專(zhuān)利名稱(chēng)：抑制劑成像劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于體內(nèi)成像的診斷成像劑。所述成像劑包括用適于體內(nèi)診斷成像的成像部分標(biāo)記的金屬蛋白酶抑制劑。
背景技術(shù)：
基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是至少20個(gè)介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解或者重建的鋅依賴(lài)性?xún)?nèi)肽酶的家族[Massova等，F(xiàn)ASEB J121075(1998)]。而且，MMP家族的成員可以降解血管壁的所有組分，所以在涉及ECM組分降解的生理學(xué)和病理學(xué)事件中都有著重要作用。由于MMP能夠干擾控制細(xì)胞行為的細(xì)胞-基質(zhì)相互作用，所以其活性影響到多種過(guò)程比如細(xì)胞分化、遷移、增殖和凋亡。在生理學(xué)狀況下精細(xì)調(diào)節(jié)MMP活性的負(fù)調(diào)節(jié)控制通常并不如所預(yù)期的那樣起作用。人們認(rèn)為MMP活性表達(dá)不當(dāng)構(gòu)成了多個(gè)疾病狀態(tài)機(jī)理的一部分。所以，在許多炎癥、惡性病和退化性疾病中，MMP是治療性金屬蛋白酶抑制劑(MMPi)的靶向物[Whittaker等，Chem.Rev.99，2735(1999)]。
由此，人們相信MMP的合成抑制劑可用于治療許多炎癥、惡性病和退化性疾病。而且，已經(jīng)提出MMP抑制劑可用于診斷這些疾病。WO01/60416公開(kāi)了基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制劑的螯合劑綴合物，及其在和診斷金屬形成的金屬絡(luò)合物的制備中的應(yīng)用。描述的具體MMP抑制劑類(lèi)是異羥肟酸鹽，尤其是琥珀?；惲u肟酸鹽。這些化合物被提議用于診斷和細(xì)胞外基質(zhì)降解相關(guān)的心臟血管病理學(xué)，比如動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭和再狹窄。其中描述了優(yōu)選的MMP抑制劑、螯合劑和連接劑。Zheng等[Nucl.Med.Biol.29761-770(2002)]報(bào)導(dǎo)了標(biāo)記有正電子發(fā)射斷層顯影術(shù)(PET)示蹤劑11C和18F的MMP抑制劑的合成。該文描述的化合物假定可用于乳腺癌的非侵入性成像。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)用成像部分標(biāo)記的磺酰胺異羥肟酸鹽基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(MMPi)類(lèi)的特殊類(lèi)可用作哺乳動(dòng)物體內(nèi)成像和診斷的診斷成像劑。這些化合物顯示出優(yōu)異的MMP抑制活性，其Ki位于亞納摩爾(sub-nanomolar)范圍。本發(fā)明MMPi的排尿分布型可以通過(guò)采用合適的連接基團(tuán)，尤其是聚乙二醇(PEG)連接基團(tuán)進(jìn)行調(diào)整。
本發(fā)明的成像劑可用于很多已知涉及特異性基質(zhì)金屬蛋白酶的病狀(炎癥、惡性病和退化性疾病)的體內(nèi)診斷成像。這些病狀包括(a)動(dòng)脈粥樣硬化，其中各種MMP過(guò)分表達(dá)。在人體動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中檢測(cè)到了水平升高的MMP-1、3、7、9、11、12、13和MT1-MMP[S.J.George，Exp.Opin.Invest.Drugs，9(5)，993-1007(2000)和其參考文獻(xiàn)]。也有人報(bào)導(dǎo)了MMP-2[Z.Li等，Am.J.Pathol.，148，121-128(1996)]和MMP-8[M.P.Herman等，Circulation，104，1899-1904(2001)]在人體動(dòng)脈粥樣化中的表達(dá)；(b)慢性心力衰竭(Peterson，J.T.等，Matrix metalloproteinaseinhibitor development for the treatment of heart failure，Drug Dev.Res.(2002)，55(1)，29-44報(bào)導(dǎo)了MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-13和MMP-14在心力衰竭中被正調(diào)節(jié))；(c)癌癥[Vihinen等，Int.J.Cancer99，p157-166(2002)對(duì)MMP，尤其是MMP-2、MMP-3、MMP-7和MMP-9在癌癥中的表現(xiàn)進(jìn)行了綜述]；(d)關(guān)節(jié)炎[Jacson等，Inflamm.Res.50(4)，p183-186(2001)“Selective matrix metalloproteinase inhibition in rheumatoidarthritis-targeting gelatinase A activation”，特別討論了MMP-2]；(e)肌萎縮性側(cè)索硬化[Lim等，J.Neurochem，67，251-259(1996)；其中涉及到了MMP-2和MMP-9]；(f)腦轉(zhuǎn)移酶，據(jù)報(bào)導(dǎo)MMP-2、MMP-9和MMP-13參與其中[Spinale，Circul.Res.，90，520-530(2002)]；(g)腦血管疾病，據(jù)報(bào)導(dǎo)MMP-2和MMP-9參與其中[Lukes等，Mol.Neurobiol.，19，267-284(1999)]；(h)阿耳茨海默氏病，在疾病組織中確定有MMP-2和MMP-9[Backstrom等，J.Neurochem.，58，983-992(1992)]；(i)神經(jīng)炎癥(neuroinflammatroy disease)，MMP-2、MMP-3和MMP-9參與其中[Mun-Bryce等，Brain.Res.，933，42-49(2002)]；(j)COPD(即，慢性肺堵塞疾病)，據(jù)報(bào)導(dǎo)其中MMP-1、MMP-2、MMP-8和MMP-9被正調(diào)節(jié)[Segura-Valdez等，Chest，117，684-694(2000)]；(k)眼病理學(xué)[Kurpakus-Wheater等，Prog.Histo.Cytochem.，36(3)，179-259(2001)]；(l)皮膚病[Herouy，Y.，Int.J.Mol.Med.，7(1)，3-12(2001)]。
發(fā)明詳述在第一方面，本發(fā)明提供了成像劑，它包括用成像部分標(biāo)記的式(I)的金屬蛋白酶抑制劑，其中所述成像部分可以在所述成像劑被體內(nèi)給藥到哺乳動(dòng)物身體后進(jìn)行檢測(cè) 其中Y1是H或-(CH2)w-(C＝O)-Z；其中w是1-6的整數(shù)；和Z是OH、C1-6烷氧基、C4-10芳氧基或者NR1R2，其中R1和R2每個(gè)獨(dú)立選自H、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C1-6氟烷基或C4-10芳基。
X1和X2與它們連接的碳原子一起形成C3-10飽和環(huán)，該環(huán)可以是脂環(huán)或二環(huán)，而且可以任選地引入選自O(shè)、N和S的1或2個(gè)雜原子；X3是H、C1-3烷基或C1-3氟烷基；Y2是式-[A1]p[O]qA2的基團(tuán)，其中p和q是0或1，A1是C1-10亞烷基，C3-8環(huán)亞烷基、C1-10全氟亞烷基、C6-10亞芳基或者C2-10雜亞芳基，和A2是H、C1-10烷基、C3-8環(huán)烷基、C1-10全氟烷基、C6-10芳基或C2-10雜芳基，前提是當(dāng)p＝0時(shí)q也是0而且A2不是H。
在式(I)中，Y1優(yōu)選是-(CH2)w-(C＝O)-Z。w優(yōu)選是1、2或3，最優(yōu)選是2或3，理想情況是2。X3優(yōu)選是H、CH3或CH2F，最優(yōu)選是H或CH3，理想情況是H。Y2優(yōu)選是A2，其中A2是C6-10芳基或者C2-10雜芳基或者-A1[O]qA2，其中A1是C6-10亞芳基和A2是C6-10芳基或C2-10雜芳基。
Z優(yōu)選是NR1R2，最優(yōu)選選擇R1和R2之一是H而另一個(gè)不是H。
由X1和X2以及它們所連接的碳原子形成的合適單環(huán)包括環(huán)烷烴(比如環(huán)戊烷或環(huán)己烷)、哌啶、四氫呋喃、四氫吡喃、四氫噻吩和四氫噻喃。合適的二環(huán)包括二環(huán)[2.2.2]辛烷、二環(huán)[2.2.3]壬烷和具有另外的亞乙基橋的二環(huán)四氫吡喃。X1和X2的環(huán)可以進(jìn)一步任選地包括一個(gè)或多個(gè)羥基、C1-3烷氧基或C1-3氟烷基取代基。X1和X2與它們連接的碳原子一起形成的環(huán)優(yōu)選是C4-6環(huán)亞烷基、或者引入單醚鍵的4元或6元環(huán)，最優(yōu)選是環(huán)戊烷、環(huán)己烷或四氫吡喃環(huán)。
本發(fā)明的磺酰胺異羥肟酸鹽基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的合適分子量是100-2000道爾頓，優(yōu)選是150-600道爾頓，最優(yōu)選是200-500道爾頓。該抑制劑優(yōu)選是合成的。
術(shù)語(yǔ)“用…標(biāo)記的”是指MMPi自身或者包括成像部分，或者成像部分以附加物種形式被連接，任選通過(guò)連接基團(tuán)，如下面的式II所述。當(dāng)MMPi自身包括成像部分時(shí)，這意味著“成像部分”形成了MMPi化學(xué)結(jié)構(gòu)的一部分，是放射性或者非放射性同位素，其含量水平明顯高于所述同位素的天然豐度水平。同位素的這種升高或者富集的水平合適地是至少5倍，優(yōu)選是至少10倍，最優(yōu)選是至少20倍；理想情況下，或者是所述同位素天然豐度水平的至少50倍，或者以所述同位素的富集水平為90-100％的水平存在。包含“成像部分”的MMPi的例子在下面進(jìn)行描述，但是包括了高水平13C或11C的CH3基團(tuán)以及高水平18F的氟烷基基團(tuán)，從而使得所述成像部分在MMPi化學(xué)結(jié)構(gòu)內(nèi)用13C、11C或18F進(jìn)行了同位素標(biāo)記。放射性同位素3H和14C并非合適的成像部分。
“成像部分”可以或者在哺乳動(dòng)物體外檢測(cè)，或者采用針對(duì)體內(nèi)使用設(shè)計(jì)的檢測(cè)器，比如血管內(nèi)放射或者光學(xué)檢測(cè)器比如內(nèi)窺鏡、或者針對(duì)術(shù)中使用設(shè)計(jì)的放射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。優(yōu)選的成像部分是可以在體內(nèi)給藥后以非侵入方式從外部檢測(cè)的成像部分。最優(yōu)選的成像部分是放射性的，尤其是放射性金屬離子、γ發(fā)射型放射性鹵素和發(fā)射正電子的放射性非金屬，尤其是那些適于采用SPECT或PET成像的部分。
“成像部分”優(yōu)選選自(i)放射性金屬離子；
(ii)順磁性金屬離子；(iii)γ發(fā)射型放射性鹵素；(iv)發(fā)射正電子的放射性非金屬；(v)超極化的NMR-活性核；(vi)適于體內(nèi)光學(xué)成像的報(bào)道分子(reporter)；(vii)適于血管內(nèi)檢測(cè)的β-發(fā)射體。
當(dāng)成像部分是放射性金屬離子，即，放射金屬時(shí)，術(shù)語(yǔ)“放射金屬”包括放射性過(guò)渡元素加上鑭系元素和錒系元素、和金屬主族元素。半金屬砷、硒和碲排除在外。合適的放射金屬可以或者是正電子發(fā)射體，比如64Cu、48V、52Fe、55Co、94mTc或68Ga；γ-發(fā)射體，比如99mTc、111In、113mIn或者67Ga。優(yōu)選的放射金屬是99mTc、64Cu、68Ga和111In。最優(yōu)選的放射金屬是γ發(fā)射體，尤其是99mTc。
當(dāng)成像部分是順磁性金屬離子時(shí)，合適的這類(lèi)金屬離子包括Gd(III)、Mn(II)、Cu(II)、Cr(III)、Fe(III)、Co(II)、Er(II)、Ni(II)、Eu(III)或者Dy(III)。優(yōu)選的順磁性金屬離子是Gd(III)、Mn(II)和Fe(III)，特別優(yōu)選的是Gd(III)。
當(dāng)成像部分是γ-發(fā)射型放射性鹵素時(shí)，放射性鹵素適當(dāng)?shù)剡x自123I、131I或77Br。優(yōu)選地γ-發(fā)射型放射性鹵素是123I。
當(dāng)成像部分是正電子發(fā)射型放射性非金屬時(shí)，這種正電子發(fā)射體合適地包括11C、13N、15O、17F、18F、75Br、76Br或124I。優(yōu)選的正電子發(fā)射型放射性非金屬是11C、13N、124I和18F，尤其是11C和18F，最尤其是18F。
當(dāng)成像部分是超極化的NMR-活性核時(shí)，這種NMR活性核的核自旋非0，包括13C、15N、19F、29Si和31P。其中優(yōu)選13C。術(shù)語(yǔ)“超極化的”是指NMR-活性核的極化度提高到高于其平衡極化。13C(相對(duì)于12C而言)的天然豐度是約1％，合適的13C標(biāo)記的化合物在被超極化之前經(jīng)適當(dāng)富集至豐度為至少5％，優(yōu)選至少50％，最優(yōu)選至少90％。本發(fā)明金屬蛋白酶抑制劑的至少一個(gè)碳原子用13C適當(dāng)富集，13C隨后被超極化。
當(dāng)成像部分是適于體內(nèi)光學(xué)成像的報(bào)道分子時(shí)，該報(bào)道分子是任何能夠在光學(xué)成像程序中直接或間接檢測(cè)的部分。報(bào)道分子可以是光散射體(例如，有色或無(wú)色顆粒)、光吸收體或光散射體。更優(yōu)選，報(bào)道分子是染料比如發(fā)色團(tuán)或熒光化合物。染料可以是任何和電磁譜線中波長(zhǎng)從紫外到近紅外的光相互作用的染料。最優(yōu)選地，該報(bào)道分子具有熒光性質(zhì)。
優(yōu)選的有機(jī)發(fā)色和熒光報(bào)道分子包括具有廣延離域電子系統(tǒng)的基團(tuán)，例如，花青、部花青、吲哚花青、酞花青、萘花青、三苯基甲川、卟啉、吡喃染料、噻喃染料、方酸染料(squarylium dye)、croconium染料、甘菊環(huán)(azulenium)染料、靛苯胺、苯并吩嗪染料、苯并噻吩并噻嗪染料、蒽醌、萘醌、陰丹士林(indathrene)、鄰苯二甲酰基吖啶酮、三苯酚合苯醌、偶氮染料、在分子間和分子內(nèi)傳遞電荷的染料和染料絡(luò)合物、環(huán)庚三烯酮、四嗪、二(二硫戊烯)絡(luò)合物、二(苯-二硫酯)絡(luò)合物、碘代苯胺染料、二(S，O-二硫戊烯)絡(luò)合物。也可以采用熒光蛋白質(zhì)，比如綠熒光蛋白質(zhì)(GFP)和具有不同吸收/發(fā)射性質(zhì)的GFP改性體。在有些情況下采用了某些稀土金屬(例如，銪、釤、鋱或鏑)的絡(luò)合物，熒光納米晶體(量子點(diǎn))也在某些情況下采用。
可以采用的發(fā)色團(tuán)的特殊例子包括熒光素、硫羅丹明101(TexasRed)、羅丹明B、羅丹明6G、羅丹明19、吲哚花青綠、Cy2、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy7、Marina Blue、Pacific Blue、Oregon Green 88、Oregon Green 514、四甲基羅丹明、和Alexa Fluor 350、Alexa Fluor430、Alexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor660、Alexa Fluor 680、Alexa Fluor 700和Alexa Fluor 750。
特別優(yōu)選的染料是吸收峰值位于可見(jiàn)區(qū)域或近紅外區(qū)域，400nm-3μm之間，特別是600-1300nm之間的染料。
光學(xué)成像模態(tài)和測(cè)量技術(shù)包括但不限于發(fā)光成像、內(nèi)窺鏡檢查、熒光內(nèi)窺鏡檢查、光學(xué)相干性斷層分析、透射成像、時(shí)間分辨透射成像、共焦成像、非線性顯微術(shù)、光聲成像、聲光成像、分光術(shù)、反射分光術(shù)、干涉測(cè)量法、相干性干涉測(cè)量法、擴(kuò)散光學(xué)斷層分析和熒光介導(dǎo)的擴(kuò)散光學(xué)斷層分析(連續(xù)波、時(shí)域和頻域系統(tǒng))、以及測(cè)量光散射、吸收、極化、發(fā)光、熒光壽命、量子輸出、和猝滅。
當(dāng)成像部分是適于血管內(nèi)檢測(cè)的β-發(fā)射體時(shí)，合適的這種β-發(fā)射體包括放射金屬67Cu、89Sr、90Y、153Sm、186Re、188Re或192Ir，和非金屬32P、33P、38S、38Cl、39Cl、82Br和83Br。
成像部分優(yōu)選連接在式(I)的MMPi的Y1、Y2、X3或X1/X2位置上，最優(yōu)選連接在Y1或Y2位置上，其中當(dāng)Y1是-(CH2)w-(C＝O)-Z時(shí)特別優(yōu)選Y1位置。特別優(yōu)選成像部分連接到或者包括Y1＝-(CH2)w-(C＝O)-NR1R2部分的R1或R2基團(tuán)之一。
本發(fā)明的成像劑優(yōu)選具有式II 其中{抑制劑}是式(I)的金屬蛋白酶抑制劑；-(A)n-是連接基團(tuán)，其中每個(gè)A獨(dú)立是-CR2-、-CR＝CR-、-C≡C-、-CR2CO2-、-CO2CR2-、-NRCO-、-CONR-、-NR(C＝O)NR-、-NR(C＝S)NR-、-SO2NR-、-NRSO2-、-CR2OCR2-、-CR2SCR2-、-CR2NRCR2-、C4-8環(huán)雜亞烷基、C4-8環(huán)亞烷基、C5-12亞芳基、或者C3-12雜亞芳基、氨基酸、糖或者單分散的聚乙二醇(PEG)結(jié)構(gòu)單元；R獨(dú)立選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基烷基或C1-4羥烷基；n是0-10的整數(shù)，和Xa是H、OH、Hal、NH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基烷基、C1-4羥烷基或者Xa是成像部分。
術(shù)語(yǔ)“氨基酸”是指L-或D-氨基酸、氨基酸類(lèi)似物(例如，萘基丙氨酸)或者氨基酸模擬物，可以是天然或者純粹合成的，而且可以是光學(xué)純的，即，單一對(duì)映體以及由此的手性對(duì)映體，或者對(duì)映體的混合物。本發(fā)明的氨基酸優(yōu)選是光學(xué)純的。
術(shù)語(yǔ)“糖”是指單糖、二糖或三糖。合適的糖包括葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、甘露糖和乳糖。任選地，糖可以進(jìn)行官能化處理以便可以很容易和氨基酸連接。因此，例如，氨基酸的葡糖胺衍生物可以經(jīng)由肽鍵綴合到其它氨基酸上。天門(mén)冬酰胺的葡糖胺衍生物(購(gòu)自Novabiochem)就是這樣的一個(gè)例子 在式II中，Xa優(yōu)選是成像部分。優(yōu)點(diǎn)在于式II的連接基團(tuán)-(A)n-將成像部分和金屬蛋白酶抑制劑的活性部位間隔開(kāi)。當(dāng)成像部分體積相對(duì)較大時(shí)(例如，金屬絡(luò)合物或放射碘原子)這尤其重要，這樣不會(huì)消弱抑制劑和MMP酶的結(jié)合。這可以通過(guò)柔性(如簡(jiǎn)單的烷基鏈)的組合來(lái)實(shí)現(xiàn)，從而使所述大體積基團(tuán)能夠自由地遠(yuǎn)離該活性部位和/或具有剛性，比如使金屬絡(luò)合物的取向背離該活性部位的環(huán)烷基或芳基間隔基。
連接基團(tuán)的本性也可用來(lái)改變成像劑的生物分布。因此，例如，在連接基團(tuán)中引入醚基團(tuán)有助于使血漿蛋白質(zhì)結(jié)合最小化。當(dāng)-(A)n-包括聚乙二醇(PEG)結(jié)構(gòu)單元或者1-10個(gè)氨基酸殘基的肽鏈時(shí)，該連接基團(tuán)可用于改變成像劑在體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)和血液清除率。所述“生物改性劑”連接基團(tuán)可以加速或減慢從背景組織，比如肌肉或肝臟、和/或血液中清除成像劑，由此由于背景干擾減弱而得到更好的診斷圖像；當(dāng)用來(lái)增加血液停留時(shí)間時(shí)，這有利于使成像劑和病變部位處的靶向生物標(biāo)記相互作用的概率最大化。生物改性劑連接基團(tuán)也可用來(lái)支持特殊的排泄途徑，例如，經(jīng)由腎臟而不是肝臟。
當(dāng)-(A)n-包括1-10個(gè)氨基酸殘基的肽鏈時(shí)，氨基酸殘基優(yōu)選選自甘氨酸、賴(lài)氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或絲氨酸。當(dāng)-(A)n-包括PEG部分時(shí)，優(yōu)選包括由式IIIA或IIIB的單分散PEG類(lèi)結(jié)構(gòu)的低聚所得到的單元
式IIIA的17-氨基-5-氧-6-氮-3，9，12，15-四氧代十七烷酸其中p是1-10的整數(shù)，C-末端單元(*)連接到成像部分上?；蛘撸梢圆捎没谑絀IIB的丙酸衍生物的PEG類(lèi)結(jié)構(gòu) 其中p的定義如式IIIA所示，q是3-15的整數(shù)。
在式IIIB中，p優(yōu)選是1或2，q優(yōu)選是5-12。
當(dāng)連接基團(tuán)不包括PEG或肽鏈時(shí)，優(yōu)選的-(A)n-基團(tuán)具有骨架鏈，所述骨架鏈?zhǔn)怯蓸?gòu)成-(A)n-部分的2-10個(gè)、最優(yōu)選2-5個(gè)，特別優(yōu)選2個(gè)或3個(gè)被連接原子形成的。最小的連接基團(tuán)骨架鏈(即2個(gè)原子)的優(yōu)點(diǎn)在于成像部分和金屬蛋白酶抑制劑被明顯分開(kāi)，從而使相互作用降到最低。
非肽連接基團(tuán)比如亞烷基或亞芳基的優(yōu)點(diǎn)在于它們和綴合MMP抑制劑沒(méi)有明顯的氫鍵相互作用，因而該連接基團(tuán)并不纏繞到MMP抑制劑上。優(yōu)選的亞烷基間隔基團(tuán)是-(CH2)q-，其中q是2-5。優(yōu)選的亞芳基間隔基具有下式 其中a和b獨(dú)立是0、1或2。
連接基團(tuán)-(A)n-優(yōu)選包括二甘醇酸部分、馬來(lái)酰亞胺部分、戊二酸、琥珀酸、基于聚乙二醇的單元或式IIIA的PEG類(lèi)單元。
當(dāng)成像部分包括金屬離于時(shí)，金屬離子以金屬絡(luò)合物形式存在。所以，這種具有金屬離子的金屬蛋白酶抑制劑綴合物適于用式IIa表示 其中A，n和Xa的定義如上式II所述。
術(shù)語(yǔ)“金屬絡(luò)合物”是指金屬離子和一個(gè)或多個(gè)配體的配位絡(luò)合物。強(qiáng)烈優(yōu)選金屬絡(luò)合物在動(dòng)力學(xué)上穩(wěn)定并因而具有“抗跨螯合性(transchelation)”，即，不容易和其它對(duì)金屬配位位置具有潛在競(jìng)爭(zhēng)力的配體發(fā)生配體交換。具有潛在競(jìng)爭(zhēng)力的配體包括異羥肟酸MMPi部分自身加上體內(nèi)制備中的其它賦型劑(例如，制備中采用的放射防護(hù)劑或者抗菌防腐劑)，或者體內(nèi)的內(nèi)源性化合物(例如，谷胱甘肽、轉(zhuǎn)鐵蛋白或血漿蛋白)。
式IIa的金屬絡(luò)合物源自式IIb的配體的綴合物 其中A、n和Xa的定義如上述式II所述。
本發(fā)明適用的、形成抗跨螯合性金屬絡(luò)合物的配體包括螯合劑，其中2-6，優(yōu)選2-4個(gè)金屬供體原子進(jìn)行排列形成5元或6元螯合環(huán)(通過(guò)具有碳原子的非配位骨架或者連接到金屬供體原子的非配位雜原子的非配位骨架)；或者單齒配體，它包括和金屬離子結(jié)合很強(qiáng)的供體原子，比如異腈、膦或diazenide。和金屬結(jié)合良好并作為螯合劑一部分的供體原子類(lèi)型的例子是胺、硫醇、酰胺、肟和膦。膦形成如此強(qiáng)的金屬絡(luò)合物以至于單齒配體或雙齒配體膦形成了合適的金屬絡(luò)合物。異腈和diazenide的線性幾何形狀導(dǎo)致其自身不容易引入到螯合劑中，因此通常被用作單齒配體。合適異腈的例子包括簡(jiǎn)單的烷基異腈，比如叔丁基異腈，和醚取代的異腈，比如mibi(即，1-異氰基-2-甲氧基-2-甲基丙烷)。合適膦的例子包括Tetrofosmin，和單齒配體膦，比如三(3-甲氧基丙基)膦。合適diazenide的例子包括HYNIC系列配體，即，聯(lián)氨取代的吡啶或煙酰胺。
優(yōu)選的配體是螯合劑以及形成動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定金屬絡(luò)合物的單齒配體，比如膦、異腈和diazenide。最優(yōu)選的配體是螯合劑，如上所述。
對(duì)于锝而言，形成抗跨螯合性金屬絡(luò)合物的合適螯合劑的例子包括但不限于(i)下式的二胺二肟 其中E1-E6每個(gè)獨(dú)立是R’基團(tuán)；每個(gè)R’是H或C1-10烷基、C3-10烷基芳基、C2-10烷氧基烷基、C1-10羥基烷基、C1-10氟烷基、C2-10羧基烷基或者C1-10氨基烷基，或者兩個(gè)或多個(gè)R’基團(tuán)和它們所連接的原子一起形成碳環(huán)、雜環(huán)、飽和環(huán)或不飽和環(huán)，而且其中一個(gè)或多個(gè)R’基團(tuán)和MMP抑制劑綴合；Q是式-(J)f-的橋基；其中f是3、4或5，每個(gè)J獨(dú)立是-O-、-NR’-或-C(R’)2-，前提是-(J)f-含有最多一個(gè)是-O-或-NR’-的J基團(tuán)。
優(yōu)選的Q基團(tuán)如下Q＝-(CH2)(CHR’)(CH2)-，即，亞丙基胺肟或者PnAO衍生物；Q＝-(CH2)2(CHR’)(CH2)2-，即，亞戊基胺肟或者PentAO衍生物；Q＝-(CH2)2NR’(CH2)2-。
E1-E6優(yōu)選選自C1-3烷基、烷基芳基烷氧基烷基、羥基烷基、氟烷基、羧基烷基或氨基烷基。最優(yōu)選的，每個(gè)E1-E6基團(tuán)是CH3。
MMP抑制劑優(yōu)選在E1或者E6R’基團(tuán)處綴合，或者在Q部分的R’基團(tuán)處綴合。最優(yōu)選的，MMP抑制劑綴合到Q部分的R’基團(tuán)處。當(dāng)MMP抑制劑和Q部分的R’基團(tuán)綴合時(shí)，R’基團(tuán)優(yōu)選處于橋頭位置。在此情況下，Q優(yōu)選是-(CH2)(CHR’)(CH2)-、-(CH2)2(CHR’)(CH2)2-或者-(CH2)2NR’(CH2)2-，最優(yōu)選是-(CH2)2(CHR’)(CH2)2-。
特別優(yōu)選的雙官能二胺二肟螯合劑具有下式 (螯合劑1)，由此MMP抑制劑經(jīng)由橋頭-CH2CH2NH2基團(tuán)綴合。
(ii)N3S配體，具有硫醇三酰胺供體組，比如MAG3(巰基乙?；拾彼?和相關(guān)配體；或者具有二酰胺吡啶硫醇供體組，比如Pica；(iii)N2S2配體，具有二胺二硫醇供體組，比如BAT或ECD(即，乙基半胱氨酸酯二聚物)，或者具有酰胺胺二硫醇供體組，比如MAMA；(iv)N4配體，其是具有四胺、酰胺三胺或者二酰胺二胺供體組的開(kāi)鏈或者大環(huán)配體，比如四氮雜環(huán)十四烷(cyclam)、單氧代四氮雜環(huán)十四烷或者二氧代四氮雜環(huán)十四烷。
(v)具有二胺二苯酚供體組的N2O2配體。
上述配體特別適用于絡(luò)合锝，例如94mTc或99mTc，Jurisson等對(duì)其進(jìn)行了更詳細(xì)地描述[Chem.Rev.，99，2205-2218(1999)]。該配體也可用于其它金屬，比如銅(64Cu或67Cu)、釩(例如，48V)、鐵(例如，52Fe)、或鈷(例如55Co)。在Sandoz的WO91/01144中描述了其它合適的配體，包括特別適于銦、釔和釓的配體，尤其是大環(huán)氨基羧酸酯和氨基膦酸配體。形成釓的非離子性(即，中性)金屬絡(luò)合物的配體是公知的，描述在US4885363中。當(dāng)放射金屬離子是锝時(shí)，配體優(yōu)選是四齒配體的螯合劑。锝的優(yōu)選螯合劑是二胺二肟、或者如上所述具有N2S2或N3S供體組的那些。
已知作為螯合劑的多齒配體異羥肟酸可以和放射金屬，包括99mTc形成金屬絡(luò)合物[Safavy等，Bioconj.Chem.，4，194-198(1993)]。但是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)比如當(dāng)式(I)中的X3是H時(shí)的單齒異羥肟酸，異羥肟酸MMPi可以和綴合配體有效競(jìng)爭(zhēng)放射金屬。因此，當(dāng)X3是H時(shí)，在選擇配體時(shí)需要特別小心，需要選擇和異羥肟酸MMPi有效競(jìng)爭(zhēng)放射金屬的配體，從而避免形成不需要的[異羥肟酸]-[放射金屬]金屬絡(luò)合物。合適的這種配體包括膦；異腈；具有四胺、酰胺三胺或者二酰胺二胺供體組的N4螯合劑；具有硫醇三酰胺供體或者二酰胺吡啶硫醇供體組的N3S螯合劑；或者具有二胺二硫醇供體組的比如BAT或者酰胺胺二硫醇供體組的比如MAMA的N2S2螯合劑。優(yōu)選的這種配體包括上述的N4、N3S和N2S2螯合劑，最優(yōu)選N4四胺和N2S2二胺二硫醇或者二酰胺二硫醇螯合劑，尤其是公知為BAT的N2S2二胺二硫醇螯合劑 強(qiáng)烈優(yōu)選基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑和金屬絡(luò)合物的連接方式使得所述連接在血液中不容易發(fā)生新陳代謝，因?yàn)檫@會(huì)導(dǎo)致金屬絡(luò)合物在標(biāo)記的金屬蛋白酶抑制劑到達(dá)所需體內(nèi)靶向位置之前分裂。所以，優(yōu)選基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑經(jīng)由不容易新陳代謝的連接共價(jià)結(jié)合到本發(fā)明的金屬絡(luò)合物上。
當(dāng)成像部分是放射性鹵素比如碘時(shí)，MMP抑制劑經(jīng)過(guò)適當(dāng)選擇以包括非放射性鹵素原子，比如芳基碘化物或溴化物(從而可以進(jìn)行放射碘交換)；活化的芳環(huán)(例如，苯酚基)；有機(jī)金屬前體化合物(例如，三烷基錫或三烷基甲硅烷基)；有機(jī)前體比如三氮烯或者用于親核取代的好的離去基團(tuán)，比如碘鹽。Bolton描述了引入放射性鹵素(包括123I和18F)的方法[J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，485-528(2002)]。放射性鹵素尤其是碘可以連接的合適芳基的例子如下 兩者都含有使得芳環(huán)上可以很容易發(fā)生放射碘取代的取代基。包括放射碘的可替換取代基可以通過(guò)直接碘化經(jīng)由放射性鹵素交換而合成，例如 當(dāng)成像部分是碘的放射性同位素時(shí)，放射碘原子優(yōu)選經(jīng)由直接共價(jià)鍵連接到芳環(huán)比如苯環(huán)上，或者乙烯基上，因?yàn)橐阎Y(jié)合到飽和脂肪系統(tǒng)的碘原子容易在體內(nèi)發(fā)生新陳代謝，從而造成放射碘的損失。
當(dāng)成像部分包括氟的放射性同位素(例如，18F)時(shí)，可以通過(guò)18F-氟化物和具有好的離去基團(tuán)的合適前體，比如烷基溴化物、甲磺酸烷基酯或者甲苯磺酸烷基酯，發(fā)生反應(yīng)而經(jīng)由直接標(biāo)記進(jìn)行放射性鹵化。18F也可以通過(guò)胺前體和烷基化劑比如18F(CH2)3OMS(其中MS是甲磺酸根)的N-烷基化而引入以便得到N-(CH2)318F，或者通過(guò)和18F(CH2)3OMS或者18F(CH2)3Br的O-烷基化而引入。18F也可以通過(guò)N-鹵乙酰基和18F(CH2)3OH反應(yīng)物的烷基化而引入以便得到-NH(CO)CH2O(CH2)318F衍生物。對(duì)于芳基系統(tǒng)而言，從芳基重氮鹽、芳基硝基化合物或者芳基季銨鹽中發(fā)生18F-氟化物親核置換是得到芳基-18F衍生物的合適途徑。
式(I)的含有伯胺的MMPi也可以用18F標(biāo)記，方法是如Kahn等[J.Lab.Comp.Radiopharm.45，1045-1053(2002)]和Borch等[J.Am.Chem.Soc.93，2897(1971)]教導(dǎo)的用18F-C6H4-CHO進(jìn)行還原胺化。這種方法也可用于芳基伯胺，比如含有苯基-NH2或苯基-CH2NH2基團(tuán)的化合物。
式(I)的含胺的MMP抑制劑也可以通過(guò)和18F標(biāo)記的活性酯發(fā)生反應(yīng)而標(biāo)記上18F以便得到酰胺鍵連接的產(chǎn)物，所述活性酯比如 Vaidyanathan等[Nucl.Med.Biol.，19(3)，275-281(1992)]和Johnstrom等[Clin.Sci.，103(Suppl.48)，45-85(2002)]教導(dǎo)了所示的N-羥基琥珀酰亞胺酯及其用來(lái)標(biāo)記肽的用途。Bolton，J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，485-528(2002)進(jìn)一步描述了18F標(biāo)記的衍生物的合成路線。
通過(guò)例如相應(yīng)異羥肟酸衍生物(X3＝H)和三氟甲基磺酸鹽衍生物，比如Fei等[J.Lab.Comp.Radiopharm.，46343-351(2003)]或Zheng等[Nucl.Med.Biol.，30，753-760(2003)]教導(dǎo)的11CH3OSO2CF3，或者上述18F O-烷基化試劑發(fā)生O-烷基化，可以在X3位置引入PET放射性同位素標(biāo)記。11C PET放射性標(biāo)記也可以通過(guò)采用上述三氟甲磺酸酯衍生物引入到烷基化的酚羥基，如Zheng等[Nucl.Med.Biol.，31，77-85(2004)]所教導(dǎo)的那樣。Antoni等教導(dǎo)了用11C標(biāo)記的其它方法[“Handbook of Radiopharmaceuticals″，M.J.Welch和C.S.Redvanly(編輯)，Wiley(2003)，第5章第141-194頁(yè)]。
本發(fā)明的優(yōu)選基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑具有式IV 其中Y2、w和Z定義如上所述；X3是H、CH3或CH2F；X4是-(CH2)m-，其中m是1、2或3、-CH2OCH2-或X5，其中X5是 其中t是2或3。
在式(IV)中，X3優(yōu)選是H或CH3，最優(yōu)選是H。X4優(yōu)選是-(CH2)2-、-CH2OCH2-或者t等于2的X6基團(tuán)。X4最優(yōu)選是-(CH2)2-或者-CH2OCH2-。式(IV)的優(yōu)選Y2、w和Z基團(tuán)如同上述式(I)定義。
當(dāng)成像劑含有式IV的MMP抑制劑并且成像部分是γ發(fā)射型放射性鹵素時(shí)，成像部分優(yōu)選在Y2、Z或X4取代基處連接，最優(yōu)選在Y2或Z取代基處連接。當(dāng)成像部分是發(fā)射正電子的放射性非金屬時(shí)，優(yōu)選在X3、X4、Y2或Z取代基，最優(yōu)選在X4或Z位置處連接。當(dāng)X3是H時(shí)，發(fā)射正電子的放射性非金屬最優(yōu)選在Z或X4位置處連接，最優(yōu)選在Z位置處連接。
當(dāng)成像部分是放射性或順磁性金屬離子時(shí)，X4或Z取代基之一優(yōu)選連接到或者包括所述成像部分。最優(yōu)選地，式IV的Z取代基優(yōu)選連接到或者包括所述放射性或順磁性金屬離子成像部分。
本發(fā)明的優(yōu)選基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑具有式V 其中X6是Hal、R1或OR1，其中R1是C1-3烷基或C1-3氟烷基。
式(V)的優(yōu)選X4、w和Z基團(tuán)如上述式(IV)所述。w最優(yōu)選是2。X6優(yōu)選是F，最優(yōu)選是4-氟代。
本發(fā)明的MMP抑制劑化合物可以按照方案1(見(jiàn)下頁(yè))制備。
在EP0895988A1和實(shí)施例5中描述了類(lèi)似MMPi化合物27的合成。在Skiles等的綜述[Curr.Med.Chem.，8，425-474(2001)]中給出了合成的其它參考文獻(xiàn)。
當(dāng)本發(fā)明的成像劑包括放射性或者順磁性金屬離子時(shí)，合適情況是金屬離子以金屬絡(luò)合物形式存在。所述金屬絡(luò)合物合適情況下通過(guò)式IIb的綴合物和適當(dāng)金屬離子的反應(yīng)制備。式IIb的MMP抑制劑的配體-綴合物或螯合劑-綴合物可以通過(guò)雙官能螯合劑方法制備。因此，連接官能基團(tuán)的配體或螯合劑(分別是“雙官能連接體”或者“雙官能螯合劑’’)的制備是已知的。連接的官能基團(tuán)包括胺、硫代氰酸鹽、馬來(lái)酰亞胺和活性酯，比如N-羥基琥珀酰亞胺或五氟苯酚。本發(fā)明的螯合劑1是胺官能化的雙官能螯合劑的例子。Baidoo等[Bioconj.Chem.5，114-118(1994)]描述了基于硫代內(nèi)酯的雙官能螯合劑，可用來(lái)制備BAT螯合劑-綴合物。Stichelberger等[Versatilesynthetic approach to new bifunctional chelating agents tailor madefor labeling with the fac-[M(CO)3]+core(M＝Tc，99mTc，Re)synthesis，in vitro，and in vivo behavior of the model complex[M(APPA)(CO)3](appa＝[(5-amino-pentyl)-pyridin-2-yl-methyl-amino]-acetic acid)；Nucl.Med.Biol.，30，465-470(2003)]描述了適于絡(luò)合到锝或者錸三羰基化物芯上的雙官能螯合劑。Edwards等[Bioconj.Chem.，8，146(1997)]描述了雙官能HYNIC配體。這些雙官能螯合劑可以和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑上的合適官能基團(tuán)反應(yīng)形成所需的綴合物。抑制劑上的合適官能基團(tuán)包括羧基(用于和胺官能化雙官能螯合劑形成酰胺鍵)；胺(用于和羧基-或者活性酯官能化的雙官能螯合劑形成酰胺鍵)；鹵素、甲磺酸酯和甲苯磺酸酯(用于胺官能化的雙官能螯合劑的N-烷基化)和硫醇(用于和馬來(lái)酰亞胺官能化的雙官能螯合劑反應(yīng))。
方案1化合物1的合成。

本發(fā)明的MMP抑制劑可以很方便地采用“前體”進(jìn)行放射性標(biāo)記。當(dāng)成像部分包括金屬離子時(shí)，所述前體適當(dāng)包括MMP抑制劑和配體的“綴合物”，如下面第四個(gè)實(shí)施方案所述。當(dāng)成像部分包括非金屬放射性同位素時(shí)，即，γ發(fā)射型放射性鹵素或發(fā)射正電子的放射性非金屬時(shí)，所述“前體”適當(dāng)包括這樣的非放射性材料它經(jīng)設(shè)計(jì)使得和適宜化學(xué)形式的所需非金屬放射性同位素的化學(xué)反應(yīng)可以在最少的步驟下進(jìn)行(理想情況是一個(gè)步驟)，并且無(wú)需大量純化(理想情況下無(wú)需進(jìn)一步純化)就得到所需的放射性產(chǎn)物。所述前體可以很方便的是優(yōu)質(zhì)化學(xué)純，任選可以是無(wú)菌形式。
預(yù)計(jì)可以如下制備用于對(duì)本發(fā)明的MMP抑制劑進(jìn)行放射性標(biāo)記的“前體”(包括配體綴合物)-N(CH2)2OH或者-N(CH2)3OH衍生物的端-OH基可以被轉(zhuǎn)換為甲苯磺?；蚣谆酋；蛘咪逖苌?，其隨后被用來(lái)和氨基官能化的螯合劑進(jìn)行綴合。所述前體的甲苯磺酰酯、甲磺酰酯或溴基團(tuán)可以可替換地用[18F]溴化物替換，以得到用18F標(biāo)記的PET成像劑。
放射性碘衍生物可以通過(guò)相應(yīng)的苯酚前體制備。烷基溴化物衍生物可用于胺官能化的螯合劑的N-烷基化。苯基碘衍生物可以轉(zhuǎn)變成放射性碘化化合物的有機(jī)金屬前體，比如三烷基錫或芳基三甲代甲硅烷基(TMS)前體。苯基碘衍生物也可以被轉(zhuǎn)變成芳基碘前體用于和18F-氟化物進(jìn)行放射性氟化。
伯胺官能化的MMP抑制劑可以和酸酐反應(yīng)得到-N(CO)(CH2)3CO2H類(lèi)型的N-官能化的前體，其可以隨后綴合到雙官能的含胺配體上。所述伯胺取代的MMPi可以通過(guò)溴衍生物和苯甲基胺發(fā)生烷化，隨后在標(biāo)準(zhǔn)條件比如采用鈀炭催化劑氫化下去除苯甲基保護(hù)基團(tuán)來(lái)制備。
胺官能化的MMPi可以直接，或者經(jīng)由連接劑和羧基-或者活性酯-官能化的雙官能螯合劑綴合。所述化合物也可以和適于18F標(biāo)記的烷基化劑，比如18F(CH2)2OTs(其中Ts是甲苯磺酸酯基團(tuán))或18F(CH2)2OMs(其中Ms是甲磺酸酯基團(tuán))反應(yīng)，得到相應(yīng)的具有N(CH2)218F取代基的N官能化的胺衍生物?？商鎿Q地，胺可以首先和氯乙酰氯反應(yīng)得到-N(CO)CH2Cl(N衍生的酰胺)，隨后分別和HS(CH2)318F或者HO(CH2)318F反應(yīng)得到-N(CO)CH2S(CH2)18F和-N(CO)CH2O(CH2)318F產(chǎn)物。
本發(fā)明的放射性金屬絡(luò)合物可以通過(guò)處于適當(dāng)氧化態(tài)的放射性金屬溶液和式IIa的配體綴合物在適當(dāng)pH反應(yīng)制備。該溶液可以?xún)?yōu)選含有和所述金屬弱絡(luò)合的配體(比如葡糖酸鹽或檸檬酸鹽)，即，放射性金屬絡(luò)合物通過(guò)配體交換或者跨螯合進(jìn)行制備。這些條件可用于抑制不需要的副反應(yīng)，比如金屬離子的水解。當(dāng)放射性金屬離子是99mTc，常見(jiàn)的起始材料是來(lái)自99Mo發(fā)生器的高锝酸鈉。锝在99mTc-高锝酸鹽中以Tc(VII)氧化態(tài)存在，該狀態(tài)相對(duì)沒(méi)有反應(yīng)性。所以，制備更低氧化態(tài)Tc(I)-Tc(V)的锝絡(luò)合物通常要求加入合適的藥用可接受還原劑，比如連二亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、抗壞血酸、甲脒亞磺酸、亞錫鐵、Fe(II)或Cu(I)，以便于絡(luò)合。藥用可接受的還原劑優(yōu)選是亞錫鹽，最優(yōu)選是氯化亞錫、氟化亞錫或者酒石酸亞錫。
當(dāng)成像部分是超極化的NMR-活性核，比如超極化的13C原子時(shí)，所需的超極化化合物可以通過(guò)從超極化的氣體(比如129Xe或3He)極化交換到合適的富含13C的異羥肟酸衍生物。
在第二方面，本發(fā)明提供了適于哺乳動(dòng)物給藥形式的藥用組合物，它包括上述成像劑以及生物相容載體?！吧锵嗳葺d體”是流體，尤其是液體，其中可以懸浮或溶解成像劑，以使該組合物在生理上可以忍受，即，可以向哺乳動(dòng)物體給藥而不會(huì)出現(xiàn)毒性或過(guò)度的不舒適感。生物相容性載體適當(dāng)?shù)氖强勺⑸漭d體液體，比如注射用無(wú)菌無(wú)熱原水；水溶液，比如鹽水(有利的做法是使其被平衡，從而使最終注射產(chǎn)物或者是等滲的，或者是非低滲的)；一種或多種調(diào)節(jié)張度的物質(zhì)(例如，具有生物相容性平衡離子的血漿陽(yáng)離子鹽)、糖(例如，葡萄糖或蔗糖)、糖醇(例如，山梨糖或甘露醇)、二元醇(例如，甘油)、或者其它非離子多醇材料(例如，聚乙二醇和丙二醇等)的水溶液。
在第三方面，本發(fā)明提供了處于適于哺乳動(dòng)物給藥形式的放射性藥用組合物，包括上述其中成像部分具有放射性的成像劑和生物相容性載體。所述放射性藥物合適地在具有密封的容器中提供，所述密封(例如，壓接的隔膜密封罩)適于在皮下注射針單次或多次刺穿時(shí)保持無(wú)菌完整性。所述容器可以包含單個(gè)或多個(gè)病人劑量。優(yōu)選的多劑量容器包括容納有多個(gè)病人劑量的單體小瓶(例如，10-30cm3體積)，因此，在制劑的可用壽命期間，可以在各個(gè)時(shí)間間隔處抽取單病人劑量到臨床級(jí)注射器中以迎合臨床狀況。預(yù)填充的注射器被設(shè)計(jì)成容納單人劑量，所以?xún)?yōu)選是一次性注射器或者其它適于臨床使用的注射器。任選地，預(yù)填充的注射器可以提供有注射器罩，以保護(hù)操作人員免受放射性劑量的影響。合適的所述放射性藥用注射器罩是本領(lǐng)域公知的，優(yōu)選包含鉛或鎢。
當(dāng)成像部分含有99mTc時(shí)，適用于診斷成像放射性藥物的放射性含量為180-1500MBq的99mTc，具體取決于將在體內(nèi)成像的部位、攝入量以及靶/背景比。
本發(fā)明的放射性藥物可以通過(guò)試劑盒制備，如在下面的第五和第六實(shí)施方案所述?？商鎿Q地，放射性藥物可以在無(wú)菌生產(chǎn)條件下制備以獲得所需的無(wú)菌產(chǎn)物。放射性藥物也可以在非無(wú)菌條件下制備，隨后采用例如γ-輻照、高壓釜處理、干燥加熱或化學(xué)處理(例如，采用環(huán)氧乙烷)進(jìn)行最終滅菌。優(yōu)選地，本發(fā)明的放射性藥物由試劑盒制備。
在第四方面，本發(fā)明提供了式(I)的基質(zhì)金屬蛋白質(zhì)抑制劑和配體的綴合物。所述配體綴合物用于制備用放射性金屬離子或順磁性金屬離子標(biāo)記的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑。優(yōu)選地，配體綴合物具有上述式IIa。最優(yōu)選地，配體綴合物的MMP抑制劑具有如上定義的式IV。本發(fā)明第四方面的綴合物的配體優(yōu)選是螯合劑。優(yōu)選地，所述螯合劑具有二胺二肟、N2S2、或N3S供體組。
在第五方面，本發(fā)明提供了用于制備上述成像部分包含放射性金屬的放射性藥用組合物的非放射性試劑盒，其包括配體和式(I)的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的綴合物。當(dāng)放射性金屬是99mTc時(shí)，試劑盒合適地進(jìn)一步含有生物相容性還原劑。配體綴合物及其優(yōu)選方面在上面的第四實(shí)施方案中進(jìn)行了描述。
所述試劑盒經(jīng)設(shè)計(jì)得到適于人體給藥例如，經(jīng)由直接注射到血流里的無(wú)菌放射性藥用產(chǎn)品。對(duì)于99mTc而言，試劑盒優(yōu)選是凍干的，被設(shè)計(jì)成用來(lái)自99mTc放射性同位素發(fā)生器的無(wú)菌99mTc-高锝酸鹽(TcO4-)進(jìn)行重構(gòu)以得到無(wú)需進(jìn)一步處理就適于人體給藥的溶液。合適的試劑盒包括密封容器以及任選的頂部空間惰性氣體(例如，氮?dú)饣驓鍤?，允許用注射器添加和抽取溶液，其中該容器可以保持無(wú)菌完整性和/或放射安全性。所述容器優(yōu)選是隔膜密封的小瓶，其中所述氣密性罩用外密封件(通常由鋁制備)壓接。所述容器的其它優(yōu)點(diǎn)在于需要時(shí)罩子可以承受真空，例如，為了改變頂部空間的氣體或者使溶液除氣。試劑盒包括游離堿或者酸鹽形式的配體或者螯合劑綴合物，以及生物相容性的還原劑，比如連二亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、抗壞血酸、甲脒亞磺酸、亞錫鐵、Fe(II)或Cu(I)。生物相容性還原劑優(yōu)選是亞錫鹽，比如氯化亞錫或酒石酸亞錫?？商鎿Q地，試劑盒可以任選地含有金屬絡(luò)合物，該絡(luò)合物在加入放射性金屬時(shí)發(fā)生金屬轉(zhuǎn)移作用(例如，金屬交換)，得到所需的產(chǎn)品。
非放射性試劑盒可以任選地進(jìn)一步包含其它組分，比如跨螯合劑、放射保護(hù)劑、抗菌防腐劑、pH調(diào)節(jié)劑或填料?！翱珧蟿笔呛惋娇焖俜磻?yīng)形成弱絡(luò)合物并隨后被配體置換的化合物。這樣使形成還原的水解锝(RHT)的風(fēng)險(xiǎn)降到最低，RHT的形成是由于和锝絡(luò)合形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系的高锝酸鹽的快速還原。合適的所述跨螯合劑是弱有機(jī)酸，即pKa為3-7的有機(jī)酸，和生物相容性陽(yáng)離子形成的鹽。合適的所述弱有機(jī)酸是乙酸、檸檬酸、酒石酸、葡糖酸、葡庚糖酸、苯甲酸、酚或膦酸。因此，合適的鹽是乙酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯甲酸鹽、酚鹽或膦酸鹽。優(yōu)選的所述鹽是酒石酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯甲酸鹽或者膦酸鹽，最優(yōu)選的是膦酸鹽，最尤其是二膦酸鹽。優(yōu)選的所述跨螯合劑是MDP(即，亞甲基二膦酸)和生物相容性陽(yáng)離子形成的鹽。術(shù)語(yǔ)“生物相容性陽(yáng)離子”是指和離子化的帶負(fù)電荷的陰離子基團(tuán)形成鹽的正電荷平衡離子，其中所述正電荷平衡離子也是無(wú)毒的，因此適于給藥到哺乳動(dòng)物體，尤其是人體。合適生物相容性陽(yáng)離子的例子包括堿金屬鈉或鉀、堿土金屬鈣和鎂、和銨離子。優(yōu)選的生物相容性陽(yáng)離子是鈉和鉀，最優(yōu)選是鈉。
術(shù)語(yǔ)“放射保護(hù)劑”是指通過(guò)捕獲反應(yīng)性強(qiáng)的自由基，比如水輻射分解形成的含氧自由基，抑制降解反應(yīng)比如氧化還原過(guò)程的化合物。本發(fā)明的放射保護(hù)劑合適的選自抗壞血酸、對(duì)氨基苯甲酸(即，4-氨基苯甲酸)、龍膽酸(即，2，5-二羥基苯甲酸)以及其和上述生物相容性陽(yáng)離子的鹽。
術(shù)語(yǔ)“抗菌防腐劑”是指抑制潛在有害的微生物，比如細(xì)菌、酵母或霉菌，生長(zhǎng)的試劑?？咕栏瘎┮部梢燥@示出某些殺菌性能，具體取決于劑量。本發(fā)明的抗菌防腐劑的主要任務(wù)是抑制任何所述微生物在放射性藥用組合物后重構(gòu)體中，即在放射性診斷產(chǎn)品本身中的生長(zhǎng)。但是，抗菌防腐劑也可以任選地用來(lái)抑制潛在有害的微生物在本發(fā)明非放射性試劑盒的一種或多種組分中在重構(gòu)之前的生長(zhǎng)。合適的抗菌防腐劑包括對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)，即，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯或丁酯或其混合物；苯甲基醇；苯酚；甲酚；溴化十六烷基三甲銨和乙基汞硫代水楊酸鈉。優(yōu)選的抗菌防腐劑是對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)。
術(shù)語(yǔ)“pH調(diào)節(jié)劑”是指用于確保重構(gòu)的試劑盒的pH位于人體給藥或哺乳動(dòng)物給藥可接受范圍(pH是大約4.0-10.5)內(nèi)的化合物或化合物混合物。合適的所述pH調(diào)節(jié)劑包括藥用可接受的緩沖液，比如麥黃酮、磷酸酯或TRIS[即，三(羥基甲基)氨基甲烷]，和藥用可接受的堿比如碳酸鈉、碳酸氫鈉或其混合物。當(dāng)綴合物以酸鹽形式采用時(shí)，pH調(diào)節(jié)劑可以任選地提供在單獨(dú)的小瓶或容器中，使得試劑盒的用戶(hù)可以調(diào)節(jié)pH，作為多步驟程序的一部分。
術(shù)語(yǔ)“填料”是指可以在制備和凍干過(guò)程中便于材料處理的藥用可接受的填充劑。合適的填料包括無(wú)機(jī)鹽，比如氯化鈉，和水溶性的糖或糖醇，比如蔗糖、麥芽糖、甘露醇或海藻糖。
在第六方面，本發(fā)明提供了用于制備其中成像部分包含非金屬放射性同位素的放射性藥用制劑的試劑盒，所述非金屬放射性同位素即γ發(fā)射型放射性鹵素或發(fā)射正電子的放射性非金屬。所述試劑盒包括下述“前體”，優(yōu)選處于無(wú)菌無(wú)熱原形式，使得和放射性同位素的無(wú)菌源的反應(yīng)形成需要最少處理的所需放射性藥物。對(duì)于放射性同位素半衰期相對(duì)較短的藥物而言，以及為了便于處理并因此減少放射藥劑師的輻射劑量而言，這些考慮尤其重要。因此，用于重建所述試劑盒的反應(yīng)介質(zhì)優(yōu)選是含水的，而且處于適于哺乳動(dòng)物給藥的形式。前體優(yōu)選提供在密封容器內(nèi)，如同上述第四個(gè)實(shí)施方案所述。
“前體”合適地包括處于無(wú)菌無(wú)熱原形式的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑材料的非放射性衍生物，其被設(shè)計(jì)成使得和適宜化學(xué)形式的所需非金屬放射性同位素的化學(xué)反應(yīng)可以在最少步驟(理想情況是單一步驟)下進(jìn)行，而且無(wú)需大量純化(理想情況下不需要進(jìn)一步的純化)就得到所需的放射性產(chǎn)物。這種前體可以很方便地以?xún)?yōu)質(zhì)化學(xué)純獲得。從Bolton，J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，485-528(2002)中描述的實(shí)施例中，可以得到合適的前體。
本實(shí)施方案的優(yōu)選前體包括這樣的衍生物，所述衍生物或者進(jìn)行親電鹵化或親核鹵化；進(jìn)行和選自烷基鹵或氟烷基鹵、甲苯磺酸酯、triflate(即，三氟甲烷磺酸酯)或甲磺酸酯的烷基化劑發(fā)生的溫和烷基化；或者對(duì)硫醇部分進(jìn)行烷基化作用以形成硫醚連接。第一類(lèi)的例子是(a)有機(jī)金屬衍生物，比如三烷基錫烷(例如，三甲錫烷基或三丁錫烷基)、或者三烷基硅烷(例如，三甲基甲硅烷基)；(b)用于鹵素交換的非放射性烷基碘或烷基溴，和用于親核鹵化的甲苯磺酸烷基酯、甲磺酸酯或triflate；(c)朝著親電鹵化方向活化的芳環(huán)(例如，酚)，核朝著親核鹵化方向活化的芳環(huán)(例如，芳基碘、芳基重氮、硝基芳基)。
易進(jìn)行烷基化的優(yōu)選衍生物是醇、酚或胺基團(tuán)，尤其是酚和空間未受阻的伯胺或仲胺。
對(duì)含硫醇的放射性同位素反應(yīng)物烷基化的優(yōu)選衍生物是N-鹵乙?；?，尤其是N-氯乙?；蚇-溴乙?；苌铩?br> 前體可以在無(wú)菌生產(chǎn)條件下使用來(lái)得到所需的無(wú)菌無(wú)熱原材料。前體也可以在非無(wú)菌條件下采用，隨后采用例如γ-輻照、高壓釜處理、干燥加熱或化學(xué)處理(例如，采用環(huán)氧乙烷)進(jìn)行最終滅菌。優(yōu)選地，前體以無(wú)菌無(wú)熱原形式采用。
當(dāng)式I中的X3是H時(shí)，式I的MMPi的合適前體因而可以包括其中X3是異羥肟酸部分的保護(hù)基團(tuán)(PG)的衍生物。術(shù)語(yǔ)“保護(hù)基團(tuán)”是指抑制或壓制不需要的化學(xué)反應(yīng)的基團(tuán)，但是該基團(tuán)被設(shè)計(jì)成具有足以在不改變分子其余部分的充分溫和條件下使其從目標(biāo)官能基團(tuán)上分裂的反應(yīng)性。在脫保護(hù)后，得到所需的產(chǎn)物。保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，對(duì)于胺基而言，其適當(dāng)?shù)剡x自Boc(其中Boc是叔丁氧基羰基)、Fmoc(其中Fmoc是芴基甲氧基羰基)、三氟乙?；?、烯丙基氧基羰基、Dde[即，1-(4，4-二甲基-2，6-二氧環(huán)亞己基)乙基]或Npys(即，3-硝基-2-吡啶亞磺?；?；對(duì)于羧基而言，是甲基酯、叔丁基酯或苯甲基酯。對(duì)于羥基而言，合適的保護(hù)基團(tuán)是苯甲基、乙?；?、苯甲氧基、三苯甲基(Trt)或者三烷基甲硅烷基，比如四丁基二甲基甲硅烷基。對(duì)于硫醇基而言，合適的保護(hù)基團(tuán)是三苯甲基和4-甲氧基苯甲基。異羥肟酸部分的羥基的優(yōu)選保護(hù)基團(tuán)是苯甲基或三烷基甲硅烷基。Theorodora W.Greene和Peter G.M.Wuts的“Protective Groups in Organic Synthesis”(John Wiley & Sons，1991)中描述了其它保護(hù)基團(tuán)的使用。
所需非金屬放射性同位素的優(yōu)選適宜化學(xué)形式包括(a)鹵化物離子(例如，123I-碘化物或18F-氟化物)，尤其是在含水介質(zhì)中，用于取代反應(yīng)；(b)11C-甲基碘或具有易離去基團(tuán)的18F-氟亞烷基化合物，比如溴化物、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯；(c)用于和烷基化前體比如N-氯乙?；騈-溴乙?；苌锇l(fā)生S-烷基化反應(yīng)的HS(CH2)318F。
在第一實(shí)施方案(上述)中描述了所述“前體”的合適例子以及其制備方法。
試劑盒的“前體”優(yōu)選以共價(jià)連接到固體支撐基質(zhì)上的形式提供。以此方式，所需的放射性藥用產(chǎn)品采取溶液形式，但是起始材料和雜質(zhì)保持連接在固體相上。在WO 03/002489中描述了用于和18F-氟化物發(fā)生固相親電氟化作用的前體。在WO03/002157中描述了用于和18F-氟化物發(fā)生固相親核氟化作用的前體。所以，試劑盒可以包括藥筒，該藥筒可以插入到適當(dāng)采用的自動(dòng)合成器內(nèi)。除了連接到固體支撐上的前體以外，藥筒可以包含用于去除不需要的氟化物離子的柱、以及適當(dāng)?shù)娜萜?，所述容器被連接用以使反應(yīng)混合物可以被蒸發(fā)并使產(chǎn)物可以按需配制。也可以包括反應(yīng)劑、溶劑和合成所需的其它消耗物，以及攜帶有軟件的壓縮盤(pán)，所述軟件使得合成人員的操作方式可以滿(mǎn)足客戶(hù)對(duì)放射濃度、體積、遞送時(shí)間等的要求。方便的情況下，試劑盒的所有部件都是一次性的，從而使每次執(zhí)行之間的污染可能性降到最小、無(wú)菌并保證質(zhì)量。
在第八方面，本發(fā)明公開(kāi)了上述基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑成像劑在動(dòng)脈粥樣硬化，尤其是不穩(wěn)定易碎斑塊的診斷成像中的用途。
在另一方面，本發(fā)明公開(kāi)了上述基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑成像劑在其它炎癥、癌癥或退化性疾病的診斷成像中的用途。
在另一方面，本發(fā)明公開(kāi)了上述基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑成像劑在采用鄰近檢測(cè)(proximity detection)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化，尤其是不穩(wěn)定的易碎斑塊進(jìn)行血管內(nèi)檢測(cè)中的用途。所述鄰近檢測(cè)可以采用血管內(nèi)器械，比如導(dǎo)管或內(nèi)操作手持探測(cè)器(例如，γ探測(cè)器)進(jìn)行。當(dāng)成像部分是適于體內(nèi)光學(xué)成像的報(bào)道分子或者β發(fā)射體時(shí)，由于所述部分在哺乳動(dòng)物體外不容易檢測(cè)但適于鄰近檢測(cè)，所以所述血管內(nèi)檢測(cè)特別有用。
本發(fā)明由下列非限制性實(shí)施例進(jìn)行舉例說(shuō)明。實(shí)施例1描述了化合物1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷的合成。實(shí)施例2提供了1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷的可替換合成方案，它避免了使用潛在有害的疊氮化物中間體。實(shí)施例3描述了氯亞硝基烷烴前體的合成。實(shí)施例4描述了本發(fā)明優(yōu)選的胺取代雙官能二胺二肟(螯合劑1)的合成。
實(shí)施例5提供了本發(fā)明MMPi，化合物27的合成。實(shí)施例6提供了適于放射性鹵化的酚取代MMPi前體(化合物23)的合成。實(shí)施例7描述了適于放射性鹵化的碘苯胺前體(化合物26)的合成。實(shí)施例9提供了本發(fā)明MMPi的螯合劑綴合物的合成。實(shí)施例10提供了用PEG連接基團(tuán)官能化的MMPi的合成。實(shí)施例11描述了具有PEG連接基團(tuán)的螯合劑綴合物的合成。實(shí)施例12提供了適于進(jìn)行PET放射性標(biāo)記的氯乙酰基前體的合成。實(shí)施例13提供了硫醚連接的氟烷基MMPi衍生物的合成。實(shí)施例14提供了許多氨基酸和/或PEG連接的MMPi，從而可以改變生物學(xué)性質(zhì)。
實(shí)施例15和16提供了適用于18F MMPi放射性標(biāo)記的18F標(biāo)記的化合物的合成。實(shí)施例17提供了化合物45-48的合成。實(shí)施例18描述了體內(nèi)測(cè)定試驗(yàn)，表明本發(fā)明MMPi的衍生物作為MMP抑制劑保持了生物活性。實(shí)施例19提供了對(duì)螯合劑綴合物進(jìn)行99mTc放射性標(biāo)記的一般方法。實(shí)施例20提供了針對(duì)本發(fā)明合適前體的放射性碘化程序。實(shí)施例21提供了本發(fā)明的特異性18F衍生物的制備。實(shí)施例22提供的證據(jù)表明本發(fā)明的放射性碘化衍生物具有作為體內(nèi)成像劑的充分血漿穩(wěn)定性。實(shí)施例23描述了在體內(nèi)腫瘤模型中攝入本發(fā)明的放射性碘化成像劑。這表明采用本發(fā)明的連接基團(tuán)可以改變生物分布。和化合物24A相比，化合物20A(即，具有PEG3間隔基的化合物24A)顯示出相似的血液停留時(shí)間，但是尿液分泌增加10％，HBS相應(yīng)下降10％。所以，加入生物改性劑導(dǎo)致藥物動(dòng)力學(xué)發(fā)生變化。和化合物24A相比，攝入到腫瘤中的量略微下降，但是保留量略微增加。化合物32A顯示出高的初始血液保留量，但是隨著時(shí)間推移而被清除。一直到注射后1小時(shí)，還觀察到良好的腫瘤攝入量和保留量。觀察到了高的尿液分泌量和低的GI分泌量。這些藥物動(dòng)力學(xué)更加理想，而且和沒(méi)有生物改性劑的化合物(即，化合物24A)的明顯不同，表明這些化合物具有有利的生物改性效果同時(shí)沒(méi)有損失抑制能力。
實(shí)施例24描述了在體內(nèi)腫瘤模型中攝入本發(fā)明的18F標(biāo)記的成像劑。實(shí)施例25描述了在動(dòng)脈粥樣硬化體內(nèi)模型中攝入本發(fā)明的成像劑。實(shí)施例26提供了自動(dòng)照相攝影術(shù)證據(jù)，表明本發(fā)明的試劑攝入到體內(nèi)的動(dòng)脈粥樣硬化部位。實(shí)施例27描述了腫瘤模型中的腫瘤成像。


圖1示出了本發(fā)明的多種化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，包括衍生這些化合物的MMPi(化合物1)。圖2示出了本發(fā)明的MMPi的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
圖3示出了由實(shí)施例27獲得的圖像。
實(shí)施例1合成1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷。
(步驟a)3-(甲氧基羰基亞甲基)戊二酸二甲基酯。
用二甲基3-氧代戊二酸酯(87g，0.5mol)處理甲酯基亞甲基三苯基正膦(167g，0.5mol)的甲苯(600ml)溶液，將反應(yīng)在120℃的油浴中于氮?dú)夥障录訜岬?00℃保持36h。然后，反應(yīng)物在真空中濃縮，用40/60汽油醚/二乙醚按照1∶1的比例，600ml，對(duì)油狀殘余物進(jìn)行研制。沉淀出三苯基氧化膦，并潷析/濾掉上清液。真空揮發(fā)得到的殘余物在高真空Bpt(烘箱溫度180-200℃，壓力為0.2torr)下進(jìn)行庫(kù)格爾若蒸餾，得到3-(甲氧基羰基亞甲基)戊二酸二甲基酯(89.08g，53％)。
NMR1H(CDCl3)δ3.31(2H，s，CH2)，3.7(9H，s，3xOCH3)，3.87(2H，s，CH2)，5.79(1H，s，＝CH，)ppm。
NMR13C(CDCl3)，δ36.56，CH3，48.7，2xCH3，52.09和52.5(2xCH2)；122.3和146.16C＝CH；165.9，170.0和170.53xCOO ppm。
(步驟b)3-(甲氧基羰基亞甲基)戊二酸二甲基酯的氫化。
將3-(甲氧基羰基亞甲基)戊二酸二甲基酯(89g，267mmol)的甲醇(200ml)溶液用(10％的鈀炭∶50％水)(9g)在氫氣氛(3.5巴)下?lián)u晃(30h)。溶液通過(guò)硅藻土過(guò)濾并在真空下濃縮，得到油狀的3-(甲氧基羰基甲基)戊二酸二甲基酯，產(chǎn)量(84.9g，94％)。
NMR1H(CDCl3)，δ2.48(6H，d，J＝8Hz，3xCH2)，2.78(1H，六重峰，J＝8Hz CH，)3.7(9H，s，3xCH3)。
NMR13C(CDCl3)，δ28.6，CH；37.50，3xCH3；51.6，3xCH2；172.28，3xCOO。
(步驟c)三甲基酯還原和酯化成三乙酸酯。
在氮?dú)夥障?，?頸式2L圓底燒瓶中，1小時(shí)內(nèi)用三(甲氧基羰基甲基)甲烷(40g，212mmol)的四氫呋喃(200ml)溶液小心地處理在四氫呋喃(400ml)中的氫化鋁鋰(20g，588mmol)。發(fā)生強(qiáng)烈的放熱反應(yīng)，導(dǎo)致溶劑猛烈回流。反應(yīng)在90℃的油浴中以回流狀態(tài)加熱3天。通過(guò)小心地逐滴加入乙酸(100ml)使反應(yīng)猝滅，直到停止放出氫為止。處于攪拌狀態(tài)的反應(yīng)混合物用乙酸酸酐溶液(500ml)小心處理，處理速率使得引起溫和的回流。燒瓶進(jìn)行蒸餾、攪拌、然后在90℃(油浴溫度)加熱以蒸餾出四氫呋喃。加入另一份的乙酸酸酐(300ml)，反應(yīng)返回到回流構(gòu)造、攪拌并在140℃油浴中加熱5h。使反應(yīng)冷卻并過(guò)濾。用乙酸乙酯清洗氧化鋁沉淀，合并的濾液在50℃水浴中于真空(5mm Hg)下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，以得到油。所述油被導(dǎo)入乙酸乙酯(500ml)，并用飽和碳酸鉀水溶液清洗。乙酸乙酯溶液經(jīng)過(guò)分離、硫酸鈉干燥、并在真空下濃縮以得到油。該油在高真空下經(jīng)庫(kù)格爾若蒸餾，得到油狀的三(2-乙酰氧基乙基)甲烷(45.3g，96％)。0.1mmHg時(shí)的Bp為220℃。
NMR1H(CDCl3)，δ1.66(7H，m，3xCH2，CH)，2.08(1H，s，3xCH3)；4.1(6H，t，3xCH20)。
NMR13C(CDCl3)，δ20.9，CH3；29.34，CH；32.17，CH2；62.15，CH2O；171，CO。
(步驟d)從三乙酸酯去除乙酸酯基團(tuán)。
將三(2-乙酰氧基乙基)甲烷(45.3g，165mM)在甲醇(200ml)和880氨(100ml)中的溶液于80℃的油浴中加熱2天。用另一份880氨(50ml)處理反應(yīng)物并將其在油浴中于80℃加熱24h。加入又一份880氨(50ml)，將反應(yīng)物在80℃加熱24h。然后，反應(yīng)物在真空中濃縮以去除所有溶劑得到油。將油導(dǎo)出到880氨(150ml)里并于80℃加熱24h。反應(yīng)物在真空中濃縮以去除所有溶劑得到油。經(jīng)過(guò)庫(kù)格爾若蒸餾得到乙酰胺bp 170-180 0.2mm。包含乙酰胺的球泡被清洗干凈并繼續(xù)蒸餾。蒸餾得到三(2-羥乙基)甲烷(22.53g，92％)bp 220℃0.2mm。
NMR1H(CDCl3)，δ1.45(6H，q，3xCH2)，2.2(1H，五重峰，CH)；3.7(6H，t 3xCH2OH)；5.5(3H，brs，3xOH)。
NMR13C(CDCl3)，δ22.13，CH；33.95，3xCH2；57.8，3xCH2OH。
(步驟e)三醇轉(zhuǎn)化成三(甲烷磺酸酯)。
在攪拌著的冰冷的三(2-羥乙基)甲烷(10g，0.0676mol)的二氯甲烷(50ml)溶液中，在氮?dú)庀戮徛蜗录淄榛酋Ｂ?40g，0.349mol)的二氯甲烷(50ml)溶液，滴入速率使得溫度不會(huì)升到15℃以上。然后逐滴加入吡啶(21.4g，0.27mol，4eq)的二氯甲烷(50ml)溶液，加入速率使得溫度不會(huì)升到15℃以上，是放熱反應(yīng)。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?4小時(shí)，然后用5N的鹽酸溶液(80ml)處理，形成分層。用另外的二氯甲烷(50ml)萃取含水層，合并有機(jī)萃取物、在硫酸鈉上干燥、過(guò)濾和真空濃縮，得到有過(guò)量甲烷磺酰氯雜質(zhì)的三[2-(甲基磺酰氧基)乙基]甲烷。理論產(chǎn)量是25.8g。
NMR1H(CDCl3)，δ4.3(6H，t，2xCH2)，3.0(9H，s，3xCH3)，2(1H，六重峰，CH)，1.85(6H，q，3xCH2)。
(步驟f)制備1，1，1-三(2-疊氮基乙基)甲烷。
處于攪拌狀態(tài)的三[2-(甲基磺酰氧基)乙基]甲烷[來(lái)自步驟1(e)，含有過(guò)量甲基磺酰氯雜質(zhì)](25.8g，67mmol，理論值)的干DMF(250ml)溶液，15分鐘內(nèi)在氮?dú)夥障掠茂B氮化鈉(30.7g，0.47mol)分批處理。觀察到了放熱，反應(yīng)物在冰浴中冷卻。30分鐘后，反應(yīng)混合物在50℃的油浴中加熱24h。反應(yīng)物變成棕色。使反應(yīng)冷卻，用碳酸鉀稀溶液(200m l)處理，并用40/60汽油醚/二乙醚按照10∶1萃取3次(3×150ml)。有機(jī)萃取物用水(2×150ml)清洗，硫酸鈉干燥，并過(guò)濾。在汽油/醚溶液中加入乙醇(200ml)以保持三疊氮化物處于溶解狀態(tài)，在真空中將體積減到不小于200ml。加入乙醇(200ml)，重新在真空中濃縮以去除最后的痕量汽油，得到不低于200ml的乙醇溶液。三疊氮化物的乙醇溶液被直接用于步驟1(g)。
小心由于疊氮化物具有潛在爆炸性，所以不要去除所有溶劑，任何時(shí)候都應(yīng)該保持為稀溶液狀態(tài)。
取小于0.2ml的溶液在真空下蒸發(fā)去除乙醇，并對(duì)該小試樣進(jìn)行NMR分析。
NMR1H(CDCl3)，δ3.35(6H，t，3xCH2)，1.8(1H，七重峰，CH，)，1.6(6H，q，3xCH2)。
步驟(g)制備1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷。
三(2-疊氮基乙基)甲烷(15.06g，0.0676mol)(假定前述反應(yīng)達(dá)到100％產(chǎn)率)的乙醇(200ml)溶液用10％的炭鈀(2g，50％水)處理，并氫化12h。反應(yīng)容器每2小時(shí)排空一次以去除反應(yīng)生成的氮，并重新填充氫。取樣進(jìn)行NMR分析，確認(rèn)三疊氮化物完全轉(zhuǎn)變成了三胺。
小心未還原的疊氮化物在蒸餾時(shí)可能爆炸。反應(yīng)物通過(guò)Celite墊過(guò)濾以去除催化劑，并在真空下濃縮得到油狀的三(2-氨基乙基)甲烷。該油在0.4mm/Hg下通過(guò)庫(kù)格爾若蒸餾進(jìn)一步純化，bp.180-200℃，得到無(wú)色油(8.1g，三醇的總產(chǎn)量為82.7％)。
NMR1H(CDCl3)，2.72(6H，t，3xCH2N)，1.41(H，七重峰，CH)，1.39(6H，q，3xCH2)。
NMR13C(CDCl3)，δ39.8(CH2NH2)，38.2(CH2.)，31.0(CH)。
實(shí)施例2制備1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷的替換方案。
(步驟a)用對(duì)甲氧基-芐基胺使三甲基醚酰胺化。
將三(甲氧基羰基甲基)甲烷[2g，8.4mmol，如上述步驟1(b)制備]溶解在對(duì)甲氧基-芐基胺(25g，178.6mmol)中。儀器設(shè)置后進(jìn)行蒸餾并在氮?dú)饬飨录訜岬?20℃并保溫24h。反應(yīng)進(jìn)程通過(guò)收集的甲醇量進(jìn)行監(jiān)控。反應(yīng)混合物冷卻到室溫，加入30ml的乙酸乙酯，然后將沉淀的三酰胺產(chǎn)物攪拌30分鐘。三酰胺通過(guò)過(guò)濾被隔離，濾餅用足量乙酸乙酯清洗數(shù)次以去除過(guò)量的對(duì)甲氧基-芐基胺。干燥后，得到4.6g，100％的白色粉末。該高度不溶性的產(chǎn)物無(wú)需進(jìn)一步純化或表征，直接用于下一步驟中。
(步驟b)制備1，1，1-三[2-(對(duì)甲氧基芐基氨基)乙基]甲烷。
在于冰水浴中冷卻的1000ml 3頸圓底燒瓶中，將步驟2(a)的三酰胺(10g，17.89mmol)小心加到250ml的1M硼烷溶液(3.5g，244.3mmol)中。完全加入后，去除冰水浴，反應(yīng)混合物緩慢加熱到60℃。反應(yīng)混合物在60℃攪拌20小時(shí)。提取反應(yīng)混合物試樣(1ml)，和0.5ml 5N HCl混合，靜置30min。在該試樣中加入0.5ml的50NaOH，隨后加入2ml水，攪拌溶液直到所有的白色沉淀物都溶解。溶液用乙醚(5ml)萃取和蒸發(fā)。殘余物以1mg/ml的濃度溶解在乙腈中，用MS分析。如果在MS譜中觀察到單酰胺和二酰胺(M+H/Z＝520和534)，則反應(yīng)沒(méi)有完成。為了使反應(yīng)完成，又加入100ml的1M硼烷T(mén)HF溶液，在60℃繼續(xù)攪拌反應(yīng)混合物6小時(shí)，按照前述采樣步驟提取新試樣。需要時(shí)繼續(xù)加入1M硼烷的THF溶液，直到完全轉(zhuǎn)變成三胺為止。
反應(yīng)混合物冷卻到室溫，緩慢加入5N HCl，[小心有強(qiáng)烈成泡現(xiàn)象]。加入HCl直到觀察不到氣體形成為止。攪拌混合物30min，然后蒸發(fā)。所得的餅懸浮在NaOH水溶液(20-40％；1∶2w/v)中，攪拌30分鐘。隨后，混合物用水(3倍體積)稀釋。然后，用二乙醚(2×150ml)萃取混合物[小心不要使用鹵化溶劑]。合并有機(jī)相隨后用水(1×200ml)、鹽水(150ml)清洗，并用硫酸鎂干燥。蒸發(fā)后產(chǎn)量7.6g，84％，油狀。
NMR1H(CDCl3)，δ1.45，(6H，m，3xCH2；1.54，(1H，七重峰，CH)；2.60(6H，t，3xCH2N)；3.68(6H，s，ArCH2)；3.78(9H，s，3xCH3O)；6.94(6H，d，6xAr).7.20(6H，d，6xAr)。
NMR13C(CDCl3)，δ32.17，CH；34.44，CH2；47.00，CH2；53.56，ArCH2；55.25，CH3O；113.78，Ar；129.29，Ar；132.61；Ar；158.60，Ar；(步驟c)制備1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷。
將1，1，1-三[2-(對(duì)甲氧基芐基氨基)乙基]甲烷(20.0g，0.036mol)溶解到甲醇(100ml)中，加入Pd(OH)2(5.0g)?；旌衔镞M(jìn)行氫化處理(3巴，100℃，高壓反應(yīng)釜中)并攪拌5小時(shí)。在10小時(shí)和15小時(shí)后再分別加入兩份(2×5g)Pd(OH)2。過(guò)濾反應(yīng)混合物，濾液用甲醇清洗。合并的有機(jī)相經(jīng)過(guò)蒸發(fā)，殘余物在真空(1×10-2，110℃)下蒸餾，得到2.60g(50％)的1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷，和前述實(shí)施例1相同。
實(shí)施例3制備3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷。
將2-甲基丁-2-烯(147ml，1.4mol)和亞硝酸異戊基酯(156ml，1.16mol)的混合物在cardice和甲醇浴中冷卻到-30℃，用頂置空氣攪拌器強(qiáng)烈攪拌，并用濃鹽酸(140ml，1.68mol)逐滴處理，處理速度使得溫度保持低于-20℃。由于具有明顯放熱效應(yīng)所以這需要大約1h，必須小心以免過(guò)熱。加入乙醇(100ml)以降低在添加結(jié)束時(shí)形成的漿料的粘度，反應(yīng)混合物繼續(xù)在-20至-10℃攪拌2h，使反應(yīng)完成。沉淀物在真空下通過(guò)過(guò)濾收集，并用4×30ml的冷(-20℃)乙醇和100ml冰冷水清洗，在真空下干燥得到白色固體形式的3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷。將乙醇濾液和清洗液組合在一起，用水(200ml)稀釋?zhuān)鋮s并于-10℃靜置1h，此時(shí)進(jìn)一步有3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷結(jié)晶析出。沉淀物通過(guò)過(guò)濾收集，并用最小量的水清洗，在真空下干燥得到總產(chǎn)率的3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(115g，0.85mol，73％)，經(jīng)NMR檢測(cè)其純度大于98％。
NMR1H(CDCl3)，異構(gòu)體的混合物形式(異構(gòu)體1，90％)1.5d，(2H，CH3)，1.65d，(4H，2xCH3)，5.85，q，和5.95，q，以及1H。(異構(gòu)體2，10％)，1.76S，(6H，2xCH3)，2.07(3H，CH3)。
實(shí)施例4二[N-(1，1-二甲基-2-N-羥基亞胺丙基)2-氨基乙基]-(2-氨基乙基)甲烷(螯合劑1)的合成。
在三(2-氨基乙基)甲烷(4.047g，27.9mol)的干乙醇(30ml)溶液中，于室溫加入無(wú)水碳酸鉀(7.7g，55.8mmol，2eq)，同時(shí)在氮?dú)夥障聫?qiáng)烈攪拌。將3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(7.56g，55.8mol，2eq)的溶液溶解在干乙醇(100ml)中，取75ml該溶液緩慢滴入反應(yīng)混合物中。反應(yīng)隨后在二氧化硅上進(jìn)行TLC[板在二氯甲烷、甲醇、濃(0.88sg)氨為100/30/5中測(cè)試，所述TLC板通過(guò)噴涂水合茚三酮并加熱而制備]。觀察到了單烷基化產(chǎn)物、二烷基化產(chǎn)物和三烷基化產(chǎn)物，其RF按此順序增加。采用梯度為7.5-75％乙腈/3％氨水的RPR逆相柱進(jìn)行HPLC分析。反應(yīng)混合物在真空中濃縮以去除乙醇，并重新懸浮到水(110ml)中。用醚(100ml)萃取所述含水漿料，以去除部分三烷基化的化合物和親脂性雜質(zhì)，使單烷基化產(chǎn)物和所需的二烷基化產(chǎn)物留在水層中。水溶液用乙酸銨(2eq，4.3g，55.8mmol)緩沖，以確保色譜分析正確進(jìn)行。水溶液在用自動(dòng)的制備HPLC純化之前在4℃儲(chǔ)存過(guò)夜。
產(chǎn)率(2.2g，6.4mmol，23％)。
質(zhì)譜正離子10V錐形電壓。結(jié)果344；計(jì)算值M+H＝344。
NMR1H(CDCl3)，δ1.24(6H，s，2xCH3)，1.3(6H，s，2xCH3)，1.25-1.75(7H，m，3xCH2，CH)，(3H，s，2xCH2)，2.58(4H，m，CH2N)，2.88(2H，t CH2N2)，5.0(6H，s，NH2，2xNH，2xOH)。
NMR1H((CD3)2SO)δ1.14xCH；1.29，3xCH2；2.1(4H，t，2xCH2)；NMR13C((CD3)2SO)，δ9.0(4xCH3)，25.8(2xCH3)，31.02xCH2，34.6CH2，56.82xCH2N；160.3，C＝N。
HPLC條件采用25mmPRP柱，流速為8ml/minA＝3％氨溶液(sp.gr＝0.88)/水；B＝乙腈時(shí)間 ％B0 7.515 75.020 75.022 7.530 7.5每次測(cè)試裝入3ml的水溶液，在12.5-13.5min的時(shí)間范圍內(nèi)收集。
實(shí)施例53-[(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺酰基)-(1-羥基氨基甲?；h(huán)戊基)氨基]丙酸的合成(化合物27現(xiàn)有技術(shù))。
(步驟A)在1-氨基環(huán)戊烷羧酸芐基酯對(duì)甲苯磺酸鹽(12.1g，30.9mmol)和三乙基胺(10.0ml，72mmol)的水(150ml)和1，4-二烷(150ml)溶液中，加入4’-氟聯(lián)苯基-4-磺酰氯(8.8g，32.5mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?6小時(shí)，然后通過(guò)在真空下蒸發(fā)去除大多數(shù)溶劑?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?zhuān)嗬^用稀鹽酸溶液、水和鹽水清洗。溶液用硫酸鎂干燥，濃縮得到固體形式的1-(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；被?環(huán)戊烷羧酸芐基酯，12.33g(76％)。
(步驟B)在處于室溫的1-(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺酰基氨基)環(huán)戊烷羧酸芐基酯(23.0g，50.7mmol)的干DMF(500ml)溶液中，加入六甲基二硅烷基疊氮化鉀(12.2g，61.1mmol)，在45分鐘后加入叔丁基-(3-碘丙氧基)二甲基硅烷(18.3g，60.9mmol)。所得混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。然后另外加入六甲基二硅烷基疊氮化鉀(3.0g，15mmol)和叔丁基-(3-碘丙氧基)二甲基硅烷(4.5g，15mmol)。在室溫下持續(xù)攪拌5小時(shí)。通過(guò)加入飽和氯化銨溶液使混合物猝滅。在真空下蒸發(fā)去除DMF。殘余物導(dǎo)出到二乙醚中，隨后相繼用水、稀鹽酸水溶液和鹽水清洗。在用硫酸鎂干燥后，二乙醚被蒸發(fā)得到黃色油。在黃色油中加入己烷和二氯甲烷，誘發(fā)起始材料結(jié)晶，所述結(jié)晶物通過(guò)過(guò)濾回收。蒸發(fā)掉濾液中的溶劑后得到琥珀色油狀的粗1-[[3-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)丙基]-(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺酰基)氨基]環(huán)戊烷羧酸芐基酯(27.35g)。
(步驟C)在處于室溫的粗1-[[3-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)丙基]-(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?氨基]環(huán)戊烷羧酸芐基酯(27.35g)的二氯甲烷(450mL)溶液中，加入三氟化硼醚合物(11mL，89.4mmol)。在45分鐘后，通過(guò)順序加入飽和氯化銨溶液和水，使反應(yīng)猝滅。有機(jī)相被分離，用水和鹽水清洗，并用硫酸鎂干燥。溶劑在真空下干燥后，得到琥珀色油狀的粗1-[(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?-(3-羥基丙基)氨基]-環(huán)戊烷羧酸芐基酯(22.1g)。
(步驟D)將粗1-[(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?-(3-羥基丙基)氨基]-環(huán)戊烷羧酸芐基酯(22.1g)的丙酮(400mL)溶液于冰浴中冷卻，用Jones反應(yīng)劑(約20mL)處理直到穩(wěn)定為桔黃色?；旌衔镌?℃-室溫?cái)嚢?小時(shí)。在用異丙醇(1mL)猝滅過(guò)量氧化劑之后，加入Celite，過(guò)濾混合物。濾液在真空下濃縮。殘余物導(dǎo)出到乙酸乙酯中，用水和鹽水清洗，用硫酸鎂干燥，并濃縮得到油狀的粗1-[(2-羧乙基)-(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?氨基]-環(huán)戊烷羧酸芐基酯(21.4g)。
(步驟E)在處于室溫的粗1-[(2-羧乙基)-(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?氨基]-環(huán)戊烷羧酸芐基酯(21.4g)的DMF(500mL)溶液中，加入碳酸鉀(22.5g，163mmol)和甲基碘(3.7ml，59.4mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?6小時(shí)，然后在真空下濃縮。殘余物導(dǎo)出到水中，采用6N的鹽酸水溶液進(jìn)行酸化處理。所得混合物用二乙醚和乙酸乙酯的混合物萃取。有機(jī)萃取物用水和鹽水清洗，并用硫酸鎂干燥。在濃縮成琥珀色油之后，通過(guò)在硅膠上用己烷中15％的乙酸乙酯洗脫進(jìn)行快速色譜分析，分離出白色固體狀的1-[(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?-(2-甲氧基羰基乙基)氨基]-環(huán)戊烷-1-羧酸芐基酯(12.6g)。
(步驟F)將1-[(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?-(2-甲氧基羰基乙基)氨基]-環(huán)戊烷-1-羧酸芐基酯(12.1g，22.4mmol)的甲醇(270mL)溶液用10％的活性炭鈀處理，并在3個(gè)大氣壓下在Parr振動(dòng)器中氫化3.5小時(shí)。在通過(guò)尼龍(孔隙尺寸為0.45μm)過(guò)濾去除催化劑以后，溶劑蒸發(fā)得到白色泡沫形式的1-{(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺酰基)-(2-甲氧基羰基乙基)氨基}環(huán)戊烷-1-羧酸(10.1g，100％)。
(步驟G)在1-[(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?-(2-甲氧基羰基乙基)-氨基]環(huán)戊烷-1-羧酸(10.1g，22.4mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(170mL)溶液中，依次加入二異丙基乙基胺(4.3mL，24.6mmol)和六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三-(二甲基氨基)(11.0g，24.9mmol)。混合物攪拌4小時(shí)。然后加入其它的二異丙基乙基胺(7.8mL，44.6mmol)和O-芐基羥基胺鹽酸鹽(4.64g，29.1mmol)，所得混合物在60℃攪拌16小時(shí)。在真空下濃縮后，殘余物導(dǎo)出到水中，用1N鹽酸水溶液進(jìn)行酸化處理?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿。腿∥镆来斡盟?、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水清洗。溶液用硫酸鎂干燥并濃縮得到固體，所述固體在用7∶3∶1己烷/乙酸乙酯/二氯甲烷研制時(shí)得到白色結(jié)晶固體形式的3-[(1-芐基氧基氨基甲?；h(huán)戊基)-(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?氨基]丙酸甲基酯(10.65g，86％)。
(步驟H)將3-[(1-芐基氧基氨基甲酰基環(huán)戊基)-(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?氨基]丙酸甲基酯(10.65g，19.2mmol)的甲醇(250mL)溶液用5％的硫酸鋇鈀處理，并在3個(gè)大氣壓下在Parr振動(dòng)器中氫化處理3小時(shí)。在通過(guò)尼龍(孔隙尺寸為0.45μm)過(guò)濾去除催化劑后，溶劑蒸發(fā)得到白色泡沫形式的3-[(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?-(1-羥基氨基甲?；h(huán)戊基)氨基]丙酸甲基酯(8.9g，100％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.80(br s，1H)，7.85-7.75(m，6H)，7.32-7.25(m，2H)，3.54(s，3H)，3.52-3.48(m，2H)，2.73-2.69(m，2H)，2.24-2.21(m，2H)，1.86-1.83(m，2H)，1.60-1.40(m，4H)。
(步驟I)將3-[(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?-(1-羥基氨基甲?；h(huán)戊基)氨基]丙酸甲基酯(8.9g，19.2mmol)的甲醇(500mL)溶液用1N的氫氧化鈉水溶液(95mL，95mmol)處理，并在室溫下攪拌5.5小時(shí)?；旌衔镞M(jìn)行濃縮以去除甲醇，用水稀釋?zhuān)?N鹽酸水溶液進(jìn)行酸化處理，用乙酸乙酯萃取。在用水和鹽水清洗后，有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥，濃縮得到白色泡沫形式的3-[(4’-氟聯(lián)苯基-4-磺?；?-(1-羥基氨基甲?；h(huán)戊基)氨基]丙酸(6.74g，78％)，其從乙酸乙酯結(jié)晶而成。Mp163-164℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ12.30(br s，1H)，10.40(br s，1H)，8.77(br s，1H)，7.89-7.74(m，6H)，7.31-7.27(m，2H)，3.51-3.44(m，2H)，2.64-2.60(m，2H)，2.24-2.22(m，2H)，1.86-1.83(m，2H)，1.60-1.40(m，4H)。MS 449(M-1)。
實(shí)施例6化合物23的合成。
在處于攪拌狀態(tài)的化合物1，四氟硼酸O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’-N’-四甲基脲或TBTU和N-甲基嗎啉的DMF溶液中，加入酪胺。反應(yīng)混合物在惰性氣氛下在室溫反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)通過(guò)HPLC監(jiān)控。在完成后，將黃色透明的溶液進(jìn)行濃縮并在高真空下干燥4小時(shí)。該粗產(chǎn)物由制備HPLC純化，得到乳白色的固體，產(chǎn)率為88％。
1H NMR(DMSO)δ10.5(1H，s，NH)；9.3(1H，s，NH)；8.8(1H，s，OH)；8(1H，s，OH)；7.8(2H，J＝8.8Hz，d，Har)；7.3(2H，J＝8Hz，t，Har)；7.2(2H，d，J＝8Hz，Har)；7.1(2H，J＝8.8Hz，d，Har)；7(2H，J＝8.8Hz，d，Har)；6.7(2H，J＝8.8Hz，d，2H)；3.4(2H，m，CH2)；3.1(2H，m，CH2)；2.7(2H，m，CH2)，2.6(2H，m，CH2)；2.2-1.9(4H，m，CH2)；1.5(4H.m，CH2)MS(ESI)586.2(MH+)和608.2(MNa+)HPLC98％純。
實(shí)施例7化合物26的合成。
在處于攪拌狀態(tài)的化合物1，六氟磷酸(7-氮雜苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷(PyAOP)和N-甲基嗎啉的DMF溶液中，加入碘代苯胺。反應(yīng)混合物在惰性氣氛下在室溫反應(yīng)3天。反應(yīng)通過(guò)HPLC監(jiān)控。在完成后，將溶液濃縮并在高度真空下干燥4小時(shí)。該粗產(chǎn)物由制備HPLC純化，得到固體，產(chǎn)率為21％。
MS(ESI)668(MH+)和690(MNa+)HPLC100％純。
實(shí)施例8化合物24的合成。
步驟A制備3-碘代酪胺。
在室溫下將碘溶液(1M，2ml)緩慢加到20ml的酪胺溶液(30mM，在30％的氨水中)中。在5小時(shí)后，溶液濃縮至5ml，于0℃靜置過(guò)夜。形成的乳白色沉淀被過(guò)濾并用冷水清洗。固體在高度真空下干燥過(guò)夜。
1H NMR(CD3OD)δ2.7(2H，t，J＝7Hz)；2.9(2H，t，J＝7Hz)；6.7(1H，d，J＝8.1Hz)；7.1(1H，dd，J＝2.2Hz，8Hz)；7.5(1H，d，J＝2.2Hz)。
步驟B。
在處于攪拌狀態(tài)的化合物1，四氟硼酸O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’-N’-四甲基脲(TBTU)和N-甲基嗎啉的DMF溶液中，加入3-碘代酪胺(來(lái)自步驟A)。反應(yīng)混合物在惰性氣氛下在室溫反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)通過(guò)HPLC監(jiān)控。在完成后，將黃色透明的溶液進(jìn)行濃縮并在高度真空下干燥4小時(shí)。該粗產(chǎn)物由制備HPLC純化，得到乳白色固體(化合物24)，產(chǎn)率為10％。
MS(ESI)712(MH+)734(MNa+)實(shí)施例9合成螯合劑-MMPi綴合物(化合物2)。
化合物2。
將化合物1(5.1mg)、PyAOP(6.0mg)和N-甲基嗎啉(2μl)溶解在二甲基甲酰胺(0.5mL)中，混合物攪拌2分鐘。加入螯合劑1(3.4mg)，反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜。加入20％乙腈/水(8ml)，采用制備HPLC(柱Phenomenex Luna 10μC18(2)250×10mm，檢測(cè)230nm，溶劑AH2O/0.1％TFA，溶劑BCH3CN/0.1％TFA，流速5mL/min，梯度20-60％B，30分鐘，tR17min)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。在凍干后，得到1mg的純材料，用LC-MS(柱Phenomenex Luna 5μC18(2)250×4.6mm，檢測(cè)214nm，溶劑AH2O/0.1％TFA，溶劑BCH3CN/0.1％TFA，流速1mL/min，梯度20-60％B，20分鐘，tR14.32min，結(jié)果m/z792.5，預(yù)期值MH+792.4)對(duì)該材料進(jìn)行表征。
實(shí)施例10合成氨基-PEG連接劑衍生的MMPi(化合物4)。
步驟(a)1，11-二疊氮基-3，6，9-三氧雜十一烷。
將干四乙二醇(19.4g，0.100mol)和甲烷磺酰氯(25.2g，0.220mol)在干THF(100ml)中的溶液在氬氣下保藏，并在冰/水浴中冷卻到0℃。向燒瓶中于45分鐘內(nèi)逐滴加入三乙基胺(22.6g，0.220mol)在干THF(25ml)中的溶液。1小時(shí)后，去除冷卻浴，繼續(xù)攪拌4小時(shí)。加入水(60ml)。向混合物中順序加入碳酸氫鈉(6g，使pH達(dá)到8)和疊氮化鈉(14.3g，0.220mmol)。通過(guò)蒸餾去除THF，水溶液回流24h(形成2層)。混合物冷卻，加入乙醚(100ml)。含水相用氯化鈉飽和。相發(fā)生分離，用乙醚(4×50ml)萃取含水相。合并的有機(jī)相用鹽水清洗(2×50ml)并干燥(MgSO4)。經(jīng)過(guò)濾和濃縮后得到22.1g(91％)的黃色油。產(chǎn)物在下一步驟使用，無(wú)需進(jìn)一步純化。
步驟(b)11-疊氮基-3，6，9-三氧雜十一烷胺。
向處于機(jī)械強(qiáng)烈攪拌的懸浮液，即1，11-二疊氮基-3，6，9-三氧雜十一烷(20.8g，0.085mol)在5％鹽酸(200ml)中的懸浮液中，于室溫在3小時(shí)內(nèi)加入三苯基膦(19.9g，0.073mol)的乙醚(150ml)溶液。反應(yīng)混合物繼續(xù)攪拌24小時(shí)。相發(fā)生分離，含水相用二氯甲烷(3×40ml)萃取。含水相在冰/水浴中冷卻，加入KOH調(diào)節(jié)pH到大約12。產(chǎn)物萃取到二氯甲烷(5×50ml)中。合并的有機(jī)相進(jìn)行干燥(MgSO4)。過(guò)濾和蒸發(fā)后，得到14.0g(88％)黃色油。MALDI-TOF質(zhì)譜分析(基質(zhì)□-氰基-4-羥基肉桂酸)表明在219處出現(xiàn)M+H峰，和預(yù)期的一樣。用1H(500MHz)13C(125MHz)NMR譜進(jìn)一步表征的結(jié)果證實(shí)了這種結(jié)構(gòu)。
步驟(c)合成(化合物1)-PEG(3)-N3。
在化合物1(41mg，87μmol)的DMF(5ml)溶液中，加入11-疊氮基-3，6，9-三氧雜十一烷胺(19mg，87μmol)，HATU(AppliedBiosystems，33mg，87μmol)和DIEA(Fluka，30μl，174μmol)。1小時(shí)反應(yīng)時(shí)間后，混合物濃縮，殘余物用制備HPLC(柱PhenomenexLuna C18(2)5μm 21.2×250mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度30-60％B，60分鐘；流速10mL/min；UV檢測(cè)214nm)進(jìn)行純化，得到的產(chǎn)物在凍干后為33.9mg(59％)。LC-MS分析(柱Phenomenex Luna C18(2)3μm 50×4.60mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度20-100％B，10分鐘；流速1mL/min；UV檢測(cè)214nm，ESI-MS)在4.88min處出現(xiàn)了峰值，m/z 667.4(MH+)，和預(yù)期的一樣。
步驟(d)合成化合物4。
化合物4在(化合物1)-PEG(3)-N3(4.7mg，7μmol)的甲醇(4ml)溶液中，加入Pd/C(Koch-Light，約10mg)。混合物在氫氣氛(1atm)下室溫?cái)嚢?0min?；旌衔锉贿^(guò)濾和濃縮。LC-MS分析(柱Phenomenex Luna C18(2)3μm 50×4.60mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度20-100％B，10分鐘；流速1mL/min；UV檢測(cè)214nm，ESI-MS)在4.17min處出現(xiàn)了峰值，m/z 667.4(MH+)，和預(yù)期的一樣。產(chǎn)物直接用于后續(xù)步驟，無(wú)需進(jìn)一步純化。
實(shí)施例11合成螯合劑與PEG(3)-二甘醇基間隔基(化合物3)的綴合物。
(步驟a)合成(化合物1)-PEG(3)-二甘醇酸。
在(化合物1)-PEG(3)-NH2(實(shí)施例6，25mg，39μmol)的DMF(4ml)溶液中，加入二甘醇酸酐(Acros，9mg，78μmol)。在攪拌1.5小時(shí)后，反應(yīng)混合物進(jìn)行濃縮，殘余物用制備HPLC(柱Phenomenex Luna C18(2)5μm 21.2×250mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度20-80％B，60分鐘；流速10.0mL/min；UV檢測(cè)214nm)純化，得到14.9mg(51％)凍干的材料。產(chǎn)物用LC-MS(柱Phenomenex Luna C18(2)3μm 50×4.60mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度20-100％B，10分鐘；流速1mL/min；UV檢測(cè)214nm，ESI-MS)分析，結(jié)果表明在4.15min處出現(xiàn)m/z 757.3(MH+)峰值，和產(chǎn)物相對(duì)應(yīng)。采用NMR譜進(jìn)行了進(jìn)一步表征。
步驟(b)合成化合物3。
化合物3在(化合物1)-PEG(3)-二甘醇酸(6.6mg，9μmol)的DMF(3ml)溶液中，加入螯合劑1(3.1mg，9μmol)、HATU(AppliedBiosystems，3.4mg，9μmol)和DIEA(Fluka，3.1μl，18μmol)。在20分鐘反應(yīng)時(shí)間后，混合物進(jìn)行濃縮，殘余物用制備HPLC(柱Phenomenex Luna C18(2)5μm 21.2×250mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-80％B，60分鐘；流速10.0mL/min；UV檢測(cè)214nm)純化，得到4.2mg(43％)凍干的產(chǎn)物。LC-MS(柱Phenomenex Luna C18(2)3μm 50×4.60mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度20-100％B，10分鐘；流速1mL/min；UV檢測(cè)214nm，ESI-MS；tR＝4.17min，m/z 1082.5(MH+))和NMR譜分析結(jié)果證實(shí)了該結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例12合成用于PET成像的氯乙酰基衍生物(化合物5)。
化合物5
將新制備的氯乙酸酸酐(52mg，0.30mmol)和DIEA(51μl，0.30mmol)加入到化合物4(實(shí)施例10的步驟d，大約0.15mmol)的DMF(10ml)溶液中。1小時(shí)后，反應(yīng)混合物進(jìn)行濃縮，殘余物用制備HPLC(柱Phenomenex Luna C18(2)10μm 50×250mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度30-40％B，60分鐘；流速50.0mL/min；UV檢測(cè)214nm)純化，得到25.8mg(24％)凍干的產(chǎn)物。LC-MS(柱Phenomenex Luna C18(2)3μm 50×4.60mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度20-100％B，10分鐘；流速1mL/min；UV檢測(cè)214nm，ESI-MS)分析結(jié)果表明在6.01min處出現(xiàn)了峰值m/z 717.5(MH+)，和預(yù)期的一樣。
實(shí)施例13將3-氟丙基硫醇和氯乙酰化的化合物(化合物6)綴合。
步驟(a)合成3-三苯甲基硫烷基-丙-1-醇[Ph3C-S(CH2)3OH]。
在處于攪拌狀態(tài)的3-巰基丙基醇(129.6μl，1.5mmol)的TFA(10ml)溶液中，逐滴加入三苯基甲醇(390.6mg，1.5mmol)的TFA(10ml)溶液。加入后，在減壓下蒸發(fā)TFA，立刻采用反相制備色譜(柱Phenomenex Luna C18，00G-4253-V0；溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝CH3CN/0.1％TFA；梯度70-80％B，60分鐘；流速50mL/min；檢測(cè)254nm)對(duì)粗產(chǎn)物進(jìn)行純化，得到372mg(74％)的純化合物。(分析HPLCVydac C18柱，218TP54溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝CH3CN/0.1％TFA；梯度70-80％B，20分鐘；流速1.0mL/min；停留時(shí)間5.4min；在214nm和254nm檢測(cè))。該結(jié)構(gòu)用NMR譜進(jìn)行了驗(yàn)證。
步驟(b)合成甲烷磺酸3-三苯甲基硫烷基-丙基酯[Ph3C-S(CH2)3OMs]。
在3-苯甲基硫烷基-丙-1-醇(372.0mg，1.11mmol)的THF(10ml)溶液中，加入三乙基胺(151.7mg，209μl，1.5mmol)和甲磺酰氯(171.9mg，116.6μl，1.5mmol)。1小時(shí)反應(yīng)時(shí)間后，沉淀物通過(guò)過(guò)濾去除。溶液進(jìn)行濃縮，殘余物通過(guò)反相HPLC(柱Phenomenex LunaC18柱，00G-4253-V0；溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝CH3CN/0.1％TFA；梯度80-100％B，60分鐘；流速50mL/min；檢測(cè)254nm)純化，得到318mg(69％)的純化合物。(分析HPLCVydac C18柱，218TP54溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝CH3CN/0.1％TFA；梯度60-70％B，20分鐘；流速1.0mL/min；停留時(shí)間18.7min；在214nm和254nm檢測(cè))。該結(jié)構(gòu)用NMR譜進(jìn)行了驗(yàn)證。
步驟(c)合成(3-氟-丙基硫烷基)三苯基甲烷[Ph3C-S(CH2)3F]。
將氟化鉀(1.4mg，0.024mmol)和Kryptofix 222(9.0mg，0.024mmol)溶解在乙腈(0.2ml)中(加熱)。加入甲烷磺酸3-三苯甲基硫烷基-丙基酯(5mg，0.012mmol)的乙腈(0.2ml)溶液。將反應(yīng)混合物在80℃加熱90min。粗產(chǎn)物通過(guò)反相制備色譜(柱Vydac C18柱，218TP1022；溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝CH3CN/0.1％TFA；梯度40-90％B，40分鐘；流速10mL/min；檢測(cè)254nm)純化。得到2mg(50％)的純化材料(分析HPLCPhenomenex Luna C18柱，00B-4251-E0；溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝CH3CN/0.1％TFA；梯度40-80％B，10分鐘；流速2.0mL/min；停留時(shí)間8.2min；在214nm和254nm檢測(cè))。該結(jié)構(gòu)用NMR分析進(jìn)行了驗(yàn)證。
步驟(d)合成化合物6。
化合物6化合物6將3-氟-三苯甲基硫烷基-丙烷(1.4mg，4μmol)在TFA(50μl)、三異丙基硅烷(5μl)和水(5μl)的混合物中攪拌。將混合物加到化合物5(1.5mg，2μmol)在水和乙腈的1∶1混合物(800μl)的溶液中。通過(guò)加入K2CO3水溶液(200μl，0.5g/ml)將pH調(diào)到10，混合物在60℃加熱25分鐘。產(chǎn)物通過(guò)制備HPLC(柱Phenomenex LunaC18(2)柱5μm 10.0×250mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度30-50％B，60分鐘；流速5.0mL/min；UV檢測(cè)214nm)純化，得到0.9mg(58％)產(chǎn)物。LC-MS分析(柱Phenomenex Luna C18(2)3μm 50×4.60mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-80％B，10分鐘；流速1mL/min；UV檢測(cè)214nm，ESI-MS；tR＝6.25min，m/z 775.4(MH+))驗(yàn)證了所述結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例14用于PET成像的氯乙?；陌被岷蚉EG衍生物(化合物7-22)。
-Lys-Peg(4)-二甘醇基-Lys(氯乙?；?-NH2(化合物7)。
化合物7化合物7采用量程為0.05mmol的手動(dòng)氮起泡器儀器分析化合物7，分析中采用了Fmoc-protected Rink Amide MBHA樹(shù)脂(Novabiochem)、Fmoc-Lys(Dde)-OH(Novabiochem)、Fmoc-Lys(Boc)-OH(Novabiochem)、Fmoc-氨基-PEG-二甘醇酸(Polypure AS)和CP-471358(Pfizer)。所有氨基酸和CP-471358采用HATU/DIEA作為偶合反應(yīng)劑進(jìn)行偶合。反應(yīng)步驟通過(guò)Kaiser測(cè)試分析。在CP-化合物偶合后，C-末端賴(lài)氨酸的側(cè)鏈Dde基團(tuán)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)氨處理分裂。氯乙酰酸(Fluka)通過(guò)新制備的對(duì)稱(chēng)酸酐偶合。在含有2.5％H2O和2.5％三異丙基硅烷的TFA中，同時(shí)實(shí)施從樹(shù)脂中去除產(chǎn)物以及分裂側(cè)鏈Boe保護(hù)基團(tuán)，進(jìn)行2小時(shí)。粗材料從醚中沉淀，通過(guò)制備HPLC(柱Phenomenex Luna C18(2)10μm 250×10mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度20-40％B，60分鐘；流速5.0mL/min；UV檢測(cè)214nm)純化得到5.0mg白色固體。
LC-MS分析(柱Phenomenex Luna C18(2)3μm 2.0×50mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-80％B，10分鐘；流速0.3mL/min；UV檢測(cè)214nm和254nm，ESI-MS正模式)結(jié)果表明在5.9min處具有m/z 1088.4峰值，和有關(guān)MH+的預(yù)期一樣。
采用固相肽分析方法，按照相同方式制備了化合物8-22，并用MS進(jìn)行表征。
實(shí)施例15合成用于N-烷基化的18F標(biāo)記的衍生物合成甲苯磺酸3-[18F]氟丙基酯。
經(jīng)由雙向龍頭，將在玻璃小瓶中制備的Kryptofix 222(10mg)的乙腈(300μl)溶液和碳酸鉀(4mg)的水(300μl)溶液，用塑料注射器(1ml)轉(zhuǎn)移到置于黃銅加熱器中的碳玻璃反應(yīng)容器中。然后，通過(guò)該雙向龍頭加入18F-氟化物(185-370MBq)在目標(biāo)水(0.5-2ml)中的溶液。加熱器設(shè)置在125℃，啟動(dòng)定時(shí)器。在15分鐘后，以1min的間隔加入三等份乙腈(0.5ml)，干燥18F-氟化物共計(jì)40分鐘。40分鐘后，加熱器用壓縮空氣冷卻，去除罐子蓋，加入1，3-丙二醇-二-對(duì)甲苯磺酸酯(5-12mg)和乙腈(1ml)。罐子蓋復(fù)位，用封堵物封住管線。加熱器設(shè)在100℃，標(biāo)記為100℃/10分鐘。在標(biāo)記以后，通過(guò)Gilson RP HPLC在如下條件下隔離甲苯磺酸3-[18F]氟丙基酯柱 u-bondapak C18 7.8×300mm洗脫液 水(泵A)乙腈(泵B)管路體積(loop size)1ml
泵速度 4ml/min波長(zhǎng)254nm梯度5-90％洗脫液B，20分鐘產(chǎn)物Rt 12min一旦隔離后，粗試樣(大約10ml)用水稀釋(10ml)，并裝入到調(diào)整好的C18分離填料柱中。分離填料柱用氮?dú)飧稍?5分鐘，并用有機(jī)溶劑、哌啶(2ml)、乙腈(2ml)或DMF(2ml)沖洗。沖洗掉了大約99％的活性。
通過(guò)在哌啶中回流，將甲苯磺酸3-[18F]氟丙基酯用來(lái)對(duì)胺進(jìn)行N-烷基化處理。
實(shí)施例16用于S-烷基化的[18F]-硫醇衍生物。
步驟(a)制備3-[18F]氟-三苯甲基硫烷基-丙烷。
經(jīng)由雙向龍頭，將在玻璃小瓶中制備的Kryptofix 222(10mg)的乙腈(800μl)溶液和碳酸鉀(1mg)的水(50μl)溶液，用塑料注射器(1ml)轉(zhuǎn)移到置于黃銅加熱器中的碳玻璃反應(yīng)容器中。然后，通過(guò)該雙向龍頭加入18F-氟化物(185-370MBq)在目標(biāo)水(0.5-2ml)中的溶液。加熱器設(shè)置在125℃，啟動(dòng)定時(shí)器。在15分鐘后，以1min的間隔加入三等份乙腈(0.5ml)，干燥18F-氟化物共計(jì)40分鐘。40分鐘后，加熱器用壓縮空氣冷卻，去除罐子蓋，加入三甲基-(3-三苯甲基硫烷基-丙氧基)硅烷(1-2mg)和DMSO(0.2ml)。罐子蓋復(fù)位，用封堵物封住管線。加熱器設(shè)在80℃，標(biāo)記為80℃/5分鐘。在標(biāo)記以后，通過(guò)RP HPLC在如下條件下分析反應(yīng)混合物柱u-bondapak C18 7.8×300mm洗脫液0.1％TFA/水(泵A)0.1％TFA/乙腈(泵B)管路體積 100μl泵速度4ml/min波長(zhǎng) 254nm
梯度 1min 40％B15min 40-80％B5min 80％B反應(yīng)混合物用DMSO/水稀釋(1∶1v/v，0.15ml)，并裝入到調(diào)整好的t-C18分離填料柱中。藥筒用水(10ml)清洗，并用氮?dú)飧稍铮?-[18F]氟-1-三苯甲基硫烷基-丙烷用4等份的乙腈(0.5ml/1等份)洗脫。
步驟(b)制備3-[18F]氟-丙烷-1-硫醇 采用氮?dú)饬饕?00℃/10min將3-[18F]氟-1-三苯甲基硫烷基-丙烷的乙腈(1-2ml)溶液蒸發(fā)至干燥。加入TFA(0.05ml)、三異丙基硅烷(0.01ml)和水(0.01ml)的混合物，隨后以80℃/10min加熱，得到3-[18F]氟-丙烷-1-硫醇。
步驟(c)和-N(CO)CH2Cl前體反應(yīng)。
用來(lái)標(biāo)記氯乙?；绑w的一般程序是用壓縮空氣冷卻裝有來(lái)自步驟(b)的3-[18F]氟-巰基-丙烷的反應(yīng)容器，然后加入氨水(水中27％，0.1ml)和前體(1mg)的水溶液(0.05ml)。將混合物以80℃/10min加熱。
實(shí)施例17合成化合物45-48。
步驟(a)合成氨基氧基前體。
采用量程為0.2mmol的手動(dòng)氮起泡器儀器分析化合物45和47，分析中由Fmoc-protected Rink Amide MBHA樹(shù)脂(Novabiochem)開(kāi)始。Fmoc氨基酸購(gòu)自Novabiochem，單分散的Fmoc-PEG氨基酸購(gòu)自Polypure AS。Boc-(氨基氧基)乙酸購(gòu)自Fluka。在將Dde-Lys(Fmoc)-OH連接到樹(shù)脂上后，分裂側(cè)鏈Fmoc基團(tuán)，隨后用Boc(氨基氧基)乙酸偶合。Dde基團(tuán)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)氨處理分裂。采用HATU/DIEA偶合賴(lài)氨酸，然而將PyAOP/DIEA用于所有其它偶合。葡萄糖O-乙酰基在被從固體載體上分裂之前，通過(guò)和甲醇鈉的甲醇溶液反應(yīng)去除。在含有2.5％H2O和2.5％三異丙基硅烷的TFA中，同時(shí)實(shí)施從樹(shù)脂中去除產(chǎn)物以及分裂側(cè)鏈Boc保護(hù)基團(tuán)，進(jìn)行1-2小時(shí)。粗材料通過(guò)制備HPLC(柱Phenomenex Luna C18(2)5μ21.2×250mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；合適梯度，60分鐘；流速10.0mL/min；UV檢測(cè)214nm)純化得到凍干后是白色的固體或者粘性的無(wú)色油。通過(guò)LC-MS分析(柱Phenomenex LunaC18(2)3μ2.0×50mm，溶劑A＝水/0.1％TFA和溶劑B＝乙腈/0.1％TFA；合適梯度，10分鐘；流速0.3mL/min；UV檢測(cè)214nm和254nm，ESI-MS正模式)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。
步驟(b)綴合得到非放射性的氟化合物46和48。
4-氟苯甲醛和4-(3-氟丙氧基)苯甲醛分別購(gòu)自Fluka和Fluorochem。在來(lái)自a)的氨基氧基前體(大約5μmol)的20％乙腈(3ml)溶液中，加入甲醛(5倍過(guò)量)?；旌衔镌谑覝?cái)嚢?5分鐘并濃縮。產(chǎn)物如同上述步驟(a)進(jìn)行純化和分析。
實(shí)施例18體外金屬蛋白酶抑制測(cè)定。
采用下列市售Biomol測(cè)定試劑盒對(duì)化合物進(jìn)行篩選MMP-1比色測(cè)定試劑盒-目錄號(hào)AK-404，MMP-2比色測(cè)定試劑盒-目錄號(hào)AK-408，MMP-8比色測(cè)定試劑盒-目錄號(hào)AK-414，MMP-9比色測(cè)定試劑盒-目錄號(hào)AK-410，MMP-12比色測(cè)定試劑盒-目錄號(hào)AK-402，購(gòu)自Affiniti Research Products Ltd.(Palatine House，MatfordCourt，Exeter，EX2 8NL，UK)。
(a)測(cè)試化合物制備。
抑制劑以粉末形式提供，在4℃存儲(chǔ)。對(duì)于每種抑制劑而言，制備在DMSO中的1mM儲(chǔ)液，分成20μl的等份，將這些等份儲(chǔ)存在-20℃。儲(chǔ)液稀釋得到8種抑制劑濃度(推薦50μM、5μM、500nM、50nM、5nM、500pM、50pM和5pM)。稀釋采用的是試劑盒測(cè)定緩沖液。在加到測(cè)定孔中時(shí)，對(duì)抑制劑儲(chǔ)液進(jìn)行5倍稀釋?zhuān)蚨罱K濃度范圍是10μM-1pM。
(b)試驗(yàn)程序。
市售試劑盒提供了詳細(xì)內(nèi)容，但可以總結(jié)如下-如上制備測(cè)試化合物稀釋液，-在板中加入測(cè)定緩沖液，-在板中加入測(cè)試化合物-制備標(biāo)準(zhǔn)試劑盒抑制劑NNGH(有關(guān)稀釋參數(shù)參見(jiàn)試劑盒)-加入NNGH來(lái)控制抑制劑孔-制備MMP酶(有關(guān)稀釋參數(shù)參見(jiàn)試劑盒)-加入MMP到板中-將板在37℃培養(yǎng)約15分鐘-制備thiopeptolide底物(有關(guān)稀釋參數(shù)參見(jiàn)試劑盒)-將底物加到板上-在Labsystems iEMS板讀數(shù)器上，于37℃，414nm每2分鐘進(jìn)行計(jì)數(shù)，共1小時(shí)(對(duì)于MMP-1而言，每30秒計(jì)數(shù)一次，共20分鐘)。
(c)結(jié)果。
結(jié)果見(jiàn)表1
表1

實(shí)施例1999mTc放射性標(biāo)記(一般性方法)。
可以通過(guò)將下列物質(zhì)加到氮?dú)獯祾叩腜46小瓶中制備99mTc絡(luò)合物1ml N2吹掃的MeOH，在100μl MeOH中的100μg配體-MMPi綴合物，0.5ml Na2CO3/NaHCO3緩沖液(pH 9.2)，來(lái)自Te發(fā)生器的0.5ml TcO4-，0.1ml SnCl2/MDP溶液，(溶液，在100ml N2吹掃過(guò)的鹽水中含有10.2mg SnCl2和101mg亞甲基二膦酸)。
ITLC(瞬時(shí)薄層色譜分析)用來(lái)確定RCP。SG板和流動(dòng)相(1∶1的MeOH/(NH4OAc 0.1M))表明，在起點(diǎn)處是RHT(還原的、水解Tc)、在溶劑前端是高锝酸鹽、在中間Rf處是锝絡(luò)合物。
實(shí)施例20前體親電放射性碘化的一般程序。
所有前體根據(jù)下列程序進(jìn)行標(biāo)記在容納有200μl 0.2M NH4OAc緩沖液(pH 4)的小瓶中，加入10μl0.1mM Na127I(在0.01M NaOH中，1×10-9mol)。將混合物加入容納有Na123I(25.0μl，在0.05M NaOH中，大約500MBq)的小瓶中。隨后，將組合溶液轉(zhuǎn)移到硅烷化的塑料小瓶中。在反應(yīng)小瓶中加入5μl(2.5×10-8mol)的新制備的過(guò)乙酸水溶液(大約5mM)。最后，將前體(34μl的前體在MeOH中的3mM溶液)加到反應(yīng)小瓶中，將溶液靜置3min。
化合物通過(guò)HPLC純化。
HPLC方法溶劑A在水中的0.1％TFA溶劑B在MeCN中的0.1％TFA柱Phenomenex Luna 5μm C18(2)150×4.6mm。
梯度時(shí)間％B0.0 3020.07020.20 10023.20 10023.70 3030.030
表2放射性碘化的化合物的HPLC停留時(shí)間

實(shí)施例21合成18F標(biāo)記的衍生物化合物46B和48B。
步驟(a)4-18F-苯甲醛。
在圓底碳玻璃反應(yīng)容器(4ml)中，加入Kryptofix 222(5mg)的乙腈(800μl)溶液和碳酸鉀[13.5mg/ml(H2O，大約0.1m)](50μl)。容器置于黃銅加熱器中，將配有3條PTFE管線的反應(yīng)容器蓋子向下壓緊。管線1配有雙向龍頭，管線2連接到廢料小瓶上，管線3預(yù)留。將試樣裝置放置在鉛墻后面。通過(guò)所述雙向龍頭加入在回旋加速器靶水(370-740MBq；0.5-2ml)中含有的18F-氟化物。N2管線和所述雙向龍頭連接，將加熱器設(shè)置在110℃。在開(kāi)始加熱后10分鐘，去除N2管線，加入等份乙腈(0.5ml)。在開(kāi)始加熱后約10.5和11分鐘，重復(fù)這個(gè)過(guò)程。在每次加入乙腈后，將N2管線重新和雙向龍頭連接。將第二條氮?dú)夤芫€連接到截端的(capped off)管線3上，沖掉這條管線中存在的任何液體。總共干燥18F-氟化物30分鐘。在30分鐘后，用壓縮空氣冷卻加熱器，去除反應(yīng)容器蓋，加入4-(三甲基銨)苯甲醛三氟甲烷磺酸鹽[由Poethko等的方法制備，J.Nucl Med45(5)p892-902(2004)；0.5-0.8mg，0.0016-0.0026mmol]的DMSO(1000μl)溶液。這3條PTFE管線用封端物截端。以90℃/15min加熱所述反應(yīng)容器，得到4-18F-苯甲醛(通常結(jié)合產(chǎn)率大約是50％)。粗產(chǎn)物無(wú)需進(jìn)一步純化就可以使用。
步驟(b)綴合程序。
將溶解在檸檬酸/Na2HPO4緩沖液[500μl；通過(guò)將809μl的0.1M檸檬酸水溶液和110μl的無(wú)水Na2HPO4的0.2M水溶液混合制備]中的化合物45(2mg，0.003mmol)或化合物47(4mg，0.002mmol)直接加到得自步驟(a)的4-18F-苯甲醛(粗)中。反應(yīng)容器以70℃/15min加熱，得到粗化合物46B或48B。
步驟(c)工作程序和配制。
將得自步驟(b)的整個(gè)反應(yīng)混合物用水稀釋到約20ml的體積，加載到調(diào)制好的t-C18分離填料柱[用DMSO(5ml)調(diào)制，隨后用水(10ml)調(diào)制]中。加載的t-C18分離柱隨后用水(2×5ml)沖洗，再用DMSO(3×5ml)沖洗。合并的DMSO沖洗物含有所需的產(chǎn)品，采用RP HPLC制備系統(tǒng)純化柱LunaC18(2)10×100mm(5u)洗脫液水(泵A)；乙腈(泵B)管路體積 2ml流速 3ml/min波長(zhǎng) 254nm。
化合物46B或48B在該制備柱上的通常停留時(shí)間分別是23和21分鐘。分離的HPLC峰用水稀釋到約20ml的體積，并加載到調(diào)制好的t-C18分離填料柱[用乙醇(5ml)調(diào)制，隨后用水(10ml)調(diào)制]中。加載的t-C18分離填料柱隨后用水(1×5ml)沖洗，再用乙醇(3×0.2ml，1×0.4ml)沖洗。合并的乙醇沖洗物含有所需的產(chǎn)品，蒸發(fā)成約0.1ml的體積，并用磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS，1ml)配制成大約10％乙醇。配制的化合物的pH是大約7。
實(shí)施例22化合物24的123I放射性碘化衍生物(化合物24A)的血漿和體內(nèi)穩(wěn)定性。
用化合物24A進(jìn)行了血漿和體內(nèi)穩(wěn)定性研究，以確定化合物的穩(wěn)定性和新陳代謝。體外大鼠血漿穩(wěn)定性試驗(yàn)表明穩(wěn)定性良好，通過(guò)在37℃培養(yǎng)2小時(shí)，母化合物的RCP從93％變成80％。
大鼠的體內(nèi)研究表明，化合物24A在體內(nèi)隨著時(shí)間流逝具有輕微的不穩(wěn)定性和新陳代謝。由于尿液中的放射性不足，所以?xún)H僅能夠分析血漿和膽汁試樣。在血漿試樣中隨著時(shí)間流逝可以觀察到游離碘化物的量增加，但是僅僅占所注入的總活性的一小部分。在血漿試樣中檢測(cè)出一種新陳代謝物，在膽汁試樣中檢測(cè)出四種，表明新陳代謝也發(fā)生了。
實(shí)施例23放射性碘化衍生物(化合物24A)在體內(nèi)LLC腫瘤模型中的生物分布。
在C57BL/6小鼠的右大腿內(nèi)側(cè)，皮下注入1×106路易斯肺癌(LLC)細(xì)胞。在進(jìn)行生物分布之前，讓腫瘤生長(zhǎng)15天。這個(gè)模型已經(jīng)被用以顯示活性明膠酶(MMP-2)和膠原酶(MMP-1和8)的表達(dá)水平[Bae等Drugs Exp Clin Res.，29(1)15-23(2003)]。
結(jié)果在LLC腫瘤模型上進(jìn)行了生物分布研究。化合物24A首先被極快地從血液中清除，主要通過(guò)肝膽系統(tǒng)(HBS)分泌。在腫瘤組織中觀察到一些停留，背景組織攝入量低。下表3給出了結(jié)果總結(jié)
表3123I標(biāo)記的化合物在LLC腫瘤模型中的生物分布。

其中STD＝標(biāo)準(zhǔn)偏差，ID＝注入劑量，尿液＝尿液分泌。
實(shí)施例2418F標(biāo)記的衍生物(化合物46B和48B)在體內(nèi)腫瘤模型中的生物分布。
研究了化合物46B和48B在實(shí)施例23的LLC腫瘤模型上的生物分布。結(jié)果總結(jié)如下表表418F標(biāo)記的化合物在體內(nèi)LLC模型中的生物分布。

其中STD＝標(biāo)準(zhǔn)偏差，ID＝注入劑量，尿液＝尿液分泌。
實(shí)施例25123I-和18F-標(biāo)記的化合物在體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化模型中的生物分布。
ApoE結(jié)扎模型。
ApoE-/-小鼠是基因敲除的轉(zhuǎn)基因小鼠，它缺少ApoE基因，所以不能調(diào)節(jié)自己的血漿膽固醇水平。因此，ApoE小鼠出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化病變，這種病變通過(guò)喂養(yǎng)高脂肪飲食加速形成。通過(guò)頸動(dòng)脈結(jié)扎可以進(jìn)一步加速這種病變，導(dǎo)致在外科手術(shù)以及高脂肪飲食喂養(yǎng)4周內(nèi)明顯形成這種病變。已經(jīng)表明這個(gè)模型具有各種程度的組織重建，以及高的巨噬細(xì)胞和MMP表達(dá)水平，如同Ivan等所述[Circulation.1052686-2691(2002)]。
在進(jìn)行這些試驗(yàn)時(shí)采用了兩個(gè)對(duì)照樣(1)ApoE模擬動(dòng)物，其中小鼠經(jīng)受同樣的外科介入，但是縫線僅僅在頸動(dòng)脈下面穿過(guò)然后去除，和(2)C57BL/6結(jié)扎動(dòng)物，它經(jīng)受和ApoE結(jié)扎小鼠相同的外科結(jié)扎和高脂肪喂養(yǎng)。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)表明這些動(dòng)物確實(shí)具有一定程度的組織重建，但是活性MMP水平較低[Ivan等，Circulation1052686～2691(2002)]。
結(jié)果如表4所示表4123I-和18F-標(biāo)記的化合物在ApoE模型中的生物分布。

其中STD＝標(biāo)準(zhǔn)偏差，ID＝注入劑量。
實(shí)施例26化合物24A和32A在體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化模型中的自動(dòng)射線攝影分析。
兔膽固醇模型。
新西蘭大白兔喂養(yǎng)1％的膽固醇食物8周，以誘導(dǎo)在主動(dòng)脈中形成動(dòng)脈粥樣硬化病變。這個(gè)模型已經(jīng)證實(shí)從主動(dòng)脈弓到主動(dòng)脈降部形成了巨噬細(xì)胞富集的晚期動(dòng)脈粥樣硬化病變。簡(jiǎn)而言之，在用膽固醇喂養(yǎng)的兔中靜脈內(nèi)注入化合物24A和32A，在注射后2小時(shí)實(shí)施安樂(lè)死。主動(dòng)脈全部取出，在10％中性緩沖福爾馬林液中固定。沿著主動(dòng)脈腹側(cè)中線將其縱向剖開(kāi)，用蘇丹IV正面(en face)染色，蘇丹IV通過(guò)脂肪染色檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化病變是否存在。隨后將主動(dòng)脈放置在熒光粉屏上過(guò)夜。然后，該屏在第二天進(jìn)行掃描，以確定主動(dòng)脈組織內(nèi)部的放射性區(qū)域。
結(jié)果表明，兩種化合物都被攝入到主動(dòng)脈的動(dòng)脈粥樣硬化病變區(qū)域，但在主動(dòng)脈正常區(qū)域的攝入量極少。
實(shí)施例27在體內(nèi)腫瘤模型中成像。
采用化合物24A在MDA-MB-231腫瘤模型(人體乳腺癌異種移植模型)中成像。文獻(xiàn)證實(shí)MDA-MB-231細(xì)胞表達(dá)多種MMP，包括MMP-1(前體和活性的)(Benbow等，Bacheimer等)、MMP-2(Bacheimer等；Lee等)、MMP-3(Bacheimer等)、MMP-7-前體(Bacheimer等)、MMP-9前體(非活性的)(Benbow等；Bacheimer等；Lee等；Weber等)、MMP-10、11和14(都是前體)(Benbow等；Bacheimer等)。
Bacluneier等Anticancer Res.2001 Nov-Dec；21(6A)38211-8；Bae等Drugs Exp ClinRes.2003；29(1)15-23；Benbow等Clin Exp Metastasis.1999 May；17(3)231-8；Lee等，Eur.jCancer，2001；37106-113.
Weber等Int J Oncol..2002 Feb；20(2)299-303.
在注射后5-120分鐘發(fā)現(xiàn)了腫瘤“熱點(diǎn)”，在所有時(shí)間點(diǎn)上，目標(biāo)區(qū)域和肌肉的比例大于2∶1。結(jié)果如圖3所示。
權(quán)利要求
1.成像劑，包括用成像部分標(biāo)記的式(I)的金屬蛋白酶抑制劑，其中所述成像部分可以在所述標(biāo)記的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑被體內(nèi)給藥到哺乳動(dòng)物身體后進(jìn)行檢測(cè) 其中Y1是H或-(CH2)w-(C＝O)-Z；其中w是1-6的整數(shù)；和Z是OH、C1-6烷氧基、C4-10芳氧基或者NR1R2，其中R1和R2每個(gè)獨(dú)立選自H、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C1-6氟烷基或C4-10芳基。X1和X2與它們連接的碳原子一起形成C3-10飽和環(huán)，該環(huán)可以是脂環(huán)或二環(huán)，而且可以任選地引入選自O(shè)、N和S的1或2個(gè)雜原子；X3是H、C1-3烷基或C1-3氟烷基；Y2是式-[A1]p[O]qA2的基團(tuán)，其中p和q是0或1，A1是C1-10亞烷基，C3-8環(huán)亞烷基、C1-10全氟亞烷基、C6-10亞芳基或者C2-10雜亞芳基，和A2是H、C1-10烷基、C3-8環(huán)烷基、C1-10全氟烷基、C6-10芳基或C2-10雜芳基，前提是當(dāng)p＝0時(shí)q也是0而且A2不是H。
2.權(quán)利要求1的成像劑，其中Y1是-(CH2)w-(C＝O)-Z而且w是1、2或3。
3.權(quán)利要求1或2的成像劑，其中X3是H、CH3或CH2F。
4.權(quán)利要求1-3的成像劑，其中Y2是-C6H4-O-A2，和A2是C6-10芳基。
5.權(quán)利要求1-4的成像劑，其中所述成像部分選自(i)放射性金屬離子；(ii)順磁性金屬離子；(iii)γ發(fā)射型放射性鹵素；(iv)發(fā)射正電子的放射性非金屬；(v)超極化的NMR-活性核；(vi)適于體內(nèi)光學(xué)成像的報(bào)道分子；(vii)適于血管內(nèi)檢測(cè)的β-發(fā)射體。
6.權(quán)利要求1-5的成像劑，其中所述成像劑具有式II 其中{抑制劑}是式(I)的金屬蛋白酶抑制劑；-(A)n-是連接基團(tuán)，其中每個(gè)A獨(dú)立是-CR2-、-CR＝CR-、-C≡C-、-CR2CO2-、-CO2CR2-、-NRCO-、-CONR-、-NR(C＝O)NR-、-NR(C＝S)NR-、-SO2NR-、-NRSO2-、-CR2OCR2-、-CR2SCR2-、-CR2NRCR2-、C4-8環(huán)雜亞烷基、C4-8環(huán)亞烷基、C5-12亞芳基、或者C3-12雜亞芳基、氨基酸、糖或者單分散的聚乙二醇(PEG)結(jié)構(gòu)單元；R獨(dú)立選自H、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基烷基或C1-4羥烷基；n是0-10的整數(shù)，和Xa是H、OH、Hal、NH2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基烷基、C1-4羥烷基或者Xa是成像部分。
7.權(quán)利要求6的成像劑，其中所述成像部分連接在所述金屬蛋白酶抑制劑的Y1或Y2位置。
8.權(quán)利要求1-7的成像劑，其中所述基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑和配體綴合，所述配體和放射性金屬離子或順磁性金屬離子形成金屬絡(luò)合物。
9.權(quán)利要求8的成像劑，其中所述配體是螯合劑。
10.權(quán)利要求8或9的成像劑，其中所述放射性金屬離子是γ發(fā)射體或正電子發(fā)射體。
11.權(quán)利要求10的成像劑，其中所述放射性金屬離子是99mTc、111In、64Cu、67Cu、67Ga和68Ga。
12.權(quán)利要求10的成像劑，其中所述γ發(fā)射型放射性鹵素成像部分是123I。
13.權(quán)利要求10的成像劑，其中所述發(fā)射正電子的放射性非金屬選自18F、11C或13N。
14.權(quán)利要求1-13的成像劑，其中所述基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑具有式IV 其中Y2、w和Z如權(quán)利要求1的定義；X3是H、CH3或CH2F；X4是-(CH2)m-，其中m是1、2或3、-CH2OCH2-或X5，其中X5是 其中t是2或3。
15.權(quán)利要求14的成像劑，其中Z是NR1R2。
16.權(quán)利要求14或15的成像劑，其中所述基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑具有式V 其中X6是Hal、R1或OR1，其中R1是C1-3烷基或C1-3氟烷基。
17.權(quán)利要求16的成像劑，其中Z是NR1R2，X6是F；和X4是-(CH2)2-、-CH2OCH2-或其中t等于2的X5。
18.藥用組合物，其包括權(quán)利要求1-17的成像劑以及生物相容性載體，并且處于適于哺乳動(dòng)物給藥的形式。
19.放射性藥用組合物，包括權(quán)利要求1-17的成像劑以及生物相容性載體，并且處于適于哺乳動(dòng)物給藥的形式，其中所述成像部分具有放射性。
20.權(quán)利要求19的放射性藥用組合物，其中所述成像部分包含放射性金屬離子。
21.權(quán)利要求19的放射性藥用組合物，其中所述成像部分包括發(fā)射正電子的放射性非金屬或γ發(fā)射型放射性鹵素。
22.權(quán)利要求1定義的式(I)的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑和配體的綴合物，其中所述配體能夠和放射性或順磁性金屬離子形成金屬絡(luò)合物。
23.權(quán)利要求20的綴合物，具有式IIb 其中{抑制劑}、A、n和Xa的定義如權(quán)利要求6所示。
24.權(quán)利要求22-23的綴合物，其中所述基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑具有權(quán)利要求14-17的式IV或V。
25.權(quán)利要求22-24的綴合物，其中所述配體是螯合劑。
26.權(quán)利要求25的綴合物，其中所述螯合劑具有二胺二肟、N2S2或N3S供體組。
27.用于制備權(quán)利要求20的放射性藥用組合物的試劑盒，其包含權(quán)利要求22-26的綴合物。
28.權(quán)利要求30的試劑盒，其中所述放射性金屬離子是99mTc，和試劑盒進(jìn)一步包含生物相容性還原劑。
29.用于制備權(quán)利要求21的放射性藥用組合物的試劑盒，其包含前體，所述前體是權(quán)利要求1-7的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的非放射性衍生物，其中所述非放射性衍生物能夠和發(fā)射正電子的放射性非金屬或γ發(fā)射型放射性鹵素的源發(fā)生反應(yīng)以得到所需的放射性藥物。
30.權(quán)利要求29的試劑盒，其中所述前體處于無(wú)菌、無(wú)熱原形式。
31.權(quán)利要求29或30的試劑盒，其中所述發(fā)射正電子的放射性非金屬或γ發(fā)射型放射性鹵素的源選自(i)鹵化物離子或F+或I+；或者(ii)烷基化試劑，選自烷基鹵或氟烷基鹵、甲苯磺酸酯、三氟甲烷磺酸酯或甲磺酸酯。
32.權(quán)利要求29-31的試劑盒，其中所述非放射性衍生物選自(i)有機(jī)金屬衍生物，比如三烷基錫烷或者三烷基硅烷；(ii)含有用于親核取代的烷基鹵、甲苯磺酸烷基酯或甲磺酸烷基酯的衍生物；(iii)含有朝著親電取代或親核取代方向活化的芳環(huán)的衍生物；(iv)含有易進(jìn)行烷基化的官能團(tuán)的衍生物；(v)使含硫醇的化合物發(fā)生烷基化以得到含硫醚產(chǎn)物的衍生物。
33.權(quán)利要求29-32的試劑盒，其中所述前體連接到固相上。
34.權(quán)利要求1-17的成像劑在用于動(dòng)脈粥樣硬化的診斷成像中的用途。
35.權(quán)利要求1-17的成像劑在用于不穩(wěn)定性斑塊的診斷成像中的用途。
36.權(quán)利要求1-17的成像劑在用于動(dòng)脈粥樣硬化的血管內(nèi)檢測(cè)中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了成像劑，它含有用成像部分標(biāo)記的、特異類(lèi)型的磺酰胺類(lèi)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(MMPi)，用作哺乳動(dòng)物體體內(nèi)成像和診斷的診斷成像劑。
文檔編號(hào)A61K51/00GK1901894SQ200480040362
公開(kāi)日2007年1月24日 申請(qǐng)日期2004年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月14日
發(fā)明者A·庫(kù)伯特森, M·索巴肯, E·布格特 申請(qǐng)人:通用電氣健康護(hù)理有限公司