專(zhuān)利名稱(chēng)：治療白癜風(fēng)的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及皮膚病學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及可用于化妝品領(lǐng)域以及人類(lèi)藥物領(lǐng)域的組合物。它對(duì)白癜風(fēng)引起的損傷有效。
背景技術(shù)：
黑素生成是一種過(guò)程，經(jīng)由該過(guò)程，制造皮膚色素的細(xì)胞(melanocites)的再生以及該細(xì)胞合成的黑色素顆粒的量都增加了。
諸如白癜風(fēng)的疾病(Prcic S.Duran V.等人，2002)，(PanuncioA1.等人，2003)，(Gauthier Y.等人，2003)，在患者處于嚴(yán)重的壓力之下以后，其會(huì)發(fā)生皮膚黑色素產(chǎn)生細(xì)胞的進(jìn)行性丟失(Martin-Garcia RF.等人，2003)，(Hadad A1.等人，2003)，(BrigantiS.等人，2003)。
該疾病影響了大約1％的世界人口，它以主要位于臉部和四肢的白斑的出現(xiàn)為特征，而不論年齡、性別或地理區(qū)域。
從本領(lǐng)域的知識(shí)水平可以知道，刺激黑素生成過(guò)程的某些化學(xué)物質(zhì)可用于該疾病的治療。其中有被稱(chēng)作補(bǔ)骨脂素的物質(zhì)(Kreuter A.等人，2001)，(Handa S.等人，2001)，(Hofer A.等人，2001)，(KwokYK.等人，2002)，它是一種埃及植物(Ammi-Majus)的合成衍生物。然而補(bǔ)骨脂素避免不了毒副作用，局部給藥后能夠引起皮炎和皮膚壞死。除此之外，大多數(shù)病例停止用藥后它還具有緩慢的可逆效應(yīng)。
另一類(lèi)似于本發(fā)明的技術(shù)解決方案是專(zhuān)利FR8220746中所提及的。在該專(zhuān)利中，50％乙醇提取物從紫河車(chē)中提取，紫河車(chē)是在無(wú)菌條件下從分娩后的健康孕婦那里收集的。
從本領(lǐng)域的知識(shí)水平也可以獲知，Melagenina Plus，專(zhuān)利第WO00/06180號(hào)“刺激皮膚黑色素合成的組合物、獲取方法和應(yīng)用”，它是一種源于紫河車(chē)的含氯化鈣的50％乙醇提取物，它是迄今為止所有治療當(dāng)中最有效且無(wú)害的(Miyares Cao.Carlos，1997)。
使用Melagenina plus的治療是局部的，一日一次且不能日光照射。其有效成分是一種α脂蛋白，它獲得自人胎盤(pán)絨毛葉，通過(guò)用有機(jī)溶劑處理人胎盤(pán)絨毛葉，隨后再溶解于乙醇和氯化鈣溶液中而獲得的。
L-脯氨酸不是一種普通的氨基酸，因?yàn)橛捎谒腘H基團(tuán)受臨近碳原子的影響，它的結(jié)構(gòu)被看作是一種亞氨基酸。因此，它被看作是分子量為115.1的α-氨基酸。
迄今為止，本領(lǐng)域中還沒(méi)有關(guān)于脯氨酸的使用與黑素細(xì)胞產(chǎn)生增加之間有關(guān)聯(lián)的報(bào)道，或與引起白癜風(fēng)患者的皮膚再著色之間有關(guān)聯(lián)的報(bào)導(dǎo)。
發(fā)明描述L-脯氨酸是本發(fā)明主題組合物的有效成分，它刺激皮膚黑色素的合成和黑素細(xì)胞的再生，而不具有進(jìn)行的毒理學(xué)和臨床試驗(yàn)所證明的嚴(yán)重的副作用。
本發(fā)明令人驚奇地證明了L-脯氨酸與上述本領(lǐng)域已經(jīng)存在的產(chǎn)品相比在黑素生成過(guò)程中具有更優(yōu)秀的效果。如藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)所證明的，該產(chǎn)品刺激皮膚黑色素的合成和黑素細(xì)胞的再生。如毒理學(xué)、畸形學(xué)和臨床試驗(yàn)所證明的，沒(méi)有報(bào)道有嚴(yán)重的副作用。易于獲得和應(yīng)用，該產(chǎn)品的再著色效果開(kāi)始迅速(治療的15-20天)，一旦終止使用該產(chǎn)品，它也是不可逆的。再著色以后，被治療皮膚的顏色與正常皮膚區(qū)域的顏色是完全相同的，它不隨時(shí)間而增加它的著色強(qiáng)度。
根據(jù)用本發(fā)明組合物進(jìn)行的臨床試驗(yàn)，已經(jīng)證明脯氨酸對(duì)于治療白癜風(fēng)具有鼓舞人心的結(jié)果，在所有被治療的患者中，它的應(yīng)用已經(jīng)顯示了十分顯著的效力。該產(chǎn)品在治療該疾病時(shí)是通過(guò)口服途徑給藥的，一周只需3次，這在以前是達(dá)不到的。
獲得本發(fā)明主題組合物的方法是通過(guò)使用0.5-2mg/mL濃度范圍的試劑級(jí)L-脯氨酸(Sigma)溶液來(lái)進(jìn)行的。為了該目的，使用70°-90°乙醇，在22-28℃下保存在120mL棕色玻璃瓶中。
實(shí)施例1測(cè)定80％乙醇水溶液和1.5mg/mL L-脯氨酸的黑素生成活性，與Melagenina Plus對(duì)CENPALAB提供的18-22g的C57BL6品系雄性黑鼠耳表皮基底層的黑素細(xì)胞的作用相比。
各產(chǎn)品試驗(yàn)重復(fù)三次。
該小鼠耳表皮的組織化學(xué)分析證明該組織中存在黑素細(xì)胞計(jì)數(shù)的改變(Nordlund等人，1981)。由5只動(dòng)物構(gòu)成的組各自進(jìn)行下列試驗(yàn)。待試驗(yàn)的樣品是A-對(duì)照80°乙醇B-Melagenina plusC-L-脯氨酸乙醇水溶液對(duì)小鼠局部施用進(jìn)行研究。
在Bioterio中適應(yīng)新環(huán)境10天的動(dòng)物的平均體重是20.15g。一旦5次施用結(jié)束，在最后一次施用后的72小時(shí)內(nèi)通過(guò)折斷頸椎殺死(處死)動(dòng)物。
處死以后，兩只耳朵都用去毛霜去毛，去毛霜于涂敷10分鐘后去除，然后用大量自來(lái)水沖洗耳朵。獲得各只耳表皮并將它在L-多巴中進(jìn)行培育組織化學(xué)方法的第一步包括，用手從軟骨剝離皮膚，然后在室溫下將各只耳的皮膚放入1M氯化鈣溶液1-2小時(shí)，這可以幫助真皮-表皮的分離。一旦這個(gè)目的達(dá)到，用蒸餾水洗滌表皮10分鐘，開(kāi)始下列操作將表皮在85°乙醇中浸漬20分鐘。
用蒸餾水洗滌。
在37℃下將它放入溶于磷酸鹽緩沖液的L-多巴溶液(1mg/mL)中。更新該溶液，使表皮保留在其中12-15小時(shí)。然后用大量自來(lái)水沖洗，從組織去除過(guò)量的多巴。
用蒸餾水再洗滌一次。
將它在10％中性甲醛溶液中固定20分鐘。
用蒸餾水再洗滌一次。
At the end it is montada in a simipermanente montagesolution選擇耳朵的五個(gè)不同部位來(lái)測(cè)定黑素細(xì)胞的數(shù)量/mm2。選擇較多黑素細(xì)胞數(shù)量的部位，使用專(zhuān)門(mén)用于細(xì)胞計(jì)數(shù)的DIGIPAT程序。測(cè)定各只動(dòng)物的黑素細(xì)胞的數(shù)量/mm2，獲得了10個(gè)值，因此，每組獲得了50個(gè)值。
進(jìn)行分析以確定L-脯氨酸的黑素生成作用，與Melagenina Plus相比。如

圖1所示，已經(jīng)證明了它相對(duì)于Melagenina Plus對(duì)黑鼠耳黑素細(xì)胞具有十分顯著的較高的黑素生成作用。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)局部施用乙醇水溶液時(shí)，氨基酸L-脯氨酸刺激了黑素細(xì)胞的再生和皮膚黑色素的合成。因此，與Melagenina Plus和乙醇(80°)相比，獲得了數(shù)量更高的值。
實(shí)施例2在自愿的原則下選擇21名白癜風(fēng)患者進(jìn)行人類(lèi)臨床試驗(yàn)。所有人都來(lái)自servicio clinico nacional del centro，如下分組性別女性10男性11種族白人16黑人4混血兒1年齡小于15歲4大于15歲17
脫色素百分率低于10％14介于10-20％3介于20-40％4需要注意的是，所選擇的所有患者都有Melagenina Plus治療-耐藥至少一年。
治療包括施用L-脯氨酸的80％乙醇水溶液，濃度1.5mg/mL，用手指在脫色部位揉搓，一周3次(周一、周三和周五)。
通過(guò)適當(dāng)相應(yīng)的皮膚和眼睛刺激來(lái)證明用于試驗(yàn)的產(chǎn)品的無(wú)害性。
在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)準(zhǔn)備各個(gè)患者的臨床記錄，拍攝脫色部位的數(shù)字圖像，標(biāo)明施用L-脯氨酸乙醇水溶液的部位。
一個(gè)月以后，把患者叫來(lái)檢查治療效果。在用被調(diào)查產(chǎn)品治療的3個(gè)月和6個(gè)月重復(fù)此項(xiàng)工作。
在每次指定的點(diǎn)確定獲得的再著色效果，如下評(píng)價(jià)顯效身體褪色的％減少在損傷部位內(nèi)部或邊緣出現(xiàn)雀斑樣的色素?fù)p傷面積減少中等損傷部位的顏色渾濁化程度沒(méi)有消失或減少不好沒(méi)有改變?cè)俅闻臄z案例的被治療區(qū)域的最終數(shù)字圖像，其中發(fā)生了再著色的顯著的可評(píng)估的改變。
這是6個(gè)月的臨床試驗(yàn)。
臨床試驗(yàn)結(jié)果下表顯示了獲得的結(jié)果以及圖像(圖2-13)。
表1再著色的結(jié)果
如上表所示，22名患者中僅有2名對(duì)治療沒(méi)有顯示應(yīng)答，他們中的18名顯示出了顯著到中度應(yīng)答，只有1名患者中途退出了，因此無(wú)法評(píng)價(jià)他的結(jié)果。另一方面，應(yīng)當(dāng)注意的是，任何病例都沒(méi)有報(bào)道損傷增加或出現(xiàn)了局部或全身副作用。獲得的結(jié)果支持(證明)治療的有效性以及L-脯氨酸乙醇水溶液的無(wú)害性。大多數(shù)患者一周僅使用3次就顯示了肯定應(yīng)答的事實(shí)表明它相對(duì)于Melagenina Plus的優(yōu)越性，即使認(rèn)為當(dāng)每天使用時(shí)，他們中的所有人已經(jīng)對(duì)該產(chǎn)品產(chǎn)生了抵抗力。
該化合物相對(duì)于Melagenina Plus的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是它的合成來(lái)源，它避免了對(duì)獲得Melagenina Plus中所用的胎盤(pán)通常要進(jìn)行的困難和昂貴的試驗(yàn)，防止了污染。
實(shí)施例3在制備后(新鮮的)以及加工后第12天和24天進(jìn)行L-脯氨酸乙醇水溶液的分光光度計(jì)測(cè)定和氨基酸分析，以進(jìn)行穩(wěn)定性研究。根據(jù)以前的技術(shù)，證明制備溶液后2年，L-脯氨酸仍舊保持穩(wěn)定(表2、3)。
表2分光光度計(jì)測(cè)量的穩(wěn)定性研究結(jié)果(por fotometria)
權(quán)利要求
1.治療白癜風(fēng)的組合物，其特征在于包含在乙醇載體中的L-脯氨酸作為有效成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其特征在于乙醇賦形劑含0.52mg/mL比例的L-脯氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其特征在于70°-90°的乙醇作為乙醇載體。
4.L-脯氨酸用于治療白癜風(fēng)的用途。
5.治療白癜風(fēng)的方法，其特征在于包含L-脯氨酸的組合物是乙醇賦形劑，用于局部施用，用手指在受累區(qū)域揉搓，一周3次。
全文摘要
本發(fā)明涉及皮膚病學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及可用于化妝品和藥物領(lǐng)域的組合物，用于治療由白癜風(fēng)引起的損傷。本發(fā)明的組合物包含作為活性成分的氨基酸L－脯氨酸，它刺激皮膚黑色素的合成以及黑素細(xì)胞的再生，并且如進(jìn)行的毒理學(xué)和臨床研究所證實(shí)的，L－脯氨酸不引起嚴(yán)重的副作用。本發(fā)明的技術(shù)目的是獲得有效治療白癜風(fēng)、而不具有毒性或不會(huì)使疾病復(fù)發(fā)的合成產(chǎn)品。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1845732SQ200480025492
公開(kāi)日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2004年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月5日
發(fā)明者C·M·米亞雷斯考, I·霍蘭斯巴爾卡, R·皮米恩塔洛佩斯 申請(qǐng)人:胎盤(pán)組織治療中心