專利名稱：：一種具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物，特別是添加有中藥貫葉連翹提取物的具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物及其生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
：目前文獻(xiàn)報(bào)道公開和醫(yī)院使用的鎮(zhèn)痛和消炎藥物有多種，西藥有阿司匹林、去痛片、消炎痛、布洛芬、酮洛芬、案普生、保泰松、尼美舒利、莫非唑拉等，中藥有牛黃消炎片、麻黃細(xì)辛湯、止痛消炎膏、烏藥提取物、竹黃提取物、蓮膽消炎膠囊等，《中藥新藥與臨床藥理》2001，12(2)“牛黃千金散抗炎鎮(zhèn)痛和免疫抑制作用”報(bào)道了對牛黃千金散的消炎、鎮(zhèn)痛、免疫抑制作用的研究，探討牛黃千金散的藥理作用，方法抗炎作用應(yīng)用大折鼠足趾腫脹法、小白鼠耳廓腫脹法；鎮(zhèn)痛作用運(yùn)用小白鼠扭體法、大白鼠鉀離子皮下透入致痛法；免疫抑制作用，測定外周血T淋巴細(xì)胞百分率、小白鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、巨噬細(xì)胞吞噬功能、遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)、血清溶血素和抗體形成細(xì)胞的功能。結(jié)果牛黃千金散有明顯的抗炎作用，并能加強(qiáng)可待因的鎮(zhèn)痛作用及免疫抑制作用，與生理鹽水對照組比較有非常顯著性的差異，證實(shí)了牛黃千金散有抗炎、鎮(zhèn)痛及免疫抑制作用。從文獻(xiàn)介紹的鎮(zhèn)痛消炎的藥物中，我們了解到，西藥的特性在于抵抗細(xì)菌或病毒感染、抑制神經(jīng)中樞的疼痛傳遞物質(zhì)傳送；而中藥作用是熱清毒化，濕祛瘟散，腐法新生，帶脈宣通暢達(dá)，則諳癥自除的目的。貫葉連翹為藤黃科金絲桃屬(HyprzeumL)植物貫葉連翹(HypericumperforatumLinn，EHPL)的全草，它主要被用于抗抑郁、收斂止血、治吐血、外傷出血、腫毒及止痛等癥。近年來國外的研究發(fā)現(xiàn)，金絲桃素是貫葉連翹中的主要有效成分，可以治療甲型肝炎、乙型肝炎、風(fēng)濕骨痛等。金絲桃索還是一種有前途的內(nèi)源性光敏劑，可應(yīng)用于腫瘤的光化學(xué)診斷與治療，具有顯著的抗DNA、RNA病毒的作用。本發(fā)明人還經(jīng)過檢索，了解貫葉連翹國內(nèi)外的研究和治療疾病的進(jìn)展情況，并檢索到有關(guān)貫葉連翹的公開文獻(xiàn)有以下一些1、“國產(chǎn)貫葉連翹化學(xué)成分的研究”，殷志琦葉文才，(中國藥科大學(xué))《中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)》。2002，33(4)文摘對我國貴州產(chǎn)貫葉連翹的化學(xué)成分進(jìn)行了較系統(tǒng)的化學(xué)研究。利用各種色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，經(jīng)理化常數(shù)和波譜分析等進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。分離得到8個(gè)化合物槲皮素(quercetin，I)，皮苷(quercitrin，II)，山萘酚(kaempferol，III)，1，7-二羥基山酮(1，7-dihydroxyxanthone，IV)，kielcorin(5-hydroxymethyl-6-guaiacyl-2，33’，2’，4’-methoxy-xanthone-1，4-dioxane，V)，大黃素(emodin，VI)，2，5-二甲基-7-羥基色原酮(2，5-dimethyl-7-hydroxychromone，VII)，香草酸(vanillicacid，VII)。結(jié)論化合物IV，VII和VIII為首次從貫葉連翹中分離得到。2、“貫葉連翹提取物抗抑郁作用研究”作者，徐靜、蔡爽等(沈陽藥科大學(xué)、中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床醫(yī)院)，《中藥藥理與臨床》。2002，18(5)，文摘目的研究貫葉連翹提取物對小鼠的抑郁作用。方法選取了強(qiáng)迫小鼠游泳實(shí)驗(yàn)，小鼠尾懸吊應(yīng)激實(shí)驗(yàn)，拮抗利血平所致的抑制癥狀等實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。結(jié)果貫葉連翹提取物150mg/kg，300mg/kg顯著縮短迫游泳小鼠及尾懸吊小鼠的不動(dòng)時(shí)間；顯著拮抗利血平所致的體溫下降作用和小鼠眼瞼下垂作用。結(jié)論貫葉連翹提取物具有一定的抗抑郁作用。3、“貫葉連翹中的新抗真菌黃酮苷”，作者，盧艷花張臻等(南京師范大學(xué)、南京大學(xué))《植物學(xué)報(bào)》。2002，44(6)。文摘從貫葉連翹(HypericumperforatumL.)地上部分的80％乙醇提取物中分離得到1個(gè)新的黃酮苷和6個(gè)已知黃酮類化合物。采用紅外光譜，紫外光譜，質(zhì)譜和核磁共振光譜等波譜技術(shù)測得新黃酮苷的結(jié)構(gòu)為6″-O-乙酰基槲皮素-3-O-β-D-阿洛糖苷(1，6″-O-acetylquercetin3-O-β-D-alloside)，6個(gè)已知化合物分別被鑒定為槲皮苷(quercitrin)，金絲桃苷(hyperoside)，扁蓄苷(avicularin)，蘆丁(rutin)，槲皮素(quercetin)和山萘酚(kaemfero10。體外抗真菌活性實(shí)驗(yàn)表明，新黃酮苷(1)，槲皮苷和槲皮素對植物病原菌HelminthosporiumsativumPamelKingetBakke具有一定的抑制作用，三者的最小抑制濃度(MIC)分別為25，50和50μg/mL。另外，1和槲皮苷對禾赤色鐮孢霉(FusariumgraminearumSchw.)的生長也有抑制作用(MIC值均為100μg/mL)。4、“貫葉連翹中金絲桃素醇法提取工藝的改進(jìn)”，溫普紅王曉玲(寶雞文理學(xué)院)，《中國醫(yī)藥工業(yè)雜志》。2002，33(4)。文摘對現(xiàn)行醇法提取植物貫葉連翹中金絲桃素的生產(chǎn)工藝進(jìn)行了研究和改進(jìn)。研制出了價(jià)廉、無毒、新型的W.X.除雜劑，使生產(chǎn)工序大為簡化。一般經(jīng)提取、除雜、調(diào)pH沉降三步，即可得到合格產(chǎn)品。經(jīng)HPLC測定，產(chǎn)品中金絲桃素含量達(dá)到0.7％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于國際市場要求的0.3％。同時(shí)，消除了原料中金絲桃素含量高低對產(chǎn)品質(zhì)量的影響。5、“貫葉連翹活性成分研究新進(jìn)展”，李宏、姜懷春等(武漢大學(xué)、重慶商學(xué)院)《中草藥》。2001，32(7)。文摘介紹了貫葉連翹的活性成分，抗抑郁、抗腫瘤、抗病毒等藥理作用和副作用的研究新進(jìn)展。6、“貫葉連翹的研究進(jìn)展與可持續(xù)發(fā)展對策”，李會寧王存蓮(漢中師范學(xué)院)《漢中師范學(xué)院學(xué)報(bào)自科版》。2000，18(1)文摘貫葉連翹除作為傳統(tǒng)的中藥材入藥外，它的活性成分在治療抑郁癥，肝炎和艾滋病以及抗癌等方面具有重要的利用前景而被廣泛關(guān)注。本文綜述了貫葉連翹的生藥顯微鑒定特征，有效成分的研究，藥理和臨床試驗(yàn)等方面的研究進(jìn)展。同時(shí)探討了可持續(xù)發(fā)展的對策。7、“貫葉連翹的生藥學(xué)研究”，雷國蓮?fù)趵^濤(陜西中醫(yī)學(xué)院)《陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》。1999，22(6)。文摘為尋找和研究新而有效，無毒，安全可靠，非麻醉性的特殊性鎮(zhèn)痛藥，作者對秦嶺地區(qū)資料十分豐富，且富含金絲桃甙的植物貫葉連翹首次作了為系統(tǒng)的生藥學(xué)研究，為該藥的開發(fā)與利用提供可靠的鑒定和研究資料。8、“金絲桃素的研究進(jìn)展”，梁巧麗高宏成(北京大學(xué))，《中草藥》。1999，30(9)。文摘綜述金絲桃素在抗抑郁，抗病毒，對癌癥的光化學(xué)治療，免疫等方面的最新研究成果，為開發(fā)新藥提供參考。從上述文獻(xiàn)了解到，貫葉連翹在治療某些疾病方面得到了證明，尤其是抗抑郁作用的研究較多，其中文獻(xiàn)7提示了含金絲桃甙的植物貫葉連翹可作為鎮(zhèn)痛藥的內(nèi)容，但未公開其使用方法、也未見有貫葉連翹提取物與其它藥物配成組合物的公開文獻(xiàn)報(bào)道。技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明人經(jīng)過對貫葉連翹的化學(xué)成分及藥效學(xué)、藥理學(xué)進(jìn)行研究，并與多種維生素進(jìn)行單獨(dú)組合或者復(fù)配組合，發(fā)現(xiàn)一些組合物具有較好的鎮(zhèn)痛和消炎作用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物包括貫葉連翹提取物、維生素B，其藥物的成分和重量百分含量如下維生素B20.5-5％維生素B65-15％貫葉連翹提取物余量或者采用維生素B11-5％維生素B20.5-5％維生素B65-15％貫葉連翹提取物余量以上所述的貫葉連翹提取物含金絲桃素2-5％，其提取方法可以采用50℃左右的熱水浸泡2h后，加入0.5％NaOH，用75％甲醇在0.05Mpa下78℃提取3-5次，每次1.5h，溶媒量為5倍，在80℃條件下濃縮干燥；也可以采用80％乙醇為溶劑，撮出貫葉連翹中的蒽衍生物，再用吸附樹脂，結(jié)合硅膠層析法把金絲桃素分離出來，得到含量為4.26％的金絲桃素產(chǎn)品；有的文獻(xiàn)介紹用95％乙醇作為溶劑來提取金絲桃甙，濃縮時(shí)加入少量(NH4)2SO4，在真空度為34～8kPa的條件下濃縮，采用噴霧干燥的方法得到。本發(fā)明的具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物根據(jù)需要可以做成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、合劑、糖漿劑、針劑。所述的片劑的制備方法是將貫葉連翹提取物、維生素B，與賦形劑制成顆粒干燥，加入崩解劑、潤滑劑，壓片，或直接包裝，或包糖衣，或包薄膜衣即得到產(chǎn)品。以上片劑所述的賦形劑為淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氫鈣等；所述的崩解劑為羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素等；所述的潤滑劑為硬脂酸鎂等；所述的包糖衣材料為蔗糖、滑石粉、明膠、色素、川蠟等；所述的薄膜包衣材料為胃溶型水、醇包衣材料等。其中賦形劑、崩解劑、潤滑劑、包衣材料用量的重量含量分別為5～75％、0.5～20％、0.5～2.0％、2～45％。膠囊劑的生產(chǎn)方法將貫葉連翹提取物、維生素B，加入賦形劑，和崩解劑、助流劑，并使之干燥，然后裝入膠囊中，得到產(chǎn)品。以上制備膠囊所述的賦形劑為淀粉及其衍生物、磷酸氫鈣、硬脂酸鎂等。重量20～80％。助流劑選用微分硅膠，用量為0.5-1％。丸劑的生產(chǎn)方法將將貫葉連翹提取物、維生素B加入賦形劑，制丸。①制成濃縮丸；②加入賦形劑重量10～100％、蜜糖，制成水蜜丸、大蜜丸、濃縮丸。顆粒劑的生產(chǎn)方法在上述生產(chǎn)得到的濃縮液中加入賦形劑，并制成顆粒，使之干燥，得到產(chǎn)品。加入賦形劑的成分和含量蔗糖50～95％、乳糖50～90％、糊精50～70％。合劑的生產(chǎn)方法將將貫葉連翹提取物、維生素B與矯味劑、防腐劑溶液混合均勻，即得到產(chǎn)品。加入的矯味劑及其含量蔗糖(或蜜糖)10～60％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。糖漿劑的生產(chǎn)方法將將貫葉連翹提取物、維生素B與蔗糖、蜜糖防腐劑溶液混合均勻，即得到產(chǎn)品。加入的蔗糖或蜜糖的重量比為60～70％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。本發(fā)明的突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步為1、安全性從公開文獻(xiàn)中我們已經(jīng)了解到，貫葉連翹提取物的毒理工作已在小鼠，大鼠和犬等動(dòng)物身上進(jìn)行了長達(dá)26星期的試驗(yàn)。最大試驗(yàn)劑量為5000mg/kg，最初不耐受劑量為每日900mg/kg。LD50大于最大劑量。所有試驗(yàn)?zāi)╋@示有基因毒和誘變作用。在13個(gè)男性正常人每日服用900，1800和3600mg貫葉連翅提取物試驗(yàn)中，每日900mg是大多數(shù)臨床試驗(yàn)采用的安全有效劑量。在我們進(jìn)行的臨床試驗(yàn)中，也證明了人服用貫葉連翹提取物的安全性。2、鎮(zhèn)痛和消炎作用的有效性本發(fā)明的貫葉連翹提取物與復(fù)合維生素B組合后有明顯的鎮(zhèn)痛作用，并且部分減輕甲醛引起的水腫癥狀。而單獨(dú)使用貫葉連翹提取物或單獨(dú)使用復(fù)合維生素B達(dá)不到復(fù)合后的效果。3、對人體的其它輔助治療效果與復(fù)合維生素復(fù)配后，顯示出該藥物組合物不僅具有鎮(zhèn)痛和消炎作用，而且還有抗抑郁、抗腫瘤的效果，還可以補(bǔ)充人體所缺乏的部分維生素。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取貫葉連翹提取物900g，維生素B220g，維生素B680g，與5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氫鈣混合，制成顆粒，干燥，加入0.5～20％羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、潤滑劑0.5～2.0％硬脂酸鎂，壓片，或直接包裝，或包糖衣，或包薄膜衣即得到產(chǎn)品。實(shí)施例2取貫葉連翹提取物750g，維生素B50g，維生素B250g，維生素B6150g，與5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氫鈣混合，制成顆粒，干燥，加入0.5～20％羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、潤滑劑0.5～2.0％硬脂酸鎂，壓片，或直接包裝，或包糖衣，或包薄膜衣即得到產(chǎn)品。實(shí)施例3取貫葉連翹提取物820g，維生素B240g，維生素B6140g，與5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氫鈣制成顆粒，干燥，加入助流劑微分硅膠，裝膠囊，即得到產(chǎn)品。實(shí)施例4取貫葉連翹提取物800g，維生素B15g，維生素B250g，維生素B6145g，與5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氫鈣制成顆粒，干燥，加入助流劑微分硅膠，裝膠囊，即得到產(chǎn)品。實(shí)施例5取貫葉連翹提取物800g，維生素B250g，維生素B6150g，與賦形劑蔗糖100g、乳糖100g、糊精300g制成濃縮丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到產(chǎn)品。實(shí)施例6取貫葉連翹提取物850g，維生素B130g，維生素B220g，維生素B6100g，與賦形劑蔗糖200g、乳糖100g、糊精200g制成濃縮丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到產(chǎn)品。實(shí)施例7取貫葉連翹提取物800g，維生素B140g，維生素B260g，維生素B6100g，加入蔗糖500g、糊精500g，制成顆粒，干燥，得到產(chǎn)品。實(shí)施例8取貫葉連翹提取物872g，維生素B28g，維生素B6120g，加入蔗糖400g、糊精300g，制成顆粒，干燥，得到產(chǎn)品。實(shí)施例9取貫葉連翹提取物850g，維生素B250g，維生素B6100g，與蔗糖10～55％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％混合，制成合劑。實(shí)施例10取貫葉連翹提取物800g，維生素B140g，維生素B240g，維生素B6120g，與蔗糖10～55％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％混合，制成合劑。實(shí)施例11取貫葉連翹提取物800g，維生素B250g，維生素B6150g，與蔗糖量為60～70％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％合并，制成糖漿劑。實(shí)施例12取貫葉連翹提取物850g，維生素B130g，維生素B220g，維生素B6100g，與蜜糖為60～70％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％合并，制成糖漿劑。本發(fā)明有關(guān)臨床試驗(yàn)、藥理、藥效學(xué)情況一、貫葉連翹提取物和維生素B復(fù)方的鎮(zhèn)痛作用研究試驗(yàn)單位，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部神經(jīng)病理室試驗(yàn)時(shí)間2002年9月-2003年1月摘要目的對貫葉連翹提取物和維生素B2、維生素B6復(fù)方的鎮(zhèn)痛、抗炎作用進(jìn)行研究。方法連續(xù)給小鼠灌胃給藥CMC-Na、嗎啡(5mg/kg，i.p.)、氯丙咪嗪(10mg/kg，i.p.)、復(fù)合物(本發(fā)明片劑或未混合的單一化合物)高劑量、中劑量、低劑量，共7天，末次給藥后1小時(shí)(嗎啡注射后30分鐘)進(jìn)行甲醛致痛實(shí)驗(yàn)，測定注射甲醒后0-5分鐘、15-30分鐘的舔腳時(shí)間、注射甲醛后4小時(shí)的右足水腫情況及病理切片，顯微鏡下觀察炎癥組織的炎癥細(xì)胞浸潤和水腫情況。結(jié)果嗎啡、氯丙咪嗪、高、中劑量復(fù)合物能夠減少0-5分鐘、15-30分鐘兩個(gè)時(shí)相舔腳時(shí)間，能夠抑制右足水腫，抑制炎癥部位炎癥細(xì)胞浸潤及水腫，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。低劑量復(fù)合物能夠減少0-5分鐘及15-30分鐘的舔腳時(shí)間，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不能抑制右足水腫及炎癥部位炎癥細(xì)胞浸潤及水腫。結(jié)論貫葉連翹提取物、維生素B2和維生素B6組成的復(fù)方在小鼠甲醛致痛模型中具有明確的鎮(zhèn)痛作用。關(guān)鍵詞貫葉連翹提取物維生素B2維生素B6鎮(zhèn)痛抗炎前言貫葉連翹(HypericumperforatumLinn，EHPL)為藤黃科金絲桃素屬多年生草本，在北美、歐洲及我國均有分布，西方又稱之為St.Joim′wort，具有抗抑郁、抗病毒、抗菌等藥理作用。貫葉連翹在民間已有2400年歷史，德國用于抗抑郁已有百余年歷史。貫葉連翹臨床上廣泛用于抑郁癥的治療，歷史悠久，副作用較小，美國已作為保健品。B族維生素缺乏尤其是維生素B1、維生素B2和維生素B6缺乏將導(dǎo)致驚厥，腕管綜合癥，慢性痛等病理狀態(tài)，說明B族維生素對維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能不可缺少，B族維生素已廣泛用于治療及預(yù)防其缺乏所造成的功能紊亂。文獻(xiàn)報(bào)道，在小鼠、大鼠熱板及苯醌(benzoquinone)扭體實(shí)驗(yàn)中，聯(lián)合使用維生素B1，維生素B6，維生素B12有鎮(zhèn)痛作用，在角叉菜膠誘發(fā)痛敏實(shí)驗(yàn)中維生素B6能夠增強(qiáng)非兇體消炎藥的鎮(zhèn)痛作用，在小鼠醋酸扭體及甲醛致痛的模型中維生素B1，維生素B2及維生素B6單獨(dú)或聯(lián)合使用都有明顯的鎮(zhèn)痛作用，并且部分減輕甲醛引起的水腫，B族維生素可以減輕病人的炎癥性疼痛。近年來B族維生素在國外被視為治療病理性疼痛的有效藥物。既然貫葉連翹提取物具有鎮(zhèn)痛和抗炎作用，B族維生素(VitB1、VitB2、vitB6)也具有鎮(zhèn)痛和抗炎作用，為了減少用藥劑量，增加療效及減輕不良反應(yīng)，我們將貫葉連翹提取物及B族維生素(維生素B1、維生素B2、維生素B6)組成多個(gè)復(fù)方，根據(jù)鎮(zhèn)痛效應(yīng)正交設(shè)計(jì)原理進(jìn)行了篩選，進(jìn)行鎮(zhèn)痛和抗炎作用的研究。1材料1.1動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，25-35g，食水自由，溫度20±2攝氏度，自然明暗周期。動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)1周后正式實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前禁食、不禁水12小時(shí)，動(dòng)物由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證013056，等級一級。1.2藥品與試劑貫葉連翹提取物(廣西南寧邕江藥業(yè)有限公司提供，生產(chǎn)批號1605795金絲桃素含量3‰，棕色瓶避光保存)，鹽酸嗎啡(青海制藥廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號01130)，甲醛溶液(北京化學(xué)試劑公司，優(yōu)級純，批號990728)，維生素B2(粉劑，97.5-102％，北京芳草醫(yī)藥化工研制公司生產(chǎn)，批號961220)，維生素B6(粉劑，廣西南寧邕江藥業(yè)有限公司提供，批號3030010010)，羧甲基纖維素鈉。氯丙咪嗪，蘇木精(德國生產(chǎn))，伊紅(美國生產(chǎn))。1.3儀器50μl微量進(jìn)樣器，寧波市鎮(zhèn)海玻璃儀器廠制造，89量制浙字02200206號。秒表，深圳市惠波工貿(mào)有限公司制造，98量制粵制03000202號。切片機(jī)Leica2實(shí)驗(yàn)方法2.1分組陰性對照組(CMC-Na)0.25％CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)，口服。陽性對照組(morphine)鹽酸嗎啡5mg/kg，腹腔注射。陽性對照組(clomipramine)氯丙咪溱10mg/kg。高劑量組(complex-H)EHPL1200mg/kg、維生素B212mg/kg、維生素B6160mg/kg。中劑量組(complex-M)EHPL600mg/kg、維生素B26mg/kg、維生素B680mg/kg。低劑量組(complex-L)EHPL300mg/kg、維生素B23mg/kg、維生素B640mg/kg。各組藥物均以0.25％CMC-Na研磨配制，給藥容積各組均為0.1ml/10g，每天約藥1次，連續(xù)給藥7天。嗎啡組連續(xù)腹腔注射生理鹽水6天，第7天末次給藥為腹腔注射嗎啡。2.2實(shí)驗(yàn)方法甲醛致痛實(shí)驗(yàn)第7天給藥1小時(shí)后(嗎啡注射后30分鐘)將0.92％的甲醛溶液(生理鹽水配制)20μl注射至小鼠右足背皮下，分別記錄0-5分鐘及15-30分鐘這兩個(gè)時(shí)相舔右后足的時(shí)間。注射甲醛后4小時(shí)斷頭處死小鼠，由膝關(guān)節(jié)切下兩側(cè)后足，分別稱重，以右足與左足重量差值代表右足水腫情況。左、右足后足稱重后炎癥部俠進(jìn)行組織切片，固定和染色后于顯微鏡下觀察不同藥物組別的炎癥情況。組織切片及染色方法取小鼠足背致炎組織，10％甲醛固定，乙醇梯度脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋，切片，H.E.染色。2.5統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用microsoftexcel軟件進(jìn)行結(jié)果處理，組間對照采用雙尾t檢驗(yàn)，顯著性為P＜0.05。tableEffectsofcomplexchronictreatmentonthenociceptiveresponseandedemainducedbysubcutaneousofformaldehydeintotherighthindpawofmouse(m±s，n＝12)ExperimentalTimespendinginlickingrighthindpaw(s)Weightdifference(mg)group0-5min15-30min4hCMC-Na28.5±16.039.6±31.635.6±15.0Morphine9.1±9.7***13.6±18.9*21.1±11.8*clomipramine12.3±9.6**11.7±27.317.2±14.2**Complex-H15.4±10.1*17.2±21.2*17.8±16.1**Complex-M13.8±6.8**17.2±18.4*19.8±14.4*Complex-L22.1±15.624.4±24.433.9±27.5ComparedwiththeresultofCMC-Nagroup，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001CMC0.25％縮甲基纖維素鈉，morphine嗎啡，clomipramine氯丙咪嗪，Complex-H高劑量，Complex-M中劑量，Complex-L低劑量。表1顯示慢性給藥嗎啡、氯丙咪嗪、高、中劑量組中均能明顯減少小鼠注射甲醛后0-5分鐘、15-30分鐘兩個(gè)時(shí)相的舔腳時(shí)間及注射甲醛后4小時(shí)的足水腫。低劑量組能減少兩相時(shí)相的舔腳時(shí)間，但無統(tǒng)計(jì)意義，不能抑制甲醛引起的足水腫。顯微鏡下觀察不同藥物組的炎癥情況顯示嗎啡、氯丙咪嗪、大、中劑量藥物能明顯抑制炎癥部位組織內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤及組織水腫。4討論慢性神經(jīng)痛是多種原因引起的一類疼痛，疼痛劇烈難以忍受，多見于腫瘤、糖尿病、病毒感染后，原發(fā)部位損傷并不明顯，但有明顯痛敏現(xiàn)象，對這類疼痛解熱鎮(zhèn)痛藥或麻醉性鎮(zhèn)痛藥有時(shí)效果并不理想，近年來推薦抗抑郁藥。貫葉連翹長期以來作為抗抑郁廣泛應(yīng)用于臨床，其抗抑郁作用的機(jī)制可能是通過抑制5-HT、NE、DA的重?cái)z取和抑制單胺氧化酶的活性，從而提高腦內(nèi)5-HT、NE的濃度[10，11]。NE和5-HT是疼痛傳遞抑制系統(tǒng)的重要神經(jīng)遞質(zhì)，如延腦頭端腹側(cè)的痛抑制系統(tǒng)有5-HT神經(jīng)原存在，刺激此區(qū)抑制脊髓-丘腦束傳遞的疼痛反腹側(cè)的痛抑制系統(tǒng)有5-HT神經(jīng)原存在，刺激此區(qū)抑制脊髓-丘腦束傳遞的疼痛反應(yīng)，NE作用于脊髓α2受體，可以起到鎮(zhèn)痛作用。貫葉連翹具有抑制炎癥及抑制白細(xì)胞浸潤作用，抑制多種炎癥介質(zhì)的合成及釋放，也可以起到鎮(zhèn)痛的作用[12]。綜上所述，貫葉連翹可能對慢性神經(jīng)痛有鎮(zhèn)痛作用。國外有幾種B族維生素復(fù)合物用于臨床，亦有文獻(xiàn)證明期鎮(zhèn)痛有效，其可能的鎮(zhèn)痛機(jī)制1、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用單獨(dú)使用維生素B6或聯(lián)合使用維生素B1、維生素B12、維生素B6能夠減弱由電刺激C纖維或傷害性熱刺激誘發(fā)的背角[6，13]及丘腦[14]神經(jīng)原活動(dòng)的增強(qiáng)，此作用可能與有些神經(jīng)遞質(zhì)合成的改變有關(guān)，而這些神經(jīng)質(zhì)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)傷害性反應(yīng)中起重要作用。維生素B6的缺乏伴有腦內(nèi)5-HT的合成[17]。2、B族維生素的鎮(zhèn)痛作用也可以涉及抑制炎癥介質(zhì)的合成，而炎癥介質(zhì)能夠激活或敏化初級傳入纖維[5，6]。總之，通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)，經(jīng)過正交設(shè)計(jì)篩選出的復(fù)合物(complex)貫葉連翹提取物、維生素B2及維生素B6復(fù)方具有明確的鎮(zhèn)痛、抗炎作用，因其各分副作用小的特點(diǎn)，在慢性神經(jīng)痛的鎮(zhèn)痛中可能廣泛的應(yīng)用前景。二、貫葉連翹提取物和維生素B復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制研究試驗(yàn)單位，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部神經(jīng)病理室試驗(yàn)時(shí)間2002年9月-2003年1月摘要目的了解貫葉連翹提取物、維生素B復(fù)方的鎮(zhèn)痛與阿片受體及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的關(guān)系。方法連續(xù)灌胃給藥CMC-Na，嗎啡(5mg/kg，I.P.)，貫葉連翹提取物(60mg/kg)、維生素B2(6mg/kg)、維生素B6(80mg/kg)復(fù)合物7天，末次給藥前30分鐘腹腔注射納洛酮10mg/kg，末次給藥后1小時(shí)(嗎啡腹腔注射后30分鐘)進(jìn)行甲醛致痛實(shí)驗(yàn)。測定注射甲醛后0-5分鐘、15-30分鐘的舔腳時(shí)間。連續(xù)給藥CMC-Na，貫葉連翹提取物(600mg/kg)、維生素B2(6mg/kg)、維生素B6(80mg/kg)復(fù)合物，末次給藥前24小時(shí)腹腔注射利血平(1mg/kg)，末次給藥后1小時(shí)進(jìn)行甲醛致痛實(shí)驗(yàn)，測定注射甲醛后0-5分鐘、15-30分鐘的舔腳時(shí)間。結(jié)果納洛酮能夠完全拮抗嗎啡在兩個(gè)小時(shí)相的鎮(zhèn)痛作用，對復(fù)方在兩個(gè)小時(shí)相的鎮(zhèn)痛作用無影響；利血平能夠完全拮抗復(fù)方在0-5分鐘的鎮(zhèn)痛作用，對復(fù)方在15-30分鐘的鎮(zhèn)痛作用無影響。關(guān)鍵詞貫葉連翹提取物維生素B2維生素B6單胺類神經(jīng)遞質(zhì)利血平鎮(zhèn)痛動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)貫葉連翹提取物和維生素B復(fù)方對由足背注射甲醛所引起的疼痛有明確的鎮(zhèn)痛、抗炎作用，之后我室對復(fù)方的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制進(jìn)行了如下研究。1動(dòng)物與材料動(dòng)物ICR種小鼠，在雄性，25-35g，食水自由，溫度20±2攝氏度，自然明暗周期。動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)1周后正式實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前禁食、不禁水12小時(shí)，動(dòng)物由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證013056，等級一級。藥品與試劑貫葉連翹提取物(廣西南寧邕江藥業(yè)有限公司提供，生產(chǎn)批號1605795金絲桃素含量3‰，棕色瓶避光保存)，鹽酸嗎啡(青海制藥廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號01130)，甲醛溶液(北京化學(xué)試劑公司，優(yōu)級純，批號990728)，維生素B2(粉劑，97.5-102％，北京芳草醫(yī)藥化工研制公司生產(chǎn)，批號961220)，維生素B6(粉劑，廣西南寧邕江藥業(yè)有限公司提供，批號3030010010)，羧甲基纖維素鈉，利血平(上海醫(yī)科大學(xué)紅旗制藥廠，批號940102)，鹽酸納洛酮(Sigma公司)。儀器50μl微量進(jìn)樣器，寧波市鎮(zhèn)海玻璃儀器廠制造，89量制浙字02200206號。秒表，深圳市惠波工貿(mào)有限公司制造，98量制粵制03000202號。2實(shí)驗(yàn)方法2.1納洛酮拮抗實(shí)驗(yàn)[1]陰性對照組(CMC-Na)兩組0.25％CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)，口服。陽性對照組(morphine)兩組鹽酸嗎啡5mg/kg，腹腔注射。復(fù)方組(complex)兩組EHPL600mg/kg、維生素B26mg/kg、維生素B680mg/kg。各組藥物均以0.25％CMC-Na研磨配制，給藥容積各組均為0.1ml/10g，每天約藥1次，連續(xù)給藥7天。小鼠第7天末次給藥前30分鐘陰性對照組(CMC)、陽性對照組(MF)、復(fù)方組(COM)中各1組(共3組)腹腔注射納洛酮(10mg/kg)，其余3組腹腔注射生理鹽酸，6個(gè)組均于末次給藥1小時(shí)(嗎啡注射后30分鐘)后將0.92％的甲醛溶液(生理鹽水配制)20μl注射至小鼠右足背下，分別記錄0-5及15-30分鐘這兩個(gè)小時(shí)小鼠舔右后足的時(shí)間。2.2利血平耗竭實(shí)驗(yàn)[2]陰性對照組(CMC-Na)兩組0.25％CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)，口服。復(fù)方組(complex)兩組EHPL600mg/kg、維生素B2mg/kg、維生素B680mg/kg各組藥物均以0.25％CMC-Na研磨配制，給藥容積各組均為0.1ml/10g，每天給藥1次，連續(xù)給藥7天。小鼠第7天末次給藥前24小時(shí)陰性對照組(CMC)、復(fù)方組(COM)中各1組(共2組)腹腔注射利血平(1mg/kg)，其余2組腹腔注射生理鹽酸，4個(gè)組均于末次給藥1小時(shí)后將0.92％的甲醛溶液(生理鹽水酸配制)20μl注射至小鼠右足背皮下，分別記錄0-5及15-30分鐘這兩個(gè)時(shí)相小鼠舔右后足的時(shí)間。2.3統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用microsoftexcel軟件進(jìn)行結(jié)果處理，組間對照采用雙尾t檢驗(yàn)，顯著性為P＜0.05。3結(jié)果tableEffectsofnaloxone(10mg/kg，i.p.)ontheantinociceptionofcomplexchronictreatmentintheformaldehyde-inducedpainmodel(0-5min)(m±s，n＝12)ExperimentalgroupTimespendinginlickingrighthindpaw(s)NSnaloxoneCMC-Na34.3+/-6.842.1+/-19.9Morphine8.6+/-5.744.8+/-15.0***Complex14.3+/-10.216.0+/-11.2Morphine+naloxoneVSmorphine+NScomplex，***p＜0.001EHPL600mg/kg+VitB26mg/kg+VitB680mg/kg表1顯示納洛酮能夠完全拮抗嗎啡在注射甲醛后0-5分鐘的鎮(zhèn)痛作用，對復(fù)方在注射甲醛后0-5分鐘鎮(zhèn)痛作用無影響。table2Effectsofnaloxone(10mg/kg，i.p.)ontheantinociceptioninducedbycomplexchronictreatmentintheformaldehyde-inducedpainmodel(m±s，15-30min)(n＝12)ExperimentalgroupTimespendinginlickingrighthindpaw(s)NSnaloxoneCMC-Na28.9+/-16.828.5+/-22.0Morphine11.3+/-11.925.5+/-20.9*Complex8.3+/-14.18.1+/-23.0Morphine+naloxoneVSmorphine+NScomplex，p＜0.05EHPL600mg/kg+VitB26mg/kg+VitB680mg/kg表2顯示納洛酮能夠完全拮抗嗎啡在注射甲醛后15-30分鐘的鎮(zhèn)痛作用，對復(fù)方在注射甲醛后15-30分鐘的鎮(zhèn)痛作用無影響。table3Effectsofreserpine(1mg/kg)ontheantinociceptionofcomplexchronictreatmentintheformaldehyde-inducedpainmodel(m±s，0-5min)(n＝12)ExperimentalgroupTimespendinginlickingrighthindpaw(s)NSnaloxoneCMC-Na31.5+/-15.034.8+/-31.6Complex8.3+/-14.12.6+/-3.5Morphine+naloxoneVSmorphine+NScomplex，**p＜0.01EHPL600mg/kg+VitB26mg/kg+VitB680mg/kg表3顯示利血平能夠完全拮抗復(fù)方在注射甲醛后0-5分鐘的鎮(zhèn)痛作用。table4Effectsofreserpineontheantinociceptioninducedbyeachcomplexchronictreatmentintheformaldehyde-inducedpainmodel(m±s，15-30min)(n＝12)ExperimentalgroupTimespendinginlickingrighthindpaw(s)NSnaloxoneCMC-Na24.2+/-15.034.8+/-31.6Complex9.3+/-11.42.6+/-3.5ComplexEHPL600mg/kg+VitB26mg/kg+VitB680mg/kg表4顯示利血平對復(fù)方在注射甲醛后15-30分鐘的鎮(zhèn)痛作用無影響。4討論分析貫葉連翹、維生素B2和維生素B6復(fù)方的鎮(zhèn)痛機(jī)制所采用的動(dòng)物模型為小鼠甲醛致痛模型，注射甲醛后產(chǎn)生兩個(gè)截然分開的疼痛時(shí)相，分別為注射甲醛后0-5分鐘及注射甲醛后15-30分鐘。這兩個(gè)進(jìn)相引起疼痛的性質(zhì)不同，第一時(shí)相是由甲醛直接作用于傷害性感受器引起，為非炎癥性疼痛；第二時(shí)相是由炎癥引起疼痛。由于兩個(gè)時(shí)相產(chǎn)生疼痛的性質(zhì)不同，導(dǎo)致不同種類的鎮(zhèn)痛藥在兩個(gè)時(shí)相的鎮(zhèn)效果也不相同，麻醉性鎮(zhèn)痛藥如嗎啡為中樞性鎮(zhèn)痛藥，對兩個(gè)時(shí)相均有鎮(zhèn)痛作用；前列腺合成抑制劑如吲哚美辛對第一時(shí)相鎮(zhèn)痛無效，對第二時(shí)相鎮(zhèn)痛有效；具有抗炎作用的類固醇如氫化考的松對第一時(shí)相無效，對第十時(shí)相有效[3]。貫葉連翹提物、維生素B復(fù)方對第一及第二時(shí)相均有效，利血平使單胺類神經(jīng)遞質(zhì)耗竭后拮抗第一時(shí)相的鎮(zhèn)痛作用，而對第二時(shí)相的鎮(zhèn)痛無影響。推測本復(fù)方在第一地相的鎮(zhèn)痛作用是通過影響單胺類神經(jīng)遞質(zhì)生產(chǎn)的。文獻(xiàn)報(bào)道，貫葉連翹提取物能夠抑制5HT、NE、DA的重?cái)z取和抑制單胺氧化酶的活性，能夠提高腦內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、NE的濃度[4，5]；維生素B具有鎮(zhèn)痛作用，其可能的鎮(zhèn)痛機(jī)制涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用單獨(dú)使用維生素B6或聯(lián)合使用維生素B1、維生素B12、維生素B6能夠減弱由電刺激C纖維或傷害性熱刺激誘發(fā)的背角[1，6]及丘腦[7]神經(jīng)原活動(dòng)的增強(qiáng)，此作用可能與有些神經(jīng)遞質(zhì)合成的改變有關(guān)，而這些神經(jīng)遞質(zhì)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)傷害性反應(yīng)中起重要作用。維生素B6的缺乏伴有腦內(nèi)5-HT和其他下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的減少。而維生素B6的治療可增加腦內(nèi)5-HT的合成。復(fù)方對第二時(shí)相有效，考慮主要是其抗炎作用，文獻(xiàn)報(bào)道，貫葉連翹提取物具有顯著的抗炎作用，能夠加強(qiáng)吲哚美辛的抗炎作用[11]，在大鼠角叉菜膠及前列腺素E1致炎動(dòng)物模型中，能抑制炎癥反應(yīng)及白細(xì)胞滲出。Westernblot分析顯示在在實(shí)驗(yàn)中貫葉連翹提取物能夠調(diào)節(jié)脂多糖、γ-干擾素，100mg/kg能抑制環(huán)氧酶及可誘導(dǎo)的一氧化氮合酶的表達(dá)。B族維生素能夠抑制小鼠甲醛引起的足水腫，B族維生素的鎮(zhèn)痛作用可能也涉及抑制炎癥介質(zhì)的合成，而炎癥介質(zhì)能夠激活或敏化初級傳入纖維。本室前期實(shí)驗(yàn)也顯示復(fù)方具有減輕甲醛引起的足水腫，減少炎癥組織內(nèi)的炎癥細(xì)胞浸潤及水腫。在小鼠甲醛致痛的動(dòng)物模型中，納洛酮能完全拮抗嗎啡在兩個(gè)時(shí)相的鎮(zhèn)痛作用，而對復(fù)方在兩個(gè)時(shí)相的致痛作用都無影響，表明復(fù)方在此模型中的鎮(zhèn)痛作用與阿片系統(tǒng)無直接關(guān)系。綜上所述，貫葉連翹提取物和維生素B2、維生素B6復(fù)方的鎮(zhèn)痛作用可能與增加單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，抗炎作用有關(guān)，無阿片系統(tǒng)的參與，關(guān)于其抗炎機(jī)制有待進(jìn)一步研究。權(quán)利要求1.一種具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物，其特征在于它包括貫葉連翹提取物、維生素B，其成分和重量百分含量如下維生素B20.5-5％維生素B65-15％貫葉連翹提取物余量。2.一種具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物，其特征在于它包括貫葉連翹提取物、維生素B，其成分和重量百分含量如下維生素B11-5％維生素B20.5-5％維生素B65-15％貫葉連翹提取物余量。3.一種如權(quán)利要求1和2所述的具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于藥物組合物根據(jù)需要可以做成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、合劑、糖漿劑、針劑。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的片劑的制備方法是將貫葉連翹提取物、維生素B，與賦形劑制成顆粒干燥，加入崩解劑、潤滑劑，壓片，或直接包裝，或包糖衣，或包薄膜衣即得到產(chǎn)品；以上片劑所述的賦形劑為淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氫鈣等；所述的崩解劑為羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素等；所述的潤滑劑為硬脂酸鎂等；所述的包糖衣材料為蔗糖、滑石粉、明膠、色素、川蠟等；所述的薄膜包衣材料為胃溶型水、醇包衣材料等。其中賦形劑、崩解劑、潤滑劑、包衣材料用量的重量含量分別為5～75％、0.5～20％、0.5～2.0％、2～45％。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的膠囊劑的生產(chǎn)方法是將貫葉連翹提取物、維生素B，加入賦形劑，和崩解劑、助流劑，并使之干燥，然后裝入膠囊中，得到產(chǎn)品。以上所述的制備膠囊所述的賦形劑為淀粉及其衍生物、磷酸氫鈣、硬脂酸鎂等。重量20～80％。助流劑選用微分硅膠，用量為0.5-1％。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的丸劑的生產(chǎn)方法將將貫葉連翹提取物、維生素B加入賦形劑，制丸。①制成濃縮丸；②加入賦形劑重量10～100％、蜜糖，制成水蜜丸、大蜜丸、濃縮丸。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的顆粒劑的生產(chǎn)方法在上述生產(chǎn)得到的濃縮液中加入賦形劑，并制成顆粒，使之干燥，得到產(chǎn)品；所述的加入賦形劑的成分和含量蔗糖50～95％、乳糖50～90％、糊精50～70％。8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的合劑的生產(chǎn)方法；將將貫葉連翹提取物、維生素B與矯味劑、防腐劑溶液混合均勻，即得到產(chǎn)品；所述的加入的矯味劑及其含量蔗糖(或蜜糖)10～60％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的糖漿劑的生產(chǎn)方法將將貫葉連翹提取物、維生素B與蔗糖、蜜糖防腐劑溶液混合均勻，即得到產(chǎn)品；所述的加入的蔗糖或蜜糖的重量比為60～70％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。全文摘要本發(fā)明涉及一種具有鎮(zhèn)痛和消炎的藥物組合物及其生產(chǎn)方法，該藥物組合物添加有中藥貫葉連翹提取物和復(fù)合維生素B，根據(jù)需要可以將其做成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、合劑、糖漿劑、針劑，這種藥物組合物具有安全性、鎮(zhèn)痛和消炎作用效果顯著，而且還有抗抑郁、抗腫瘤的效果，還可以補(bǔ)充人體所缺乏的部分維生素。文檔編號A61K31/7042GK1452980SQ0312800公開日2003年11月5日申請日期2003年5月17日優(yōu)先權(quán)日2003年5月17日發(fā)明者庫寶善,羅潤昌,麻叔林,湯萍英,孫宜申請人:廣西化工生物技術(shù)研究所