專利名稱：柔毛水楊梅的有機提取物及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中草藥。具體地，本發(fā)明涉及柔毛水楊梅(Geum JaponicumThunb variant，在下文中以“EGJV”表示)的有機提取物，及將所述提取物用于刺激受損的骨骼肌及包括皮膚在內的軟組織中的血管新生、骨骼肌再生、及抑制纖維化。本發(fā)明還涉及制備EGJV有機提取物的方法，以及治療骨骼肌損傷或皮膚損傷，促進手術切口愈合，或減少在皮膚愈合及整形手術中形成的疤痕。
背景技術：
水楊梅是包括65種具有單葉或羽狀復葉和整齊花朵(regular flowers)的帶地下莖的草本和半灌木植物的屬，例如G.borisii、G.chiloense、G.coccineum、G.macrophyllum、G.montanum(買麻藤)、G.reptans、G.rivale、G.triflorum、G.Urbanum和G.Japonicum(柔毛水楊梅)等。柔毛水楊梅是薔薇科多年生草本開花植物。在傳統(tǒng)中醫(yī)里柔毛水楊梅的全植株水提取物被用作利尿劑(Perry，L.M.，In Medicinal Plants of East and SoutheastAsia，MIT Press，Cambridge，Mass，pp.242，1980)。
骨骼肌嚴重損傷后的愈合是緩慢和不完全的。骨骼肌有限的再生能力以及在受傷部位迅速形成纖維性疤痕組織是臨床的主要問題。嚴重受損的骨骼肌的通常結果是纖維化。迄今為止，還沒有有效的治療手段能夠促進嚴重損傷后的骨骼肌的完全愈合。
如上所述，嚴重損傷后的肌肉愈合是緩慢和不完全的，導致了纖維組織的替代(Grounds，M.D.Muscle regenerationmolecular aspects andtherapeutic implications.Curr.Opin.Neurol.12，535-543(1999)；Nikolaou，PK，et al.，Biomechanical and histological evaluation of muscle aftercontolled strain injury.American J Sports Med.15，9-14(1987))。目前，還沒有有效的治療方法能夠促進嚴重損傷后的骨骼肌的顯著再生。在我們的早期研究中(Li，M.et al.，Two novel myogenic factors identified andisolated by sequential isoelectic focusing and sodium dodecylsulfate-polyacylamide gel electrophoresis.Electrophoresis 21，289-292(2000)；Li，M.，et al.，Identification and purification of an intrinsic humanmuscle myogenic factor that enhances muscle repair and regeneration.Arch.Biochem.Biophys.384，263-268(2000)，已鑒定了能夠在動物模型中增強培養(yǎng)的衛(wèi)星細胞的增殖和分化以及肌纖維再生的肌肉肌原因子(myogenicfactors)。盡管這些肌原因子能促進肌肉愈合，但不能實現(xiàn)嚴重肌肉損傷后的完全愈合。
纖維組織可在相對局部缺血環(huán)境中生長，但正常組織細胞很難生長。當骨骼肌受到損傷時，血管系統(tǒng)通常被損壞，因此受損部位周圍的血液供應不足。通常，纖維組織生長較快并占據(jù)先前由受損肌纖維占據(jù)的位置，于是阻礙新的肌纖維取代該位置。依照先前的研究，某些生長因子如VEGF、aFGF、bFGF或PDGF能夠增強血管生成，但由那些生長因子介導的血管生成需要約2到9周。在國際市場上沒有產品能誘導嚴重受損的骨骼肌的完全愈合，尤其是在數(shù)小時內誘導母體中血管快速新生。迄今為止，未見報道市場上或研究中有任何藥劑或因子能引起嚴重受損的骨骼肌完全愈合。
發(fā)明概述本發(fā)明的主要目的是提供能夠誘導嚴重受損的骨骼肌充分愈合，同時抑制該受損骨骼肌纖維化的試劑。為達成此目的，本發(fā)明人進行了辛勤的研究。結果發(fā)現(xiàn)天然原料(柔毛水楊梅的完整植株)的有機提取物對快速血管生成和肌生成表現(xiàn)出雙重功效。此雙重功效可用于治療骨骼肌損傷，諸如皮膚愈合、手術切口愈合、燒傷及潰瘍愈合和其它軟組織愈合，以及諸如骨折愈合和骨損傷修復的硬組織愈合。
本發(fā)明的一個目的是提供所述EGJV。所述“EGJV”主要含有包括gemins A、B、C、D、E和F的丹寧酸，和包括2-羥基齊墩果酸、2-羥基烏索酸、2，19-二羥基-烏索酸、2-α，19-α-二羥基-3-氧-12-ursenoic-28酸、烏索酸、epimolic酸、山楂酸、刺梨酸(euscaphic acid)、委陵菜酸(tormenticacid)、委陵菜酸的28-β-D-葡糖苷等等的三萜。
本發(fā)明的另一目的是提供所述“EGJV”在制備用于治療骨骼肌損傷、皮膚損傷或骨折的藥物中的應用?？蓪⑺鯡GJV與藥物可接受的添加劑結合制成各種用于治療骨骼肌損傷、皮膚損傷或骨折的藥物。
本發(fā)明的另一目的是提供治療骨骼肌損傷或皮膚損傷的方法，包括將有效量的“EGJV”對患有骨骼肌損傷或皮膚損傷的動物進行給藥。
本發(fā)明的另一目的是提供制備所述“EGJV”的方法，包括用C1-C4醇對柔毛水楊梅植株進行提取的步驟。
通過以下參照附圖的詳細描述，本領域所屬技術人員能夠很好地理解本發(fā)明的這些及其它特征。
附圖的簡要說明

圖1所示為使用本發(fā)明的溶于5％DMSO的所述EGJV或用5％DMSO對照治療的牽張(stain)損傷的兔脛骨前肌在治療1、2、3、7和18天時的外觀(appearance)。圖1A顯示該受傷部位分布了大量炎性細胞(Inf)。符號“N”表示正常肌纖維的外觀。圖1B顯示經EGJV治療后一天，在受傷部位可觀察到許多新再生的細小肌管和新生的血管。所述新生血管用黑色箭頭指示，而所述新再生的肌管用綠色箭頭指示。圖1C顯示，肌肉損傷2天后，在受傷部位觀察到許多新形成的血管(綠色箭頭指示)且形成許多新再生的肌管(黑色箭頭指示)。相比之下，如圖1E所示(DMSO對照組)該傷口仍然新鮮，并且基本上沒有炎性細胞浸潤。既沒觀察到新形成的血管，也沒觀察到新再生的肌管。
如黑色箭頭所示，第18天在傷口處觀察到許多新再生的有中央核的且相對成熟的肌管(尺寸略小于用N表示的正常肌纖維)(圖1D)。相比之下，圖1F中對照組的傷口內布滿用“Fib”表示的纖維組織。
圖2為顯示牽拉損傷的脛骨前肌在使用本發(fā)明的EGJV治療1、2和3天后的外觀照片。圖2a顯示，第二天在5％DMSO對照組，該受傷部位布滿大量的炎性細胞(Inf)。符號“N”表示正常肌纖維的外觀。相比之下，圖2b-2d顯示EGJV治療組的結果，肌肉損傷一天后，在受傷部位觀察到許多新形成的血管(用黑色箭頭指示)(參照圖2b)。在肌肉損傷2天后，除黑色箭頭指示的許多新形成的血管外，還觀察到沿所述新形成血管的許多新再生并延伸的細小肌管(由綠色箭頭指示)。(參照圖2c)。并且在肌肉損傷3天后觀察到如綠色箭頭環(huán)繞著的更多新再生的肌管簇。(參照圖2d)。
圖3為顯示牽拉損傷的大鼠脛骨前肌在使用本發(fā)明EGJV治療7天后的組織學外觀照片。圖3a顯示，在對照組中所述受傷部位布滿炎性細胞(由“Inf”表示)及纖維組織(由“Fb”表示)。相比之下，圖3b和3c顯示，在EGJV治療組中觀察到整齊排列并延伸的新再生肌管(由紅箭頭指示)，并且其將損傷部位的傷口橋接起來。圖3d是圖3c中藍色矩形部分的放大區(qū)域。圖3d中的紅色箭頭指示新再生肌管，綠色箭頭指示所述新再生肌管的中央核，及藍色箭頭指出活性衛(wèi)星細胞?？梢钥闯鲆恍┧鲂l(wèi)星細胞將與所述肌管融合。
圖4為顯示牽拉損傷的脛骨前肌在使用EGJV治療14天后的組織學外觀照片。圖4a顯示，在對照組中所述受傷部位為纖維化愈合(由“Fb”表示)及傷口處收縮(藍色箭頭)。相比之下，圖4b和4c顯示，在EGJV治療組中傷口部位完全由整齊排列并延伸的新再生肌纖維橋接。符號“Rm”表示新再生的肌纖維，而符號“Em”表示原有的肌纖維。如綠色箭頭所示，切口的輪廓仍可辨認。在圖3b和3c中，與先前存在的肌纖維相比，新再生肌纖維(不足2周齡)具有不同的染色，這可能是由于在兩個不同齡的細胞群中的蛋白質含量仍不同。
發(fā)明的詳細說明本發(fā)明包括以下四個方面第一方面涉及制備所述EGJV的方法。
1.本發(fā)明提供一種從柔毛水楊梅制備有機提取物的方法。該方法包括如下步驟a)用選自C1-C4的醇提取所述水楊梅植株。在室溫條件下重復該步驟a)3-6次，優(yōu)選重復5次。在進行步驟a)前，優(yōu)選獲得所述水楊梅植株的粉末。所述C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇及叔丁醇。更有用的醇為甲醇和乙醇。而甲醇是最優(yōu)選的。至于所述醇相對于待用該醇提取的柔毛水楊梅的用量沒有特別的限制。但從經濟角度考慮，所用的醇量優(yōu)選為待提取的所述柔毛水楊梅重量的1-10倍。
2.上述第1項所述的方法還可包括步驟b)將所述步驟a)得到的提取物干燥成干粉；及c)依次用C6烷烴、乙酸乙酯和選自C1-C4的醇提取所述步驟b)得到的干粉。所述C6烷烴包括具有6個碳原子的環(huán)烷烴及非環(huán)烷烴，包括例如環(huán)己烷、正己烷和新己烷等。所述C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇及叔丁醇。步驟c)中更有用的醇為正丙醇和正丁醇。而正丁醇是最優(yōu)選的。至于所述C6烷烴、乙酸乙酯和醇相對于之前干燥步驟所得的干粉的用量沒有嚴格的限制。但從經濟角度考慮，所用的有機溶劑的量優(yōu)選為待進一步提取的所述干粉重量的1-10倍。
3.為使所述EGJV更適用，以上第2項所述方法優(yōu)選包括步驟d)將所述步驟c)得到的提取物干燥成干粉。在進行步驟d)的干燥操作之前，優(yōu)選將之前步驟c)得到的提取物過濾以除去其中任何不溶性粉末。d)的干燥步驟可在減壓及高于室溫(如在50℃)的條件下完成。
4.為使所述EGJV更純凈，以上第3項所述的方法優(yōu)選還包括步驟e)將所述步驟d)得到的粉末裝入層析柱中；及f)使用濃度逐漸增加的醇的水溶液對所述層析柱進行洗脫，所述醇選自C1-C4醇。步驟e)中的所述層析柱沒有限制。例如，可使用Sephadex或反相柱。步驟f)中所用的醇可選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇及叔丁醇中任何一種。且甲醇為最優(yōu)選的。
本發(fā)明的第二方面涉及由以上1-4項中任一項所述的方法獲得的柔毛水楊梅有機提取物。通過NMR分析發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的EGJV主要含有丹寧酸和三萜，其中所述丹寧酸包括gemins A、B、C、D、E和F的，所述三萜包括2-羥基齊墩果酸、2-羥基烏索酸、2，19-二羥基-烏索酸、2-α，19-α-二羥基-3-氧-12-ursenoic-28酸、烏索酸、epimolic酸、山楂酸、刺梨酸、委陵菜酸、委陵菜酸的28-β-D-葡糖苷。
本發(fā)明的第三方面涉及所述柔毛水楊梅有機提取物的應用，用來制備治療骨骼肌損傷、皮膚損傷或骨折的藥物?？蓪⑺鯡GJV組方成增強血管生成和肌生成的藥物。除所述EGJV外，所述藥物可包括與該EGJV相容的其它藥物試劑。所述藥物試劑包括但不限于諸如抗生素、維生素、細胞因子及oesteo-誘導蛋白(oesteo-inductive proteins)等的藥劑。所述EGJV可與藥物可接受的添加劑組方成各種劑型，包括但不限于粉末、溶液、懸浮液、霜劑(cream)和糊劑(paste)等。所述添加劑和制備各種劑型的方法是本領域所屬技術人員所公知的。
本發(fā)明的第四方面涉及治療骨骼肌損傷、皮膚損傷或骨折的方法，包括給予具有骨骼肌損傷、皮膚損傷、手術切口或骨折的動物有效劑量的所述柔毛水楊梅有機提取物。術語“有效劑量”是能夠有效增強細胞培養(yǎng)體系或動物模型體系中血管生成或肌生成的劑量。此“有效劑量”依賴多種因素，包括待治療動物的種類、待給藥的所述EGJV的濃度以及所述肌肉或皮膚損傷的嚴重程度。確定此“有效劑量”的方法是本領域所屬技術人員公知的。本文中所用的術語“給藥”表示任何標準途徑傳遞藥物。所述給藥途徑是本領域公知的，包括但不限于靜脈內注射、腹膜內注射、肌肉內注射、皮內給藥或透皮給藥等。術語“動物”優(yōu)選指包括大鼠、小鼠、貓、狗、馬和羊等的哺乳動物。更優(yōu)選該術語指人。
實施例參照以下實施例對本發(fā)明進行更詳盡的描述。但本發(fā)明的范圍不局限于這些實施例。
實施例1“EGJV”的制備水楊梅采集自中國貴州省。將干燥的植株(1kg)制成粉末，并在室溫下用甲醇(8L)滲濾2-3小時，重復5次。然后將該提取物減壓干燥，得約50克殘余物。將該干燥粉末(50g)懸浮于120ml H2O中并依次用己烷(5×250ml)、乙醇(5×250ml)和正丁醇(5×250ml)進行分配。對該正丁醇提取液部分進行過濾并減壓蒸發(fā)(50℃)得到粉狀殘余物。將此粉狀殘余物裝入用10％甲醇平衡的Sephadex LH-20柱中，并用濃度逐漸增加的甲醇水溶液洗脫，洗脫出12份，經NMR分析主要含有諸如gemins A、B、C、D、E和F的丹寧酸，和包括2-α，19-α-二羥基-3-氧-12-ursenoic-28酸、烏索酸、epimolic酸、山楂酸、刺梨酸、委陵菜酸、委陵菜酸的28-β-D-葡糖苷的三萜。將此12份甲醇洗脫液合并用作實施例2和3中評價的EGJV提取物。
在從中草藥中篩選血管生成和肌生成試劑的過程中，人發(fā)現(xiàn)所述正丁醇溶解的部分和其后的甲醇洗脫液部分具有強力的刺激嚴重受損骨骼肌中的新血管早期生長(少于24小時)和肌肉再生的雙重功效。除非另有指出，下文使用的術語“EGJV”指所述甲醇洗脫部分。
實施例2活性成分對兔肌肉損傷模型的雙重作用的評價在此，本發(fā)明人測試了所述“EGJV”的效果。試驗結果令人驚奇地證實，與對照組纖維性疤痕組織相比，所述EGJV對嚴重受損骨骼肌的愈合過程有顯著的效果，在所述受損區(qū)域出現(xiàn)再生肌纖維。所述EGJV對于在受損肌肉愈合過程早期階段刺激血管生成和肌再生，以及抑制在骨骼肌愈合和皮膚損傷愈合過程中纖維性疤痕的形成顯示出非常有利的作用。
所述EGJV被用于嚴重肌肉損傷的兔動物模型中(雌性，N＝12，平均體重2.5kg)。在兔脛骨前肌上用外科剪刀通過橫切造成牽拉誘導型肌肉損傷。在所述牽拉誘導型損傷后立即對6只兔的脛骨前肌皮下注射1ml溶于5％DMSO的EGJV溶液。對其它6只兔注射相同體積的5％DMSO溶液作為對照。該注射只給予一次。在損傷后2天將每組的2只兔處死。取出脛骨前肌并處理用于石蠟切片和HE(即蘇木精和伊紅)染色。在損傷后1周將每組的另外2只兔處死，及在損傷后2周將每組的余下2只兔處死。對不同時刻處死的所有兔進行以下相同處理。
如圖1E所示，損傷后1天單獨注射5％DMSO的脛骨前肌的損傷部位仍是新鮮的，幾乎沒有炎性細胞的浸潤，且沒觀察到新形成的血管和再生肌管。對照之下，損傷后1天的EGJV治療組的脛骨前肌損傷部位分布了大量炎性細胞，并且在損傷部位觀察到一些新再生的細小肌管及新形成的血管(圖1B)。肌肉損傷后2天，在受傷部位觀察到許多新形成的血管，并且也形成一些新再生的肌管(圖1C)。相對比地，在DMSO對照組，該損傷部位仍是新鮮的且?guī)缀鯖]有炎性細胞的浸潤(圖1E)。在此對照組中，既沒觀察到新形成的血管，也沒觀察到新再生的肌管(圖1E)。第18天，在EGJV治療組的傷口處觀察到許多新再生的且相對成熟的肌管(具有中央核，尺寸略小于正常肌纖維)(圖1D)。相比之下，對照組的傷口處布滿纖維組織(圖1F)。
實施例3活性成分對大鼠肌肉損傷模型的雙重作用的評價在大鼠骨骼肌損傷模型中對EGJV進行進一步的研究。實驗結果證實，所述EGJV能夠顯著刺激嚴重受損肌肉的受傷部位的血管再生(24小時內)和衛(wèi)星細胞的增殖。在損傷后2周內，接受EGJV治療的動物的受傷部位完全被新再生的肌纖維取代，作為鮮明對照，纖維化是對照組動物的主要特征。
在實驗大鼠(SD大鼠，雌性，N＝40，平均體重150g)脛骨前肌上用外科剪刀通過橫切造成牽拉誘導型肌肉損傷。在所述牽拉誘導型損傷后立即對20只大鼠的脛骨前肌表皮下注射0.1ml溶于5％DMSO的EGJV。對其它20只大鼠則注射相同體積的5％DMSO溶液作為對照。該注射只給予一次。分別在損傷1、2和3天后將每組的4只大鼠處死。取出脛骨前肌，進行石蠟包埋、切片和HE染色處理。在損傷后7天將每組的另外4只大鼠處死，及在損傷后14天將每組的余下4只大鼠處死。對不同時刻處死的所有大鼠進行以下相同處理。
在損傷后1天檢查，對照組大鼠的脛骨前肌受傷部位分布大量炎性細胞，而在第2天有更多炎性細胞浸潤(圖2a)。還觀察到少量的新形成的血管。相比之下，在EGJV治療的大鼠的受傷部位發(fā)現(xiàn)，第1天，出現(xiàn)許多新形成的血管(圖2b)，而在第2天出現(xiàn)更多的血管及新再生的細長肌管(該肌管中央出現(xiàn)核)(圖2c)。第3天，在EGJV治療組的受傷部位觀察到更多的新再生肌管簇取代受損的肌纖維(圖2d)。
第7天，對照組動物的受傷部位布滿炎性細胞和纖維組織替代(圖3a)。而作為鮮明的對照，在EGJV治療的動物的受傷部位則觀察到大量新生的、成長中的、整齊排列的肌管(圖3b-3c)。在新再生的肌管上還發(fā)現(xiàn)一些增殖的衛(wèi)星細胞(圖3d)。同時沒發(fā)現(xiàn)顯著的纖維化跡象。
在第14天，對照組動物的傷口部位通過纖維化愈合。如圖4a所示肌肉損傷的傷口收縮。但在EGJV治療的大鼠中，受傷部位沒有纖維化跡象，并由整齊排列的新再生肌纖維橋聯(lián)(圖4b和4c)。通過先前存在的肌纖維和新再生肌纖維染色的不同，仍可辨認實驗大鼠肌肉中的切口輪廓(圖4b和4c)，這可能是由于兩個不同階段的肌纖維中的蛋白質含量的不同。
總之，我們的實驗結果顯示，在損傷后24小時內，在骨骼肌受傷部位由單獨局部注射EGJV誘導出現(xiàn)活躍的新血管形成現(xiàn)象，并且在注射部位周圍形成許多新的充滿血細胞的毛細芽(capillary sprouts)。在肌肉受損后第2天，除了許多新形成的血管外，還觀察到大量分散的新再生的細長的肌管。相比之下，在對照組中有許多炎性細胞浸潤。在第7天，所述新再生肌纖維變長，并準確地沿鄰近的完好肌纖維的長軸方向填滿該受損肌肉的傷口。但在對照組中，在受傷部位除了浸潤的炎性細胞，還形成了纖維化組織。在第14天，在EGJV治療的肌肉中，受損肌肉傷口完全被新再生肌肉代替，而在對照組中，所述傷口由纖維化愈合且傷口收縮。
實驗結果的說明實驗結果顯示，本發(fā)明的EGJV憑借其對嚴重受損肌肉的愈合過程中的早期血管形成(少于24小時)、肌生成和抑制纖維化的多重作用參與骨骼肌的愈合過程。所述源自EGJV的早期血管形成、肌生成和抑制纖維化的多重作用彼此協(xié)調，使嚴重受損骨骼肌完全愈合。所述早期血管生成、肌生成和抑制纖維化之間的協(xié)調作用為新肌肉生長構筑了更理想的周圍環(huán)境。纖維組織能在相對缺血的環(huán)境中生長。例如，如果沒有供給必要的營養(yǎng)成分將不可能有好的肌生成。如果血液供應不充足，纖維組織能夠生長而正常組織細胞不能生長。只有在良好血液供應及無纖維組織阻礙的條件下才能夠適當?shù)匕l(fā)生肌生成。我們的EGJV能在24小時或更短時間內刺激新血管的快速生長，因此建立起良好的細胞生長和增殖的環(huán)境。已證實增強早期血管生成、肌生成和抑制纖維化的協(xié)調作用引起嚴重受損肌肉的完全愈合。
本發(fā)明的工業(yè)應用性所述EGJV對快速血管生成、肌生成及抑制纖維化的獨特特征使其非常適用于治療骨骼肌損傷、軟組織創(chuàng)傷、手術切口、燒傷、潰瘍、骨折及骨損傷。所述EGJV還可與其它治療性藥劑結合形成更好的藥劑，例如將所述EGJV與oesteo-誘導蛋白結合用于治療骨折和骨損傷，尤其在較少血液供應或多數(shù)血管受損的部位。因此，EGJV很有可能發(fā)展為治療骨骼肌損傷、皮膚損傷、手術切口愈合及骨折愈合的新一代治療性藥劑。
權利要求
1.一種制備柔毛水楊梅有機提取物的方法，包括如下步驟a)用選自C1-C4的醇對所述水楊梅植株進行提取。
2.如權利要求1所述的方法，還包括以下步驟b)將所述步驟a)得到的提取物干燥成干粉；及c)依次用C6烷烴、乙酸乙酯和選自C1-C4的醇對所述步驟b)得到的干粉進行提取。
3.如權利要求2所述的方法，還包括以下步驟d)將所述步驟c)得到的提取物干燥成干粉。
4.如權利要求3所述的方法，還包括步驟e)將所述步驟d)得到的粉末裝入層析柱中；及f)使用濃度逐漸增加的醇的水溶液對所述層析柱進行洗脫，其中所述醇選自C1-C4的醇。
5.如權利要求1-4中任一項權利要求所述的方法，其中所述步驟a)在室溫下進行2-3小時，并重復5次。
6.如權利要求1所述的方法，其中所述的有機溶劑為甲醇。
7.如權利要求2所述的方法，其中所述的C6烷烴為正己烷，且所述步驟c)中所用的醇為正丁醇。
8.如權利要求4所述的方法，其中所述的層析柱為用10％重量比的甲醇平衡的Sephadex LH-20柱，且其中所述步驟e)中所用的醇為甲醇。
9.如權利要求2-8中任一項權利要求所述的方法，其中所述步驟b)或d)在減壓下進行。
10.如權利要求1-9中任一項權利要求所述的方法，其中所獲得的提取物主要含有丹寧酸和三萜，所述丹寧酸包括gemins A、B、C、D、E和F，所述三萜包括2-羥基齊墩果酸、2-羥基烏索酸、2，19-二羥基-烏索酸、2-α，19-α-二羥基-3-氧-12-ursenoic-28酸、烏索酸、epimolic酸、山楂酸、刺梨酸、委陵菜酸、委陵菜酸的28-β-D-葡糖苷。
11.柔毛水楊梅有機提取物，所述提取物是通過權利要求1-10中任一項權利要求所述的方法獲得的。
12.柔毛水楊梅有機提取物在制備用于治療骨骼肌損傷、皮膚損傷或骨折的藥物中的應用，其中所述柔毛水楊梅有機提取物是通過權利要求1-10中任一項權利要求所述的方法獲得的。
13.治療骨骼肌損傷、皮膚損傷或骨折的方法，包括將有效量的柔毛水楊梅有機提取物對患有骨骼肌損傷、皮膚損傷或骨折的動物進行給藥，其中所述柔毛水楊梅有機提取物是通過權利要求1-10中任一項權利要求所述的方法獲得的。
14.如權利要求13所述的方法，其中所述動物為哺乳動物。
15.如權利要求14所述的方法，其中所述哺乳動物為人。
全文摘要
本發(fā)明確證中草藥柔毛水楊梅有機提取物對受損骨骼肌中的快速血管生成(＜24h)、肌生成和抑制纖維化方面表現(xiàn)出有力的刺激作用。在兔和大鼠動物模型中，該提取物顯示出對受損骨骼肌中的血管生成和肌生成的雙重功效，導致骨骼肌完全愈合。本發(fā)明的所述提取物能夠開發(fā)為治療骨骼肌損傷，包括燒傷、皮膚損傷和手術切口的軟組織損傷，以及骨折和骨損傷的有效的治療性藥劑。
文檔編號A61P17/00GK1708313SQ02830016
公開日2005年12月14日 申請日期2002年12月10日 優(yōu)先權日2002年12月10日
發(fā)明者李明, 沈祖堯, 梁秉中, 董輝, 陳啟明 申請人:香港中文大學