專利名稱：一種化合物、其制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物。本發(fā)明還涉及該化合物的制備方法。本發(fā)明還涉及了該化合物在制備L型鈣電流抑制藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
自從1929年弗萊明從真菌中發(fā)現(xiàn)青霉素以來，真菌的代謝產(chǎn)物成為了藥物的豐富來源，絕大多數(shù)臨床應(yīng)用的抗生素都來源于真菌和細(xì)菌，真菌的代謝產(chǎn)物還有其他的藥用價值，如抗腫瘤，治療心血管疾病，免疫調(diào)節(jié)劑，酶抑制劑等。由于海洋環(huán)境的特殊性，海洋真菌能提供陸生真菌無法提供的代謝產(chǎn)物。國際上已從海洋真菌中發(fā)現(xiàn)了一些結(jié)構(gòu)獨(dú)特的化合物，分別具有抗菌，抗病毒，抗腫瘤和神經(jīng)心血管方面的活性。例如從Acremonium ehrysogenum產(chǎn)生的頭孢菌素，已發(fā)展為一大類半合成抗生素的先導(dǎo)，廣泛應(yīng)用于臨床，還有其他的一些例子見Kerstin Liberra的文章《Marine fungi a profile resource ofbiologically active natural products？》(Pharmazie 50(1995)，H.9583)。國際上這方面的研究從八十年代以來呈加速發(fā)展的趨勢，國內(nèi)從海洋微生物也發(fā)現(xiàn)一批新的活性物質(zhì)(Lin YC et alTetrahedron 2000，Lin YC et al Tetrahedron Letters，2000，LinYC et al J.Org.Chem.2001)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的具有藥用價值的化合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供上述該化合物的制備方法。
本發(fā)明的另一目的在于提供了上述化合物在制備L型鈣電流抑制藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下
本發(fā)明的化合物，具有以下的結(jié)構(gòu)式 本發(fā)明的化合物可以從真菌2508的發(fā)酵液中提取分離而得到，所用的的真菌2508已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC，中國，武漢大學(xué)校內(nèi))，保藏號為CCTCC NOM202029；，保藏日為2002年08月03日。制備上述化合物的方法由以下步驟組成a.真菌2508的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖0.5-1.5、酵母提取物0.05-0.15、蛋白胨0.1-0.3、瓊脂1-1.5、氯化鈉3-5、水100，制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，30-35℃培養(yǎng)5-7天；b.真菌2508的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖0.5-1.5、酵母提取物0.05-0.15、蛋白胨0.1-0.3、氯化鈉3-5、水100，將斜面中培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，于室溫25-35℃靜置1-2月，或者于200L全自動發(fā)酵罐培養(yǎng)90小時；c.將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵液過濾除去菌體；d.將發(fā)酵液加熱濃縮至原液體積的1/3-1/5，用乙酸乙酯萃取3-6次，濃縮乙酸乙酯萃取液，在硅膠柱中進(jìn)行色譜分離，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑梯度洗脫；
e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脫液，純化，即為本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的化合物對L型鈣電流有明顯的抑制作用。由于在四個類型的鈣通道中L型通道的電導(dǎo)較大，在心、腦血管疾病的治療中具有重要的意義(二氫吡啶類就選擇性地作用于L型通道)，因而上述化合物可作為在心、腦血管病的治療方面的鈣拮抗劑。


圖1為實(shí)施例3中所得化合物的晶體結(jié)構(gòu)圖。
具體實(shí)施例方式
以下的實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1化合物可以通過以下步驟制備得到a.真菌2508的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖0.5、酵母提取物0.05、蛋白胨0.1、瓊脂1、氯化鈉3、水100，制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，30℃培養(yǎng)5天；b.真菌2508的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖0.5、酵母提取物0.05、蛋白胨0.1、氯化鈉3、水100，將斜面中培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，于室溫25℃靜置1月；c.將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵液過濾除去菌體；d.將發(fā)酵液加熱濃縮至原液體積的1/3，用乙酸乙酯萃取4次，濃縮濃縮乙酸乙酯萃取液，在硅膠柱中進(jìn)行色譜分離，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑梯度洗脫；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脫液，再在同樣條件下反復(fù)色譜純化得到化合物。
實(shí)施例2
化合物可通過以下步驟制備a.真菌2508的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖1.5、酵母提取物0.15、蛋白胨0.3、瓊脂1.5、氯化鈉5、水100，制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，35℃培養(yǎng)7天b.真菌2508的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖1.5、酵母提取物0.15、蛋白胨0.3、氯化鈉5、水100，將斜面中培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，于室溫35℃靜置2月c.將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵液過濾除去菌體d.將發(fā)酵液加熱濃縮至原液體積的1/5，用乙酸乙酯萃取6次，濃縮濃縮乙酸乙酯萃取液，在硅膠柱中進(jìn)行色譜分離，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑梯度洗脫；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脫液，再在同樣條件下反復(fù)色譜純化得到化合物。
實(shí)施例3化合物可通過以下步驟制備a.真菌2508的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖1.0、酵母提取物0.1、蛋白胨0.2、瓊脂1.0、氯化鈉4、水100，制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，33℃培養(yǎng)6天；b.真菌2508的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖1.0、酵母提取物0.1、蛋白胨0.2、氯化鈉4、水100，將斜面中培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，于室溫30℃靜置1.5個月；c.將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵液過濾除去菌體；d.將發(fā)酵液加熱濃縮至原液體積的1/4，用乙酸乙酯萃取5次，濃縮濃縮乙酸乙酯萃取液，在硅膠柱中進(jìn)行色譜分離，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑梯度洗脫；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脫液，再在同樣條件下反復(fù)色譜純化得到化合物。
實(shí)施例4化合物可以通過以下步驟制備得到a.真菌2508的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖0.5、酵母提取物0.05、蛋白胨0.1、瓊脂1、氯化鈉3、水100，制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，30℃培養(yǎng)5天；b.真菌2508的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基(按重量比)葡萄糖0.5、酵母提取物0.05、蛋白胨0.1、氯化鈉3、水100、將斜面中培養(yǎng)好的菌株，于有同樣發(fā)酵培養(yǎng)基的200L全自動發(fā)酵罐培養(yǎng)90小時；c.將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵液過濾除去菌體；d.將發(fā)酵液加熱濃縮至原液體積的1/3，用乙酸乙酯萃取4次，濃縮濃縮乙酸乙酯萃取液，在硅膠柱中進(jìn)行色譜分離，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑梯度洗脫；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脫液，再在同樣條件下反復(fù)色譜純化得到化合物。
實(shí)施例5對實(shí)施例3所制得的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析試驗(yàn)，得以下試驗(yàn)數(shù)據(jù)實(shí)施例3的化合物的試驗(yàn)數(shù)據(jù)mp 160-162℃，[α]25D＝-50.6，F(xiàn)ABMS705(M+1)，IR v/cm-1(KBr)3351，2955，2929，1615，1460，1381，1340，1311，1207，1115，1076，1004，869。UV λmax226(ε15411)，273(ε2475)，元素分析(w/％，C41H52O10)C69.91，H 7.57，F(xiàn)ound.C 69.99，H 7.39。
表1化合物的NMR數(shù)據(jù)(CDCl3，TMS，ppm)碳位號 δC DEPT ΔH(mult.JHz) HMBC H-HCOSY2 107.5 C4 74.0CH2a.4.14(t，8)C-2，6，11 a.H-4b，5b.3.50 b.H-4a，55 35.2CH 2.13(m) C-4，7 H-4，6，116 47.5CH 1.87(dd，7，11) C-2，5，8，11 H-5，77 19.2CH2a.2.86(d，18) C-2，5，6，8.9 a.H-6，7bb.2.72(dd18，7)b.H-6，7a8 100.1 C9 150.2 C10 22.9CH31.48(s) C-2，611 15.9CH31.02(d，6.5)C-4，5，6 H-512 152.5 C13 106.2 C14 17.2CH23.72(s) C-9，9′，12，132′ 109.3 C4′ 74.5CH2a.4.30(t，6)C-2′，6′，11′ a.H-4′b，5′b.3.61(t，8) b.H-4′a，5′5′ 35.3CH 2.13(m) C-4′，7′ H-4′，6′，11′6′ 47.5CH 1.91(dd，7，11) C-2′，5′，8′，11′ H-5′，7′7′ 19.2CH2a.2.84(d，18) C-2′，5′，6′，8′，9′ a.H-6′，7′bb.2.60(dd，7，18) b.H-6′，7′a8′ 98.1C9′ 148.1 C10′22.3CH31.58(s) C-2′，6′
11′15.8CH31.04(d，6.5)C-4′，5′，6′ H-5′OH OH 8.40(s)用X-射線單晶衍射實(shí)驗(yàn)得到實(shí)施例3制得的化合物的晶體結(jié)構(gòu)和數(shù)據(jù)附圖1為該化合物的晶體結(jié)構(gòu)圖。
以下為所得的數(shù)據(jù)化合物的晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)精化Identification code11052mEmpirical formula C41 H52 010Formula weight 704.83Temperature293(2)KWavelength 0.71073 ACrystal system，space groupOrthorhombic，P2(1)2(1)2(1)Unit cell dimensions a＝11.225(6)A alpha＝90deg.
b＝17.437(9)A beta＝90deg.
c＝20.327(11)A gamma＝90deg.
Volume 3979(4)A^3Z，Calculated density 4，1.177Mg/m^3Absorption coefficient 0.083mm^-1F(000) 1512Crystal size 0.50×0.26×0.16mmTheta range for data collection1.54 to 27.05deg.
Limiting indices -14<＝h＜＝13，-19＜＝k＜＝22，-25＜＝l＜＝24Reflections collected/unique 23646/8603[R(int)＝0.0287]Completeness to theta＝27.05 99.0％
Absorption correctionNoneMax.and min.transmission 0.9868 and 0.9595Refinement methodFull-matrix least-squares on F^2Data/restraints/parameters 8603/0/461Goodness-of-fit on F^2 1.066Final R indices[I>2sigma(I)] R1＝0.0428，wR2＝0.1020R indices(all data) R1＝0.1009，wR2＝0.1307Absolute structure parameter -0.2(10)Extinction coefficient 0.0037(4)Largest diff.peak and hole 0.229 and-0.160 e.A^-3實(shí)施例6采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢驗(yàn)實(shí)施例3制得的化合物的大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞L型鈣電流抑制試驗(yàn)1、材料和方法體外原代培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞。采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，應(yīng)用CEZ-2300型膜片鉗放大器(Nihon kohden公司)，PCLAMP6.0軟件進(jìn)行采集和分析。記錄用玻璃電極的制作采用日本產(chǎn)垂直拉力器，分二步拉成尖端內(nèi)徑1μm，充填電極內(nèi)液后電極電阻為8～12MΩ。玻璃電極內(nèi)液(mmol/L)天冬氨酸鉀(K-asparatate)125、KCl 20、MgCl21、HEPES 5、EGTA 10，pH 7.35。按特定程序加以鉗制電壓及指令電壓。鉗制電壓-40mv，指令電壓-70～10mv，階躍10mV。
2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表2不同濃度受試物對新生大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞L型Ca電流的影響(n＝8～10)


*p＜0.001 vs給藥前結(jié)果表明本發(fā)明的化合物對L型鈣電流有明顯抑制作用。
權(quán)利要求
1.一種化合物，其特征在于該化合物具有以下的化學(xué)結(jié)構(gòu)式
2.制備權(quán)利要求1所述化合物的方法，依次由以下步驟組成a.真菌2508的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基葡萄糖0.5-1.5、酵母提取物0.05-0.15、蛋白胨0.1-0.3、瓊脂1-1.5、氯化鈉3-5、水100，以上的數(shù)值皆為重量比，以下同，制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，30-35℃培養(yǎng)5-7天；b.真菌2508的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖0.5-1.5、酵母提取物0.05-0.15、蛋白胨0.1-0.3、氯化鈉3-5、水100，將斜面中培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，于室溫25-35℃靜置1-2月，或者于200L全自動發(fā)酵罐培養(yǎng)90小時；c.將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵液過濾除去菌體；d.將發(fā)酵液加熱濃縮至原液體積的1/3-1/5，用乙酸乙酯萃取3-6次，濃縮乙酸乙酯萃取液，在硅膠柱中進(jìn)行色譜分離，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑梯度洗脫；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脫液，純化。
3.權(quán)利要求1所述的化合物在制備L型鈣電流抑制藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療心、腦血管病鈣拮抗劑藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)式的化合物。本發(fā)明還公開了該化合物的制備方法，同時公開了該化合物在制備L型鈣電流抑制藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的化合物對L型鈣電流有明顯的抑制作用，由于在四個類型的鈣通道中L型通道的電導(dǎo)較大，在心、腦血管疾病的治療中具有重要的意義，因而上述化合物可作為在心、腦血管病的治療方面的鈣拮抗劑。
文檔編號A61K31/351GK1537857SQ200310111830
公開日2004年10月20日 申請日期2003年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月20日
發(fā)明者林永成, 吳雄宇, 佘志剛, 李厚金, 劉曉紅, 羅景慧, 周世寧, 王煥章, 瞿東方, 關(guān)利平 申請人:中山大學(xué)