專利名稱：預(yù)后指示劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)移(metastasis)預(yù)后指示劑，針對轉(zhuǎn)移癌的一種疫苗，一種治療轉(zhuǎn)移的方法，和一種用于診斷危及生命的轉(zhuǎn)移的試劑盒。
背景技術(shù)：
大多數(shù)癌癥被認(rèn)為是由于特定基因的改變所致，這種改變的原因是以某種方式使其基因產(chǎn)物更加有效的突變，或使作用增強的正常基因的過量表達(dá)。這些癌基因基本已經(jīng)通過下列方法鑒定將人類癌癥的DNA的基因長度片段導(dǎo)入小鼠成纖維細(xì)胞系中，培養(yǎng)，篩選那些在液體或半固體培養(yǎng)基中以不受控制的方式生長的細(xì)胞系。癌基因本身利用標(biāo)準(zhǔn)重組技術(shù)通過從小鼠DNA中克隆人類DNA片段分離。此外，突變也能在抑制癌基因活性的基因(例如P53或Rb)或抑制其產(chǎn)物水平的基因(例如NM-23)中發(fā)生。它們被稱為腫瘤抑制基因。對于常見的癌癥，一般認(rèn)為需要在癌基因或腫瘤抑制基因中有5-7個這樣的改變才能導(dǎo)致充分發(fā)展的癌癥。
主要的癌癥形式，包括乳癌、肺癌和結(jié)腸癌，不能有效地治愈，因為，雖然當(dāng)前的治療對于原發(fā)腫瘤可能有效，但對擴散或轉(zhuǎn)移的細(xì)胞基本無效，最終使患者死亡。盡管進行了大量的癌癥研究工作，但對于轉(zhuǎn)移的最重要的危及生命的過程，在分子水平上知之甚少。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)癌基因和抑制基因，是根據(jù)它們促進小鼠成纖維細(xì)胞系不受控制地生長的能力而發(fā)現(xiàn)的。該領(lǐng)域的主要問題是，測定細(xì)胞生長不能確定轉(zhuǎn)移過程。實際上，雖然不受控制的生長是癌癥發(fā)展初期事件的一個重要方面，但是遠(yuǎn)距轉(zhuǎn)移的生長速率可能顯著降低。因此，除最后階段外，轉(zhuǎn)移過程基本不依賴于與細(xì)胞生長有關(guān)的過程。因此，癌基因和腫瘤抑制基因不可能過多地參與轉(zhuǎn)移過程，也不可能是控制和消除轉(zhuǎn)移性疾病的有用的診斷或治療靶標(biāo)。
與癌癥形成轉(zhuǎn)移有關(guān)的一種蛋白質(zhì)是骨橋蛋白(Oates，A.J.等人，1997，Invasion and Metastasis 17，1-15)。骨橋蛋白(OPN)是一種分泌的、整聯(lián)蛋白結(jié)合的、鈣結(jié)合的、帶負(fù)電的糖基化磷蛋白，其分子量約為44-60Kda，與正常的和病理過程均有關(guān)。OPN在所有體液和礦化組織的細(xì)胞外基質(zhì)中均有發(fā)現(xiàn)，是骨中較豐富的非膠原蛋白成分之一。除了活化的T淋巴細(xì)胞外，它一般還存在于骨、腎臟、血管、內(nèi)耳、膽囊上皮細(xì)胞、胃腸道、支氣管、乳腺、尿道和生殖道、唾液管和汗腺管、連續(xù)更新的組織中。OPN已經(jīng)顯示在惡性腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)移性疾病患者的血液中高水平表達(dá)，因而推斷OPN在惡性腫瘤中起作用(Singer D.R.等人，與腫瘤轉(zhuǎn)化有關(guān)的分泌磷蛋白。Cancer Res 485770-5774，1988)。也有大量研究表明，由于轉(zhuǎn)移，乳癌的血液OPN水平顯著升高，較高的OPN水平對應(yīng)于降低的存活率(Singhal，H，Clinic Cancer Res 3605-611，1997；Bellahcene，A和Castranovo V，Am.J.Pathol 14695-100，1995)。
人OPN前體的序列已經(jīng)闡明，翻譯如下(SEQ ID No.1)MRIAVI CFCLLGITCA IPVKQADSGSSEEKQLYNKY PDAVATWLNP DPSQKQNLLA PQNAVSSEETNDFKQETLPS KSNESHDHMD DMDDEDDDDH VDSQDSIDSNDSDDVDDTDD SHQSDESHHS DESDELVTDF PTDLPATEVFTPVVPTVDTY DGRGDSVVYG LRSKSKKFRR PDIQYPDATDEDITSHMESE ELNGAYKAI PVAQDLNAPSD WDSRGKDSYETSQLDDQSAE THSHKQSRLY KRKANDESNE HSDVIDSQELSKVSREFHSH EFHSHEDMLV VDPKSKEEDK HLKFRISHELDSASSEVN(Crosby，A.H.等人，人骨橋蛋白基因的基因組構(gòu)成；排除了基因座在II型牙本質(zhì)發(fā)生不全發(fā)病機理中的病因作用。Genomics27(1)，155-160，1995)。
骨橋蛋白在以前也被視為胃癌(Ue，T等人，Int J Cancer 79；127-132，1998)和乳癌(Tuck，AB等人，Int J Cancer 79；502-508，1998)的一種預(yù)后指示劑，但是預(yù)后的差異遠(yuǎn)非絕對的。
盡管主要的工作與癌細(xì)胞中存在OPN有關(guān)，但是還不能闡明OPN(通常)在癌癥或(尤其在)轉(zhuǎn)移中的作用。本發(fā)明的一個目的是為已知在癌細(xì)胞中存在OPN的患者獲得實際利益。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的第一個方面，提供一種轉(zhuǎn)移預(yù)后指示劑，其含有一種抗骨橋蛋白抗體。
申請人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在不表達(dá)骨橋蛋白的乳癌個體中沒有危及生命的轉(zhuǎn)移擴散。
因此，OPN的表達(dá)可能是轉(zhuǎn)移過程的起因。因此，利用本發(fā)明，通過阻止OPN表達(dá)緩解或治愈危及生命的癌癥的方法是可能的。
在本發(fā)明中有用的抗體可以在組織學(xué)上用于骨橋蛋白基因產(chǎn)物或其保守變體或肽片段的原位檢測。原位檢測可如下進行從患者采集組織學(xué)標(biāo)本，然后加至本發(fā)明的抗骨橋蛋白抗體上，隨后用標(biāo)記的第二抗體顯示。利用這種方法，不僅能確定骨橋蛋白基因產(chǎn)物或保守變體或肽片段的存在，而且能確定它在所檢測的組織中的分布。應(yīng)用本發(fā)明，普通技術(shù)人員可以理解，為了完成這種原位檢測，能改進其它多種組織學(xué)方法，如染色方法。優(yōu)選地，只檢測癌上皮細(xì)胞；忽略巨噬細(xì)胞、宿主基質(zhì)等引起的染色。
例如，可以用如上所述的抗體或抗體片段檢測骨橋蛋白或其保守變體或肽片段的存在，或者可以用標(biāo)記的cDNA反義探針檢測mRNA。例如，可使用熒光標(biāo)記抗體，通過與光學(xué)顯微鏡、流式細(xì)胞或熒光檢測偶聯(lián)的免疫熒光技術(shù)完成。
對骨橋蛋白基因產(chǎn)物或其保守變體或肽片段的測定一般包括在能夠鑒定骨橋蛋白基因產(chǎn)物或其保守變體或肽片段的可檢測標(biāo)記抗體存在下溫育樣品，如組織提取物、新收集的細(xì)胞或在細(xì)胞培養(yǎng)物中溫育的細(xì)胞裂解物，并通過本領(lǐng)域眾所周知的多種技術(shù)之一檢測結(jié)合的抗體。
生物樣品可以接觸或固定于一種固體載體上，如硝酸纖維素，或能夠固定細(xì)胞、細(xì)胞顆粒或可溶性蛋白質(zhì)的其他固體載體。洗滌載體，然后用可檢測的標(biāo)記骨橋蛋白特異性抗體或抗體片段處理。用一種緩沖液第二次洗滌固體載體，除去未結(jié)合的抗體。然后可以用常規(guī)方法檢測結(jié)合于固體載體上的標(biāo)記物的量。
根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供一種含有抗原肽的疫苗，它可產(chǎn)生一種抗骨橋蛋白抗體。
肽可來源于骨橋蛋白的至少10個連續(xù)氨基酸。優(yōu)選地，該肽來源于骨橋蛋白的14-20個連續(xù)氨基酸。更優(yōu)選地，該肽來源于骨橋蛋白的氨基端氨基酸，因為氨基端暴露于細(xì)胞外。更優(yōu)選地，該肽來源于上述人OPN前體序列的28-48區(qū)(SEQ ID No.2)的氨基酸EEKQLYNKY PDAVATWLNP DP。
更優(yōu)選地，該肽來源于上述人OPN前體序列的32-45區(qū)(SEQ IDNo.3)的氨基酸QLYNKYPDAVATWL。
該肽可能包含與SEQ ID No.2至少70％同源的氨基酸序列，優(yōu)選地，該肽與SEQ ID No.2有至少80％的同源性，更優(yōu)選地，該肽與SEQ ID No.2有至少90％的同源性。再更優(yōu)選地，該肽與SEQ IDNo.3有至少70％的序列同源性，甚至更優(yōu)選地，該肽與SEQ IDNo.3有至少80％的序列同源性，最優(yōu)選地，該肽與SEQ ID No.3有至少90％的序列同源性。
優(yōu)選地，該疫苗還含有佐劑目前，明礬(氫氧化鋁和/或磷酸鋁)是獲準(zhǔn)普遍用于人類疫苗的唯一佐劑。其它佐劑，特別是弗氏完全佐劑，已經(jīng)用于動物，并且十分有效，但是到目前為止，毒副作用仍然妨礙了它在人類中的應(yīng)用。鋁鹽佐劑一般以兩種方式與蛋白質(zhì)佐劑一起使用(a)作為明礬沉淀的疫苗和(b)作為明礬吸附的疫苗(Harlow，E&D.Lane，1988，《抗體實驗室手冊》，冷泉港實驗室；Nicklas，W.，1992，鋁鹽。Research in Immunology 143489-493。市售明礬一般為Al(OH)3(丹麥/Accurate Chemical and Scientic Co，Westbury，New York的鋁水凝膠-superfos)。
在本發(fā)明第二方面的一個實施方案中，抗原肽可與一種載體蛋白質(zhì)偶聯(lián)。
根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供一種治療轉(zhuǎn)移的方法，包括施用一種調(diào)節(jié)骨橋蛋白表達(dá)的化合物。
在一個實施方案中，可阻斷骨橋蛋白的表達(dá)。
該化合物可以是一種抗骨橋蛋白抗體，它可提供阻斷骨橋蛋白mRNAs翻譯的反義分子，或者可提供與骨橋蛋白基因5’區(qū)互補并阻斷轉(zhuǎn)錄的核酸分子。
該化合物也可以是調(diào)節(jié)表達(dá)的任何一種小分子。該化合物可通過阻斷骨橋蛋白的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或通過與T細(xì)胞因子(TCF)4相互作用阻止其誘導(dǎo)，阻斷骨橋蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)，或者該小分子可與DNA上的CAAAG序列相互作用，阻止它與TCF4螯合，從而阻止骨橋蛋白的誘導(dǎo)(El Tanani等人，Oncogene 20，1793-97(2001)；El Tanani等人，Cancer Research 61，5619-5629(2001))。該化合物也可阻止骨橋蛋白與整聯(lián)蛋白ανβ1、整聯(lián)蛋白ανβ3、ανβ5或α4β1的相互作用(Liaw L等人，J Clin Invest 95，713-724(1991)；Miyaichi等人，J.Biol Chem 266，20369-20374(1991)；Bayless等人，J CellScience 111，1165-1174(1998))。優(yōu)選地，該小分子的分子量小于2kDa。
根據(jù)本發(fā)明的第四方面，提供一種診斷轉(zhuǎn)移的試劑盒，其包含如上所述的一種預(yù)后指示劑和一種或多種目視指示劑。
根據(jù)本發(fā)明的第五方面，提供如權(quán)利要求1-8中任一項所述的預(yù)后指示劑的用途，用于確定研究對象是否有發(fā)生轉(zhuǎn)移的危險，包括使受檢樣品接觸該預(yù)后指示劑，檢測預(yù)后指示劑與受檢樣品間復(fù)合物的形成。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種確定研究對象是否有發(fā)生轉(zhuǎn)移的危險的方法，包括使受檢樣品接觸如權(quán)利要求1-8中任一項所述的預(yù)后指示劑，檢測預(yù)后指示劑與受檢樣品間復(fù)合物的形成。
僅以舉例方式，現(xiàn)在參照下列實施例和附圖，描述檢測骨橋蛋白的存在的一種方法


圖1.乳癌患者的Kaplan Meier存活曲線，其中原發(fā)腫瘤表達(dá)不同含量的OPN，混合陽性染色組。
圖2.圖1中確定的乳癌患者的Kaplan Meier存活曲線，其中這些組別分開表示，顯示骨橋蛋白表達(dá)的劑量-應(yīng)答作用。
圖3.顯示肽檢測的Western印跡分析，其中使用抗Cys+兔骨橋蛋白前體的氨基酸32-45(SEQ ID No.4CQLYHKHPDALATWL)的抗血清。
實施例圖1和圖2顯示Kaplan Meier存活曲線，其中手術(shù)切除的乳癌組織采自一組339名原發(fā)癌癥患者，他們處于可進行手術(shù)的疾病第一階段和第二階段，來自Merseyside地區(qū)，于1976-1982年間在皇家大學(xué)醫(yī)院診斷(Winstanley等人，1991，Br J Cancer 63447-450；1993，Br J Cancer 67762-772)。年齡范圍為29-92歲(平均57歲)。標(biāo)本組織在中性緩沖的福爾馬林中常規(guī)固定，并且保存于石蠟塊中。獲得患者存活率的后續(xù)信息并且更新至1995年8月31日?？构菢虻鞍?alphaMBIII Bio(1))來自愛荷華州大學(xué)的Development StudiesHybridoma Bank，是IgG1同種型的一種單克隆小鼠抗體，用含有0.05％BSA的PBS 1/30稀釋使用。第二種抗體是生物素化的綿羊抗小鼠抗體(Amersham，Bucks)，用含有0.5％BSA的PBS 1/200稀釋使用。抗體用ABC復(fù)合物(Dako，Bucks)和二氨基聯(lián)苯胺顯色。由兩名獨立的觀察者評估染色，記錄每種標(biāo)本兩個切片中，骨橋蛋白細(xì)胞質(zhì)染色的癌細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，在200×放大倍數(shù)下每個切片10個視野(未染色的細(xì)胞用Mayer′s Haemalum復(fù)染)。忽略原位癌的染色水平，以及巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、宿主基質(zhì)、紡錘細(xì)胞和血管的染色。分組定義如下＜1％的細(xì)胞染色＝ve，＜5％＝+/-，5-25％＝+，25-50％＝++，50-75％＝+++，75-100％＝++++。這些組分別包含51、66、60、95和67個癌。參照圖1和圖2，對于除-對+/-和+++對++++之外的所有組，組間差異顯著，水平為5％。
申請人進一步表示，當(dāng)MCF-7細(xì)胞(一種人類乳腺轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系)在培養(yǎng)中存活時，該細(xì)胞被上述抗骨橋蛋白抗體識別，這清楚地表明，該疫苗將在體內(nèi)起作用。
圖3顯示一種Western印跡分析，其中牛骨橋蛋白(3μg)在12％SDS凝膠中電泳，并電印跡到硝酸纖維素膜上。將膜切成三部分，每一部分與用含有0.05％(v/v)TWEEN 20的Tris-緩沖鹽溶液(pH7)(PBST)1∶1000稀釋的抗血清一起4℃溫育過夜。在用TBS-T洗滌幾次后，該膜與1∶1000稀釋的與辣根過氧化物酶(Dako)偶聯(lián)的豬抗兔免疫球蛋白一起室溫溫育2小時。結(jié)合的抗體用ECL發(fā)光底物試劑盒(BioRad)和感光膠片顯示。通過將顯色的膠片疊加在膜上，能在膠片上指出預(yù)染色的已知分子量的蛋白質(zhì)在膜上的位置?？闺?抗血清針對兔骨橋蛋白序列的15個氨基酸的肽。GO61和GO62是指來自接種該肽的兩只動物的抗血清。LF123是針對重組人骨橋蛋白的全兔血清。
肽CQLYHKHPDALATWL(Cys+骨橋蛋白前體的氨基酸32-45)商業(yè)合成(Genosphere Biotechnologies，2 Rue de Gravillieres，75003，巴黎，法國)，并通過半胱氨酸與匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)偶聯(lián)(Lener等人，1981，PNAS 78，3404-3407)。兩只兔子注射該構(gòu)建體以及佐劑(以3周的間隔注射4次)，第一次注射使用弗氏完全佐劑，其它使用弗氏不完全佐劑，最后一次注射2周后放血。
用含有1％牛血清白蛋白和0.01％疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液1∶10000稀釋的抗血清，通過ELISA檢測肽，而1∶1000稀釋的抗血清通過Western印跡法檢測牛OPN。在Western印跡中，一只兔也識別一種～35kDa的較小的多肽。
這證明(i)該肽是抗原性的，(ii)短期內(nèi)，不會損害宿主。
序列表<110>University of Liverpool<120>預(yù)后指示劑<130>P403645WO/jdm/dgr<140>
<141>
<150>0023080.5<151>2000-09-20<160>4<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>314<212>PRT<213>人<400>1
Met Arg Ile Ala Val Ile Cys Phe Cys Leu Leu Gly Ile Thr CysAla1 5 10 15Ile Pro Val Lys Gln Ala Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Lys GlnLeu20 25 30Tyr Asn Lys Tyr Pro Asp Ala Val Ala Thr Trp Leu Asn Pro AspPro35 40 45Ser Gln Lys Gln Asn Leu Leu Ala Pro Gln Asn Ala Val Ser SerGlu50 55 60Glu Thr Asn Asp Phe Lys Gln Glu Thr Leu Pro Ser Lys Ser AsnGlu65 70 7580
Ser His Asp His Met Asp Asp Met Asp Asp Glu Asp Asp Asp AspHis85 90 95Val Asp Ser Gln Asp Ser Ile Asp Ser Asn Asp Ser Asp Asp ValAsp100 105 110Asp Thr Asp Asp Ser His Gln Ser Asp Glu Ser His His Ser AspGlu115 120 125Ser Asp Glu Leu Val Thr Asp Phe Pro Thr Asp Leu Pro Ala ThrGlu130 135 140Val Phe Thr Pro Val Val Pro Thr Val Asp Thr Tyr Asp Gly ArgGly145 150 155160
Asp Ser Val Val Tyr Gly Leu Arg Ser Lys Ser Lys Lys Phe ArgArg165 170 175Pro Asp Ile Gln Tyr Pro Asp Ala Thr Asp Glu Asp Ile Thr SerHis180185 190Met Glu Ser Glu Glu Leu Asn Gly Ala Tyr Lys Ala Ile Pro ValAla195200 205Gln Asp Leu Asn Ala Pro Ser Asp Trp Asp Ser Arg Gly Lys AspSer210215 220Tyr Glu Thr Ser Gln Leu Asp Asp Gln Ser Ala Glu Thr His SerHis225 230 235240
Lys Gln Ser Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Ala Asn Asp Glu Ser AsnGlu245 250 255His Ser Asp Val Ile Asp Ser Gln Glu Leu Ser Lys Val Ser ArgGlu260 265 270Phe His Ser His Glu Phe His Ser His Glu Asp Met Leu Val ValAsp275280285Pro Lys Ser Lys Glu Glu Asp Lys His Leu Lys Phe Arg Ile SerHis290295300Glu Leu Asp Ser Ala Ser Ser Glu Val Asn305 310
<210>2<211>21<212>PRT<213>人<400>2Glu Glu Lys Gln Leu Tyr Asn Lys Tyr Pro Asp Ala Val Ala ThrTrp1 5 10 15Leu Asn Pro Asp Pro20<210>3<211>14<212>PRT<213>人<400>3Gln Leu Tyr Asn Lys Tyr Pro Asp Ala Val Ala Thr Trp Leu1 5 10
<210>4<211>15<212>PRT<213>兔<400>4Cys Gln Leu Tyr His Lys His Pro Asp Ala Leu Ala Thr Trp Leu1 5 10 1權(quán)利要求
1.一種轉(zhuǎn)移預(yù)后指示劑，其含有一種抗骨橋蛋白抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的預(yù)后指示劑，其包含一種抗骨橋蛋白基因產(chǎn)物的抗體。
3.如權(quán)利要求2所述的預(yù)后指示劑，其中該抗體針對一種來源于骨橋蛋白的肽。
4.如權(quán)利要求3所述的預(yù)后指示劑，其中該肽來源于骨橋蛋白的氨基端。
5.如權(quán)利要求3所述的預(yù)后指示劑，其中該肽包含SEQ IDNo.1的至少10個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列。
6.如權(quán)利要求5所述的預(yù)后指示劑，其中該肽包含SEQ IDNo.1的14-20個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列。
7.如權(quán)利要求5或6之一所述的預(yù)后指示劑，其中該肽包含與SEQ ID No.2至少70％同源的氨基酸序列。
8.如權(quán)利要求7所述的一種預(yù)后指示劑，其中該肽包含與SEQID No.2至少90％同源的氨基酸序列。
9.一種針對轉(zhuǎn)移癌的疫苗，其含有一種來源于骨橋蛋白的抗原肽。
10.如權(quán)利要求9所述的疫苗，其中該疫苗針對轉(zhuǎn)移性乳癌。
11.如權(quán)利要求9或10之一所述的疫苗，其中該抗原肽來源于骨橋蛋白的氨基端。
12.如權(quán)利要求10或11之一所述的疫苗，其中該抗原肽包含SEQ ID No.1的至少10個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列。
13.如權(quán)利要求12所述的疫苗，其中該抗原肽包含SEQ IDNo.1的14-20個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列。
14.如權(quán)利要求12或13之一所述的疫苗，其中該抗原肽包含與SEQ ID No.2至少80％同源的氨基酸序列。
15.如權(quán)利要求14所述的疫苗，其中該抗原肽包含與SEQ IDNo.2至少90％同源的氨基酸序列。
16.如權(quán)利要求9-15中任一項所述的疫苗，其中該抗原肽與一種載體蛋白偶聯(lián)。
17.如權(quán)利要求9-16中任一項所述的疫苗，其含有一種佐劑。
18.如權(quán)利要求17所述的疫苗，其中該佐劑是明礬或弗氏完全佐劑。
19.一種治療轉(zhuǎn)移的方法，包括施用一種調(diào)節(jié)骨橋蛋白表達(dá)的化合物。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中骨橋蛋白的表達(dá)被阻斷。
21.如權(quán)利要求19所述的方法，其中該化合物是一種抗骨橋蛋白抗體。
22.如權(quán)利要求19所述的方法，其中該化合物提供一種阻斷骨橋蛋白mRNAs翻譯的反義分子。
23.如權(quán)利要求19所述的方法，其中該化合物提供一種與骨橋蛋白基因5’區(qū)互補并阻斷轉(zhuǎn)錄的核酸分子。
24.如權(quán)利要求19所述的方法，其中該化合物是一種小分子。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中該化合物的分子量為2KDa或更低。
26.一種診斷轉(zhuǎn)移的試劑盒，其包含如權(quán)利要求1-8中任一項所述的一種預(yù)后指示劑和一種或多種目視指示劑。
27.如權(quán)利要求1-8中任一項所述的預(yù)后指示劑的用途，用于確定研究對象是否有發(fā)生轉(zhuǎn)移的危險，包括使受檢樣品接觸該預(yù)后指示劑，檢測預(yù)后指示劑與受檢樣品間復(fù)合物的形成。
28.一種確定研究對象是否有發(fā)生轉(zhuǎn)移的危險的方法，包括使受檢樣品接觸如權(quán)利要求1-8中任一項所述的預(yù)后指示劑，檢測預(yù)后指示劑與受檢樣品間復(fù)合物的形成。
全文摘要
一種轉(zhuǎn)移預(yù)后指示劑，其含有一種抗骨橋蛋白抗體。
文檔編號A61P35/04GK1554026SQ01817048
公開日2004年12月8日 申請日期2001年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月20日
發(fā)明者A·J·史密斯, P·S·魯?shù)绿m德, A J 史密斯, 魯?shù)绿m德 申請人:利物浦大學(xué)