專利名稱：一種龍血竭總黃酮制劑的制備方法及其質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑制備方法及其質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種龍血竭總黃酮制劑的制備工藝及其質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
血竭作為傳統(tǒng)名貴中藥材，始載于《唐本草》，在以往的醫(yī)療實踐中，其來源曾經(jīng)長期依賴進(jìn)口。在我國研制出進(jìn)口代用品龍血竭以后，近年來對龍血竭則進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究。其中很多文獻(xiàn)報道集中在龍血竭的化學(xué)成份研究上。我國的廣西血竭(龍血竭)和云南血竭均含有揮發(fā)油、黃酮、酚類、強(qiáng)心苷、多糖等成份。藥理作用研究表明龍血竭具有消炎止痛作用、對血液流變學(xué)的雙向調(diào)節(jié)作用；對子宮平滑肌收縮的抑制作用等。
臨床應(yīng)用研究表明龍血竭具有促進(jìn)表皮修復(fù)、治療冠心病、消化道出血、大面積褥瘡、結(jié)腸炎等作用。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種龍血竭總黃酮制劑的制備工藝及其質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的。
龍血竭藥材粉碎成粗粉，加6-10倍量乙酸乙酯回流提取2-3次，每次1-2小時，濾過，合并2次濾液，回收乙酸乙酯并濃縮至干；乙酸乙酯提取物粉碎成粗粉，以20-40倍提取物量的0.2-0.5％NaOH溶液攪拌20-40分鐘使溶解，濾過；濾液用5-12％HCl調(diào)pH至1～2，靜置8-24小時，傾出上清液，棄去；沉淀離心濾過，收集沉淀物，用去離子水洗至pH試紙檢測為中性，60℃以下真空干燥，粉碎，即得龍血竭總黃酮。
用本發(fā)明龍血竭總黃酮制劑的制備方法龍血竭總黃酮 100-400重量份淀粉 10-40重量份取淀粉加沸水?dāng)嚢柚瞥?0-30％淀粉漿，將淀粉漿加入龍血竭總黃酮細(xì)粉中，混勻，制成軟材，置搖擺式制粒機(jī)中制粒；將制好的濕顆粒于80℃烘干，制成臨床可接受的劑型，如片劑、顆粒劑、膠囊劑等。上述淀粉可以用糊精或其他藥用輔料代替。
本發(fā)明膠囊劑質(zhì)量控制方法為鑒別取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取7，4`-二羥基黃酮對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以13-16∶1氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；取龍血-素B對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，取供試品溶液與上述對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以1-3∶0.5-1.5的石油醚(沸程為60-90℃)-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
含量測定總黃酮龍血素B標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃壓干燥至恒重的龍血素B對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻；精密量取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml與5.0ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在275nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；7，4`-二羥基黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻；精密量取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.5ml與3.5ml，分別置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在330nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定法 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取15mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在275nm和330nm的波長處分別測定吸收度，分別從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中龍血素B和7，4`-二羥基黃酮的重量，計算，即得，本品每粒含總黃酮以龍血素B(C18H20O5)和7，4`-二羥基黃酮(C15H10O3)之和計，不得少于150.0mg。
7，4`-二羥基黃酮照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；22-25∶74-77乙腈-1％冰醋酸溶液為流動相檢測波長為330nm，理論板數(shù)按7，4`-二羥基黃酮峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取110mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，精密量取上述溶液2ml，點于硅膠G薄層板上使成條狀，再精密吸取對照品溶10μl，點于同一硅膠G薄層板上，以18-22∶0.5-1.5氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視定位，刮取7，4`-二羥基黃酮斑點，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理2-8分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得，本品每粒含7，4`-二羥基黃酮(C15H10O3)不得少于1.50mg。
實驗例1龍血竭總黃酮膠囊對局灶性腦缺血大鼠的行為及腦組織損傷的影響實驗動物隨機(jī)分為7組，即①模型組(溶劑對照，n＝13)每日灌服0.25％CMC，0.5ml/100g體重，連續(xù)4大。末次給藥15min后按方法3.2復(fù)制局灶性腦缺血模型。
②假手術(shù)組(n＝6)每日灌服0.25％CMC，0.5ml/100g，連續(xù)4天。末次給藥15min后手術(shù)同模型組，但不插線。
③尼莫地平組(n＝10)每日灌服尼莫地平5mg/kg體重，0.5ml/100g，連續(xù)4天。末次給藥15min后手不同模型組。
④腦得生組(n＝10)每日灌服腦得生2.7g/kg體重，0.5ml/100g，連續(xù)4天。末次給藥15min后手術(shù)同模型組。
⑤龍血竭總黃酮大劑量組(n＝15)每日灌服龍血竭總黃酮100mg/kg體重，0.5ml/100g，連續(xù)4天。末次給藥15min后手術(shù)同模型組。
⑥龍血竭總黃酮中劑量組(n＝10)每日灌服龍血竭總黃酮50mg/kg體重，0.5ml/100g，連續(xù)4天。木次給藥15min后手術(shù)同模型組。
⑦龍血竭總黃酮小劑量組(n＝8)每日灌服龍血竭總黃酮25mg/kg體重，0.5ml/100g，連續(xù)4天。末次給藥15min后手術(shù)同模型組。
大鼠局灶性腦缺血模型參照Longa方法，阻塞大腦中動脈(MCA)造成大鼠局灶性腦缺血模型。取SD大鼠，以10％的水合氯醛麻醉(350mg/kg，ip)，仰位固定，沿頸部中線切開皮膚及皮下組織，分離右側(cè)頸總動脈及其頸內(nèi)和頸外分支。結(jié)扎頸總和頸外動脈，動脈夾夾閉頸內(nèi)動脈，剪開頸總動脈遠(yuǎn)心端，將直徑為0.26mm的尼龍線插入頸總動脈，穿過頸內(nèi)和頸脈動脈分叉處進(jìn)入頸內(nèi)動脈。
松開動脈夾，繼續(xù)將線插入到頸內(nèi)動脈的顱內(nèi)段。當(dāng)感到明顯阻力時，此時插入線的總長度約為2.0cm，即可阻斷MCA。結(jié)扎插線以防脫落，縫合皮膚。
神經(jīng)功能行為評分和腦梗死范圍測定腦缺血24h后，對大鼠的神經(jīng)功能行為進(jìn)行評分。評分參照Bederson和Lin的方法進(jìn)行。具體方法如下(總分為11分)①提起鼠尾離開地面，觀察前肢情況。正常大鼠兩前肢對稱地伸向地面。出現(xiàn)腕曲、肘曲、肩內(nèi)旋者分別評為1～3分，同時出現(xiàn)肩內(nèi)旋伴腕曲或肘曲者評為4分。②將大鼠置平滑地板上，分別推左(或右)肩向?qū)?cè)移動，檢查抵抗推動的阻力。正常大鼠雙側(cè)阻力明顯對稱。右肩向左側(cè)移動時，發(fā)現(xiàn)阻力下降者，根據(jù)下降的輕、中、重程度，分別評為1～3分。③將大鼠兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察兩前肢的肌張力。正常大鼠兩前肢肌張力明顯對稱。發(fā)現(xiàn)左前肢肌張力下降者，根據(jù)下降的輕、中、重程度，分別評為1～3分。③將大鼠置地板上，觀察其行走。出現(xiàn)明顯轉(zhuǎn)圈者，評為1分，否則0分。分?jǐn)?shù)越高，說明動物的行為障礙越嚴(yán)重。評分采用單盲法。
腦梗死范圍測定采用TIC染色法。腦缺血24h后，大鼠斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，將前腦冠狀切成5片。切片位置為大腦前極和視交叉連線中點、視交叉部位、漏斗柄部位和漏斗柄與后極之間處。將腦片浸入5mlTTC染色液中(包括4％TTC 1.5ml，1mol/LK2HPO40.1ml和蒸餾水3.4ml)，37℃避光染色30min。然后照相，計算機(jī)分析，獲得梗死區(qū)域面積占前腦半球總面積的百分比，來表示腦梗死范圍。
統(tǒng)計學(xué)處理，所有數(shù)據(jù)皆以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組間比較用t檢驗。
結(jié)果1、龍血竭總黃酮對局灶性腦缺血后神經(jīng)功能行為評分的影響大腦中動脈阻斷24h引起局灶性腦缺血-后，模型組大鼠左前肢肌張力下降，表現(xiàn)左前肢腕曲、胴曲、肩內(nèi)旋和握持力下降，神經(jīng)功能均評分為8.6分。假手術(shù)組部分動物左前肢肌張力也梢有下降，神經(jīng)功能平均評分為2.2分，明顯低于模型組(P＜0.01)。龍血竭總黃酮100、50、25mg/kg體重、尼莫地平5mg/kg體重或腦得生2.7g/kg體重給藥后神經(jīng)功能行為評分分別下降17.2％、12.9％(P＜0.01)、11.5％(P＜0.05)、9.5％和6.0％。
表1.龍血竭總黃酮對局灶性腦缺血后神經(jīng)功能行為評分的影響分組 劑量動物數(shù) 神經(jīng)功能行為評分 藥物組下降百(mg/kg (只)(X±SD) 分率(％))模型組- 13 8.6±1.2 -假手術(shù)組 - 6 2.2±2.4**-尼莫地平組5 10 7.8±1.5 9.5腦得生組 270010 8.1±2.0 6.0龍血竭大劑量組100 15 7.1±1.7 17.2龍血竭中劑量組50 10 7.5±0.5**12.9龍血竭小劑量組25 8 7.6±0.9*11.5注經(jīng)t檢驗，與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
2、龍血竭總黃酮對局灶性腦缺血后腦梗死范圍的影響大腦中動脈阻斷24h后，可見明顯的腦組織缺血梗死區(qū)(未染色部位)。模型組大鼠腦梗死范圍占前腦半球面積的28.0％。龍血竭總黃酮100、50、25mg/kg體重、尼莫地平5mg/kg體重或腦得生2.7g/kg體重給藥后腦梗死范圍分別減少21.5％、48.9％(P＜0.01)、40.3％(P＜0.01)、18.1％(P＜0.05)和21.7％。
表2.龍血竭總黃酮對局灶性腦缺血后腦梗死范圍的影響劑量 動物數(shù)腦梗死范圍(％)分組 藥物組下降百分率(％)(mg/kg) (只) (X±SD)模型組-13 28.0±6.0 -尼莫地平組510 20.1±8.3*28.2腦得生組 2700 10 21.6±10.4 22.7龍血竭大劑量組100 15 21.9±10.6 21.5龍血竭中劑量組50 10 14.3±11.3**48.9龍血竭小劑量組25 816.7±8.1*40.3注經(jīng)t檢驗，與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
實驗結(jié)果表明，腦缺血24h后，模型組大鼠的左前肢肌張力明顯下降，神經(jīng)功能行為評分為8.6分腦組織染色出現(xiàn)明顯的缺血梗死區(qū)，占前腦半球面積的28.0％。龍血竭總黃酮50、25mg/kg體重，連續(xù)灌胃4天，可顯著降低大鼠的神經(jīng)功能行為評分(P＜0.01或P＜0.05)，并明顯減少了腦梗死范圍(P＜0.01)，療效強(qiáng)于陽性對照藥尼莫地平5mg/kg體重及腦得生2.7g/kg體重。
實驗例2龍血竭總黃酮對大鼠腦血流量的影響實驗分組與劑量設(shè)計實驗動物隨機(jī)分為5組，①偽模型動物組實驗動物20只。儀實施假手術(shù)，不測腦血流量。
②正常動物組兼模型動物組實驗動物25只。每日灌服0.25％CM((溶劑對照)1ml.100g體重，連續(xù)10天。
③陽性藥舒血寧組實驗動物15只。每日灌服舒血寧100mg/kg體重，連續(xù)10天。
④龍血竭大劑量組實驗動物25只。每日灌服龍血竭總黃酮200mg/kg體重，連續(xù)10天。
⑤龍血竭小劑量組實驗動物25只。每日灌服龍血竭總黃酮100mS/kg體重，連續(xù)10天。
兩個實驗共用一批動物，前期給藥方式相同。正常對照組動物測完腦血流量后，實施雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎，在腦水腫實驗中為模型動物組。
實驗步驟，末次給藥后1小時，以水合氯醛(0.35g/kg，中)麻醉，分離大鼠兩側(cè)頸總動脈，分別埋線后，再分離左側(cè)頸外動脈，埋線后，將直徑為1mm電磁流量計探頭鉤在左側(cè)頸總動脈上，稍后片刻，待頸總動脈血流穩(wěn)定后，記錄頸總動脈血流量數(shù)值。結(jié)扎左側(cè)頸外動脈，此時電磁流量計顯示的是頸內(nèi)動脈血流量數(shù)值，可在一定程度上反映腦血流量。記錄后，摘下電磁流量計探頭，迅速結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈。偽模型組動物只埋線不結(jié)扎?？p合切口，單籠放置觀察，室溫保持在18±1℃。記錄48小時內(nèi)實驗動物死亡情況。48小時內(nèi)若遇動物剛剛死亡，立即斷頭取腦，稱重。其余動物48小時時，取腦稱濕重。110℃烤10小時脫水后，稱干重。計算腦內(nèi)含水量，并進(jìn)行組間統(tǒng)計學(xué)比較。實驗結(jié)果見表3、表4。
表3.龍血竭總黃酮對大鼠腦血流量的影響劑量 實驗動物數(shù)頸內(nèi)動脈血流量分組(mg/kg) (只) (ml/mim.)正常對照組 -25 3.8±1.1舒血寧組100 25 4.9±1.7*龍血竭大劑量組 200 25 5.0±1.9*龍血竭小劑量組 100 25 4.5±1.2*注經(jīng)t檢驗，與正常對照組相比，*P＜0.05。
表4、龍血竭總黃酮對結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈造所致大鼠缺血性腦水腫的影響劑量 48小時內(nèi)死亡數(shù)(只)48小時內(nèi)動物腦濕重腦干重 腦含水量組別(mg/kg)實驗動物總數(shù)(只) (死亡率％) (g) (g) (％)偽模型組- 0/200 1.238±0.061 0.278±0.015 77.5±0342模型組 - 13/25 52 1.374±0.031## 0.282±0.013 79.4±0.980##舒血寧組100 10/25 40 1313±0.054**0.279±0.014 78.7±0.642*龍血竭大劑量組 200 10/25 40 1325±0.075*0.284±0.013 78.5±0.907*龍血竭小劑量組 100 12/25 48 1.358±0.051 0.287±0.011 78.9±0.624注經(jīng)t檢驗，與假手術(shù)組相比，##P＜0.01；與模型組相比，**P＜0.01、*＜0.05實驗表明，龍血竭總黃酮200mg/kg體重和100mg/kg體重，連續(xù)灌胃10天，可明顯增加實驗動物的腦血流量，經(jīng)t檢驗，與正常對照絹動物相比，P＜0.05，藥效與陽性對照藥舒血寧100mg/kg相當(dāng)；龍血竭總黃酮200mg/kg體重，連續(xù)灌胃10天，可明顯降低結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈造成急性腦缺血大鼠的腦含水量，經(jīng)t檢驗，與模型動物組相比，P＜0.05，療效與舒血寧100mg/kg相當(dāng)，并有降低實驗動物48小時內(nèi)死亡率的趨勢。
實施例1龍血竭藥材粉碎成粗粉，加8倍量乙酸乙酯回流提取2次，每次1小時，濾過，合并2次濾液，回收乙酸乙酯并濃縮至干；乙酸乙酯提取物粉碎成粗粉，以30倍提取物量的0.35％NaOH溶液攪拌30分鐘使溶解，濾過；濾液用10％HCl調(diào)pH至1～2，靜置12小時，傾出上清液，棄去；沉淀離心濾過，收集沉淀物，用去離子水洗至pH試紙檢測為中性，60℃以下真空干燥，粉碎，過80目篩，即得龍血竭總黃酮；取龍血竭總黃酮300g，淀粉30g；取淀粉加沸水?dāng)嚢柚瞥?0％淀粉漿，將淀粉漿加入龍血竭總黃酮細(xì)粉中，混勻，制成軟材，置搖擺式制粒機(jī)中制粒；將制好的濕顆粒于80℃烘干，整粒，灌裝0號膠囊，制成硬膠囊1000粒，即得，一次2粒，一日3次，每粒裝0.33g。實施例2本發(fā)明膠囊劑質(zhì)量控制方法鑒別取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取7，4`-二羥基黃酮對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶1氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；取龍血-素B對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液與上述對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以2∶1，60-90℃石油醚-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，254nm置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
含量測定總黃酮龍血素B標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃壓干燥至恒重的龍血素B對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻；精密量取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml與5.0ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在275nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；7，4`-二羥基黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻；精密量取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.5ml與3.5ml，分別置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在330nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定法，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取15mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在275nm和330nm的波長處分別測定吸收度，分別從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中龍血素B和7，4`-二羥基黃酮的重量，計算，即得，本品每粒含總黃酮以龍血素B(C18H20O5)和7，4`-二羥基黃酮(C15H10O3)之和計，不得少于150.0mg；7，4`-二羥基黃酮照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；24∶76乙腈-1％冰醋酸溶液為流動相檢測波長為330nm，理論板數(shù)按7，4`-二羥基黃酮峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得，供試品溶液的制備，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取110mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，精密量取上述溶液2ml，點于硅膠G薄層板上使成條狀，再精密吸取對照品溶10μl，點于同一硅膠G薄層板上，以20∶1氯仿-甲醇為展開劑，展開16cm，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視定位，刮取7，4`-二羥基黃酮斑點，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得，本品每粒含7，4`-二羥基黃酮(C15H10O3)不得少于1.50mg。實施例3龍血竭總黃酮 200g糊精 20g取糊精加沸水?dāng)嚢柚瞥?5％糊精漿，將糊精漿加入龍血竭總黃酮細(xì)粉中，混勻，制成軟材，置搖擺式制粒機(jī)中制粒；將制好的濕顆粒于80℃烘干，制成顆粒劑。
權(quán)利要求
1.一種龍血竭總黃酮制劑的制備方法，其特征在于該方法為龍血竭總黃酮 100-400重量份淀粉 10-40重量份取淀粉加沸水?dāng)嚢柚瞥?0-30％淀粉漿，將淀粉漿加入龍血竭總黃酮細(xì)粉中，混勻，制成軟材，置搖擺式制粒機(jī)中制粒；將制好的濕顆粒于80℃烘干，制成臨床可接受的劑型。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于該方法為取龍血竭總黃酮 300重量份，淀粉 30重量份；取淀粉加沸水?dāng)嚢柚瞥?0％淀粉漿，將淀粉漿加入龍血竭總黃酮細(xì)粉中，混勻，制成軟材，置搖擺式制粒機(jī)中制粒；將制好的濕顆粒于80℃烘干，整粒，制成膠囊。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于該方法為龍血竭總黃酮 200重量份淀粉 20重量份取淀粉加沸水?dāng)嚢柚瞥?5％淀粉漿，將淀粉漿加入龍血竭總黃酮細(xì)粉中，混勻，制成軟材，置搖擺式制粒機(jī)中制粒；將制好的濕顆粒于80℃烘干，制成顆粒劑。
4.如權(quán)利要求1、2、或3所述的制備方法，其特征在于該方法中淀粉可以用糊精或其他藥用輔料代替。
5.如權(quán)利要求1、2、或3所述的制備方法，其特征在于該方法中龍血竭總黃酮是由如下方法制備的龍血竭藥材粉碎成粗粉，加6-10倍量乙酸乙酯回流提取2-3次，每次1-2小時，濾過，合并2次濾液，回收乙酸乙酯并濃縮至干；乙酸乙酯提取物粉碎成粗粉，以20--40倍提取物量的0.2-0.5％NaOH溶液攪拌20-40分鐘使溶解，濾過；濾液用5-12％HCl調(diào)pH至1～2，靜置8-24小時，傾出上清液，棄去；沉淀離心濾過，收集沉淀物，用去離子水洗至pH試紙檢測為中性，60℃以下真空干燥，粉碎，即得龍血竭總黃酮。
6.如權(quán)利要求1、2、或3所述的制備方法，其特征在于該方法中龍血竭總黃酮是由如下方法制備的龍血竭藥材粉碎成粗粉，加8倍量乙酸乙酯回流提取2次，每次1小時，濾過，合并2次濾液，回收乙酸乙酯并濃縮至干；乙酸乙酯提取物粉碎成粗粉，以30倍提取物量的0.35％NaOH溶液攪拌30分鐘使溶解，濾過；濾液用10％HCl調(diào)pH至1～2，靜置12小時，傾出上清液，棄去；沉淀離心濾過，收集沉淀物，用去離子水洗至pH試紙檢測為中性，60℃以下真空干燥，粉碎，過80目篩，即得龍血竭總黃酮。
7.龍血竭總黃酮膠囊劑鑒別方法，其特征在于該方法為取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取7，4`-二羥基黃酮對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以13-16∶1氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；取龍血-素B對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；照薄層色譜法試驗，取供試品溶液與上述對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以1-3∶0.5-1.5的沸程為60-90℃石油醚-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于該方法為取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取7，4`-二羥基黃酮對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶1氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；取龍血-素B對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與上述對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以2∶1的沸程為60-90℃石油醚-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，254nm置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
9.龍血竭總黃酮膠囊劑含量測定方法，其特征在于該方法為總黃酮龍血素B標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃壓干燥至恒重的龍血素B對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻；精密量取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml與5.0ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在275nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；7，4`-二羥基黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，精密量取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.5ml與3.5ml，分別置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在330nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定法，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取15mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在275nm和330nm的波長處分別測定吸收度，分別從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中龍血素B和7，4`-二羥基黃酮的重量，計算，即得，本品每粒含總黃酮以龍血素B和7，4`-二羥基黃酮之和計，不得少于150.0mg；7，4`-二羥基黃酮照高效液相色譜法測定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；22-25∶74-77乙腈-1％冰醋酸溶液為流動相檢測波長為330nm，理論板數(shù)按7，4`-二羥基黃酮峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取110mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，照薄層色譜法試驗，精密量取上述溶液2ml，點于硅膠G薄層板上使成條狀，再精密吸取對照品溶10μl，點于同一硅膠G薄層板上，以18-22∶0.5-1.5氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視定位，刮取7，4`-二羥基黃酮斑點，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理2-8分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得，本品每粒含7，4`-二羥基黃酮不得少于1.50mg。
10.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于該方法為總黃酮龍血素B標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃壓干燥至恒重的龍血素B對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，精密量取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml與5.0ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在275nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；7，4`-二羥基黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻；精密量取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.5ml與3.5ml，分別置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在330nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定法，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取15mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在275nm和330nm的波長處分別測定吸收度，分別從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中龍血素B和7，4`-二羥基黃酮的重量，計算，即得，本品每粒含總黃酮以龍血素B和7，4`-二羥基黃酮之和計，不得少于150.0mg；7，4`-二羥基黃酮照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；24∶76乙腈-1％冰醋酸溶液為流動相檢測波長為330nm，理論板數(shù)按7，4`-二羥基黃酮峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得，供試品溶液的制備，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取110mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液；照薄層色譜法試驗，精密量取上述溶液2ml，點于硅膠G薄層板上使成條狀，再精密吸取對照品溶10μl，點于同一硅膠G薄層板上，以20∶1氯仿-甲醇為展開劑，展開16cm，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視定位，刮取7，4`-二羥基黃酮斑點，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得，本品每粒含7，4`-二羥基黃酮不得少于1.50mg。
11.龍血竭總黃酮膠囊劑質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法為取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取7，4`-二羥基黃酮對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以13-16∶1氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；取龍血-素B對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；照薄層色譜法試驗，取供試品溶液與上述對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以1-3∶0.5-1.5的沸程為60-90℃石油醚-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；含量測定總黃酮龍血素B標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃壓干燥至恒重的龍血素B對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻；精密量取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml與5.0ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在275nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；7，4`-二羥基黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻；精密量取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.5ml與3.5ml，？分別置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在330nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定法，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取15mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在275nm和330nm的波長處分別測定吸收度，分別從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中龍血素B和7，4`-二羥基黃酮的重量，計算，即得，本品每粒含總黃酮以龍血素B和7，4`-二羥基黃酮之和計，不得少于150.0mg。7，4`-二羥基黃酮照高效液相色譜法測定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；22-25∶74-77乙腈-1％冰醋酸溶液為流動相檢測波長為330nm，理論板數(shù)按7，4`-二羥基黃酮峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取110mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，照薄層色譜法試驗，精密量取上述溶液2ml，點于硅膠G薄層板上使成條狀，再精密吸取對照品溶10μl，點于同一硅膠G薄層板上，以18-22∶0.5-1.5氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視定位，刮取7，4`-二羥基黃酮斑點，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理2-8分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得，本品每粒含7，4`-二羥基黃酮不得少于1.50mg。
12.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于該方法為取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取7，4`-二羥基黃酮對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同-硅膠G薄層板上，以15∶1氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；取龍血-素B對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；取本品內(nèi)容物約5mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與上述對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以2∶1的沸程為60-90℃石油醚-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，254nm置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；總黃酮龍血素B標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃壓干燥至恒重的龍血素B對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，精密量取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml與5.0ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在275nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；7，4`-二羥基黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻；精密量取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.5ml與3.5ml，分別置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在330nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定法，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取15mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；照分光光度法，在275nm和330nm的波長處分別測定吸收度，分別從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中龍血素B和7，4`-二羥基黃酮的重量，計算，即得，本品每粒含總黃酮以龍血素B和7，4`-二羥基黃酮之和計，不得少于150.0mg；7，4`-二羥基黃酮照高效液相色譜法測定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；24∶76乙腈-1％冰醋酸溶液為流動相檢測波長為330nm，理論板數(shù)按7，4`-二羥基黃酮峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的7，4`-二羥基黃酮對照品適量，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得，供試品溶液的制備，取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取110mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液；照薄層色譜法試驗，精密量取上述溶液2ml，點于硅膠G薄層板上使成條狀，再精密吸取對照品溶10μl，點于同一硅膠G薄層板上，以20∶1氯仿-甲醇為展開劑，展開16cm，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視定位，刮取7，4`-二羥基黃酮斑點，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得，本品每粒含7，4`-二羥基黃酮不得少于1.50mg。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種龍血竭總黃酮制劑的制備工藝及其質(zhì)量控制方法。本發(fā)明龍血竭總黃酮制劑的制備方法為龍血竭總黃酮100－400重量份;淀粉10—40重量份;取淀粉加沸水?dāng)嚢柚瞥傻矸蹪{，加入龍血竭總黃酮細(xì)粉中，制成臨床可接受的劑型，如片劑、顆粒劑、膠囊劑等。本發(fā)明膠囊劑質(zhì)量控制方法包括鑒別方法和含量測定方法。本發(fā)明龍血竭總黃酮制劑療效確切，質(zhì)量可控。
文檔編號A61K31/352GK1481788SQ0212968
公開日2004年3月17日 申請日期2002年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月12日
發(fā)明者屠鵬飛, 蕭偉, 胡迎慶, 戴翔翎, 夏月, 沈靜, 畢宇安, 章晨峰, 徐玉玲 申請人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司