專利名稱：含脫乙酰殼多糖的多糖、其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型含脫乙酰殼多糖的多糖、其制備方法、以及含有該含脫乙酰殼多糖的多糖作為有效成分的藥物組合物和食品。
背景技術(shù)：
到目前為止，關(guān)于蟹、蝦等甲殼類動物的脫乙酰殼多糖(以下稱為蟹脫乙酰殼多糖)性質(zhì)、制備方法的研究已經(jīng)有很多，但關(guān)于以菇菌為代表的植物性脫乙酰殼多糖及其制備方法，則罕有研究文獻面世。
關(guān)于黑曲霉、水霉菌、放線菌等菌類所產(chǎn)生的脫乙酰殼多糖，已有一些研究報告，但由于這些菌類培養(yǎng)困難，含有未知毒性物質(zhì)的可能性很大，因此菌類所產(chǎn)生的脫乙酰殼多糖無法應(yīng)用于食品、藥物等可對人體產(chǎn)生安全性問題之處。
另一方面，已知對腎病有效的蘑菇(二孢蘑菇)(Agaricus bisporus)的親水性溶劑提取物(商品名“食用傘菌提取物”)中微量含有脫乙酰殼多糖的主要成分葡糖胺，但該微量的葡糖胺是否具有生理學(xué)意義則尚不明確。還沒有人主動嘗試從以蘑菇(二孢蘑菇)為代表的菇菌類制備含脫乙酰殼多糖的多糖。
包括日本在內(nèi)的亞洲地區(qū)，自古以來就認為香菇(Lentinus edodes)或木耳、草菇、姬菇(しめじ)、舞菇(即灰樹花(Grifola frondosa))是優(yōu)良的保健食品，得到廣泛應(yīng)用，是藥食同源的基本食材。在歐洲，從17世紀開始，蘑菇(食用傘菌)(二孢蘑菇)被廣泛食用。
所謂的蘑菇或食用傘菌，原本是所有菇菌的總稱，在狹義范圍內(nèi)是指17世紀在巴黎近郊的洞穴內(nèi)栽培的二孢蘑菇。為避免混淆，本說明書中將蘑菇或食用傘菌稱為“二孢蘑菇”，當(dāng)講到所有的食用菇菌類時，采用“菇菌”的稱呼。
世界范圍內(nèi)，二孢蘑菇的年產(chǎn)量為240-320萬噸，占全世界栽培菇的30-38％，在美國，二孢蘑菇占栽培菇的90％。追溯其歷史，植物性殼多糖作為堿不溶性高分子物質(zhì)，是法國植物學(xué)家布拉克諾(Braconnot)于1811年從蘑菇中首次提取出的。1859年，Rouget將殼多糖在氫氧化鉀濃溶液中加熱，發(fā)現(xiàn)其可溶解于有機酸，1894年，Hoppe-Seyler將該物質(zhì)命名為“脫乙酰殼多糖(Chitosan)”。
1999年-2000年，俄羅斯的研究人員從黑曲霉(Aspergillus niger)中分離出殼多糖·葡聚糖化合物。該殼多糖·葡聚糖化合物含有15-20％的葡聚糖。該殼多糖和葡聚糖通過牢固的共價鍵結(jié)合，因此只有用酶處理才可完全分離。(參照非專利文獻1和非專利文獻2)1981年，志田等人報道了香菇(Lentinus edodes)的堿(24％、5℃)不溶性葡聚糖骨架。通過甲基化分析得知葡聚糖部分的結(jié)構(gòu)是具有高度分支的β-1，6和β-1，3鍵的糖鏈。該葡聚糖與殼多糖結(jié)合，形成香菇的內(nèi)部骨架。(非專利文獻3)1994年，Hartland等人發(fā)現(xiàn)酵母(釀酒酵母Saccharomycescerevisiae)的細胞壁中，堿可溶性(1-3)β葡聚糖與殼多糖結(jié)合，形成堿不溶性的(1-3)β葡聚糖。(非專利文獻4)人們認為菇菌類的細胞壁構(gòu)成成分是α(1-3)葡聚糖和殼多糖，但在這些菌類的生長過程中，頻繁地進行著多糖類的重新構(gòu)成、重新組織。二孢蘑菇的生長周期中，α和β結(jié)構(gòu)比例是變化的。在增殖過程中β(1-4)的比例增加，在子實體等中β(1-6)的比例增加。
但是目前，含有這些殼多糖的菇的骨架成分化學(xué)穩(wěn)定性好，不溶解于水、稀酸或堿、有機溶劑中，因此幾乎未被有效地利用。其原因之一就是菇中所含殼多糖幾乎對所有的溶劑均不溶，不具生理學(xué)活性，無法期望其在保健食品、藥物中發(fā)揮有效性。
人們發(fā)現(xiàn)作為來自菇的糖類，熱水提取的香菇水溶性成分β葡聚糖具有增強免疫的作用，由此開發(fā)出免疫增強劑。另外，對二孢蘑菇進行化學(xué)處理得到可利用物質(zhì)也是最近的事，Ricom公司首次發(fā)現(xiàn)其熱水提取物具有消臭作用，開發(fā)了消臭劑商品。
其它大部分菇目前只是有云芝(カワラタケ)、靈芝、靈芝、巴西產(chǎn)的“二孢蘑菇”等或以本身的形態(tài)，或極簡單地制成熱水提取物及其凍干品作為保健食品提供。
非專利文獻1Gamayurova等.Synthesis of soluble derivatives of chitin-glucancomplex.Chemistry and Computational Simulation.ButlerovCommunicatios，1999；No.1.
非專利文獻2Shabrukoca等.Study of the nature of chitin-glucan complex.Chemistry and Computational Simulation.Butlerov Communicatios，2001；No.4.
非專利文獻3Shida，等.Structure of the alkali-insoluble skeltal glucan of Lentinusedodes.J-Biochem-Tokyo.1981；90(4)1093-1100.
非專利文獻4Hartland等.The linkage of(1-3)-beta-glucan to chitin during cellwall assembry in Saccharomyces cerevisiae.Yeast.1994；10(12)1591-1599.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供新型的含脫乙酰殼多糖的多糖。
本發(fā)明的其他目的在于提供上述含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，特別是提供由安全的菇殼多糖高效大量制備含脫乙酰殼多糖的多糖的方法，其中所述安全的菇是指以蘑菇(二孢蘑菇)、香菇為代表的被廣泛食用的菇。
本發(fā)明的另一目的在于提供上述含脫乙酰殼多糖的多糖的用途，特別提供含有該含脫乙酰殼多糖的多糖的藥物、食品。
本發(fā)明如下。
1.具有下述特性的含脫乙酰殼多糖的多糖(1)構(gòu)成糖由葡糖胺和葡萄糖構(gòu)成，其構(gòu)成摩爾比為1-5∶5-1；(2)分子量由奧氏粘度儀測定的分子量為約5萬-約40萬。由凝膠過濾色譜測定的分子量為約4萬-約20萬；(3)構(gòu)成單元主要由脫乙酰殼多糖部分和葡聚糖部分構(gòu)成；(4)鍵的種類含有β(1→4)鍵和β(1→6)鍵，但不含有β(1→3)鍵；(5)酶分解性可被殼聚糖酶分解成低聚糖，但不被纖維素酶分解；(6)蛋白質(zhì)和還原性多糖不含有蛋白質(zhì)和還原性多糖；(7)顯色反應(yīng)對于碘-淀粉反應(yīng)呈陰性；(8)物質(zhì)顏色無色(白色)；(9)溶解性溶解于5-10％質(zhì)量的乙酸、蘋果酸或抗壞血酸水溶液，但不溶解于水、乙醇、pH10以上的堿性水溶液。
2.上述1的含脫乙酰殼多糖的多糖，其中葡萄糖與葡糖胺的構(gòu)成摩爾比為1∶1。
3.上述1或2的含脫乙酰殼多糖的多糖，其中脫乙酰殼多糖含量為18-72％。
4.上述1-3中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖，其中脫乙酰殼多糖部分為葡糖胺的均聚物。
5.上述1-5中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖，其中葡聚糖部分為葡萄糖的均聚物。
6.上述1-5中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其特征在于將菇在25-50％質(zhì)量的苛性堿水溶液中進行加熱處理，然后固液分離，將所得固態(tài)部分溶解于有機酸水溶液，向其中加入醇，或加入苛性堿至pH10以上，使其產(chǎn)生沉淀，將該沉淀洗滌、干燥。
7.上述6的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其特征在于在苛性堿水溶液中進行加熱處理之前，將菇用纖維素酶或葡聚糖酶進行預(yù)處理。
8.上述6或7的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其中菇為二孢蘑菇。
9.上述1-5中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其特征在于將菇在25-50％質(zhì)量的苛性堿水溶液中進行加熱處理，然后將粘度調(diào)節(jié)為3-20mPa·s，固液分離，將所得固態(tài)部分洗滌、干燥。
10.上述9的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其中在苛性堿水溶液中進行加熱處理后，加入水或酸，將粘度調(diào)節(jié)為3-20mPa·s。
11.藥物組合物，該藥物組合物含有上述1-5中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖作為有效成分。
12.用于治療或預(yù)防生活方式病的上述10的藥物組合物。
13.食品，該食品含有上述1-5中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖作為有效成分。
本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖不含有蟹脫乙酰殼多糖中所見的雜質(zhì)蛋白質(zhì)、含硫的氨基化合物等變應(yīng)原物質(zhì)，可作為新型的功能性食品材料。以甲殼類例如蟹為起始原料的蟹脫乙酰殼多糖中有蟹特有的異味、不快的堿味，但當(dāng)以菇為原料時，本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖中含有菇所特有的香氣，完全沒有異味或不快的堿味。并且，本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖中除了葡糖胺之外，還含有50％左右的多糖類，有望存在蟹脫乙酰殼多糖中見不到的新的生理活性。
含脫乙酰殼多糖的多糖的優(yōu)勢還在于與從蝦、蟹等甲殼類中分離出的脫乙酰殼多糖不同，其構(gòu)成糖類幾乎都是由葡萄糖形成的多糖類·葡聚糖。
實施發(fā)明的最佳方式以下詳細說明本發(fā)明。
我們著眼于Ricom公司作為保健食品供應(yīng)的、來自二孢蘑菇的食用傘菌提取物成分中可溶解于有機酸但不溶解于堿的成分，對該物質(zhì)進行了分析，發(fā)現(xiàn)有與脫乙酰殼多糖非常相似性質(zhì)的多糖類存在，經(jīng)過深入研究，結(jié)果成功地從二孢蘑菇中提取到大量的脫乙酰殼多糖。由二孢蘑菇提取的脫乙酰殼多糖的基本性質(zhì)與由甲殼類提取的蟹脫乙酰殼多糖類似，但含有類似葡聚糖的多糖類，從這一點可知其成分與僅由葡糖胺構(gòu)成的單純的均聚物蟹脫乙酰殼多糖不同，是一種新物質(zhì)。
以下在本說明書中將該新物質(zhì)稱為“含脫乙酰殼多糖的多糖”。
脫乙酰殼多糖的歷史如前所述，是由“蘑菇”中發(fā)現(xiàn)的，但其后的研究則主要專注于甲殼類進行，說到脫乙酰殼多糖，也即指蟹脫乙酰殼多糖。并且由于蟹脫乙酰殼多糖是由幾乎100％的N-乙?；咸前窐?gòu)成的單純的聚合物，因此脫乙酰殼多糖也被定義為80％以上的該乙?；幻撘阴；傻奈镔|(zhì)。但是，如前所述，脫乙酰殼多糖本來的定義應(yīng)是不溶解于稀堿、可溶解于稀有機酸的多糖。根據(jù)該定義，菇的含脫乙酰殼多糖的多糖可以說絕對是脫乙酰殼多糖家族的一員。
本發(fā)明的新型含脫乙酰殼多糖的多糖可以從廣泛食用的所有的菇類中制備。含脫乙酰殼多糖的多糖在天然中微量存在，但其大部分只是作為與葡聚糖牢固結(jié)合的殼多糖存在，通過我們所開發(fā)出的方法，首次了解了它的真面目。
以下對本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法進行詳細說明。
用于制備本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖的原料只要是含有含殼多糖的多糖即可，對其沒有特別限定，但從所得含脫乙酰殼多糖的多糖不快氣味或異味少的角度考慮，優(yōu)選植物性材料，特別優(yōu)選菇。菇中優(yōu)選的是二孢蘑菇、香菇、金針菇、姬菇、舞菇、滑子菇(なめこ)等，特別優(yōu)選的是二孢蘑菇、香菇、金針菇、姬菇等。
使用菇作為原料時，可以是鮮品也可以是干燥品，通常要除去菌柄頭，水洗，完全除去泥土等附著物。如果不充分洗凈，則雜質(zhì)會殘留在最終產(chǎn)品中。根據(jù)需要將其用攪拌器或切片機粉碎或切片，然后在高濃度苛性堿水溶液、優(yōu)選在25-50％質(zhì)量的苛性堿水溶液中進行加熱處理?？列詨A優(yōu)選苛性鈉、苛性鉀。優(yōu)選相對于100質(zhì)量份原料(干燥質(zhì)量)添加40-50質(zhì)量份苛性堿水溶液，優(yōu)選在90-120℃加熱處理0.2-30小時，進一步優(yōu)選在100-110℃加熱處理1-10小時。
本發(fā)明使用濃苛性堿水溶液，因此優(yōu)選反應(yīng)容器使用瓷器或硬質(zhì)玻璃制的容器。加熱處理可在常壓下進行，也可在減壓或加壓狀態(tài)下進行，通常常壓下即足夠。
加熱處理前，可以進行纖維素酶、葡聚糖酶、蛋白酶等的酶處理或冷凍解凍處理。酶處理可在水中加入上述酶，優(yōu)選加入0.01-0.1％質(zhì)量，在25℃-40℃進行2-24小時處理。通過酶處理，細胞壁或蛋白質(zhì)被分解，容易制備含脫乙酰殼多糖的多糖。另外，冷凍后解凍，組織(細胞壁)被破壞，容易制備含脫乙酰殼多糖的多糖。特別是通過進行冷凍解凍處理、切片破碎、攪拌器粉碎等前處理，菇的纖維被拆散，酶處理(纖維素酶處理等)的效率提高。
例如，將10kg經(jīng)前處理的菇懸浮于20L純水中，加入6g-60g左右的纖維素酶，在40℃加熱2小時，在60℃加熱2小時，再提高溫度至沸騰。上述纖維素酶例如有來自黑曲霉的纖維素酶、來自芽孢桿菌屬(Bacilus)的纖維素酶(堿性纖維素酶)、來自里氏木霉(Tricoderma reesei)的纖維素酶、來自Anthrobacter的纖維素酶等。
大致冷卻后，加入苛性鈉或苛性鉀，使其終濃度為50％質(zhì)量左右。此時，溫度上升至100℃以上，保持該狀態(tài)繼續(xù)加熱約2-4小時。加熱結(jié)束后立即將反應(yīng)容器蓋上蓋子，放置冷卻過夜。蓋子是為了不使堿吸收空氣中的二氧化碳而導(dǎo)致變質(zhì)。通過該加熱處理。含有殼多糖的多糖的氨基被脫乙?；珊撘阴ざ嗵堑亩嗵?。
用不銹鋼金屬網(wǎng)(100目)舀取在堿處理液上部表面生成的含脫乙酰殼多糖的多糖層。再次潷析，回收底部生成的沉淀。殘余的堿液可再次直接用于下次的堿處理。
將所得混合物通過離心分離、過濾、潷析等方法進行固液分離。所得固態(tài)部分以含脫乙酰殼多糖的多糖為主要成分。具體的操作是將固態(tài)部分即粗制含脫乙酰殼多糖的多糖懸浮于約2-10倍量的純水中，轉(zhuǎn)移到漂白棉布等中，用純水充分洗滌，直至洗液大致呈中性。此時最重要的是要使用純水。這是因為這里所得的粗制含脫乙酰殼多糖的多糖會極高效地吸附自來水中的金屬離子等雜質(zhì)。另外，此時如果不盡快進行洗滌處理，則粘度增高，之后的處理步驟變得困難。粘性過高時，用乙醇等有機溶劑處理較有效。通過該處理，使過濾變得容易。
接著，將經(jīng)水洗的粗制含脫乙酰殼多糖的多糖溶解于有機酸水溶液。有機酸的例子有乙酸、蘋果酸、抗壞血酸等。有機酸的濃度優(yōu)選1-20％質(zhì)量，進一步優(yōu)選5-10％質(zhì)量。溶解可以在5-40℃進行0.1-48小時，通?？稍谑覝叵路胖眠^夜。含脫乙酰殼多糖的多糖是高分子，因此溶解需要足夠的時間。通過對溶解有含脫乙酰殼多糖的多糖的溶液進行離心分離、過濾、潷析等來除去不溶物。溶液的粘性高，過濾、潷析都非常需要時間，因此優(yōu)選離心分離。
向所得澄清的含脫乙酰殼多糖的多糖溶液中加入醇(例如乙醇、甲醇)、丙酮或苛性堿(例如苛性鈉)，使含脫乙酰殼多糖的多糖沉淀并回收。例如每100質(zhì)量份含脫乙酰殼多糖的多糖溶液中加入0.01-0.5質(zhì)量份苛性鈉，則含脫乙酰殼多糖的多糖發(fā)生沉淀。將其通過離心分離進行固液分離，回收純的含脫乙酰殼多糖的多糖。用乙醇沉淀后過濾比較容易，操作簡單，但需要大量的溶劑。需要含脫乙酰殼多糖的多糖溶液的至少2-3倍量的乙醇。并且用醇制備的含脫乙酰殼多糖的多糖潮解性高。另外，在將脫乙酰殼多糖用于食品、藥物、化妝品等場合時，不優(yōu)選使用丙酮、甲醇作為溶劑。
因此，優(yōu)選在通常的固液分離步驟中通過堿進行沉淀操作。反復(fù)進行本處理步驟，可以除去雜質(zhì)，但含脫乙酰殼多糖的多糖對雜質(zhì)的吸附力強，因此更需要優(yōu)選處理過程不復(fù)雜的方法。
另一方面，需大量獲得含脫乙酰殼多糖的多糖時，作為固液分離的方法，用大量濃堿液進行離心分離是很危險的操作，并且非常困難。這種情況下，優(yōu)選采用下述的“不采用離心分離的方法”。
即，充分洗滌，在切片為1-3mm厚的蘑菇、切片香菇、一切為二的金針菇、干燥品浸泡水后的二孢蘑菇等中加入堿例如苛性鈉，使終濃度為40-60％質(zhì)量，例如50％質(zhì)量。為使堿充分溶解，可根據(jù)需要加入極少量的蒸餾水。在80-120℃加熱3-30小時，例如在110℃以上加熱2小時以上，放置冷卻。根據(jù)需要，向其中加入等量以上、優(yōu)選3-4倍量的蒸餾水、或10-20％質(zhì)量的無機酸(例如鹽酸、硫酸)或有機酸(例如乙酸、抗壞血酸、乳酸)，將粘度調(diào)節(jié)為3-20mPa·s、優(yōu)選5-10mPa·s。以該狀態(tài)靜置過夜，根據(jù)需要將pH調(diào)節(jié)為9-6.5，優(yōu)選7。接著用過濾器例如不銹鋼制、漂白棉布制或粗紗制的過濾器過濾。
粘性增高，則以后的過濾處理步驟困難，因此調(diào)節(jié)蒸餾水、無機·有機酸的添加方法，使粘度不升高，這是非常重要的。因此，最好用一部分試料預(yù)先進行測試。添加無機酸或有機酸時，優(yōu)選加入后使pH為9-6.5，優(yōu)選為7。
將所得固態(tài)部分再懸浮于蒸餾水中，一邊輕輕攪拌一邊調(diào)節(jié)為pH 9-6.5、優(yōu)選總是為7。再次過濾或者潷析，加入蒸餾水，重復(fù)上述操作，直至鹽分濃度和pH充分降低。最后用粗紗過濾，加壓脫水，將固態(tài)部分冷凍干燥，制成干燥品。
由所得粗制含脫乙酰殼多糖的多糖獲得含脫乙酰殼多糖的多糖，因該過程操作量小、堿度低，因此可以使用通常的“采用離心分離的方法”。即，將粗制含脫乙酰殼多糖的多糖溶解于5-10％乙酸，充分攪拌，然后離心分離，將其上清液用堿中和，再次離心分離，將所得脫乙酰殼多糖組分·沉淀部分水洗，用漂白棉布或粗紗過濾、壓榨，減少水分，然后冷凍干燥，得到純化含脫乙酰殼多糖的多糖。
本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖中，脫乙酰殼多糖含量隨制備條件而變化，通常為5-80％質(zhì)量，特別是在15-75％質(zhì)量的范圍。
含脫乙酰殼多糖的多糖中脫乙酰殼多糖含量的測定按照以下方法進行。
準確稱量0.5g含脫乙酰殼多糖的多糖粉末，將其溶解于5％容量的乙酸中，準確配制100g。準確地稱量1g該溶液，裝入200ml容量的三角燒瓶，加入30ml去離子水，充分攪拌混合。加入2-3滴作為指示劑的0.1％甲苯胺藍溶液，用N/400聚乙烯基硫酸鉀溶液[(C2H3OSK)n、n＝1500以上]滴定。根據(jù)下式求出脫乙酰度(即脫乙酰殼多糖含量＝葡糖胺含量)。
脫乙酰度＝(X/161)/[(X/161)+(Y/203)]×100(％)X＝(1/400)×(1/1000)×f×161×vY＝0.5×(1/100)-Xv＝N/400聚乙烯基硫酸鉀溶液滴定值(ml)f＝N/400聚乙烯基硫酸鉀溶液系數(shù)系數(shù)f為1.005。
換一種寫法，即脫乙酰度＝[203X/(203X+161Y)]×100(％)X＝1.005×161×v(滴定值；ml)Y＝0.5-X根據(jù)需要，可以將純化含脫乙酰殼多糖的多糖重新溶解于上述稀有機酸、例如1-5％的乙酸、蘋果酸、抗壞血酸等中，進行堿中和沉淀處理，通過反復(fù)進行以上步驟，進一步進行純化。不過通常進行一次就可以了。將可溶性純化含脫乙酰殼多糖的多糖溶解于稀有機酸，直接進行噴霧干燥或冷凍干燥，可以制成白色粉末。該可溶性含脫乙酰殼多糖的多糖可瞬間溶解于純水中。由堿沉淀處理得到的純含脫乙酰殼多糖的多糖可以直接冷凍干燥。其不溶解于純水，因此可以在溶解于稀有機酸例如抗壞血酸或蘋果酸之后使用。難溶于鹽酸。
用含脫乙酰殼多糖的多糖制成的藥物或食品本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖具有降低血壓、尿糖值、血糖值、尿酸值、總膽固醇值、中性脂肪值等的作用。因此，本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖對于高血壓癥、糖尿病等生活方式病、成人病的檢驗數(shù)據(jù)的改善有很大效果，優(yōu)選以藥物或食品的形式使用。
以液劑的形式應(yīng)用本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖時，可以根據(jù)需要，在含脫乙酰殼多糖的多糖中混合苯甲酸鈉、對羥基苯甲酸甲酯、脫氫乙酸鈉等防腐劑，蘋果酸、抗壞血酸、檸檬酸、乙酸等溶解助劑，以及著色劑，香料，風(fēng)味劑，葡萄糖、甘露醇等甜味劑等，還可以根據(jù)需要添加蒸餾水、生理鹽水等稀釋劑，制成藥物或食品。
以含脫乙酰殼多糖的多糖為有效成分的藥物通常制成片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、栓劑等固體制劑的形態(tài)。這些藥物制劑中可以使用通常使用的填充劑、增稠劑(增量劑)、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑等稀釋劑或賦型劑來制備。
形成片劑形態(tài)時，可以廣泛使用本領(lǐng)域以往公知的作為載體的物質(zhì)，例如乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、淀粉、碳酸鈣、高嶺土、結(jié)晶纖維素等賦型劑；蒸餾水、生理鹽水、單糖漿、葡萄糖液、淀粉液、明膠溶液、羧甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等粘合劑；干燥淀粉、海藻酸鈉、瓊脂粉末、碳酸氫鈉、碳酸鈣、月桂基硫酸鈉、硬脂酸一甘油酯、淀粉、乳糖等崩解劑，蔗糖、硬脂精、可可脂、氫化油等崩解抑制劑；乙酸、抗壞血酸、蘋果酸等溶解吸收促進劑；甘油、淀粉、乳糖、高嶺土、膨潤土、膠態(tài)硅酸等吸附劑；精制滑石粉、硬脂酸鹽、聚乙二醇等潤滑劑等。片劑還可以根據(jù)需要制成糖衣片、明膠包衣片、腸溶包衣片、薄膜包衣片或雙層片劑、多層片劑。
成型為丸劑的形態(tài)時，可以廣泛使用本領(lǐng)域以往公知的作為載體的物質(zhì)，例如葡萄糖、乳糖、甘露醇、淀粉、可可脂、氫化植物油、高嶺土、滑石粉等賦型劑；阿拉伯樹膠末、明膠等崩解劑等。成型為栓劑的形態(tài)時，可以廣泛使用本領(lǐng)域以往公知的作為載體的物質(zhì)，例如可可脂、高級醇的酯類、明膠等。
對作為有效成分使用的含脫乙酰殼多糖的多糖含量并沒有特別限定，可在廣范圍內(nèi)選擇，通常在制劑中以1-90％質(zhì)量、優(yōu)選10-70％質(zhì)量含有。
對于給藥量并沒有特別限定，可根據(jù)用法、患者的年齡、性別、患病程度等條件適當(dāng)選擇，相對于1kg體重，每天可將0.1-10mg、優(yōu)選0.5-5mg的量分1-4次口服給藥。含脫乙酰殼多糖的多糖含量高，則其吸附、包合鐵、維生素，因此可能出現(xiàn)鐵、維生素缺乏癥，但如果是上述范圍的給藥量，則含脫乙酰殼多糖的多糖含量比較低，尚無需補充鐵、維生素。
對于含有本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖的食品并沒有特別限定，例如有湯、豆醬、飲料、果凍、軟糖等。這些食品中含脫乙酰殼多糖的多糖的含量優(yōu)選為0.01-5.0％質(zhì)量，更優(yōu)選0.02-1.0％質(zhì)量，最優(yōu)選0.05-0.5％質(zhì)量。
實施例以下，通過實施例更詳細地說明本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法、含脫乙酰殼多糖的多糖的生物化學(xué)性質(zhì)。
制備例1(菇殼多糖的制備)將二孢蘑菇帶有土的菌柄頭切掉，稱量440g。向其中加入900ml含有1％蘋果酸、0.1％抗壞血酸的水溶液，分兩次用攪拌器混合30秒。不時攪拌，用熱水(100℃)保溫120分鐘。上述懸浮液的溫度為70℃左右-85℃左右。接著，用2-3小時對該懸浮液進行緩慢吸濾。用刮勺將殘留在濾紙上的物質(zhì)取出，用純水將殘余物洗滌回收。得到約600ml容量的粗制殼多糖懸浮液。向其中加入600ml N-NaOH，以60℃熱水加熱20分鐘，進行吸濾。在同一濾紙上用純水、乙醇洗滌。
將殘留在濾紙上的粗制含殼多糖的多糖懸浮于1000ml純水中，將該菇含殼多糖的多糖懸浮液用N-HCl中和，以4500rpm離心分離。將沉淀部分的菇殼多糖組分懸浮于99％乙醇中，制成1000ml左右的懸浮液，然后將兩張濾紙重疊進行過濾。用約500ml乙醇洗滌，完全吸濾。純化含殼多糖的多糖組分的濕重為約53g。將其裝入鋪滿硅膠的干燥器，減壓干燥，得到5-54g純化含殼多糖的多糖。
每100g鮮二孢蘑菇的干燥、純化含殼多糖的多糖的收量為1.260g。干燥的含殼多糖的多糖的性狀為煎餅狀，可用鑷子容易地拆散、分割。
制備例2(由菇含殼多糖的多糖制備含脫乙酰殼多糖的多糖)在4.99g制備例1中制備的二孢蘑菇的干燥的純化含殼多糖的多糖中加入200ml 50％NaOH水溶液，使其懸浮。不時攪拌，在90℃加熱處理2小時。離心分離(4500rpm、15分鐘、4℃；離心分離條件以下相同)，回收固態(tài)部分。該固態(tài)部分的主要成分是含脫乙酰殼多糖的多糖。
向其中加入1000ml 10％乙酸水溶液，勻漿，在室溫下以該狀態(tài)靜置過夜，使含脫乙酰殼多糖的多糖溶解。溶液非常粘稠。再次離心分離，回收上清液組分。沉淀組分用10％乙酸水溶液重新溶解，萃取含脫乙酰殼多糖的多糖，加到上清液中。將合并的上清液調(diào)節(jié)為pH10。離心分離，在沉淀組分中加入1000ml純水，懸浮，離心分離，將該操作重復(fù)3次。第一次洗滌后pH為10，第2次洗滌后pH為7.5，第3次洗滌后最終pH約為6.5。
將沉淀轉(zhuǎn)移到濾紙上，在25℃減壓干燥40小時。
共得到1050mg葡糖胺含量為55％的含脫乙酰殼多糖的多糖。
每1g含殼多糖的多糖中，含脫乙酰殼多糖的多糖的收量為210mg。
在以下的條件下將該含脫乙酰殼多糖的多糖水解，用以下的薄層色譜條件分析該水解產(chǎn)物，檢測到葡糖胺與葡萄糖的比例大致為3∶1。未檢測出除此以外的單糖類和半乳糖胺。通過薄層色譜分析的葡糖胺量比用聚乙烯硫酸法得到的分析值高，其原因可能是在4M-HCl、100℃的水解條件下，與葡糖胺相比，葡萄糖的生成量少，并且被水解等。
含脫乙酰殼多糖的多糖的水解條件在4M-HCl中、在100℃水解3小時水解產(chǎn)物的薄層色譜條件載體Whatman 4860-820(厚度250μm)洗脫溶劑∶正丁醇/吡啶/0.1M-HCl(5∶3∶2)在室溫下洗脫約2小時顯色試劑∶二苯胺/苯胺/磷酸制備例3(由切片二孢蘑菇制備含脫乙酰殼多糖的多糖)將二孢蘑菇帶有土的菌柄頭切掉，稱量546g。將其用廚刀或食品加工器切片處理成約1mm厚度。分別向2個1000ml燒杯中裝入270g切片，分別加入270g固體NaOH。靜置約15分鐘，二孢蘑菇被堿腌漬，容積減小。將兩個燒杯的內(nèi)容物合并，用熱水加熱。一邊攪拌，一邊在90℃-95℃加熱約2小時，然后放置冷卻至室溫。
用取堿勺小心地將浮起的菇(主要成分為含脫乙酰殼多糖的多糖)舀起，用80％乙醇洗滌3次。一邊輕輕攪拌，一邊用600-800ml左右的乙醇洗滌10分鐘左右。再用1000ml純水洗滌2次，加入25ml乙酸，確認pH為中性，再加入1/10容量的乙酸，在室溫下放置過夜，使含脫乙酰殼多糖的多糖溶解。用粗紗過濾，用50％NaOH中和濾液，使含脫乙酰殼多糖的多糖沉淀。
將產(chǎn)生的沉淀離心分離，溶解于乙酸，在4℃保存2晝夜(64小時)，使含脫乙酰殼多糖的多糖溶解。對含脫乙酰殼多糖的多糖的乙酸溶液(600ml 10％乙酸)進行離心分離，回收上清液(pH4.48)。用500ml 10％乙酸(pH為2.18)再萃取沉淀組分，加入到上清液中。合并上清液，中和(pH10)，離心分離并回收生成的含脫乙酰殼多糖的多糖沉淀。將其溶解于500ml 10％乙酸，離心分離，回收上清液。再加入50％NaOH進行中和，離心分離并回收生成的沉淀。
向沉淀中加入500ml水，懸浮并離心分離，將該操作進行2次。得到褐色的沉淀。將該沉淀用干冰/丙酮冷凍，進行冷凍干燥。冷凍干燥后的收量為2702mg。含脫乙酰殼多糖的多糖中，葡糖胺的含量為19.6％，每100g鮮菇中含脫乙酰殼多糖的多糖的收量為495mg。
制備例4和5(高壓釜處理與蘋果酸的添加效果)將鮮二孢蘑菇除去菌柄頭，水洗，然后用攪拌器粉碎30秒。將其分為兩份，一份加入200ml純水，另一份加入200ml 5％蘋果酸水溶液，在120℃用高壓釜處理30分鐘，然后放置一晝夜。用紗布過濾后懸浮于純水中，配制成200ml。
分別加入200g NaOH，在高壓釜中、在120℃進行30分鐘的加熱處理。分別加入約200ml的純水，離心分離?；厥蘸撘阴ざ嗵堑亩嗵浅恋恚芙庥?0％乙酸。將離心分離該溶液所得的上清液用25％NaOH中和，將產(chǎn)生的含脫乙酰殼多糖的多糖沉淀進行離心分離。通過離心分離法將所得含脫乙酰殼多糖的多糖沉淀再次用500ml純水洗滌3次，純水洗滌3次后，pH降低至約7.5左右。
冷凍干燥，測定收量和葡糖胺的含量。收量分別為643mg和713mg，葡糖胺含量分別為71.3％和37.6％。
純水、高壓釜處理后的葡糖胺含量值最高。
制備例6(經(jīng)纖維素酶前處理的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備)本例中，以新鮮的二孢蘑菇為原料，進行纖維素酶、濃堿加熱處理，得到了可溶解于稀有機酸、不溶解于堿的含脫乙酰殼多糖的多糖。將其冷凍干燥，得到約11g粉末。以下詳細說明。
將3.2kg二孢蘑菇快速水洗，完全除去附著的泥土。接著切成1mm厚的切片。將該切片懸浮于5600ml純水中，加入12g纖維素酶(來自黑曲霉，食品級)，在40℃加熱2小時，在60℃加熱2小時，再升高溫度加熱至沸騰。
大致冷卻后，加入苛性鈉，使終濃度為50％。此時，溫度上升到110℃，保持該狀態(tài)繼續(xù)加熱約3小時。加熱結(jié)束后，立即蓋上蓋子靜置3天。接著，用不銹鋼金屬網(wǎng)(100目)舀取在堿處理液上部表面生成的含脫乙酰殼多糖的多糖層。再次潷析，回收底部生成的含脫乙酰殼多糖的多糖沉淀。
將15g所得粗制含脫乙酰殼多糖的多糖懸浮于約300倍量的純水中，轉(zhuǎn)移至漂白棉布上，用純水充分洗滌，直至洗液大致呈中性。用1-2小時將洗滌的粗制含脫乙酰殼多糖的多糖緩慢溶解于10％乙酸。通過離心分離，從溶解有含脫乙酰殼多糖的多糖的溶液中除去不溶物。向3500ml所得澄清的含脫乙酰殼多糖的多糖溶液中加入約500ml 10N-NaOH，使含脫乙酰殼多糖的多糖沉淀并回收。用3L純水洗滌沉淀，離心分離。將所得純化含脫乙酰殼多糖的多糖冷凍干燥，得到10.8g灰白色粉末。
表1表示含脫乙酰殼多糖的多糖制備例2-6的結(jié)果。
表1

(注1)如后所述，可以認為對于含脫乙酰殼多糖的多糖，該葡糖胺含量(％)的測定值反映了脫乙酰殼多糖的含量。
制備例7(不采用離心分離的“粗制含脫乙酰殼多糖的多糖”的制備方法)充分洗滌，將換算為鮮品各為120kg的1-3mm厚切片蘑菇、切片香菇、一切為二的金針菇、干燥品浸泡水后的二孢蘑菇等混合，向其中加入約500kg的NaOH，使終濃度為50％質(zhì)量。為使NaOH充分溶解，加入了100kg的蒸餾水。在90-110℃加熱2小時以上，放置冷卻過夜。向其中加入5倍量的20％質(zhì)量檸檬酸，以該狀態(tài)靜置過夜。pH為8.0。第二天，用粗紗制的過濾器過濾。
將所得固態(tài)部分再懸浮于1000L蒸餾水中，一邊輕輕攪拌一邊調(diào)節(jié)pH總為7。再次過濾，加入蒸餾水，重復(fù)3次上述操作，直至鹽分濃度和pH充分降低。最后用粗紗過濾，加壓脫水，將固態(tài)部分冷凍干燥，得到約5.6kg的干燥品。按480kg原料計算，粗制含脫乙酰殼多糖的多糖的回收率為1.2％。
將5.6kg粗制含脫乙酰殼多糖的多糖溶解于100L 10％質(zhì)量的乙酸中，充分攪拌，然后離心分離，將該上清液用苛性鈉中和，離心分離，將所得脫乙酰殼多糖組分·沉淀部分水洗，用粗紗過濾、壓榨，減少水分，然后冷凍干燥，得到1.2kg含脫乙酰殼多糖的多糖。
含脫乙酰殼多糖的多糖相對于原材料的回收率為0.25％，粗制含脫乙酰殼多糖的多糖中含有20％以上的含脫乙酰殼多糖的多糖。
制備例8制備例7中，在堿加熱處理后，加入2000L 20％質(zhì)量的乳酸，以此代替5倍量的20％質(zhì)量的檸檬酸，以該狀態(tài)靜置過夜，除此之外進行同樣的操作。得到了同樣的結(jié)果。
制備例9制備例7中，在堿加熱處理后，加入2000L 20％質(zhì)量乙酸，以此代替5倍量的20％質(zhì)量檸檬酸，以該狀態(tài)靜置過夜，除此之外進行同樣的操作。得到了同樣的結(jié)果。
制劑例1(含有含脫乙酰殼多糖的多糖的片劑)在10g制備例6中制備的含脫乙酰殼多糖的多糖中加入10g蘋果酸、10g抗壞血酸，溶解于1000ml的水中，冷凍干燥，制備水溶性脫乙酰殼多糖。該物質(zhì)具有瞬間溶解于純水中的特性。在10g該冷凍干燥品中加入20g甘露醇、50g乳糖、20g聚右旋糖，充分混合，加入2g蔗糖脂肪酸酯作為粘合劑，制成片劑。
該片劑具有使高血壓、糖尿病等生活方式病、成人病患者的血壓、尿糖值、血糖值、尿酸值、總膽固醇值、中性脂肪值等降低的作用。
實施例1(純化含脫乙酰殼多糖的多糖的成分分析)對于制備例6中制備的含脫乙酰殼多糖的多糖進行以下分析。
通過縮二脲法確認蛋白質(zhì)的存在，通過蒽酮-硫酸法確認還原多糖的存在，但蛋白質(zhì)和還原多糖均未檢出。
碘-淀粉反應(yīng)呈陰性，有少許脫乙酰殼多糖所特有的褐色顯色。
通過聚乙烯硫酸法和埃爾森-摩根法對含脫乙酰殼多糖的多糖中的葡糖胺含量進行定量。得到了近似的測定值。
進行了β(1→3)葡聚糖的分析，在檢出下限以下。
制備例6中，使用乙醇代替苛性鈉而沉淀出的含脫乙酰殼多糖的多糖具有很強的潮解性或吸濕性。
象制備例1那樣用攪拌器進行粉碎處理時，多糖的部分被物理性地除去而變短，脫乙酰殼多糖的量增加，而象制備例3那樣進行切片處理時，多糖的部分多，可得到更接近于自然狀態(tài)(即脫乙酰殼多糖部分的量大)的含脫乙酰殼多糖的多糖。
實施例2(市場上常見的菇類中含脫乙酰殼多糖的多糖)按照制備例2的方法對市場上所見的各種菇進行處理，得到含脫乙酰殼多糖的多糖。表2中表示了每100g新鮮菇中含脫乙酰殼多糖的多糖含量(mg)、含脫乙酰殼多糖的多糖中葡糖胺的含量(％質(zhì)量)以及含脫乙酰殼多糖的多糖的分子量。分子量的測定如下將含脫乙酰殼多糖的多糖溶解于5％乙酸中，在室溫下靜置一晝夜，用奧氏粘度儀(柴田2630-1)對所得(含脫乙酰殼多糖的多糖濃度為0.05％)物質(zhì)進行測定。用下式計算分子量。
LogM＝(log(1/C*ln(ηrel))+3.05/0.71其中，[ηrel]是由試驗結(jié)果求出的相對粘度。
表2


(注2)菇是新鮮的，含有約90％的水分。如果是干燥品則可得到其10倍量的脫乙酰殼多糖。幾乎未從舞菇、滑子菇中獲得含脫乙酰殼多糖的多糖，這是由于其殼多糖含量原本就少。由該實驗的結(jié)果可知金針菇、二孢蘑菇和香菇的原料價格適宜、采購方便，適合作為本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖制造原料。
實施例3(含脫乙酰殼多糖的多糖的成分分析)將制備例3中制備的含脫乙酰殼多糖的多糖和市售的蟹脫乙酰殼多糖在4M-HCl中、10℃加熱3小時，進行水解。將該水解產(chǎn)物用硅膠薄層色譜儀(Whatman)展開。
洗脫溶劑丁醇/丙醇/鹽酸糖類的顯色采用了苯胺試劑。
(參照Ghebrezabher，M.，Rufini，S.，Sapia，G.M.and Lato.M.1979；J.Chromatography，180，1.和Zweig.G.and Sherma，J.(eds.)1972；CRCHandbook of Chromatography，Vol.1。)使用葡萄糖、半乳糖、半乳糖胺、葡糖胺和N-乙?；咸前纷鳛閷φ?，將本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖和蟹脫乙酰殼多糖的酸水解物同時展開。
蟹脫乙酰殼多糖的酸水解物具有葡糖胺和其二聚體的斑點，含脫乙酰殼多糖的多糖的酸水解物與蟹脫乙酰殼多糖的酸水解物同樣，具有葡糖胺和其二聚體的斑點，除此之外還具有葡萄糖的斑點。包括蟹脫乙酰殼多糖的酸水解物和含脫乙酰殼多糖的多糖的酸水解物，葡糖胺二聚體的量約為葡糖胺單體量的10％。
可以確認制備例3中制備的含脫乙酰殼多糖的多糖中葡萄糖莫里施反應(yīng)中的顯色反應(yīng)比制備例2中制備的含脫乙酰殼多糖的多糖的強。結(jié)果與葡糖胺含量的數(shù)據(jù)非常一致。
由于未見水解物中存在由葡糖胺和葡萄糖形成的二糖，因此，可以明確含脫乙酰殼多糖的多糖不具有葡糖胺與葡萄糖的嵌合體結(jié)構(gòu)，或其存在量極少。另外，可以想見這樣的嵌合體結(jié)構(gòu)在生物合成過程中是極復(fù)雜的，可以推定這樣的結(jié)構(gòu)存在的可能性低。
含脫乙酰殼多糖的多糖的脫乙酰殼多糖部分是葡糖胺的均聚物，該部分決定了含脫乙酰殼多糖的多糖的物理性質(zhì)。即，含脫乙酰殼多糖的多糖中，即使該部分占多糖全部的幾個百分比，也與幾乎含有100％葡糖胺的甲殼類的脫乙酰殼多糖相同，具有可溶解于稀有機酸，不溶于堿這個用于定義脫乙酰殼多糖的性質(zhì)。這可能是由于含脫乙酰殼多糖的多糖的葡聚糖部分親水性高，脫乙酰殼多糖部分擔(dān)負著對稀有機酸的溶解性。
實施例4(含脫乙酰殼多糖的多糖的分子量和吸收光譜)制備例3和6中制備的含脫乙酰殼多糖的多糖的分子量隨測定條件變化，結(jié)果如下。
用奧氏粘度儀測定，測定進行兩次。
表3

凝膠過濾色譜中的凝膠載體采用Cellulofine GCL 2000m(生化學(xué)工業(yè)社制造、商品名)、溶劑采用10％乙酸。分子量標記采用鐵蛋白(44萬)、λ-球蛋白(16萬)、血紅蛋白(6.45萬)、卵白白蛋白(4.6萬)、細胞色素C(1.25萬)。制備例6的含脫乙酰殼多糖的多糖沒有單一的峰，分散于5萬-40萬之間，中心分子量約為15萬。蟹脫乙酰殼多糖分散于2萬-100萬之間，中心分子量為40萬。
另一方面，使用0.2M乙酸/0.1M NaCl/4M尿素作為溶劑，用奧氏粘度儀求分子量，則制備例3的含脫乙酰殼多糖的多糖為6萬-13萬，制備例6的含脫乙酰殼多糖的多糖為14萬-28萬，蟹脫乙酰殼多糖為40萬-58萬。分子量的計算采用Mark-Houwink-櫻田的公式[η]＝K·Ma計算。其中，[η]是由試驗結(jié)果求出的特性粘度，K和a的值分別采用8.93×10-4和0.71。
對制備例2的含脫乙酰殼多糖的多糖以2mg/ml(5％乙酸)的濃度進行紫外可見光吸光度測定。在236-239nm處可見小的峰。
本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖用奧氏粘度儀測定的分子量為約5萬-約40萬。
以上結(jié)果顯示本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖中的葡聚糖部分是具有復(fù)雜的分支結(jié)構(gòu)的葡萄糖的均聚物。并且由葡聚糖部分親水性高、未檢出β(1-3)葡聚糖、不被纖維素酶分解等可以推定葡聚糖部分的結(jié)構(gòu)是具有較多的β(1-6)分支、類似于糖原或支鏈淀粉的結(jié)構(gòu)。
實施例5(含脫乙酰殼多糖的多糖的口感測試)請男女各5名共10人分別試食各50mg本發(fā)明制備例2的含脫乙酰殼多糖的多糖和市售的蟹脫乙酰殼多糖。全部試食者均感到蟹脫乙酰殼多糖有令人不快的堿味，但對于本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖均回答具有良好的味道，完全沒有令人不快的味道。這表明本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖添加到食品中，幾乎無損食品味道。
實施例6(攝取含脫乙酰殼多糖的多糖對于體檢數(shù)據(jù)的改善效果)人(54歲男性)在6個月內(nèi)口服本發(fā)明制劑例1的含脫乙酰殼多糖的多糖(100mg/天)，研究各種檢驗項目的改善效果。結(jié)果(含脫乙酰殼多糖的多糖口服前后檢驗數(shù)據(jù)的變化(54歲男性))表示在表4中。
表4

通過長期(6個月)口服本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖制劑，在尿糖、血糖值、尿酸等超標項目中可見改善效果，數(shù)值回復(fù)正常。降低總膽固醇、中性脂肪，以及降低血壓的作用也很明顯。
服用本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖制劑后，在生活態(tài)度、環(huán)境、體重沒發(fā)生變化的情況下可見體檢數(shù)據(jù)的改善，這可以說本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖對于高血壓、糖尿病等生活方式病、成人病檢驗數(shù)據(jù)的改善有很大效果。
產(chǎn)業(yè)實用性通過應(yīng)用本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖制備技術(shù)，可以用迄今大量廢棄的含殼多糖的工業(yè)廢棄物、例如啤酒酵母、產(chǎn)生抗生物質(zhì)后的放線菌等微生物固態(tài)部分、菇提取物或者各種果實、植物殘渣、谷物的種皮等制造新型的、來自植物性含量的含脫乙酰殼多糖的多糖。所得植物性含脫乙酰殼多糖的多糖有望作為藥物、保健食品等功能性食品得到應(yīng)用。特別是這些啤酒、乙醇制造車間的工業(yè)廢棄物中含有大量的氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等，含脫乙酰殼多糖的多糖的純化過程繁雜，因此，比起直接將其作為含脫乙酰殼多糖的多糖原料，本發(fā)明是實際利用菇處理物，人們當(dāng)然希望不斷生產(chǎn)菇，然后制備含脫乙酰殼多糖的多糖。這可以容易地獲得純度高的植物性含脫乙酰殼多糖的多糖。
本發(fā)明的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法基本上可以應(yīng)用所有含殼多糖的谷物、植物成分，因此廣泛應(yīng)用性極高。
權(quán)利要求
1.具有下述特性的含脫乙酰殼多糖的多糖(1)構(gòu)成糖由葡糖胺和葡萄糖構(gòu)成，其構(gòu)成摩爾比為1-5∶5-1；(2)分子量由奧氏粘度儀測定的分子量為約5萬-約40萬；(3)構(gòu)成單元主要由脫乙酰殼多糖部分和葡聚糖部分構(gòu)成；(4)鍵的種類含有β(1→4)鍵和β(1→6)鍵，但不含有β(1→3)鍵；(5)酶分解性被殼聚糖酶分解成低聚糖，但不被纖維素酶分解；(6)蛋白質(zhì)和還原性多糖不含有蛋白質(zhì)和還原性多糖；(7)顯色反應(yīng)對于碘-淀粉反應(yīng)呈陰性；(8)物質(zhì)顏色無色(白色)；(9)溶解性溶解于5-10％質(zhì)量的乙酸、蘋果酸或抗壞血酸水溶液，但不溶解于水、乙醇、pH10以上的堿性水溶液。
2.權(quán)利要求1的含脫乙酰殼多糖的多糖，其中葡萄糖與葡糖胺的構(gòu)成摩爾比為1∶1。
3.權(quán)利要求1或2的含脫乙酰殼多糖的多糖，其中脫乙酰殼多糖含量為18-72％。
4.權(quán)利要求1-3中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖，其中脫乙酰殼多糖部分為葡糖胺的均聚物。
5.權(quán)利要求1-4中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖，其中葡聚糖部分為葡萄糖的均聚物。
6.權(quán)利要求1-5中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其特征在于將菇在25-50％質(zhì)量的苛性堿水溶液中進行加熱處理，然后固液分離，將所得固態(tài)部分溶解于有機酸水溶液，向其中加入醇或加入苛性堿至pH為10以上，使其產(chǎn)生沉淀，將該沉淀洗滌、干燥。
7.權(quán)利要求6的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其特征在于在進行苛性堿水溶液中的加熱處理之前，將菇用纖維素酶或葡聚糖酶進行預(yù)處理。
8.權(quán)利要求6或7的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其中菇為二孢蘑菇(Agaricus bisporus)。
9.權(quán)利要求1-5中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其特征在于將菇在25-50％質(zhì)量的苛性堿水溶液中進行加熱處理，然后將粘度調(diào)節(jié)為3-20mPa·s，固液分離，將所得固態(tài)部分洗滌、干燥。
10.權(quán)利要求9的含脫乙酰殼多糖的多糖的制備方法，其中，在苛性堿水溶液中進行加熱處理后，加入水或酸，將粘度調(diào)節(jié)為3-20mPa·s。
11.藥物組合物，該藥物組合物含有權(quán)利要求1-5中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖作為有效成分。
12.用于治療或預(yù)防生活方式病的權(quán)利要求11的藥物組合物。
13.食品，該食品含有權(quán)利要求1-5中任一項的含脫乙酰殼多糖的多糖作為有效成分。
全文摘要
本發(fā)明提供含脫乙酰殼多糖的多糖、其制備方法、含有該含脫乙酰殼多糖的多糖的藥物、食品。含脫乙酰殼多糖的多糖可如下獲得將菇在濃苛性堿水溶液中進行加熱處理，然后固液分離，將所得固態(tài)部分溶解于有機酸水溶液，向其中加入醇或苛性堿，使其生成沉淀，將該沉淀洗滌、干燥。該含脫乙酰殼多糖的多糖是葡糖胺的均聚物與葡聚糖以共價鍵結(jié)合而成的化合物，葡糖胺和葡萄糖的構(gòu)成摩爾比為1－5∶5－1，分子量約為15萬，含有β(1→4)鍵和β(1→6)鍵，但不含有β(1→3)鍵。不含有蛋白質(zhì)和還原性多糖。該含脫乙酰殼多糖的多糖對于高血壓、糖尿病等生活方式病的預(yù)防和治療有效。
文檔編號A61P3/06GK1720265SQ200380105219
公開日2006年1月11日 申請日期2003年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月8日
發(fā)明者岡崎英雄, 浜屋忠生, 栗原昭一 申請人:株式會社利根