專利名稱：化合物、組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白KSP的抑制劑化合物，它們用于治療細(xì)胞增殖性疾病，例如癌癥、增生、再狹窄、心臟肥大、免疫疾病、真菌病和炎癥。
背景技術(shù)：
用于治療癌癥的治療劑為紫杉烷和長(zhǎng)春花屬生物堿，它們作用于微管。微管是有絲分裂紡錘體的主要結(jié)構(gòu)元件。有絲分裂紡錘體負(fù)責(zé)基因組的復(fù)制拷貝向細(xì)胞分裂所產(chǎn)生的兩個(gè)子細(xì)胞的每個(gè)中的分配。認(rèn)為這些藥物對(duì)有絲分裂紡錘體的破壞導(dǎo)致對(duì)癌細(xì)胞分裂的抑制，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡。然而，微管形成其他類型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，包括用于神經(jīng)過(guò)程中胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)穆窂?。因?yàn)檫@些藥物不特異性地靶向于有絲分裂紡錘體，所以它們具有限制它們的實(shí)用性的副作用。
由于如果能夠降低與給予這些藥物有關(guān)的副作用會(huì)實(shí)現(xiàn)的治療益處，所以提高癌癥治療藥物的特異性是相當(dāng)令人感興趣的。傳統(tǒng)上，癌癥治療中的顯著改善與鑒定通過(guò)新機(jī)理作用的治療劑有關(guān)。其實(shí)例不僅包括紫杉烷，而且還包括拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑喜樹(shù)堿類。由這兩類藥物來(lái)看，有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白對(duì)于新的抗癌藥物而言是有吸引力的靶。
有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白是有絲分裂紡錘體組裝及功能所必需的酶，但通常并不是其他微管結(jié)構(gòu)的部分，如在神經(jīng)過(guò)程中。有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白在有絲分裂的所有階段都起到重要作用。這些酶是將ATP水解所釋放的能量轉(zhuǎn)化為驅(qū)動(dòng)細(xì)胞成分(cellular cargoes)沿微管定向移動(dòng)的機(jī)械力的“分子發(fā)動(dòng)機(jī)”。足以完成該任務(wù)的催化域是一個(gè)約340個(gè)氨基酸的緊密結(jié)構(gòu)。在有絲分裂期間，驅(qū)動(dòng)蛋白將微管組裝成有絲分裂紡錘體的雙極結(jié)構(gòu)。驅(qū)動(dòng)蛋白介導(dǎo)染色體沿紡錘體微管的移動(dòng)，以及有絲分裂紡錘體中與有絲分裂的特定階段有關(guān)的結(jié)構(gòu)變化。有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白功能的實(shí)驗(yàn)干擾導(dǎo)致有絲分裂紡錘體的畸形或功能障礙，通常導(dǎo)致細(xì)胞周期停止和細(xì)胞死亡。
KSP是已鑒定的有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白中的一種。KSP屬于正端定向微管發(fā)動(dòng)機(jī)(plus end-directed microtubule motors)的進(jìn)化保守型驅(qū)動(dòng)蛋白亞族，所述正端定向微管發(fā)動(dòng)機(jī)組裝成由反平行同型二聚體組成的雙極同型四聚體。在有絲分裂期間，KSP與有絲分裂紡錘體的微管結(jié)合。在人細(xì)胞中微量注射針對(duì)KSP的抗體在前中期期間阻止紡錘極分開(kāi)，產(chǎn)生單極紡錘體，而導(dǎo)致有絲分裂停止，并誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡。KSP以及其他非人生物中的相關(guān)驅(qū)動(dòng)蛋白使反平行微管成束，并使它們相互之間滑動(dòng)，由此迫使兩個(gè)紡錘極分開(kāi)。KSP也可介導(dǎo)后期B紡錘體拉長(zhǎng)以及紡錘極處的微管集中。
已描述了人KSP(也稱為HsEg5)(Blangy等人，Cell，831159-69(1995)；Whitehead等人，Arthritis Rheum.，391635-42(1996)；Galgio等人，J.Cell Biol.，135339-414(1996)；Blangy等人，J Biol.Chem.，27219418-24(1997)；Blangy等人，Cell Motil Cytoskeleton，40174-82(1998)；Whitehead和Rattner，J.Cell Sci.，1112551-61(1998)；Kaiser等人，JBC 27418925-31(1999)；GenBank登錄號(hào)X85137，NM004523和U37426)，而且已描述了KSP基因的片段(TRIP5)(Lee等人，MolEndocrinol，9243-54(1995)；GenBank登錄號(hào)L40372)。已報(bào)道了非洲爪蟾屬KSP同系物(Egs)以及果蠅屬KLP61 F/KRP1 30。
有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白，包括KSP，是發(fā)現(xiàn)和開(kāi)發(fā)新的有絲分裂化學(xué)治療劑的有吸引力的靶。因此，本發(fā)明的目的是提供用于KSP的化合物、組合物和方法。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)如上概述的目的，本發(fā)明提供可用于治療細(xì)胞增殖性疾病的化合物。該化合物是KSP抑制劑，特別是人KSP抑制劑。本發(fā)明還提供包含這些化合物的組合物，和利用這些化合物或組合物的方法，它們可以用于治療細(xì)胞增殖性疾病。
在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及治療細(xì)胞增殖性疾病，以及通過(guò)抑制KSP活性來(lái)治療病癥的方法。該方法采用由式I代表的化合物 式I其中R1選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基-；R2和R2′獨(dú)立地選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的烷氧基、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基；或者R2和R2′一起形成任選取代的3-7元環(huán)；R12選自任選取代的咪唑基、任選取代的咪唑啉基、-NHR4、-N(R4)(COR3)、-N(R4)(SO2R3a)和-N(R4)(CH2R3b)；R3選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-、任選取代的雜芳烷基-、R15O-和R17-NH-；R3a選自任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-、任選取代的雜芳烷基-和R17-NH-；R3b選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-、任選取代的雜芳烷基；R4選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜環(huán)基-和任選取代的雜芳烷基-；R5、R6、R7和R8獨(dú)立地選自氫、?；⑷芜x取代的烷基-、任選取代的烷氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺?；?、烷基磺酰氨基-、烷硫基-、羧基烷基-、酰胺基-、氨基羰基-、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；R15選自任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基-；且R17為氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-或任選取代的雜芳烷基-，包括單一立體異構(gòu)體、立體異構(gòu)體混合物；式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽；式I的化合物的藥學(xué)可接受的溶劑化物的藥學(xué)可接受的溶劑化物；或者式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽的藥學(xué)可接受的溶劑化物。
根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，當(dāng)R2和R2′之一為氫時(shí)，則另一個(gè)不是氫。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2和R2′各自為氫，而R1選自任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基-，但條件是R1不是取代的苯基。
在一方面，本發(fā)明涉及通過(guò)給予治療有效量的式I的化合物、式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽或者式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽的溶劑化物來(lái)治療細(xì)胞增殖性疾病和其它可以通過(guò)抑制KSP來(lái)治療的疾病的方法。這些疾病和病癥包括癌癥、增生、再狹窄、心臟肥大、免疫疾病、真菌病和炎癥。
在另一方面，本發(fā)明涉及用于抑制KSP驅(qū)動(dòng)蛋白的化合物。該化合物具有以上式I所示的結(jié)構(gòu)；式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽或者式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽的藥學(xué)可接受的溶劑化物。本發(fā)明還涉及含有治療有效量的與至少一種藥用賦形劑混合的式I的化合物、式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽或式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽的藥學(xué)可接受的溶劑化物的藥物組合物。在另一方面，除了本發(fā)明的化合物，該組合物還包含化學(xué)治療劑。
在另外的方面，本發(fā)明提供用于篩選結(jié)合KSP驅(qū)動(dòng)蛋白的化合物的方法，例如替換本發(fā)明化合物的結(jié)合或者與本發(fā)明的化合物的結(jié)合進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)的化合物。該方法包括混合標(biāo)記的本發(fā)明的化合物、KSP驅(qū)動(dòng)蛋白，以及至少一種候選藥物，然后測(cè)定候選藥物對(duì)KSP驅(qū)動(dòng)蛋白的結(jié)合。
在又一方面，本發(fā)明提供用于篩選KSP驅(qū)動(dòng)蛋白活性調(diào)節(jié)劑的方法。該方法包括混合本發(fā)明的化合物、KSP驅(qū)動(dòng)蛋白，以及至少一種候選藥物，并測(cè)定候選藥物對(duì)KSP驅(qū)動(dòng)蛋白活性的作用。


參照以下與附圖相關(guān)的描述將更好地理解本發(fā)明。
圖1和2分別代表根據(jù)制備A制備的鹽的XRPD和MDSC掃描。
圖3代表根據(jù)制備B制備的鹽的XRPD掃描。
具體實(shí)施例方式
本說(shuō)明書(shū)中所用的以下詞語(yǔ)和短語(yǔ)一般意在具有下述的含義，除了在使用它們的上下文的范圍之內(nèi)作出另外說(shuō)明。以下的縮寫(xiě)和術(shù)語(yǔ)在全文具有所示的含義
Ac＝乙?；鵅oc ＝叔丁氧羰基Bu＝丁基c-＝環(huán)CBZ ＝苯酯基＝芐氧羰基DCM ＝二氯甲烷＝甲叉二氯＝CH2Cl2DIEA ＝N，N-二異丙基乙胺DMF ＝N，N-二甲基甲酰胺DMSO ＝二甲亞砜Et＝乙基HBTU ＝O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲嗡六氟磷酸鹽HMDS ＝六甲基二硅氮烷HOAc ＝乙酸IPA ＝異丙醇Me＝甲基Ph＝苯基Py＝吡啶rt＝室溫sat′d＝飽和s-＝仲t-＝叔TEA ＝三乙胺TFA ＝三氟乙酸THF ＝四氫呋喃Tf＝三氟甲磺酸(triflate)烷基意在包括直鏈、支鏈或環(huán)狀脂族烴結(jié)構(gòu)以及它們的組合，所述結(jié)構(gòu)可以是飽和或不飽和的。低級(jí)烷基指1-5個(gè)碳原子，優(yōu)選1-4個(gè)碳原子的烷基。低級(jí)烷基的實(shí)例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基和叔丁基等。優(yōu)選的烷基是C20或更低級(jí)的烷基。更優(yōu)選的烷基是C13或更低級(jí)的烷基。環(huán)烷基是烷基的一個(gè)子集，包括3-13個(gè)碳原子的環(huán)狀脂族烴基。環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、降冰片烷基(norbornyl)、金剛烷基等。環(huán)烷基-烷基是烷基的另一子集，指通過(guò)非環(huán)狀烷基與母體結(jié)構(gòu)連接的環(huán)烷基。環(huán)烷基-烷基的實(shí)例包括環(huán)己基甲基、環(huán)丙基甲基、環(huán)己基丙基等。在本申請(qǐng)中，烷基包括鏈烷基、鏈烯基和炔基殘基，其意在包括乙烯基、烯丙基、異戊二烯基等。亞烷基-、亞鏈烯基-和亞炔基-是烷基的其它子集，包括與烷基相同，但在化學(xué)結(jié)構(gòu)內(nèi)具有二個(gè)連接點(diǎn)的殘基。亞烷基的實(shí)例包括亞乙基(-CH2CH2-)、亞丙基(-CH2CH2CH2-)、二甲基亞丙基(-CH2C(CH3)2CH2-)和環(huán)己基亞丙基(-CH2CH2CH(C6H13)-)。同樣，亞鏈烯基的實(shí)例包括亞乙烯基(-CH＝CH-)、亞丙烯基(-CH＝CH-CH2-)和環(huán)己基亞丙烯基(-CH＝CHCH(C6H13)-)。亞炔基的實(shí)例包括亞乙炔基(-C≡C-)和亞丙炔基(-CH≡CH-CH2-)。當(dāng)命名具有特定數(shù)目的碳的烷基殘基時(shí)，意在包括具有該碳數(shù)的所有幾何異構(gòu)體；因此，例如“丁基”意在包括正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基；“丙基”包括正丙基、異丙基和環(huán)丙基。
烷氧基指優(yōu)選包括1-8個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷基以及它們的組合，其通過(guò)氧連接在母體結(jié)構(gòu)上(即基團(tuán)烷基-O-)。實(shí)例包括甲氧基-、乙氧基-、丙氧基-、異丙氧基-、環(huán)丙氧基-、環(huán)己氧基等。低級(jí)烷氧基指含有1-4個(gè)碳的烷氧基。
酰基指通過(guò)羰基官能團(tuán)連接在母體結(jié)構(gòu)上的1-8個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的基團(tuán)以及它們的組合。這種基團(tuán)可以是飽和或不飽和的，脂族或芳族的。?；鶜埢械囊粋€(gè)或多個(gè)碳可被氮、氧或硫置換，只要與母體的連接點(diǎn)在羰基即可。實(shí)例包括乙酰基、苯甲?；⒈；?、異丁?；⑹宥⊙豸驶?、芐氧羰基等。低級(jí)?；负?-4個(gè)碳的酰基。
氨基指基團(tuán)-NH2。術(shù)語(yǔ)“取代的氨基”指基團(tuán)-NHR或-NRR，其中R獨(dú)立地選自任選取代的烷基、任選取代的烷氧基、任選取代的氨基羰基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜環(huán)基、?；?、烷氧羰基、硫烷基、亞硫酰基和磺?；缍一被?、甲基磺酰氨基、呋喃基-氧-磺酰氨基。
氨基羰基-指基團(tuán)-NRcCORb、-NRcCO2Rb或-NRcCONRbRc，其中Rb為H或任選取代的C1-C6烷基、芳基、雜芳基、芳基-C1-C4烷基-或雜芳基-C1-C4烷基-基團(tuán)；而Rc為氫或C1-C4烷基；且其中各任選取代的Rb基團(tuán)獨(dú)立地未被取代或被一或多個(gè)獨(dú)立地選自以下的取代基取代C1-C4烷基、芳基、雜芳基、芳基-C1-C4烷基-、雜芳基-C1-C4烷基-、C1-C4鹵代烷基、-OC1-C4烷基、-OC1-C4烷基苯基、-C1-C4烷基-OH、-OC1-C4鹵代烷基、鹵素、-OH、-NH2、-C1-C4烷基-NH2、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基苯基)、-NH(C1-C4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代(作為雜芳基的取代基)、-CO2H、-C(O)OC1-C4烷基、-CON(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-CONH(C1-C4烷基)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C1-C4烷基、-C(O)C1-C4苯基、-C(O)C1-C4鹵代烷基、-OC(O)C1-C4烷基、-SO2(C1-C4烷基)、-SO2(苯基)、-SO2(C1-C4鹵代烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4烷基)、-SO2NH(苯基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(苯基)和-NHSO2(C1-C4鹵代烷基)。
抗有絲分裂劑指抑制或阻止有絲分裂，例如通過(guò)造成中期停止抑制或阻止有絲分裂的藥物。某些抗腫瘤藥物阻斷增殖，并被認(rèn)為是抗有絲分裂劑。
芳基和雜芳基分別意指含有0或1-4個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的5或6元芳環(huán)或雜芳環(huán)；含有0或1-4個(gè)(或更多個(gè))選自O(shè)、N或S的雜原子的雙環(huán)9或10元芳環(huán)或雜芳環(huán)系統(tǒng)；或者含有0或1-4個(gè)(或更多個(gè))選自O(shè)、N或S的雜原子的三環(huán)12至14元芳環(huán)或雜芳環(huán)系統(tǒng)。芳族6-14元碳環(huán)包括，例如苯基、萘基、茚滿基、四氫萘基和芴基；而5-10元芳族雜環(huán)包括，例如咪唑基、吡啶基、吲哚基、噻吩基、苯并吡喃酮基、噻唑基、呋喃基、苯并咪唑基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基和吡唑基。
芳烷基-指芳基部分通過(guò)烷基殘基連接在母體結(jié)構(gòu)上的殘基。實(shí)例包括芐基、苯乙基、苯基乙烯基、苯基烯丙基等。雜芳烷基-指雜芳基部分通過(guò)烷基殘基連接在母體結(jié)構(gòu)上的殘基。實(shí)例包括呋喃基甲基、吡啶基甲基、嘧啶基乙基等。
芳烷氧基-指基團(tuán)-O-芳烷基。類似地，雜芳烷氧基-指基團(tuán)-O-雜芳烷基；芳氧基-指基團(tuán)-O-芳基；酰氧基-指基團(tuán)-O-?；浑s芳氧基-指基團(tuán)-O-雜芳基；而雜環(huán)氧基-指基團(tuán)-O-雜環(huán)基(即芳烷基、雜芳烷基、芳基、?；?、雜環(huán)基或雜芳基通過(guò)氧連接在母體結(jié)構(gòu)體上)。
羧基烷基-指基團(tuán)-烷基-COOH。
酰胺基指基團(tuán)-CONRbRc，其中Rb為H或任選取代的C1-C6烷基、芳基、雜芳基、芳基-C1-C4烷基-或雜芳基-C1-C4烷基-基團(tuán)；而Rc為氫或C1-C4烷基；且其中各任選取代的Rb基團(tuán)獨(dú)立地未被取代或被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自以下的取代基取代C1-C4烷基、芳基、雜芳基、芳基-C1-C4烷基-、雜芳基-C1-C4烷基-、C1-C4鹵代烷基、-OC1-C4烷基、-OC1-C4烷基苯基、-C1-C4烷基-OH、-OC1-C4鹵代烷基、鹵素、-OH、-NH2、-C1-C4烷基-NH2、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基苯基)、-NH(C1-C4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代(作為雜芳基的取代基)、-CO2H、-C(O)OC1-C4烷基、-CON(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-CONH(C1-C4烷基)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、NHC(O)苯基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)C(O)苯基)、-C(O)C1-C4烷基、-C(O)C1-C4苯基、-C(O)C1-C4鹵代烷基、-OC(O)C1-C4烷基、-SO2(C1-C4烷基)、-SO2(苯基)、-SO2(C1-C4鹵代烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4烷基)、-SO2NH(苯基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(苯基)和-NHSO2(C1-C4鹵代烷基)。
鹵素或鹵代指氟、氯、溴或碘。優(yōu)選氟、氯和溴。二鹵代芳基、二鹵代烷基、三鹵代芳基等指被指定數(shù)目的多個(gè)鹵素(這里分別為2、2和3個(gè))但不一定是多個(gè)相同的鹵素取代的芳基和烷基；因此4-氯-3-氟苯基在二鹵代芳基的范圍之內(nèi)。
雜環(huán)基指其中1-4個(gè)碳被諸如氧、氮或硫的雜原置換的環(huán)烷基或芳基。本發(fā)明范圍內(nèi)的雜環(huán)的實(shí)例包括氮雜環(huán)丁烷基、咪唑啉基、吡咯烷基、吡唑基、吡咯基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、苯并呋喃基、苯并二噁烷基、苯并二氧基(當(dāng)作為取代基出現(xiàn)時(shí)，通常稱為亞甲二氧基苯基)、四唑基、嗎啉基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、哌啶基、嘧啶基、噻吩基、呋喃基、噁唑基、噁唑啉基、異噁唑基、二噁烷基(dioxanyl)、四氫呋喃基等?！癗-雜環(huán)基”指含氮雜環(huán)。術(shù)語(yǔ)雜環(huán)基包括雜環(huán)基的子集雜芳基。N-雜環(huán)基殘基的實(shí)例包括氮雜環(huán)丁烷基、4-嗎啉基、4-硫代嗎啉基、1-哌啶基、1-吡咯烷基、3-噻唑烷基、哌嗪基和4-(3，4-二氫苯并噁嗪基)。取代的雜環(huán)基的實(shí)例包括4-甲基-1-哌嗪基和4-芐基-1-哌啶基。
離去基團(tuán)或原子是任何在反應(yīng)條件下從原料上裂解，從而促進(jìn)特定部位的反應(yīng)的基團(tuán)。除非另外說(shuō)明，這種基團(tuán)的適宜的實(shí)例是鹵原子、甲磺酰氧基、對(duì)硝基苯磺酰氧基和甲苯磺酰氧基。
任選意指隨后所述的事件或環(huán)境可能發(fā)生或不發(fā)生，且該表述包括所述事件或環(huán)境發(fā)生的情況和它不發(fā)生的情況。例如，“任選取代的烷基”包括本文定義的“烷基”和“取代的烷基”。關(guān)于含有一個(gè)或多個(gè)取代基的任何基團(tuán)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，這種基團(tuán)不意在引入立體上不實(shí)際的和/或合成上不實(shí)際的和/或本身不穩(wěn)定的任何取代或者取代方式。
取代的烷氧基指其中烷基組分被取代的烷氧基(即-O-(取代的烷基))。一種優(yōu)選的取代的烷氧基是“聚烷氧基”或-O-(任選取代的亞烷基)-(任選取代的烷氧基)，并包括諸如-OCH2CH2OCH3的基團(tuán)和二醇醚如聚乙二醇的殘基和-O(CH2CH2O)x-CH3，其中x為約2-20，優(yōu)選約2-10，更優(yōu)選約2-5的整數(shù)。另一種優(yōu)選的取代的烷氧基是羥基烷氧基或-OCH2(CH2)yOH，其中y是約1-10，優(yōu)選約1-4的整數(shù)。
包括含有任選取代的烷基、芳基和雜芳基部分的基團(tuán)(例如烷氧基、芳烷基和雜芳烷基)的取代的烷基、芳基和雜芳基部分的取代的烷基、芳基和雜芳基分別指其中一個(gè)或多個(gè)(至多約5個(gè)，優(yōu)選至多約3個(gè))氫原子被獨(dú)立地選自以下的取代基置換的烷基、芳基和雜芳基-Ra、ORb、-O(C1-C2烷基)O-(作為芳基取代基)、-SRb、NRbRc、鹵素、氰基、硝基、-CORb、-CO2Rb、-CONRbRc、-OCORb、-OCO2Rb、-OCONRbRc、-NRcCORb、-NRcCO2Rb、NRcCONRbRc、-CO2Rb、CONRbRc、NRcCORb、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRbRc和-NRcSO2Ra，其中R8是任選取代的C1-C6烷基、芳基、雜芳基、芳基-C1-C4烷基-或雜芳基-C1-C4烷基，Rb為H或任選取代的C1-C6烷基、芳基、雜芳基、芳基-G1-C4烷基-或雜芳基-C1-C4烷基-基團(tuán)；Rc為氫或C1-C4烷基；其中各任選取代的Ra基團(tuán)和Rb基團(tuán)獨(dú)立地未被取代或被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自以下的取代基取代C1-C4烷基、芳基、雜芳基、芳基-C1-C4烷基-、雜芳基-C1-C4烷基-、C1-C4鹵代烷基、-OC1-C4烷基、-OC1-C4烷基苯基、-C1-C4烷基-OH、-OC1-C4鹵代烷基、鹵素、-OH、-NH2、-C1-C4烷基-NH2、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基苯基)、-NH(C1-C4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代(作為雜芳基的取代基)、-CO2H、-C(O)OC1-C4烷基、-CON(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-CONH(C1-C4烷基)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C1-C4烷基、-C(O)C1-C4苯基、-C(O)C1-C4鹵代烷基、-OC(O)C1-C4烷基、-SO2(C1-C4烷基)、-SO2(苯基)、-SO2(C1-C4鹵代烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4烷基)、-SO2NH(苯基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(苯基)和-NHSO2(C1-C4鹵代烷基)。
硫烷基指基團(tuán)-S-(任選取代的烷基)、-S-(任選取代的芳基)、-S-(任選取代的雜芳基)和-S-(任選取代的雜環(huán)基)。
亞硫?；富鶊F(tuán)-S(O)-H、-S(O)-(任選取代的烷基)、-S(O)-任選取代的芳基)、-S(O)-(任選取代的雜芳基)、-S(O)-(任選取代的雜環(huán)基)和-S(O)-(任選取代的氨基)。
磺?；富鶊F(tuán)-S(O2)-H、S(O2)-(任選取代的烷基)、-S(O2)-(任選取代的芳基)、-S(O2)-(任選取代的雜芳基)、-S(O2)-(任選取代的雜環(huán)基)、-S(O2)-(任選取代的烷氧基)、-S(O2)-任選取代的芳氧基)、-S(O2)-(任選取代的雜芳氧基)、-S(O2)-(任選取代的雜環(huán)氧基)和-S(O2)-(任選取代的氨基)。
藥學(xué)可接受的鹽指保持游離化合物的生物有效性，不是生物學(xué)上不期望的，與適宜的酸或堿形成的那些鹽，包括藥學(xué)可接受的酸加成鹽和堿加成鹽。藥學(xué)可接受的酸加成鹽包括由無(wú)機(jī)酸，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等衍生的鹽，和由有機(jī)酸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸等衍生的鹽。
藥學(xué)可接受的堿加成鹽包括由無(wú)機(jī)堿衍生的鹽，如鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽等。特別優(yōu)選銨、鉀、鈉、鈣和鎂鹽。堿加成鹽還包括由藥學(xué)可接受的有機(jī)無(wú)毒堿衍生的鹽，包括伯、仲和叔胺、取代的胺(包括天然存在的取代的胺)、環(huán)胺和堿性離子交換樹(shù)脂(如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺)的鹽。
保護(hù)基具有與其在有機(jī)合成中有關(guān)的常規(guī)含義，即選擇性阻斷多官能化合物的一個(gè)或多個(gè)反應(yīng)部位，從而使化學(xué)反應(yīng)可以在另一個(gè)未受保護(hù)的反應(yīng)部位進(jìn)行并可以在選擇性反應(yīng)完成之后容易地除去的基團(tuán)。許多保護(hù)基已在諸如以下的文獻(xiàn)中公開(kāi)T.H.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，Third Edition，John Wiley& Sons，New York(1999)，該文獻(xiàn)引入本文作參考。例如，在羥基保護(hù)形式中，化合物中存在的至少一個(gè)羥基被羥基保護(hù)基保護(hù)。同樣，胺和其它反應(yīng)基團(tuán)可以類似地保護(hù)。
溶劑化物指通過(guò)溶劑和式I的化合物或其鹽的相互作用而形成的化合物。式I的化合物的適宜的溶劑化物是藥學(xué)可接受的溶劑化物，如水合物，包括一水合物和半水合物。
本文所述的許多化合物含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心(例如R2和R2’連接其上的碳，其中R2不同于R2’)，并因此可以產(chǎn)生對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體和其它可以根據(jù)絕對(duì)立體化學(xué)定義為(R)-或(S)-的立體異構(gòu)形式。本發(fā)明意在包括所有這些可能的異構(gòu)體，包括外消旋混合物、光學(xué)純形式和中間體混合物。光學(xué)活性(R)-和(S)-異構(gòu)體可以使用手性合成子或手性試劑制備，或者使用常規(guī)技術(shù)拆分。當(dāng)本文所述的化合物含有烯屬雙鍵或其它幾何不對(duì)稱中心時(shí)，除非特別指出，它意指該化合物包括E和Z幾何異構(gòu)體。同樣地，也意在包括所有的互變異構(gòu)形式和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體。
當(dāng)需要時(shí)，可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法拆分R-和S-異構(gòu)體，例如通過(guò)形成可以例如用結(jié)晶法分離的非對(duì)映異構(gòu)體鹽或者配合物；通過(guò)形成可以例如用結(jié)晶法、氣-液或液相色譜法分離的非對(duì)映異構(gòu)體衍生物；使一種對(duì)映異構(gòu)體與對(duì)映異構(gòu)體特異性試劑進(jìn)行選擇性反應(yīng)，例如進(jìn)行酶氧化或還原，然后分離修飾和未修飾的對(duì)映異構(gòu)體；或者在手性環(huán)境中，例如在手性載體，如具有結(jié)合的手性配體的二氧化硅上或者在手性溶劑存在下進(jìn)行氣-液或液相色譜處理?？梢岳斫?，當(dāng)通過(guò)上述的一種分離方法將所需要的對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化成另一種化學(xué)實(shí)體時(shí)，可能需要進(jìn)一步的步驟來(lái)釋放所需要的對(duì)映異構(gòu)體形式?；蛘?，可以通過(guò)使用光學(xué)活性試劑、底物、催化劑或溶劑進(jìn)行不對(duì)稱合成，或者通過(guò)用不對(duì)稱轉(zhuǎn)化將一種對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化成另一種，來(lái)合成特定的對(duì)映異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物本發(fā)明涉及一類新的化合物，它們可以被描述為苯并吡喃-4-酮或色烯-4-酮，它們是一種或多種有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白的抑制劑。通過(guò)抑制有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白但不抑制其它驅(qū)動(dòng)蛋白(例如轉(zhuǎn)運(yùn)驅(qū)動(dòng)蛋白)，對(duì)細(xì)胞增殖的特異性抑制得以實(shí)現(xiàn)。雖然不意在受任何理論的限制，但本發(fā)明利用以下發(fā)現(xiàn)干擾有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白功能導(dǎo)致有絲分裂紡綞體的畸形或者功能障礙，通常導(dǎo)致細(xì)胞周期停止和細(xì)胞死亡。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，本文所述的化合物抑制有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白KSP。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該化合物抑制有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白KSP，并調(diào)節(jié)一種或多種選自以下的人有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白HSET(參見(jiàn)美國(guó)專利6,361,993，其引入本文作參考)；MCAK(參見(jiàn)美國(guó)專利6,331,424，其引入本文作參考)；CENP-E(參見(jiàn)PCT公開(kāi)WO99/13061，其引入本文作參考)；Kif4(參見(jiàn)美國(guó)專利6,440,684，其引入本文作參考)；MKLP1(參見(jiàn)美國(guó)專利6,448,025，其引入本文作參考)；Kifl5(參見(jiàn)美國(guó)專利6,355,466，其引入本文作參考)；Kid(參見(jiàn)美國(guó)專利6,387,644，其引入本文作參考)；Mppl、CMKrp、KinI-3(參見(jiàn)美國(guó)專利6,461,855，其引入本文作參考)；Kip3a(參見(jiàn)PCT公開(kāi)WO 01/96593，其引入本文作參考)；Kip3d(參見(jiàn)美國(guó)專利6,492,151，其引入本文作參考)；和RabK6。
抑制人KSP驅(qū)動(dòng)蛋白的方法包括使本發(fā)明的抑制劑與驅(qū)動(dòng)蛋白，特別是人驅(qū)動(dòng)蛋白，優(yōu)選人KSP或其片段和變體接觸。該抑制作用可以是KSP驅(qū)動(dòng)蛋白的ATP水解活性和/或有絲分裂紡綞體形成活性的抑制，使得有絲分裂紡綞體被破壞。減數(shù)分裂紡綞體也可被破壞。
本發(fā)明的目的是開(kāi)發(fā)有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白，特別是KSP，尤其是人KSP的抑制劑，以治療與細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥。傳統(tǒng)上，癌癥，一種細(xì)胞增殖性疾病治療的顯著改善與鑒定通過(guò)新機(jī)理作用的治療劑有關(guān)。其實(shí)例不僅包括似乎對(duì)微管形成產(chǎn)生作用的紫杉烷類試劑，而且還包括拓樸異構(gòu)酶I抑制劑喜樹(shù)堿類。本文所述的化合物、組合物和方法區(qū)別可能在于它們的選擇性，而且優(yōu)選用于治療細(xì)胞增殖性疾病，包括但不限于癌癥、增生、再狹窄、心臟肥大、免疫疾病、真菌病和炎癥。
因此，本發(fā)明涉及采用式I代表的化合物的方法 式I其中R1選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基-；R2和R2′獨(dú)立地選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的烷氧基、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基；或者R2和R2′一起形成任選取代的3-7元環(huán)；R12選自任選取代的咪唑基、任選取代的咪唑啉基、-NHR4、-N(R4)(COR3)、-N(R4)(SO2R3a)和-N(R4)(CH2R3b)；R3選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-、任選取代的雜芳烷基-、R15O-和R17-NH-；R3a選自任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-、任選取代的雜芳烷基-和R17-NH-；R3b選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-、任選取代的雜芳烷基；R4選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜環(huán)基-和任選取代的雜芳烷基-；R5、R6、R7和R8獨(dú)立地選自氫、?；⑷芜x取代的烷基-、任選取代的烷氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺?；?、烷基磺酰氨基-、烷硫基-、羧基烷基-、酰胺基-、氨基羰基-、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；R15選自任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基-；且R17為氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-或任選取代的雜芳烷基-，包括單一立體異構(gòu)體、立體異構(gòu)體混合物；式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽；式I的化合物的藥學(xué)可接受的溶劑化物的藥學(xué)可接受的溶劑化物；或者式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽的藥學(xué)可接受的溶劑化物。
當(dāng)R12為咪唑時(shí)，R12具有下式 其中R9選自氫、任選取代的C1-C8烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的芳基-C1-C4-烷氧基、任選取代的雜芳基-C1-C4-烷氧基、任選取代的雜芳基；而R13和R13’獨(dú)立地為氫、任選取代的C1-C8烷基-、任選取代的芳基-或任選取代的芳基-C1-C4-烷基。
當(dāng)R12為咪唑啉時(shí)，R12具有下式 其中R9選自氫、任選取代的C1-C8烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-和任選取代的雜芳基；而R10、R10′、R14和R14′獨(dú)立地選自氫、任選取代的C1-C8烷基-、任選取代的芳基-和任選取代的芳基-C1-C4-烷基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R1選自氫、任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基和任選取代的雜芳烷基；R2和R2′獨(dú)立地選自氫、任選取代的烷基、任選取代的烷氧基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基和任選取代的雜芳烷基；或者R2和R2′一起形成任選取代的3-7元環(huán)；條件是如果R2和R2′之一為氫，則另一個(gè)不是氫；R12選自任選取代的咪唑基、任選取代的咪唑啉基、-NHR4、-N(R4)(COR3)、-N(R4)(SO2R3a)和-N(R4)(CH2R3b)；R3選自氫、任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基、R15O-和R17-NH-；R3a選自任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基和任選取代的雜芳烷基和R17-NH-；R3b選自氫、任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基；R4選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜環(huán)基-和任選取代的雜芳烷基-；R5、R6、R7和R8獨(dú)立地選自氫、?；?、任選取代的烷基-、任選取代的烷氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺?；?、烷基磺酰氨基、烷硫基、羧基烷基、酰胺基、氨基羰基、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基-；R15選自任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基和任選取代的雜芳烷基-，R17選自氫、任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜芳烷基，包括單一立體異構(gòu)體、立體異構(gòu)體混合物；式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽；式I的化合物的藥學(xué)可接受的溶劑化物的藥學(xué)可接受的溶劑化物；或者式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽的藥學(xué)可接受的溶劑化物。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2和R2′為氫，且R1選自任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基和任選取代的雜芳烷基，但條件是R1不是取代的苯基；R12選自任選取代的咪唑基、任選取代的咪唑啉基、-NHR4、-N(R4)(COR3)、-N(R4)(SO2R3a)和-N(R4)(CH2R3b)；R3選自氫、任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基、R15O-和R17-NH-；R3a選自任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基和R17-NH-；R3b選自氫、任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基；R4選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜環(huán)基-和任選取代的雜芳烷基-；
R5、R6、R7和R8獨(dú)立地選自氫、?；?、任選取代的烷基、任選取代的烷氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺酰基、烷基磺酰氨基、烷硫基、羧基烷基、酰胺基、氨基羰基、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基-；R15選自任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基和任選取代的雜芳烷基-；且R17選自氫、任選取代的烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基和任選取代的雜芳烷基，包括單一立體異構(gòu)體、立體異構(gòu)體混合物；式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽；式I的化合物的藥學(xué)可接受的溶劑化物的藥學(xué)可接受的溶劑化物；或者式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽的藥學(xué)可接受的溶劑化物。
在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2不同于R2’，R2和R2’連接其上的立體(stereogenic)中心為R構(gòu)型。
命名法式I的化合物可以下述的方式命名和編號(hào)(例如用AutoNom 2.1版或ISIS-DRAW，其各自利用IUPAC命名系統(tǒng))。例如，化合物 即根據(jù)式I的化合物，其中R1為芐基，R2為丙基(特別是異丙基)，R2’為氫；R12為-N(R4)(COR3)；R3為3，4-二甲基苯基-；R4為3-氨基丙基-；R5、R6和R8為氫；而R7為氰基；將其命名為N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-3，4-二甲基-苯甲酰胺。
同樣，化合物 即根據(jù)式I的化合物，其中R1為3-甲氧基-芐基，R2為丙基(特別是異丙基)，R2’為氫；R12為取代的咪唑啉；R5，R6，和R8為氫；R7為氯；R9為亞甲二氧基苯基-；R10、R10′、R14和R14’為氫；可以將其命名為2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-7-氯-3-(3-甲氧基-芐基)-色烯-4-酮(2-[1-(2-benzo[1，3]dioxol-5-yl-4，5-dihydro-imidazol-1-yl)-2-methyl-propyl]-7-chloro-3-(3-methoxy-benzyl)-chromen-4-one)。
式I的化合物的合成式I的化合物可以根據(jù)參照以下反應(yīng)方案所述的方法或者利用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)來(lái)制備。例如參見(jiàn)Hirao等人(1984)Synthesis1076-1078和Coppola等人(1981)Synthesis 523-526，它們引入本文作參考。
除非另外說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“溶劑”、“惰性有機(jī)溶劑”或“惰性溶劑”意指在相關(guān)描述的反應(yīng)條件下為惰性的溶劑[例如包括苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃(″THF″)、二甲基甲酰胺(″DMF″)、氯仿、二氯甲烷(或甲叉二氯)、乙醚、甲醇、吡啶等]。除非有相反的說(shuō)明，用于本發(fā)明的反應(yīng)的溶劑是惰性有機(jī)溶劑。
術(shù)語(yǔ)″q.s.″意指加入足以實(shí)現(xiàn)所述功能，例如使溶液變成目標(biāo)體積(即100％)的數(shù)量。
一般地，羧酸的酯可以通過(guò)常規(guī)酯化方法來(lái)制備，例如烷基酯可以通過(guò)用適宜的鏈烷醇，通常在酸性條件下處理所需的羧酸來(lái)制備。同樣，酰胺可以使用常規(guī)酰胺化方法來(lái)制備，例如酰胺可以通過(guò)用適宜的胺處理相關(guān)的羧酸來(lái)制備?；蛘?，可以任選在三甲基鋁存在下，根據(jù)Tetrahedron Lett.48，4171-4173，1977所述的方法，用胺處理諸如酸的甲酯的低級(jí)烷基酯，得到所需的酰胺。羧基可以作為烷基酯，例如甲酯得到保護(hù)，所述的酯可以用常規(guī)的方法制備和除去，一種用于將甲酯基轉(zhuǎn)化成羧基的方便的方法是使用氫氧化鋰水溶液。
本文提及的化合物的鹽和溶劑化物可以根據(jù)需要用本領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)。例如，如果本發(fā)明的化合物為酸，則可以通過(guò)用無(wú)機(jī)或有機(jī)堿，如胺(伯、仲或叔)、堿金屬或堿土金屬氫氧化物等處理游離酸來(lái)制備所需的堿加成鹽。適宜的鹽的例示性實(shí)例包括由以下物質(zhì)衍生的有機(jī)鹽氨基酸如甘氨酸和精氨酸；氨；伯、仲和叔胺；如乙二胺，和環(huán)胺如環(huán)己胺、哌啶、嗎啉和哌嗪；以及由鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁和鋰衍生的無(wú)機(jī)鹽。
如果化合物為堿，則所需的酸加成鹽可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的任何適宜的方法制備，包括用無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或者用有機(jī)酸如乙酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、苦杏仁酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃糖苷酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羥基酸如檸檬酸或酒石酸、氨基酸如天門(mén)冬氨酸或谷氨酸、芳族酸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸如對(duì)甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸等處理游離堿。
如果需要的話，本文所述的化合物和中間體的分離和純化可以通過(guò)任何適宜的分離或純化方法，例如過(guò)濾、萃取、結(jié)晶、柱色譜法、薄層色譜法或厚層色譜法或者這些方法的組合來(lái)實(shí)現(xiàn)?？梢詤⒖急疚囊韵碌膶?shí)施例來(lái)具體例示適宜的分離方法。但是，其它等同的分離方法當(dāng)然也可以使用。
反應(yīng)方案的簡(jiǎn)要說(shuō)明反應(yīng)方案1例示式109的化合物，式I的化合物的合成中間體的合成。
反應(yīng)方案2例示式I的化合物的合成，其中R12為-N(R4)(COR3)。
反應(yīng)方案3例示式I的化合物的合成，其中R7為-OH。
反應(yīng)方案4例示式I的化合物的合成，其中R7為-OCH3。
反應(yīng)方案5例示式I的化合物的另一合成，其中R12為-N(R4)(COR3)。
反應(yīng)方案6例示式I的化合物的合成，其中R12為-N(R4)(SO2R3a)。
反應(yīng)方案7例示式I的化合物的合成，其中R12為-N(R4)(CH2R3b)。
反應(yīng)方案8例示式I的化合物的合成，其中R12為任選取代的咪唑基。
反應(yīng)方案9例示式I的化合物的另一合成，其中R12為任選取代的咪唑基。
反應(yīng)方案10例示式I的化合物的合成，其中R12為任選取代的咪唑啉基。
反應(yīng)方案11例示式I的化合物的第二種合成，其中R12為任選取代的咪唑啉基。
反應(yīng)方案12例示式I的化合物的合成，其中R12為-N(R4)(COR3)，其中R3為-OR15。
反應(yīng)方案13例示式I的化合物的合成，其中R12為-N(R4)(COR3)，其中R3為-NHR17。
反應(yīng)方案14例示式1407的化合物的合成，該化合物可以用作合成式I的化合物的中間體。
反應(yīng)方案15例示例示式1505的化合物的合成，該化合物可以用作合成式I的化合物的中間體。
原料任選取代的式101的化合物可商購(gòu)得到，例如購(gòu)自AldrichChemical Company，Milwaukee，WI。其它反應(yīng)物同樣可商購(gòu)得到，或者可以容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常用的合成方法來(lái)制備。
反應(yīng)方案1 式103的化合物的制備參考反應(yīng)方案1，步驟1，在約1分鐘內(nèi)將約1當(dāng)量的氯甲酸乙酯加入0-5℃的在非極性、非質(zhì)子溶劑如THF中的式101的化合物(優(yōu)選其中的氨基保護(hù)基，PG為Boc基團(tuán))和堿如三乙胺的溶液中。約15分鐘后，在約5分鐘內(nèi)加入在非極性、非質(zhì)子溶劑如THF中的過(guò)量二甲基羥胺鹽酸鹽(優(yōu)選約1.2當(dāng)量)和堿如三乙胺的混合物。將產(chǎn)物，式103的化合物分離，并不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
式105的化合物的制備參照反應(yīng)方案1，步驟2，通過(guò)在非極性、非質(zhì)子溶劑如乙醚中混合式R1CH2Br的化合物(通常約3當(dāng)量)和鎂屑來(lái)制備格氏試劑。通常約1.5小時(shí)后完成格利雅反應(yīng)。將在非極性、非質(zhì)子溶劑如乙醚中的式103的化合物的溶液加入該格氏試劑中。應(yīng)該監(jiān)測(cè)溫度，并使其不超過(guò)～30℃。分離并純化產(chǎn)物，式105的化合物。
式107的化合物的制備參照反應(yīng)方案1，步驟3，在～3分鐘內(nèi)將雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(約3.3當(dāng)量)緩慢加入-78℃的在非極性、非質(zhì)子溶劑如THF中的式105的溶液中。應(yīng)該監(jiān)測(cè)反應(yīng)溶液溫度，并以足以防止溫度超過(guò)約-54℃的速度加入堿。在加入完成后，將所得溶液在-78℃下保持約30分鐘。然后加入式106的?；?優(yōu)選純的)。將反應(yīng)溶液于-78℃下保持約30分鐘。分離產(chǎn)物并將其不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
將以上粗產(chǎn)物，堿如碳酸鉀和極性、非質(zhì)子溶劑如DMF的混合物在約室溫下保持約30分鐘。分離并純化產(chǎn)物，式107的化合物。
式109的化合物的制備參照反應(yīng)方案1，步驟4，可以任選地從胺上除去保護(hù)基PG。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，除去保護(hù)基的條件隨不同的保護(hù)而變。這些條件在本領(lǐng)域中是已知的，并可以見(jiàn)于，例如Greene等人，上述。當(dāng)PG為Boc時(shí)，可以通過(guò)用TFA水溶液(優(yōu)選TFA∶H2O，97.5∶2.5)在室溫下處理式107的化合物來(lái)將其除去。分離并純化產(chǎn)物，式109的化合物。
光學(xué)活性化合物的制備在R2不同于R2’的本發(fā)明的化合物中，特定的立體構(gòu)型(如(R)異構(gòu)體)在R2和R2’連接其上的立體中心處可能是優(yōu)選的。該光學(xué)活性化合物可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法制備。例如，將式109的胺溶于惰性有機(jī)溶劑(如IPA)，并加熱至60℃。在單獨(dú)的容器中，將拆分試劑(如二苯甲?；?D-酒石酸)溶解，優(yōu)選溶于相同的溫溶劑中，然后將其快速加入(同時(shí)攪拌)溫的胺溶液中。通過(guò)在16小時(shí)內(nèi)持續(xù)攪拌下冷卻至室溫使反應(yīng)混合物結(jié)晶。分離并純化所需的異構(gòu)體，例如式109的化合物的(R)異構(gòu)體。
為在余下的關(guān)于式I的化合物合成的描述中簡(jiǎn)要起見(jiàn)，應(yīng)該理解可以使用單一異構(gòu)體或異構(gòu)體混合物得到對(duì)應(yīng)的產(chǎn)物。
反應(yīng)方案2
式203的制備參照反應(yīng)方案2，步驟1，向式109的化合物的溶液中連續(xù)加入稍過(guò)量(優(yōu)選約1.2當(dāng)量)的包含R4’的醛(即具有式R4’CHO的化合物，其中R4’CH2-等同于上述的R4和R4，或者是這種取代基的受保護(hù)的前體，例如(3-氧-丙基)-氨基甲酸叔丁酯)和還原劑如三乙酸基硼氫化鈉。將所得混合物攪拌數(shù)小時(shí)。分離并純化產(chǎn)物，式203的化合物。
式205的制備參照反應(yīng)方案2，步驟2，向在非極性、非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中的式203的化合物和胺堿如二異丙基乙胺的溶液中加入R3?；?如C1-C(O)-R3，其中R3如上述)。將所得溶液于氮?dú)夥蘸褪覝叵聰嚢钄?shù)小時(shí)。分離并純化產(chǎn)物，式205的化合物。
式207的制備任選地，然后除去式205的化合物的任何保護(hù)基。例如，如果R4包含保護(hù)基為Boc的受保護(hù)的胺，則可以通過(guò)用酸如三氟乙酸在非極性、非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中的處理式205的化合物，同時(shí)在約室溫下保持反應(yīng)來(lái)除去Boc基團(tuán)。該反應(yīng)通過(guò)例如TLC監(jiān)測(cè)。一旦完成，分離并純化產(chǎn)物，式207的化合物。
反應(yīng)方案3 式303的化合物的制備參照反應(yīng)方案3，步驟1，向在非極性、非質(zhì)子溶劑如DMF中的式301的化合物的溶液中加入氫化鈉。將所得溶液于約45℃下攪拌約5分鐘，然后通過(guò)移液管加入烯丙醇(約1.4當(dāng)量)。將所得溶液于約45℃下攪拌約12小時(shí)，然后冷卻至室溫。分離產(chǎn)物，式303的化合物，不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
式305的化合物的制備參照反應(yīng)方案3，步驟2，向在非質(zhì)子溶劑如乙腈中的式303的化合物的室溫溶液中加入嗎啉，然后加入Pd(PPh3)4。將所得溶液攪拌約5分鐘。分離并純化產(chǎn)物，式305的化合物。
反應(yīng)方案4
參照反應(yīng)方案4，將式401的化合物溶于在甲醇中的0.5M甲醇鈉，并加熱至約70℃。將溫度于約70℃下持續(xù)約12小時(shí)，然后冷卻至室溫。分離并純化產(chǎn)物，式403的化合物。
反應(yīng)方案5
式503的制備參照反應(yīng)方案5，步驟1，室溫下在約5分鐘內(nèi)向在非極性、非質(zhì)子溶劑如CH2Cl2中的式501的化合物和堿如三乙胺的溶液中加入約1當(dāng)量的式Cl-(CO)-CH2R的?；?。在約30分鐘后，分離產(chǎn)物，式503的化合物，并不經(jīng)任何進(jìn)一步的純化而使用。
式505的化合物的制備參照反應(yīng)方案5，步驟2，在約140℃下，在約15分鐘內(nèi)將AlCl3(約1.3當(dāng)量)緩慢加入式503的化合物中。在氣體產(chǎn)生停止后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。分離并純化產(chǎn)物，式505的化合物。
式507的化合物的制備參照反應(yīng)方案5，步驟3，將式505的化合物和胺基團(tuán)已被保護(hù)基PG(優(yōu)選Boc基團(tuán))適宜保護(hù)的式506的氨基酸(優(yōu)選約1.1當(dāng)量)、偶合試劑如HBTU(優(yōu)選約1.2當(dāng)量)、堿如TEA，和非極性、非質(zhì)子溶劑如CH2Cl2在室溫下保持約5小時(shí)。分離并純化產(chǎn)物，式507的化合物。
式509的化合物的制備參照反應(yīng)方案5，步驟4，將在極性、非質(zhì)子溶劑如DMF中的式507的酯和堿如碳酸鉀的混合物在約140℃下加熱。約30分鐘后，分離并純化產(chǎn)物，式509的化合物。
式511的化合物的制備參照反應(yīng)方案5，步驟5，然后除去胺保護(hù)基PG。當(dāng)PG為Boc時(shí)，這可以通過(guò)用酸的水溶液(優(yōu)選97.5∶2.5 TFA∶H2O)于室溫下處理約1小時(shí)來(lái)完成。分離游離胺，并不經(jīng)進(jìn)一步純而使用。
將所得產(chǎn)物，包含R4的醛(即具有式R4’CHO的化合物，其中R4’CH2-等于上述的R4和R4，或者是這種取代基的受保護(hù)的前體，例如(3-氧-丙基)-氨基甲酸叔丁酯；優(yōu)選約1.45當(dāng)量)，還原劑如Na(OAc)3BH，和非極性、非質(zhì)子溶劑如CH2Cl2在室溫下保持約3小時(shí)。分離并純化產(chǎn)物，式511的化合物。
式513的化合物的制備參照反應(yīng)方案5，步驟6，室溫下向式511的化合物、堿如二異丙基乙胺，和非極性、非質(zhì)子溶劑如CH2Cl2的溶液中加入式R3COCl的?；?優(yōu)選約2當(dāng)量)。在約2.5小時(shí)后，分離并純化產(chǎn)物，式513的化合物。
反應(yīng)方案6 參照反應(yīng)方案6，向在非極性、非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中的式203的化合物和胺堿如二異丙基乙胺的溶液中加入具有式Cl-S(O)2-R3a或O-(S(O)2-R3a)2的化合物，其中R3a如上述。將所得溶液于氮?dú)夥蘸褪覝叵聰嚢钄?shù)小時(shí)。分離并純化產(chǎn)物，式603的化合物。
反應(yīng)方案7 參照反應(yīng)方案7，向在非極性、非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中的式203的化合物和胺堿如二異丙基乙胺的溶液中加入具有式X-CH2-R3b的化合物，其中R3b如上述，而X為Br、Cl、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。將所得溶液于氮?dú)夥蘸褪覝鼗蚣訜嵯聰嚢钄?shù)小時(shí)。分離并純化產(chǎn)物，式703的化合物。
反應(yīng)方案8
式803的制備參照反應(yīng)方案8，步驟1，在堿(如碳酸鉀)存在下向溶于極性、非質(zhì)子溶劑(如DMF)中的任選取代的式109的化合物中加入1當(dāng)量的任選取代的適宜保護(hù)的醛，其中這種醛還包含離去基團(tuán)，優(yōu)選鹵化物(如溴乙醛二甲基縮醛)。將溶液加熱回流，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成(例如通過(guò)TLC)。將反應(yīng)混合物冷卻，并分離并純化對(duì)應(yīng)的任選取代的式803的化合物。
式805的制備參照反應(yīng)方案8，步驟2，在約1.5摩爾當(dāng)量的胺堿(如三乙胺)存在下，向在惰性溶劑(如二氯甲烷)中的任選取代的式803的化合物中加入約1.5摩爾當(dāng)量的R9?；龋鏑l-C(O)-R9，其中R9如本文所述。該反應(yīng)在攪拌和室溫下進(jìn)行4-24小時(shí)。通過(guò)例如TLC監(jiān)測(cè)完成。分離并純化對(duì)應(yīng)的式805的化合物。
式807的制備參照反應(yīng)方案8，步驟3，將在乙酸中的式805的化合物和過(guò)量乙酸銨的溶液加熱回流1-4小時(shí)。通過(guò)例如TLC監(jiān)測(cè)完成。分離并純化對(duì)應(yīng)的式807的化合物。
反應(yīng)方案9
式903的制備參照反應(yīng)方案9，步驟1，室溫下攪拌在極性、非質(zhì)子溶劑如DMF中的式109的化合物、式R13′(CO)CH2X的α-鹵代酮試劑(其中X為鹵化物，而R13′如本文所述)，和約1當(dāng)量的堿如碳酸鉀的懸浮液。用水稀釋反應(yīng)物，并未經(jīng)純化而將通常為固體的所得化合物，式903的化合物用于隨后的步驟。如果所得化合物不為固體，則用標(biāo)準(zhǔn)方法分離之，然后用于隨后的步驟。
式905的制備參照反應(yīng)方案9，步驟2，將在有機(jī)溶劑如二氯甲烷中的式903的化合物、約1當(dāng)量的胺堿如三乙胺和約1當(dāng)量的?；?如式R9-COCl的化合物)的溶液于室溫下攪拌數(shù)小時(shí)。通過(guò)例如TLC監(jiān)測(cè)完成。分離并純化對(duì)應(yīng)的式905的化合物。
式907的制備參照反應(yīng)方案9，步驟3，使用Dean-Stark阱和冷凝器將在乙酸中的式905的化合物和過(guò)量乙酸銨的溶液加熱回流。通過(guò)例如TLC監(jiān)測(cè)完成。分離并純化對(duì)應(yīng)的式907的化合物。
式909的制備參照反應(yīng)方案9，步驟4，當(dāng)R13′包含受保護(hù)的氨基烷基時(shí)，可以除去氨基保護(hù)的基團(tuán)。例如，當(dāng)氨基作為對(duì)應(yīng)的鄰苯二甲酰亞胺得到保護(hù)時(shí)，如下除去保護(hù)基。將在極性、質(zhì)子溶劑如乙醇中的式907的化合物和過(guò)量無(wú)水肼的溶液加熱回流。將反應(yīng)物冷卻至5℃，并濾出任何沉淀。將濾液真空濃縮并純化，得到式909的化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可以用其它條件除去其它保護(hù)基。
反應(yīng)方案10
式1003的制備參照反應(yīng)方案10，步驟1，用任選取代的含醛氨基甲酸酯將式109的胺還原氨化，得到尿烷中間體。更具體而言，向在二氯甲烷中的式109的化合物和1當(dāng)量的適宜保護(hù)的醛(Seki等人，Chem.Pharm.Bull.1996，44，2061)的溶液中加入稍過(guò)量的還原劑，如三乙酸基硼氫化鈉。將所得混濁混合物保持在室溫下。通過(guò)例如TLC監(jiān)測(cè)完成。分離對(duì)應(yīng)的式1003的化合物，并將其不經(jīng)純化而用于隨后的步驟。
式1005的制備參照反應(yīng)方案10，步驟2，然后除去氨基保護(hù)基PG。當(dāng)PG為Boc保護(hù)基時(shí)，這可以通過(guò)用強(qiáng)酸如三氟乙酸處理在非極性、非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中的式1003的化合物的溶液來(lái)完成。將所得溶液于室溫下保持過(guò)夜，并減壓濃縮。分離殘余物，得到式1005的化合物，將其不經(jīng)純化而用于隨后的步驟。
式1007的制備參照反應(yīng)方案10，步驟3，向在非極性、非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中的式1005的化合物的溶液中加入過(guò)量，優(yōu)選約2當(dāng)量的胺堿如三乙胺，然后加入約1當(dāng)量或稍過(guò)量的式R9-CO-Cl的?；取⑺萌芤河谑覝叵聰嚢杓s3小時(shí)。通過(guò)例如TLC監(jiān)測(cè)完成。分離并純化對(duì)應(yīng)的式1007的化合物。
式1009的制備參照反應(yīng)方案10，步驟4，將在過(guò)量三氯氧化磷中的式1007的化合物的溶液加熱回流。8小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并減壓濃縮。分離并純化對(duì)應(yīng)的式1009的化合物。
反應(yīng)方案11 式1109的制備作為反應(yīng)方案10的步驟3和4的另一選擇，可在不分離中間體酰胺的情況下將式1005的伯胺?；?，然后進(jìn)行乙酸介導(dǎo)的環(huán)化，產(chǎn)生式1109的目標(biāo)化合物。此路線如反應(yīng)方案11所示。
更具體而言，向在非極性、非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中的式1005的化合物的溶液中加入過(guò)量，優(yōu)選約2當(dāng)量的胺堿，如三乙胺，然后加入約1當(dāng)量的式R9-CO-Cl的?；取⑺萌芤河谑覝叵聰嚢?小時(shí)，然后減壓蒸發(fā)。用冰醋酸處理所得固體，然后將所得懸浮液加熱回流約48小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至室溫，然后減壓蒸發(fā)。分離并純化對(duì)應(yīng)的式1109的化合物。
反應(yīng)方案12 參照反應(yīng)方案12，使式203的化合物與稍過(guò)量的式R15O(CO)Cl的化合物在堿如三乙胺存在下，在非極性、非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中反應(yīng)。分離并純化產(chǎn)物，式1203的化合物。
反應(yīng)方案13 參照反應(yīng)方案13，使式203的化合物與稍過(guò)量的異氰酸酯R17-N＝C＝O在堿如三乙胺存在下，在非極性、非質(zhì)子溶劑如二氯甲烷中反應(yīng)。分離并純化產(chǎn)物，式1303的化合物。
反應(yīng)方案14
式1403的化合物的制備參照反應(yīng)方案14，步驟1，將非極性、非質(zhì)子溶劑如THF，和在非極性、非質(zhì)子溶劑中的過(guò)量任選取代的乙烯基溴化鎂的溶液(更優(yōu)選在THF中的約3當(dāng)量的1.0M任選取代的乙烯基溴化鎂的溶液)冷卻至-78℃，同時(shí)在氮?dú)夥障聰嚢琛Ｔ诩s30分鐘內(nèi)滴加在非極性、非質(zhì)子溶劑如THF中的式1401的化合物的溶液來(lái)處理混合物。將混合物在-78℃下攪拌30分鐘后，移出冷卻浴，并使反應(yīng)混合物緩慢暖至室溫過(guò)夜(約15小時(shí))。分離并純化產(chǎn)物，式1403的化合物。
式1405的化合物的制備參照反應(yīng)方案14，步驟2，在惰性氣氛，如氬氣氛下，向在無(wú)水、非極性、非質(zhì)子溶劑如乙腈中的式1403的化合物的溶液中加入約1當(dāng)量的式R1’-X的化合物(其中R1’是任選取代的乙烯基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，而X為I、Br或-OTf)，和堿如三乙胺，然后加入乙酸鈀(II)(優(yōu)選約0.025當(dāng)量)。將所得溶液加熱至約80℃。約15小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。分離并立即純化產(chǎn)物，式1405的化合物。
式1407的化合物的制備在氮?dú)夥障?，向在非極性、非質(zhì)子溶劑如乙酸乙酯中的式1405的化合的的溶液中加入10重量％擔(dān)載在碳上的鈀。用氫氣球置換氮，并清洗燒瓶。3小時(shí)后，用氮清洗反應(yīng)燒瓶，并用C鹽濾墊過(guò)濾(用溶劑如乙酸乙酯沖洗)。分離并純化產(chǎn)物，式1407的化合物。
反應(yīng)方案15 式1503的化合物的制備參照反應(yīng)方案15，步驟1，將約1當(dāng)量的羰基二咪唑緩慢加入在非極性、非質(zhì)子溶劑如THF中的式1501的化合物(優(yōu)選其中的氨基保護(hù)基PG為Boc)的室溫溶液中。在約1小時(shí)后，分離產(chǎn)物，式1503的化合物，并不經(jīng)純化而使用。
式1505的化合物的制備參照反應(yīng)方案15，步驟2，由在非極性、非質(zhì)子溶劑如THF中的式R1CH2Br的化合物和鎂屑制備格氏試劑。將在非極性、非質(zhì)子溶劑如THF中的式1503的化合物的溶液冷卻至約0-5℃。然后通過(guò)注射器將格氏試劑的溶液加入式1503的化合物的0-5℃的溶液中。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)溫度，并使其不超過(guò)約15℃。將反應(yīng)混合物在約0-5℃下保持約1小時(shí)。分離并純化產(chǎn)物，式1505的化合物。
優(yōu)選的方法和最終步驟使式I的化合物任選與藥學(xué)可接受的酸或堿接觸以形成對(duì)應(yīng)的酸或堿加成鹽。
使式I的化合物的藥學(xué)可接受的酸加成鹽任選與堿接觸以形成對(duì)應(yīng)的式I的游離堿。使式I的化合物的藥學(xué)可接受的堿加成鹽任選與酸接觸以形成對(duì)應(yīng)的式I的游離酸。
優(yōu)選的化合物當(dāng)R2或R2′不為氫時(shí)優(yōu)選的R1當(dāng)考慮式I的化合物時(shí)，在R2或R2’之一不為氫或都不為氫(更優(yōu)選R2或R2’之一不為氫)時(shí)的優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1選自氫、任選取代的C1-C8烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-和任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-(更優(yōu)選任選取代的芳基和任選取代的芳基-C1-C4-烷基-)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1選自氫、任選取代的C1-C4烷基、任選取代的苯基-C1-C4-烷基-、任選取代的萘基甲基、任選取代的苯基，和萘基。更優(yōu)選R1為任選取代的苯基-C1-C4-烷基-或任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-。
在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1為萘基、苯基、溴苯基、氯苯基、甲氧基苯基、乙氧基苯基、甲苯基、二甲基苯基、氯氟苯基、甲基氯苯基、乙基苯基、苯乙基、芐基、氯芐基、甲基芐基、甲氧基芐基、氰基芐基、羥基芐基、二氯芐基、二甲氧基芐基或萘基甲基。更優(yōu)選R1為芐基、氰基芐基、甲氧基芐基或萘基甲基。最優(yōu)選R1為芐基。
R2和R2’為氫時(shí)優(yōu)選的R1在R2和R2’均為氫的實(shí)施方案中，優(yōu)選R1選自任選取代的芳基、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的雜芳基和任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-，但條件是R1不是取代的苯基。更優(yōu)選R1為任選取代的芳基-C1-C4烷基-或任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-。更優(yōu)選當(dāng)R2和R2’均為氫時(shí)，R1選自任選取代的苯基-C1-C4-烷基和任選取代的萘基甲基。在R2和R2’均為氫的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1選自芐基、氯芐基、甲基芐基、甲氧基芐基、氰基芐基、羥基芐基、二氯芐基、二甲氧基芐基和萘基甲基。更優(yōu)選R1為芐基、氰基芐基、甲氧基芐基或萘基甲基。更優(yōu)選R1為芐基。
優(yōu)選的R2在考慮式I的化合物時(shí)，并且如本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的，本文所述的化合物在R2和R2’連接其上的碳上具有可能的手性中心。R2和R2’基團(tuán)可以相同或不同；如果不同的話，該化合物是手性的(即具有立體中心)。當(dāng)R2和R2’不同時(shí)，在優(yōu)選的的實(shí)施方案中R2′為氫，而R2不為氫。本發(fā)明包括使用純對(duì)映異構(gòu)體和對(duì)映異構(gòu)體混合物，包括外消旋混合物，雖然通常優(yōu)選使用基本上光學(xué)純的對(duì)映異構(gòu)體。術(shù)語(yǔ)“基本上光學(xué)純的”或者“對(duì)映異構(gòu)體純的”意指具有至少約95％的所描述的對(duì)映異構(gòu)體，而沒(méi)有一種雜質(zhì)超過(guò)約1％，優(yōu)選至少約97.5％對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2和R2’連接其上的立體中心是R構(gòu)型。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R2為任選取代的C1-C4烷基，而R2’為氫或任選取代的C1-C4烷基。更優(yōu)選R2’為氫，而R2為任選取代的C1-C4烷基。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2選自甲基、乙基、丙基(特別是環(huán)丙基或異丙基)、丁基(特別是叔丁基)、甲硫基乙基、甲硫基甲基、氨基丁基、(CBZ)氨基丁基、環(huán)己基甲基、芐氧基甲基、甲基亞硫?；一⒓谆鶃喠蝓；谆土u基甲基，而R2’為氫。特別優(yōu)選當(dāng)R2’為氫時(shí)，R2為乙基或丙基(特別是環(huán)丙基或異丙基)。更優(yōu)選R2為異丙基。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2和R2′連接其上的立體中心是R構(gòu)型。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2和R2′均為氫。
當(dāng)R12為-N(R4)(COR3)時(shí)優(yōu)選的R3基團(tuán)當(dāng)考慮式I的化合物(其中R12為-N(R4)(COR3))時(shí)，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3選自任選取代的C1-C8烷基、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的雜芳基、任選取代的芳基、R15O-和R17-NH-，R15選自任選取代的C1-C8烷基和任選取代的芳基，而R17選自氫、任選取代的C1-C8烷基和任選取代的芳基。優(yōu)選的R3是任選取代的C1-C8烷基(例如被低級(jí)烷氧基取代的C1-C8烷基)、任選取代的雜芳基和任選取代的芳基。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)R3不為R17NH-或R15O-時(shí)，R3選自苯基；被一個(gè)或多個(gè)以下取代基取代的苯基鹵素、C1-C4烷基、被羥基取代的C1-C4烷基(例如羥基甲基)、C1-C4烷氧基、被C1-C4烷氧基取代的C1-C4烷基、硝基、甲?；Ⅳ然?、氰基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、?；?例如乙?；?、-N-?；?例如N-乙?；?或三氟甲基；芐基；苯氧基甲基-；鹵代苯氧基甲基-；苯基乙烯基-；雜芳基-；被C1-C4烷基取代的雜芳基或被鹵素取代的C1-C4烷基(例如CF3)；被C1-C4烷氧基-和芐氧基甲基-取代的C1-C4烷基。
在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)R3不為R17NH-或R15O-時(shí)，R3選自苯基、鹵代苯基、二鹵代苯基、氰基苯基、鹵代(三氟甲基)苯基、羥基甲基苯基、甲氧基苯基、乙氧基苯基、羧基苯基、乙基苯基、甲苯基、亞甲二氧基苯基、亞乙二氧基苯基、甲氧基氯苯基、二氫-苯并二噁烯基(dihydro-benzodioxinyl)、甲基鹵代苯基、三氟甲基苯基、雙(三氟甲基)苯基芐基、呋喃基、C1-C4烷基取代的呋喃基、三氟甲基呋喃基、C1-C4烷基取代的三氟甲基呋喃基、苯并呋喃基、苯硫基、C1-C4烷基取代的苯硫基、苯并噻吩基、苯并噻二唑基、吡啶基、吲哚基、甲基吡啶基、三氟甲基吡啶基、吡咯基、喹啉基、甲代吡啶基、吡唑基、C1-C4烷基取代的吡唑基、N-甲基吡唑基、C1-C4烷基取代的N-甲基吡唑基、C1-C4烷基取代的吡嗪基、C1-C4烷基取代的異噁唑基、苯并異噁唑基、嗎啉代甲基、甲硫基甲基、甲氧基甲基、N-甲基咪唑基和咪唑基。進(jìn)一步更優(yōu)選地，R3為甲苯基、鹵代苯基、鹵代甲基苯基、羥基甲基苯基、亞甲二氧基苯基、甲?；交蚯杌交?。
在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)R3為R17NH-時(shí)，R17選自氫、C1-C4烷基；環(huán)己基；苯基；和被鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4烷硫基取代的苯基。
在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)R3為R17NH-時(shí)，R17為氫、異丙基、丁基、環(huán)己基、苯基、溴苯基、二氯苯基、甲氧基苯基、乙基苯基、甲苯基、三氟甲基苯基或甲基硫代苯基。
在R3為R15O-的實(shí)施方案中，R15選自任選取代的C1-C8烷基和任選取代的芳基。
當(dāng)R12為-N(R4)(SO2R3a)時(shí)優(yōu)選的R3a基團(tuán)優(yōu)選地，當(dāng)R12為-N(R4)(SO2R3a)時(shí)，R3a選自C1-C13烷基；苯基；萘基；被鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、氰基、硝基、亞甲二氧基或三氟甲基取代的苯基；聯(lián)苯基和雜芳基。更優(yōu)選R3a選自被鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、氰基、硝基、亞甲二氧基或三氟甲基取代的苯基和萘基。
當(dāng)R12為-N(R4)(CH2R3b)時(shí)優(yōu)選的R3b基團(tuán)優(yōu)選地，當(dāng)R12為-N(R4)(CH2R3b)時(shí)，R3b選自C1-C13烷基；取代的C1-C4烷基；苯基；萘基；被羧基、烷氧羰基、氰基、鹵素、C1-C4烷基-、C1-C4烷氧基、硝基、亞甲二氧基或三氟甲基取代的苯基；聯(lián)苯基，芐基；和雜環(huán)基。
最優(yōu)選，R3b選自鹵代苯基、多鹵代苯基、甲基鹵代苯基、甲苯基、二甲基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、氰基苯基、三氟甲基苯基、三氟甲氧基苯基、雙(三氟甲基)苯基、羧基苯基、叔丁基苯基、甲氧羰基苯基、哌啶基和萘基。
當(dāng)R12為-NHR4、-N(R4)(COR3)或-N(R4)(CH2R3b)時(shí)優(yōu)選的R4基團(tuán)在優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)R1為-NHR4、-N(R4)(COR3)或-N(R4)(CH2R3b)時(shí)，R4選自氫、任選取代的C1-C13烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的雜環(huán)基和任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-(優(yōu)選氫或任選取代的C1-C13烷基)。
更優(yōu)選R4選自氫、C1-C4烷基；環(huán)己基；被羥基、C1-C4烷氧基或C1-C4烷基取代的苯基；芐基；雜芳基甲基-；雜芳基乙基-；雜芳基丙基-；和R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4烷基)氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、C1-C4烷氧基-或N-雜環(huán)基-，特別是吡咯烷基、哌啶子基或咪唑基。
更優(yōu)選R4為R16-亞烷基-，其中R16為氨基、C1-C4烷基氨基-、二(C1-C4烷基)氨基-、C1-C4烷氧基-、羥基或N-雜環(huán)基。優(yōu)選R16為氨基。
在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)R12為-NHR4、-N(R4)(COR3)或-N(R4)(CH2R3b)時(shí)，R4選自氫、甲基、乙基、丙基、丁基、環(huán)己基、羧基乙基、羧基甲基、甲氧基乙基、羥基乙基、羥基丙基、二甲基氨基乙基、二甲基氨基丙基、二乙基氨基乙基、二乙基氨基丙基、氨基丙基、甲基氨基丙基、2，2-二甲基-3-(二甲基氨基)丙基、1-環(huán)己基-4-(二乙基氨基)丁基、氨基乙基、氨基丁基、氨基戊基、氨基己基、氨基乙氧基乙基、異丙基氨基丙基、二異丙基氨基乙基、1-甲基-4-(二乙基氨基)丁基、(t-Boc)氨基丙基、羥基苯基、芐基、甲氧基苯基、甲基甲氧基苯基、二甲基苯基、甲苯基、乙基苯基、(氧代吡咯烷基)丙基、(甲氧羰基)乙基、芐基哌啶基、吡啶基乙基、吡啶基甲基、嗎啉基乙基、嗎啉基丙基、哌啶基、氮雜環(huán)丁烷基甲基、氮雜環(huán)丁烷基乙基、氮雜環(huán)丁烷基丙基、吡咯烷基乙基、吡咯烷基丙基、哌啶基甲基、哌啶基乙基、咪唑基丙基、咪唑基乙基、(乙基吡咯烷基)甲基、(甲基吡咯烷基)乙基、(甲基哌啶基)丙基、(甲基哌嗪基)丙基、呋喃基甲基和吲哚基乙基。
更優(yōu)選R4為氨基乙基、氨基丙基、氨基丁基、氨基戊基、氨基己基、甲基氨基乙基、甲基氨基丙基、甲基氨基丁基、甲基氨基戊基、甲基氨基己基、二甲基氨基乙基、二甲基氨基丙基、二甲基氨基丁基、二甲基氨基戊基、二甲基氨基己基、乙基氨基乙基、乙基氨基丙基、乙基氨基丁基、乙基氨基戊基、乙基氨基己基、二乙基氨基乙基、二乙基氨基丙基、二乙基氨基丁基、二乙基氨基戊基或二乙基氨基己基，最優(yōu)選氨基丙基。
當(dāng)R12為-N(R4)(SO2R3a)時(shí)優(yōu)選的R4基團(tuán)優(yōu)選地，當(dāng)R12為-N(R4)(SO2R3a)時(shí)，R4選自C1-C4烷基、環(huán)己基；被羥基、C1-C4烷氧基或C1-C4烷基取代的苯基；芐基；雜芳基甲基-；雜芳基乙基-；雜芳基丙基-；雜芳基乙基-；雜芳基丙基-和R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4烷基)氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、C1-C4烷氧基-或N-雜環(huán)基-，特別是吡咯烷基、哌啶子基或咪唑基。
R12為咪唑優(yōu)選地，當(dāng)R12為咪唑時(shí)，R12具有下式 其中R9選自氫、任選取代的C1-C8烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的芳基-C1-C4-烷氧基-、任選取代的雜芳基-C1-C4-烷氧基-、任選取代的雜芳基-；而R13和R13′獨(dú)立地為氫、任選取代的C1-C8烷基、任選取代的芳基或任選取代的芳基-C1-C4-烷基-(優(yōu)選任選取代的芳基)。更優(yōu)選R9為被C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基-和/或鹵素(特別是C1-C4-烷基和/或鹵素)取代的苯基；苯基；或芐基。進(jìn)一步更優(yōu)選R9為甲苯基；鹵代苯基；或鹵代甲基苯基。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R13為氫，而R13′為取代的C1-C4烷基。更優(yōu)選R13為氫，而R13′為氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、乙酰氨基-甲基、乙酰氨基乙基、芐氧羰基氨基-甲基或芐氧羰基氨基-乙基。
R12為咪唑啉優(yōu)選地，當(dāng)R12為咪唑啉時(shí)，R12具有下式 其中R9選自氫、任選取代的C1-C8烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-和任選取代的雜芳基-；而R10、R10’、R14和R14′獨(dú)立地選自氫、任選取代的C-C8烷基、任選取代的芳基和任選取代的芳基-C1-C4-烷基-。更優(yōu)選R9為亞甲二氧基苯基；苯基；被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和/或鹵素取代的苯基；或芐基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R9為亞甲二氧基苯基-；苯基；或被甲氧基、鹵素和/或甲基(優(yōu)選鹵素和/或甲基，包括甲苯基)取代的苯基，更優(yōu)選亞甲二氧基苯基或所述取代的苯基。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R10、R10′、R14′和R14獨(dú)立地為氫或任選取代的烷基(優(yōu)選任選取代的C1-C4烷基)。更優(yōu)選R10和R10′獨(dú)立地選自氫或任選取代的C1-C4烷基(更特別為甲基或氨基烷基-)，而R14′和R14為氫。
優(yōu)選的R5、R6、R7和R8基團(tuán)當(dāng)考慮式I的化合物時(shí)，在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，R5、R6、R7和R8獨(dú)立地選自氫；?；?，烷基；被烷基、烷氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺酰基、烷基磺酰氨基、烷硫基、羧基烷基、酰胺基、氨基羰基、低級(jí)烷基氨基羰基-(例如甲基氨基羰基-或乙基氨基羰基-)、二(低級(jí)烷基)氨基羰基-(例如二甲基氨基羰基-或二乙基氨基羰基-)、芳基或雜芳基取代的烷基；烷氧基；被烷基、酰基、烷氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺?；?、烷基磺酰氨基、烷硫基、羧基烷基、酰胺基、氨基羰基、低級(jí)烷基氨基羰基-(例如甲基氨基羰基-或乙基氨基羰基-)、二(低級(jí)烷基)氨基羰基-(例如二甲基氨基羰基-或二乙基氨基羰基-)、芳基或雜芳基取代的烷氧基；鹵素；羥基；硝基；氰基；二烷基氨基；烷基磺酰基；烷基磺酰氨基；烷硫基；羧基烷基；酰胺基；酰氨基羰基；芳基；被烷基、?；?、烷氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺?；?、烷基磺酰氨基、烷硫基、羧基烷基、酰胺基、氨基羰基、低級(jí)烷基氨基羰基-(例如甲基氨基羰基-或乙基氨基羰基-)、二(低級(jí)烷基)氨基羰基-(例如二甲基氨基羰基-或二乙基氨基羰基-)、芳基或雜芳基取代的芳基；雜芳基或被烷基、?；⑼檠趸?、鹵素、羥基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺?；⑼榛酋０被?、烷硫基、羧基烷基、酰胺基、氨基羰基、低級(jí)烷基氨基羰基-(例如甲基氨基羰基-或乙基氨基羰基-)、二(低級(jí)烷基)氨基羰基-(例如二甲基氨基羰基-或二乙基氨基羰基-)、芳基或雜芳基取代的雜芳基。
更優(yōu)選R5、R6、R7和R8獨(dú)立地選自氫、氨基、烷基氨基、羥基、鹵素(特別是氯和氟)、C1-C4烷基(特別是甲基)、C1-C4鹵代烷基(特別是三氟甲基)、C1-C4烷氧基(特別是甲氧基)、C1-C4鹵代烷氧基和氰基。更優(yōu)選R5、R6、R7和R8為甲氧基、氫、氰基或鹵素(特別是Cl、F)。各具體的取代基進(jìn)一步優(yōu)選R5為氨基、烷基氨基、三氟甲基、氫或鹵素；R6為氫、烷基(特別是甲基)或鹵素；R7為氫、鹵素、烷基(特別是甲基)、烷氧基(特別是甲氧基)、氰基或三氟甲基；而R8為氫或鹵素。更進(jìn)一步優(yōu)選這樣的化合物，其中R5、R6、R7和R8中僅一個(gè)不為氫，特別是R7。更優(yōu)選這樣的化合物，其中R5、R6和R8為氫，而R7為氰基、甲氧基或鹵素(特別是Cl、F)。
優(yōu)選的鹽形式優(yōu)選的化合物通常能夠形成酸加成鹽(即包含與藥學(xué)可接受的酸反應(yīng)形成酸加成鹽的部位)。本發(fā)明包括式I的化合物的藥學(xué)可接受的酸加成鹽。本發(fā)明的化合物的酸加成鹽以標(biāo)準(zhǔn)方式，在適宜的溶劑中，由母體化合物和過(guò)量酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、馬來(lái)酸、琥珀酸或甲磺酸制備。優(yōu)選的鹽形式為鹽酸鹽、磷酸鹽和草酸鹽，特別優(yōu)選鹽酸鹽形式。
非藥學(xué)可接受的本發(fā)明化合物的鹽和/或溶劑化物可以用作制備式(I)的化合物的藥學(xué)可接受的鹽和/或溶劑化物的中間體或式(I)的化合物本身，其本身構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。
優(yōu)選的亞屬在式I的化合物的特別優(yōu)選的亞屬中，R1為芐基、鹵代芐基、甲氧基芐基-、氰基芐基或萘基甲基-；R2為乙基或丙基；R2′為氫；R5為氫；R6為氫；R7為鹵素、氰基、甲氧基或氫；R8為氫；而R12為-NR4(COR3)，其中R3為任選取代的芳基(優(yōu)選鹵代苯基、鹵代甲基苯基-、亞甲二氧基苯基-、甲氧基苯基-、乙氧基苯基-、氰基苯基-或被低級(jí)?；虻图?jí)烷基氨基羰基-，例如甲基氨基羰基-或乙基氨基羰基-，或二(低級(jí)烷基)氨基羰基-，例如二甲基氨基羰基-或二乙基氨基羰基-取代的苯基；而R4為R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4)烷基氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、吡咯烷基、哌啶子基、咪唑基和嗎啉代(更優(yōu)選在此實(shí)施方案中，R1為芐基、鹵代芐基、甲氧基芐基、氰基芐基或萘基甲基；而R2為丙基(特別是異丙基-或環(huán)丙基)。
在式I的化合物的另一個(gè)特別優(yōu)選的亞屬中，R1為芐基、鹵代芐基、甲氧基芐基-、氰基芐基或萘基甲基-；R2為乙基或丙基；R2’為氫；R5為氫；R6為氫；R7為鹵素、氰基、甲氧基或氫；R8為氫；R12為-NR4(CH2R3b)，其中R4為R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4)烷基氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、吡咯烷基、哌啶子基、咪唑基或嗎啉代；而R3b為任選取代的芳基。
在式I的化合物的特別優(yōu)選的亞屬中，R1為芐基、鹵代芐基、甲氧基芐基、氰基芐基或萘基甲基；R2選自乙基或丙基；R2′為氫；R5為氫；R6為氫；R7為鹵素、氰基、甲氧基或氫；R8為氫；而R12為上式的任選取代的咪唑啉基，其中R10、R10′、R14和R14′獨(dú)立地為氫或任選取代的烷基(優(yōu)選任選取代的C1-C4烷基)；而R9為任選取代的苯基(優(yōu)選鹵代苯基、鹵代甲基苯基、甲苯基或亞甲二氧基苯基)。更優(yōu)選在此實(shí)施方案中，R1為芐基、甲氧基芐基或氰基芐基；R2為丙基(特別是異丙基或環(huán)丙基)；而R16為氨基。
在式I的化合物的特別優(yōu)選的亞屬中，R1為芐基、鹵代芐基、甲氧基芐基、氰基芐基或萘基甲基；R2選自乙基或丙基；R2’為氫；R5為氫；R6為氫；R7為鹵素、氰基、甲氧基或氫；R8為氫；而R12為上式的任選取代的咪唑，其中R13為氫，而R13’為氫或任選取代的烷基(優(yōu)選任選取代的C1-C4烷基)；而R9為任選取代的芳基(優(yōu)選鹵代苯基、鹵代甲基苯基、甲苯基或亞甲二氧基苯基)。更優(yōu)選R13為氫，而R13′為氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、乙酰氨基-甲基、乙酰氨基乙基、芐氧羰基氨基-甲基或芐氧羰基氨基-乙基。更優(yōu)選在此實(shí)施方案中，R1為芐基、甲氧基芐基或氰基芐基；R2為丙基(特別是異丙基或環(huán)丙基)；而R16為氨基。
當(dāng)R12為-N(R4)(SO2R3a)時(shí)，R1最優(yōu)選選自C1-C4烷基、芐基、取代的芐基和取代的苯基；R2為C1-C4烷基；R2′為氫；R3a選自取代的苯基和萘基；R4為R16-亞烷基-；R7為氫、氟、甲基或氯；R5、R6和R8為氫；而R16選自羥基、二(C1-C4)氨基、(C1-C4烷基)氨基、氨基、吡咯烷基、哌啶子基、咪唑基和嗎啉代。
當(dāng)R12為-NHR4或-N(R4)(CH2R3b)時(shí)，R1優(yōu)選選自氫、任選取代的C1-C4烷基、任選取代的芐基、任選取代的苯基和任選取代的萘基甲基；R2為任選取代的C1-C4烷基，而R2’為氫；R3b選自任選取代的烷基；任選取代的苯基；聯(lián)苯基，任選取代的芳烷基；和任選取代的雜環(huán)基；而R4選自氫，任選取代的C1-C4烷基；環(huán)己基；任選取代的苯基；任選取代的芐基；雜環(huán)基；雜芳基甲基；雜芳基乙基；和雜芳基丙基。更優(yōu)選R4為R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4)烷基氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、C1-C4烷氧基-或N-雜環(huán)基。
當(dāng)R12為-NHR4或-N(R4)(CH2R3b)時(shí)，R1最優(yōu)選選自C1-C4烷基、任選取代的芐基和任選取代的苯基(更優(yōu)選任選取代的芐基，例如芐基、氰基芐基)；R2為任選取代的C1-C4烷基(更優(yōu)選丙基，特別是異丙基或環(huán)丙基)；R2′為氫；R3b選自任選取代的苯基、任選取代的雜環(huán)基和萘基；R4選自氫、任選取代的芐基、任選取代的雜環(huán)基，和R16-亞烷基-；R6和R7選自鹵素、氰基、甲氧基或氫；R5和R8為氫；而R16選自二(C1-C4烷基氨基)-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑基和嗎啉基。
在式I的化合物的特別優(yōu)選的亞屬中，R1為芐基、鹵代芐基(特別是Cl-芐基和F-芐基)、甲氧基芐基-、氰基芐基或萘基甲基-；R2為乙基或丙基；R2’為氫；R5為氫；R6為氫；R7為鹵素、氰基、甲氧基或氫；R8為氫；而R12為-NHR4，其中R4為氫(更優(yōu)選在此實(shí)施方案中，R1為芐基、鹵代芐基、氰基芐基；而R2為丙基，特別是異丙基或環(huán)丙基)。
當(dāng)R3b存在時(shí)，它最優(yōu)選選自被一個(gè)或多個(gè)鹵素、甲基、甲氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基和或甲氧羰基取代的苯基[例如鹵代苯基、多鹵代苯基、甲苯基、二甲基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、氰基苯基、三氟甲基苯基、三氟甲氧基苯基、雙(三氟甲基)苯基、羧基苯基、叔丁基苯基、甲氧羰基苯基]；哌啶基和萘基。
特別優(yōu)選的化合物包括N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[3-(3-氰基-芐基)-7-羥基-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；4-乙?；?N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-甲氧基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-苯甲酰胺；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-芐基-4-氧-4H-色烯-7-腈；3-芐基-2-[1-(4，4-二甲基-2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-4-氧-4H-色烯-7-腈；苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-{1-[7-氯-3-(3-氰基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氯-3-(3-氰基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(7-氯-3-萘-1-基甲基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-2-甲氧基-乙酰胺；4-乙酰基-N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氯-3-(3-氰基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；
3-芐基-2-[1-(4，4-二甲基-2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-7-羥基-色烯-4-酮；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-甲氧基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-甲氧基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；3-芐基-2-[1-(4，4-二甲基-2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-7-甲氧基-色烯-4-酮；3-芐基-7-氟-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，4-二甲基-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-色烯-4-酮；3-芐基-2-[1-(4，4-二甲基-2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-7-氟-色烯-4-酮；3-芐基-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，4-二甲基-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-7-氰基-色烯-4-酮；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；4-乙?；?N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-3-氟-N-{1-[7-氟-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；4-乙酰基-N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氯-3-(3-氰基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-苯甲酰胺；(2-{1-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-2-對(duì)甲苯基-1H-咪唑-4-基}-乙基)-氨基甲酸芐酯；2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，4-二甲基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氰基-色烯-4-酮；4-乙?；?N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氟-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲氧基-苯甲酰胺；苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-{1-[7-氟-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-酰胺；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-羥基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-羥基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氟-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-2-甲氧基-乙酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氟-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-環(huán)丙基-甲基]-4-甲基-苯甲酰胺；2，3-二氫-苯并[1，4]二噁烯-6-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；N-(3-氨基-丙基)-3-氟-N-{1-[7-氰基-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
3-芐基-7-氯-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-色烯-4-酮；3-芐基-7-氟-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-色烯-4-酮；2-[1-(4-氨基甲基-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮；3-芐基-7-甲氧基-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-色烯-4-酮；2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮；4-乙?；?N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-苯甲酰胺；4-乙酰基-N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氰基-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-苯甲酰胺；3-芐基-7-氯-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-色烯-4-酮；3-芐基-7-氟-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-色烯-4-酮；2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氟-色烯-4-酮；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氰基-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-{1-[7-氰基-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-酰胺；3-(2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-7-甲氧基-4-氧-4H-色烯-3-基甲基)-芐腈；3-{7-氯-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-4-氧-4H-色烯-3-基甲基}-芐腈；3-{7-甲氧基-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-4-氧-4H-色烯-3-基甲基}-芐腈；3-{7-氟-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-4-氧-4H-色烯-3-基甲基}-芐腈；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氯-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[3-(3-氰基-芐基)-7-甲氧基-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[3-(3-氰基-芐基)-7-甲氧基-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；3-{2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-7-氟-4-氧-4H-色烯-3-基甲基}-芐腈；3-芐基-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-4-氧-4H-色烯-7-腈；2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-4-氧-4H-色烯-7-腈；3-(7-氯-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-4-氧-4H-色烯-3-基甲基)-芐腈；3-{2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-7-甲氧基-4-氧-4H-色烯-3-基甲基}-芐腈；3-(7-氟-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-4-氧-4H-色烯-3-基甲基)-芐腈；苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-{1-[7-氰基-3-(3-氰基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-酰胺；苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-{1-[3-(3-氰基-芐基)-7-甲氧基-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-酰胺；
苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-{1-[3-(3-氰基-芐基)-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[3-(3-氰基-芐基)-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；苯并[1，3]二噁茂-5-羧酸(3-氨基-丙基)-{1-[7-氯-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氰基-3-(3-氰基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；3-芐基-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-4-氧-4H-色烯-7-腈；2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-甲氧基-色烯-4-酮；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氯-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-2-甲氧基-乙酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[7-氰基-3-(3-氰基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[3-(3-氰基-芐基)-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-7-氯-3-(3-甲氧基-芐基)-色烯-4-酮；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-(3-氟-4-甲基-苯基)-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-芐基-7-氟-色烯-4-酮；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-(3-氟-4-甲基-苯基)-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-芐基-4-氧-4H-色烯-7-腈；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-芐基-7-氟-色烯-4-酮；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-(3-氟-4-甲基-苯基)-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-7-氯-3-(3-甲氧基-芐基)-色烯-4-酮；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-(3-氟-4-甲基-苯基)-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮；3-芐基-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-7-甲氧基-色烯-4-酮；3-(2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-7-氯-4-氧-4H-色烯-3-基甲基)-芐腈；3-(2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-(3-氟-4-甲基-苯基)-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-7-氯-4-氧-4H-色烯-3-基甲基)-芐腈；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-7-氟-3-(3-甲氧基-芐基)-色烯-4-酮；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-(3-氟-4-甲基-苯基)-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-(3-氰基-芐基)-4-氧-4H-色烯-7-腈；N-(3-氨基-丙基)-3-氟-N-{1-[7-羥基-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-7-腈；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-4-乙氧基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-6-三氟甲基-煙酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-6-三氟甲基-煙酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-異煙酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-4-氰基-苯甲酰胺；
4-乙酰氨基-N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-6-三氟甲基-煙酰胺；苯并[1，2，3]噻二唑-5-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；苯并[1，2，3]噻二唑-5-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；4-乙酰氨基-N-(3-氨基-丙基)N-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-苯甲酰胺；苯并[1，2，3]噻二唑-5-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-煙酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲氧基-苯甲酰胺；苯并[1，2，3]噻二唑-5-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-吡嗪-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-3-二甲基氨基-苯甲酰胺；2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-7-腈；7-氯-3-(3-甲氧基-芐基)-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-色烯-4-酮；7-氯-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-(3-甲氧基-芐基)-色烯-4-酮；2-[1-(2-苯并[1，3]二噁茂-5-基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-7-氯-3-(3-甲氧基-芐基)-色烯-4-酮；7-氟-3-(3-甲氧基-芐基)-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-色烯-4-酮；7-氟-2-{1-[2-(3-氟-4-甲基-苯基)-4，5-二氫-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基-3-(3-甲氧基-芐基)-色烯-4-酮；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-(3-氟-4-甲基-苯基)-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基-7-氟-3-(3-甲氧基-芐基)-色烯-4-酮；2-{1-[4-(2-乙酰氨基-乙基)-2-(3-氟-4-甲基-苯基)-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-(3-甲氧基-芐基)-4-氧-4H-色烯-7-羧酸酰胺；3-(2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-(3-氟-4-甲基-苯基)-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-7-氟-4-氧-4H-色烯-3-基甲基)-芐腈；N-{1-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-2-對(duì)甲苯基-1H-咪唑-4-基甲基}-乙酰胺；苯并[b]噻吩-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；1-甲基-1H-吲哚-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-叔丁基-2-甲基-2H-吡唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；2，5-二甲基-2H-吡唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-叔丁基-2-甲基-2H-吡唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；2，5-二甲基-2H-吡唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；
2，5-二甲基-2H-吡唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-2H-吡唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-2H-吡唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；呋喃-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；呋喃-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；2，5-二甲基-呋喃-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；2，5-二甲基-呋喃-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-噻吩-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-噻吩-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-異噁唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-2-三氟甲基-呋喃-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-異噁唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-異噁唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；苯并[c]異噁唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；苯并[c]異噁唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；1-甲基-1H-咪唑-4-羧酸(3-氨基-丙基)-[(R)-1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[(R)-1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-3-二甲基氨基-苯甲酰胺；5-甲基-2-三氟甲基-呋喃-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[(R)-1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-異噁唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[(R)-1-(3-芐基-7-氰基-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；1-甲基-1H-咪唑-4-羧酸(3-氨基-丙基)-[(R)-1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[(R)-1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；苯并[c]異噁唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[(R)-1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；和5-甲基-異噁唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[(R)-1-(3-芐基-7-氟-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺。
實(shí)用性、測(cè)試和給藥一般實(shí)用性一旦制備，本發(fā)明的化合物用于多種應(yīng)用，包括改變有絲分裂。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，有絲分裂可以多種方式改變，即，可以通過(guò)增加或減少有絲分裂途徑中的組分的活性來(lái)影響有絲分裂。換句話說(shuō)，有絲分裂可通過(guò)抑制或者活化某些組分而干擾平衡來(lái)影響(如被破壞)。類似的方法可用于改變減數(shù)分裂。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于抑制有絲分裂紡綞體形成，由此導(dǎo)致有絲分裂中延長(zhǎng)的細(xì)胞周期停止。在這方面，術(shù)語(yǔ)“抑制”是指減少或干擾有絲分裂紡綞體形成或?qū)е掠薪z分裂紡綞體功能障礙。本文的術(shù)語(yǔ)“有絲分裂紡綞體形成”是指通過(guò)有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白將微管組合成雙極結(jié)構(gòu)。本文的術(shù)語(yǔ)“有絲分裂紡綞體功能障礙”是指有絲分裂停止或者單極紡綞體形成。
本發(fā)明的化合物用于與有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白，KSP結(jié)合和/或抑制其活性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，KSP是人KSP，盡管該化合物可以用于與來(lái)自其它生物體的KSP驅(qū)動(dòng)蛋白結(jié)合。在這方面，“抑制”意指增加或減少紡綞極分離，導(dǎo)致有絲分裂紡綞極的畸形，即張開(kāi)(splaying)，或者導(dǎo)致有絲分裂紡綞體的形態(tài)干擾。為這些目的的KSP的定義中還包括KSP的變體和/或片段。參見(jiàn)美國(guó)專利6,437,115，該文獻(xiàn)引入本文作參考。還已證明本發(fā)明的化合物對(duì)KSP具有特異性。但是，本發(fā)明包括將該化合物用于結(jié)合或調(diào)節(jié)其它有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白。
本發(fā)明的化合物用于治療細(xì)胞增殖性疾病?？捎帽疚奶峁┑幕衔铩⒔M合物和方法治療的疾病狀態(tài)包括但不限于癌癥(以下進(jìn)一步討論)、自體免疫疾病、真菌病、關(guān)節(jié)炎、移植物排斥反應(yīng)、炎性腸病、醫(yī)療過(guò)程(包括但不限于手術(shù)、血管成形術(shù)等)后誘發(fā)的細(xì)胞增殖。治療包括抑制細(xì)胞增殖?？梢岳斫?，在一些情況下，細(xì)胞有可能不處在異常狀態(tài)，而且仍需要治療。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括應(yīng)用于即將罹患這些疾病或狀態(tài)之任一種的細(xì)胞或者受試者。
認(rèn)為本文提供的化合物、組合物和方法對(duì)于治療癌癥特別有用，所述癌癥包括實(shí)體瘤，如皮膚、乳腺、腦、子宮頸癌、睪丸癌等。更具體而言，可用本發(fā)明的化合物、組合物及方法治療的癌癥包括但不限于心肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂瘤和畸胎瘤；肺支氣管癌(鱗狀細(xì)胞、未分化小細(xì)胞、末分化大細(xì)胞、腺癌)、肺泡(細(xì)支氣管)癌、支氣管腺癌、肉瘤、淋巴瘤、軟骨錯(cuò)構(gòu)瘤、間皮瘤；胃腸道食管(鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰(胰管腺癌、胰島瘤、高血糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、胰腺癌)、小腸(腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波濟(jì)肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂瘤、神經(jīng)纖維瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管腺瘤、絨毛腺瘤、錯(cuò)構(gòu)瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道腎(腺癌、維爾姆斯腫瘤(腎胚細(xì)胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鱗狀細(xì)胞癌、過(guò)渡細(xì)胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原細(xì)胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、絨膜癌、肉瘤、間質(zhì)細(xì)胞癌、纖維瘤、纖維腺癌、腺癌樣腫瘤、脂瘤)；肝臟肝細(xì)胞瘤(肝細(xì)胞癌)、膽管癌、肝胚細(xì)胞瘤、血管肉瘤、肝細(xì)胞腺癌、血管瘤；骨成骨肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤)、多發(fā)性脊髓瘤、惡性巨細(xì)胞腫瘤脊索瘤、軟骨骨瘤(骨軟骨外生骨疣)、良性軟骨瘤、成軟骨細(xì)胞瘤、軟骨粘液纖維瘤、骨樣骨瘤和巨細(xì)胞腫瘤；神經(jīng)系統(tǒng)顱骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黃瘤、畸形性骨炎)、腦膜(腦膜瘤、腦膜肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤病)、腦(星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管瘤、胚組織瘤(松果體瘤)、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)鞘瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、先天性腫瘤)、脊索(神經(jīng)纖維瘤、腦膜瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肉瘤)；婦科子宮(子宮內(nèi)膜癌)、子宮頸(子宮頸癌、腫瘤前子宮頸發(fā)育異常)、卵巢(卵巢癌(漿液囊腺癌、假粘液性囊腺癌、未分類的癌)、粒層-膜細(xì)胞腫瘤、塞爾托利-萊迪希細(xì)胞腫瘤、無(wú)性細(xì)胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀細(xì)胞癌、上皮內(nèi)癌、腺癌、纖維肉瘤、黑素瘤)、陰道(透明細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、葡萄簇狀肉瘤(胚胎橫組肌肉瘤))、輸卵管(癌)；血液血液(髓細(xì)胞樣白血病(急勝和慢性)、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、骨髓增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、脊髓發(fā)育不良綜合癥)、何杰金病、非何杰金淋巴瘤(惡性淋巴瘤)；皮膚惡性黑素瘤、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、卡波濟(jì)肉瘤、痣發(fā)育不良痣(moles dysplastic nevi)、脂瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、癲痕瘤、牛皮癬；以及腺體成神經(jīng)細(xì)胞瘤。因此，本文所用術(shù)語(yǔ)“癌細(xì)胞”包括患任何一種如上所述的病癥的細(xì)胞。
測(cè)試為測(cè)定KSP-調(diào)節(jié)活性，通常將KSP或者本發(fā)明的化合物不可擴(kuò)散地結(jié)合在不溶性載體上，所述載體具有單獨(dú)的樣品接受區(qū)域(如微量滴定板、陣列(array)等)。該不溶性載體可由任何樣品可結(jié)合于其上的材料制成，易于與可溶性材料分離，或者與整個(gè)篩選方法相適應(yīng)。這種載體的表面可以是固體或者多孔性的，而且可以是任何方便的形狀。合適的不溶性載體的實(shí)例包括微量滴定板、陣列、膜和珠。這些材料通常由玻璃、塑料(如聚苯乙烯)、多糖、尼龍或者硝基纖維素、TefionTM等制成。微量滴定板和陣列特別方便，因?yàn)槭褂蒙倭吭噭┖蜆悠芳纯赏瑫r(shí)進(jìn)行大量的測(cè)定。樣品的具體結(jié)合方式不是關(guān)鍵性的，只要其與試劑以及本發(fā)明的整個(gè)方法相適應(yīng)，保持化合物的活性而且不可擴(kuò)散即可。優(yōu)選的結(jié)合方法包括使用抗體(當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)合于載體上時(shí)，其不會(huì)立體地阻斷配體結(jié)合位點(diǎn)或者活化序列)、直接結(jié)合在“粘性”或者離子載體上、化學(xué)交聯(lián)、在表面上合成蛋白質(zhì)或試劑等。在結(jié)合樣品后，通過(guò)洗滌除去過(guò)量未結(jié)合的材料。然后可通過(guò)與牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白或者其他無(wú)毒蛋白或者其他物質(zhì)一起溫育而將樣品接受區(qū)域阻斷。
本發(fā)明的化合物本身可以用于抑制有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白，特別是KSP的活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，將本發(fā)明的化合物與KSP混合，病測(cè)定KSP的活性。驅(qū)動(dòng)蛋白(包括KSP)活性在本領(lǐng)域中是已知的，而且包括一種或者多種驅(qū)動(dòng)蛋白活性。驅(qū)動(dòng)蛋白活性包括影響ATP水解的能力；微管結(jié)合；滑動(dòng)以及聚合/解聚(對(duì)微管動(dòng)力學(xué)的影響)；與紡錘體的其他蛋白質(zhì)結(jié)合；與細(xì)胞周期控制中涉及的蛋白質(zhì)結(jié)合；作為其他酶，如激酶或者蛋白酶的底物；以及特異性驅(qū)動(dòng)蛋白細(xì)胞活性如紡錘極分離。
進(jìn)行游動(dòng)測(cè)定的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的(例如參見(jiàn)Hall等人(1996)，Biophys.J，713467-3476；Turner等人，1996 AnalBiochem.242(1)20-5；Gittes等人，1996，Biophys.J.70(1)418-29；Shirakawa等人，1995，J.Exp.Biol 1981809-15；Winkelmann等人，1995，Biophys.J.682444-53；Winkelmann等人，1995，Biophys.J.6872S)。
也可使用本領(lǐng)域中已知的測(cè)定ATP酶水解活性的方法。優(yōu)選地，使用基于溶液的測(cè)定。美國(guó)專利6,410,254描述了這種測(cè)定，該文獻(xiàn)引入本文作參考。或者，使用常規(guī)方法。例如，可對(duì)驅(qū)動(dòng)蛋白的Pi釋放進(jìn)行定量。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，ATP酶水解活性測(cè)定使用0.3M PCA(高氯酸)和孔雀綠試劑(8.27mM鉬(II)酸鈉、0.33mM孔雀綠草酸鹽，以及0.8mM TrionX-100)。為進(jìn)行該測(cè)定，將10μL反應(yīng)物在90μL冷的0.3M PCA中終止反應(yīng)。使用磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)物，所以可將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為mM所釋放的無(wú)機(jī)磷酸鹽。當(dāng)所有的反應(yīng)物和標(biāo)準(zhǔn)物都已在PCA中終止反應(yīng)時(shí)，在例如微量滴定板的相關(guān)孔中添加100μL孔雀綠試劑。使混合物顯色10-15分鐘，然后讀取板在650nm處的吸光度。如果使用磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)物，則可將吸光度讀數(shù)轉(zhuǎn)化為mM Pi，并相對(duì)時(shí)間作圖。另外，本領(lǐng)域中已知的ATP酶實(shí)驗(yàn)包括熒光素酶測(cè)定。
驅(qū)動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)域的ATP酶活性也可用于監(jiān)測(cè)試劑的作用，且對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的。在一個(gè)實(shí)施方案中，在沒(méi)有微管存在下進(jìn)行驅(qū)動(dòng)蛋白的ATP酶測(cè)定。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在微管存在下進(jìn)行ATP酶測(cè)定。在以上測(cè)定中可檢測(cè)不同類型的試劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，試劑的作用不依賴于微管和ATP的濃度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)增加ATP、微管或者這兩者的濃度，可降低試劑對(duì)驅(qū)動(dòng)蛋白ATP酶的作用。在又一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)增加ATP、微管或者這兩者的濃度，可增強(qiáng)試劑的作用。
體外抑制KSP的生化活性的化合物然后可在體內(nèi)進(jìn)行篩選。體內(nèi)篩選方法包括細(xì)胞周期分布、細(xì)胞生存力，或者有絲分裂紡錘體的存在、形態(tài)、活性、分布或者數(shù)目的測(cè)定。例如通過(guò)流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)細(xì)胞群的細(xì)胞周期分布的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的，測(cè)定細(xì)胞生存力的方法也是如此。例如參見(jiàn)美國(guó)專利6,437,115，該文獻(xiàn)引入本文作參考。監(jiān)測(cè)紡錘體的形成和畸形的顯微方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言也是已知的(例如參見(jiàn)Whitehead and Rattner(1998)，J，Cell Sci.1112251-61；Galgio等人，(1996)J.Cell Biol.，135399-414)，這些文獻(xiàn)引入本文作參考。
本發(fā)明的化合物抑制KSP驅(qū)動(dòng)蛋白。抑制作用的一個(gè)量度是IC50，其定義為KSP的活性相對(duì)于對(duì)照降低50％的化合物濃度。優(yōu)選的化合物IC50低于約1mM，在優(yōu)選實(shí)施方案中，IC50低于約100μM，在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，IC50低于約10μM，在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，IC50低于約1μM，在尤為優(yōu)選的實(shí)施方案中，IC50低于約100nM，而在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，IC50低于約10nM。IC50的測(cè)量使用如本文所述的ATP酶測(cè)定進(jìn)行。
抑制作用的另一個(gè)量度是Ki。對(duì)于IC50低于1μM的化合物，Ki或者Kd定義為本文所述的化合物與KSP相互作用的離解速率常數(shù)。優(yōu)選的化合物具有低于約100μM的Ki，在優(yōu)選實(shí)施方案中，Ki低于約10μM，在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ki低于約1μM，在尤為優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ki低于約100nM，而在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ki低于約10nM。
化合物的Ki基于三個(gè)假設(shè)和Michaelis-Menten方程由IC50測(cè)定。第一，僅一個(gè)化合物分子結(jié)合在酶上，而且沒(méi)有協(xié)同性。第二，活性酶的濃度和測(cè)試化合物是已知的(例如，在制劑中沒(méi)有顯著量的雜質(zhì)或者失活形式)。第三，酶-抑制劑復(fù)合物的酶促速率是零。速率(即化合物濃度)數(shù)據(jù)擬合于以下方程中V=VmaxE0[I·(E0+I0+Kd)·(E0+I0+Kd)2-4E0I02E0]]]>其中V是觀察的速率，Vmax是游離酶的速率，I0是抑制劑濃度，E0是酶濃度，而Kd是酶-抑制劑復(fù)合物的離解常數(shù)。
抑制作用的再一個(gè)量度是GI50，其定義為導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低50％的化合物濃度。優(yōu)選的化合物具有低于約1mMGI50；GI50低于約20μM的化合物是更優(yōu)選的；GI50低于約10μM的化合物是更優(yōu)選的；GI50低于約1μM的化合物是更優(yōu)選的；GI50低于約100nM的化合物是更優(yōu)選的；GI50低于約10nM的化合物是更優(yōu)選的。GI50通過(guò)使用諸如本文所述的細(xì)胞增殖測(cè)定來(lái)測(cè)定。發(fā)現(xiàn)這類化合物抑制細(xì)胞增殖。
小分子抑制劑的體外效力例如通過(guò)測(cè)定人卵巢癌細(xì)胞(SKOV3)在與9點(diǎn)稀釋系列的化合物接觸72小時(shí)后的生存力來(lái)測(cè)定。細(xì)胞生存力通過(guò)測(cè)定甲 ，一種通過(guò)MTS/PMS，可商購(gòu)得到的試劑的生物還原形成的產(chǎn)物的吸光度來(lái)測(cè)定。劑量反應(yīng)曲線上的各點(diǎn)計(jì)算為72小時(shí)的未處理的對(duì)照細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)減去背景吸收(完全細(xì)胞殺死)。
已成功地用于臨床治療癌癥(癌癥化學(xué)療法)的抗增殖化合物的GI50是有很大變化的。例如，在A549細(xì)胞中，紫杉醇GI50為4nM，阿霉素為63nM，5-氟尿嘧啶為1μM，而羥基脲為500μM(由NationalCancer Institute，Developmental Therapeutic Program，http//dtp.nci.nih.gov/提供的數(shù)據(jù))。因此，抑制細(xì)胞增殖的化合物可能是有用的，與表現(xiàn)抑制作用的濃度無(wú)關(guān)。
為了將本發(fā)明的化合物用于篩選結(jié)合KSP驅(qū)動(dòng)蛋白的化合物的方法，將KSP結(jié)合在載體上，然后在測(cè)定中添加本發(fā)明的化合物。或者，將本發(fā)明的化合物結(jié)合在載體上，并添加KSP。可在其中尋求新的結(jié)合劑的化合物種類包括特異性抗體、在化學(xué)文庫(kù)的篩選中鑒定的非天然結(jié)合劑、肽類似物等。特別感興趣的是篩選對(duì)于人細(xì)胞毒性低的候選藥物的篩選測(cè)定。為此目的可使用多種測(cè)定，包括標(biāo)記的體外蛋白-蛋白結(jié)合測(cè)定、電泳淌度位移測(cè)定、用于蛋白結(jié)合的免疫測(cè)定、官能團(tuán)測(cè)定(磷酸化測(cè)定等)等。
可以多種方式測(cè)定本發(fā)明的化合物與KSP的結(jié)合。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物例如用熒光或者放射活性基團(tuán)標(biāo)記，然后直接測(cè)定結(jié)合。例如，這可如下進(jìn)行將KSP的全部或者一部分連接在固體載體上，添加經(jīng)標(biāo)記的測(cè)試化合物(例如其中至少一個(gè)原子被可檢測(cè)的同位素置換的本發(fā)明的化合物)，洗掉過(guò)量試劑，并測(cè)定標(biāo)記物的量是否是固體載體上存在的標(biāo)記物的量。
本文的術(shù)語(yǔ)“標(biāo)記”是指化合物直接或者間接地用提供檢測(cè)信號(hào)的標(biāo)記物標(biāo)記，所述標(biāo)記物例如是放射同位素、熒光標(biāo)記、酶、抗體、顆粒(如磁性顆粒)、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記或者特異性結(jié)合分子等。特異性結(jié)合分子包括成對(duì)物質(zhì)，如生物素和抗生蛋白鏈菌素，地高新和抗地高新等。對(duì)于特異性結(jié)合物，根據(jù)如上概述的已知方法，互補(bǔ)一方通常與用供檢測(cè)的分子標(biāo)記。標(biāo)記物可直接或者間接提供可檢測(cè)的信號(hào)。
在某些實(shí)施方案中，僅標(biāo)記組分之一。例如，可用125I或者熒光團(tuán)在酪氨酸位置處標(biāo)記驅(qū)動(dòng)蛋白?；蛘?，用不同的標(biāo)記物標(biāo)記一個(gè)以上組分，例如蛋白質(zhì)用125I標(biāo)記，而有絲分裂劑用熒光團(tuán)標(biāo)記。
本發(fā)明的化合物也可用作篩選其他候選藥物的競(jìng)爭(zhēng)劑。本文所用的術(shù)語(yǔ)“候選藥物”或者同義詞是指要檢測(cè)其生物活性的任何分子，如蛋白質(zhì)、寡肽、小有機(jī)分子、多糖、多核苷酸等。它們可能能夠直接或者間接改變細(xì)胞增殖表型或者細(xì)胞增殖序列的表達(dá)，所述細(xì)胞增殖序列包括核酸序列和蛋白質(zhì)序列。在其他情況下，篩選細(xì)胞增殖蛋白結(jié)合和/或活性的改變。該類型的篩選可在有或者沒(méi)有微管存在下進(jìn)行。在篩選蛋白結(jié)合或活性時(shí)，優(yōu)選的實(shí)施方案不包括任何已知結(jié)合該特定的蛋白的分子，所述蛋白例如聚合物結(jié)構(gòu)(如微管)以及能量源(如ATP)。本文測(cè)定的優(yōu)選實(shí)施方案包括在其內(nèi)源天然狀態(tài)下不結(jié)合細(xì)胞增殖蛋白的候選藥物，本文稱其為“外源性”藥物。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，外源性藥物進(jìn)一步排除KSP的抗體。
候選藥物可包括多種化學(xué)物質(zhì)類別，但通常它們是有機(jī)分子，優(yōu)選分子量超過(guò)100且小于約2500道爾頓的小有機(jī)分子。候選藥物包括與蛋白的結(jié)構(gòu)相互作用，特別是氫鍵和親脂性結(jié)合所必需的官能團(tuán)，其通常至少包括胺、羰基、羥基、醚或者羧基，優(yōu)選至少這些化學(xué)官能團(tuán)的兩種。候選藥物經(jīng)常包括環(huán)狀碳或者雜環(huán)結(jié)構(gòu)和/或芳香或者多芳香結(jié)構(gòu)，它們被一個(gè)或者多個(gè)上述官能團(tuán)取代。候選藥物還在生物分子中發(fā)現(xiàn)，所述生物分子包括肽、糖、脂肪酸、甾體化合物、嘌呤、嘧啶以及它們的衍生物、結(jié)構(gòu)類似物或者組合。
候選藥物得自包括合成或者天然化合物的文庫(kù)的多種來(lái)源。例如，有多種方法隨機(jī)和定向合成多種有機(jī)化合物及生物分子，包括隨機(jī)寡核苷酸的表達(dá)?；蛘?，細(xì)菌、真菌、植物和動(dòng)物提取物形式的天然化合物文庫(kù)也是可獲得或者容易產(chǎn)生的。另外，天然或者合成制備的文庫(kù)及化合物容易地通過(guò)常規(guī)的化學(xué)、物理和生物化學(xué)方法進(jìn)行修飾。已知的藥物可進(jìn)行定向或者隨機(jī)化學(xué)修飾，如?；?、烷化、酯化和/或酰胺化，以產(chǎn)生結(jié)構(gòu)類似物。
競(jìng)爭(zhēng)性篩選測(cè)定可通過(guò)在第一個(gè)樣品中混合KSP以及候選藥物來(lái)進(jìn)行。第二個(gè)樣品包括本發(fā)明的化合物、KSP以及候選藥物。這可在有或者沒(méi)有微管存在下進(jìn)行。測(cè)定這兩個(gè)樣品的候選藥物結(jié)合，而兩個(gè)樣品之間的結(jié)合變化或者不同表明存在能夠結(jié)合KSP并可能抑制其活性的藥物。也就是說(shuō)，如果第二個(gè)樣品中候選藥物的結(jié)合不同于第一個(gè)樣品，則表明候選藥物能夠結(jié)合KSP。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，候選藥物與KSP的結(jié)合通過(guò)使用競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定來(lái)測(cè)定。在該實(shí)施方案中，競(jìng)爭(zhēng)劑是已知與KSP結(jié)合的結(jié)合物質(zhì)，如抗體、肽、結(jié)合配偶體、配體等。在某些情況下，例如在候選藥物和結(jié)合物質(zhì)之間，用結(jié)合物質(zhì)置換候選藥物，可存在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。
在一個(gè)實(shí)施方案中，候選藥物是經(jīng)標(biāo)記的。首先將候選藥物或者競(jìng)爭(zhēng)劑或者它們兩個(gè)添加至KSP中，其時(shí)間足以進(jìn)行結(jié)合，如果有結(jié)合的話?？稍谌魏斡欣谧罴鸦钚缘臏囟认逻M(jìn)行溫育，通常在4-40℃之間。
溫育的時(shí)間根據(jù)最佳活性來(lái)選擇，但也可進(jìn)行最佳化，以有利于快速高通量篩選。通常0.1-1小時(shí)是足夠的。過(guò)量試劑通常被除去或者洗掉。接著添加第二組分，然后觀察有或者沒(méi)有經(jīng)標(biāo)記的組分，以表明結(jié)合。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，首先添加競(jìng)爭(zhēng)劑，然后添加候選藥物。競(jìng)爭(zhēng)劑的置換是候選藥物與KSP結(jié)合并由此能夠結(jié)合以及可能抑制KSP活性的指標(biāo)。在該實(shí)施方案中，任一組分可進(jìn)行標(biāo)記。因此，例如，如果競(jìng)爭(zhēng)劑是經(jīng)標(biāo)記的，則在洗滌溶液中存在標(biāo)記物表明被藥物置換?；蛘?，如果候選藥物是經(jīng)標(biāo)記的，在載體上存在標(biāo)記物表明置換。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，首先添加候選藥物，并進(jìn)行溫育和洗滌，然后添加競(jìng)爭(zhēng)劑。不存在競(jìng)爭(zhēng)劑的結(jié)合可能表明候選藥物以更高的親和力與KSP結(jié)合。因此，如果候選藥物是經(jīng)標(biāo)記的，在載體上存在標(biāo)記物，并且沒(méi)有競(jìng)爭(zhēng)劑結(jié)合，有可能表明候選藥物能夠與KSP結(jié)合。
抑制作用通過(guò)篩選能夠抑制KSP活性的候選藥物來(lái)測(cè)試，其包括以下步驟如上混合候選藥物和KSP，并測(cè)定KSP生物活性的改變。因此，在該實(shí)施方案中，候選藥物應(yīng)與KSP結(jié)合(雖然這可能不是必需的)，并如本文定義改變其生物或者生化活性。該方法包括細(xì)胞的體外篩選法和體內(nèi)篩選法，用于篩選包括細(xì)胞周期分布、細(xì)胞生存力的改變，或用于篩選有絲分裂紡錘體的存在、形態(tài)、活性、分布或者量，如以上概述。
或者，可使用不同的篩選，以鑒定與天然KSP結(jié)合但不與修飾的KSP結(jié)合的候選藥物。
可在測(cè)定中使用陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。優(yōu)選所有的對(duì)照和測(cè)試樣品都至少平行三份進(jìn)行，以得到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的結(jié)果。所有樣品的溫育時(shí)間應(yīng)足以使藥物與蛋白質(zhì)結(jié)合。在溫育后，洗滌所有的樣品，使得沒(méi)有非特異性結(jié)合材料，并測(cè)定通常經(jīng)標(biāo)記的藥物結(jié)合的量。例如，當(dāng)采用放射性標(biāo)記物時(shí)，樣品可在閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)，以測(cè)定結(jié)合化合物的量。
在篩選測(cè)定中可包括多種其他試劑。這些試劑包括例如鹽、中性蛋白質(zhì)(如白蛋白)、洗滌劑等，它們可以用于促進(jìn)最佳的蛋白-蛋白結(jié)合和/或降低非特異性或者背景相互作用。還可使用可提高測(cè)定效率的試劑，如蛋白酶抑制劑、核酸酶抑制劑、抗微生物劑等?？梢匀魏雾樞蛱砑咏M分的混合物，以提供所需的結(jié)合。
給藥因此，本發(fā)明的化合物給藥于細(xì)胞。本文的“細(xì)胞”是指有絲分裂或減數(shù)分裂可以改變的任何細(xì)胞。本文的“給藥”是指給予細(xì)胞培養(yǎng)物或患者中的細(xì)胞治療有效劑量的本發(fā)明的化合物。本文的“治療有效劑量”是指產(chǎn)生其給藥所欲產(chǎn)生的作用的劑量。確切的劑量取決于治療目的，并由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用已知的技術(shù)來(lái)確定。本領(lǐng)域中已知，可能需要根據(jù)全身與局部給藥、給藥途徑、年齡、體重、總的健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、配方的性質(zhì)、藥物相互作用以及需要治療的確切病癥及其嚴(yán)重程度進(jìn)行調(diào)整，而且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員用常規(guī)的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。但是，用于治療腫瘤生長(zhǎng)，例如結(jié)腸或乳癌的式I的化合物的有效量(通常通過(guò)靜脈內(nèi)給藥)通常范圍是對(duì)于每周一次或每月一次的給藥方案而言，每次給藥為0.1-100(包括1-100)mg/m2受者表面積，通常對(duì)于每周一次至每月一次的給藥方案而言，每次給藥為2-30mg/m2受者表面積。式I的化合物的鹽、溶劑化物或者鹽的溶劑化物的有效量的可以確定為式I的化合物本身有效量的一定比例。設(shè)想類似的劑量對(duì)于本文所提到的其它病癥的治療而言是合適的。
為本發(fā)明的目的，“患者”包括人和其他動(dòng)物(特別是哺乳動(dòng)物)以及其他生物體。因此，該方法可應(yīng)用于人的治療和獸醫(yī)應(yīng)用中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，患者是哺乳動(dòng)物，而在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，患者是人。
具有所希望的藥理活性的本發(fā)明的化合物可以給予患者，優(yōu)選以包含藥用賦形劑的藥學(xué)可接受的組合物給予患者，如本文所述。根據(jù)引入的方式，該化合物可以如下討論的多種方式配方。治療活性化合物在配方中的濃度可為約0.1-100重量％。
藥物可單獨(dú)或者與其他治療(即放射療法)或者其他化學(xué)治療劑如似乎作用于微管形成的紫杉烷類藥物或拓樸異構(gòu)酶I抑制劑喜樹(shù)堿類一起給予。使用時(shí)，可以在本發(fā)明的化合物給藥之前、同時(shí)或之后進(jìn)行其它化學(xué)治療劑給藥。在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物與一種或多種其它化學(xué)治療劑聯(lián)合給藥?！奥?lián)合給藥”是指將本發(fā)明的化合物給予患者，使得在患者的血流中可以同時(shí)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物和聯(lián)合給藥的化合物，而不管化合物實(shí)際上何時(shí)給藥，包括同時(shí)給藥。
本發(fā)明的化合物和組合物的給藥可以多種方式完成，包括但不限于口服、皮下、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)、經(jīng)皮、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、肺內(nèi)、陰道、直腸或者眼內(nèi)。在某些情況下，例如在治療傷口和炎癥時(shí)，該化合物或組合物可直接以溶液或者噴霧劑施用。
藥物劑型包括式I的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物和一種或多種藥用賦形劑。如本領(lǐng)域中已知，藥用賦形劑是第二成分，其功能是促使或促進(jìn)各種劑型(例如口服劑型如片劑、膠囊劑和液體；局部劑型如皮膚、眼睛和耳用劑型；栓劑；注射劑；呼吸用劑型等)的藥或藥物的遞送。藥用賦形劑包括惰性或非活性成分、增效劑或?qū)嵸|(zhì)上有助于活性成分的醫(yī)療效果的化學(xué)物質(zhì)。例如，藥用賦形劑可以用于改善流動(dòng)特征、產(chǎn)品均勻性、穩(wěn)定性、味道或外觀，以使劑量操作和給藥容易，從而方便使用，或者控制生物利用度。雖然藥用賦形劑常被描述為惰性或無(wú)活性，但在本領(lǐng)域中可以認(rèn)識(shí)到在藥用賦形劑的性質(zhì)和含有它們的劑型之間存在一定的關(guān)系。
適用作載體或稀釋劑的藥用賦形劑在本領(lǐng)域中是已知的，并且用于多種配方。例如參見(jiàn)Remington′s Pharmaceutical Sciences，18thEdition，A.R.Gennaro，Editor，Mack Publishing Company(1990)；RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，20th Edition，A.R.Gennaro，Editor，Lippincott Williams & Wilkins(2000)；Handbook ofPharmaceutical Excipients，3rd Edition，A.H.Kibbe，Editor，AmericanPharmaceutical Association，and Pharmaceutical Press(2000)；和Handbook of Pharmaceutical Additives，compiled by Michael and IreneAsh，Gower(1995)，各文獻(xiàn)均引入本文作參考。
口服固體劑型如片劑通常包含一種或多種藥用賦形劑，它們例如可以有助于賦予令人滿意的加工和壓縮特征，或者給片劑提供附加的所需物理特征。這些藥用賦形劑可以選自稀釋劑、粘合劑、助流劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、甜味劑、聚合物、蠟或其它延遲溶解的物質(zhì)。
用于靜脈內(nèi)給藥的組合物一般包含靜脈內(nèi)液體，即簡(jiǎn)單化學(xué)物質(zhì)如糖、氨基酸或電解質(zhì)的無(wú)菌溶液，它們可以容易地被循環(huán)系統(tǒng)遞送和消化。這些液體可以用注射用水USP制備。
常用于靜脈內(nèi)(IV)的液體公開(kāi)在Remington，the Science andPractice of Pharmacy[前面提供的完整引文]中，并包括醇(例如在右旋糖和水(″D/W″)中[例如5％右旋糖]或在生理鹽水溶液(″NSS″)中的右旋糖和水[例如5％右旋糖]中；例如5％醇)；合成氨基酸如Aminosyn、FreAmine、Travasol，例如分別為3.5或7；8.5；3.5、5.5或8.5％；氯化銨，例如2.14％；葡聚糖40，在NSS中，例如10％，或者在D5/W中，例如10％；葡聚糖70，在NSS中，例如6％，或者在D5/W中，例如6％；右旋糖(葡萄糖，D5/W)，例如2.5-50％；右旋糖和氯化鈉，例如5-20％右旋糖和0.22-0.9％NaCl；乳酸化Ringer′s(Hartmann′s)，例如NaCl 0.6％、KCl 0.03％、CaCl20.02％；乳酸鹽0.3％；甘露糖醇，例如5％，任選與右旋糖，例如10％，或者NaCl，例如15或20％組合；多種含有電解質(zhì)、右旋糖、果糖、轉(zhuǎn)化糖Ringer′s的不同組合的電解質(zhì)溶液，例如NaCl 0.86％、KCl 0.03％、CaCl20.033％；碳酸氫鈉，例如5％；氯化鈉，例如0.45、0.9、3或5％；乳酸鈉，例如1/6M；和無(wú)菌注射用水。
這種液體的pH可以改變，并且通常為3.5-8，如本領(lǐng)域中已知。
以下實(shí)施例用于更詳細(xì)地描述使用上述發(fā)明的方式并描述關(guān)于實(shí)施本發(fā)明的各個(gè)方面所考慮的最佳方式。應(yīng)理解的是，這些實(shí)施例絕不是對(duì)本發(fā)明真實(shí)范圍的限制，而僅是用于說(shuō)明目的。在本說(shuō)明書(shū)中引用的所有的出版物，包括但不限于專利和專利申請(qǐng)都引入本文作參考，如同各單獨(dú)的出版物在本文中具體和單獨(dú)地指出是引入本文作參考一樣。
實(shí)施例所有無(wú)水溶劑均購(gòu)自Aldrich Chemical Company，在SureSeal容器中。加入試劑，并用單通道或多通道移液管進(jìn)行水萃取。用Whatman/Polyfiltronics 24孔、10mL過(guò)濾模塊進(jìn)行過(guò)濾。用LabconcoVortex-Evaporator或者用4×6氮多支管刮除來(lái)從陣列上蒸發(fā)揮發(fā)性物質(zhì)。
實(shí)施例1合成化合物
a)3-苯基-丙酸3-氯-苯酯23℃下在5分鐘內(nèi)向3-氯苯酚(1，50.1g，0.3mol)、三乙胺(TEA，85mL)和CH2Cl2(500mL)的溶液中加入氫化肉桂酰氯(2，31mL，0.3mol)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物真空濃縮。然后將粗漿溶于10∶1己烷∶EtOAc(300mL)，并用1N NaOH(100mL)和鹽水(100mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)并用硅膠塞過(guò)濾(10∶1己烷∶EtOAc沖洗)。將洗脫液濃縮，得到78g淺黃色油，將其不經(jīng)任何進(jìn)一步純化而使用。
b)1-(4-氯-2-羥基-苯基)-3-苯基-丙-1-酮140℃下在15分鐘內(nèi)將AlCl3(52g，0.39mol)緩慢加入酯3(78g，0.3mol)中。再過(guò)15分鐘后，氣體釋放終止，將反應(yīng)混合物傾入1L燒瓶中，并冷卻至RT。將所得固體溶于CH2Cl2(100mL)，并緩慢地用1N HCl(200mL)終止反應(yīng)。用EtOAc(600mL)稀釋此混合物，并分離各層。用鹽水(100mL)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。將粗油溶于20∶1己烷∶EtOAc(500mL)，并用硅膠塞沖洗(100％己烷；20∶1己烷∶EtOAc沖洗)。將濾液濃縮，得到淺褐色油，用閃蒸柱色譜法(50∶1己烷∶EtOAc；40∶1己烷∶EtOAc；30∶1己烷∶EtOAc；20∶1己烷∶EtOAc)將其純化，得到31.2g(40％)4，為一種白色固體。
c)2-叔丁氧羰基氨基-3-甲基-丁酸5-氯-2-(3-苯基-丙酰基)-苯酯將苯酚4(23.18g，89.1mmol)、BOC-D-纈氨酸(5，21.29g，98.05mmol)、HBTU(40.57g，107mmol)、TEA(37mL，265mmol)和CH2Cl2(155mL)的溶液于23℃下保持5小時(shí)。用EtOAc(500mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用飽和NH4Cl水溶液(2×100mL)和鹽水(100mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(100％己烷；50∶1己烷∶EtOAc；40∶1己烷∶EtOAc；30∶1己烷∶EtOAc；20∶1己烷∶EtOAc；10∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到35.7g(87％)的6，為一種黃色油。
d)[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯將酯6(35.55g，79.17mmol)、K2CO3(21.8g，158.4mmol)和DMF(264mL)的混合物放置在140℃油浴中。30分鐘后，用H2O(300mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)，并用Et2O(3×200mL)萃取。用鹽水(100mL)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到3.5g(10.2％)7。
e)2-(1-氨基-2-甲基-丙基)-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮將色酮7(1.8g，4.18mmol)和TFA∶H2O(97.5∶2.5，30mL)在23℃下保持1小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物。將殘余物溶于EtOAc(100mL)并用1N NaOH(25mL)和鹽水(25mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮，得到一種無(wú)色油，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
f)N-{2-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基氨基]-1，1-二甲基-乙基}-4-甲基-苯甲酰胺將色酮8(72mg，0.22mmol)、醛9(65mg，0.32mmol)、Na(OAc)3BH(184mg，0.87mmol)和CH2Cl2(1mL)于23℃下保持3小時(shí)。用EtOAc(20mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用1N NaOH(5mL)和鹽水(5mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(3∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到80mg(70％)10，為一種白色固體。
g)3-芐基-7-氯-2-[1-(4，4-二甲基-2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-色烯-4-酮將色酮10(80mg，0.15mmol)、POCl3(0.1mL，1.1mmol)和PhMe(1mL)加熱至110℃。3.5小時(shí)后，加入另一部分POCl3(0.1mL，1.1mmol)。1小時(shí)后，用EtOAc(20mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用1N NaOH(10mL)和鹽水(10mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(20∶1 CHCl3∶MeOH)純化所得殘余物，得到50mg(65％)11，為一種白色固體。
實(shí)施例2合成化合物 a)制備{3-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯將色酮8(420mg，1.24mmol)、醛12(280mg，1.6mmol)、NaCN(OAc)3BH(790mg，3.7mmol)和CH2Cl2(4.1mL)于23℃下保持3小時(shí)。用EtOAc(20mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用1N NaOH(5mL)和鹽水(5mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(5∶1己烷∶EtOAc；3∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到460mg(75％)13，為一種粘性油。
b)制備{3-[[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯23℃下向色酮13(1.3g，2.6mmol)、二異丙基乙胺(DIEA，1.8mL)和CH2Cl2(7.5mL)的溶液中加入對(duì)甲苯酰氯(0.7mL，5.22mmol)。2.5小時(shí)后，用EtOAc(100mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用飽和NaHCO3水溶液(2×20mL)和鹽水(20mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(3∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到1.43g(89％)14，為一種無(wú)色油。
c)制備N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺將色酮14(1.43g，2.32mmol)和TFA∶H2O(97.5∶2.5，30mL)在23℃下保持1小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物。將殘余物溶于EtOAc(100mL)，并用1N NaOH(25mL)和鹽水(25mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮，得到一種白色固體，由1H NMR和LCMS分析認(rèn)定其為＞95％純。
使用類似于以上實(shí)施例2所述的方法制備以下化合物。

實(shí)施例3合成化合物 將羰基二咪唑(9.14g，56.37mmol)緩慢加入BOC-D-纈氨酸(5，12.25g，56.37mmol)和THF(185mL)的室溫溶液中。1小時(shí)后，用50％NaCl水溶液(200mL)洗滌溶液，然后用鹽水(2×200mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮，得到一種白色固體，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
將(2-溴乙基)苯(2.51mL，18.38mmol)、鎂屑(477mg，19.62mmol)和THF(20mL)于60℃下加熱1小時(shí)，然后冷卻至室溫。將16(2.0g，9.19mmol)和THF(20mL)的溶液冷卻至0-5℃。然后通過(guò)注射器將苯乙基氯化鎂溶液加入0-5℃的纈氨酸咪唑溶液中。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)溫度，并使其不超過(guò)15℃。將反應(yīng)混合物于0-5℃下保持1小時(shí)。用飽和NH4Cl水溶液(20mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)，并用EtOAc(100mL)稀釋。分離各層，并用鹽水(30mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc；5∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到1.15g(41％)17。LRMS(MH-tBuOCO)m/z 206.1。
通過(guò)注射器將LHMDS(1.M，在THF中，9.53mL，3.3當(dāng)量)緩慢加入酮17(882mg，2.89mmol)的-78℃溶液中。在加入完成后，將所得淺橙色溶液于-78℃下保持40分鐘。通過(guò)注射器滴加純的4-氯-2-氟苯甲酰氯(18，460μL，2.89mmol)(假設(shè)密度為1.20g/mL)。反應(yīng)溶液變成橙色，并將其保持40分鐘。用飽和NH4Cl水溶液(20mL)終止反應(yīng)溶液的反應(yīng)，并用EtOAc(50mL)稀釋。分離各層，并用鹽水(30mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到1.15g(86％)19。LRMS(MH-HF)m/z 442.1。
將19(1.15g，2.49mmol)、K2CO3(420mg，3.04mmol)和DMF(12mL)的混合物于室溫下保持30分鐘。用鹽水(50mL)終止黃色反應(yīng)溶液的反應(yīng)，并用Et2O(50mL)稀釋。分離各層，并用鹽水(2×50mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到20。LRMS(MH)m/z442.1。
使用類似于以上實(shí)施例2和3所述的方法制備以下所示的化合物。


實(shí)施例4可選的化合物制備方法

在1分鐘內(nèi)在N2氣氛下將氯甲酸乙酯(11.0mL，115mmol)加入BOC-D-纈氨酸(5，25.0g，115mmol)、三乙胺(16.0mL，115mmol)和THF(145mL)的0-5℃溶液中。使反應(yīng)溶液的內(nèi)部溫度升至9℃。15分鐘后，在5分鐘內(nèi)加入二甲基羥胺鹽酸鹽(13.46g，138mmol)、三乙胺(32.0mL，230mmol)和THF(110mL)的混合物。將內(nèi)部溫度升至17℃。一旦完成加入，移出冰/H2O浴，并將反應(yīng)溶液于23℃下保持1小時(shí)。然后濃縮反應(yīng)溶液。將粗殘余物溶于EtOAc(200mL)，并用1N HCl(200mL)和鹽水(100mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮，得到30g(～100％)21，為一種無(wú)色油，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
23℃和N2氣氛下，在配備回流冷凝器的1L圓底燒瓶中混合(2-溴乙基)苯(38.0mL，273mmol)、鎂屑(7.0g，289mmol)和Et2O(500mL)。～10分鐘后，反應(yīng)混合物開(kāi)始放熱，使反應(yīng)混合物進(jìn)行至回流，并間歇地用冰/H2O浴冷卻。1.5小時(shí)后，完成格利雅反應(yīng)，并將溶液冷卻至23℃。通過(guò)套管將21(18.0g，82.7mmol)和Et2O(200mL)的溶液加入苯乙基溴化鎂的20℃溶液中。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)溫度，并使其不超過(guò)～30℃。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)反應(yīng)混合物溫度，并用冰/H2O浴調(diào)節(jié)(20-30℃)。在23℃下1小時(shí)后，通過(guò)傾入1N HCl(300mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(100mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到13.4g(53％)17。LRMS(MH-tBuOCO)m/z 206.1。
在～3分鐘內(nèi)通過(guò)注射器將雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(LHMDS，1.0M，在THF中，94.0mL，3.3當(dāng)量)緩慢加入酮17(8.74g，28.62mmol)和THF(100mL)的-78℃溶液中。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)反應(yīng)溶液溫度，并以足以防止溫度超出-54℃的速率加入堿。加入完成后，將所得溶液于-78℃下保持30分鐘。在～1分鐘內(nèi)通過(guò)注射器滴加純的4-氯-2-氟苯甲酰氯(18，4.58mL，28.62mmol)(假設(shè)密度為1.20g/mL)(溫度從-78℃升至-59℃)。將反應(yīng)溶液于-78℃下保持30分鐘。用1NHCl(100mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(100mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。將所得殘余物不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
將以上粗產(chǎn)物、K2CO3(4.75g，34.34mmol)和DMF(100mL)的混合物于23℃下保持30分鐘。通過(guò)加入Et2O(200mL)和鹽水(200mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(2×200mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。將所得殘余物吸附于硅膠(CH2Cl2)，并用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc)純化，得到11.5g(91％，2步)20，為一種白色固體。LRMS(MH)m/z 442.1。
實(shí)施例5 5分鐘內(nèi)在N2氣氛下將甲基氯化鎂(82.5mL，3.0M，在THF中，247mmol)加入21(17.95g，69.0mmol)和THF(200mL)的0-5℃溶液中。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)反應(yīng)混合物溫度，并以足以防止溫度超過(guò)19℃的速率加入格氏試劑。一旦完成加入，移出冷卻浴，并將反應(yīng)混合物在23℃下保持2小時(shí)。然后用1N HCl(100mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(100mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮，得到12.5g(84％)22，為一種白色固體(根據(jù)1H NMR為＞95％純)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
在3分鐘內(nèi)通過(guò)注射器將LHMDS(128mL，1.0M，在THF中)加入酮22(12.5g，58.1mmol)和THF(200mL)的-78℃溶液中。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)反應(yīng)溶液溫度，并以足以防止溫度超過(guò)-58℃的速率加入堿。30分鐘后，在30秒內(nèi)加入α-溴-間甲苯腈(23，12.5g，63.9mmol)和THF(50mL)的溶液(溫度從-78升至-60℃)。立即用冰/H2O浴代替冷卻浴，并將反應(yīng)溶液于～0℃下保持20分鐘。用1N HCl(100mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(100mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到11.6g(60％)24。然后用1H NMR檢查表明24僅～80％純，但沒(méi)有進(jìn)行進(jìn)一步的純化。LRMS(MH-tBuOCO)m/z 231.1。
通過(guò)注射器將雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(LHMDS，1.0M，在THF中，28.4mL，3.3當(dāng)量)緩慢加入酮24(2.84g，8.6mmol)和THF(40mL)的-78℃溶液中。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)反應(yīng)溶液溫度，并以足以防止溫度超過(guò)-48℃的速率加入堿。在加入完成后，將所得溶液于-78℃下保持30分鐘。通過(guò)注射器滴加純的4-氯-2-氟苯甲酰氯(18，1.38mL，8.6mmol)(假設(shè)密度為1.20g/mL)。反應(yīng)溶液變成橙色，并保持30分鐘。用1N HCl(20mL)終止反應(yīng)溶液的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(20mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。將所得殘余物不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
將以上粗產(chǎn)物、K2CO3(1.43g，10.34mmol)和DMF(43mL)的混合物于23℃下保持1小時(shí)。通過(guò)加入Et2O(100mL)和鹽水(200mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(2×200mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。將所得殘余物吸附于硅膠(CH2Cl2)，并用閃蒸柱色譜法(5∶1己烷∶EtOAc)純化，得到2.7g(67％，2步)25。1H NMR檢查表明25僅～80％純，但沒(méi)有進(jìn)行進(jìn)一步純化。LRMS(MH)m/z 467.1。
將色酮25(2.71g，5.80mmol)和TFA∶H2O(97.5∶2.5，25mL)于23℃下保持1小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物。將殘余物溶于EtOAc(100mL)，并用1N NaOH(25mL)和鹽水(25mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(1∶1己烷∶EtOAc；1∶2己烷∶EtOAc；1∶4己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到1.20g(56％)26。LRMS(MH)m/z 367.1。
實(shí)施例6 通過(guò)注射器將雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(LHMDS，1.0M，在THF中，23.5mL，3.3當(dāng)量)緩慢加入酮17(2.18g，7.14mmol)和THF(20mL)的-78℃溶液中。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)反應(yīng)溶液溫度，并以足以防止溫度超過(guò)-50℃的速率加入堿。在加入完成后，將所得溶液于-78℃下保持30分鐘。通過(guò)注射器滴加純的2，4-二氟苯甲酰氯(27，1.05mL，8.57mmol)。反應(yīng)溶液變?yōu)槌壬?，并保?0分鐘。用1N HCl(20mL)終止反應(yīng)溶液的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(20mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到2.16g(68％)28。1H NMR檢查表明28僅～85％純，但沒(méi)有進(jìn)行進(jìn)一步純化。
將28(2.16g，4.9mmol)、K2CO3(812mg，5.86mmol)和DMF(24mL)的混合物于23℃下保持1小時(shí)。用鹽水(50mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)，并用Et2O(50mL)稀釋。分離各層，并用鹽水(2×50mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到1.25g(60％)29。LRMS(MH)m/z426.2。
實(shí)施例7 通過(guò)注射器將雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(LHMDS，1.0M，在THF中，47mL，3.3當(dāng)量)緩慢加入的酮17(4.37g，14.31mmol)和THF(55mL)的-78℃溶液中。通過(guò)內(nèi)部溫度計(jì)監(jiān)測(cè)反應(yīng)溶液溫度，并以足以防止溫度超過(guò)-50℃的速率加入堿。加入完成后，將所得溶液于-78℃下保持30分鐘。通過(guò)注射器快速加入4-氰基-2-氟苯甲酰氯(30，1.38mL，8.6mmol)和THF(5mL)的溶液(溫度從-78℃升到-50℃)。反應(yīng)混合物變成深紅色，并保持30分鐘。用1N HCl(20mL)終止反應(yīng)溶液的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(20mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。將所得殘余物不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
將以上粗產(chǎn)物、K2CO3(2.40g，17.17mmol)和DMF(70mL)的混合物于23℃下保持1小時(shí)。通過(guò)加入Et2O(200mL)和鹽水(200mL)終止反應(yīng)混合物的反應(yīng)。分離各層，并用鹽水(2×200mL)洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮。用閃蒸柱色譜法(10∶1己烷∶EtOAc)純化所得殘余物，得到4.95g(80％，2步)31。LRMS(MH)m/z 433.2。
實(shí)施例8 將7-氟-色酮32(96mg，0.19mmol)溶于在甲醇(10mL)中的0.5M甲醇鈉，并加熱至70℃。將溫度在70℃下保持12小時(shí)，然后冷卻至室溫。減壓除去溶劑。向所得殘余物中加入EtOAc(20mL)和水(20mL)。分離各層，并用附加的EtOAc(3×15mL)萃取水相。合并有機(jī)相，用鹽水(25mL)洗滌并干燥(Na2SO4)。真空濃縮，得到一種無(wú)定形白色固體，用閃蒸柱色譜法(20∶1 DCM∶MeOH)將其純化，得到92mg(94％)33。LRMS(MH)m/z 509.3。
實(shí)施例9 將化合物29(608mg，1.43mmol)溶于在甲醇(40mL)中的0.5M甲醇鈉的溶液。將混合物加熱回流3小時(shí)(或直至LC-MS表明無(wú)原料殘留)。然后蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶于二氯甲烷(200mL)，并加入水，其中通過(guò)加入2N HCl溶液將混合溶液的pH調(diào)節(jié)至9。通過(guò)硫酸鈉干燥收集的有機(jī)層。蒸發(fā)溶劑后，在真空下干燥最終的化合物34(580mg，92％)。
實(shí)施例10 向在DMF(5mL)中的32(56mg，0.11mmol)的溶液中加入NaH(5mg在礦物油中的60％懸浮液，0.15mmol)。將所得溶液于45℃下攪拌5分鐘，然后通過(guò)移液管加入烯丙醇(10μL，0.15mmol)。將所得溶液于45℃下攪拌12小時(shí)，然后冷卻至室溫。加入EtOAc(50mL)和水(15mL)，并分離各層。用EtOAc(3×15mL)萃取水相。合并有機(jī)相，用水(2×30mL)和鹽水(2×30mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并減壓濃縮，得到35，為一種無(wú)定形固體，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用(54mg，91％)。LRMS(MH)m/z 535.0。
向35(54mg，0.10mmol)和MeCN(5mL)的室溫溶液中加入嗎啉(44μL，0.50mmol)，然后加入Pd(PPh3)4(5mg，10％)。將所得溶液攪拌5分鐘，然后減壓濃縮。用閃蒸柱色譜法，使用分步洗脫(20∶1DCM∶MeOH，10∶1 DCM∶MeOH)純化殘余物，得到41mg 36，為一種米色固體(81％)。LRMS(MH)m/z 495.2。
實(shí)施例113-芐基-7-氯-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-色烯-4-酮的制備a){2-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基氨基]-乙基氨基甲酸叔丁酯向在二氯甲烷(150mL)中的2-(1-氨基-2-甲基-丙基)-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮(6.0g，18mmol)和(3-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.6g，23mmol)的溶液中加入三乙酸基硼氫化鈉(7.4g，35mmol)。將反應(yīng)混合物于室溫下攪拌16小時(shí)，此時(shí)用1N氫氧化鈉(150mL)稀釋，并劇烈攪拌2小時(shí)。用1N氫氧化鈉(100mL)和鹽水(100mL)洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，并濃縮。用閃蒸色譜法(0→50％乙酸乙酯/己烷)純化殘余物，得到5.7g(67％)標(biāo)題化合物。MS(ES+)m/e 485[M+H]+。
b)2-[1-(2-氨基-乙基氨基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮將在4∶1二氯甲烷/三氟乙酸(250mL)中的{2-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基氨基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(5.7g，12mmol)的溶液于室溫下保持1.5小時(shí)，此時(shí)將其濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷(200mL)，用10％碳酸鈉、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，并濃縮。將殘余物(4.2g，91％收率)不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
c)N-{2-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基氨基]-乙基}-4-甲基-苯甲酰胺向在二氯甲烷(100mL)中的2-[1-(2-氨基-乙基氨基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮(4.1g，11mmol)和三乙胺(2.2mL，17mmol)的冷(0℃)的溶液中加入在二氯甲烷(20mL)中的對(duì)甲苯甲酰氯(1.7g，11mmol)的溶液。將反應(yīng)物于0℃下保持2小時(shí)，此時(shí)用乙醚(250mL)將其稀釋。用1N氯化氫(2×200mL)、飽和碳酸氫鈉(200mL)和鹽水(150mL)洗滌所得溶液，用硫酸鎂干燥，并濃縮。用閃蒸色譜法(0→60％乙酸乙酯/己烷)純化殘余物，得到2.8g(50％)標(biāo)題化合物。MS(ES+)m/e 503[M+H]+。
d)3-芐基-7-氯-2-[2-甲基-1-(2-對(duì)甲苯基-4，5-二氫-咪唑-1-基)-丙基]-色烯-4-酮將在甲苯(60mL)中的N-{2-[1-(3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基氨基]-乙基}-4-甲基-苯甲酰胺(2.8g，5.5mmol)和三氯氧化磷(9.4mL，100mmol)的混合物于85℃下加熱7小時(shí)，然后加熱回流1小時(shí)。濃縮反應(yīng)物，并通過(guò)甲苯共沸除去剩余的三氯氧化磷。用乙酸乙酯(100mL)稀釋殘余物，并用飽和碳酸氫鈉(100mL)和鹽水(100mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，并濃縮。用閃蒸色譜法(0→8％甲醇/二氯甲烷)純化所得殘余物，得到1.4g(50％)標(biāo)題化合物。MS(ES+)m/e 485[M+H]+。
根據(jù)類似于實(shí)施例1、3和/或4所述的方法制備以下化合物

實(shí)施例122-[(R)-1-(4-氨基甲基-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮的制備a)2-[(R)-1-(3-鄰苯二甲酰亞氨基-2-氧-丙基氨基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮向在DMF(10mL)中的2-((R)-1-氨基-2-甲基-丙基)-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮(0.5g，1.5mMol)和K2CO3(0.21g，1.5mMol)中加入N-(3-溴-2-氧丙基)-鄰苯二甲酰亞胺(0.45g，1.5mMol)(Nair等人，J.Org.Chem.；40；1975；1745)。在RT下將反應(yīng)物攪拌3小時(shí)，真空濃縮，回收于EtOAc，用水、鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(0.88g，100％)，為一種黃色固體MS(ES)m/e 543.2(M+H)+。
b)2-{(R)-1-[N-甲苯?；?(3-鄰苯二甲酰亞氨基-2-氧-丙基)氨基]-2-甲基-丙基}-3-芐基-7-氯-色烯4-酮向在CH2Cl2(10mL)中的2-[(R)-1-(3-鄰苯二甲酰亞氨基-2-氧-丙基氨基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮(0.88g，1.5mMol)中加入Et3N(0.23mL，1.6mMol)和甲苯酰氯(0.21mL，1.6mMol)。將反應(yīng)物于RT下攪拌18小時(shí)，真空濃縮，回收于EtOAc，用1N HCl、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至干。用硅膠閃蒸色譜法(5-15％EtOAc/己烷)純化，然后與石油醚一起研磨，過(guò)濾，并真空干燥，得到標(biāo)題化合物(0.89g，90％)，為一種白色固體MS(ES)m/e 661.2(M+H)+。
c)N-{1-[(R)-1-(3-芐基-7-氯-4-氧-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-2-對(duì)甲苯基-1H-咪唑-4-基甲基}-鄰苯二甲酰亞胺向2-{(R)-1-[N-甲苯?；?(3-鄰苯二甲酰亞氨基-2-氧-丙基)氨基]-2-甲基-丙基}-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮(0.88g，1.3mMol)和NH4Oac(5.13g，66.8mMol)中加入HOAc(15mL)。將反應(yīng)物攪拌，并加熱回流(155℃油浴)2.5小時(shí)，冷卻至RT，并真空濃縮。將殘余物回收于EtOAc，用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至干。用硅膠閃蒸色譜法(50％EtOAc/己烷)純化，然后與(1∶2)Et2O/石油醚一起研磨，過(guò)濾并真空干燥，得到標(biāo)題化合物(0.51g，61％)，為一種棕褐色固體1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.11(d，J＝8.6Hz，1H)，7.89(2d，2H)，7.73(2d，2H)，7.53(d，J＝1.8Hz，1H)，7.52(s，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，2H)，7.36(dd，1H)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H)，7.14(m，3H)，6.74(d，J＝1.5Hz，1H)，6.72(s，1H)，5.04(d，J＝8.8Hz，1H)，4.94(s，2H)，4.01(d，J＝15.5Hz，1H)，2.63(m，1H)，2.46(s，3H)，2.44(d，J＝15.5Hz，1H)，0.95(d，J＝6.6Hz，3H)，0.29(d，J＝6.7Hz，3H)；MS(ES)m/e 642.0(M+H)+。
d)2-[(R)-1-(4-氨基甲基-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮向在EtOH(15mL)中的N-{1-[(R)-1-(3-芐基-7-氯-4-氧-3，4-二氫-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-2-對(duì)甲苯基-1H-咪唑-4-基甲基}-鄰苯二甲酰亞胺(0.50g，0.78mMol)中加入一水合肼(0.12mL，2.5mMol)。將反應(yīng)物于室溫下攪拌72小時(shí)，用C鹽濾墊過(guò)濾以除去不溶性沉淀，用EtOH沖洗，并蒸發(fā)至干。用硅膠閃蒸色譜法[5-10％(在MeOH中的5％NH4OH)/CH2Cl2]純化，得到標(biāo)題化合物(364mg，91％)，為一種白色固體泡沫1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.14(d，J＝8.6Hz，1H)，7.63(d，J＝1.8Hz，1H)，7.37(m，6H)，7.15(m，3H)，6.71(d，J＝1.7Hz，1H)，6.69(s，1H)，5.00(d，J＝10.9Hz，1H)，4.07(d，J＝15.5Hz，1H)，3.92(d，1H)，3.88(d，1H)，2.72(br s，2H)，2.65(m，1H)，2.49(s，3H)，2.48(d，J＝15.5Hz，1H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.30(d，J＝6.7Hz，3H)；MS(ES)m/e 512.2(M+H)+。
根據(jù)類似于上述的方法制備以下化合物


實(shí)施例13N-{1-[(R)-1-(3-芐基-7-氯-4-氧-3，4-二氫-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-2-對(duì)甲苯基-1H-咪唑-4-基甲基}-乙酰胺的制備向在CH2Cl2(5mL)中的2-[(R)-1-(4-氨基甲基-2-對(duì)甲苯基-咪唑-1-基)-2-甲基-丙基]-3-芐基-7-氯-色烯-4-酮(0.17g，0.33mMol)中攪拌加入吡啶(27μL，0.33mMol)和Ac2O(63μL，0.67mMol)。RT下攪拌4小時(shí)后，真空濃縮反應(yīng)物。將殘余物與(1∶1)Et2O/石油醚一起研磨，過(guò)濾并真空干燥，得到標(biāo)題化合物(163mg，89％)，為一種白色固體1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.14(d，J＝8.6Hz，1H)，7.59(d，J＝1.8Hz，1H)，7.43(m，6H)，7.17(m，3H)，6.84(br s，1H)，6.71(d，J＝2.2Hz，1H)，6.69(s，1H)，5.07(d，J＝10.9Hz，1H)，4.50(2d，1H)，4.43(2d，1H)，4.07(d，J＝15.5Hz，1H)，2.66(m，1H)，2.51(s，3H)，2.48(d，J＝15.5Hz，1H)，2.00(s，3H)，0.95(d，J＝6.6Hz，3H)，0.34(d，J＝6.7Hz，3H)；MS(ES)m/e 554.4(M+H)+。
實(shí)施例14 在配備回流冷凝器的250mL圓底燒瓶中，在N2氣氛下將4-氰基-2-氟苯甲酸(1，25g)、DMF(0.1mL)和亞硫酰氯(50mL)的混合物于90℃油浴中加熱回流30分鐘。用蒸餾頭代替回流冷凝器，并從反應(yīng)罐中蒸餾過(guò)量的亞硫酰氯。將油浴溫度升至120℃以促進(jìn)蒸餾。2小時(shí)后，將反應(yīng)容器冷卻至23℃，并放置在減壓(～25托)下。然后將反應(yīng)容器于90℃下加熱20分鐘，然后于130℃下加熱90分鐘，以除去任何過(guò)量的剩余亞硫酰氯。然后將反應(yīng)容器冷卻至23℃，并在高真空(～0.2托)下放置。反應(yīng)容器配備清潔的蒸餾頭和收集燒瓶。將容器置于137℃油浴，并從反應(yīng)罐中蒸餾出產(chǎn)物(b.p.＝107℃@～0.2托)。蒸餾物在冷卻時(shí)固化，得到2，為一種白色固體，接近定量收率。
在配備回流冷凝器的250mL圓底燒瓶中，在N2氮?dú)夥障聦?-氯-2-氟苯甲酸(3,25g)、DMF(0.1mL)和亞硫酰氯(50mL)的混合物于90℃油浴中加熱回流30分鐘。用蒸餾頭置換回流冷凝器，并從反應(yīng)罐中蒸餾出過(guò)量亞硫酰氯。將油浴溫度升至120℃以促進(jìn)蒸餾。2小時(shí)后，將反應(yīng)容器冷卻至23℃，并放置在減壓(～25托)下。然后將反應(yīng)容器于90℃下加熱20分鐘，然后于120℃下加熱90分鐘，以除去任何過(guò)量的剩余亞硫酰氯。然后將反應(yīng)容器冷卻至23℃，并配備清潔蒸餾頭和收集燒瓶。將容器置于160℃油浴，并從反應(yīng)罐中蒸餾出產(chǎn)物(b.p.＝124℃@～25托)，得到4，為一種無(wú)色油，接近定量收率。
實(shí)施例15 室溫下將胡椒酰氯(1，7.8g，42mmol)加入2-氨基-2-甲基-1-丙醇(4ml，42mmol)、CH2Cl2(200mL)和三乙胺(11.7ml，84mmol)的溶液中。45分鐘后濃縮反應(yīng)溶液，用EtOAc(40mL)稀釋所得殘余物，并用鹽水(30mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮，得到一種淺褐色油。將粗物質(zhì)(2，8.8g)不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
在0℃下于N2氣氛下將四丙基過(guò)釕酸銨(TPAP，638mg，1.8mmol)分部分加入2(8.6g，36.3mmol)、CH2Cl2(73ml，2mL/mmol)、4-甲基嗎啉N-氧化物(6.4g，54.5mmol)和分子篩4?；罨勰?18g，500mg/mmol)的溶液中。15分鐘后使反應(yīng)物暖至室溫。1小時(shí)后反應(yīng)完成(TLC)，用二氧化硅過(guò)濾，用EtOAc(100mL)洗脫，并濃縮濾液。這得到7g米色固體(3)。將該物質(zhì)重結(jié)晶將EtOAc(30mL)、MeOH(10mL)和己烷(1mL)分部分加入，加熱并超聲。如此得到一種油，然后加入己烷(100mL)并冷卻。結(jié)晶在溶液冷卻時(shí)立即開(kāi)始沉淀。將混合物過(guò)濾，并用己烷(10mL)洗滌結(jié)晶，得到4.88g(57％)3，為米色絨毛狀結(jié)晶。
實(shí)施例16 將2-氨基-2-甲基-1-丙醇(4ml，42mmol)、CH2Cl2(200mL)、4-乙酰苯甲酸(1，6.9g，42mmol)、EDC(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺HCl，12.1g，63mmol)、HOBT(N-羥基苯并三唑H2O，6.4g，42mmol)和Hunig堿(二異丙基乙胺，22mL，126mmol)的混合物于室溫下攪拌18小時(shí)。一旦完成(TLC，LC/MS)，濃縮反應(yīng)混合物，用EtOAc(50mL)稀釋所得殘余物，并用NaHCO3(2×40mL)和鹽水(40mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾，并濃縮濾液。用閃蒸柱色譜法(4∶1∶1己烷∶EtOAc∶CH2Cl2；1∶1∶1己烷∶EtOAc∶CH2Cl2；1∶1 EtOAc∶CH2Cl2)純化粗物質(zhì)以除去雙?；镔|(zhì)。得到醇2，收率54％(5.36g)。
在0℃下于N2氣氛下將四丙基過(guò)釕酸銨(TPAP，387mg，1.1mmol)分部分加入2(5.36g，22.8mmol)、CH2Cl2(46mL，2mL/mmol)、4-甲基-嗎啉N-氧化物(4g，34.2mmol)和分子篩4活化粉末(11.4g，500mg/mmol)的溶液中。15分鐘后使反應(yīng)物暖至室溫。1小時(shí)后反應(yīng)完成(TLC)，用二氧化硅過(guò)濾，用EtOAc(100mL)洗脫，并濃縮濾液。這得到4.4g淺粉色固體(3)。將該物質(zhì)重結(jié)晶將1∶1己烷∶EtOAc(5mL)、CH2Cl2(20mL)和MeOH(10mL)分部分加入，加熱并超聲。如此得到一種油，然后加入己烷(100mL)并冷卻。結(jié)晶在溶液冷卻時(shí)立即開(kāi)始沉淀。將混合物過(guò)濾，并用己烷(10mL)洗滌結(jié)晶，得到2.46g(46％)3，為米色絨毛狀結(jié)晶。
實(shí)施例17 將在草酰氯(5mL)中的4-乙酰基苯甲酸(500mg)的溶液加熱回流2小時(shí)。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)任何剩余的草酰氯，并將殘余物真空干燥。產(chǎn)物的收率是定量的。
實(shí)施例18 ((R)-1-異丙基-2-氧-丁-3-烯基)-氨基甲酸叔丁酯將四氫呋喃(THF，100mL)和在THF(360mL，360mmol，3.1當(dāng)量)中的1.0M乙烯基溴化鎂的溶液冷卻至-78℃，同時(shí)在氮?dú)夥障聰嚢琛?0分鐘內(nèi)用在THF(50mL)中的[(R)-(甲氧基-甲基-氨基甲?；?-甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(30.3g，116mmol，1當(dāng)量)逐滴處理混合物。將所得深黃色混合物于-78℃下攪拌30分鐘后，移去冷卻浴，并使反應(yīng)混合物緩慢暖至室溫過(guò)夜(15小時(shí))。將反應(yīng)混合物緩慢傾入1N鹽酸水溶液(700mL)的冰冷卻的溶液中，然后暖至室溫。用(3×600mL)乙酸乙酯萃取有機(jī)物，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，并真空濃縮。用閃蒸柱色譜法(5-10％乙酸乙酯/己烷)純化，得到產(chǎn)物，為一種白色固體(16.8g，64％)。ESMS[M+H]+228.4。
[(R)-(E)-1-異丙基-4-(3-甲氧基-苯基)-2-氧-丁-3-烯基]-氨基甲酸叔丁酯在氬氣氛下向在無(wú)水乙腈(150mL)中的((R)-1-異丙基-2-氧-丁-3-烯基)-氨基甲酸叔丁酯(13.54g，59.6mmol)的溶液中加入3-碘茴香醚(13.96g，59.6mmol)、三乙胺(9.1mL，65.6mmol)，然后加入乙酸鈀(II)(335mg，1.49mmol)。將所得澄清的黃色溶液加熱至80℃。加熱時(shí)反應(yīng)物加深，并發(fā)生鈀黑沉淀。15小時(shí)后，使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(150mL)終止反應(yīng)，并用乙醚(150mL)稀釋。用鹽水(100mL)洗滌乙醚層，并用乙醚(二個(gè)50mL部分)萃取合并的水層。用硫酸鎂干燥萃取物，過(guò)濾并減壓濃縮。用硅膠色譜法(9∶1己烷/EtOAc)立即純化殘余物，得到17.6g(88％)[(R)-(E)-1-異丙基-4-(3-甲氧基-苯基)-2-氧-丁-3-烯基]-氨基甲酸叔丁酯，為一種黃色油。MS(ES+)m/e 334.0[M+H]+。
-氨基甲酸叔丁酯根據(jù)關(guān)于[(R)-(E)-1-異丙基-4-(3-甲氧基-苯基)-2-氧-丁-3-烯基]-氨基甲酸叔丁酯所述的方法，用3-碘芐腈(5.50g，24.0mmol，1當(dāng)量)得到標(biāo)題化合物，為一種黃色固體(7.4g～90％純物質(zhì))。ESMS[M+H]+329.2。
-氨基甲酸叔丁酯氮?dú)夥障孪蛟谝宜嵋阴?450mL)中的[(R)-(E)-1-異丙基-4-(3-甲氧基-苯基)-2-氧-丁-3-烯基]-氨基甲酸叔丁酯(17.6g，52.9mmol)的溶液中加入10重量％擔(dān)載在碳上的鈀(300mg)。用氫氣球替換氮，并清洗燒瓶。3小時(shí)后，用氮清洗反應(yīng)燒瓶，并用C鹽濾墊過(guò)濾(用乙酸乙酯沖洗)。將濾液減壓濃縮，并用硅膠色譜法(9∶1己烷/EtOAc)純化殘余物，得到16.2g(91％)[(R)-(E)-1-異丙基-4-(3-甲氧基-苯基)-2-氧-丁基]-氨基甲酸叔丁酯，為一種無(wú)色油。MS(ES+)m/e 336.4[M+H]+。
D20＝+19.1(c＝0.755，MeOH)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.21(m，1H)，6.80-6.77(m，2H)，6.75(s，1H)，5.13(d，J＝8.4Hz，1H)，4.28(dd，J＝8.8，4.4Hz，1H)，3.81(s，3H)，2.93-2.88(m，2H)，2.85-2.76(m，2H)，2.14(m，1H)，1.46(s，9H)，1.00(d，J＝6.8Hz，3H)，0.75(d，J＝6.8Hz，3H)。
[(R)-4-(3-氰基-苯基)-1-異丙基-2-氧-丁基]-氨基甲酸叔丁酯室溫下將擔(dān)載在碳上的鈀(740mg 10％wt/wt Pd/C)加入在甲醇(200mL)中的[(R)-(Z)-4-(3-氰基-苯基)-1-異丙基-2-氧-丁-3-烯基]-氨基甲酸叔丁酯(7.4g，22.5mmol，1當(dāng)量)的脫氣溶液中。將反應(yīng)混合物完全脫氣，并用來(lái)自氣球的氫氣回填。在大氣壓下氫化2.5小時(shí)。然后用乙醚(300mL)稀釋(脫氣的)反應(yīng)混合物，用C鹽過(guò)濾，并用附加的乙醚(2×100mL)洗滌。真空濃縮后，用閃蒸柱色譜法(20％乙酸乙酯-己烷)純化殘余物，得到酮產(chǎn)物，為一種白色固體(5.9g，79％)。ESMS[M+H]+331.2。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.51(m，2H)，7.46(m，1H)，7.41(m，1H)，5.07(m，1H)，4.24(m，1H)，2.98(m，2H)，2.86(m，2H)，2.11(m，1H)，1.45(s，9H)，0.98(d，3H，J＝6.76Hz)，0.74(d，3H，J＝6.78Hz)。[α]D＝+24.74(c＝0.95，CH3OH)。
實(shí)施例19根據(jù)類似于上述的方法制備以下化合物



實(shí)施例20用以下方式制備用于靜脈內(nèi)給藥的藥物組合物。
1mg/mL(作為游離堿)IV溶液，載體為含有3.5％(w/v)甘露醇的pH5.0的50mM乙酸鈉緩沖液組成*單元配方(mg/mL)實(shí)施例2的化合物(游離堿)1.000冰醋酸 1.081乙酸鈉三水合物 4.355甘露醇，不含熱原 35.000注射用水(WFI) q.s.至1mL*除了活性化合物之外的所有組分為USP或Ph.Eur。
向適宜的混合容器中充入約75％的含WFI的本體溶液。將冰醋酸(1.081g)、乙酸鈉三水合物(4.355g)、甘露醇(35.000g)和活性化合物(1.000g)稱重，并分別加入混合容器中。加入后，通過(guò)用攪拌器攪拌將各成分溶于混合物。測(cè)量本體溶液的pH，并用5N NaOH或5N冰醋酸調(diào)節(jié)至5.0。用WFI使溶液達(dá)到其最終體積(1升)。如果活性化合物為藥學(xué)可接受的鹽、水合物或水合物的鹽，例如一鹽酸鹽或一鹽酸鹽的水合物，則加入與游離堿相等的活性化合物量。
實(shí)施例21N-(3-氨基丙基)-N-[(R)-1-3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺的鹽酸鹽的制備在一個(gè)實(shí)施方案中，以以下方式形成N-(3-氨基丙基)-N-[(R)-1-3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺的鹽酸鹽，如根據(jù)實(shí)施例2制備的。通過(guò)以下方法適宜地制備HCl鹽使游離堿(例如溶于適宜的溶劑，如TBME、THF和乙酸乙酯的一種或多種)與鹽酸、適宜的鹽酸水溶液或在水存在下反應(yīng)。向混合物中適宜地加入HCl鹽晶種以幫助結(jié)晶?？梢杂贸Ｒ?guī)技術(shù)如過(guò)濾和干燥(用溶劑，如TBME、THF和乙酸乙酯的一種或多種適宜地洗滌鹽)來(lái)分離所得鹽。
在特定的實(shí)施方案中，如下制備鹽1.將游離堿溶于10體積的TBME和5體積的THF，溶解在室溫下適宜地進(jìn)行；2.加入HCl水溶液，例如6.0M或12.0M，適宜地為1.1當(dāng)量，例如逐滴加入；3.向溶液中加入HCl鹽結(jié)晶作為晶種，例如根據(jù)以下制備B進(jìn)行制備；4.適宜地?cái)嚢柚敝两Y(jié)晶形成；5.適宜地通過(guò)采用過(guò)濾，用適宜的溶劑如TBME洗滌，并干燥而分離結(jié)晶。
在更特定的實(shí)施方案中，如下制備鹽制備A向配備攪拌棒的小瓶中加入500mg N-(3-氨基丙基)-N-[(R)-1-3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺和3mlTBME，并將游離堿于室溫下溶于TBME。鼓入HCl氣體約30秒鐘，直至形成一種白色固體。過(guò)濾并用500μL TBME將固體沖洗兩次。將固體轉(zhuǎn)移至試管，加入4ml TBME和攪拌棒，并在室溫下攪拌(鹽不溶解)。將含有混合物的試管放置在Argonaut RS10加熱模塊(Argonaut Technologies，F(xiàn)oster City，California)中，或者等同物中，且溫度循環(huán)如下1.室溫下30分鐘2. 30分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)變至40℃，并在40℃下保持30分鐘3. 30分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)變至室溫，并在室溫下保持30分鐘4. 30分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)變至10℃，并在10℃下保持30分鐘5. 30分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)變至室溫，并在室溫下保持30分鐘
6.根據(jù)需要，重復(fù)2-5通過(guò)20小時(shí)循環(huán)蒸發(fā)某些溶劑，在試管側(cè)壁上形成白色粉末，并在其底部形成熔融樣固體。加入2ml TBME。15天后，過(guò)濾淺黃色固體，并用約0.5ml TBME洗滌兩次，然后用1ml己烷洗滌兩次。室溫下在真空烘箱中干燥12-24小時(shí)，得到約440mg HCl鹽。
圖1和2分別代表根據(jù)制備A制備的鹽的XRPD和MDSC掃描。
制備B將4.23g N-(3-氨基丙基)-N-[(R)-1-3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基]-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺溶于5體積(21ml)THF。加入10體積(42ml)TBME(叔丁基甲基醚)，然后一次性加入1.1當(dāng)量的12NHCl(750μl)。用HCl鹽作晶種，如制備A制備(例如分3次加入，每次約10mg，持續(xù)約10分鐘)。將混合物攪拌過(guò)夜，例如持續(xù)約12-24小時(shí)。將混合物過(guò)濾，用TBME洗滌固體，并在室溫下在真空烘箱中干燥固體過(guò)夜，例如持續(xù)約12-24小時(shí)，得到約4.3g HCl鹽。
圖3代表根據(jù)制備B制備的鹽的XRPD掃描，本發(fā)明包括結(jié)晶N-(3-氨基丙基)-N-[(R)-1-3-芐基-7-氯-4-氧-4H-色烯-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺鹽酸鹽，其特征是X-射線衍射峰在約4.8、9.7、14.7、17.9、18.3、20.1、20.9、22.5、23.2、23.8、26.1和26.9度2θ。
實(shí)施例22用KSP抑制劑處理的腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞生存力的抑制原料和溶液·細(xì)胞SKOV3，卵巢癌(人)。
·培養(yǎng)基無(wú)酚紅RPMI+5％胎牛血清+2mM L-谷氨酰胺。
·用于測(cè)定細(xì)胞生存力的比色劑Promega MTS四唑嗡化合物。
·用于最大細(xì)胞殺傷的對(duì)照化合物Topotecan，1μM。
方法第1天-細(xì)胞鋪板用10mL PBS洗滌粘附的SKOV3細(xì)胞，然后加入2mL 0.25％胰蛋白酶，并在37℃下溫育5分鐘。用8mL培養(yǎng)基(無(wú)酚紅RPMI+5％FBS)從燒瓶中沖洗細(xì)胞，并轉(zhuǎn)入新鮮的燒瓶。用Coulter計(jì)數(shù)器測(cè)定細(xì)胞濃度，并計(jì)算獲得1000個(gè)細(xì)胞/100μL的適宜的細(xì)胞體積。將100μL培養(yǎng)基細(xì)胞懸浮液(調(diào)節(jié)至1000細(xì)胞/100μL)加入96孔平板的所有孔中，然后在37℃、100％濕度和5％CO2下溫育18-24小時(shí)，使細(xì)胞粘附在平板上。
方法第2天-化合物加入向一列孔的高壓滅菌的測(cè)定儲(chǔ)備液中以400X最大目標(biāo)濃度加入最初2.5μL的測(cè)試化合物。將1.25μL 400X(400μM)Topotecan加入其它孔中(用這些孔的光密度來(lái)扣除死亡細(xì)胞和載體的背景吸光度)。將不含DMSO的500μL培養(yǎng)基加入含有測(cè)試化合物的孔，并將250μL加入Topotecan孔。將250μL培養(yǎng)基+0.5％DMSO加入其余的孔中，將孔中的測(cè)試化合物連續(xù)稀釋。將來(lái)自測(cè)定儲(chǔ)備液的含化合物的培養(yǎng)基成行平板復(fù)制(平行兩份)至對(duì)應(yīng)的細(xì)胞平板。將細(xì)胞平板于37℃、100％濕度和5％CO2下溫育72小時(shí)。
方法第4天-MTS加入和OD讀數(shù)從培養(yǎng)箱中移出平板，并將40μL MTS/PMS加入每孔。然后將平板于37℃、100％濕度，5％CO2下溫育120分鐘，然后在5秒的振蕩循環(huán)之后96孔分光光度計(jì)中在490nm處讀取OD。
數(shù)據(jù)分析計(jì)算對(duì)照的歸一化的％(吸光度-背景)，并用Xlfit作出劑量-反應(yīng)曲線，由此曲線測(cè)定抑制生存力50％所需的化合物的濃度。本發(fā)明的化合物在通過(guò)上述方法測(cè)試時(shí)表現(xiàn)出活性。
實(shí)施例23對(duì)映異構(gòu)體分離通過(guò)手性色譜法，使用以下條件將富集的3∶1 R∶S的色酮對(duì)映異構(gòu)體的混合物分離成其純對(duì)映異構(gòu)體柱-Chiralpak AD，250×4.6mm(Diacel Inc.)。樣品-22.5mg/ml，在1∶1 i-PrOH∶己烷中。條件-用在己烷中的等滲50％i-PrOH的溶液洗脫40分鐘，在18.35分鐘時(shí)洗脫(S)-對(duì)映異構(gòu)體，在26.87分鐘時(shí)洗脫(R)-對(duì)映異構(gòu)體。(R)-對(duì)映異構(gòu)體明顯比實(shí)施例2的化合物的(S)-對(duì)映異構(gòu)體更有效。
實(shí)施例24應(yīng)用KSP抑制劑后的單極紡錘體形成人腫瘤細(xì)胞系Skov-3(卵巢)以每孔4,000個(gè)細(xì)胞的密度放入96孔板中，使它們粘附24小時(shí)，并用各種濃度的色酮化合物處理24小時(shí)。細(xì)胞固定在4％甲醛中，并用抗微管蛋白抗體(隨后使用熒光標(biāo)記的第二抗體識(shí)別)和Hoechst染料(其染色DNA)進(jìn)行染色。
肉眼檢查表明該化合物導(dǎo)致細(xì)胞周期停止在有絲分裂的前中期。DNA縮合，并且開(kāi)始形成紡錘體，但休止的細(xì)胞均勻地表現(xiàn)單極紡錘體，這表明抑制了紡錘極體的分離。微量注射抗KSP抗體也導(dǎo)致有絲分裂停止，休止細(xì)胞表現(xiàn)單極紡錘體。
實(shí)施例25在用KSP抑制劑處理的腫瘤細(xì)胞系中抑制細(xì)胞增殖以1000-2500個(gè)細(xì)胞/孔的密度將細(xì)胞鋪入96孔板的孔中，然后使它們粘附/生長(zhǎng)24小時(shí)。然后用多種濃度的藥物將它們處理48小時(shí)。添加化合物時(shí)的時(shí)間作為T(mén)0。使用試劑3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓(MTS)的基于四唑鎓的測(cè)定(專利號(hào)5,185,450)(參見(jiàn)Promega產(chǎn)品目錄#G3580，CellTiter96AQueousOne Solution Cell Proliferation Assay)，被用于測(cè)定T0時(shí)的細(xì)胞存活數(shù)目以及接觸化合物48小時(shí)后存活細(xì)胞的數(shù)目。對(duì)48小時(shí)后存活的細(xì)胞的數(shù)目與添加藥物時(shí)的存活細(xì)胞的數(shù)目進(jìn)行比較，以計(jì)算生長(zhǎng)抑制作用。
在僅用載體(0.25％DMSO)處理的對(duì)照孔中細(xì)胞在48小時(shí)后的生長(zhǎng)被認(rèn)為是100％的生長(zhǎng)，而添加化合物的孔中的細(xì)胞生長(zhǎng)與其進(jìn)行比較。
Gi50通過(guò)化合物的濃度(μM)對(duì)處理孔中細(xì)胞生長(zhǎng)的百分比作圖而計(jì)算。對(duì)于化合物計(jì)算的Gi50是與對(duì)照相比抑制生長(zhǎng)50％時(shí)的估計(jì)濃度，即在該濃度100×[(處理48-T0)/(對(duì)照48-T0)]＝50其中處理48是48小時(shí)時(shí)處理細(xì)胞的值，而對(duì)照48是48小時(shí)時(shí)對(duì)照細(xì)胞的值。
所有的化合物濃度均平行兩份測(cè)試，而對(duì)照是12個(gè)孔的平均值。National Cancer Institute使用非常類似的96孔板方案和Gi50。計(jì)算方法(參見(jiàn)Monks等人，J.NaiI.Cancer Iust.83757-766(1991))。但是，National Cancer Institute用于定量細(xì)胞數(shù)目的方法不使用MTS，而是使用另外的方法。
實(shí)施例26IC50的計(jì)算使用ATP酶測(cè)定來(lái)測(cè)量化合物對(duì)KSP活性的IC50值。使用以下溶液溶液1由3mM磷酸烯醇丙酮酸鉀鹽(Sigma P-7127)、2mM ATP(Sigma A-3377)、1mM IDTT(Sigma D-9779)、5μM紫杉醇(SigmaT-7402)、10ppm消泡289(Sigma A-8436)、25mM Pipes/KOH pH6.8(Sigma P6757)、2mM氯化鎂(VWR JT400301)以及1mM EGTA(Sigma E3889)組成。溶液2由1mM NADH(Sigma N 8129)、0.2mg/ml BSA(Sigma A7906)、丙酮酸激酶7U/ml、L-乳酸脫氫酶10U/ml(Sigma P0294)、100nM KSP運(yùn)動(dòng)域、50μg/ml微管、1mM DTT(SigmaD9779)、5μM紫杉醇(Sigma T-7402)、10ppm消泡289(SigmaA-8436)、25mM Pipes/KOH pH6.8(Sigma P6757)、2mM氯化鎂(VWRJT4003-01)以及1mM EGTA(Sigma E3889)組成。使用溶液1在96孔微量滴定板(Corning Costar 3695)中進(jìn)行化合物的系列稀釋(8-12個(gè)2倍稀釋)。在系列稀釋后，每個(gè)孔有50μL溶液1。在每個(gè)孔中添加5μL溶液2，由此使反應(yīng)開(kāi)始。這可通過(guò)手工使用多通道移液管或者用自動(dòng)液體處理裝置來(lái)實(shí)現(xiàn)。將微量滴定板轉(zhuǎn)移至微板吸光度讀數(shù)器中，并以動(dòng)態(tài)模式讀取每個(gè)孔在340nm處的多個(gè)吸光度讀數(shù)。所觀察到的變化速率與ATP酶成正比，并繪制其作為化合物濃度的函數(shù)的圖。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)IC50測(cè)定，將獲得的數(shù)據(jù)通過(guò)以下四參數(shù)方程使用非線性擬合程序(如Grafit 4)進(jìn)行擬合 其中y是觀察到的速率，而x是化合物濃度。
權(quán)利要求
1.具有以下結(jié)構(gòu)的化合物 其中R1選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基-；R2和R2′獨(dú)立地選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的烷氧基、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基；或者R2和R2′一起形成任選取代的3-7元環(huán)；R12選自任選取代的咪唑基、任選取代的咪唑啉基、-NHR4、-N(R4)(COR3)、-N(R4)(SO2R3a)和-N(R4)(CH2R3b)；R3選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-、任選取代的雜芳烷基-、R15O-和R17-NH-；R3a選自任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-、任選取代的雜芳烷基-和R17-NH-；R3b選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基；R4選自氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜環(huán)基-和任選取代的雜芳烷基-；R5、R6、R7和R8獨(dú)立地選自氫、?；⑷芜x取代的烷基-、任選取代的烷氧基、鹵素、羥基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺酰基-、烷基磺酰氨基-、烷硫基-、羧基烷基-、酰胺基-、氨基羰基-、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基；且R15選自任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基-，R17為氫、任選取代的烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-或任選取代的雜芳烷基-，包括單一立體異構(gòu)體、立體異構(gòu)體混合物；式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽；式I的化合物的藥學(xué)可接受的溶劑化物的藥學(xué)可接受的溶劑化物；或者式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽的藥學(xué)可接受的溶劑化物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中如果R2和R2′之一為氫，則另一個(gè)不是氫。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R2和R2′為氫，而R1選自任選取代的芳基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳基-和任選取代的雜芳烷基-，但條件是R1不是取代的苯基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自氫、氨基、烷基氨基、羥基、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基和氰基。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自氫、氰基、甲氧基和鹵素。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中R5、R6和R8各自為氫，而R7為氰基、甲氧基或鹵素。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中R2為任選取代的C1-C4烷基，而R2為氫或任選取代的C1-C4烷基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中R2’為氫，而R2為任選取代的C1-C4烷基。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R2′為氫，而R2為乙基或丙基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中R2為異丙基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1為氫、任選取代的C1-C4烷基、任選取代的苯基-C1-C4-烷基-、任選取代的萘基甲基、任選取代的苯基，或萘基。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R1為任選取代的苯基-C1-C4-烷基-或任選取代的萘基甲基-。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R1為萘基、苯基、溴苯基、氯苯基、甲氧基苯基、乙氧基苯基、甲苯基、二甲基苯基、氯氟苯基、甲基氯苯基、乙基苯基、苯乙基、芐基、氯芐基、甲基芐基、甲氧基芐基、氰基芐基、羥基芐基、二氯芐基、二甲氧基芐基或萘基甲基。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中R1為芐基-、氰基芐基-、甲氧基芐基-或萘基甲基。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中R1為芐基。
16.根據(jù)權(quán)利要求1或3的化合物，其中R1為任選取代的芳基-C1-C4-烷基-或任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的化合物，其中R1為任選取代的苯基-C1-C4-烷基-和任選取代的萘基甲基。
18.根據(jù)權(quán)利要求16的化合物，其中R1為芐基、氯芐基、甲基芐基、甲氧基芐基、氰基芐基、羥基芐基、二氯芐基、二甲氧基芐基或萘基甲基。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中R1為芐基-、氰基芐基-、甲氧基芐基-或萘基甲基。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的化合物，其中R1為芐基。
21.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R12為-N(R4)(COR3)，而R3選自任選取代的烷基-、任選取代的芳烷基-、任選取代的雜芳烷基-、任選取代的雜芳基-、任選取代的芳基-、R15O-和R17-NH-；R15選自任選取代的烷基和任選取代的芳基；而R17選自氫、任選取代的烷基和任選取代的芳基。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的化合物，其中R3選自苯基；被一個(gè)或多個(gè)以下取代基取代的苯基鹵素、C1-C4烷基、被羥基取代的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、被C1-C4烷氧基取代的C1-C4烷基、硝基、甲?；?、羧基、氰基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、?；?N-?；蛉谆?；芐基；苯氧基甲基-；鹵代苯氧基甲基-；苯基乙烯基-；雜芳基-；被C1-C4烷基取代的雜芳基-或被鹵素取代的C1-C4烷基；被C1-C4烷氧基-和芐氧基甲基取代的C1-C4烷基。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中R3選自苯基、鹵代苯基、二鹵代苯基、氰基苯基、鹵代(三氟甲基)苯基、羥基甲基苯基、甲氧基苯基、乙氧基苯基、羧基苯基、乙基苯基、甲苯基、亞甲二氧基苯基、亞乙二氧基苯基、甲氧基氯苯基、二氫-苯并二噁烯基、甲基鹵代苯基、三氟甲基苯基、雙(三氟甲基)苯基芐基、呋喃基、C1-C4烷基取代的呋喃基、三氟甲基呋喃基、C1-C4烷基取代的三氟甲基呋喃基、苯并呋喃基、苯硫基、C1-C4烷基取代的苯硫基、苯并噻吩基、苯并噻二唑基、吡啶基、吲哚基、甲基吡啶基、三氟甲基吡啶基、吡咯基、喹啉基、甲代吡啶基、吡唑基、C1-C4烷基取代的吡唑基、N-甲基吡唑基、C1-C4烷基取代的N-甲基吡唑基、C1-C4烷基取代的吡嗪基、C1-C4烷基取代的異噁唑基、苯并異噁唑基、嗎啉代甲基、甲硫基甲基、甲氧基甲基、N-甲基咪唑基和咪唑基。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的化合物，其中R3為甲苯基、鹵代苯基、鹵代甲基苯基、羥基甲基苯基、亞甲二氧基苯基、甲?；交蚯杌交?。
25.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R12為-N(R4)(SO2R3a)，而R3a選自C1-C13烷基；苯基；萘基；被鹵素、C1-C4烷基-、C1-C4烷氧基、氰基、硝基、亞甲二氧基或三氟甲基取代的苯基；聯(lián)苯基和雜芳基。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的化合物，其中R3a選自被鹵素、C1-C4烷基-、C1-C4烷氧基、氰基、硝基、亞甲二氧基或三氟甲基取代的苯基；和萘基。
27.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R12為-N(R4)(CH2R3b)，而R3b選自C1-C13烷基；取代的C1-C4烷基；苯基；萘基；被羧基、烷氧羰基、氰基、鹵素、C1-C4烷基-、C1-C4烷氧基、硝基、亞甲二氧基或三氟甲基取代的苯基；聯(lián)苯基；芐基；和雜環(huán)基。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的化合物，其中R3b選自被一個(gè)或多個(gè)鹵素、甲基、甲氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基和或甲氧羰基取代的苯基；哌啶基；和萘基。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的化合物，其中R3b選自鹵代苯基、多鹵代苯基、甲苯基、二甲基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、氰基苯基、三氟甲基苯基、三氟甲氧基苯基、雙(三氟甲基)苯基、羧基苯基、叔丁基苯基、甲氧羰基苯基、哌啶基和萘基。
30.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R12為-N(R4)(CH2R3b)，而R4選自氫、任選取代的C1-C13烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的雜環(huán)基和任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-(優(yōu)選氫或任選取代的C1-C13烷基)。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的化合物，其中R4選自氫、C1-C4烷基；環(huán)己基；被羥基、C1-C4烷氧基或C1-C4烷基取代的苯基；芐基；雜芳基甲基-；雜芳基乙基-；雜芳基丙基-；和R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4烷基)氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、C1-C4烷氧基-或N-雜環(huán)基-，特別是吡咯烷基、哌啶子基或咪唑基。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的化合物，其中R4為R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4烷基)氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、C1-C4烷氧基或N-雜環(huán)基。
33.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R12為-NH(R4)，而R4選自氫、任選取代的C1-C13烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的雜環(huán)基和任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-(優(yōu)選氫或任選取代的C1-C13烷基)。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的化合物，其中R4為R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4烷基)氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、C1-C4烷氧基或N-雜環(huán)基。
35.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R12為-N(R4)(COR3)，而R4選自氫、C1-C4烷基；環(huán)己基；被羥基、C1-C4烷氧基或C1-C4烷基取代的苯基；芐基；雜芳基甲基-；雜芳基乙基-；雜芳基丙基-；和R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4烷基)氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、C1-C4烷氧基-或N-雜環(huán)基-，特別是吡咯烷基、哌啶子基或咪唑基。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的化合物，其中R4為R16-亞烷基-，而R16為C1-C4烷氧基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羥基或N-雜環(huán)基。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的化合物，其中R4為R16-亞烷基-，而R16為氨基。
38.根據(jù)權(quán)利要求36的化合物，其中R4選自氫、甲基、乙基、丙基、丁基、環(huán)己基、羧基乙基、羧基甲基、甲氧基乙基-、羥基乙基-、羥基丙基-、二甲基氨基乙基-、二甲基氨基丙基-、二乙基氨基乙基-、二乙基氨基丙基-、氨基丙基-、甲基氨基丙基-、2，2-二甲基-3-(二甲基氨基)丙基-、1-環(huán)己基-4-(二乙基氨基)丁基-、氨基乙基-、氨基丙基-、氨基丁基-、氨基戊基-、氨基己基-、氨基乙氧基乙基-、異丙基氨基丙基-、二異丙基氨基乙基-、1-甲基-4-(二乙基氨基)丁基-、(t-Boc)氨基丙基-、羥基苯基-、芐基、甲氧基苯基-、甲基甲氧基苯基-、二甲基苯基-、甲苯基、乙基苯基-、(氧代吡咯烷基)丙基-、(甲氧羰基)乙基-、芐基哌啶基-、吡啶基乙基-、吡啶基甲基-、嗎啉基乙基-、嗎啉基丙基-、哌啶基-、氮雜環(huán)丁烷基甲基-、氮雜環(huán)丁烷基乙基-、氮雜環(huán)丁烷基丙基-、吡咯烷基乙基-、吡咯烷基丙基-、哌啶基甲基-、哌啶基乙基-、咪唑基丙基-、咪唑基乙基-、(乙基吡咯烷基)甲基-、(甲基吡咯烷基)乙基-、(甲基哌啶基)丙基-、(甲基哌嗪基)丙基-、呋喃基甲基-和吲哚基乙基。
39.根據(jù)權(quán)利要求38的化合物，其中R4為氨基乙基-、氨基丙基-、氨基丁基-、氨基戊基-、氨基己基-、甲基氨基乙基-、甲基氨基丙基-、甲基氨基丁基-、甲基氨基戊基-、甲基氨基己基-、二甲基氨基乙基-、二甲基氨基丙基-、二甲基氨基丁基-、二甲基氨基戊基-、二甲基氨基己基-、乙基氨基乙基-、乙基氨基丙基-、乙基氨基丁基-、乙基氨基戊基-、乙基氨基己基-、二乙基氨基乙基-、二乙基氨基丙基-、二乙基氨基丁基-、二乙基氨基戊基-或二乙基氨基己基。
40.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R12為咪唑，且R12具有下式 其中R9選自氫、任選取代的C1-C8烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的雜芳基-C1-C4-烷基-、任選取代的芳基-C1-C4-烷氧基、任選取代的雜芳基-C1-C4-烷氧基、任選取代的雜芳基；且R13和R13’獨(dú)立地為氫、任選取代的C1-C8烷基-、任選取代的芳基-或任選取代的芳基-C1-C4-烷基。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的化合物，其中R9為被C1-C4烷基、C1-C4-烷氧基-和/或鹵素取代的苯基；苯基；或芐基。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的化合物，其中R9為甲苯基；鹵代苯基；或鹵代甲基苯基。
43.根據(jù)權(quán)利要求40的化合物，其中R13為氫，而R13’為取代的C1-C4烷基。
44.根據(jù)權(quán)利要求43的化合物，其中R13為氫，而R13’為氨基甲基-、氨基乙基-、氨基丙基-、乙酰氨基-甲基-、乙酰氨基乙基-、芐氧羰基氨基-甲基-或芐氧羰基氨基-乙基-。
45.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R12為咪唑啉，且R12具有下式 其中R9選自氫、任選取代的C1-C8烷基-、任選取代的芳基-、任選取代的芳基-C1-C4-烷基-和任選取代的雜芳基；且R10、R10′、R14和R14′獨(dú)立地選自氫、任選取代的C1-C8烷基-、任選取代的芳基-和任選取代的芳基-C1-C4-烷基。
46.根據(jù)權(quán)利要求45的化合物，其中R9為亞甲二氧基苯基；苯基；C1-C4烷基-、C1-C4烷氧基-和/或鹵素取代的苯基；或芐基。
47.根據(jù)權(quán)利要求46的化合物，其中R9為亞甲二氧基苯基；苯基；甲苯基；甲氧基苯基-；鹵代苯基；或鹵代甲基苯基。
48.根據(jù)權(quán)利要求45的化合物，其中R10、R10′、R14′和R14獨(dú)立地為氫或任選取代的C1-C4烷基。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的化合物，其中R14′和R14為氫。
50.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為芐基、鹵代芐基、甲氧基芐基-、氰基芐基或萘基甲基-；R2為乙基或丙基；R2’為氫；R5為氫；R6為氫；R7為鹵素、氰基、甲氧基或氫；R8為氫；且R12為-NR4(COR3)，其中R3為任選取代的芳基，而R4為R16-亞烷基-，其中R16為羥基、二(C1-C4)烷基氨基-、(C1-C4烷基)氨基-、氨基、吡咯烷基、哌啶子基、咪唑基和嗎啉代。
51.根據(jù)權(quán)利要求50的化合物，其中R1為芐基、鹵代芐基、甲氧基芐基-、氰基芐基或萘基甲基-；R2為丙基；R2′為氫；R5為氫；R6為氫；R7為鹵素、氰基、甲氧基或氫；R8為氫；且R12為-NR4(COR3)，其中R4為氨基丙基，而R3為甲苯基。
52.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1為芐基、鹵代芐基、甲氧基芐基-、氰基芐基或萘基甲基；R2為乙基或丙基；R2′為氫；R5為氫；R6為氫；R7為鹵素、氰基、甲氧基或氫；R8為氫；且R12為任選取代的咪唑啉基，其中R10、R10′、R14和R14′獨(dú)立地為氫或任選取代的C1-C4烷基；而R9為任選取代的苯基。
53.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1為芐基、鹵代芐基、甲氧基芐基-、氰基芐基或萘基甲基；R2為乙基或丙基；R2’為氫；R5為氫；R6為氫；R7為鹵素、氰基、甲氧基或氫；R8為氫；且R12為任選取代的咪唑，其中R13為氫，而R13′為氫或任選取代的烷基；而R9為任選取代的芳基。
54.根據(jù)權(quán)利要求1-47之任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物，其中R2和R2’各自與具有R構(gòu)型的立體中心連接。
55.根據(jù)權(quán)利要求1-48之任一項(xiàng)的化合物，所述化合物是鹽酸、磷酸或草酸鹽。
56.一種包含藥用賦形劑和權(quán)利要求1-47之任一項(xiàng)的化合物、鹽或溶劑化物的組合物。
57.根據(jù)權(quán)利要求50的組合物，其中除了式I的化合物或其藥用鹽或溶劑化物，所述組合物還包含化學(xué)治療劑。
58.根據(jù)權(quán)利要求51的組合物，其中所述組合物還包含紫杉烷。
59.根據(jù)權(quán)利要求51的組合物，其中所述組合物還包含長(zhǎng)春花屬生物堿。
60.根據(jù)權(quán)利要求51的組合物，其中所述組合物還包含拓樸異構(gòu)酶I抑制劑。
61.一種調(diào)節(jié)KSP驅(qū)動(dòng)蛋白活性的方法，所述方法包括使所述驅(qū)動(dòng)蛋白與有效量的權(quán)利要求1-55之任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物接觸。
62.一種抑制KSP的方法，所述方法包括使所述驅(qū)動(dòng)蛋白與有效量的權(quán)利要求1-55之任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物接觸。
63.一種用于治療細(xì)胞增殖性疾病的方法，所述方法包括給予需要其的受試者權(quán)利要求1-55之任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物。
64.一種用于治療細(xì)胞增殖性疾病的方法，所述方法包括給予需要其的受試者權(quán)利要求56-60之任一項(xiàng)的組合物。
65.根據(jù)權(quán)利要求63或權(quán)利要求64的方法，其中所述疾病選自癌癥、增生、再狹窄、心臟肥大、免疫疾病和炎癥。
66.權(quán)利要求1-66之任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物用于制備治療細(xì)胞增殖性疾病的藥物的用途。
67.權(quán)利要求66定義的化合物的用途，用于制備治療與KSP驅(qū)動(dòng)蛋白活性有關(guān)的病癥的藥物。
全文摘要
本申請(qǐng)公開(kāi)了用于通過(guò)調(diào)節(jié)KSP活性來(lái)治療細(xì)胞增殖性疾病和病癥的化合物。
文檔編號(hào)A61K45/00GK1662508SQ03814066
公開(kāi)日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2003年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月17日
發(fā)明者安德魯·麥克唐納, 古斯塔夫·貝格內(nèi)斯, 馮柏年, 小戴維·J.·C.·莫干斯, 史蒂文·戴維·奈特, 肯尼思·A.·紐蘭德, 達(dá)西昂特·達(dá)哈納特, 克里斯托弗·S.·布魯克 申請(qǐng)人:賽特凱恩蒂克公司, 史克比徹姆公司