可和多聚體的水凝膠的羧基基團(tuán)酯化反應(yīng)形成多聚體的酯。另一個(gè)方法是用溴代乙酰葡萄糖和在順丁烯二酸的共聚物上的膽甾-5-內(nèi)-3β-醇縮合。N-取代多聚丙烯酰胺能通過(guò)活性聚合物和末尾的胺烷基糖苷的反應(yīng)合成(1)(碳水化合物-間隔物)(n)-多聚丙烯酰胺，`假多糖`；(2)(碳水化合物間隔物)(n)-磷脂酰乙醇胺(m)-多聚丙烯酰胺、新糖脂、磷脂酰乙醇胺的衍生物；(3)(碳水化合物-間隔物)(n)-生物素(m)-多聚丙烯酰胺。這些生物素化的衍生物能連接粘膜表面上的凝集素以促進(jìn)生物活性劑的吸收，生物活性劑例如，聚合物-包被的葡萄糖調(diào)節(jié)肽。
本發(fā)明更細(xì)的方面，一種或多種公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物、和/或其它生物活性劑，選擇地包括二級(jí)活性劑例如蛋白酶抑制劑、細(xì)胞因子、另外的細(xì)胞內(nèi)連接的生理學(xué)的調(diào)節(jié)劑等，是修飾的和結(jié)合于多聚體的載體或基質(zhì)。例如，這可以通過(guò)在交聯(lián)的聚合物的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中化學(xué)結(jié)合肽或蛋白質(zhì)活性劑和其它選擇性的試劑完成。也可能分別用一種相互作用劑例如包括糖苷的分子化學(xué)修飾聚合物。在某些方面，生物活性劑和選擇的二級(jí)活性劑，可能是官能化的，即其中一種合適的反應(yīng)基團(tuán)被鑒定或化學(xué)地加到活性劑。最經(jīng)常地一個(gè)乙烯可聚合基團(tuán)被加上，并且然后官能化的活性劑與單體和交聯(lián)劑用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的聚合化方法共聚合，聚合方法例如溶液聚合化(經(jīng)常在水中)、乳劑、懸液或分散相聚合化。經(jīng)常，官能化試劑以對(duì)官能性或可聚合基團(tuán)足夠高的濃度使用以保證活性劑的多個(gè)位點(diǎn)功能化。例如，多肽中包括16個(gè)胺基位點(diǎn)，一般期望官能化至少2、4、5、7、到8或更多的位點(diǎn)。
官能化后，官能化的活性劑與單體和包含感興趣的形成聚合物的試劑的交聯(lián)劑混合。之后在此基質(zhì)中誘導(dǎo)聚合化以產(chǎn)生包括所結(jié)合的活性劑的聚合物。之后聚合物以水或其它合適的溶劑洗滌，并另外純化以除去未反應(yīng)的微量雜質(zhì)，如需要，研磨或用物理的方式破壞，例如攪拌、用力推過(guò)一個(gè)篩子、超聲粉碎或其它合適的方法以得到期望的顆粒大小。溶劑，通常是水，之后用不使得活性劑變性或降解活性劑的方式除去。一種期望的方法是低壓凍干法(冷凍干燥)但其它方法是可得到的和可用的(例如真空干燥、空氣干燥、噴霧干燥等)。
為引入可聚合基團(tuán)到本發(fā)明的肽、蛋白質(zhì)和其它活性劑中，可能將可得的氨基、羥基、巰基和其它活性基團(tuán)與包括親電子試劑的非飽和基團(tuán)反應(yīng)。例如，包括N-羥基琥珀酰亞胺基團(tuán)的非飽和單體、活性的碳酸酯例如對(duì)硝基苯基碳酸酯、三氯苯基碳酸酯、三聚丙烯酸酯(tresylate)、氧羰基咪唑、環(huán)氧化物、異氰酸酯和醛和非飽和的羧基甲基疊氮化合物和非飽和正吡啶基二硫化物屬于這類試劑。示意性的非飽和試劑的實(shí)例是烯丙基縮水甘油基醚、烯丙基氯、烯丙基溴、烯丙基碘、丙烯酰氯、烯丙基異氰酸酯、烯丙基磺酰氯、馬來(lái)酸酐、馬來(lái)酸酐和烯丙基醚的共聚物和類似物。
所有賴氨酸活性衍生物，除了醛，能通常與其它氨基酸例如組氨酸的咪唑基團(tuán)和酪氨酸的羥基基團(tuán)和胱氨酸的巰基基團(tuán)反應(yīng)，如果位點(diǎn)的環(huán)境增強(qiáng)這些基團(tuán)的親核性。包括醛官能化的試劑是賴氨酸特異的。這類與賴氨酸、半胱氨酸、酪氨酸的可得的基團(tuán)的反應(yīng)已經(jīng)被在文獻(xiàn)中大量報(bào)道并被本領(lǐng)域的技術(shù)人員所知。
在生物活性劑包含胺基基團(tuán)的情況，將這些基團(tuán)與一種酰氧基氯反應(yīng)，例如丙烯酰氯，和引入可聚合的丙烯酸基團(tuán)到反應(yīng)劑上是方便的。然后在制備聚合物的過(guò)程中，例如丙烯酰胺和丙烯酸的共聚物的交聯(lián)過(guò)程中，官能化活性劑，通過(guò)丙烯酸的基團(tuán)，連接到聚合物并結(jié)合在那里。
在本發(fā)明另外的方面，生物活性劑，包括肽、蛋白質(zhì)、核苷、及體內(nèi)生物活性的其它分子，是通過(guò)共價(jià)連接一種或多種活性劑到聚合物而穩(wěn)定共軛的，與其整合為一個(gè)整體部分，既有親水的部分例如直線的聚烷撐二醇，又有一個(gè)親脂的部分(參考例如美國(guó)專利No.5,681,811)。在一方面，生物活性劑是與聚合物共價(jià)配對(duì)的，聚合物包括(i)直線的多聚烷撐二醇部分和(ii)一個(gè)親脂的部分，其中的活性劑即直線的多聚烷撐二醇部分，和親脂的部分是構(gòu)象地相互布置的，所以活性治療劑有增強(qiáng)的體內(nèi)抗酶降解作用(即相對(duì)于它在相似的條件下，以一種非共軛形式，沒(méi)有配對(duì)聚合物的穩(wěn)定性)。在另一個(gè)方面，共軛穩(wěn)定的制劑有一種三維構(gòu)象，包括生物活性劑與聚山梨酸酯復(fù)合物共價(jià)配對(duì)的，聚山梨酸酯復(fù)合物包括(i)直線的多聚烷撐二醇部分和(ii)一個(gè)親脂的部分，其中的活性劑即直線的多聚烷撐二醇部分和親脂的部分是構(gòu)象地相互布置的，所以(a)親脂的部分在三維構(gòu)象是外部可獲得的，和(b)組合物中的活性劑有增強(qiáng)的體內(nèi)抗酶降解作用。
在進(jìn)一步的相關(guān)方面，提供了一種多配體共軛的復(fù)合物，它包含生物活性劑，生物活性劑與甘油三酸酯骨架部分共價(jià)配對(duì)，共價(jià)配對(duì)通過(guò)一個(gè)多聚烷撐二醇間隔物基團(tuán)結(jié)合在甘油三酸酯骨架部分的一個(gè)碳原子，和至少一個(gè)脂肪酸部分共價(jià)直接連接到甘油三酸酯骨架部分的一個(gè)碳原子或通過(guò)一個(gè)多聚烷撐二醇間隔物部分共價(jià)結(jié)合(參考例如美國(guó)專利No.5,681,811)。在這樣一個(gè)多配體共軛的治療劑復(fù)合物，甘油三酸酯生物活性部分的α’和β碳原子可能與脂肪酸部分連接，通過(guò)直接地共價(jià)連接或者間接地通過(guò)多聚烷撐二醇間隔物部分共價(jià)結(jié)合。二中擇一的，一個(gè)脂肪酸部分可能直接或間接通過(guò)一個(gè)多聚烷撐二醇間隔物部分共價(jià)連接甘油三酸酯骨架部分的α和α′的碳，生物活性治療劑與甘油三酸酯骨架部分的γ-碳共價(jià)地配對(duì)，或者直接共價(jià)結(jié)合或通過(guò)一個(gè)多聚烯基間隔物部分間接結(jié)合。已認(rèn)識(shí)到在本發(fā)明范圍內(nèi)，多種結(jié)構(gòu)的、組合的和構(gòu)象的形式對(duì)包括甘油三酸酯骨架部分的多配體共軛的治療劑復(fù)合物是可能的。進(jìn)一步注意到在本發(fā)明的范圍內(nèi)，在這樣的多配體共軛的治療劑復(fù)合物中，生物活性劑可能有利地與甘油三酸酯修飾的骨架部分通過(guò)烷基間隔物基團(tuán)，或二中擇一的其它可接受的間隔物基團(tuán)共價(jià)配對(duì)。如在這些內(nèi)容所用，間隔物基團(tuán)的可接受性指立體的、組合的、和最后用途應(yīng)用特異的可接受性特征。
在本發(fā)明的更多方面，一種共軛穩(wěn)定的復(fù)合物是被提供的，它包含聚山梨酸酯復(fù)合物，其包括聚山梨酸酯部分，包括一個(gè)甘油三酸酯骨架有共價(jià)配對(duì)到α、α′和β碳原子的官能化基團(tuán)包括(i)一個(gè)脂肪酸基團(tuán)；和(ii)一個(gè)聚乙二醇基團(tuán)有一個(gè)生物活性劑或部分共價(jià)結(jié)合的，例如結(jié)合到聚乙二醇基團(tuán)的一個(gè)合適的官能域。這樣的共價(jià)結(jié)合可能是或者直接的，例如到聚乙二醇基團(tuán)的一個(gè)羥基末端的官能性域，或二中擇一的，共價(jià)結(jié)合可能是非直接的，例如通過(guò)以一個(gè)末端的羧基功能域間隔物基團(tuán)反應(yīng)地加帽聚乙二醇基團(tuán)的羥基末端，以至所得加帽的聚乙二醇基團(tuán)有一個(gè)末端的羧基官能域，生物活性劑或部分可能共價(jià)與之結(jié)合。
在本發(fā)明的更多方面，一種穩(wěn)定、水溶的、共軛穩(wěn)定的復(fù)合物是提供的，包括公布于此的一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物、和/或其它生物活性劑共價(jià)地配對(duì)的到生理相容的聚乙二醇(PEG)修飾的糖脂部分。在這些復(fù)合物中，生物活性劑可以通過(guò)在活性劑游離氨基酸基團(tuán)的一個(gè)不穩(wěn)定的共價(jià)鍵，共價(jià)地配對(duì)到生理相容的PEG修飾的糖脂部分，其中不穩(wěn)定的共價(jià)鍵是在體內(nèi)通過(guò)生物化學(xué)水解和/或蛋白水解作用可切斷的。生理相容的PEG修飾的糖脂部分可能有利地包含聚山梨酸酯聚合物，例如聚山梨酸酯聚合物，包括脂肪酸酯基團(tuán)選自單軟脂酸酯、二棕櫚酸酯、單月桂酸酯、二月桂酸酯、三月桂酸酯、單油酸酯、雙油酸酯、三油酸酯、單硬脂酸酯、二硬脂酸酯和三硬酯酸酯組成的組。在這些復(fù)合物中，生理相容的PEG修飾的糖脂部分可適合包含聚合物，聚合物選自脂肪酸的聚乙二醇醚和脂肪酸的聚乙二醇酯組成的組，其中脂肪酸例如包含一種脂肪酸，選自月桂酸、棕櫚酸、油酸和硬脂酸組成的組。
材料的儲(chǔ)藏在本發(fā)明的某些方面，在此處聯(lián)合制劑和/或協(xié)同給藥方法摻入有效量的肽和蛋白質(zhì)，后者可粘附于帶電荷的玻璃從而減少容器內(nèi)有效濃度。硅烷化的容器，例如，硅烷化玻璃容器，是適于儲(chǔ)存終產(chǎn)物以減少多肽或蛋白質(zhì)向玻璃容器的吸附。
在本發(fā)明另外的方面，治療哺乳動(dòng)物受試者的試劑盒包括穩(wěn)定的粘膜遞送到哺乳動(dòng)物受試者的一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽復(fù)合物制劑的藥物組合物，其中組合物是有效緩解肥胖癥、癌癥、或營(yíng)養(yǎng)不良或所述個(gè)體與癌癥相關(guān)的萎縮的一種或多種癥狀，無(wú)不可接受的不良副反應(yīng)。試劑盒進(jìn)一步包括一個(gè)藥物試劑瓶以包含一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽復(fù)合物。藥物試劑瓶由藥物級(jí)聚合物、玻璃或其它合適的材料組成。藥物試劑瓶是例如一個(gè)硅烷化玻璃瓶。試劑盒進(jìn)一步包括遞送組合物到受試者的鼻粘膜表面的一個(gè)孔。遞送孔是由一種藥物級(jí)聚合物、玻璃或其它合適的材料組成的。遞送孔是，例如，一種硅烷化玻璃。
硅烷化技術(shù)結(jié)合表面在低壓下經(jīng)過(guò)一個(gè)硅烷化的過(guò)程而硅烷化的一個(gè)特殊的凈化技術(shù)。硅烷在氣相中并且以將要被硅烷化的表面的高溫度。此方法提供一個(gè)穩(wěn)定、一致的和有單層特征的功能性硅烷層的可再生的表面。硅烷化的表面防止玻璃與本發(fā)明多肽或粘膜遞送增強(qiáng)劑的結(jié)合。
本過(guò)程對(duì)制備硅烷化藥物試劑瓶是有用的，以裝載本發(fā)明的葡萄糖調(diào)節(jié)肽組合物。玻璃盤(pán)通過(guò)用前用雙蒸水(ddH2O)沖而清洗。硅烷盤(pán)之后用95％EtOH沖，丙酮盤(pán)用丙酮沖。藥物試劑瓶在丙酮中聲處理10分鐘。丙酮中聲處理后試劑瓶在ddH2O盤(pán)中洗滌至少兩次。試劑瓶在0.1MNaOH中聲處理10分鐘。當(dāng)試劑瓶在NaOH中聲處理時(shí)，硅烷溶液在一個(gè)通風(fēng)櫥中制備。(硅烷溶液800mL 95％乙醇；96L冰醋酸；25mL縮水甘油基氧丙基三甲氧硅烷)。NaOH聲處理后，試劑瓶在雙蒸水盤(pán)中洗滌至少兩次。試劑瓶在硅烷溶液中聲處理3-5分鐘。試劑瓶在100％EtOH盤(pán)中洗滌。試劑瓶用預(yù)純化N2氣干燥并在用前儲(chǔ)藏在100℃烤箱中至少2小時(shí)。
生物粘附遞送運(yùn)輸工具和方法在本發(fā)明的某些方面，聯(lián)合制劑和/或協(xié)同給藥方法在此處摻入有效量的非毒性生物粘附劑作為添加劑復(fù)合物或載體以增強(qiáng)一種或多種生物活性劑的粘膜遞送。在本文生物粘附劑展示與靶向的粘膜一個(gè)或多個(gè)組分或表面通常的或特異的粘附。生物粘附劑維持期望濃度梯度的生物活性劑進(jìn)入或穿越粘膜以確保甚至大分子(例如肽和蛋白質(zhì))進(jìn)入或穿越粘膜上皮的滲透。典型地，本發(fā)明中的方法和組合物所用的生物粘附劑產(chǎn)生進(jìn)入或穿越粘膜上皮滲透的肽和蛋白質(zhì)2-到5-倍，經(jīng)常地5-到10-倍的增長(zhǎng)。這種上皮滲透增強(qiáng)通常允許大分子的有效穿越粘膜遞送，例如鼻上皮的基底的部分或進(jìn)入鄰近的細(xì)胞外間隔或血漿或中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織或流體。
增強(qiáng)的遞送提供了更改進(jìn)的生物活性肽、蛋白質(zhì)和其它大分子的治療物質(zhì)的遞送的有效性。這些結(jié)果部分依賴于復(fù)合物的親水性，因?yàn)榕c水不可溶的復(fù)合物相比，更多的滲透是通過(guò)親水物質(zhì)實(shí)現(xiàn)的。除了這些效應(yīng)，為增強(qiáng)藥物在粘膜表面的持續(xù)性而使用的生物粘附劑能引起用于延長(zhǎng)藥物遞送的貯器機(jī)制，因?yàn)閺?fù)合物不僅穿越粘膜組織而且也反向-擴(kuò)散向粘膜表面，當(dāng)表面的物質(zhì)用盡時(shí)。
多種合適的生物粘附劑公布于口服給藥領(lǐng)域，美國(guó)專利No.3,972,995；4,259,314；4,680,323；4,740,365；4,573,996；4,292,299；4,715,369；4,876,092；4,855,142；4,250,163；4,226,848；4,948,580；美國(guó)專利再版33,093，它們用于本發(fā)明新的方法和組合物。本發(fā)明中的方法和組合物的多種生物粘附聚合物作為粘膜的，例如鼻的，遞送平臺(tái)的潛力可易于通過(guò)測(cè)定它們保留和釋放葡萄糖調(diào)節(jié)肽的能力，以及通過(guò)合并其中活性劑之后與粘膜表面相互作用的能力來(lái)評(píng)價(jià)。另外，能使用已知方法以測(cè)定所選聚合物與粘膜給藥位點(diǎn)組織的生物相容性。當(dāng)靶向粘膜被粘液覆蓋(即，在無(wú)粘液溶解的和粘液清潔的治療)，它能作為與下層粘膜上皮的一個(gè)連接子。因此，在此處所用術(shù)語(yǔ)“生物粘附劑”也包括對(duì)增強(qiáng)本發(fā)明粘膜遞送生物活性劑有用的粘膜粘附復(fù)合物。但是，通過(guò)粘附于粘液膠層對(duì)粘膜組織的粘附接觸可受限于粘液層和下面組織之間不完全和瞬時(shí)的粘附，特別在鼻表面，在那里發(fā)生快速的粘液清除。這方面，粘蛋白糖蛋白被不斷的分泌，在它們被細(xì)胞和腺體分泌后立即形成一種粘彈性的膠。然而粘附的膠層的腔表面，是連續(xù)地被機(jī)械地、酶地和/或纖毛活動(dòng)地侵蝕。當(dāng)這種活動(dòng)是更主要的或希望有更長(zhǎng)粘附時(shí)間，本發(fā)明協(xié)同給藥方法和聯(lián)合制劑的方法可進(jìn)一步摻入公布于以上的粘液溶解的和/或纖毛穩(wěn)定的方法和試劑。
典型地，本發(fā)明所用粘膜粘附聚合物是天然的或合成的大分子，它們通過(guò)復(fù)合但是非特異的機(jī)制粘附濕的粘膜組織表面。除了這些粘膜粘附聚合物，本發(fā)明也提供聯(lián)合那些直接粘附細(xì)胞表面的生物粘附劑的方法和組合物，而非通過(guò)特異的包括受體介導(dǎo)的相互作用粘附到粘液。生物粘附劑的一個(gè)例子是那些稱為凝集素的以特異的方式起作用的復(fù)合物組。這些是糖蛋白，它有能力特異地識(shí)別和結(jié)合糖分子，例如糖蛋白或糖脂，后者形成部分鼻內(nèi)上皮的細(xì)胞膜并且能認(rèn)為是“凝集素受體”。
在本發(fā)明的某些方面，增強(qiáng)鼻內(nèi)遞送的生物活性劑的生物粘附物質(zhì)包含親水的基質(zhì)，例如水溶或水可膨脹的聚合物，或那些能粘附于濕的粘膜表面的聚合物的混合物。這些粘附可以制為如藥膏、水凝膠(參考上面)、薄膜和其它應(yīng)用形式。通常，這些粘附混合有生物活性劑以實(shí)現(xiàn)活性劑的緩慢釋放和局部遞送。一些是有另外的成分以促進(jìn)活性劑通過(guò)鼻粘膜的滲透，例如，進(jìn)入個(gè)體的循環(huán)系統(tǒng)。
多種天然的和合成的聚合物，在生理?xiàng)l件下，與粘液和/或粘膜上皮的表面表現(xiàn)顯著的結(jié)合性。這種相互作用的強(qiáng)度可易于通過(guò)機(jī)械削皮(peel)或剪切試驗(yàn)測(cè)量。當(dāng)應(yīng)用于濕的粘膜表面，許多干的物質(zhì)會(huì)自發(fā)粘附，至少是輕微地。這個(gè)初始接觸后，親水的物質(zhì)開(kāi)始通過(guò)吸收、膨脹或毛細(xì)管的力而吸引水，如果水是從下層基質(zhì)或從聚合物-組織的界面吸收來(lái)的，粘附能有效的達(dá)到增加粘膜吸收生物活性劑的目的。這些‘通過(guò)水合粘附’可能是非常強(qiáng)的，但適于用這種機(jī)制的制劑必須考慮膨脹，它連續(xù)的作為劑量轉(zhuǎn)換進(jìn)水合粘液。這反映出對(duì)本發(fā)明中許多有用的水膠體規(guī)劃，特別是纖維素-衍生物，當(dāng)以預(yù)含水態(tài)應(yīng)用時(shí)它通常是非粘附。雖然如此，粘膜給藥的生物粘附藥物遞送系統(tǒng)是在本發(fā)明有效的，當(dāng)這些物質(zhì)用于干的多聚體粉末、微球、或膜類遞送的形式。
其它聚合物粘附于粘膜表面不僅以干態(tài)使用，也在完全水合態(tài)和有過(guò)剩的水存在下。粘膜粘附劑的選擇需要應(yīng)用條件的考慮，生理學(xué)的和生理化學(xué)的，在此條件會(huì)形成和維持與組織的接觸。特別，水量或濕度通常存在于粘附的預(yù)期點(diǎn)，和占優(yōu)勢(shì)的pH，是已知很大影響不同聚合物粘膜粘附的結(jié)合強(qiáng)度。
多種多聚體的生物粘附藥物遞送系統(tǒng)已在過(guò)去的20年被制造和研究了，不總是成功。然而目前多種這樣載體用于臨床應(yīng)用，包括，牙齒的、矯形的、眼科的和外科的使用。例如，基于丙烯酸的水凝膠已被廣泛用于生物粘附設(shè)備。基于丙烯酸的水凝膠非常適于生物粘附，因?yàn)樗鼈兊娜嵝院头悄ノg特征，特別是在部分膨脹態(tài)，這樣減少對(duì)接觸組織造成損壞的磨耗。此外，它們?cè)谂蛎洃B(tài)的高通透性允許未反應(yīng)的單體、未交聯(lián)的聚合物鏈和起始物在聚合后洗出混合物，這是本發(fā)明所選生物粘附物質(zhì)的一個(gè)重要的特征?；诒┧岬木酆衔镌O(shè)備展示非常高的粘附結(jié)合力。為控制粘膜遞送肽和蛋白質(zhì)藥物，本發(fā)明的方法和組合物選擇地包括載體的使用，例如，多聚體的遞送運(yùn)輸工具，它們部分防止蛋白水解降解生物活性劑，然而同時(shí)提供肽或蛋白質(zhì)進(jìn)入或穿越鼻粘膜的增強(qiáng)的滲透。在本文，生物粘附聚合物已顯示非常有效的增強(qiáng)口服藥物遞送。作為一個(gè)例子，9-去甘氨酰胺，8-精氨酸抗利尿激素(DGAVP)十二指腸內(nèi)給藥于大鼠，同時(shí)給藥1％(w/v)粘膜粘附聚(丙烯酸)衍生物聚卡波非的鹽分散相，生物有效性相比于無(wú)這些聚合物的水溶液的肽藥物是3-5倍的增加。
聚(丙烯酸)類的粘膜粘附聚合物是一些腸內(nèi)蛋白酶的有效的抑制劑。酶抑制的機(jī)制解釋為通過(guò)這類聚合物對(duì)二價(jià)陽(yáng)離子強(qiáng)的親和力，例如鈣或鋅，它們是金屬蛋白酶，例如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶，的重要輔助因子。通過(guò)聚(丙烯酸)去除蛋白酶的輔助因子被報(bào)道誘導(dǎo)酶蛋白的不可逆的結(jié)構(gòu)變化，這樣完成酶活性的喪失。同時(shí)，其它粘膜粘附聚合物(例如一些纖維素衍生物和殼聚糖)可能在某些條件下不抑制蛋白水解酶。與其它預(yù)期在本發(fā)明使用的酶抑制劑相反(例如抑肽酶、苯丁抑制素)，后者是相對(duì)的小分子，抑制劑聚合物穿越鼻的吸收可能由于這些分子的大小而最小化，因此消除不良副反應(yīng)的可能性。因此，粘膜粘附聚合物，特別是聚(丙烯酸)類，可能既作為吸收促進(jìn)粘附劑又作為酶保護(hù)劑以增強(qiáng)肽和蛋白質(zhì)藥物的控制遞送，特別是安全性被考慮時(shí)。
除了防止酶的降解作用，本發(fā)明中所用生物粘附劑和其它多聚體的或非多聚體的吸收-促進(jìn)劑可直接增強(qiáng)對(duì)生物活性劑的粘膜通透性。為促進(jìn)大的和親水分子，例如肽和蛋白質(zhì)，運(yùn)輸穿越鼻的上皮屏障，粘膜粘附聚合物和其它試劑已被假定產(chǎn)生增強(qiáng)的滲透影響，除了期望的通過(guò)延長(zhǎng)遞送系統(tǒng)的前粘膜滯留時(shí)間。藥物血漿濃度的時(shí)程報(bào)道提示生物粘附微球造成急性、但瞬時(shí)的胰島素穿越鼻粘膜通透性的增加。其它用于本發(fā)明的粘膜粘附聚合物，例如殼聚糖，報(bào)道增強(qiáng)某些粘膜上皮的通透性，甚至當(dāng)它們作為水溶液或膠使用時(shí)。另一個(gè)據(jù)報(bào)道直接影響上皮通透性的粘膜粘附聚合物是透明質(zhì)酸和其酯衍生物。在本發(fā)明協(xié)同給藥和/或聯(lián)合制劑的方法和組合物中特別有用的生物粘附劑是殼聚糖、以及其類似物和衍生物。殼聚糖是非毒性的、生物相容的和生物可降解聚合物，它廣泛地用于藥物和醫(yī)學(xué)應(yīng)用，因?yàn)樗投竞秃蒙锵嗳菪缘挠欣阅堋Ｋ翘烊坏耐ㄟ^(guò)利用堿的N-脫乙酰作用從甲殼質(zhì)制備的多聚氨基糖。如在本發(fā)明中的方法和組合物使用，殼聚糖增加公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物和其它生物活性劑在粘膜應(yīng)用位點(diǎn)的滯留。此模式的給藥也能改進(jìn)病人的順應(yīng)性和接受性。如在此處進(jìn)一步提供的，本發(fā)明的方法和組合物會(huì)選擇地包括殼聚糖的新的殼聚糖衍生物或化學(xué)修飾的形式。本發(fā)明中使用的一種這樣的新的衍生物是表示為β-[1→4]-2-胍基-2-脫氧-D-葡萄糖聚合物(多聚-GuD)。殼聚糖是甲殼質(zhì)的N-去乙?；a(chǎn)物，一種天然發(fā)生聚合物，它廣泛地用于制備口服和鼻內(nèi)制劑的微球。殼聚糖聚合物還被建議作為腸胃外的藥物遞送的可溶的載體。在本發(fā)明的一個(gè)方面，o-甲基異脲用于轉(zhuǎn)化殼聚糖胺到其胍鹽部分。胍鹽復(fù)合物是通過(guò)例如pH8.0以上的殼聚糖和o-甲基異脲的等-當(dāng)量溶液的反應(yīng)而制備的。
在本發(fā)明中使用的另外的歸于生物粘附劑的復(fù)合物通過(guò)介導(dǎo)特異的相互作用，典型地歸于生物粘附復(fù)合物的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)和粘膜上皮表面組分之間的“受體-配體相互作用”起作用。許多天然的實(shí)例顯示這樣形式的特異性結(jié)合生物粘附，如通過(guò)凝集素-糖相互作用例證。凝集素是非免疫源的(糖)蛋白，它結(jié)合多糖或糖結(jié)合物。
幾種植物凝集素被研究作為可能的藥物吸收促進(jìn)劑。一種植物凝集素腎豆血凝素(PHA)，給大鼠服用后顯示高出10％的高的口服生物有效性。番茄(茄科番茄(Lycopersicon esculeutum))凝集素(TL)顯示對(duì)多種模式給藥的安全性。
總之，上述生物粘附劑是有用于本發(fā)明的聯(lián)合制劑和協(xié)同給藥方法，它選擇地?fù)饺胗行Я亢托问降纳镎掣絼┮匝娱L(zhǎng)一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物、以及其它生物活性劑的持續(xù)性或以其它方式增加粘膜吸收。生物粘附劑可作為添加劑復(fù)合物協(xié)同給藥或作為本發(fā)明聯(lián)合制劑的添加劑。在某些實(shí)例，生物粘附劑作為‘藥物膠’，然而在其它實(shí)例中生物粘附劑的添加遞送或聯(lián)合制劑用作增強(qiáng)生物活性劑與鼻粘膜的接觸，在一些例子中通過(guò)促進(jìn)與上皮細(xì)胞的“受體”特異的受體-配體相互作用，以及在其它例子中通過(guò)增強(qiáng)上皮通透性以顯著地增加在遞送靶向位點(diǎn)(例如，肝臟、血漿、或中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織或流體)測(cè)量的藥物濃度梯度。然而另外的用于本發(fā)明的生物粘附劑作為酶(例如，蛋白酶)抑制劑以增強(qiáng)與生物粘附劑協(xié)同遞送的或聯(lián)合制劑的粘膜給藥的生物治療劑的穩(wěn)定性。
脂質(zhì)體和膠束的遞送運(yùn)輸工具本發(fā)明的協(xié)同給藥方法和聯(lián)合制劑選擇地?fù)饺胗行У幕谥|(zhì)或脂肪酸的載體、加工劑、或遞送運(yùn)輸工具，以為葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物，以及其它生物活性劑的粘膜遞送提供改進(jìn)的制劑。例如，多種制劑和方法提供給粘膜遞送，它包含一種或多種這些的活性劑，例如肽或蛋白質(zhì)，被混合的或被囊的，或通過(guò)協(xié)同給藥的，與脂質(zhì)體、混合的膠束的載體、或乳劑，以在粘膜遞送中增強(qiáng)生物活性劑的化學(xué)的和物理的穩(wěn)定性和增加半衰期(例如，通過(guò)降低對(duì)蛋白質(zhì)水解作用、化學(xué)修飾和/或變性的敏感性)。
在本發(fā)明的某些方面，生物活性劑的特異的遞送系統(tǒng)包含小的脂質(zhì)小囊泡名為脂質(zhì)體。這些是典型地從天然的、生物可降解、非毒性的和非免疫源的脂質(zhì)分子制備的，并且能有效地包容藥物分子或結(jié)合藥物分子，包括肽和蛋白質(zhì)，進(jìn)入它們的膜，或在膜上。本發(fā)明中脂質(zhì)體作為肽和蛋白質(zhì)遞送系統(tǒng)的吸引力是通過(guò)一種事實(shí)而增加的，事實(shí)是被囊的蛋白質(zhì)能保持在小囊泡中它們優(yōu)選的水環(huán)境中，而脂質(zhì)體的膜保護(hù)它們抵抗蛋白水解作用和其它失穩(wěn)因子。即使不是全部脂質(zhì)體已知的制備方法適于肽和蛋白質(zhì)的被囊化，因?yàn)樗鼈儐我坏奈锢砗突瘜W(xué)性能，多種方法允許這些大分子的被囊化并基本無(wú)失活。
多種方法在對(duì)本發(fā)明中使用制備脂質(zhì)體是有效的，美國(guó)專利No.4,235,871、4,501,728和4,837,028。為利用脂質(zhì)體遞送，生物活性劑是典型地包容于脂質(zhì)體內(nèi)、或脂質(zhì)小囊泡內(nèi)，或結(jié)合于小囊泡的外側(cè)。
如脂質(zhì)體，非飽和的長(zhǎng)鏈脂肪酸，它們也有對(duì)粘膜吸收增強(qiáng)的活性，能形成有雙層樣結(jié)構(gòu)的(也稱“尤發(fā)松(ufasomes)”)封閉的小囊泡。在本發(fā)明為粘膜，例如鼻內(nèi)的遞送，這些能通過(guò)，例如，用油酸使生物活性肽和蛋白質(zhì)包容入而形成。
其它用于本發(fā)明的遞送系統(tǒng)結(jié)合聚合物和脂質(zhì)體的使用，以聯(lián)合兩種運(yùn)輸工具的優(yōu)勢(shì)性能例如在天然的聚合物纖維蛋白內(nèi)被囊化。此外，生物治療復(fù)合物從這個(gè)遞送系統(tǒng)的釋放是通過(guò)使用共價(jià)交聯(lián)和向纖維蛋白聚合物添加抗纖維蛋白溶解劑而可控制的。
用于本發(fā)明的更簡(jiǎn)化的遞送系統(tǒng)包括陽(yáng)離子脂質(zhì)作為遞送運(yùn)輸工具或載體的使用，這能有效地使用以在脂質(zhì)載體和這些帶電荷的生物活性劑，如蛋白和多聚陰離子的核酸，之間提供靜電的相互作用。這允許藥物進(jìn)入適合粘膜給藥和/或之后遞送到體間隔的形式的有效的包裝。
用于本發(fā)明的另外的遞送運(yùn)輸工具包括長(zhǎng)鏈和中鏈的脂肪酸，以及帶有脂肪酸的混合表面活性劑的微膠粒。多數(shù)天然發(fā)生的酯形式的脂質(zhì)有重要意義，因?yàn)樗鼈冏约哼\(yùn)輸穿越粘膜表面。游離脂肪酸和它們的帶有極性基團(tuán)的甘油單酯，已顯示以混合微膠粒形式在腸內(nèi)屏障上作為滲透增強(qiáng)劑。游離脂肪酸(鏈長(zhǎng)從12到20個(gè)碳原子變化的羧酸)和它們的極性衍生物的屏障修飾功能的發(fā)現(xiàn)，已很大刺激這些試劑作為粘膜吸收增強(qiáng)劑的應(yīng)用的研究。
為在本發(fā)明的方法中使用，長(zhǎng)鏈脂肪酸，特別是融合(fusogenic)脂質(zhì)(非飽和脂肪酸和甘油單酯，例如油酸、亞麻仁油酸、亞麻仁油酸、一油清等)提供有用的載體以增強(qiáng)公布于此處的葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物、以及其它生物活性劑的粘膜遞送。中鏈脂肪酸(C6到C12)和甘油單酯也顯示在腸內(nèi)藥物吸收中有增強(qiáng)活性，以及能適于本發(fā)明粘膜遞送制劑和方法的使用。另外，中鏈和長(zhǎng)鏈脂肪酸的鈉鹽對(duì)本發(fā)明的生物活性劑的粘膜遞送是有效遞送運(yùn)輸工具和吸收增強(qiáng)劑。因此，脂肪酸可用于鈉鹽的溶解形式或通過(guò)添加非毒性表面活性劑，例如聚氧乙基化的氫化蓖麻油、?；悄懰徕c等。那些在本發(fā)明有用的其它脂肪酸以及混合的膠束的制品包括但不限于，辛酸鈉(C8)、癸酸鈉(C10)、月桂酸鈉(C12)或油酸鈉(C18)，選擇地聯(lián)合膽鹽，例如甘氨膽酸鹽和?；悄懰猁}。
聚乙二醇化(Pegylation)提供于本發(fā)明內(nèi)的另外的方法和組合物包括生物活性肽和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾，通過(guò)多聚體的物質(zhì)共價(jià)粘附，例如葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、糖肽、聚乙二醇和聚氨基酸。所得共軛的肽和蛋白質(zhì)保留它們對(duì)粘膜給藥的生物活性和可溶性。在另一個(gè)實(shí)例，葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物、以及其它生物活性肽和蛋白質(zhì)，是連接到多聚烯基氧化聚合物，特別是聚乙二醇(PEG)。美國(guó)專利No.4,179,337。
用于本發(fā)明的胺反應(yīng)性的PEG聚合物包括分子量2000、5000、10000、12000和20000的SC-PEG；U-PEG-10000；NHS-PEG-3400-生物素；T-PEG-5000；T-PEG-12000；和TPC-PEG-5000。生物活性肽和蛋白質(zhì)的聚乙二醇化可通過(guò)修飾羧基位點(diǎn)(例如除了羧基末端的天冬氨酸或谷氨酸基團(tuán))而獲得。在酸性條件下選擇性的修飾碳二亞胺-活化的蛋白羧基基團(tuán)的PEG-酰肼的使用已被描述。二中擇一的，生物活性肽和蛋白質(zhì)的雙官能性PEG修飾可使用。在一些過(guò)程，帶電荷的氨基酸殘基，包括賴氨酸、天冬氨酸和谷氨酸，有一個(gè)顯著的傾向是蛋白表面上溶劑易接近性。
活性劑的其它穩(wěn)定修飾除了聚乙二醇化，用于本發(fā)明的生物活性劑例如肽和蛋白質(zhì)能被修飾以增強(qiáng)循環(huán)的半衰期，通過(guò)與其它已知的保護(hù)的或穩(wěn)定的化合物的連接而屏蔽活性劑，例如通過(guò)產(chǎn)生有活性肽、蛋白質(zhì)、類似物或模仿物的融合蛋白，前者相連于一種或多種載體蛋白，例如一個(gè)或多個(gè)免疫球蛋白鏈。
制劑和給藥本發(fā)明的粘膜遞送制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、類似物和模仿物，典型地聯(lián)合一種或多種藥物上可接受的載體一起以及，選擇地，其它治療成分。載體必須是“藥物上可接受的”，意思是與制劑其它成分相容的，以及不引起受試者不可接受的有害影響。這樣的載體前文已有描述或?qū)λ帉W(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員是已知的。希望的，制劑不應(yīng)包括物質(zhì)例如酶或氧化劑，和它們與一起給藥的生物活性劑是已知不相容的。制劑可用藥學(xué)的熟知的技術(shù)的任意方法制備。
在本發(fā)明的組合物和方法中，公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物，和其它生物活性劑可以通過(guò)多種粘膜給藥模式給藥給受試者，包括通過(guò)口腔的、直腸的、陰道的、鼻內(nèi)的、肺內(nèi)的、或經(jīng)皮膚的遞送、或通過(guò)表面的遞送到眼、耳、皮膚或其它粘膜表面。選擇地，公布于此的葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物，和其它生物活性劑能通過(guò)非粘膜路徑協(xié)同地或輔助地給藥，包括通過(guò)肌內(nèi)的、皮下的、靜脈、心房?jī)?nèi)的、關(guān)節(jié)內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、或腸胃外的路徑。在其它可選的實(shí)例中，生物活性劑能是體外給藥的，通過(guò)直接暴露于源于哺乳動(dòng)物個(gè)體的細(xì)胞、組織或器官，例如作為體外組織或器官治療制劑的一種組分，它包括在合適液體或固體載體的生物活性劑。
關(guān)于本發(fā)明的組合物是作為鼻的或肺的噴霧劑經(jīng)常在水溶液中給藥，并且可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方法在噴霧劑型中分散。作為鼻的噴霧劑的分散液體的優(yōu)選的系統(tǒng)是公布于美國(guó)專利No.4,511,069中。制劑可存在于多劑量容器，例如在封閉的分散系統(tǒng)中，公布于美國(guó)專利No.4,511,069。另外的氣溶膠遞送形式可以包括，例如壓縮的空氣-、噴嘴-、超聲的-、和壓電的噴霧器，它們遞送溶解的或懸浮在藥物溶劑，例如水、乙醇、或它們的混合物，的生物活性劑中。
本發(fā)明的鼻的和肺的噴霧劑溶液典型地包括藥物或要遞送的藥物，選擇地與表面活性劑，例如非離子的表面活性劑(例如，聚山梨酸酯-80)，和一種或多種緩沖液制劑。在本發(fā)明的一些實(shí)例，鼻的噴霧劑溶液進(jìn)一步包含噴射劑。鼻噴霧劑溶液的pH選擇地在大約pH2.0和8之間，優(yōu)選的4.5±0.5。用于這些組合物的合適的緩沖液在前文有描述或是本領(lǐng)域已知技術(shù)。其它組分可以添加以增強(qiáng)或維持化學(xué)穩(wěn)定性，包括防腐劑、表面活性劑、分散劑、或氣體。合適的防腐劑包括，但不限于，苯酚、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸酯、間-甲酚、硫柳汞、三氯丁醇、苯甲基氯銨(alkonimum)、苯甲酸鈉和類似物。合適的表面活性劑包括，但不限于，油酸、失水山梨糖醇三油酸酯、聚山梨酸酯、卵磷脂、磷脂酰膽堿和多種長(zhǎng)鏈甘油二酯和磷脂。合適的分散劑包括，但不限于，乙二胺四乙酸和類似物。合適的氣體包括，但不限于，氮?dú)?、氦氣、氯氟碳?xì)?CFCs)、氫氟碳(HFCs)、二氧化碳、空氣和類似物。
在其它的實(shí)例，粘膜制劑是以干粉的制劑給藥，包括干態(tài)的生物活性劑，通常經(jīng)單低壓凍干，為鼻內(nèi)遞送形成合適大小的顆粒，或在合適顆粒大小的范圍。適合在鼻的或肺的通道沉淀的最小顆粒大小時(shí)常是0.5μ質(zhì)量中值當(dāng)量空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMEAD)，一般大約1μMMEAD，和更典型地大約2μMMEAD。適合在鼻通道沉淀的最大顆粒大小時(shí)常是大約10μMMEAD，一般大約8μMMEAD，和更典型地大約4μMMEAD。以這些大小范圍，鼻內(nèi)呼吸粉末能通過(guò)多種常規(guī)技術(shù)，例如氣流動(dòng)力磨、噴霧干燥、溶劑沉淀、超臨界液體濃集和類似物而產(chǎn)生。這些合適的MMEAD干粉能經(jīng)由傳統(tǒng)的干粉吸入裝置(DPI)給藥給病人，它依賴于病人的呼吸，緊接肺或鼻的吸入，分散粉末進(jìn)入一個(gè)氣溶膠化的量。二中擇一的，干粉可以經(jīng)由空氣協(xié)助的裝置給藥，它使用一種外部的粉源以分散粉末進(jìn)入氣溶膠化的量，例如一個(gè)活塞泵。
干粉裝置典型地需要粉末重量在從1mg到20mg的范圍內(nèi)以產(chǎn)生單一的氣溶膠的劑量(“泡夫”)。如果所需或希望的生物活性劑的劑量是低于這個(gè)量，粉末化的活性劑會(huì)典型地與藥物干的填充粉劑聯(lián)合，以提供所需的總粉末質(zhì)量。優(yōu)選的干的填充粉劑包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇、氨基乙酸、海藻糖、人血清白蛋白(HSA)和淀粉。其它合適的干的填充粉劑包括纖維二糖、葡聚糖、麥芽三糖、果膠、檸檬酸鈉、抗壞血酸鈉和類似物。
為本發(fā)明的粘膜遞送制備組合物，生物活性劑可與為分散活性劑的多種藥物上可接受的添加劑、以及基質(zhì)或載體聯(lián)合。理想的添加劑包括但不限于，pH控制劑，例如精氨酸、氫氧化鈉、氨基乙酸、鹽酸、檸檬酸、乙酸等。此外，局部麻醉藥(例如苯甲基醇)、等滲劑(例如氯化鈉、甘露醇、山梨糖醇)、吸附抑制劑(例如吐溫80)、可溶性增強(qiáng)劑(例如環(huán)糊精及其衍生物)、穩(wěn)定劑(例如血清白蛋白)和還原劑(例如谷胱甘肽)能被包括。當(dāng)粘膜遞送的組合物是液體，制劑的張度，它用參考0.9％(w/v)生理鹽溶液的張度作單位來(lái)測(cè)量，典型地調(diào)節(jié)到一個(gè)數(shù)值，在這個(gè)數(shù)值基本無(wú)不可逆的組織損傷會(huì)在鼻粘膜的給藥位點(diǎn)引起。一般，溶液的張度調(diào)節(jié)到大約1/3到3的數(shù)值，更典型地1/2到2，最經(jīng)常地3/4到1.7。
生物活性劑可以分散在基質(zhì)或運(yùn)輸工具中，它們可以包含有分散活性劑和任何理想的添加劑潛力的親水的復(fù)合物。基質(zhì)可選自合適的載體的一個(gè)廣泛的范圍，包括但不限于，多聚羧酸或其鹽的共聚物、羧基脫水物(例如馬來(lái)酸酐)和其它單體(例如(甲基)丙烯酸甲酯、丙烯酸等)，親水的乙烯聚合物例如多聚醋酸乙烯、多聚乙烯醇、多聚乙烯吡咯烷酮、纖維素衍生物例如羥基甲基纖維素、羥基丙基纖維素等，和天然的聚合物例如殼聚糖、膠原、海藻酸鈉、白明膠、透明質(zhì)酸和它的非毒性的金屬鹽。通常，生物可降解聚合物是選擇作為基質(zhì)或載體，例如聚乳酸、多聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物、多聚羥基丁酸、多聚(羥基丁酸-羥基乙酸)共聚物和它們的混合物。二中擇一的或另外的，合成的脂肪酸酯例如聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯等可用于作為載體。親水的聚合物和其它載體能被單獨(dú)使用或聯(lián)合使用，而且增強(qiáng)的結(jié)構(gòu)完整性能通過(guò)部分結(jié)晶、離子鍵、交聯(lián)和類似物被賦予給載體。載體能為直接用于鼻粘膜以多種形式提供，包括，流體或粘稠的溶液、膠、漿糊、粉末、微球和薄膜。在本文所選載體的使用可能引起生物活性劑吸收的促進(jìn)。
生物活性劑依據(jù)多種方法能聯(lián)合基質(zhì)或載體，活性劑的釋放可通過(guò)滲透、載體的瓦解、或水通道的聯(lián)合制劑。在某些情況，活性劑是分散在微粒體(微球)中或毫微型膠囊(毫微球)中，后者從合適的聚合物制備，例如異丁基2-氰丙烯酸酯，并分散在用于鼻粘膜的生物相容的分散介質(zhì)，在一個(gè)延長(zhǎng)的時(shí)間它產(chǎn)生持續(xù)的遞送和生物活性。
為進(jìn)一步增強(qiáng)本發(fā)明藥劑的粘膜遞送，包括活性劑的制劑也可以包含親水的低分子量的復(fù)合物作為基質(zhì)或賦形劑。這些親水的低分子量復(fù)合物提供一種通道介質(zhì)，通過(guò)它水溶性的活性劑，例如生理活性肽或蛋白質(zhì)，可能通過(guò)從基質(zhì)擴(kuò)散到機(jī)體的表面，在那里活性劑被吸收。親水的低分子量復(fù)合物選擇地從粘膜或給藥環(huán)境吸收濕氣并且溶解水溶性活性肽。親水的低分子量復(fù)合物的分子量通常不大于10000和優(yōu)選的不大于3000。親水的低分子量復(fù)合物例子包括多元醇復(fù)合物，例如寡聚-糖、雙-糖和單糖例如蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤蘚糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纖維二糖、龍膽二糖、甘油和聚乙二醇。其它在本發(fā)明作為載體有用的親水的低分子量復(fù)合物的實(shí)例包括N-甲基吡咯烷酮、和醇(例如寡聚乙烯醇、乙醇、乙二醇、丙二醇等)。這些親水的低分子量復(fù)合物能被單獨(dú)使用或相互聯(lián)合或與其它鼻內(nèi)制劑的活性或非活性組分聯(lián)合。
本發(fā)明的組合物可以二中擇一的包括作為藥物可接受載體的物質(zhì)，如臨近生理?xiàng)l件所需，例如pH調(diào)節(jié)和緩沖劑、張度調(diào)節(jié)劑、濕潤(rùn)劑和類似物，例如，醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、失水山梨糖醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等。對(duì)固體組合物，傳統(tǒng)的非毒性藥物上可接受的載體能用的包括，例如，藥物級(jí)甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石粉、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂和類似物。
給藥生物活性劑的治療組合物也能制備成溶液、微乳化液、或其它適于高濃度活性成分的有序的結(jié)構(gòu)。載體能是溶劑或分散介質(zhì)包括，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、和液體聚乙二醇、和類似物)，和它們合適的混合物。溶液合適的流動(dòng)性能被維持，例如，通過(guò)使用一個(gè)例如卵磷脂的加帽，通過(guò)在可分散的制劑情況下維持理想的顆粒大小，以及通過(guò)使用表面活性劑。在許多情況，希望在組合物中包括等滲劑，例如，糖、多聚醇例如甘露醇、山梨糖醇、或氯化鈉。生物活性劑延長(zhǎng)的吸收通過(guò)在組合物中包括延遲吸收的試劑而實(shí)現(xiàn)，例如單硬脂酸鹽和白明膠。
在本發(fā)明的某些實(shí)例，生物活性劑是以時(shí)間-釋放制劑給藥的，例如在組合物包括緩慢釋放聚合物?；钚詣┠芘c載體一起制備，這會(huì)防止快速釋放，例如受控釋放運(yùn)輸工具例如聚合物、被微囊化的遞送系統(tǒng)或生物粘附膠。延長(zhǎng)的活性劑的遞送，在本發(fā)明多種組合物中能通過(guò)在組合物中包括那些延遲吸收的劑，例如，單硬脂酸鋁、水凝膠和白明膠而實(shí)現(xiàn)。當(dāng)受控釋放的生物活性劑制劑是理想的，根據(jù)本發(fā)明適合使用的受控釋放結(jié)合子包括任何生物相容的受控釋放物質(zhì)，它們對(duì)活性劑是惰性的并且能摻入生物活性劑。許多這樣的物質(zhì)是本領(lǐng)域中已知的。有用的受控釋放結(jié)合子是那些在生理?xiàng)l件下，它們的鼻內(nèi)遞送(例如在鼻的粘膜表面，或穿越粘膜遞送后在體液存在情況下)后代謝緩慢的物質(zhì)。合適的結(jié)合子包括但不限于生物相容的聚合物和共聚物，它們?cè)缦仍诒绢I(lǐng)域的持續(xù)釋放制劑中使用。這樣的生物相容的復(fù)合物是對(duì)周?chē)M織非毒性和惰性的，并且不引起顯著的不良副反應(yīng)例如鼻的刺激、免疫反應(yīng)、炎癥、或類似的情況。它們被代謝進(jìn)入代謝的產(chǎn)物，后者也是生物相容的并容易從機(jī)體清除。
在本文使用的多聚體物質(zhì)的實(shí)例包括但不限于，多聚體的基質(zhì)，它們衍生于有可水解的酯鍵的共多聚體和同多聚體的多聚酯。許多這些是本領(lǐng)域中已知生物可降解和產(chǎn)生降解作用的產(chǎn)物是無(wú)或低毒性的。聚合物實(shí)例包括多聚羥基乙酸(PGA)和多聚乳酸(PLA)、多聚(DL-乳酸-co-羥基乙酸)(DL PLGA)、多聚(D-乳酸-co羥基乙酸)(D PLGA)和多聚(L-乳酸-co-羥基乙酸)(L PLGA)。其它有用的生物可降解或生物可腐蝕的聚合物包括但不限于這些聚合物例如多聚(ε-己內(nèi)酯)、多聚(ε-阿內(nèi)酯源(aprolactone)-CO-乳酸)、多聚(ε-阿內(nèi)酯源-CO-羥基乙酸)、多聚(β-羥基丁酸)、多聚(烷基-2-氰基丙烯酸酯)、水凝膠例如多聚(羥基乙基甲基丙烯酸酯)、聚酰胺、多聚(氨基酸)(即L-亮氨酸、谷氨酸、L-天冬氨酸和類似物)、多聚(酯尿)、多聚(2-羥基乙基DL-阿司帕坦(aspartamide))、多聚縮醛聚合物、多聚原酸酯類、多聚碳酸鹽、多聚馬來(lái)酰胺、多糖和它們的共聚物。制備這樣的制劑的許多方法是一般對(duì)本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員是已知的。其它有用的制劑包括受控釋放組合物例如微粒體，美國(guó)專利No.4,652,441和4,917,893，在制備微粒體和其它制劑有用的乳酸-羥基乙酸共聚物，美國(guó)專利No.4,677,191和4,728,721，以及水溶性肽的持續(xù)釋放組合物，美國(guó)專利No.4,675,189。
無(wú)菌的溶液能通過(guò)摻入所要?jiǎng)┝康幕钚詮?fù)合物到合適的溶劑而制備，包括以上列舉的一種成分或一種成分的組合，如果需要，隨后過(guò)濾除菌。通常，分散是通過(guò)摻入活性復(fù)合物到無(wú)菌的運(yùn)輸工具，后者包括基本的分散介質(zhì)和所需的來(lái)自以上列舉的其它成分。在無(wú)菌粉末的情況下，制備的方法包括真空干燥和凍干法，它們產(chǎn)生活性成分的粉劑，后者從事先無(wú)菌過(guò)濾的溶液添加任何另外的期望的成分。微生物的預(yù)防能通過(guò)多種抗細(xì)菌和抗真菌劑，例如，對(duì)羥基苯甲酸酯、三氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞和類似物來(lái)實(shí)現(xiàn)。
依據(jù)本發(fā)明的粘膜給藥允許有效自我給藥治療病人，前提是有足夠的安全保護(hù)控制和監(jiān)視劑量和副反應(yīng)。粘膜給藥也克服其它給藥形式的某些缺點(diǎn)，例如注射，它是疼的還暴露病人于可能的感染以及可能有藥物生物有效性問(wèn)題。對(duì)鼻的和肺的遞送，廣泛已知地，治療性液體的受控制氣溶膠分散系統(tǒng)是噴霧劑。在一個(gè)實(shí)例中，活性劑的測(cè)定的劑量是通過(guò)一個(gè)特殊結(jié)構(gòu)的機(jī)械泵閥遞送的，美國(guó)專利No.4,511,069。
劑量為預(yù)防和治療的目的，公布于此的生物活性劑可以以快速灌注遞送給藥給受試者，通過(guò)連續(xù)的遞送(例如，連續(xù)的經(jīng)皮膚的、粘膜的、或靜脈的遞送)在一個(gè)長(zhǎng)的時(shí)間，或在一個(gè)重復(fù)給藥步驟(例如，通過(guò)每小時(shí)地、每天地或每周地，重復(fù)地給藥步驟)。在本文，葡萄糖調(diào)節(jié)肽的治療有效劑量可能包括在一個(gè)延長(zhǎng)的預(yù)防或治療用藥法中的重復(fù)劑量，它會(huì)產(chǎn)生臨床顯著的結(jié)果以減輕與以上所述的靶向的一種疾病或情況相關(guān)的一種或多種癥狀或可檢測(cè)的情況。在本文有效劑量的確定是典型地基于動(dòng)物模型研究，之后通過(guò)人臨床試驗(yàn)以及通過(guò)確定有效劑量和給藥步驟的指導(dǎo)，它們顯著地減少機(jī)體靶向疾病癥狀或情況的發(fā)生或惡化。在這方面合適的模型包括，例如，小鼠、大鼠、豬、貓、非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物，和本領(lǐng)域已知其它可接受的動(dòng)物模型個(gè)體。二中擇一的，有效劑量能用體外模型(例如，免疫學(xué)的和組織病理學(xué)的分析)確定。用這些模型，只有普通計(jì)算和調(diào)節(jié)是典型地需要的，以確定合適的濃度和劑量，來(lái)給藥治療有效量的生物活性劑(例如，鼻內(nèi)有效的、經(jīng)皮膚有效的、靜脈有效的、或肌內(nèi)有效的劑量以引起期望的反應(yīng))。
在一個(gè)選擇的實(shí)例，本發(fā)明提供葡萄糖調(diào)節(jié)肽的鼻內(nèi)遞送的組合物和方法，其中葡萄糖調(diào)節(jié)肽復(fù)合物是重復(fù)給藥的，通過(guò)鼻有效劑量用藥法，后者包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽的多重給藥于個(gè)體，在每天或每周的時(shí)間表過(guò)程中，以在一個(gè)長(zhǎng)期的劑量階段中維持葡萄糖調(diào)節(jié)肽治療有效的提升和降低的波動(dòng)水平。組合物和方法提供那些通過(guò)個(gè)體在鼻制劑每天一次到六次自我給藥的葡萄糖調(diào)節(jié)肽復(fù)合物在8小時(shí)到24小時(shí)長(zhǎng)劑量時(shí)間維持葡萄糖調(diào)節(jié)肽治療有效的提升和降低的波動(dòng)水平。
試劑盒本發(fā)明也包括含有上述藥物組合物、為預(yù)防和治療哺乳動(dòng)物個(gè)體的疾病和其它情況而使用的活性成分、和/或給藥它們的裝置的試劑盒、包裝和多容器單位。簡(jiǎn)而言之，這些試劑盒包括一種容器或制劑，它們含有一種或多種葡萄糖調(diào)節(jié)肽蛋白、類似物和模仿物、和/或其它生物活性劑，并聯(lián)合公布于此的粘膜遞送增強(qiáng)劑，制備為為粘膜遞送的藥物制劑。
本發(fā)明的鼻內(nèi)制劑能通過(guò)使用任何噴霧瓶或注射器，或通過(guò)滴入法給藥。作為一個(gè)鼻噴霧瓶的例子是“有安全片的鼻噴霧泵，PfeifferSAP#60548，它遞送每次噴出0.1mL的劑量以及有一個(gè)長(zhǎng)為36.05mm的浸管。它能從美國(guó)新澤西州普林斯頓的Pfeiffer購(gòu)買(mǎi)到。
葡萄糖調(diào)節(jié)肽的氣溶膠鼻的給藥我們發(fā)現(xiàn)GRP能用鼻的噴霧劑或氣溶膠鼻內(nèi)地給藥。這是出乎意料的，因?yàn)樵S多蛋白質(zhì)和肽由于產(chǎn)生噴霧劑或氣溶膠的促動(dòng)機(jī)產(chǎn)生的機(jī)械力而被切斷或變性。在此領(lǐng)域以下的界定是有用的。
1.氣溶膠-一種產(chǎn)物，它在壓力下被包裝而且包括治療活性成分，后者在一個(gè)合適的閥系統(tǒng)激活時(shí)被釋放。
2.計(jì)量的氣溶膠-一種加壓劑型，它包括計(jì)量的劑量閥，后者允許單一量的噴霧劑在每次激活時(shí)的被遞送。
3.粉末氣溶膠-一種產(chǎn)物，它在壓力下被包裝而且包括粉末形式的治療活性成分，后者在一種合適的閥系統(tǒng)激活時(shí)被釋放。
4.噴霧劑氣溶膠-一種氣溶膠產(chǎn)物，它利用壓縮的氣體作為噴射劑提供以濕噴霧劑釋放所述產(chǎn)物所必須的力；這樣的方法對(duì)水溶劑中的藥劑的溶液通常是可行的。
5.噴霧劑-一種溶液，它被空氣或蒸汽噴射口細(xì)密地分散。鼻的噴霧藥物產(chǎn)物包含治療活性成分，后者溶解或懸浮于溶液或在非壓縮的分配器的賦形劑的混合物中。
6.計(jì)量噴霧劑-一種非壓縮的包含閥的劑型，在每次激活時(shí)，它允許一種特定數(shù)量噴霧劑的配藥。
7.懸浮噴霧劑-一種液體制劑，包括分散在液體運(yùn)輸工具的固體顆粒以及是以流動(dòng)小滴的形式或精細(xì)分散的固體。
通過(guò)計(jì)量鼻噴霧劑泵作為一個(gè)藥物遞送裝置(″DDD″)發(fā)射的氣溶膠噴霧劑的液體動(dòng)力學(xué)特征。噴霧劑特性是對(duì)食品和藥物管理局(″FDA″)許可的調(diào)節(jié)釋放的一個(gè)固有部分，對(duì)新的和現(xiàn)有的鼻噴霧泵的研究和開(kāi)發(fā)，質(zhì)量保險(xiǎn)和穩(wěn)定性檢測(cè)過(guò)程是必須的。
噴霧劑的幾何學(xué)的所有特征是鼻噴霧器泵整個(gè)性能最好的指示。特別是，當(dāng)噴霧劑離開(kāi)裝置，噴霧劑分散角度(煙縷幾何學(xué))的測(cè)量；噴霧劑橫斷層面的橢圓率、均勻度和顆粒/小滴分布(噴霧劑式樣)；和展開(kāi)的噴霧劑的時(shí)間演變已被發(fā)現(xiàn)是最代表鼻噴霧劑泵特征的性能。質(zhì)量保險(xiǎn)和穩(wěn)定性測(cè)試中，煙縷的幾何學(xué)和噴霧劑式樣測(cè)量是對(duì)驗(yàn)證與批準(zhǔn)的鼻噴霧劑泵的數(shù)據(jù)的一致性和相符性的關(guān)鍵的標(biāo)識(shí)符。
界定煙縷高度-從促動(dòng)器頂?shù)接捎谥本€流的斷裂煙縷角度變得非直線的點(diǎn)的尺寸?；跀?shù)碼圖片的視覺(jué)測(cè)定，以及為了建立一個(gè)測(cè)量點(diǎn)作為寬度，它與噴霧劑式樣最遠(yuǎn)的測(cè)量點(diǎn)一致，30mm的高度是對(duì)本研究確定的。
主軸-最長(zhǎng)的帶，它能在擬合的噴霧劑式樣中被畫(huà)出，噴霧劑式樣在基質(zhì)單位中穿越COMw(mm)輔軸-最短的帶，它能在擬合的噴霧劑式樣中被畫(huà)出，噴霧劑式樣在基質(zhì)單位中穿越COMw(mm)橢圓率-主軸對(duì)輔軸的比例，優(yōu)選的在1.0和1.5之間，和最優(yōu)選的在1.0和1.3之間。
D10--某種小滴的直徑，對(duì)它樣品總液體體積的10％由較小直徑的小滴組成(μm)D50--某種小滴的直徑，對(duì)它樣品總液體體積的50％由較小直徑的小滴組成(μm)，也稱作質(zhì)量中位直徑D90--某種小滴的直徑，對(duì)它樣品總液體體積的90％由較小直徑的小滴組成(μm)跨距--分布寬度的尺寸，值越小，分布越窄。跨距的計(jì)算是 ％RSD--百分比相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差，通過(guò)除以系列以及乘于100的方式的標(biāo)準(zhǔn)差，也稱作％CV。
體積--從遞送裝置每次刺激釋放的液體或粉末的體積，優(yōu)選的在0.01mL和大約2.5mL之間，以及最優(yōu)選的在0.02mL和0.25mL之間。
以下的實(shí)施例通過(guò)例證的方式提供，不是限制。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(預(yù)示的)包括GRP組合物的制劑為葡萄糖調(diào)節(jié)肽的增強(qiáng)的鼻粘膜遞送的一種舉例的、預(yù)示的制劑，遵照本說(shuō)明書(shū)教導(dǎo)制備和評(píng)價(jià)如下
表1GRP制劑組合物*

●許多GRP被加入制劑以產(chǎn)生足夠產(chǎn)生治療效應(yīng)的濃度。
實(shí)施例2(預(yù)示的)無(wú)蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑的糊精制劑的制備適合鼻內(nèi)給藥糊精的糊精制劑是以下面所列的制劑制備的，它基本不含蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
1.大約3/4的水加入一個(gè)燒杯并在一個(gè)攪拌皿上用一個(gè)攪拌棒攪拌并且檸檬酸鈉被加入直到溶解完全。
2.EDTA隨后被加入并且攪拌直到全部溶解。
3.檸檬酸隨后被加入并且攪拌直到全部溶解。
4.甲基-β-環(huán)糊精隨后被加入并且攪拌直到全部溶解。
5.DDPC隨后被加入并且攪拌直到全部溶解。
6.乳糖隨后被加入并且攪拌直到全部溶解。
7.山梨糖醇隨后被加入并且攪拌直到全部溶解。
8.三氯丁醇隨后被加入并且攪拌直到全部溶解。
9.糊精隨后被加入并且攪拌直到溶解。
10.檢查pH以確定它是5.0±0.25。加入稀釋的HCl或稀釋的NaOH來(lái)調(diào)節(jié)pH。
11.加水到終體積。
表2

制劑pH5+/-0.25滲透性～250實(shí)施例3(預(yù)示的)無(wú)蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑的糊精制劑的制備以及糊精的濃度是15mg/mL第二種制劑是按上面所述配制，除了糊精的濃度是15mg/mL，如下面的表3所示。
表3

制劑pH4-6實(shí)施例4(預(yù)示的)無(wú)蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑的并且無(wú)內(nèi)毒素的普蘭林肽制劑的制備以下無(wú)內(nèi)毒素的普蘭林肽醋酸鼻的制劑能夠被制備。
表4

制劑pH5+/-0.25
實(shí)施例5(預(yù)示的)GRP的口服制劑雙層片劑是用以下方式制備的。粘附層是通過(guò)這樣制備的，稱量70份重的聚環(huán)氧乙烷(Polyox 301N；Union Carbide)、20份重的多聚丙烯酸(Carbopol 934P；B.F.Goodrich)、10份重的可壓縮的木糖醇/羧甲基纖維素填充劑(Xylitab 200；Xyrofin)。混合這些成分，在一個(gè)瓶中旋轉(zhuǎn)3分鐘?；旌衔锶缓筠D(zhuǎn)到一個(gè)蒸發(fā)盤(pán)并快速地與純乙醇濕顆?；男纬砂朊鎴F(tuán)狀的稠度。這些物質(zhì)被立即和快速通過(guò)一個(gè)不銹鋼的14篩目(1.4mm孔徑)的篩，濕的顆粒粘附其上。所述篩目用多孔的鋁箔覆蓋，30℃過(guò)夜干燥濕的顆粒。干的顆粒從篩移去，然后通過(guò)一個(gè)20篩目(0.85mm孔徑)的篩以進(jìn)一步減小顆粒的大小。不能通過(guò)20篩目的篩的顆粒用一個(gè)研缽和研棒快速研磨以減少微小顆粒的量，之后通過(guò)20篩目的篩。所得顆粒放于一個(gè)混合瓶中，加入0.25份重的硬脂酸和0.06份重的薄荷香料(通用香料)并與顆粒混合。成分最后的重量百分?jǐn)?shù)是69.78％聚環(huán)氧乙烷、9.97％可壓縮的木糖醇/羧甲基纖維素填充劑、19.94％多聚丙烯酸、0.25％硬脂酸和0.06％薄荷香料。50mg量的所述混合物放于一個(gè)0.375英尺直徑的模具并預(yù)壓縮于一個(gè)雕刻器壓縮模具C(Carver Press Model C)之上，用0.25公噸的壓力3秒鐘的停留時(shí)間以形成粘附層。
活性層是通過(guò)這樣制備的，稱量49.39份重的甘露醇、34.33份重的羥基丙基纖維素(Klucel L F；Aqualon，Wilmington，Del.)和15.00份重的?；悄懰徕c(Aldrich，Milwaukee，Wis.)，混合這些成分，在一個(gè)瓶中旋轉(zhuǎn)3分鐘。混合物然后轉(zhuǎn)到一個(gè)蒸發(fā)盤(pán)并快速地與純乙醇濕顆?；纬砂朊鎴F(tuán)狀的稠度。這些物質(zhì)被立即和快速通過(guò)一個(gè)不銹鋼的14篩目的篩，濕的顆粒粘附其上。所述篩目用多孔的鋁箔覆蓋，30℃干燥濕的顆粒。干的顆粒從篩移去，然后順序通過(guò)20、40(0.425mm孔徑)和60(0.25mm孔徑)篩目的篩以進(jìn)一步減小顆粒的大小。不能通過(guò)20篩目的篩的顆粒用一個(gè)研缽和研棒快速研磨以減少微小顆粒，之后通過(guò)篩。通過(guò)篩的顆粒被稱量，之后0.91份重量的GRP和0.06份重量的FD&C yellow #6HTaluminum lake dye染料先后與干顆粒通過(guò)幾何稀釋混合。所得顆粒放于一個(gè)混合瓶中，加入0.25份重的硬脂酸鎂(潤(rùn)滑劑)和0.06份重的薄荷香料并與顆粒通過(guò)3分鐘旋轉(zhuǎn)混合。50mg這樣物質(zhì)的樣品放置于部分壓縮的粘附層上，并且兩個(gè)層面被壓縮，以1.0公噸的壓力3秒鐘的停留時(shí)間以形成適合口腔遞送的雙層片劑。
這個(gè)過(guò)程產(chǎn)生齒齦片劑，其中活性層包括0.91％重量的GRP、15％重量的NaTC、和84.09％重量的填充劑、潤(rùn)滑劑、染料、制劑助劑、或香料。
實(shí)施例6(預(yù)示的)GRP的肺遞送如下所述制備的載體復(fù)合物可直接用作遞送載體，通過(guò)與無(wú)內(nèi)毒素的葡萄糖調(diào)節(jié)肽簡(jiǎn)單地混合一種或多種化合物或鹽、多聚氨基酸或肽以達(dá)到肺的遞送。
給藥混合物這樣制備，混合載體的水溶液和活性成分的水溶液，在給藥之前。二中擇一的，載體和生物或化學(xué)活性成分能在生產(chǎn)的過(guò)程中混合。溶液可選擇地包括添加劑例如磷酸緩沖鹽、檸檬酸、乙酸、白明膠和阿拉伯膠。
許多已知的肺的遞送方法能使用無(wú)內(nèi)毒素的葡萄糖調(diào)節(jié)肽，特別是GRP，以改進(jìn)GRP到肺的遞送。以下非限定的專利申請(qǐng)被摻入在此處，以作為肺遞送的參考美國(guó)專利申請(qǐng)No.20030223939、20030215514、20030215512、20030209243、20030203036、20030198601、20030183228、200301885765、20030150454、20030124193、20030094173。
實(shí)施例7(預(yù)示的)肺遞送載體的制備
2-(4-(N-水楊酰)氨苯)丙酸(載體B)的制備58.6g(0.355mol)的2-(4-氨苯)丙酸的膏劑和500ml二氯甲烷被90.11ml(77.13g.0.710mol)三甲基硅烷基氯化物處理，并被加熱至回流120分鐘。反應(yīng)混合物被冷卻到0℃，并以184.44ml(107.77g，1.065mol)的三乙胺處理。攪拌5分鐘以后，此混合物被70.45g(0.355mol)的鄰乙酰水楊酰氯化物和150ml的二氯甲烷的溶液處理。反應(yīng)混合物被加熱到25℃并攪拌64小時(shí)。真空移去揮發(fā)物。殘余物在2N氫氧化鈉水溶液中攪拌一個(gè)小時(shí)，并用2M硫酸水溶液酸化。固體從乙醇/水中被重結(jié)晶兩次以給出一種黃褐色的固體。通過(guò)過(guò)濾分離得到預(yù)期的產(chǎn)量53.05g(52％產(chǎn)率)的2-(4-(N-水楊酰)氨苯)丙酸。性能?？扇苄?00mg/m200mg+350.μL 2N NaOH+650.μL H2O-pH-7.67。分析C，67.36；H，5.3；N，4.91。
2-(4-(N-水楊酰)氨苯)丙酸鈉鹽(載體B鈉鹽)的制備53.05g(0.186mol)2-(4-(N-水楊酰)氨苯-)丙酸和300ml乙醇的水溶液被7.59g(0.190mol)溶解于22ml水的NaOH處理。反應(yīng)混合物在25℃被攪拌30分鐘和在0℃被攪拌30分鐘。所得淡黃固體通過(guò)過(guò)濾分離，以產(chǎn)生52.61g 2-(4-(N-水楊酰)氨苯)丙酸鈉鹽。性能?？扇苄?00mg/ml澄清溶液，pH＝6.85。分析C，60.45；H，5.45；N，3.92；Na，6.43。熔點(diǎn)236-238℃。
載體C鈉鹽的制備一個(gè)帶有磁力攪拌器和一個(gè)回流冷凝器的2L的圓底燒瓶裝滿溶于二氯甲烷(250ml)的3-(4-氨苯)丙酸(15.0g.0.084moles.1.0當(dāng)量)的懸浮液。氯三甲基硅烷(18.19g，0.856moles，2.0當(dāng)量)加入一部分，混合物在氬下加熱至回流1.5小時(shí)。反應(yīng)物被允許冷卻到室溫和放置在一個(gè)冰浴中(內(nèi)部溫度＜10℃)?；亓骼淠饔靡粋€(gè)漏斗代替，漏斗內(nèi)包括三乙胺(25.41g，0.251moles，3.0當(dāng)量.)。三乙胺一滴一滴地加入15分鐘，一種黃色固體在加入過(guò)程中形成。此漏斗被另一個(gè)另外的漏斗代替，后者包括溶于二氯甲烷(100mL)的2，3-二甲基苯甲酰氯(I 8.31g，0.091moles，1.09當(dāng)量)的溶液。所述溶液一滴一滴地加入30分鐘。反應(yīng)物在冰浴上攪拌30分鐘，在環(huán)境溫度攪拌3小時(shí)。二氯甲烷在真空中蒸發(fā)以產(chǎn)生一種棕色油。棕色油在冰浴中冷卻，冰冷卻的飽和的二碳酸鈉溶液(250ml)被加入。移去冰浴，反應(yīng)物被攪拌1小時(shí)以產(chǎn)生一種清澈的棕色液體。溶液用濃縮的HCl酸化，并儲(chǔ)存在ca SC一個(gè)小時(shí)。混合物用二氯甲烷(3次.100mL)萃取，硫酸鈉干燥，過(guò)濾除去鹽以及真空除二氯甲烷。所得固體從50％醋酸乙酯/水(v/v)中重結(jié)晶以提供白色針狀的載體C酸(25.92g.90％)。C19H21NO5的分析C，66.46；H，6.16；N，4.08.mp＝99-102℃。
12克的載體C酸在加熱下溶于75ml乙醇。對(duì)此溶液加入8.5M氫氧化鈉(1.02摩爾當(dāng)量，4.5mL水中1.426克)溶液?；旌衔飻嚢?5分鐘。大約3/4的乙醇真空移去，并且100mL正庚烷加入所得油并形成沉淀。固體通過(guò)50℃真空干燥。分析C19H20NO5Na0.067H2OC，62.25；H，5.54；N，3.82；Na，6.27。
N-(4-甲基水楊酰)-8-氨基辛酸(載體D)的制備(a)寡聚(4-水楊酸甲酯)的制備乙酸酐(32mL，34.5g，0.338mol，1.03eq)、4-甲基水楊酸(50g，0.329mmol，1.00eq)和二甲苯(100mL)加入一個(gè)1L、帶有一個(gè)磁力攪拌棒、一個(gè)溫度計(jì)和一個(gè)冷凝器的四頸瓶。瓶子放于沙浴，并開(kāi)始加熱混濁的白色混合物。反應(yīng)混合物在大約90℃變澄清，成為一種黃色液體。多數(shù)揮發(fā)性的有機(jī)物(二甲苯和乙酸)蒸餾超過(guò)3小時(shí)后進(jìn)入Dean-Stark套(135-146℃)。繼續(xù)蒸餾一個(gè)小時(shí)(總共110mL被蒸餾)，在此期間，瓶溫度慢慢升至204℃，餾出物慢慢變成細(xì)流。剩余物在還是熱的時(shí)候被倒出到一個(gè)鋁盤(pán)。冷卻后，形成脆的黃色玻璃形式。固體被研磨成細(xì)粉。所得寡聚(4-水楊酸甲酯)無(wú)需進(jìn)一步純化就能使用。
(b)N-(4-甲基水楊酰)-8-氨基辛酸的制備7M碳酸鉀溶液(45mL，43.2g，0.313mol，0.95eq)、8-氨基辛酸(41.8g，262mol，798eq)和水(20mL)加入一個(gè)1L的有一個(gè)磁力攪拌棒、冷凝器和一些附加燃料的圓底燒瓶。白色渾濁混合物被寡聚(4-水楊酸甲酯)(44.7g，0.329mmol 1.0eq)和二噁烷(250mL)的溶液處理30分鐘以上。反應(yīng)混合物加熱到90℃3小時(shí)(在此時(shí)反應(yīng)通過(guò)HPLC測(cè)定是已經(jīng)完成了)。透明的橙色反應(yīng)混合物冷卻到30℃并用50％硫酸水溶液(64g)酸化到pH＝2。所得固體通過(guò)過(guò)濾分離。白色固體從1170mL 50％乙醇-水中重結(jié)晶。固體通過(guò)過(guò)濾回收并在50℃真空烘箱干燥18小時(shí)以上。N-(4-甲基水楊酰)-8-氨基辛酸以一種白色固體(30.88g，52％)被分離；mp＝113-114°。分析C6H23NO4C，65.51；H，7.90；N，4.77。
然后GRP的水溶液被制備，并與一種或多種載體混合以產(chǎn)生GRP組合物，它能被噴霧進(jìn)入肺。對(duì)生成物組合物的合適的GRP濃度應(yīng)該是大約400μg/mL。參考美國(guó)專利申請(qǐng)No.20030072740。
實(shí)施例8(預(yù)示的)無(wú)蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑的GLP-1制劑的制備合適鼻內(nèi)給藥GLP-1的GLP-1制劑，它基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑，制備有如下的制劑。
1.大約3/4的水加入一個(gè)燒杯并在一個(gè)攪拌盤(pán)上用一個(gè)攪拌棒攪拌，加入檸檬酸鈉直到全部溶解。
2.之后加入EDTA并攪拌直到全部溶解。
3.之后加入檸檬酸并攪拌直到全部溶解。
4.加入甲基-β-環(huán)糊精并攪拌直到全部溶解。
5.之后加入DDPC并攪拌直到全部溶解。
6.之后加入乳糖并攪拌直到全部溶解。
7.之后加入山梨糖醇并攪拌直到全部溶解。
8.之后加入三氯丁醇并攪拌直到全部溶解。
9.加入GLP-1并輕輕攪拌直到溶解。
10.檢查pH，確定它是4.5±0.5。加入稀釋的HCl或稀釋的NaOH來(lái)調(diào)節(jié)pH。
11.加水到終體積。
表5

制劑pH4.5±0.5滲透性～250實(shí)施例9(預(yù)示的)無(wú)蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑的GLP-1制劑的制備第二種制劑是按上面所述配制，除了GLP-1的濃度是15mg/mL，如下面的表6所示。
表6

制劑pH4.5±0.5
實(shí)施例10(預(yù)示的)無(wú)蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑的促胰島素分泌肽-4制劑的制備適合鼻內(nèi)給藥促胰島素分泌肽的促胰島素分泌肽-4制劑，它基本不含蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑，制備有如下的制劑。
1.大約3/4的水加入一個(gè)燒杯并在一個(gè)攪拌盤(pán)上用一個(gè)攪拌棒攪拌，加入檸檬酸鈉直到全部溶解。
2.之后加入EDTA并攪拌直到全部溶解。
3.之后加入檸檬酸并攪拌直到全部溶解。
4.加入甲基-β-環(huán)糊精并攪拌直到全部溶解。
5.之后加入DDPC并攪拌直到全部溶解。
6.之后加入乳糖并攪拌直到全部溶解。
7.之后加入山梨糖醇并攪拌直到全部溶解。
8.之后加入三氯丁醇并攪拌直到全部溶解。
9.加入促胰島素分泌肽-4并輕輕攪拌直到溶解。
10.檢查pH，確定它是5.0±0.25。加入稀釋的HCl或稀釋的NaOH來(lái)調(diào)節(jié)pH。
11.加水到終體積。
表7

制劑pH4.5±0.5滲透性～250實(shí)施例11第二種制劑是按上面所述配制，除了促胰島素分泌肽-4的濃度是15mg/mL，如下面的表8所示。
表8

制劑pH5+/-0.25實(shí)施例12使用滲透增強(qiáng)劑，熒光素標(biāo)記的腸促胰島素類似物穿越細(xì)胞屏障的增加的通透性樣品制劑#11mg/mL熒光素-促胰島素分泌肽4(AnaSpec，Inc，San Jose，CA)10mM檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖液系統(tǒng)，pH4.545mg/mL甲基-β-環(huán)糊精
1mg/mL EDTA1mg/mL DDPC25mM乳糖100mM山梨糖醇0.5％三氯丁醇制劑#2(鹽制劑)1mg/mL熒光素-促胰島素分泌肽4(AnaSpec，Inc，San Jose，CA)10mM檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖液系統(tǒng)，pH4.5140mM NaCl方法細(xì)胞培養(yǎng)物細(xì)胞系MatTek Corp.(Ashland，MA)用作正常、人源的氣管的/支氣管的上皮細(xì)胞(EpiAirwayTM組織模型)的來(lái)源。細(xì)胞以嵌入物提供，在Millipore Milicell-CM過(guò)濾器上生長(zhǎng)至融合，過(guò)濾器包含透明的親水的Teflon(PTFE)。接收后，在使用前膜在1mL基礎(chǔ)培養(yǎng)液(無(wú)酚紅和無(wú)氫化可的松的Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM))，于37℃、5％CO2培養(yǎng)24-48小時(shí)。嵌入物每天加入以恢復(fù)。
組織分析每種組織嵌入物被放于一個(gè)單獨(dú)的孔中，孔中有1mL基礎(chǔ)培養(yǎng)液。在嵌入物頂端表面，加上100ul試驗(yàn)制劑，樣品放在一個(gè)振蕩器上37℃振蕩(～100rpm)1小時(shí)。下層的培養(yǎng)液樣品在4℃儲(chǔ)藏48小時(shí)，用于乳酸脫氫酶(LDH，細(xì)胞毒性)和樣品滲透評(píng)價(jià)。穿上皮電阻(TER)在1小時(shí)孵育前后測(cè)量。孵育后，細(xì)胞嵌入物用于分析細(xì)胞活力，通過(guò)線粒體脫氫酶(MDH)分析。
測(cè)量穿上電阻(TER)TEER測(cè)量是這樣完成，用Endohm-12Tissue Resistance MeasurementChamber連接于帶有電極導(dǎo)線的EVOM Epithelial Voltohmmeter(WorldPrecision Instruments，Sarasota，F(xiàn)L)。電極和組織培養(yǎng)空白嵌入物在磷酸緩沖溶液中平衡至少20分鐘，檢驗(yàn)校準(zhǔn)之前電源是斷的。背景電阻通過(guò)測(cè)量Endohm組織室的1.5mL PBS和空白嵌入物的250μL PBS。對(duì)每個(gè)TER的確定，～250μL PBS加入嵌入物之后放于Endohm室中。電阻表示為(所測(cè)電阻-空白)×0.6cm2。
LDH測(cè)定法死細(xì)胞的量通過(guò)測(cè)量細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)的損失，使用一個(gè)CytoTox 96Cytoxicity Assay Kit(Promega Corp.，Madison，WI)。新鮮的無(wú)細(xì)胞的培養(yǎng)液用作空白對(duì)照。50微升底物溶液加入每個(gè)孔，盤(pán)子在室溫黑暗處孵育30分鐘。孵育后，50μL終止溶液加入每個(gè)孔，盤(pán)子在一個(gè)光密度盤(pán)測(cè)量?jī)x490nm讀取。
MTT測(cè)定法細(xì)胞活力用MTT測(cè)定法(MTT-100，MatTek試劑盒)評(píng)定。融化的和稀釋的MTT濃縮液用移液管加入(300μL)一個(gè)24-孔盤(pán)。組織嵌入物被輕輕地干燥，放進(jìn)盤(pán)孔，然后37℃孵育3小時(shí)。孵育后，從盤(pán)子移去每種嵌入物，輕輕轉(zhuǎn)移，放入一個(gè)24-孔提取盤(pán)。細(xì)胞培養(yǎng)嵌入物然后浸入每孔2.0mL的提取溶液(全部覆蓋樣品)。提取盤(pán)封蓋上以減少提取劑的蒸發(fā)。在室溫黑暗處孵育過(guò)夜后，每種嵌入物中的液體被傾注回它所被取出的孔，移去嵌入物。提取溶液(至少雙份的200μL)用移液管加入96-孔微量滴定盤(pán)，同時(shí)加入空白提取。樣品的光密度在一個(gè)盤(pán)測(cè)量?jī)x(Molecular Devicess，Palo Alto，CA)550nm測(cè)量。
熒光素-腸促胰島素類似物穿越組織屏障的定量體外熒光素-促胰島素分泌肽4穿越細(xì)胞屏障的量是用一個(gè)Bio-TekMicroplate Fluorescence Plate Reader，F(xiàn)LC 800(Bioteck Instruments Inc，Winooski，VT)計(jì)量的。每孔基底外側(cè)的樣品在一個(gè)小時(shí)孵育后被收集，用熒光盤(pán)測(cè)量?jī)x未稀釋地讀取，使用用于滲透試驗(yàn)的從熒光素-促胰島素分泌肽4和PBS的同樣母液制備的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)。在相對(duì)定量范圍做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。激發(fā)光使用485，發(fā)射是528。
圖1的數(shù)據(jù)顯示加入滲透增強(qiáng)劑于制劑#1顯著地降低TER。在此情況，TER的降低和Triton-X對(duì)照樣品是可比的。相反，制劑#2，它沒(méi)有任何滲透增強(qiáng)劑，它不顯示TER的降低，這與PBS(磷酸緩沖鹽)對(duì)照的情況相似。
圖2描述MTT測(cè)定法(細(xì)胞活力)的數(shù)據(jù)?？梢钥闯鲋苿?1和#2都顯示高活力，與PBS對(duì)照相比至少高80％。如預(yù)料，Triton對(duì)照顯著降低細(xì)胞活力。
圖3描述LDH測(cè)定法(細(xì)胞毒性)的數(shù)據(jù)?？梢钥闯鲋苿?1和#2都顯示低細(xì)胞毒性，與PBS對(duì)照相似。如預(yù)料，Triton對(duì)照有顯著增加的細(xì)胞活力。
最后，含有熒光素-腸促胰島素類似物的制劑#1和#2的滲透性數(shù)據(jù)在圖4給出(注意y-軸是以一個(gè)對(duì)數(shù)刻度顯示的)。制劑#1，其中滲透增強(qiáng)劑的添加可逆地打開(kāi)緊密連接，顯示顯著增加的滲透性，與簡(jiǎn)單的制劑#2相比(超過(guò)200倍的增加)。
雖然本發(fā)明為了清楚地理解已通過(guò)實(shí)施例詳述，但是對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員很明顯的是，某些內(nèi)容的改變和更改包括在本公開(kāi)內(nèi)，并在所附權(quán)利要求限定的范圍內(nèi)可以實(shí)現(xiàn)而沒(méi)有不適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)，本發(fā)明詳述通過(guò)示例而不是限制的方式存在。
序列表<110>史蒂文.C.夸伊亨利.R.康斯坦丁諾<120>葡萄糖調(diào)節(jié)肽的鼻內(nèi)給藥<130>03-14PCT<150>60/532,337<151>2003-12-26<160>47<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>39<212>PRT<213>毒蜥<400>1His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu1 5 10 15Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser20 25 30Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser35<210>2<211>39<212>PRT<213>毒蜥<400>2His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu1 5 1015Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser20 2530Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser35
<210>3<211>30<212>PRT<213>人類<400>3His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly1 5 1015Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg20 25 30<210>4<211>31<212>PRT<213>人類<400>4His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly1 5 10 15Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly20 25 30<210>5<211>37<212>PRT<213>人類<400>5Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val20 2530Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>6<211>37<212>PRT<213>人類
<400>6Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>7<211>37<212>PRT<213>人類<400>7Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15lle Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala lle Leu Ser Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>8<211>37<212>PRT<213>人類<400>8Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Len1 5 10 15Val Arg Thr Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>9<211>37<212>PRT<213>人類<400>9
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>10<211>37<212>PRT<213>人類<400>10Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Asn Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Ser Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>11<211>37<212>PRT<213>人類<400>11Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu1 5 1015Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Leu Pro Thr Asp Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>12<211>36<212>PRT<213>人類<400>12Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val1 5 10 15
His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val Gly20 25 30Ser Asn Thr Tyr35<210>13<211>37<212>PRT<213>人類<400>13Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>14<211>37<212>PRT<213>人類<400>14Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro lle Leu Pro Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>15<211>37<212>PRT<213>人類<400>15Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>16<211>36<212>PRT<213>人類<400>16Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val1 510 15His Arg Ser Asn Asn Phe Gly Pro lle Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly20 25 30Ser Asn Thr Tyr35<210>17<211>37<212>PRT<213>人類<400>17Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>18<211>37<212>PRT<213>人類<400>18Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val20 2530Gly Ser Asn Thr Tyr35
<210>19<211>36<212>PRT<213>人類<400>19Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val1 5 10 15Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Ser Asn Val Gly202530Ser Asn Thr Tyr35<210>20<211>36<212>PRT<213>人類<400>20Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val1 5 10 15His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Ser Asn Val Gly20 25 30Ser Asn Thr Tyr35<210>21<211>37<212>PRT<213>人類<400>21Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35
<210>22<211>37<212>PRT<213>人類<400>22Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val2025 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>23<211>36<212>PRT<213>人類<400>23Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val1 5 10 15His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly20 25 30Ser Asn Thr Tyr35<210>24<211>37<212>PRT<213>人類<400>24Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>25<211>37
<212>PRT<213>人類<400>25Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val2025 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>26<211>37<212>PRT<213>人類<400>26Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro lle Leu Pro Ser Thr Asn Val20 2530Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>27<211>37<212>PRT<213>人類<400>27Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Ile His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val202530Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>28<211>37<212>PRT<213>人類
<400>28Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val Ile Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val20 2530Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>29<211>36<212>PRT<213>人類<400>29Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu lle1 5 10 15His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro lle Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly20 2530Ser Asn Thr Tyr35<210>30<211>37<212>PRT<213>人類<400>30Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>31<211>37<212>PRT<213>人類<400>31
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Val Leu Ser Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>32<211>37<212>PRT<213>人類<400>32Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015lle Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>33<211>37<212>PRT<213>人類<400>33Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu1 5 10 15Val His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Leu Pro Thr Asp Val20 2530Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>34<211>37<212>PRT<213>人類<400>34Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu1 5 10 15
Val His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Ser Pro Thr Asp Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>35<211>36<212>PRT<213>人類<400>35Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu Val1 5 1015His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Val Leu Pro Ser Thr Asp Val Gly20 25 30Ser Asn Thr Tyr35<210>36<211>37<212>PRT<213>人類<400>36Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu1 5 10 15Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Ser Pro Thr Asp Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>37<211>37<212>PRT<213>人類<400>37Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu1 5 10 15Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ile Leu Pro Pro Thr Asp Val20 25 30
Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>38<211>37<212>PRT<213>人類<400>38Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu1 5 1015Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Pro Ala Leu Pro Pro Thr Asp VAl20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>39<211>37<212>PRT<213>人類<400>39Lys Asp Asn Thr Ala Thr Lys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>40<211>37<212>PRT<213>人類<400>40Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35
<210>41<211>37<212>PRT<213>人類<400>41Ser Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>42<211>37<212>PRT<213>人類<400>42Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala lle Leu Ser Pro Thr Asn Val20 2530Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>43<211>37<212>PRT<213>人類<400>43Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr35
<210>44<211>36<212>PRT<213>人類<400>44Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val1 5 1015His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly20 25 30Ser Asn Thr Tyr35<210>45<211>36<212>PRT<213>人類<400>45Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val1 5 10 15His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Val Leu Pro Pro Ser Asn Val Gly20 2530Ser Asn Thr Tyr35<210>46<211>37<212>PRT<213>人類<400>46Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 10 15Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val20 2530Gly Ser Asn Thr Tyr35<210>47<211>37
<212>PRT<213>人類<400>47Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu1 5 1015Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val20 25 30Gly Ser Asn Thr Tyr3權(quán)利要求
1.一種穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其中所述穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑中的所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽在體外滲透試驗(yàn)中滲透性至少10-倍高于鹽制劑中的葡萄糖調(diào)節(jié)肽，其中所述鹽制劑由葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水、氯化鈉和緩沖劑組成，其中所述穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑和所述鹽制劑有相同的pH和同滲容摩。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽選自糊精、糊精類似物、普蘭林肽、胰高血糖素樣肽-1(GLP)和促胰島素分泌肽-3、促胰島素分泌肽-4組成的組。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其進(jìn)一步包括至少一種粘膜遞送增強(qiáng)劑，其選自如下物質(zhì)組成的組(a)增溶劑；(b)電荷修飾劑；(c)pH控制劑；(d)降解酶抑制劑；(e)粘液溶解的或粘液清除劑；(f)纖毛穩(wěn)定劑；(g)膜滲透增強(qiáng)劑，其選自(i)表面活性劑，(ii)膽鹽，(ii)磷脂添加劑、混合膠束、脂質(zhì)體或載體，(iii)醇，(iv)烯胺，(v)NO供體化合物，(vi)長(zhǎng)鏈兩性分子，(vii)小的疏水滲透增強(qiáng)劑；(viii)水楊酸鈉或水楊酸衍生物；(ix)乙酰乙酸的甘油酯，(x)環(huán)糊精或β-環(huán)糊精衍生物，(xi)中鏈脂肪酸，(xii)螯合劑，(xiii)氨基酸或其鹽，(xiv)N-乙酰氨基酸或其鹽，(xv)降解成所選膜組分的酶，(ix)脂肪酸合成的抑制劑，或(x)膽固醇合成的抑制劑；或(xi)在此所述膜滲透增強(qiáng)劑(i)-(x)的任何組合；(h)上皮連接生理學(xué)的調(diào)節(jié)劑；(i)血管擴(kuò)張劑；(j)選擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑；和(k)一種穩(wěn)定遞送運(yùn)輸工具、載體、支持或復(fù)合物-形成物質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述制劑是鼻內(nèi)制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其中所述制劑是包含水和葡萄糖調(diào)節(jié)肽的水性制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制劑，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽選自糊精肽、GLP肽和促胰島素分泌肽組成的組。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制劑，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽是糊精肽，其中所述糊精肽包含選自序列ID NO1-47組成的組的氨基酸序列。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其中所述制劑進(jìn)一步包括至少一種穿越粘膜遞送劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制劑，其中所述穿越粘膜遞送劑選自如下物質(zhì)組成的組(a)增溶劑；(b)電荷修飾劑；(c)pH控制劑；(d)降解酶抑制劑；(e)粘液溶解的或粘液清除劑；(f)纖毛穩(wěn)定劑；(g)膜滲透增強(qiáng)劑，其選自(i)表面活性劑，(ii)膽鹽，(ii)磷脂添加劑、混合膠束、脂質(zhì)體或載體，(iii)醇，(iv)烯胺，(v)NO供體化合物，(vi)長(zhǎng)鏈兩性分子，(vii)小的疏水滲透增強(qiáng)劑；(viii)水楊酸鈉或水楊酸衍生物；(ix)乙酰乙酸的甘油酯，(x)環(huán)糊精或β-環(huán)糊精衍生物，(xi)中鏈脂肪酸，(xii)螯合劑，(xiii)氨基酸或其鹽，(xiv)N-乙酰氨基酸或其鹽，(xv)降解成所選膜組分的酶，(ix)脂肪酸合成的抑制劑，或(x)膽固醇合成的抑制劑；或(xi)在此所述膜滲透增強(qiáng)劑(i)-(x)的任何組合；(h)上皮連接生理學(xué)的調(diào)節(jié)劑；(i)血管擴(kuò)張劑；(j)選擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑；和(k)穩(wěn)定遞送運(yùn)輸工具、載體、支持或復(fù)合物-形成物質(zhì)。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，所述制劑進(jìn)一步包括至少一種多元醇。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的制劑，其中所述多元醇是甘露醇、乳糖或山梨糖醇。
12.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其進(jìn)一步包括螯合劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的制劑，其中所述螯合劑是乙二胺四乙酸(EDTA)。
14.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其進(jìn)一步包括增溶劑。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的制劑，其中所述增溶劑是環(huán)糊精。
16.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其進(jìn)一步包括表面活性劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的制劑，其中所述表面活性劑是L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)。
18.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其中所述GRP拮抗劑是促胰島素分泌肽-4肽。
19.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其中所述制劑具有大約2-8的pH。
20.一種水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水和增溶劑，其中所述制劑基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的制劑，其中所述增溶劑選自羥基丙基-β-環(huán)葡聚糖、磺基丁基醚-β-環(huán)葡聚糖和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的水性制劑，其進(jìn)一步包括一種或多種多元醇。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的水性制劑，其中所述多元醇選自乳糖、山梨糖醇、海藻糖、蔗糖、甘露糖、甘露醇和麥芽糖及其衍生物和類似物組成的組。
24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其進(jìn)一步包括表面活性劑和螯合劑。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的水性制劑，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、PEG、十六烷醇、PVP、PVA、羊毛脂醇、L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)和失水山梨糖醇單油酸酯組成的組。
26.根據(jù)權(quán)利要求20所述的水性制劑，其中所述GRP選自促胰島素分泌肽-3、促胰島素分泌肽-4、糊精、普蘭林肽、GLP-1組成的組。
27.根據(jù)權(quán)利要求20所述的水性制劑，其中所述GRP是選自序列IDNO1-47組成的組的肽。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的水性制劑，其中所述肽具有羧基末端氨基酸殘基，其中所述羧基末端氨基酸殘基是乙?；?。
29.一種水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其包括水、葡萄糖調(diào)節(jié)肽和螯合劑，其中所述制劑的pH是大約2到大約8，以及所述制劑基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的水性制劑，其進(jìn)一步包括一種或多種多元醇。
31.根據(jù)權(quán)利要求29所述的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其進(jìn)一步包括增溶劑。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其中所述增溶劑選自羥基丙基-β-環(huán)葡聚糖、磺基丁基醚-β-環(huán)葡聚糖和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
33.根據(jù)權(quán)利要求29所述的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其進(jìn)一步包括表面活性劑。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、PEG、十六烷醇、PVP、PVA、羊毛脂醇、L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)和失水山梨糖醇單油酸酯組成的組。
35.根據(jù)權(quán)利要求29所述的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽是選自序列ID NO1-47組成的組的肽。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的制劑，其中所述肽具有羧基末端氨基酸殘基，其中所述羧基末端氨基酸殘基是乙?；摹?br> 37.一種水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水和增溶劑，其中所述制劑具有2.0到大約8的pH，并且所述制劑基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其中所述增溶劑選自羥基丙基-β-環(huán)葡聚糖、磺基丁基醚-β-環(huán)葡聚糖和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
39.根據(jù)權(quán)利要求37所述的水性制劑，其進(jìn)一步包括螯合劑。
40.根據(jù)權(quán)利要求37所述的制劑，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽是選自序列ID NO1-47組成的組的肽。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的制劑，其中所述肽具有羧基末端氨基酸殘基，其中所述羧基末端氨基酸殘基是乙?；?。
42.一種水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水、螯合劑和表面活性劑，其中所述制劑具有2.0到大約8的pH，以及所述制劑基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的水性制劑，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、PEG、十六烷醇、PVP、PVA、L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)、羊毛脂醇和失水山梨糖醇單油酸酯組成的組。
44.根據(jù)權(quán)利要求42所述的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其進(jìn)一步包括增溶劑。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其中所述增溶劑選自羥基丙基-β-環(huán)葡聚糖、磺基丁基醚-β-環(huán)葡聚糖和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
46.一種給藥葡萄糖調(diào)節(jié)肽的用途，其包括鼻內(nèi)地給藥穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其中所述穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑中的所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽在一種體外滲透試驗(yàn)中的滲透性至少10倍高于鹽制劑中的葡萄糖調(diào)節(jié)肽，其中所述鹽制劑由葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水、氯化鈉和緩沖劑組成，其中所述穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑和所述鹽制劑有相同的pH和同滲容摩。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的用途，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽選自糊精、糊精類似物、普蘭林肽、胰高血糖素樣肽-1(GLP)和促胰島素分泌肽-3、促胰島素分泌肽-4組成的組。
48.根據(jù)權(quán)利要求46所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括選自以下物質(zhì)組成的組的至少一種粘膜遞送增強(qiáng)劑(a)增溶劑；(b)電荷修飾劑；(c)pH控制劑；(d)降解酶抑制劑；(e)粘液溶解的或粘液清除劑；(f)纖毛穩(wěn)定劑；(g)膜滲透增強(qiáng)劑，其選自(i)表面活性劑，(ii)膽鹽，(ii)磷脂添加劑、混合膠束、脂質(zhì)體或載體，(iii)醇，(iv)烯胺，(v)NO供體化合物，(vi)長(zhǎng)鏈兩性分子，(vii)小的疏水滲透增強(qiáng)劑；(viii)水楊酸鈉或水楊酸衍生物；(ix)乙酰乙酸的甘油酯，(x)環(huán)糊精或β-環(huán)糊精衍生物，(xi)中鏈脂肪酸，(xii)螯合劑，(xiii)氨基酸或其鹽，(xiv)N-乙酰氨基酸或其鹽，(xv)降解成所選膜組分的酶，(ix)脂肪酸合成的抑制劑，或(x)膽固醇合成的抑制劑；或(xi)在此所述膜滲透增強(qiáng)劑(i)-(x)的任何組合；(h)上皮連接生理學(xué)的調(diào)節(jié)劑；(i)血管擴(kuò)張劑；(j)選擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑；和(k)穩(wěn)定遞送運(yùn)輸工具、載體、支持或復(fù)合物-形成物質(zhì)。
49.根據(jù)權(quán)利要求46所述的用途，其中所述制劑是包含水和葡萄糖調(diào)節(jié)肽的水性制劑。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽選自糊精肽、GLP肽和促胰島素分泌肽組成的組。
51.根據(jù)權(quán)利要求46所述的用途，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽是糊精肽，其中所述糊精肽包括選自序列ID NO1-47組成的組的氨基酸序列。
52.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括至少一種穿越粘膜遞送劑。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的用途，其中所述穿越粘膜遞送劑選自以下物質(zhì)組成的組(a)增溶劑；(b)電荷修飾劑；(c)pH控制劑；(d)降解酶抑制劑；(e)粘液溶解的或粘液清除劑；(f)纖毛穩(wěn)定劑；(g)膜滲透增強(qiáng)劑，其選自(i)表面活性劑，(ii)膽鹽，(ii)磷脂添加劑、混合膠束、脂質(zhì)體或載體，(iii)醇，(iv)烯胺，(v)NO供體化合物，(vi)長(zhǎng)鏈兩性分子，(vii)小的疏水滲透增強(qiáng)劑；(viii)水楊酸鈉或水楊酸衍生物；(ix)乙酰乙酸的甘油酯，(x)環(huán)糊精或β-環(huán)糊精衍生物，(xi)中鏈脂肪酸，(xii)螯合劑，(xiii)氨基酸或其鹽，(xiv)N-乙酰氨基酸或其鹽，(xv)降解成所選膜組分的酶，(ix)脂肪酸合成的抑制劑，或(x)膽固醇合成的抑制劑；或(xi)在此所述膜滲透增強(qiáng)劑(i)-(x)的任何組合；(h)上皮連接生理學(xué)的調(diào)節(jié)劑；(i)血管擴(kuò)張劑；(j)選擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑；和(k)穩(wěn)定遞送運(yùn)輸工具、載體、支持或復(fù)合物-形成物質(zhì)。
54.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括至少一種多元醇。
55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的制劑，其中所述多元醇是甘露醇、乳糖或山梨糖醇。
56.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括螯合劑。
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的用途，其中所述螯合劑是乙二胺四乙酸(EDTA)。
58.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括增溶劑。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的用途，其中所述增溶劑是環(huán)糊精。
60.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括表面活性劑。
61.根據(jù)權(quán)利要求60所述的用途，其中所述表面活性劑是L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)。
62.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述GRP拮抗劑是促胰島素分泌肽-4肽。
63.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述制劑有大約2-8的pH。
64.一種給藥葡萄糖調(diào)節(jié)肽的用途，其包括鼻內(nèi)地給藥水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，所述制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水和增溶劑，其中所述制劑基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的用途，其中所述增溶劑選自羥基丙基-β-環(huán)葡聚糖、磺基丁基醚-β-環(huán)葡聚糖和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
66.根據(jù)權(quán)利要求64所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括一種或多種多元醇。
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的用途，其中所述多元醇選自乳糖、山梨糖醇、海藻糖、蔗糖、甘露糖、甘露醇和麥芽糖及其衍生物和類似物組成的組。
68.根據(jù)權(quán)利要求64所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括表面活性劑和螯合劑。
69.根據(jù)權(quán)利要求68所述的用途，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、PEG、十六烷醇、PVP、PVA、羊毛脂醇、L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)和失水山梨糖醇單油酸酯組成的組。
70.根據(jù)權(quán)利要求64所述的用途，其中所述GRP選自促胰島素分泌肽-3、促胰島素分泌肽-4、糊精、普蘭林肽、GLP-1組成的組。
71.根據(jù)權(quán)利要求64所述的用途，其中所述GRP是選自序列ID NO1-47組成的組的肽。
72.根據(jù)權(quán)利要求71所述的用途，其中所述肽具有羧基末端氨基酸殘基，其中所述羧基末端氨基酸殘基是乙?；?。
73.一種給藥葡萄糖調(diào)節(jié)肽的用途，其包括鼻內(nèi)地給藥水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，所述制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水和螯合劑，其中所述制劑的pH是大約2到大約8，所述制劑基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
74.根據(jù)權(quán)利要求73所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括一種或多種多元醇。
75.根據(jù)權(quán)利要求73所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括增溶劑。
76.根據(jù)權(quán)利要求75所述的用途，其中所述增溶劑選自羥基丙基-β-環(huán)葡聚糖、磺基丁基醚-β-環(huán)葡聚糖和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
77.根據(jù)權(quán)利要求73所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括表面活性劑。
78.根據(jù)權(quán)利要求77所述的用途，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、PEG、十六烷醇、PVP、PVA、羊毛脂醇、L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)和失水山梨糖醇單油酸酯組成的組。
79.根據(jù)權(quán)利要求73所述的用途，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽是選自序列ID NO1-47組成的組的肽。
80.根據(jù)權(quán)利要求79所述的用途，其中所述肽具有羧基末端氨基酸殘基，其中所述羧基末端氨基酸殘基是乙?；摹?br> 81.一種給藥葡萄糖調(diào)節(jié)肽的用途，其包括鼻內(nèi)地給藥水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，所述制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水和增溶劑，其中所述制劑的pH是2.0到大約8，所述制劑基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
82.根據(jù)權(quán)利要求81所述的用途，其中所述增溶劑選自羥基丙基-β-環(huán)葡聚糖、磺基丁基醚-β-環(huán)葡聚糖和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
83.根據(jù)權(quán)利要求81所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括螯合劑。
84.根據(jù)權(quán)利要求81所述的用途，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽是選自序列ID NO1-47組成的組的肽。
85.根據(jù)權(quán)利要求84所述的用途，其中所述肽具有羧基末端氨基酸殘基，其中所述羧基末端氨基酸殘基是乙酰化的。
86.一種給藥葡萄糖調(diào)節(jié)肽的用途，其包括鼻內(nèi)地給藥水性葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，所述制劑包括葡萄糖調(diào)節(jié)肽、水、螯合劑和表面活性劑，其中所述制劑的pH是2.0到大約8，所述制劑基本不含多肽或蛋白質(zhì)那樣的穩(wěn)定劑。
87.根據(jù)權(quán)利要求86所述的用途，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、PEG、十六烷醇、PVP、PVA、L-α-磷脂酰膽堿二癸酰(DDPC)、羊毛脂醇和失水山梨糖醇單油酸酯組成的組。
88.根據(jù)權(quán)利要求86所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括增溶劑。
89.根據(jù)權(quán)利要求88所述的用途，其中所述增溶劑選自羥基丙基-β-環(huán)葡聚糖、磺基丁基醚-β-環(huán)葡聚糖和甲基-β-環(huán)糊精組成的組。
90.一種穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其中所述穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑中的所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽當(dāng)鼻內(nèi)給藥于人時(shí)，具有至少10％的生物利用度。
91.根據(jù)權(quán)利要求90所述的制劑，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽選自糊精、糊精類似物、普蘭林肽、胰高血糖素樣肽-1(GLP)和促胰島素分泌肽-3、促胰島素分泌肽-4組成的組。
92.根據(jù)權(quán)利要求90所述的制劑，其進(jìn)一步包括至少一種選自以下物質(zhì)組成的組的粘膜遞送增強(qiáng)劑(a)增溶劑；(b)電荷修飾劑；(c)pH控制劑；(d)降解酶抑制劑；(e)粘液溶解的或粘液清除劑；(f)纖毛穩(wěn)定劑；(g)膜滲透增強(qiáng)劑，其選自(i)表面活性劑，(ii)膽鹽，(ii)磷脂添加劑、混合膠束、脂質(zhì)體或載體，(iii)醇，(iv)烯胺，(v)NO供體化合物，(vi)長(zhǎng)鏈兩性分子，(vii)小的疏水滲透增強(qiáng)劑；(viii)水楊酸鈉或水楊酸衍生物；(ix)乙酰乙酸的甘油酯，(x)環(huán)糊精或β-環(huán)糊精衍生物，(xi)中鏈脂肪酸，(xii)螯合劑，(xiii)氨基酸或其鹽，(xiv)N-乙酰氨基酸或其鹽，(xv)降解成所選膜組分的酶，(ix)脂肪酸合成的抑制劑，或(x)膽固醇合成的抑制劑；或(xi)在此所述膜滲透增強(qiáng)劑(i)-(x)的任何組合；(h)上皮連接生理學(xué)的調(diào)節(jié)劑；(i)血管擴(kuò)張劑；(j)選擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑；和(k)穩(wěn)定遞送運(yùn)輸工具、載體、支持或復(fù)合物-形成物質(zhì)。
93.根據(jù)權(quán)利要求90所述的制劑，其中所述制劑是鼻內(nèi)制劑。
94.根據(jù)權(quán)利要求90所述的制劑，其中所述制劑是包含水和葡萄糖調(diào)節(jié)肽的水性制劑。
95.根據(jù)權(quán)利要求94所述的制劑，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽選自糊精肽、GLP肽和促胰島素分泌肽組成的組。
96.根據(jù)權(quán)利要求95所述的制劑，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽是糊精肽，其中所述糊精肽包括選自序列ID NO1-47組成的組的氨基酸序列。
97.根據(jù)權(quán)利要求90所述的制劑，其中所述制劑進(jìn)一步包括至少一種穿越粘膜遞送劑。
98.一種給藥葡萄糖調(diào)節(jié)肽的用途，其包括鼻內(nèi)地給藥穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑，其中所述穿越粘膜葡萄糖調(diào)節(jié)肽制劑中的所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽當(dāng)鼻內(nèi)給藥于人時(shí)，具有至少10％的生物利用度。
99.根據(jù)權(quán)利要求98所述的用途，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽選自糊精、糊精類似物、普蘭林肽、胰高血糖素樣肽-1(GLP)和促胰島素分泌肽-3、促胰島素分泌肽-4組成的組。
100.根據(jù)權(quán)利要求99所述的用途，其中所述制劑進(jìn)一步包括至少一種粘膜遞送增強(qiáng)劑，所述粘膜遞送增強(qiáng)劑選自以下物質(zhì)組成的組(a)增溶劑；(b)電荷修飾劑；(c)pH控制劑；(d)降解酶抑制劑；(e)粘液溶解的或粘液清除劑；(f)纖毛穩(wěn)定劑；(g)膜滲透增強(qiáng)劑，其選自(i)表面活性劑，(ii)膽鹽，(ii)磷脂添加劑、混合膠束、脂質(zhì)體或載體，(iii)醇，(iv)烯胺，(v)NO供體化合物，(vi)長(zhǎng)鏈兩性分子，(vii)小的疏水滲透增強(qiáng)劑；(viii)水楊酸鈉或水楊酸衍生物；(ix)乙酰乙酸的甘油酯，(x)環(huán)糊精或β-環(huán)糊精衍生物，(xi)中鏈脂肪酸，(xii)螯合劑，(xiii)氨基酸或其鹽，(xiv)N-乙酰氨基酸或其鹽，(xv)降解成所選膜組分的酶，(ix)脂肪酸合成的抑制劑，或(x)膽固醇合成的抑制劑；或(xi)在此所述膜滲透增強(qiáng)劑(i)-(x)的任何組合；(h)上皮連接生理學(xué)的調(diào)節(jié)劑；(i)血管擴(kuò)張劑；(j)選擇性的運(yùn)輸增強(qiáng)劑；和(k)穩(wěn)定遞送運(yùn)輸工具、載體、支持或復(fù)合物-形成物質(zhì)。
101.根據(jù)權(quán)利要求98所述的用途，其中所述制劑是包含水和葡萄糖調(diào)節(jié)肽的水性制劑。
102.根據(jù)權(quán)利要求101所述的用途，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽選自糊精肽、GLP肽和促胰島素分泌肽組成的組。
103.根據(jù)權(quán)利要求98所述的用途，其中所述葡萄糖調(diào)節(jié)肽是糊精肽，其中所述糊精肽包括選自序列ID NO1-47組成的組的氨基酸序列。
全文摘要
介紹了藥物組合物和方法，其包括至少一種葡萄糖調(diào)節(jié)肽，例如糊精、胰高血糖素樣肽－1(GLP)、普蘭林肽(pramlintide)或促胰島素分泌肽－4(exendin－4)，和一種或多種提高鼻粘膜對(duì)糊精的遞送的粘膜遞送增強(qiáng)劑，以治療哺乳動(dòng)物的多種疾病和癥狀，包括肥胖癥和糖尿病。
文檔編號(hào)A61K9/00GK1933855SQ200480042162
公開(kāi)日2007年3月21日 申請(qǐng)日期2004年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月26日
發(fā)明者史蒂文·C·夸伊, 亨利·R·康斯坦丁諾 申請(qǐng)人:納斯泰克制藥公司