專利名稱：包含美拉加群和地塞米松的組合產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的藥學(xué)活性化合物組合。
背景和現(xiàn)有技術(shù)凝血是止血(即防止血液從受損血管中流失)和血栓形成(即在血管中形成血凝塊，有時導(dǎo)致血管阻塞)中都會涉及的關(guān)鍵過程。
凝血是一系列復(fù)雜的酶反應(yīng)的結(jié)果。
彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)是一種由于原發(fā)問題如感染、創(chuàng)傷、產(chǎn)科并發(fā)癥、癌癥和蛇咬傷而出現(xiàn)的繼發(fā)性全身凝血-出血障礙。
DIC最嚴重的臨床形式的特征為凝血蛋白的過度消耗、血纖蛋白的沉積和出血。在其最輕微的形式中，生成凝血酶的內(nèi)源性標志，同時幾乎不產(chǎn)生凝血問題或不產(chǎn)生明顯的凝血問題。
創(chuàng)傷患者患DIC的風(fēng)險增加。頭部創(chuàng)傷是特別常見的引發(fā)兒童患DIC的原因。
約40％的創(chuàng)傷患者可能會發(fā)生膿毒癥，并且膿毒癥是所有患者DIC重要的原始起因。繼發(fā)性血纖蛋白溶解使臨床病況惡化，其導(dǎo)致形成例如血纖蛋白原和血纖蛋白降解，這干擾了正常血纖蛋白的形成和血小板的功能。
DIC中的血纖蛋白沉積可進一步導(dǎo)致器官機能障礙。DIC是引發(fā)急性腎衰竭的主要原因，并且其還會促發(fā)多系統(tǒng)器官衰竭(MOF)和死亡。盡管改善了重癥監(jiān)護并使用了廣譜抗菌劑，患有嚴重膿毒癥的DIC患者的死亡率仍然很高(Eisele等人，Sem.Thromb.Hemost.，(1998)24，71)。
DIC的主要特征為導(dǎo)致產(chǎn)生過量凝血酶的前凝血劑活化、伴有血管內(nèi)血纖蛋白形成的血凝過快、和導(dǎo)致血小板減少癥(血小板計數(shù)低)的組織內(nèi)血小板聚集。此外，中和凝血酶的天然凝血抑制機理不能正常運轉(zhuǎn)。
目前DIC的治療個性化很高并且著重于治療根本的原發(fā)疾病。不控制原發(fā)疾病的話，不管進行何種形式糾正相關(guān)出血或血栓形成問題的治療，DIC將繼續(xù)。
對于出血顯著的患者而言，為了維持止血平衡，常常進行使用新鮮冷凍血漿(FFP)、冷沉淀物、和/或血小板濃縮物的替代治療直至原發(fā)問題受到控制。
在DIC的治療中內(nèi)源性抗凝作用和/或其它抗凝劑治療可能是有益的。肝素已經(jīng)被用于DIC的患者，得到不同結(jié)果。但是，對于肝素的響應(yīng)似乎依賴于抗凝血酶III(ATIII)的血漿濃度，其在DIC期間，尤其是患有膿毒癥患者的DIC期間通常會降低(Riewald and Reiss，Sem.Thromb.Hemost.，(1998)24，53)。實際上，肝素在DIC治療中的應(yīng)用有很大爭議，并且在以創(chuàng)傷為根本問題的患者中一般不指示使用肝素。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，用ATIII替代，可降低內(nèi)毒素動物模型以及患膿毒癥的危重患者的死亡率(Diaz-Cremades等人，Intensive Care Med.，(1994)20，577；Eisele等人，Sem.Thromb.Hemost.，(1998)24，71)。為了驗證這種假設(shè)，目前正在進行較大規(guī)模的隨機臨床試驗。
國際專利申請WO 94/29336公開了一組凝血酶抑制性化合物，包括HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-H(其中Cgl代表環(huán)己基甘氨酸，Aze代表S-氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸并且Pab-H代表4-氨基甲基脒基苯)，其也被稱為美拉加群(melagatran)(見WO 94/29336的實施例1)。國際專利申請WO 97/23499公開了美拉加群的前體藥物等。
Eriksson等人(Thromb.Hemost.，(1998)80，1022和ActaAnaesthesiol.Scand.，(2000)44，24)和Basu等人(Exp.Opin.Invest.Drugs，(2000)9，1129)對實驗性內(nèi)毒素血癥期間美拉加群的作用進行了評估。后一組研究者推斷美拉加群可能可用于治療膿毒性休克。
不過，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)不管美拉加群還是任何其它獨立的抗凝劑在實驗性內(nèi)毒素血癥中都不能提供完全的恢復(fù)。因此，仍然需要作為替代的和/或更有效的DIC治療方法。
地塞米松是一種眾所周知的表現(xiàn)出抗炎活性的合成皮質(zhì)類固醇。其可以以多種物理形式進行給藥來用于治療各種炎性病況(見，例如，Martindale-The Complete Drug Reference，(第32版)K.Parfitt(編輯)，Pharmaceutical Press，倫敦(1999)，1037-1039頁)。
雖然國際專利申請WO 00/41716公開了美拉加群在炎性病癥治療中的一般應(yīng)用，以及美拉加群、其衍生物和前體藥物與一般性提及的用于治療炎癥的其它抗炎劑的組合，但是其并沒有提及或暗示包含美拉加群和地塞米松的特定組合。
我們現(xiàn)在令人吃驚地發(fā)現(xiàn)，該類組合的給藥在大鼠實驗性內(nèi)毒素血癥中可以產(chǎn)生顯著的協(xié)同作用。因此，期待該類組合可用于治療特別是哺乳動物患者的DIC。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一方面提供了一種組合產(chǎn)品，其包含(A)美拉加群或其可藥用的衍生物；和(B)地塞米松或其可藥用的衍生物，其中組分(A)和(B)各自與可藥用的助劑、稀釋劑或載體混和配制。
本發(fā)明的組合產(chǎn)品提供了美拉加群(或其衍生物)與地塞米松(或其衍生物)的聯(lián)合給藥，并且因此可以以獨立制劑的形式存在，其中這些制劑中的至少一種包含美拉加群和至少一種包含地塞米松，或可以以組合制劑的形式提交(即配制)(即以包括美拉加群/衍生物和地塞米松/衍生物的單一制劑的形式提交)。
因此，還提供了(1)一種包括美拉加群或其可藥用的衍生物和地塞米松或其可藥用的衍生物以及可藥用的助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑(該制劑在下文中被稱為“組合制劑”)；和(2)一種多部分試劑盒(kit of parts)，其包含組分(a)和(b)(a)一種包括美拉加群或其可藥用的衍生物以及可藥用的助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑；和(b)一種包括地塞米松或其可藥用的衍生物以及可藥用的助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑，其中組分(a)和(b)各自是以適于與另一個組分聯(lián)合進行給藥的形式被提供的。
本發(fā)明另一方面提供了一種制造上面所定義的多部分試劑盒的方法，該方法包括將上面所定義的組分(a)與上面所定義的組分(b)相結(jié)合，從而使得兩種組分適于彼此聯(lián)合地進行給藥。
對于將兩種組分彼此“聯(lián)合”而言，該多部分試劑盒的組分(a)和(b)可以(i)以獨立制劑(即彼此獨立)的形式被提供，隨后將其放到一起用于在組合治療中彼此聯(lián)合應(yīng)用；或(ii)以“組合包裝”獨立組分的形式進行包裝并一起提交用于在組合治療中彼此聯(lián)合應(yīng)用。
因此，還提供了一種多部分試劑盒，其包含(I)這里所定義的組分(a)和(b)中的一種；以及(II)將組分與兩種組分中的另一種聯(lián)用的使用說明。
這里所描述的多部分試劑盒可以包含一種以上包括適宜數(shù)量/劑量的美拉加群或其衍生物的制劑，和/或一種以上包括適宜數(shù)量/劑量的地塞米松或其衍生物的制劑，以進行重復(fù)給藥。如果存在一種以上的制劑(包含任何一種活性化合物)，則該類制劑在美拉加群(或衍生物)或地塞米松(或衍生物)的劑量、化學(xué)組成和/或物理形式方面可以相同或不同。
本發(fā)明的組合產(chǎn)品可用于治療炎性病癥。該類病癥包括由損傷所導(dǎo)致的炎癥、由病毒或細菌感染所導(dǎo)致的炎癥、或由特征在于炎癥為其癥狀之一的疾病所導(dǎo)致的炎癥。該類疾病包括自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、過敏、哮喘、鼻炎、胰腺炎、uticaria和炎性腸綜合征。
本發(fā)明的組合產(chǎn)品還可用于治療患有或有患其中希望或需要抑制凝血酶的疾病的風(fēng)險的患者，例如可用于治療和/或預(yù)防包括人在內(nèi)的動物的血液和/或組織中的血栓形成和血凝過快。已知血凝過快可以導(dǎo)致血栓-栓塞疾病?？商峒暗呐c血凝過快和血栓-栓塞疾病有關(guān)的病況包括遺傳或獲得性蛋白質(zhì)C抗性，如因子V-突變(因子V Leiden)、和在抗凝血酶III、蛋白質(zhì)C、蛋白質(zhì)S、肝素輔因子II方面的遺傳或獲得性缺陷。已知與血凝過快和血栓-栓塞疾病有關(guān)的其它病況包括循環(huán)的抗磷脂抗體(Lupus抗凝劑)、homocysteinemi、肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥和血纖蛋白溶解方面的缺陷、以及凝血綜合征(例如DIC)和通常的血管損傷(例如由于手術(shù)而導(dǎo)致的)。
其中有不希望的凝血酶過量而沒有血凝過快跡象的病況的治療例如對神經(jīng)變性性疾病如阿爾茨海默氏病的治療。
還可提及的疾病情形包括靜脈血栓形成(例如DVT)和肺栓塞、動脈血栓形成(例如在心肌梗死、不穩(wěn)定的絞痛、以血栓形成為基礎(chǔ)的中風(fēng)和外周動脈血栓形成)、全身性栓塞的治療和/或預(yù)防性處理，所說的全身性栓塞通常來自心房纖顫期間的心房或透壁性心肌梗死后的左心室，或者是由充血性心衰所造成的；血栓溶解、經(jīng)皮的透腔血管成形術(shù)(PTA)和冠狀動脈旁路手術(shù)后再閉合(即血栓形成)的預(yù)防；顯微手術(shù)和一般的血管手術(shù)后血栓再形成的預(yù)防。
另外的適應(yīng)癥包括由細菌、多種創(chuàng)傷、中毒或任何其它機理所造成的DIC的治療和/或預(yù)防；當血液與身體內(nèi)的異物表面如血管移植物、血管支架、血管插管、機械和生物性人工瓣膜或任何其它醫(yī)學(xué)裝置相接觸時的抗凝劑治療；和當血液與體外的醫(yī)學(xué)裝置相接觸時如在使用心-肺復(fù)蘇機的心血管手術(shù)期間或在血液透析中的抗凝劑治療；自發(fā)性和成人呼吸窘迫綜合征、用放療或化療進行治療后的肺纖維化、膿毒性休克、敗血癥、炎性反應(yīng)的治療和預(yù)防性處理，其非限制性地包括水腫、急性或慢性動脈粥樣硬化如冠狀動脈疾病和動脈粥樣硬化斑的形成、腦動脈疾病、腦梗死、腦血栓形成、腦栓塞、外周動脈疾病、局部缺血、絞痛(包括不穩(wěn)定的絞痛)、再灌注性損害、經(jīng)皮透腔血管成形術(shù)(PTA)和冠狀動脈旁路手術(shù)后的再狹窄。
優(yōu)選的病況包括其中炎癥參與觸發(fā)凝血的栓塞性疾病。例如，由于微生物和/或由其釋放的物質(zhì)的存在和/或作用、物理損傷、動脈粥樣硬化性損害和其它炎癥誘導(dǎo)劑而造成的血管壁炎癥。
在這點上，用本發(fā)明的組合產(chǎn)品治療的優(yōu)選病癥包括DIC。
在文獻中也被稱為彌散性血管內(nèi)凝血、消耗性凝血和/或脫血纖蛋白綜合征的術(shù)語“DIC”應(yīng)被理解為包括具有上文所述特征的任何凝血病況，和/或其中觀察到參與凝血、血纖蛋白溶解和/或血纖蛋白分解途徑的元素和/或因子因在廣泛的血管內(nèi)血凝中發(fā)揮作用而被異常消耗的病況。如前所述的那樣，DIC可以由許多初始原因所導(dǎo)致。
因此，本發(fā)明另一方面提供了一種治療特征在于炎癥是其癥狀之一的病況、和/或其中希望或需要抑制凝血酶的病況、和/或其中炎癥參與觸發(fā)凝血的病況的方法，該治療方法包括給予包括美拉加群(或其可藥用的衍生物)、和地塞米松(或其可藥用的衍生物)以及可藥用的助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑。
本發(fā)明另一方面提供了一種治療該類病況的方法，其包括給患有或懷疑患有該類病況的患者使用(a)一種包含美拉加群或其可藥用的衍生物以及可藥用的助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑；和(b)一種包含地塞米松或其可藥用的衍生物以及可藥用的助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑。
為了避免疑惑，這里所用的術(shù)語“治療”包括針對病況的治療和/或預(yù)防性處理。
對于這里所述的多部分試劑盒而言，“聯(lián)合給藥”指的是在相關(guān)病況的治療過程中將包含美拉加群(或其衍生物)和地塞米松(或其衍生物)的各制劑相繼、分開和/或同時給藥，其中所說的病況可以是急性或慢性的。
因此，就本發(fā)明的組合產(chǎn)品來說，術(shù)語“聯(lián)合給藥”包括將組合產(chǎn)品的兩種組分(美拉加群/衍生物和地塞米松/衍生物)一起或在時間上足夠密切地進行給藥(任選地可重復(fù)給藥)以確保能在相關(guān)病況的治療中為患者提供有益的作用，這種有益的作用高于在相同的治療過程中將包含美拉加群/衍生物的制劑或包含地塞米松/衍生物的制劑中的任何一種在不存在其它成分的情況下單獨給藥(任選地重復(fù)給藥)所獲得的作用。關(guān)于在特定病況的治療過程中一種組合是否能提供更好的有益作用的判定將依賴于所要治療或預(yù)防的病況，但這種判定是本領(lǐng)域技術(shù)人員按常規(guī)可以完成的。
此外，在本發(fā)明多部分試劑盒的上下文中，術(shù)語“與......聯(lián)用”包括兩種制劑中的一種或另外一種可以在另一種成分給藥之前、給藥之后和/或在相同的時間進行給藥(任選地可重復(fù)給藥)。當用于本文中時，術(shù)語“同時給藥”和“在相同的時間進行給藥”包括單獨劑量的美拉加群(或其衍生物)和地塞米松(或其衍生物)在彼此給藥的48小時(例如24小時)內(nèi)進行給藥。
美拉加群的“可藥用的衍生物”包括鹽(例如無毒的可藥用的有機或無機酸加成鹽)和溶劑化物。應(yīng)當清楚的是該術(shù)語還包括具有或可提供與美拉加群相同的生物學(xué)功能和/或活性(例如對抗凝血酶的抑制活性)的衍生物。此外，對于本發(fā)明的目的而言，該術(shù)語還包括美拉加群的前體藥物。美拉加群的“前體藥物”包括在口服或胃腸外給藥后在預(yù)定的時間內(nèi)(例如在6和24小時之間的給藥間隔內(nèi)(即一天給藥1-4次))可以在體內(nèi)代謝形成試驗上可檢測量的美拉加群的任何物質(zhì)組成。為了避免疑惑，術(shù)語“胃腸外”給藥包括除口服給藥外的所有給藥形式。
可提及的美拉加群的前體藥物包括在國際專利申請WO 97/23499中所公開的那些物質(zhì)。優(yōu)選的前體藥物是這些式R1O2C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH的物質(zhì)(見上面或WO 97/23499中的縮寫目錄)，其中R1表示C1-10烷基或芐基，如直鏈或支鏈的C1-6烷基(例如C1-4烷基，尤其是甲基、正丙基、異丙基、叔丁基，并且特別是乙基)，并且OH基團取代了Pab脒基氫中的一個。
地塞米松“可藥用的衍生物”包括鹽(例如無毒的可藥用的有機或無機酸加成鹽)和溶劑化物以及無毒的可藥用酯。應(yīng)當清楚的是該術(shù)語還包括具有或可提供與地塞米松相同的生物學(xué)功能和/或活性的衍生物。可提及的酯包括地塞米松的醋酸酯、異煙酸酯、磷酸酯、間磺基苯甲酸鈉酯、磷酸鈉酯、半琥珀酸酯、亞油酸酯、棕櫚酸酯、新戊酸酯、丙酸酯、琥珀酸鈉酯、叔丁乙酸酯(tebutates)、戊酸酯、苯丙酸酯和troxundates。
根據(jù)本發(fā)明，美拉加群、地塞米松以及二者中任何一種的衍生物可以以包含可藥用劑量形式美拉加群和/或地塞米松的藥物制劑的形式被口服給藥、靜脈內(nèi)給藥、皮下給藥、頰給藥、直腸給藥、皮膚給藥、經(jīng)鼻給藥、氣管給藥、支氣管給藥、局部給藥、通過任何其它胃腸外途徑或通過吸入來進行給藥。根據(jù)所治療的病癥和患者以及給藥途徑，該組合物可以以不同的劑量進行給藥。
優(yōu)選的傳遞方式是全身給藥。對于美拉加群及其衍生物而言，優(yōu)選的給藥方式是胃腸外給藥，更優(yōu)選地是靜脈內(nèi)給藥，并且尤其是皮下給藥。對于美拉加群的前體藥物而言，優(yōu)選的給藥方式是口服給藥。對于地塞米松及其衍生物而言，優(yōu)選的給藥方式是口服給藥、胃腸外給藥(例如靜脈內(nèi)注射或輸注、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)或損害內(nèi)注射、或軟組織注射)，或如果適宜的話，可以局部給藥，例如通過吸入給藥于肺或經(jīng)鼻給藥。
對于哺乳動物，尤其是人的治療而言，美拉加群/衍生物和地塞米松/衍生物可以以混有可藥用助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑的形式被給藥，可以根據(jù)所需的給藥途徑和標準的制藥規(guī)范來對所述可藥用助劑、稀釋劑或載體進行選擇。
在文獻中對用于將美拉加群及其衍生物(包括前體藥物)進行給藥的適宜制劑進行了描述，例如特別是如國際專利申請WO 94/29336、WO 96/14084、WO 96/16671、WO 97/23499、WO 97/39770、WO 97/45138、WO 98/16252、WO 99/27912、WO 99/27913、WO 00/12043和WO 00/13671所描述的，這些文件中的公開內(nèi)容在這里被引入作為參考。
類似地，在文獻(見例如Martindale-The Complete DrugReference(第32版)1037至1039頁，這里所涉及的文件以及所有這些文件中的公開內(nèi)容在這里都被引入作為參考)中對用于將地塞米松進行給藥的適宜制劑進行了描述。同樣地，普通技術(shù)人員用常規(guī)技術(shù)可以不需要花費創(chuàng)造性勞動地完成適宜制劑的制備，特別是既包括美拉加群/衍生物又包括地塞米松/衍生物的組合制劑的制備。
在各制劑中的美拉加群/衍生物和地塞米松/衍生物的數(shù)量將取決于所治療病況的嚴重程度、所治療的患者以及所用的化合物，但是可以由普通技術(shù)人員非創(chuàng)造性地決定。
在哺乳動物，尤其是人類患者的治療和/或預(yù)防性處理中美拉加群/衍生物和地塞米松/衍生物的適宜劑量可以由醫(yī)學(xué)參與者或其它技術(shù)人員用常規(guī)方法來決定，并且包括相關(guān)內(nèi)容在這里被引入作為參考的上文所提及與美拉加群/衍生物和地塞米松/衍生物二者有關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)文件中所討論的各自劑量。
在美拉加群的情況中，在哺乳動物，尤其是人類患者的治療和/或預(yù)防性處理中其活性化合物、前體藥物和衍生物的適宜劑量包括這些在相關(guān)病況的治療過程中可以給出最高至5μmol/L，例如0.001至5μmol/L的平均血漿濃度的劑量。因此，適宜的劑量可以為0.1mg每天一次至25mg每天三次，和/或最高至在24小時期間胃腸外輸入100mg，并且對于包括上文所特定提及的物質(zhì)在內(nèi)的美拉加群的前體藥物而言在0.1mg每天一次至100mg每天三次的范圍內(nèi)。
在地塞米松及其衍生物的情況中，用于治療或預(yù)防目的的適宜劑量為每日0.001至1mg/kg體重。
不管怎樣，醫(yī)生或本領(lǐng)域技術(shù)人員將能決定最適于各患者的實際劑量，該劑量可隨著被治療的病況以及被治療的特定患者的年齡、體重、性別和響應(yīng)來進行變化。上述劑量是一般情況的示范性實例；當然，在應(yīng)使用較高或較低劑量的情況中可以有個例，并且該類劑量也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
當將獨立制劑進行給藥時，可以由醫(yī)生或本領(lǐng)域技術(shù)人員來決定被給藥的包含美拉加群(或其衍生物)、以及地塞米松(或其衍生物)的制劑的次序(即是否和在何時進行順序、分開和/或同時給藥)。例如，給藥次序可取決于許多對技術(shù)人員而言顯而易見的因素，如在治療過程或治療周期的任何時間，由于實際操作的原因是否不能將該制劑中的一種或另一種給患者進行給藥(例如患者失去知覺，不能服用包含美拉加群或地塞米松的口服制劑)。
這里所描述的方法在病況如DIC的治療中具有一些優(yōu)點，與現(xiàn)有技術(shù)中用于治療該類病況的公知方法相比，其對于醫(yī)生和/或患者而言更方便、更有效、毒性更低、具有更廣的活性范圍、效力更強、產(chǎn)生的副作用更少，或其具有其它有用的藥理學(xué)性質(zhì)。
用下面的實例參考附圖對本發(fā)明進行非限制性地解釋，其中
圖1說明了在靜脈內(nèi)注射內(nèi)毒素后5小時內(nèi)對照組大鼠(偽組菱形；賦形劑組正方形)中血漿血纖蛋白原的下降。
圖2說明了在給予內(nèi)毒素后5小時各組大鼠(對照組和這些給予試驗化合物的組)血液中的血纖蛋白原。
圖3a說明了在給予內(nèi)毒素后5小時各組大鼠(對照組和這些給予試驗化合物的組)肝中的血纖蛋白蓄積。
圖3b說明了在給予內(nèi)毒素后5小時各組大鼠(對照組和這些給予試驗化合物的組)脾中的血纖蛋白蓄積。
圖4說明了在靜脈內(nèi)注射內(nèi)毒素后5小時內(nèi)對照組大鼠(偽組菱形；賦形劑組正方形)中血小板的下降。
圖5說明了在給予內(nèi)毒素后5小時各組大鼠(對照組和這些給予試驗化合物的組)血小板占基準值的百分比。
實施例材料和方法在研究中使用雄性Sprague-Dawley大鼠(體重350-425g，Mlegaard Breeding Centre，Skensved，丹麥)。動物護理和使用得到了Gothenburg Local Ethical Committee on AnimalExperiments——一個屬于瑞典The National Board for LaboratoryAnimals的團體的批準。通過腹膜內(nèi)注射戊巴比妥鈉(80mg/kg，Nord Vacc，Malm，瑞典)來誘發(fā)麻醉，然后在整個試驗期間進行連續(xù)輸注(12mg/kg/h)。在整個試驗期間，通過外部加熱將體溫維持在38℃。
在試驗開始時以靜脈內(nèi)推注的形式給予內(nèi)毒素(脂多糖，LPS，Escherichia coli，055B5，Sigma，Ma，USA)。就在內(nèi)毒素給藥前以靜脈內(nèi)注射的形式進行一次血纖蛋白溶解抑制劑——氨甲環(huán)酸(Cyclokapron，Kabi Pharmacia，Stockholm，瑞典)的給藥并且在2.5小時后再進行一次給藥(作為對照)。以靜脈內(nèi)推注形式給予得自腸粘膜的未分級的肝素鈉(肝素)(Kabi Pharmacia)和美拉加群(Astra Zeneca，Sdertlje，瑞典)，并且隨后在內(nèi)毒素注射之前20分鐘開始的整個試驗過程中自始至終進行連續(xù)輸注。在內(nèi)毒素之前1小時以靜脈內(nèi)推注的形式給予地塞米松(Decadron，MSD，Haarlem，Netherlands)。進行偽操作的動物用鹽水來替代內(nèi)毒素。劑量和組的號碼的詳細情況見表1。
表1組 縮寫 大小 藥物推注 輸注I 偽組 13鹽水II 賦形劑 16鹽水III氨甲環(huán)酸 7 氨甲環(huán)酸2×50mg/kgIV 美拉加群 低劑量10美拉加群0.13μmol/kg 0.32μmol/kg/hV 美拉加群 中劑量10美拉加群0.4μmol/kg 1.0μmol/kg/hVI 美拉加群 高劑量9 美拉加群1.3μmol/kg 3.2μmol/kg/hVII肝素 低劑量8 肝素25U/kg 25U/kg/hVIII 肝素 中劑量5 肝素50U/kg 50U/kg/hIX 肝素 低劑量8 肝素25U/kg 25U/kg/h美拉加群 低劑量 美拉加群0.13μmol/kg 0.32μmol/kg/hX 肝素 低劑量7 肝素25U/kg 25U/kg/h美拉加群 中劑量 美拉加群0.4μmol/kg 1.0μmol/kg/hXV 地塞米松 低劑量5 地塞米松1mg/kgXVI地塞米松 高劑量5 地塞米松10mg/kgXVII 地塞米松 低劑量5 地塞米松1mg/kg美拉加群 低劑量 美拉加群0.13μmol/kg 0.32μmol/kg/hXVIII 地塞米松 低劑量5 地塞米松1mg/kg美拉加群 高劑量 美拉加群0.4μmol/kg 1.0μmol/kg/hXIX地塞米松 高劑量6 地塞米松10mg/kg美拉加群 低劑量 美拉加群0.13μmol/kg 0.32μmol/kg/hXX 地塞米松 高劑量4 地塞米松10mg/kg美拉加群 低劑量 美拉加群0.4μmol/kg 1.0μmol/kg/h將動物的氣管切開，將用于給藥的導(dǎo)管放置到左頸靜脈中，將用于戊巴比妥的連續(xù)輸注和取血樣的導(dǎo)管放置在右股動脈中。在開始實驗時以靜脈內(nèi)注射的形式給予內(nèi)毒素(1mg/kg)。在內(nèi)毒素給藥前15分鐘靜脈內(nèi)給予作為血液中血纖蛋白原和器官中血纖蛋白標記物的人125I-血纖蛋白原(80kBq，IM53，Amersham International，Buckinghamshire，UK)。每隔30分鐘取血樣以測量血液中的125I-活性，測定血細胞和血紅蛋白(Hb)含量的測定。在內(nèi)毒素給藥后2.5和5小時，取血樣以測定血漿中纖溶酶活化劑抑制劑(PAI-1)的活性和美拉加群以及肝素的血漿濃度。對于一些動物而言，還測量所形成的凝血酶/抗凝血酶III復(fù)合體(TAT)的量。在注射內(nèi)毒素后5小時，將肺、肝、腎和脾從動物身上取下，用鹽水從外部進行清洗并將水吸干，測量125I-活性。
將血樣抽取到包含枸櫞酸鹽溶液的塑料管中(9份血和1份枸櫞酸鈉溶液，0.13mol/L)，將其在10000xg下在20℃下離心5分鐘，在進行分析前將血漿在-20℃下進行儲存。根據(jù)制造商的說明用血凝度計(KC4，Amelung，Lemago，德國)對APTT(活化凝血酶原的時間，PTT-Automate(Diagnostica Stago，Asnières，法國)進行測定。用LC-MS法(BA-285，Astra Zeneca R & DMlndal，瑞典)測量美拉加群的血漿濃度并用Coatest Heparin(Cromogenix，Mlndal，瑞典)測定肝素的血漿濃度。用TAT-micro(Stago，Arnisiére，法國)測定凝血酶/抗凝血酶III復(fù)合體(TAT)。用Spectrolyse/Fibrin(Biopool，Ume，瑞典)來測量PAI-1的活性。用細胞計數(shù)器(Sysmex F-800，TOAMedical Electronics Co，Kobe，日本)來對血細胞和血紅蛋白(Hb)進行測定并將就在進行內(nèi)毒素注射之前獲得的測量結(jié)果(基準值)設(shè)定為100％。
在進行試驗的同一天用γ計數(shù)器(1282 Compugamma，LKB WallacOy，Turku，芬蘭)對血樣和器官(肺、腎、肝和脾)中的125I-活性進行測量并以活性/mg血或器官的形式來對其進行計算。以血液或器官中125I-活性(cpm/mg)和在實驗開始時就在注射內(nèi)毒素前所取的參考血樣的活性(基準值)的百分比來計算混入到血中的血纖蛋白原和器官中所引入的血纖蛋白。
將結(jié)果表示為均值和均值的標準偏差(SEM)。將實驗期間進行的重復(fù)測量的血中血纖蛋白原和血小板計數(shù)用組和時間因素以及交互組*時間通過雙程方差分析進行分析。用Scheffe來完成多重性的調(diào)整。用單程方差分析對在150分鐘實驗時血纖蛋白原和器官中的血纖蛋白以及血小板計數(shù)進行分析，并且在p＜0.05的情況中，然后與偽操作組(沒有內(nèi)毒素)兩兩進行比較，并且賦形劑組僅給予內(nèi)毒素。根據(jù)Bonferroni來進行多個比較的修正。
結(jié)果血纖蛋白原和血纖蛋白用血樣中的125I-活性作為血中血纖蛋白原數(shù)量的量度。
圖1表明在靜脈內(nèi)注射后5小時內(nèi)偽組和賦形劑組中血漿血纖蛋白原下降。在150分鐘后以及在整個實驗期間，與偽操作的大鼠相比，在給予內(nèi)毒素的大鼠的血液中血纖蛋白原顯著下降。
圖2表明在給予內(nèi)毒素后5小時血中的血纖蛋白原。與偽操作組I(42±1.7％)相比，在賦形劑組II(27±1.3％)、組III(氨甲環(huán)酸)和組VII(肝素低劑量)中血纖蛋白原顯著降低。
對于肝(圖3a)和脾(圖3b)而言，當與偽操作的大鼠(組I)相比時，發(fā)現(xiàn)在組II(賦形劑)和組III(氨甲環(huán)酸)中血纖蛋白累積顯著增加。在肺和腎中沒有發(fā)現(xiàn)該類血纖蛋白累積。
血中的血小板相對于血纖蛋白原而言，雖然較不顯著，但是在5h實驗期間血小板有一定的下降(偽組和賦形劑組，圖4)。在偽組I中血小板降至78±2.2％，在給予內(nèi)毒素的賦形劑組II中血小板降至43±2.6％。圖5表示所有組在5小時時血小板相對于基準值的百分比。在內(nèi)毒素給藥后5小時，對于除XV-XX組(地塞米松低劑量和地塞米松高劑量加或不加美拉加群低劑量和美拉加群中劑量)外的所有組而言，與偽操作組I相比血小板都顯著降低。
TAT測量了一些動物的TAT。在組I(偽組)中TAT為4.7±2.5μg/l，在組II(賦形劑組)中增至39.7±3.3μg/l，在組III(TA)中增至55.5±6.6μg/l。在組XV-XX(地塞米松加或不加美拉加群)中，TAT為≤10μg/l，表明凝血酶的產(chǎn)生減少。
PAI-1在5h實驗時間時，偽操作大鼠(組I)中的PAI-1活性為81±15U/ml。三只動物的值低于檢測限(50U/ml)。將這些值作為50U/ml進行處理。對于給予內(nèi)毒素的所有組而言，在LPS注射后2.5小時，PAI-1活性增至350U/ml以上并且在5小時時仍然維持在這一水平。在這種研究中所有的治療都不影響PAI-1的血漿水平。
血漿濃度在5小時的實驗過程中三個美拉加群組(IV、V和VI)的血漿濃度分別為0.78±0.08、2.83±0.45和6.88±0.42μmol/l。當與肝素相結(jié)合時，美拉加群(組IX和X)的血漿濃度為0.72±0.09、1.97±0.16μmol/l。當美拉加群與地塞米松聯(lián)合給藥時(組XVII-XX)，低劑量組的血漿濃度為0.48±0.01和0.46±0.02μmol/l，高劑量組為1.49±0.13和1.28±0.1μmok/l。對于肝素組而言，低劑量組(VII、IX和X)的血漿濃度分別為0.37±0.03、0.26±0.08和0.32±0.02U/ml，對于高劑量肝素組(組VIII)而言為1.0±0.08U/ml。
討論在這項研究中，用PAI-1作為內(nèi)毒素給藥后止血的活化標志。在給予內(nèi)毒素后2.5小時和整個實驗期間的高PAI-1活性表示了一種持續(xù)的活化狀態(tài)。在這項研究中所用的治療選項對于血漿中的PAI-1活性沒有任何顯著影響。
血小板當以本研究所用的劑量單獨使用時，所有這三種物質(zhì)(兩種抗凝劑和地塞米松)都僅部分降低血小板的消耗。相反，美拉加群和地塞米松的組合完全阻止了血小板的消耗(組XVII和XVIII(地塞米松低劑量+美拉加群低劑量和地塞米松低劑量+美拉加群中劑量)為84±2.6％和83±6.3％，組XIX和XX(地塞米松高劑量+美拉加群低劑量和地塞米松高劑量+美拉加群中劑量)為78±3.7％和83±6.8％)。
血纖蛋白原和血纖蛋白常用人125I-標記的血纖蛋白原作為血液中血纖蛋白原和器官中血纖蛋白的示蹤劑。在該實驗最初的90分鐘內(nèi)，在組I(偽組)中喪失了38％的125I-活性，其程度與組II(賦形劑組)相同。這種血中活性的迅速下降可能是由于腎對游離碘化物以及小的血纖蛋白原或血纖蛋白的標記片斷的消除。在內(nèi)毒素給藥后九十分鐘，血纖蛋白原曲線發(fā)生偏離，在接下來的210分鐘內(nèi)，其在偽組(I)中進一步下降20％，在賦形劑組(II)中進一步下降32％。對于低劑量的肝素(組VII)而言，血纖蛋白原的消耗與賦形劑組(I)一樣高。高劑量肝素(組VIII)和不與地塞米松合用(組IV-VI)或與地塞米松合用(組XVII-XX)的美拉加群完全阻止了血纖蛋白原的消耗。
TAT實驗期間TAT的增加表明在給予內(nèi)毒素的組中凝血酶的產(chǎn)生增加。在地塞米松組，凝血酶的產(chǎn)生被抑制至低于8μg/l。
總之，這些實驗表明，在所使用的物質(zhì)中，僅美拉加群和地塞米松的組合可完全保護動物個體以免形成DIC。
權(quán)利要求
1.一種組合產(chǎn)品，其包含(A)美拉加群或其可藥用的衍生物；和(B)地塞米松或其可藥用的衍生物，其中組分(A)和(B)各自與可藥用的助劑、稀釋劑或載體混和配制。
2.如權(quán)利要求1所述的組合產(chǎn)品，其包含一種包括美拉加群或其可藥用的衍生物、地塞米松或其可藥用的衍生物、以及可藥用的助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑。
3.如權(quán)利要求1所述的組合產(chǎn)品，其包括一種包含組分(a)和(b)的多部分試劑盒(a)一種包括美拉加群或其可藥用的衍生物以及可藥用的助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑；和(b)一種包括地塞米松或其可藥用的衍生物以及可藥用的助劑、稀釋劑或載體的藥物制劑，其中組分(a)和(b)各自是以適于與另一個組分聯(lián)合給藥的形式被提供的。
4.如權(quán)利要求3所述的多部分試劑盒，其中所說的組分(a)和(b)適于相繼、分開和/或同時用于特征在于炎癥是其癥狀之一的病況、和/或其中希望或需要抑制凝血酶的病況、和/或其中炎癥參與觸發(fā)凝血的病況的治療。
5.如權(quán)利要求4所述的多部分試劑盒，其中所說的病況是彌散性血管內(nèi)凝血。
6.如權(quán)利要求1至5中任意一項所述的組合產(chǎn)品，其中所說的美拉加群的衍生物是美拉加群的前體藥物。
7.如權(quán)利要求6所述的組合產(chǎn)品，其中所說的前體藥物具有下式R1O2C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH，其中R1表示直鏈或支鏈的C1-6烷基并且OH基團替代了Pab脒基氫中的一個。
8.如權(quán)利要求7所述的組合產(chǎn)品，其中R1表示甲基、乙基、正丙基、異丙基或叔丁基。
9.如權(quán)利要求8所述的組合產(chǎn)品，其中R1表示乙基。
10.一種制造如權(quán)利要求3至9中任意一項所定義的多部分試劑盒的方法，該方法包括將如權(quán)利要求3至9中任意一項所定義的組分(a)與如權(quán)利要求3至9中任意一項所定義的組分(b)相結(jié)合，從而使兩種組分適于彼此聯(lián)合地進行給藥。
11.一種多部分試劑盒，其包括(I)如權(quán)利要求3至9中任意一項所定義的組分(a)和(b)中的一種；以及(II)將組分與兩種組分中的另一種聯(lián)用的使用說明。
12.用于治療特征在于炎癥是其癥狀之一的病況、和/或其中希望或需要抑制凝血酶的病況、和/或其中炎癥參與觸發(fā)凝血的病況的如權(quán)利要求1至9中任意一項所述的組合產(chǎn)品或如權(quán)利要求11所定義的多部分試劑盒。
13.如權(quán)利要求12所述的組合產(chǎn)品，其中所說的病況是彌散性血管內(nèi)凝血。
14.一種治療特征在于炎癥是其癥狀之一的病況、和/或其中希望或需要抑制凝血酶的病況、和/或其中炎癥參與觸發(fā)凝血的病況的方法，其包括給患有或易患有所述病況的患者給予如權(quán)利要求1至9中任意一項所定義的組合產(chǎn)品或如權(quán)利要求11所定義的多部分試劑盒。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所說的病況是彌散性血管內(nèi)凝血。
16.如權(quán)利要求1至9中任意一項所定義的組合產(chǎn)品或如權(quán)利要求11所定義的多部分試劑盒用于制備治療或預(yù)防特征在于炎癥是其癥狀之一的病況、和/或其中希望或需要抑制凝血酶的病況、和/或其中炎癥參與觸發(fā)凝血的病況的藥物的應(yīng)用。
17.美拉加群或其可藥用的衍生物與地塞米松或其可藥用的衍生物一起用于制備治療或預(yù)防特征在于炎癥是其癥狀之一的病況、和/或其中希望或需要抑制凝血酶的病況、和/或其中炎癥參與觸發(fā)凝血的病況的藥物的應(yīng)用。
18.如權(quán)利要求16或17所述的應(yīng)用，其中所說的病況是彌散性血管內(nèi)凝血。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種包含(A)美拉加群或其可藥用的衍生物和(B)地塞米松或其可藥用的衍生物的組合產(chǎn)品，其中組分(A)和(B)各自與可藥用的助劑、稀釋劑或載體混和配制，還提供了該類組合產(chǎn)品在治療包括彌散性血管內(nèi)凝血在內(nèi)的病癥中的應(yīng)用。
文檔編號A61P31/04GK1575179SQ02821249
公開日2005年2月2日 申請日期2002年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月26日
發(fā)明者M·埃爾格 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司