專利名稱：治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法及其產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及純中藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種治療心血管疾病的注射劑(商品名為疏血通)的制造方法及其產(chǎn)品。
目前治療心血管疾病的中西藥物雖然很多，但是高效、速效、安全的特效藥卻不多見，造成心血管疾病的死亡率及后遺癥的發(fā)生率居高不下。為此，研制一種高效、速效、安全的藥物，降低病死率和后遺癥發(fā)生率就成為醫(yī)藥界的主攻方向。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是它包括如下步驟(1)原料選擇及低溫浸漬在室溫條件下，將水蛭和地龍分別用生理鹽水浸泡，使其表面充分展開，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，將清洗至干凈的水蛭和地龍分別置于2～4倍的生理鹽水中，于低溫0～4℃浸漬15～30小時，過濾，將濾液與藥渣分別存放備用；(2)搗碎研磨將藥渣采用高速組織搗碎機將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合使用勻漿器磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；(3)冷凍及解融將勻漿液在-15℃以下冷凍15～30小時后取出，于低溫0～4℃條件下解融，再按上述條件冷凍和解融反復(fù)至少2次；(4)分離和純化將上述冷凍和解融液置于離心機離心分離，再將上清液通過分子量為5萬的濾柱進(jìn)行粗濾，濾液經(jīng)105～136℃熱壓10～30分鐘；再通過分子量為1萬的超濾柱進(jìn)一步過濾純化；(5)配液將分別提取的水蛭溶液和地龍溶液以一定比例混合均勻，包括制成1-20ml/支的注射劑，或50-200ml/瓶的注射劑，或脫水干燥成粉針劑，經(jīng)檢測后包裝。
該水蛭和/或地龍原料包括干品和/或鮮品。該步驟(3)的冷凍及解融中，其勻漿液為在-20℃冷凍20小時。
本發(fā)明還提供一種治療心血管疾病的注射劑，其特征是它包含有水蛭生理鹽水提取液33％～84％和地龍生理鹽水提取液16％～67％。
本發(fā)明的治療心腦血管疾病注射劑的重要意義是進(jìn)一步發(fā)掘和繼承祖國醫(yī)藥學(xué)中的寶貴遺產(chǎn)；其次針對心腦血管疾病起病急驟、變化迅速、病情危急的特點，發(fā)掘出一種高效、速效、安全的注射劑藥物，開創(chuàng)了動物類中藥復(fù)方注射劑的先河，最大限度降低心腦血管疾病的病死率和中風(fēng)后遺癥；通過對動物類藥物全方位的研究，在傳統(tǒng)中藥基礎(chǔ)上采用現(xiàn)代生化技術(shù)加以提高，充分發(fā)揮動物類中藥的優(yōu)勢，使其更好地造福于人類。
下面結(jié)合較佳實施例和附圖
進(jìn)一步說明。
圖2是本發(fā)明的制造50-500ml/瓶注射劑的工藝流程示意圖。
圖3是本發(fā)明的制造粉針注射劑的工藝流程示意圖。
5、配液、灌封至成品將分別提取的水蛭和地龍溶液混和均勻，加生理鹽水至2000ml，灌封，每支2ml，滅菌、檢測、包裝。
6、檢測結(jié)果總氨基酸5.90mg/支；總糖15.20mg/支；次黃嘌呤0.136mg/支；總固體25.16mg/支；可控指標(biāo)占總固體84.40％。
需要說明的是在配液時，加入的生理鹽水可以是2000-5000ml，作成系列不同濃度的注射劑，以滿足不同病人的需求。
實施例2參閱圖2所示，本發(fā)明實施例2的治療心腦血管疾病的瓶注射劑的制造方法包括如下步驟1、原料選擇及低溫浸漬主要藥材原料是水蛭和地龍，水蛭655g(干品)及地龍345g(干品)，在室溫條件下，分別用生理鹽水浸泡2.5小時左右，使其表面充分展開，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，將清洗至干凈的水蛭和地龍分別置于4倍的生理鹽水中，于低溫(0～4℃)浸漬15小時，過濾，將濾液與藥渣分別存放備用；2、搗碎研磨將藥渣采用高速組織搗碎機(1000rpm)，利用高速轉(zhuǎn)動的刀片將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合，使用勻漿器利用其兩個磨砂面相互摩擦，將組織磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；3、冷凍及解融將勻漿液在-15℃以下冷凍25小時后取出，于低溫0～4℃條件下解融，再按上述條件冷凍和解融反復(fù)4次；4、分離和純化將上述冷凍和解融液置于離心機(5000r/min)離心分離，再將上清液通過分子量為5萬的濾柱進(jìn)行粗濾，濾液經(jīng)121℃熱壓20分鐘；再通過分子量為1萬的超濾柱進(jìn)一步過濾純化；5、配液、分裝至成品將分別提取的水蛭和地龍溶液混合均勻，加生理鹽水至50000ml，分裝，每瓶100ml，滅菌、檢驗、包裝6、檢測結(jié)果總氨基酸9.00mg/瓶；總糖29.0mg/瓶；次黃嘌呤0.331mg/瓶；總固體45.52mg/瓶；可控指標(biāo)占總固體84.21％。
實施例3
參閱圖3所示，本發(fā)明實施例3的治療心腦血管疾病的凍干粉針劑的制造方法包括如下步驟1、原料選擇及低溫浸漬主要藥材原料是水蛭和地龍，水蛭715g(干品)及地龍285g(干品)，在室溫條件下，分別用生理鹽水浸泡2小時左右，使其表面充分展開，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，將清洗至干凈的水蛭和地龍分別置于3倍的生理鹽水中，于低溫(0～4℃)浸漬25小時，過濾，將濾液與藥渣分別存放備用；2、搗碎研磨將藥渣采用高速組織搗碎機(1000rpm)，利用高速轉(zhuǎn)動的刀片將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合，使用勻漿器利用其兩個磨砂面相互摩擦，將組織磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；3、冷凍及解融將勻漿液在-20℃冷凍15小時后取出，于低溫0～4℃條件下解融，再按上述條件冷凍和解融反復(fù)5次；4、分離和純化將上述冷凍和解融液置于離心機(5000r/min)離心分離，再將上清液通過分子量為5萬的濾柱進(jìn)行粗濾，濾液經(jīng)130℃熱壓10分鐘；再通過分子量為1萬的超濾柱進(jìn)一步過濾純化；5、配液、分裝、凍干將分別提取的水蛭和地龍溶液混合均勻，加入5％甘露醇，加生理鹽水至2000ml，先經(jīng)分子量為1萬的超濾柱過濾，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜終端除菌過濾，分裝于西林瓶或安瓿中，在-40℃至-60℃預(yù)凍3～4小時，隨后抽真空(真空度低于15pa)，線性升溫、干燥時間20～36小時，即可制成凍干粉針劑。
6、檢測結(jié)果總氨基酸8.44mg/支；總糖28.8mg/支；次黃嘌呤0.344mg/支；總固體44.56mg/支；可控指標(biāo)占總固體84.34％。
關(guān)于本發(fā)明的制造方法的創(chuàng)造性的進(jìn)一步說明如下1、關(guān)于原料及劑型的選擇水蛭做為一味常用的活血化瘀中藥，其適應(yīng)癥治療重點，也由以往的婦科疾患，轉(zhuǎn)移到現(xiàn)在的心腦血管疾病上。傳統(tǒng)的水蛭用于治療心腦血管疾病上，有以復(fù)方辨證施治的，更多的則是單味藥的投治，都收到了較好效果，由于都是口服途徑給藥，其有效物質(zhì)的生物利用度較低，造成其療效較為緩慢，不適應(yīng)急性心腦血管病的需求。
地龍的藥用價值常用于咳喘、中風(fēng)后遺癥、慢性腎小球腎炎、腮腺炎、跌打損傷等，無論是復(fù)方組合，還是單方施治，都有較好的臨床療效。但是，由于都是口服途徑給藥，其有效物質(zhì)的生物利用度較低，造成其療效較為緩慢，不適應(yīng)急性心腦血管病的需求。
本發(fā)明將以上二者合用，達(dá)到破血逐瘀之中具有活血通絡(luò)之意，軟堅活血有助于通絡(luò)，可謂相得益彰，由于注射劑具有起效迅速可靠，適用于不宜或不能口服給藥的危重病人，而心腦血管疾病，尤其是急性心腦血管疾病，多以起病急驟、變化迅速及病情危重為特點，因此，注射劑為治療心腦血管疾病的首選給藥途徑。通過將水蛭和地龍配伍，制成小容量注射針劑、大容量注射劑或粉針劑，達(dá)到高效速效共奏活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)的作用，以及治療心血管疾病的目的。
2、關(guān)于原料的前處理的方法為了便于保存和運輸，中藥材大多采用干品，本發(fā)明使用的中藥原料水蛭和地龍前處理方法是在室溫條件下，分別用生理鹽水浸泡3小時左右，使其表面充分展開，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，其浸泡液經(jīng)過“紙色譜法”(中國藥典2000年-部附錄VI A)試驗，未發(fā)現(xiàn)其中有氨基酸，該處理方法即達(dá)到使干燥藥材展開，清除雜質(zhì)污垢，又不使有效成分損失的目的。
3、關(guān)于提取中藥的有效成分的工藝方法對于提取中藥的有效成分的傳統(tǒng)方法是采用醇提取法或水煎煮法，本發(fā)明人將醇提取法和水煎煮法與本發(fā)明的方法分別制備相同濃度的提取液應(yīng)用于大鼠，測定凝血時間，結(jié)果見表1所示。
表1

從表1可見三種提取液對大鼠全凝血時間(CTg)的影響，說明本發(fā)明的方法最佳。
4、關(guān)于細(xì)胞的破碎方法本發(fā)明所使用的水蛭和地龍通常是干品，經(jīng)過清洗后再浸泡，組織雖然已變軟，但直接研磨成勻漿液，還是相當(dāng)費時又困難，因此，本發(fā)明先采用高速組織搗碎機(1000rpm)，利用高速轉(zhuǎn)動的鋒利的刀片將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合，使用勻漿器利用其兩個磨砂面相互摩擦，將組織磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；在機械破碎的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用物理破碎法，即反復(fù)冷凍法，即于低溫(-15～-20℃)使之凍固，然后再緩慢地解融，如此反復(fù)地操作，使大部分細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)顆粒破壞，其原理是由于滲透壓的變化，使結(jié)合水凍結(jié)，產(chǎn)生組織的變形，冰片將細(xì)胞膜破碎，使蛋白質(zhì)類可溶性成分溶解于溶液中，同時，可以使脂蛋白凍結(jié)變性，以利于清除。
5、關(guān)于濾過條件與熱壓條件的選擇本發(fā)明的產(chǎn)品為靜脈注射劑，又是從動物體提取的制劑，因此，不能有蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，否則其后果不堪設(shè)想。本發(fā)明所采用的方法是首先選擇5萬分子量左右的濾柱進(jìn)行粗濾，這樣可以使低于5萬分子量的物質(zhì)通過，除去5萬以上的蛋白質(zhì)等大分子量物質(zhì)；第二步選用分子量1萬以下的超濾柱過濾，使保留1萬以下的小分子多肽，除去較大分子肽。
由于低聚肽的性質(zhì)與氨基酸相似，其既溶于水，也溶于醇，且受熱不凝固，很難除去，其無論使用高濃度醇，或采用煮沸冷藏、或活性炭吸附等均不能將其除去。本發(fā)明經(jīng)過大量的實驗研究，創(chuàng)造出使濾液經(jīng)105～136℃熱壓10～45分鐘處理，一方面可以使部分低聚肽進(jìn)一步分解成氨基酸，溶解于提取液中；另一方面可以使部分低聚肽凝固析出沉淀，以便除去。
以下是關(guān)于本發(fā)明的方法制造的治療心血管疾病的注射劑(商品名為疏血通)的藥效學(xué)、藥理學(xué)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥品穩(wěn)定性和臨床試驗等的試驗研究。
委托中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所、中國藥品生物制品檢定所，中國科學(xué)院物理所進(jìn)一步按照“中藥注射劑研制指導(dǎo)原則(試行)”的要求，對藥效學(xué)、藥理學(xué)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藥品穩(wěn)定性等進(jìn)行了全面系統(tǒng)的試驗研究?，F(xiàn)將試驗研究結(jié)果綜述如下(一)藥效學(xué)及一般藥理的試驗研究1、對小鼠凝血時間的影響分別給小鼠尾iv注射2.5和5.0g/kg(生藥量，以下同)本發(fā)明的注射劑后，測量其凝血時間，結(jié)果表明凝血時間均顯著延長；2、對大鼠血小板的影響(1)對大鼠血小板的影響分別給大鼠尾iv注射1.0、2.5和5.0g/kg本發(fā)明的注射劑后，測量其血小板數(shù)，結(jié)果表明均具有輕度降低血小板數(shù)，顯著降低血小板的粘附的作用，有利于減少血栓的形成；(2)對大鼠血小板聚集的影響分別給大鼠尾iv注射0.5、1.0和2.5g/kg本發(fā)明的注射劑后，測量其血小板聚集，結(jié)果表明均可使ADP、花生四烯酸和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集減少，并顯示出一定的劑量效應(yīng)關(guān)系；3、對血栓的影響(1)對預(yù)防血栓形成的影響分別給大鼠尾iv注射0.5、1.0和2.5g/kg本發(fā)明的注射劑后，進(jìn)行其體外血栓和體內(nèi)靜脈血栓試驗，結(jié)果表明所形成的血栓重量均有不同程度的減輕，說明具有抑制血栓形成的作用；對大鼠動脈預(yù)防性血栓形成的影響分別給大鼠舌靜脈注射0.5、1.0和2.5g/kg本發(fā)明的注射劑后，進(jìn)行其血栓試驗，結(jié)果表明均使血栓形成的時間延長；(2)溶血栓的作用①對股動脈血栓狗的動脈血流量的影響給狗注射30g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，測量其血流量，結(jié)果表明血流量明顯增加；②不同劑量的本發(fā)明的注射劑和UK，對纖維蛋白原的影響給狗注射30g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，測量其纖維蛋白原的含量，結(jié)果表明均無明顯的變化，表明本發(fā)明的注射劑對纖維蛋白原無影響；③對股動脈血栓狗的血漿優(yōu)球蛋白溶解時間的影響給股動脈血栓狗注射15g/kg和30g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，測量其優(yōu)球蛋白溶解的時間，結(jié)果表明均明顯的縮短，與給藥前比較差異顯著；④對狗股脈血栓重量的影響給股動脈血栓狗注射30g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，測量其股動脈血栓重量，結(jié)果表明股動脈血栓重量明顯減輕，左右股動脈血栓重量分別減少35.8％和34.9％；給股動脈血栓狗注射15g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，左右股動脈血栓重量分別減少17.8％和32.6％。表明本發(fā)明的注射劑具有溶解血栓的作用；4、對大鼠大腦中動脈結(jié)扎引起缺血的影響本發(fā)明的注射劑按照1.0、2.5和5.0g/kg給藥，使結(jié)扎大鼠大腦動脈引起的缺血行為障礙減輕，腦缺血面積分別減少28.4％、35.8％和71.7％，表明本發(fā)明的注射劑對缺血性腦血管病和中風(fēng)具有良好的治療作用。
5、對正常麻醉犬的試驗給正常麻醉的犬iv注射本發(fā)明的注射劑，按照0.75和1.5g/kg給藥，測量BP和HR均無明顯改變，但是按照3.0g/kg給藥，測量BP和HR，則明顯減慢HR，而對BP無明顯影響。提示本發(fā)明的注射劑對抗腦缺血性疾病和血栓可能不是通過擴張腦血管實現(xiàn)的。
6、一般藥理實驗將本發(fā)明的注射劑按照1.0、2.5和5.0g/kg給昆明種小鼠尾iv注射后，未發(fā)現(xiàn)活動和外觀行為異常，表明該藥對神經(jīng)系統(tǒng)及外觀行為無明顯影響；且對小鼠自主活動無明顯影。
另將本發(fā)明的注射劑以0.5和2.0g/kg給犬iv注射，對犬的呼吸深度、頻率、血壓，心率及II導(dǎo)電圖均無明顯的影響。
(二)毒理試驗研究1、急性毒性試驗通過大量的動物試驗表明靜脈注射給小鼠的LD50為112.5g/kg(按照生藥量計算)，腹腔注射的LD50為173.83g/kg，灌胃給藥的最大耐受量為390g/kg。腹腔用藥相當(dāng)臨床人用藥量的4345倍；靜滴用藥量相當(dāng)臨床人用藥量的2800倍(關(guān)于此點的計算方法是小鼠的LD50為112.5g/kg，臨床用針劑為0.5g/ml(生藥)；成人每日用4ml，相當(dāng)靜滴入2g生藥，按體重50kg估算，每人每日靜滴入0.04g/kg計，給小鼠靜注的LD50值為112.5g/kg，相當(dāng)于人臨床用藥的2800倍)，表明本發(fā)明的注射劑的毒性較低，臨床用藥屬于安全。
2、長期毒性試驗①將本發(fā)明的注射劑按照0.4、2.5和15.0g/kg的三個劑量給大鼠靜脈注射，連續(xù)30天的結(jié)果和恢復(fù)期的結(jié)果，表明各給藥組的一般行為表現(xiàn)、攝食量、體重增長率、血液學(xué)、血清生化學(xué)檢查、臟器系數(shù)和組織病理學(xué)檢查等指標(biāo)，與空白對照組比較，均無明顯差異，說明本發(fā)明的注射劑在0、4～15.0g/kg(相當(dāng)臨床擬用量10～375倍)劑量范圍內(nèi)，對大鼠無明顯毒副作用。
②將本發(fā)明的注射劑按照0.5、1.0和3.0g/kg的三個劑量給Beagla犬靜脈注射，連續(xù)30天的結(jié)果和恢復(fù)期的結(jié)果，一般觀察，未見異常；在給藥2～4周和恢復(fù)期進(jìn)行血液學(xué)、血液生化學(xué)檢查、臟器系統(tǒng)和心電圖，均未見異常；組織病理學(xué)檢查和臟器均無明顯差異，說明本發(fā)明的注射劑在0、5～3.0g/kg(大劑量組相當(dāng)臨床擬用量75倍)劑量范圍內(nèi)，對犬無明顯毒副作用?？梢暠景l(fā)明的注射劑為安全的藥物。
(三)安全性試驗1、刺激性試驗
①局部刺激性試驗將本發(fā)明的注射劑對兩只家兔四塊股四頭肌注射，均為未見無血或壞死現(xiàn)象，根據(jù)刺激反應(yīng)級的分值為0，即為無明顯變化；病理檢查無明顯炎癥反應(yīng)。表明無局部刺激性反應(yīng)。
②血管刺激性試驗將本發(fā)明的注射劑對家兔按照1.0g/kg的劑量耳部注射，連續(xù)3次，末次給藥后24小時處死家兔，均為未見無血或壞死現(xiàn)象，取注射部位的耳片固定，常規(guī)病理組織學(xué)檢查，在顯微鏡下，未觀察到注射局部的血管有組織變性或壞死等刺激性的反應(yīng)。
2、過敏性試驗按照“中藥注射劑指導(dǎo)原則(試行)”附件一過敏性試驗要求，對豚鼠注射本發(fā)明的注射劑后15分鐘內(nèi)均未見豎毛、呼吸困難、噴嚏、咳嗽、干嘔、抽搐、虛脫、死亡等反應(yīng)現(xiàn)象，表明本發(fā)明的注射劑對豚鼠無過敏性。
3、溶血性試驗本發(fā)明的注射劑和濃縮液均未發(fā)現(xiàn)有溶血現(xiàn)象，亦未見有紅細(xì)胞凝集作用。
(四)本發(fā)明的注射劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)按照衛(wèi)生部頒布的“中藥注射劑指導(dǎo)原則(試行)”中關(guān)于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的要求，建立了紫外最大吸收、孔C及凝膠電泳的鑒別；檢查項目按照有關(guān)規(guī)定制訂了重金屬、砷鹽、蛋白質(zhì)、Ph、相對密度、熾灼殘渣、鉀離子等項的檢查，均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求；含量測定采取高效液相色譜法測定總氨基酸、多肽氨基酸、和次黃嘌呤；用碘量法測定總糖和多糖；用干燥法測定總固體含量；使可控部分的指標(biāo)達(dá)到總固體的60％以上。
(五)藥品穩(wěn)定性試驗采取留樣觀察法、光照法、40℃恒溫恒濕箱中的加速試驗法等穩(wěn)定性試驗方法，進(jìn)行了連續(xù)三個月的觀察，以質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的各項作為考察指標(biāo)，按期進(jìn)行檢驗，結(jié)果與0月比較，其理化性質(zhì)穩(wěn)定無變化，說明本發(fā)明的注射劑的質(zhì)量穩(wěn)定。
以下是本發(fā)明的注射劑的臨床試驗研究。
本發(fā)明的治療心血管疾病的注射劑經(jīng)過大量的臨床應(yīng)用試驗研究，證明其具有治療心血管疾病的特效和速效，且無有毒副作用及具有減少后遺癥的功效。以下舉例說明。
1、臨床試驗1通過對10名健康人志愿者試驗，本發(fā)明的注射劑以每日相當(dāng)于生藥量2克用量靜滴21日，無論從臨床表現(xiàn)，還是血、尿常規(guī)，肝、腎、心功能檢查，均未發(fā)現(xiàn)毒副作用。
而后提高劑量1.5倍，即本發(fā)明的注射劑每日相當(dāng)于生藥量3克用量靜滴21日，無論從臨床表現(xiàn)，還是血、尿常規(guī)，肝、腎、心功能檢查，均未發(fā)現(xiàn)毒副作用。認(rèn)為本發(fā)明的注射劑每日給藥相當(dāng)生藥量3克的用量靜滴21日是安全的。
2、臨床試驗2使用本發(fā)明的注射劑對50例腦梗塞病人進(jìn)行了為期一個療程(10天)的治療臨床試驗，結(jié)果表明總有效率達(dá)84％，療效明顯優(yōu)于對照組，對照組使用“曲克蘆丁”的總有效率僅為36％；上述兩組治療前后CT檢查結(jié)果是治療組好轉(zhuǎn)率達(dá)96％，對照組好轉(zhuǎn)率為54％；治療兩周后，其中20例的額顳氏低密度區(qū)平均縮小64％，表示大腦中動脈供血改善；其中10例的額頂葉低密度區(qū)有占位性病變，經(jīng)繼續(xù)治療，其低密度區(qū)平均縮小20％，占位性病變消失。
其中10例腦梗塞原左基底節(jié)區(qū)呈卵園低密度區(qū)邊緣清晰，且中線右移，經(jīng)治療低密度平均縮小70％，中線右移消失。
3、臨床試驗3使用本發(fā)明的注射劑對30例心血管疾病病人進(jìn)行臨床試驗，對照組為使用腹蛇抗栓酶試驗，結(jié)果表明本發(fā)明的注射劑的有效率達(dá)90％，而對照組為86％；同時發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的注射劑治療的病人的血栓素B2和纖維蛋日原及血小板數(shù)均比治療前有非常顯著的減少；全血比粘度、血漿比粘度和全血還原粘度均比治療前明顯降低，說明本發(fā)明的注射劑能有效降低血粘度，改善血細(xì)胞電泳率，降低血小板粘附，使腦梗塞區(qū)的供血和腦細(xì)胞水腫得到改善，使受損的神經(jīng)細(xì)胞恢復(fù)其功能。
綜上所述，經(jīng)過對本發(fā)明的注射劑全面、系統(tǒng)的試驗研究，表明各項研究內(nèi)容均符合衛(wèi)生部發(fā)布的“中藥注射劑研制指導(dǎo)原則(試行)”及新藥審批辦法“有關(guān)中藥部分的修訂和補充規(guī)定”的要求。
關(guān)于本發(fā)明的治療心血管疾病的注射劑的臨床應(yīng)用試驗研究的詳細(xì)內(nèi)容，請參閱如下附件1～81、附件1共8頁 一般藥理研究的試驗資料；2、附件2共22頁 疏血通的主要藥效學(xué)研究；3、附件3共21頁 動物長期毒性試驗資料；4、附件4共21頁 疏血通注射劑治療中風(fēng)病II期臨床總結(jié)；5、附件5共15頁 疏血通注射劑IV期臨床總結(jié)；6、附件6共7頁 疏血通注射劑I期臨床試驗設(shè)計及I期臨床試驗總結(jié)。
7、附件7共8頁 疏血通治療缺血性腦血管病的臨床觀察與評價。
8、附件8共4頁 疏血通治療腦梗塞的臨床療效及對血液流變學(xué)的影響。
權(quán)利要求
1.一種治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是它包括如下步驟(1)原料選擇及低溫浸漬在室溫條件下，將水蛭和地龍分別用生理鹽水浸泡，使其表面充分展開，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，將清洗至干凈的水蛭和地龍分別置于2～4倍的生理鹽水中，于低溫0～4℃浸漬15～30小時，過濾，將濾液與藥渣分別存放備用；(2)搗碎研磨將藥渣采用高速組織搗碎機將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合使用勻漿器磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；(3)冷凍及解融將勻漿液在-15℃以下冷凍15～30小時后取出，于低溫0～4℃條件下解融，再按上述條件冷凍和解融反復(fù)至少2次；(4)分離和純化將上述冷凍和解融液置于離心機離心分離，再將上清液通過分子量為5萬的濾柱進(jìn)行粗濾，濾液經(jīng)105～136℃熱壓10～45分鐘；再通過分子量為1萬的超濾柱進(jìn)一步過濾純化；(5)配液將以上制得的兩種濾液按照水蛭生理鹽水提取液33％～84％和地龍生理鹽水提取液16％～67％的比例混合均勻，制成1-20ml/支的注射劑，或50-200ml/瓶的注射劑，或脫水干燥成粉針劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是該水蛭和/或地龍原料包括干品和/或鮮品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是該步驟(3)的冷凍及解融中，其勻漿液為在-20℃冷凍20小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是該步驟(4)的配液中的脫水干燥成粉針劑包括，將分別提取的水蛭和地龍溶液混合均勻，加入5％甘露醇，加生理鹽水至2000ml，先經(jīng)分子量為1萬的超濾柱過濾，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜終端除菌過濾，分裝于西林瓶或安瓿中，在-40℃至-60℃預(yù)凍3～4小時，隨后抽真空(真空度低于15pa)，線性升溫、干燥時間20～36小時，即制成凍干粉針劑。
5.一種治療心血管疾病的注射劑，其特征是它包含有水蛭生理鹽水提取液33％～84％和地龍生理鹽水提取液16％～67％。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療心血管疾病的注射劑，其特征是該注射劑中的總氨基酸、多肽氨基酸、次黃嘌呤、總糖及多糖的含量為總固體的60％以上。
全文摘要
一種治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法及其產(chǎn)品，通過將水蛭和地龍的生理鹽水提取液按照一定的配比組成，提供一種高效速效的治療心腦血管疾病的注射劑，具有降低心腦血管疾病的病死率和后遺癥的功效。
文檔編號A61K35/56GK1475266SQ0314828
公開日2004年2月18日 申請日期2003年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月1日
發(fā)明者李振國 申請人:李振國