專利名稱：藁本內(nèi)酯用于防治動脈粥樣硬化的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是藳本內(nèi)酯用于制備防治動脈粥樣硬化藥物或保健食品的用途。
背景技術(shù)：
動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)，導(dǎo)致血管壁形成大小不一的斑塊，妨礙相應(yīng)組織器官的血流供應(yīng)。AS是一種侵犯全身動脈系統(tǒng)的疾病，導(dǎo)致的各種心腦血管病是重要的致殘性和致死性疾病，它嚴(yán)重威脅著人類的健康。因此，廣泛尋找預(yù)防和治療藥物具有深遠(yuǎn)的理論和實(shí)際意義。
藳本內(nèi)酯(Ligustilide)是從川芎、當(dāng)歸等傘型科植物的根部提取的一種揮發(fā)油成分，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下 根據(jù)有關(guān)報(bào)道，藳本內(nèi)酯一直被認(rèn)為是川芎、當(dāng)歸等傳統(tǒng)活血化瘀類中藥的主要活性成分之一，其易揮發(fā)，能聚合為二聚體。但至今未見藳本內(nèi)酯對動脈粥樣硬化有防治作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明從川芎等植物中提取藳本內(nèi)酯，經(jīng)動物實(shí)驗(yàn)，證明藳本內(nèi)酯及其二聚體對動脈粥樣硬化有防治作用，因而可用于制備防治動脈粥樣硬化的藥物或保健食品。
藳本內(nèi)酯的制備方法通常采用超臨界萃取技術(shù)，將川芎或當(dāng)歸等植物干燥粉碎后用液態(tài)CO2進(jìn)行萃取并富集。(詳見《超臨界流體萃取》，化學(xué)工業(yè)出版社，2002年出版)一.藳本內(nèi)酯防治動脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)本發(fā)明采用動脈粥樣硬化大鼠模型，證明藳本內(nèi)酯對動脈粥樣硬化病變有防治作用。方法如下雄性Wistar大鼠40只，體重300±10g，購自中科院上海實(shí)驗(yàn)動物中心(合格證號SCXK滬2002-0010)，飼養(yǎng)于清潔級動物房。正常飼料喂養(yǎng)后，隨機(jī)分成4組，即空白對照組、模型組、藳本內(nèi)酯低劑量組及藳本內(nèi)酯高劑量組，每組10只。除空白對照組外，其余各組均先給大鼠腹腔注射維生素D360萬單位/kg，再喂食高脂飼料8周。所述高脂飼料配方為，3％膽固醇，0.5％膽酸鈉，0.2％丙基硫氧嘧啶，5％白糖，10％豬油，81.3％基礎(chǔ)飼料，攪拌均勻后，壓制成顆粒，烘干成高脂飼料?？瞻讓φ战M則先腹腔注射生理鹽水，再喂食正常飼料8周。
藳本內(nèi)酯低劑量組在喂食高脂飼料的同時，每日灌胃給予2.5mg/kg藳本內(nèi)酯；藳本內(nèi)酯高劑量組在喂食高脂飼料的同時，每日灌胃給予25mg/kg藳本內(nèi)酯；空白對照組與模型組則每日灌胃等量生理鹽水。各組于8周后處死，取主動脈、心臟進(jìn)行病理觀測。模型組大鼠可觀測到全身性的動脈粥樣硬化病理改變。說明注射維生素D360萬單位/kg后再喂食高脂飼料8周，就可形成動脈粥樣硬化。詳見專利申請《一種動脈粥樣硬化大鼠模型的制備方法》(申請?zhí)?00310108363)。然而藳本內(nèi)酯低劑量組和高劑量組的大鼠，其病理指標(biāo)明顯輕于模型組，有的甚至不發(fā)生動脈粥樣硬化。詳見如下指標(biāo)
1.主動脈病變程度觀測 沿主動脈瓣至髂動脈分支處取出主動脈，縱向剪開，在10％福爾馬林溶液中固定，大體觀察，結(jié)合油紅O染色。
通過大體觀察，參照《藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》(人民衛(wèi)生出版社，2002出版)，病變分級如下0級內(nèi)膜表面光滑，無斑塊，評0分；0.5級內(nèi)膜有輕度奶油色變化，但無凸出于表面的斑塊，評0.5分；1級有明顯的奶油色斑塊，面積小于3mm2，評1分；2級斑塊面積大于3mm2，評2分；3級斑塊融合成片，大部分斑塊面積大于3mm2，評3分；4級斑塊幾乎覆蓋整個動脈內(nèi)膜，評4分。
2.冠狀動脈病理觀測 心臟在冠狀溝下方和距心尖0.5cm處橫斷，取其間組織塊，石蠟包埋，連續(xù)切片，作HE染色。另外，每組取3只大鼠在心臟相同部位作冰凍切片，進(jìn)行油紅O染色。
參照《藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》(人民衛(wèi)生出版社，2002出版)，每只動物觀察10個動脈斷面，冠狀動脈病變程度分級采用以下標(biāo)準(zhǔn)分級0級動脈內(nèi)膜無脂質(zhì)浸潤，評0分；0.5級內(nèi)膜有輕度脂質(zhì)浸潤，評0.5分；1級內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/4，評1分；2級內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/2，評2分；3級內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/2以上，評3分；4級斑塊幾乎堵塞整個管腔，評4分。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.主動脈形態(tài)觀察 經(jīng)油紅O大體染色后，空白對照組未出現(xiàn)陽性。模型組大鼠主動脈出現(xiàn)大量斑塊，病變評分達(dá)2.5±1.4，斑塊區(qū)域主要分布于主動脈弓、腹主動脈及髂動脈分叉處。經(jīng)石蠟包埋切片后，HE染色光鏡下觀察，空白對照組血管細(xì)胞排列整齊而完整；模型組病變部位內(nèi)膜明顯增厚，血管內(nèi)皮細(xì)胞排列不完整，平滑肌細(xì)胞在內(nèi)膜增生顯著，與大量堆積的泡沫細(xì)胞形成動脈粥樣硬化斑塊，呈典型的動脈粥樣硬化病變。藳本內(nèi)酯的低、高劑量組均可顯著降低主動脈的斑塊面積，病變評分分別為1.5±1.1和0.45±0.50，其中高劑量組有5只未檢測到動脈粥樣硬化病變。結(jié)果見表1。
表1 藳本內(nèi)酯對大鼠主動脈粥樣硬化病變影響結(jié)果評分(x±s)組別動物數(shù)(只)病變評分(分)空白對照組 10 0模型組 102.5±1.4低劑量藳本內(nèi)酯組101.3±0.67*高劑量藳本內(nèi)酯組100.45±0.50**與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01由表1可見，藳本內(nèi)酯能夠顯著降低主動脈粥樣硬化病變程度。
2.心臟病理觀察 空白對照組大鼠心臟冠狀動脈經(jīng)油紅O染色后未發(fā)現(xiàn)陽性區(qū)域。模型組大鼠出現(xiàn)典型的冠狀血管AS病變，病變程度評分為1.9±0.8。病變區(qū)主要為內(nèi)膜增厚，管腔嚴(yán)重狹窄；內(nèi)皮和平滑肌層細(xì)胞排列紊亂，平滑肌增生明顯。經(jīng)冰凍切片、油紅O染色后，AS病變區(qū)血管壁染色陽性，血管內(nèi)膜堆積大量泡沫細(xì)胞。高劑量的藳本內(nèi)酯可顯著減輕大鼠冠狀動脈病變程度，病變評分為0.95±0.50。結(jié)果見表2。
表2 藳本內(nèi)酯對大鼠冠狀動脈粥樣硬化病變影響結(jié)果評分(x±s)組別動物數(shù)(只)病變評分(分)空白對照組 10 0模型組 101.9±0.8低劑量藳本內(nèi)酯組101.05±0.72高劑量藳本內(nèi)酯組100.95±0.50*與模型組比較*P＜0.05由表2可見，藳本內(nèi)酯能夠顯著降低冠狀動脈粥樣硬化病變程度。因此，藳本內(nèi)酯可用于制備防治動脈粥樣硬化的藥物或保健食品。
二、實(shí)施例一 制備藳本內(nèi)酯從中藥川芎中提取藳本內(nèi)酯的提取方法(參見《超臨界流體萃取》，化學(xué)工業(yè)出版社，2002年出版)1.原料將干燥的中藥川芎粉碎成20目粗粉17.5kg，分兩鍋進(jìn)料，投入萃取釜(杭州華黎泵業(yè)有限公司出品)中。
2.萃取流程為CO2鋼瓶-冷卻系統(tǒng)萃取釜-解析釜1-解析釜2-儲罐-循環(huán)。
3.條件萃取釜壓力29MPa，溫度35℃；解析釜1壓力7～8MPa，溫度40℃；解析釜2壓力6～7MPa，溫度40℃；流速165~180kg/小時。提取3小時，共提兩鍋，第1鍋進(jìn)料10kg，第2鍋進(jìn)料7.5kg，從解析釜1收集到具有強(qiáng)烈川芎香氣的油狀物900ml。
4.分離富集將該油狀物分次上硅膠柱，按常規(guī)以環(huán)己烷丙酮進(jìn)行梯度洗脫，收集含有藳本內(nèi)酯的部分，減壓濃縮即得藳本內(nèi)酯。
三、實(shí)施例二 制備藳本內(nèi)酯軟膠囊劑1.配方與配比藳本內(nèi)酯 20g蜂蠟 10g叔丁基對羥基茴香醚(BHA) 0.10g大豆油加至500g共壓制成1000粒囊殼配方明膠 200g甘油 60g水 305.2g2.制備工藝①取蜂蠟，加大豆油250g，80℃水浴下熔融混勻，冷卻至室溫(25℃)。
②加入叔丁基對羥基茴香醚，充分混勻。
③加入藳本內(nèi)酯，再加大豆油至500g，充分混勻，待用。
④取明膠，加入適量的水使明膠吸水膨脹。另將甘油及余下的水置煮膠鍋中加熱至70-80℃，混合均勻，加入膨脹的明膠，攪拌，熔融，保溫1小時，真空抽氣以除去氣泡，以潔凈白布過濾，混勻，保溫待用。
⑤將已制好的明膠甘油液和囊心藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機(jī)中，膠帶溫度控制在40-50℃，囊心藥液溫度控制在25℃，壓制出每粒含500mg藥液的軟膠囊，在30-32℃、相對濕度28％條件下烘干24小時即可。
四、實(shí)施例三 制備藳本內(nèi)酯復(fù)方制劑將藳本內(nèi)酯和普羅布考(Probucol)組方，制成復(fù)方藥1.配方與配比藳本內(nèi)酯 20g普羅布考 250g淀粉 400g糊精 100g硬脂酸鎂 6g乙醇 適量共壓制成1000片2.制備方法①將藳本內(nèi)酯、普羅布考、淀粉、糊精混勻，加乙醇適量制軟材。
②過20目篩。
③60℃烘干2小時。
④加硬脂酸鎂，18目篩整粒，混勻。
⑤壓片，每片0.77g。
權(quán)利要求
1.藁本內(nèi)酯及其二聚體在制備防治動脈粥樣硬化藥物或保健食品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是藁本內(nèi)酯用于制備防治動脈粥樣硬化藥物或保健食品的用途。藁本內(nèi)酯是從川芎、當(dāng)歸等傘型科植物中提取的一種揮發(fā)油成分。經(jīng)動物實(shí)驗(yàn)，藁本內(nèi)酯及其二聚體對動脈粥樣硬化有防治作用，因而可用于制備防治動脈粥樣硬化藥物或保健食品。
文檔編號A61K31/365GK1543859SQ200310108859
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月25日
發(fā)明者楊鵬遠(yuǎn), 張衛(wèi)東, 芮耀誠, 蘇娟, 張川 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)