專利名稱：駱駝蓬種子總生物堿的制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到駱駝蓬總生物堿的提取純化方法和所獲得的產(chǎn)品的應(yīng)用，屬于藥用植物有效部位的提取方法技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
駱駝蓬為蒺藜科多年生草本植物，喜生于路旁、河岸、戈壁、荒漠等干旱地區(qū)。駱駝蓬種子為維吾爾、哈薩克、藏族習(xí)用藥材，收載于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(維吾爾藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-BW-0080-98)，中國(guó)專利公開(kāi)文獻(xiàn)CN1104507A、CN1220162A、CN1299664A多為駱駝蓬制劑及制備方法；目前關(guān)于提取分離駱駝蓬總生物堿的方法，概括有以下幾種①The alkaloidSanKen(1952)所描述的用5％的醋酸浸提種子，用10％的氯化鈉將醋酸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)辂}酸鹽然后冷熱反復(fù)處理即得。
②BritCA.1964.619365h系用乙醇滲漉回收乙醇水母液用乙醚脫脂，水沉用氨水調(diào)PH6.5加入硫酸銨，用焦炭過(guò)濾，加KI，再用含HI的焦炭處理，鹽用10％的氨水處理即得。
③李春杰(新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)1987 10(1)27-30)系用5％的鹽酸浸提，酸液用陽(yáng)離子樹(shù)脂交換，用氨水堿花樹(shù)脂，并用乙醚、氯仿或無(wú)水乙醇洗脫即得。
④利國(guó)威(中草藥1988 19(1)2-4)系用95％的乙醇回流提取，濃縮至糖漿狀，用稀鹽酸轉(zhuǎn)溶，氯仿脫脂后的酸液用氨水堿化，析出沉淀，即得
⑤張學(xué)農(nóng)(新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)1993 16(4)350-1)系用酸水與堿水交替煎煮合并溶液干燥即得。
⑥Munir等(Fitoterapia 1995 66(1)73-6)系用乙醇提取，提取液用氯化汞處理使去氫駱駝蓬堿與駱駝蓬堿以復(fù)合物沉淀下來(lái)，然后用H2S處理即得。
上述駱駝蓬提取方法中①法雖然工藝簡(jiǎn)單，但提取率不高，只是分離去氫駱駝蓬堿而丟失了其他生物堿且醋酸鹽與鹽酸鹽轉(zhuǎn)化不徹底；②法用乙醚萃取脫脂，工業(yè)化生產(chǎn)十分困難而危險(xiǎn)；③法用H型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂處理生物堿，樹(shù)脂再生及預(yù)處理復(fù)雜，后續(xù)處理中用乙醚和氯仿，對(duì)環(huán)境不友好；④法稀鹽酸轉(zhuǎn)溶時(shí)不易進(jìn)行，因?yàn)轳橊勁罘N子中含有大量粘液質(zhì)、樹(shù)脂、樹(shù)膠、脂肪油等，用稀鹽酸不能充分接觸生物堿，即使攪拌也較困難，而且酸水溶液過(guò)濾困難；⑤法酸水與堿水煎煮藥材，盡管工藝簡(jiǎn)單，但濃縮干燥十分困難，因?yàn)殡S著濃縮的進(jìn)行，溶液表面會(huì)形成厚厚的油膜狀物質(zhì)，使熱利用率降低；噴霧干燥溶液易粘壁；⑥法用重金屬和H2S處理，導(dǎo)致環(huán)境污染和人體毒害，不可取。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種低成本，高轉(zhuǎn)移率，適合于工業(yè)化生產(chǎn)的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法及獲得的產(chǎn)品，作為制備治療癌癥藥物尤其是治療人體消化系統(tǒng)腫瘤的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的這種駱駝蓬種子總生物堿的制備方法包括A、堿液浸潤(rùn)將駱駝蓬種子粉碎成粗末，用PH＞8的堿性水溶液或堿性醇溶液，以1-3倍(W/W)的量浸泡8-12小時(shí)使之溶脹；B、提取總生物堿用PH＞8的堿性醇溶液加熱回流提取3次以上；醇溶液用量為生藥的3-10倍，每次提取時(shí)間為1-2小時(shí)，合并提取液；減壓回收溶劑，濃縮至藥液比重為1.01-1.3，過(guò)濾；C、堿化游離對(duì)B步驟中流浸膏，按照生藥0.05-15％的重量比例加入石灰，60-80℃真空干燥48-96小時(shí)；水分控制在7％以下，粉碎成細(xì)末；D、回流分離將步驟C的浸膏粉，用甲酸乙脂、乙酸甲脂、乙酸乙脂、乙酸丁脂、丙酮其中的一種或幾種溶劑進(jìn)行回流提取游離總生物堿，回流2-3次，每次用量為浸膏的4-8倍，時(shí)間為1-2小時(shí)；E、用硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)趁熱進(jìn)行減壓過(guò)濾；60-80℃減壓回收溶劑，并烘干；F、轉(zhuǎn)溶精制對(duì)步驟D的浸膏加入醇溶液進(jìn)行溫浸或回流提??；用量為浸膏的2-6倍，次數(shù)為1-2次，每次1-2小時(shí)，合并上述醇溶液；再用步驟E中的介質(zhì)進(jìn)行過(guò)濾，然后減壓回收溶劑；G、水沉將步驟F的母液進(jìn)行水沉，加水量為30倍以上(重量/重量)，冷藏4小時(shí)以上，板框過(guò)濾，噴霧干燥。
所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法中用于浸潤(rùn)生藥堿性溶液適用的堿包括氨水、K2CO3、KHCO3、Na2CO3、NaHCO3、KOH、NaOH、Ca(OH)2；乙胺、二乙胺、三乙胺、N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二甲基乙酰胺，三甲基磷酰三胺。
所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法中所述醇溶液包括甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇的70-85％溶液。
所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法步驟B中還可用慢速滲漉代替回流提取，堿性醇溶液用量為生藥的20倍以上；直至無(wú)明顯的生物堿反應(yīng)為止；合并提取液。
所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法所述步驟D中優(yōu)選乙酸乙酯回流提取游離總生物堿。
所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法所述步驟E中硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)比例為1∶1。
所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法，將所述步驟F的醇溶液按照藥料比為1∶6以上的比例在飽和的β-環(huán)糊精/羥丙基β-環(huán)糊精溶液中進(jìn)行高速攪拌2小時(shí)以上，停止攪拌冷藏4小時(shí)以上，傾出上層清液，過(guò)濾即得β-環(huán)糊精/羥丙基β-環(huán)糊精包合物。
所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法獲得的去氫駱駝蓬堿達(dá)到50％以上。
所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法獲得的提取物或包合物，作為制備治療癌癥藥物的應(yīng)用，可與臨床上可接受的藥用輔料進(jìn)行配伍制備口服制劑，注射制劑。
所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法獲得的提取物或包合物，作為制備治療人體消化系統(tǒng)的腫瘤，如胃癌，食道癌、肝癌、結(jié)腸癌、直腸癌、口腔癌、舌癌、膽癌、膽管癌、胰腺癌、喉癌藥物的應(yīng)用，可以用于制備滴丸、片劑、膠曩、顆粒劑、乳劑、注射用粉針劑，混懸劑。
本發(fā)明的一個(gè)重要特點(diǎn)是在浸潤(rùn)、提取、游離過(guò)程中連續(xù)三次采用堿性物質(zhì)處理駱駝蓬種子，一方面大大提高了去氫駱駝蓬總堿的提取率，使之達(dá)到50％以上，比現(xiàn)在文獻(xiàn)報(bào)道的20-30％提高近一倍；另一方面，加入生/熟石灰后，大大加快干燥速度；同時(shí)促使生物堿徹底的游離；為駱駝蓬種子大批量的工業(yè)化提取創(chuàng)造了工藝條件。
本發(fā)明的另一個(gè)重要特點(diǎn)是用β-環(huán)糊精包合駱駝蓬提取物，以增加其溶解度，使其在后續(xù)制劑步驟中更具實(shí)用性。
本發(fā)明制備的駱駝蓬種子總生物堿中的去氫駱駝蓬堿＞50％，體外抗腫瘤研究結(jié)果表明隨著去氫駱駝蓬堿含量增高，效果顯著(見(jiàn)附件1)。急性毒性試驗(yàn)表明，駱駝蓬種子總生物堿的β-環(huán)糊精包合物(見(jiàn)附件2)和直接噴霧干燥產(chǎn)品均能達(dá)到藥用要求(見(jiàn)附件3)具體實(shí)施方式
下面結(jié)合駱駝蓬種子的生物總堿提取和制劑實(shí)例說(shuō)明本發(fā)明的具體實(shí)施例1駱駝蓬種子總生物堿的制備方法1取駱駝蓬種子40目的粉末，加二倍重生藥量的1％氨水，攪拌均勻，放置8小時(shí)，以85％的堿性醇溶液(Ph＝9)加熱回流提取三次，每次1.5小時(shí)，醇溶液加入量分別為生藥的量的6倍、4倍，4倍，合并醇提液，減壓回收乙醇，濃縮無(wú)醇味，加入5％的熟石灰(按生藥重量計(jì)算)，攪拌均勻，70℃真空干燥72小時(shí)(至水分＜15％)，粉碎，用乙酸乙脂回流提取三次，每次2小時(shí)，乙酸乙脂量為浸膏的10倍、8倍、8倍，合并乙酸乙脂提取液，用硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)(1∶1)過(guò)濾，減壓回收乙酸乙脂，真空干燥24小時(shí)，用85％的乙醇10倍量，2倍量回流提取2次(2小時(shí)、0.5小時(shí))，合并提取液，用硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)(1∶1)過(guò)濾，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，加45倍酸性水加熱溶解，冷藏過(guò)夜，用硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)(1∶1)過(guò)濾，濾液濃縮干燥即得。
以此為原料做滴丸，顆粒劑，片劑，腸溶膠囊，膠囊。制劑處方分別如下1、滴丸制劑處方總堿200mg基質(zhì)聚乙二醇(聚合度6000)，14.5g工藝原料與基質(zhì)于80℃研磨溶解，加入數(shù)滴吐溫-80，攪拌均勻，冷卻劑為二甲基硅油，從每分鐘15滴的速度，滴制而成。
其它制劑形式如表1所示
表1

實(shí)施例2駱駝蓬種子總生物堿的制備方法2取駱駝蓬種子粉碎40目的粉末，加1％的碳酸鈉乙醇溶液以二倍的生藥量浸泡攪拌均勻，放置8小時(shí)，潤(rùn)透，以85％的堿性乙醇溶液(PH＝11)加熱回流提取三次，每次1.5小時(shí)，用量分別為生藥的6倍、4倍、4倍，合并醇提液，減壓回收乙醇，濃縮無(wú)醇味，加入5％的生石灰(按生藥重量計(jì)算)，攪拌均勻，70℃真空干燥72小時(shí)(水分＜15％)，粉碎，用乙酸乙脂回流提取三次，每次2小時(shí)，用量為浸膏的10倍、8倍、8倍，合并乙酸乙脂提取液，用硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)(1∶1)過(guò)濾，減壓回收乙酸乙脂，真空干燥24小時(shí)，分別用85％的乙醇10倍量，2倍量回流提取2次，每次2小時(shí)、0.5小時(shí)，合并提取液，用硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)(1∶1)過(guò)濾，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，加6倍β-環(huán)糊精溶液，在60℃水浴中攪拌狀態(tài)下以每分鐘60滴的速度加入上述藥液，繼續(xù)攪拌2小時(shí)，冷藏4小時(shí)，過(guò)濾，真空干燥即得。
獲得的干燥物用于制備注射劑，可與注射用蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、聚乙二醇等配合，還可以加入適宜的賦形劑、助溶劑、防腐劑。
實(shí)施例3駱駝蓬浸潤(rùn)生藥使用的不同堿性溶液的影響(1)、取粉碎40目的駱駝蓬種子生藥20g，加入用Na2CO3調(diào)節(jié)pH為12的水溶液50ml浸泡過(guò)夜，過(guò)濾，得吸水率為1.9倍。
(2)、粉碎40目的駱駝蓬種子生藥20g，加入用二乙胺調(diào)節(jié)pH為9的乙醇溶液50ml浸泡過(guò)夜，過(guò)濾，得吸水率為1.8倍。
實(shí)施例4駱駝蓬回流提取步驟中pH值，乙醇濃度，用量和提取時(shí)間的影響如表2所示表2

結(jié)果分析正交試驗(yàn)結(jié)果是pH值較高，乙醇濃度也較高時(shí)效果較好。
實(shí)施例5駱駝蓬堿化游離步驟中石灰的加入量影響各取400g生藥，按上述條件進(jìn)行提取，濃縮至無(wú)醇味的提取液，分成四份分別加入Ca(OH)220g、15g、CaO25g、30g拌勻，分別于常壓下60℃干燥1.5小時(shí)，2小時(shí)，3小時(shí)，4小時(shí)，然后60℃減壓干燥7天，采用烘干法測(cè)水分，結(jié)果如表3所示表3

實(shí)施例6駱駝蓬回流分離步驟中不同溶劑的影響各取實(shí)施例4中的Ca(OH)2干燥物15g，加入苯，甲苯，乙酸乙脂，氯仿，二氯甲烷，丙酮各150ml，在三口瓶中在攪拌狀態(tài)下加熱回流提取三次，每次1.5小時(shí)，在澄清板上抽濾，減壓回收溶劑，用少量鮮新溶劑洗滌，水浴上揮干，80℃真空干燥48小時(shí)，測(cè)各溶劑的收率如表4所示表4

結(jié)果分析從收率來(lái)看，以氯仿和乙酸乙脂為好，從駱駝蓬總堿的含量來(lái)看，以乙酸乙脂和氯仿為好，但乙酸乙脂對(duì)總生物堿的提取效率與氯仿相比明顯要好許多，且對(duì)環(huán)境及人皆友好，故優(yōu)選乙酸乙脂。
實(shí)施例7駱駝蓬轉(zhuǎn)溶精制步驟中不同濃度的乙醇轉(zhuǎn)溶效果影響用10倍不同濃度的乙醇加熱回流1.5小時(shí)，2倍回流0.5小時(shí)，合并濾液，測(cè)去氫駱駝蓬堿的含量如表5所示表5

實(shí)施例8β--環(huán)糊精對(duì)總生物堿的包合溫度的和比例的影響如表6所示表6

總生物堿每份10g，加入乙醇回流溶解后，加入到β-環(huán)糊精的飽和溶液中，在相應(yīng)的溫度及配比的條件下攪拌操作2小時(shí)，冷藏4小時(shí)，過(guò)濾，用乙醇少許洗滌樣品，70℃真空干燥4小時(shí)，快速稱重.得到包合物結(jié)果如下①60℃1∶6，結(jié)果得到56g；②60℃1∶8，結(jié)果得到56.5g；③80℃1∶6，結(jié)果得到56.5g；④80℃1∶8，結(jié)果得到57g.
考慮成本因素，初步擬定為1∶6，以每分鐘60滴的速度加入物料，60℃攪拌操作2小時(shí)，冷藏4小時(shí)，過(guò)濾，用乙醇少許洗滌樣品，70℃真空干燥4小時(shí)，即得。
權(quán)利要求
1.駱駝蓬種子總生物堿的制備方法，其特征在于基本步驟包括A、堿液浸潤(rùn)將駱駝蓬種子粉碎成粗末，用PH＞8的堿性水溶液或堿性醇溶液，以1-3倍(重量/重量)的量浸泡8-12小時(shí)使之溶脹；B、提取總生物堿用PH＞8的堿性醇溶液加熱回流提取3次以上；醇溶液用量為生藥的3-10倍，每次提取時(shí)間為1-2小時(shí)，合并提取液；減壓回收溶劑，濃縮至藥液比重為1.01-1.3，過(guò)濾；C、堿化游離對(duì)B步驟中流浸膏，按照生藥0.05-15％的重量比例加入石灰，60-80℃真空干燥48-96小時(shí)；水分控制在7％以下，粉碎成細(xì)末；D、回流分離將步驟C的浸膏粉，用甲酸乙脂、乙酸甲脂、乙酸乙脂、乙酸丁脂、丙酮其中的一種或幾種溶劑進(jìn)行回流提取游離總生物堿，回流2-3次，每次用量為浸膏的4-8倍，時(shí)間為1-2小時(shí)；E、用硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)趁熱進(jìn)行減壓過(guò)濾；60-80℃減壓回收溶劑，并烘干；F、轉(zhuǎn)溶精制對(duì)步驟D的浸膏加入醇溶液進(jìn)行溫浸或回流提取；用量為浸膏的2-6倍，次數(shù)為1-2次，每次1-2小時(shí)，合并上述醇溶液；再用步驟E中的介質(zhì)進(jìn)行過(guò)濾，然后減壓回收溶劑；G、水沉將步驟F的母液進(jìn)行水沉，加水量為30倍以上(重量/重量)，冷藏4小時(shí)以上，板框過(guò)濾，噴霧干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法，其特征在于所述用于浸潤(rùn)生藥堿性溶液適用的堿包括氨水、K2CO3、KHCO3、Na2CO3、NaHCO3、KOH、NaOH、Ca(OH)2；乙胺、二乙胺、三乙胺、N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二甲基乙酰胺，三甲基磷酰三胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法，其特征在于所述醇溶液包括甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇的70-85％溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法，其特征在于所述步驟B中用慢速滲漉代替回流提取，堿性醇溶液用量為生藥的20倍以上；直至無(wú)明顯的生物堿反應(yīng)為止；合并提取液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法，其特征在于所述步驟D中優(yōu)選乙酸乙酯回流提取游離總生物堿。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法，其特征在于所述步驟E中硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)比例為1∶1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法，其特征在于將所述步驟F的醇溶液按照藥料比為1∶6以上的比例在飽和的β-環(huán)糊精/羥丙基β-環(huán)糊精溶液中進(jìn)行高速攪拌2小時(shí)以上，停止攪拌冷藏4小時(shí)以上，傾出上層清液，過(guò)濾即得β-環(huán)糊精/羥丙基β-環(huán)糊精包合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法，其特征在于獲得的去氫駱駝蓬堿達(dá)到50％以上。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法獲得的提取物或包合物，作為制備治療癌癥藥物的應(yīng)用，其特征在于可與臨床上可接受的藥用輔料進(jìn)行配伍制備口服制劑，注射制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要9所述的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法獲得的提取物或包合物，作為制備治療人體消化系統(tǒng)的腫瘤，適用于胃癌，食道癌、肝癌、結(jié)腸癌、直腸癌、口腔癌、舌癌、膽癌、膽管癌、胰腺癌、喉癌藥物的應(yīng)用，其特征在于可以用于制備滴丸、片劑、膠曩、顆粒劑、乳劑、注射用粉針劑，混懸劑。
全文摘要
本發(fā)明提供低成本，高轉(zhuǎn)移率，適合于工業(yè)化生產(chǎn)的駱駝蓬種子總生物堿的制備方法及獲得的產(chǎn)品，作為制備治療癌癥藥物尤其是治療人體消化系統(tǒng)腫瘤的應(yīng)用。駱駝蓬種子總生物堿的制備方法包括A.堿液浸潤(rùn)；B.提取總生物堿；C.堿化游離；D.回流分離；E.用硅藻土與活性炭組成的混合介質(zhì)趁熱進(jìn)行減壓過(guò)濾；60－80℃減壓回收溶劑，并烘干；F.轉(zhuǎn)溶精制；G.水沉噴霧干燥等步驟。駱駝蓬種子總生物堿的制備方法獲得的提取物或包合物，可與臨床上可接受的藥用輔料進(jìn)行配伍制備口服制劑，注射制劑。
文檔編號(hào)A61K9/00GK1542015SQ20031010964
公開(kāi)日2004年11月3日 申請(qǐng)日期2003年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月6日
發(fā)明者王錦軍, 張延召, 趙寶勝, 唐海平, 趙韶華, 高學(xué)東, 裴茂偉 申請(qǐng)人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司