專利名稱：一種中國冬蟲夏草真菌的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中國冬蟲夏草(Ceordyceps sinensis sp.)無性型菌(Hirsutella sp.)的工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
中國專利ZL97110448.4公開了一種“中國冬蟲夏草真菌的發(fā)酵生產(chǎn)方法”，該方法是將菌種植入液體培養(yǎng)基置于搖床上，溫度12-20℃，培養(yǎng)8天，然后植入一級種子罐，溫度12-20℃，發(fā)酵6-8天，然后以培養(yǎng)基量的10倍擴(kuò)大，逐級發(fā)酵，直至達(dá)到所需要的量，出罐過濾而成；發(fā)酵過程均在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行，培養(yǎng)基為碳原0.5-5％，氮原0.2-5％，微量元素、維生素少許，其余為水份。該方法實(shí)現(xiàn)了中國冬蟲夏草真菌的規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)速度快。用該方法生產(chǎn)的產(chǎn)品具有治療各種虛癥以及器官移植手術(shù)后的抗排異作用，對人體內(nèi)分泌有雙向調(diào)節(jié)作用，與天然冬蟲夏草的作用極為接近。
然而，隨著生產(chǎn)的不斷延續(xù)，真菌的一代代的繁殖，產(chǎn)品也在不斷地發(fā)生著變異第一，種上的變異。由于在冬蟲夏草上除了中國冬蟲夏草真菌外還伴生著數(shù)十種不同的真菌，只要在培養(yǎng)基、營養(yǎng)、溫度、消毒、分菌材料等條件上，稍不適合就會生長出完全不同的其它真菌種，工業(yè)生產(chǎn)不可能完全模擬冬蟲夏草生產(chǎn)的自然條件。所以，隨著生產(chǎn)的不斷延續(xù)，菌種一代代轉(zhuǎn)接，選擇生長較快的擴(kuò)大生產(chǎn)，傳代越多，時(shí)間越長，蟲草原有的種性就會慢慢地發(fā)生變異，產(chǎn)品的品質(zhì)會越來越差。第二，即使“種”沒有變，但其固有菌種特性也會逐漸變異。由于冬蟲夏草原本是生長在高海拔地區(qū)(海拔3000米-5200米)，氣溫很低，其主產(chǎn)區(qū)7月份5cm的地溫在10℃以下，一年有8個(gè)月是凍冰期。而工業(yè)化生產(chǎn)，為了使冬蟲夏草真菌長得快、產(chǎn)量高，通常是在16-18℃的培養(yǎng)液中培養(yǎng)生產(chǎn)，使得其生長溫度偏離了其天然的生長溫度，而且為了降低成本，培養(yǎng)液通常也是選用真菌菌絲長得好的培養(yǎng)液，而這種培養(yǎng)液的成份往往偏離冬蟲夏草真菌寄主蝙蝠蛾的成分較遠(yuǎn)，造成生產(chǎn)用菌長期在不符合其原有生長發(fā)育需要的條件下培養(yǎng)，月月如此，代代相傳，固有的菌種特性便逐漸變異，原有的藥用作用就逐漸降低，以致喪失特有的藥理作用。
在提取產(chǎn)品(菌絲)時(shí)，一般采用離心機(jī)絹紗袋過濾法，由于絹紗袋孔徑大小不均勻，離心機(jī)高速轉(zhuǎn)動導(dǎo)致部分菌絲流失，這是其一。其二，被過濾的菌絲緊貼在過濾袋上形成一層厚而堅(jiān)實(shí)的菌片層，須要用手工撕成薄片，手工操作撕的菌絲片厚薄不均勻，導(dǎo)致烘烤干燥時(shí)受熱和氧化不一致，影響產(chǎn)品的成份和色澤。其三，手工操作增加了產(chǎn)品的染菌機(jī)會。
發(fā)明的內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服上述不足，準(zhǔn)備提供一種能不斷修正和檢驗(yàn)冬蟲夏草真菌的真實(shí)品種不變和保持固有菌種特性，繼而使得產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，最終使產(chǎn)品的藥效長期保持穩(wěn)定的生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的第二目的是要提供一種改進(jìn)了的能提高產(chǎn)量，改善產(chǎn)品質(zhì)量的菌絲提取和干燥方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是其特點(diǎn)是每年到產(chǎn)區(qū)分離新菌種，并利用該菌種曾在滅菌培養(yǎng)基上完成完整發(fā)育周期的特點(diǎn)，18℃培養(yǎng)，獲得新分離菌種后，接入250毫升以上的三角瓶中，在10℃以下培養(yǎng)，以其能否生長出子座，作為檢驗(yàn)菌種是否正確，能否用于生產(chǎn)的手段。已投產(chǎn)使用的菌種純化和繁殖10代以上的，必須進(jìn)行高營養(yǎng)低溫傳代的復(fù)壯培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為10℃以下的低溫條件下繁殖5代以上，培養(yǎng)后生長出分生孢子和孢子梗與產(chǎn)區(qū)新分菌(能在三角瓶中形成子座并在菌落中生長)的分生孢子相比較要一樣，才能繼續(xù)用于生產(chǎn)。進(jìn)行上述培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為(在水+牛肉湯+牛奶為1000克中)牛肉湯(1∶2)300-600克，水解乳蛋白5-10克，酵母粉1克，葡萄糖20-40克，牛奶100-200克，核酸0.5克，硫酸鎂0.2克，磷酸氫二鉀1克，復(fù)合維生素1克(VB1、VB2各1克+(硫胺素0.1+核黃素0.1+水100克))，瓊脂粉15克，水400-500克，PH7.2。將經(jīng)上述程序處理后的菌種植入液體培養(yǎng)，并置于搖床上，溫度12-18℃，培養(yǎng)8天，然后植入一級種子罐，溫度12-18℃，發(fā)酵6-8天，然后以培養(yǎng)基體積的10倍擴(kuò)大，逐級發(fā)酵，直至第四級進(jìn)入20-30噸的生產(chǎn)罐，出罐過濾而成。發(fā)酵過程均在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行。液體培養(yǎng)基為重量配比碳原0.5-5％，氮原0.5-2％，微量元素、維生素少許，其余為水份。
本發(fā)明的另一特點(diǎn)是在所述的發(fā)酵步驟完成后，將液體培養(yǎng)基(含菌絲)打入高位貯存罐中，按工作流量慢慢輸入轉(zhuǎn)鼓真空干燥機(jī)中將菌絲均勻地吸附在底部，由傳送帶徐徐通過15-20米長的烤干隧道，到出口時(shí)已失去70-80％的水分，用切片機(jī)切成約1公分長寬的菌片，再進(jìn)行沸騰干燥，粉碎過篩而成產(chǎn)品。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及效果是首先，由于采用了每年到產(chǎn)區(qū)采集新菌，并對已用菌進(jìn)行“復(fù)壯”的方法，并且培養(yǎng)其曾完成整個(gè)生長發(fā)育周期的創(chuàng)舉，觀察其發(fā)育特征能否生長出子座的辦法，來檢驗(yàn)菌種真?zhèn)渭盁o性孢子特征來鑒定固有的遺傳特性是否喪失，所以能不斷地修正冬蟲夏草真菌的品種真?zhèn)魏汀胺N性”特征，使產(chǎn)品質(zhì)量保持穩(wěn)定，使產(chǎn)品保持了穩(wěn)定藥用效果。其次，實(shí)踐檢驗(yàn)證明，用本發(fā)明的方法制造的產(chǎn)品始終保持著與天然冬蟲夏草基本一致的作用，在治療各種虛癥，以及人體器官移植術(shù)后抗排異(特別是腎移植手術(shù))后，該產(chǎn)品始終保持著與天然冬蟲夏草一致的抗排異和解除服用環(huán)孢霉素等抗排異藥引起毒害作用。而該產(chǎn)品價(jià)格卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于天然冬蟲夏草，很受歡迎。最后，由于本發(fā)明采用了轉(zhuǎn)鼓真空干燥法提取、干燥產(chǎn)品，所以菌絲收率提高約5-20％。質(zhì)量更有較大的提高，顏色由原來的灰色和深褐色變?yōu)楝F(xiàn)在的棕黃色或深棕色，與天然蟲草外表顏色一致，說明其氧化過程均勻，產(chǎn)品的品質(zhì)更加接近天然冬蟲夏草。
具體實(shí)施例方式
每年到產(chǎn)區(qū)分離新菌種，將該菌種進(jìn)行有性和無性繁殖型發(fā)育周期的培養(yǎng)(即生長子座和分生孢子)，即18℃以下培養(yǎng)，獲得新分菌后，接入500毫升三角瓶中，10℃以下培養(yǎng)，能生長出子座的菌種，證明是蟲草菌，否則淘汰。已投產(chǎn)使用的菌種，純化和繁殖10代以上的，必須進(jìn)行低溫和高營養(yǎng)固體培養(yǎng)基“復(fù)壯”，在10℃以下的低溫條件下繁殖5代以上，在菌落中，生長出來的分生孢子和孢子梗要與在產(chǎn)區(qū)新分離的菌種，在三角瓶中生長了“子座”，同時(shí)在菌落中生長的分生孢子相比較要一樣，，證明沒有變異或變異不嚴(yán)重，仍可以作為生產(chǎn)用菌。
進(jìn)行上述培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為(在水+牛肉湯+牛奶為1000克中)牛肉湯300克，水解乳蛋白5克，酵母粉1克，葡萄糖40克，牛奶200克，核酸0.5克，硫酸鎂0.2克，磷酸氫二鉀1克，復(fù)合維生素1克，瓊脂粉15克，水500克，PH7.2。
將經(jīng)上述程序處理后的菌種植入液體培養(yǎng)基并置于搖床上，溫度12-18℃，培養(yǎng)8天，然后植入一級種子罐，溫度12-18℃發(fā)酵6-8天，然后以培養(yǎng)基體積的10倍擴(kuò)大，逐級發(fā)酵，直至第四級進(jìn)入20-30噸的生產(chǎn)罐，發(fā)酵過程均在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行。液體培養(yǎng)基為(重量百分比)碳原0.5-5％，氮原0.5-2％，微量元素、維生素少許，其余為水份。然后將發(fā)酵后的液體培養(yǎng)基(含菌絲)送入轉(zhuǎn)鼓真空干燥機(jī)中，菌絲便均勻沉淀在過濾器的底部，由傳送帶徐徐通過恒溫烤干的隧道移動烘干，溫度為60-80℃，菌絲受熱均勻，氧化一致，到出口處已失去70-80％的水份，然后再經(jīng)切片機(jī)切成約1公分大小的薄片，再進(jìn)入沸騰干燥器快速干燥粉碎過篩而成產(chǎn)品。
實(shí)施例2培養(yǎng)能生長子座或分生孢子的培養(yǎng)基的配方為(在水+牛肉湯+牛奶為1000克中)加牛肉湯500克，水解乳蛋白10克，酵母粉1克，葡萄糖20克，牛奶100克，核酸0.5克，硫酸鎂0.2克，磷酸氫二鉀1克，復(fù)合維生素1克，瓊脂粉15克，水400克，PH值為7.2。三角瓶用容積為250ml的三角瓶。其余步驟和條件與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例3培養(yǎng)能生長子座或分生孢子的培養(yǎng)基的配方為(在水+牛肉湯+牛奶為1000克中)加牛肉湯400克，水解乳蛋白5克，酵母粉1克，葡萄糖30克，牛奶100克，核酸0.5克，硫酸鎂0.2克，磷酸氫二鉀1克，復(fù)合維生素1克，瓊脂粉15克，水500克，PH值為7.2。其余步驟和條件與實(shí)施例1相同。
權(quán)利要求
1.一種中國冬蟲夏草真菌的生產(chǎn)方法，其特征在于每年到產(chǎn)區(qū)分離新菌種，18℃培養(yǎng)，獲得新菌種后接入三角瓶中，在10℃以下培養(yǎng)，以其能否生長出子座，作為檢驗(yàn)菌種是否正確、能否用于生產(chǎn)的手段；已投產(chǎn)使用的菌種，純化和繁殖10代以上的必須進(jìn)行復(fù)壯培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為10℃以下的低溫條件下繁殖5代以上，培養(yǎng)后生長出的分生孢子和孢子梗與產(chǎn)區(qū)能生長子座的新分菌的分生孢子相比較要一樣，才能繼續(xù)用于生產(chǎn)；進(jìn)行上述培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為(在水+牛肉湯+牛奶為1000克中)牛肉湯(1∶2)300-500克，水解乳蛋白5-10克，酵母粉1克，葡萄糖20-40克，牛奶100-200克，核酸0.5克，硫酸鎂0.2克，磷酸二氫鉀1克，復(fù)合維生素1克，瓊脂粉15克，水400-500克，PH值為7.2；將經(jīng)上述程序處理后的菌種植入液體培養(yǎng)，并置于搖床上，溫度12-18℃，培養(yǎng)8天，然后植入一極種子罐，溫度12-18℃，發(fā)酵6-8天，然后以培養(yǎng)基體積的10倍擴(kuò)大，逐級發(fā)酵，直至達(dá)到所需要的量，出罐過濾、干燥而成；發(fā)酵過程均在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行，液體培養(yǎng)基為重量百分比碳原0.5-5％，氮原0.5-2％，微量元素、維生素少許，其余為水分。
2.如權(quán)利要求1所述的一種中國冬蟲夏草真菌的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的復(fù)合維生素為維生素B1、維生素B2各1克，硫胺素0.1克，核黃素0.1克，水100克混合而成。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種中國冬蟲夏草真菌的生產(chǎn)方法，其特征在于在所述的發(fā)酵步驟完成后，將液體培養(yǎng)基打入高位貯存罐中，按工作流量慢慢輸入轉(zhuǎn)鼓真空干燥機(jī)中，菌絲被均勻地吸附在低部，由傳送帶徐徐通過15-20米長的烤干隧道，到出口時(shí)已失去70-80％的水分，再用切片機(jī)切成約1厘米長寬的菌片，再進(jìn)行沸騰干燥而成產(chǎn)品。
全文摘要
一種中國冬蟲夏草真菌的生產(chǎn)方法，其特點(diǎn)是每年到產(chǎn)區(qū)分離新菌種，18℃培養(yǎng)，獲得新菌種后接入三角瓶中，在10℃以下培養(yǎng)，以其能否生長出子座，作為檢驗(yàn)菌種是否正確、能否用于生產(chǎn)的手段；已投產(chǎn)使用的菌種，純化和繁殖10代以上的必須進(jìn)行復(fù)壯培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為10℃以下的低溫條件下繁殖5代以上，培養(yǎng)后生長出的分生孢子和孢子梗與產(chǎn)區(qū)能生長子座的新分菌的分生孢子相比較要一樣，才能繼續(xù)用于生產(chǎn)；然后進(jìn)行逐級發(fā)酵生產(chǎn)。該方法能不斷地修正本菌品種的“種性”特征，用該方法生產(chǎn)的的產(chǎn)品能保持穩(wěn)定的藥用效果和具有和天然冬蟲夏草基本一致的作用。
文檔編號A61K36/066GK1704469SQ20041003711
公開日2005年12月7日 申請日期2004年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月31日
發(fā)明者沈南英 申請人:沈南英