專利名稱：吡啶基咪唑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及吡啶基取代的咪唑，它們是轉(zhuǎn)化生長因子(″TGF″)-β信號通道(signaling pathway)，特別是通過I型或活化素樣激酶(activin-like kinase，″ALK″)-5受體的smad2或smad3的磷酸化作用的抑制劑，本發(fā)明還涉及它們的制備方法和它們在藥物中的用途，特別是在治療和預(yù)防該通道介導(dǎo)的疾病的用途。
TGF-β1是包括TGF-β，活化素，抑制素，骨形態(tài)形成蛋白和Müllerian-抑制物質(zhì)的細(xì)胞因子家族的原型成員，其通過一系列單跨膜絲氨酸/蘇氨酸激酶受體發(fā)出信號。這些受體可被分為兩類，I型或活化素樣激酶(ALK)受體和II型受體。AlK受體與II型受體的區(qū)別在于ALK受體(a)缺乏富有絲氨酸/蘇氨酸的細(xì)胞內(nèi)尾部，(b)具有與I型受體非常同源的絲氨酸/蘇氨酸激酶域，(c)共享被稱為GS域的共有的序列基元，該域由富有甘氨酸和絲氨酸殘基的域組成。GS域位于細(xì)胞內(nèi)激酶域的氨基末端，且對于通過II型受體的活化是重要的。很多研究表明，TGF-β信號同時(shí)需要ALK和II型受體。特別是在TGF-β存在下，II型受體磷酸化了TGF-β的I型受體(ALK5)的GS域。ALK5依次在兩個(gè)羧基末端絲氨酸處磷酸化了細(xì)胞質(zhì)蛋白smad2和smad3。通常認(rèn)為，在很多種類中，II型受體調(diào)控細(xì)胞增殖，I型受體調(diào)控基質(zhì)產(chǎn)生。因此，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是選擇性的，在于他們抑制I型受體并因此抑制基質(zhì)產(chǎn)生，而不抑制II型受體介導(dǎo)的細(xì)胞增殖。
TGF-β1軸的活化和細(xì)胞外基質(zhì)的擴(kuò)展早期并持續(xù)導(dǎo)致慢性腎病和血管疾病的發(fā)展和進(jìn)行。Border W.A.，Noble N.A.，N.Engl.J.Med.，Nov.10，1994；331(19)1286-92。另外，TGF-β1在纖連蛋白和纖溶酶原活化劑抑制劑-1，鞏膜沉積物(sclerotic deposits)組分的形成中，通過TGF-β1受體ALK5的smad3磷酸化而發(fā)揮作用。Zhang Y.，F(xiàn)eng X.H.，Derynck R.，Nature，Aug.27，1998；394(6696)909-13；Usui T.，Takase M.，Kaji Y.，Suzuki K.，Ishida K.，Tsuru T.，Miyata K.，Kawabata M.，Yamashita H.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，Oct.1998；39(11)1981-9。
腎和心血管系統(tǒng)中的進(jìn)行性纖維變性是痛苦和死亡的主要原因，而且是保健花費(fèi)的主要因素。TGF-β1已涉及于許多腎纖維變性疾病中。BorderW.A.，Noble N.A.，N.Engl.J.Med.，Nov 10，1994；331(19)1286-92。在急性或慢性腎小球腎炎中TGF-β1升高，Yoshioka K.，Takemura T.，Murakami K.，Okada M.，Hino S.，Miyamoto H.，Maki S.，Lab.Invest.，F(xiàn)eb.1993；68(2)154-63，糖尿病性腎病，Yamamoto，T.，Nakamura，T.，Noble，N.A.，Ruoslahti，E.，Border，W.A.，(1993)PNAS 901814-1818，同種異體移植排斥、HIV腎病和血管緊張素誘導(dǎo)的腎病，Border W.A.，Noble N.A.，N.Engl.J.Med.，Nov.10，1994；331(19)1286-92。在這些疾病中，TGF-β1的表達(dá)量與細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生一致。三條證據(jù)顯示TGF-β1和基質(zhì)產(chǎn)生之間的因果關(guān)系。第一，正常(腎)小球，腎小球系膜細(xì)胞和非腎細(xì)胞可被外源性TGF-β1在體外誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)蛋白并抑制蛋白酶活性。第二，中和TGF-β1的抗體可預(yù)防腎病大鼠中細(xì)胞外基質(zhì)的聚積。第三，TGF-β1轉(zhuǎn)基因小鼠或在體內(nèi)TGF-β1基因轉(zhuǎn)染到正常大鼠腎內(nèi)導(dǎo)致腎小球硬化癥的快速發(fā)展。Kopp J.B.，F(xiàn)actorV.M.，Mozes M.，Nagy P.，Sanderson N.，Bottinger E.P.，Klotman P.E.，Thorgeirsson S.S.，Lab Invest，June 1996；74(6)991-1003。因此，抑制TGF-β1活性表明可作為慢性腎病中的治療干預(yù)。
TGF-β1及其受體在受傷的血管內(nèi)增加并且顯示在氣囊血管成形術(shù)后新內(nèi)膜形成中，Saltis J.，Agrotis A.，Bobik A.，Clin Exp Pharmacol Physiol，Mar.1996；23(3)193-200。另外，TGF-β1是平滑肌細(xì)胞(″SMC″)體外遷移的有力刺激物，且SMC在動(dòng)脈壁中的遷移是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄發(fā)病的原因。另外，在相對于總膽固醇的內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)物的多元分析中可知，TGF-β受體ALK5與總膽固醇相關(guān)(P＜0.001)，Blann A.D.，Wang J.M.，WilsonP.B.，Kumar S.，動(dòng)脈粥樣硬化，F(xiàn)eb.1996；120(1-2)221-6。另外，自人動(dòng)脈粥樣硬化損傷(atherosclerotic lesion)得到的SMC的ALK5/TGF-βII型受體比率增加。因?yàn)門GF-β1在纖維增殖血管損傷中過度表達(dá)，所以受體變體細(xì)胞將被允許緩慢地，但以無限制的方式生長，同時(shí)過度產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)組分，McCaffrey T.A.，Consigli S.，Du B.，F(xiàn)alcone D.J.，Sanborn T.A.，SpokojnyA.M.，Bush H.L.，Jr.，J Clin Invest，Dec.1995；96(6)2667-75。在發(fā)生活性基質(zhì)合成的動(dòng)脈粥樣硬化損傷中TGF-β1免疫定位到非泡沫巨噬細(xì)胞上，顯示非泡沫巨噬細(xì)胞可能通過TGF-β-依賴型機(jī)制動(dòng)脈粥樣重塑中基因的表達(dá)。因此，在動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄中也顯示出抑制TGF-β1對ALK5的作用。
在傷口愈合中也涉及到了TGF-β。中和TGF-β1的抗體已被用于大量模型中以用于說明TGF-β1信號的抑制作用在治療過程中通過限制過度形成疤痕而對受傷后的功能恢復(fù)是有利的。例如，在大鼠中，中和TGF-β1和TGF-β2的抗體減少了疤痕形成并且通過減少單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的數(shù)量以及減少皮膚粘連蛋白和膠原沉積而改進(jìn)了新真皮的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，Shah M.，J.Cell.Sci.，1995，108，985-1002。而且，在兔子中，TGF-β抗體也改進(jìn)了角膜損傷的愈合，Moller-Pedersen T.，Curr.Eye Res.，1998，17，736-747，并且加速了大鼠胃潰瘍的傷口愈合，Ernst H.，Gut，1996，39，172-175。這些數(shù)據(jù)顯著地顯示在很多組織中限制TGF-β活性將是很有益的，并建議通過抑制smad2和smad3信號通道而使任何具有TGF-β慢性上升的疾病受益。在腹膜粘連中也涉及TGF-β，Saed G.M.，et al，傷口愈合再生，1999 Nov-Dec，7(6)，504-510.因此，ALK5的抑制劑在預(yù)防外科手術(shù)后腹膜和皮下纖維變性粘連中是有利的。
TGFβ1-抗體被認(rèn)為通過抗血管生成機(jī)理抑制裸鼠中被移植的腎腫瘤的生長，Ananth S，et al，Journal Of The American Society of Nephrology Abstracts，9433A(摘要)。盡管腫瘤本身對于TGF-β沒有應(yīng)答，但是通過TGF-β分泌腫瘤的新生血管形成，周圍組織應(yīng)答并支持腫瘤生長。因此，對TGF-β途徑的拮抗作用將預(yù)防轉(zhuǎn)移生長并減少癌癥負(fù)擔(dān)。
Bioorg.Med.Chem.Lett.，1995，5(6)，543公開了2-[5-(2-甲基苯基)-2-丙基-IH-咪唑-4-基]吡啶作為胃H+/K+ATP酶抑制劑。
DE 2221546公開了作為抗炎、鎮(zhèn)痛或退熱劑的下列化合物2-[2-(1，1-二甲基乙基)-5-(4-甲氧苯基)-1H-咪唑-4-基]吡啶，2-[2-(1，1-二甲基乙基)-5-苯基-1H-咪唑-4-基]吡啶。
日本專利No.09124640公開了作為農(nóng)用化學(xué)殺真菌劑的下列化合物2-[5-(3，5-二氯苯基)-2-甲基-1H-咪唑-4-基]吡啶，2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-甲基-1H-咪唑-4-基]吡啶，2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-乙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-氨基-1H-咪唑-4-基]吡啶，2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-異丙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-丙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-酰胺-1H-咪唑-4-基]吡啶。
我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，一系列通式(I)的2-吡啶基取代的咪唑具有ALK5激酶的有效的且選擇性的非肽抑制劑功能，并因此可用于治療和預(yù)防各種由ALK5激酶機(jī)理介導(dǎo)的疾病，如慢性腎病(renal disease)，急性腎病，傷口愈合，關(guān)節(jié)炎，骨質(zhì)疏松癥，腎病(kidney disease)，充血性心力衰竭，潰瘍，眼病，角膜損傷，糖尿病性腎病，神經(jīng)功能損傷，阿耳茨海默氏疾病，營養(yǎng)疾病(trophic condition)，動(dòng)脈粥樣硬化，腹膜和皮下粘連，纖維變性是主要因素的任何疾病，包括但不限于肺纖維變性和肝臟纖維變性，以及再狹窄。
按照本發(fā)明，提供了一種通式(I)化合物或其藥用鹽 其中R1是萘基、蒽基或苯基，任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、C1-6烷氧基，C1-6烷硫基，C1-6烷基，C1-6鹵代烷基，O-(CH2)m-Ph，S-(CH2)m-Ph，氰基，苯基和CO2R的取代基取代，其中R是氫或C1-6烷基，且m是0-3；或R1是與芳香或非芳香的5-7員環(huán)稠和的苯基或吡啶基，其中所述的環(huán)任選地含有最多3個(gè)獨(dú)立的選自N，O和S的雜原子，且任選的由＝O取代；R2表示氫，C1-6烷基，C1-6烷氧基，苯基，C1-6鹵代烷基，鹵素，NH2，NH-C1-6烷基或NH(CH2)n-Ph，其中n是0-3；R3表示C1-6烷基，-(CH2)p-CN，-(CH2)p-COOH，-(CH2)p-CONHR4R5，-(CH2)pCOR4，-(CH2)q(OR6)2，-(CH2)pOR4，-(CH2)q-CH＝CH-CN，-(CH2)q-CH＝CH-CO2H，-(CH2)p-CH＝CH-CONHR4R5，-(CH2)pNHCOR7或-(CH2)pNR8R9，R4和R5獨(dú)立地是氫或C1-6烷基；R6是C1-6烷基；R7是C1-7烷基，或任選取代的芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基或雜芳基C1-6烷基；R8和R9獨(dú)立地是選自氫，C1-6烷基，芳基和芳基C1-6烷基；p是0-4；
q是1-4；X1和X2之一是N，另一個(gè)是NR10；且R10是氫，C1-6烷基或C3-7環(huán)烷基；條件是該化合物不是i)2-[5-(2-甲基苯基)-2-丙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，ii)2-[2-(1，1-二甲基乙基)-5-(4-甲氧苯基)-1H-咪唑-4-基]吡啶，iii)2-[2-(1，1-二甲基乙基)-5-苯基-1H-咪唑-4-基]吡啶，iv)2-[5-(3，5-二氯苯基)-2-甲基-1H-咪唑-4-基]吡啶，v)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-甲基-IH-咪唑-4-基]吡啶，vi)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-乙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，Vii)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-氨基-1H-咪唑-4-基]吡啶，viii)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-異丙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，ix)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-丙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，或x)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-酰胺基-1H-咪唑-4-基]吡啶。
本文中，式(I)中虛線代表的雙鍵，表示化合物的可能的互變異構(gòu)的環(huán)形式也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，雙鍵時(shí)應(yīng)是未取代的氮。
在一組優(yōu)選化合物中，R1是任選取代的萘基或苯基，優(yōu)選R1是任選地由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素，C1-6烷氧基，C1-6烷硫基和苯基的取代基取代的苯基；更優(yōu)選R1是任選地由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、C1-6烷氧基，C1-6烷硫基和氰基的取代基取代的苯基；或R1是與芳香或非芳香的5-7員環(huán)稠和的苯基或吡啶基(特別是苯基)，其中所述的環(huán)任選包含最多3個(gè)獨(dú)立的選自N，O或S的雜原子，且可以任選地由＝O取代；例如R1代表苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基(dioxolyl)、2，3-二氫苯并[1，4]間二氧雜環(huán)己烯基(dioxinyl)、苯并噁唑基、苯并噻唑基、喹喔啉基、苯并[1，2，5]噁二唑基、苯并[1，2，5]噻二唑基、[1，2，4]三唑并[1，5-α]吡啶基、二氫苯并呋喃基、苯并[1，4]噁嗪基-3-酮或苯并噁唑基-2-酮。
優(yōu)選R2不是氫，當(dāng)R2不是氫時(shí)，優(yōu)選位于吡啶環(huán)的氮的鄰位。
優(yōu)選R3表示C1-6烷基或(CH2)pNHCOR7，其中R7是C1-7烷基，或任選取代的芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基或雜芳基C1-6烷基。
優(yōu)選X1和X2之一是N且另一個(gè)是NR10，其中R10是氫或C1-6烷基。
R10優(yōu)選是氫。
本發(fā)明的方法中使用的化合物優(yōu)選分子量低于800，更優(yōu)選低于600。
可提及的本發(fā)明的具體化合物包括在實(shí)施例中描述的那些化合物。
通式(I)化合物的合適的藥用鹽，包括但并不限于與無機(jī)酸成的鹽如鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽、氫溴酸鹽和硝酸鹽，或與有機(jī)酸成的鹽如蘋果酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、棕櫚酸鹽、水楊酸鹽和硬脂酸鹽。
本發(fā)明的一些化合物可以用如水和有機(jī)溶劑的溶劑中結(jié)晶或者重結(jié)晶。在這種情況下可形成溶劑化物。本發(fā)明包括在其范圍內(nèi)的化學(xué)計(jì)量量的包括水合物在內(nèi)的溶劑化物而且含有各種含量水的化合物，它們可通過例如冷凍干燥的方法制備。
某些通式(I)化合物可以光學(xué)異構(gòu)體，如非對映異構(gòu)體和各種比例的異構(gòu)體混合物，如外消旋混合物的形式存在。本發(fā)明包括所有這些形式，特別是純的異構(gòu)體形式。不同的異構(gòu)體可以通過常規(guī)的方法將其與其它形式中分離或拆分出來，或者可通過常規(guī)合成方法或者通過立體選擇性或手性合成方法獲得任何給出的異構(gòu)體。
由于通式(I)有意應(yīng)用于藥用組合物中，所以容易理解它們各自優(yōu)選以基本純的形式提供，例如純度至少為60％，更適宜的純度為至少75％且優(yōu)選至少85％，特別是純度至少為98％(％為重量百分比)。化合物不純的制備產(chǎn)物可用于制備用于藥用組合物的形式；這些較低純度的化合物制備產(chǎn)物應(yīng)含有至少1％，更適宜的為至少5％并且優(yōu)選至少10％的通式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物。
這里使用的術(shù)語“C1-6烷基”和“C1-7烷基”不論是它本身還是作為大基團(tuán)的一部分，例如C1-6烷氧基，分別代表直鏈或支鏈的1-6和1-7個(gè)碳原子的基團(tuán)，包括但并不限于甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，仲丁基，異丁基和叔丁基。
C1-6鹵代烷基可含有一個(gè)或多個(gè)鹵原子，特別可提及的C1-6鹵代烷基是CF3。
在這里交替使用的術(shù)語“鹵代”或“鹵素”是指衍生自氯、氟、碘和溴的殘基。
這里使用的術(shù)語“C3-7環(huán)烷基”是指3-7個(gè)碳原子的環(huán)狀基團(tuán)，包括但并不限于環(huán)丙基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
這里使用的術(shù)語“芳基”是指取代的或未取代的5-至14-員芳香環(huán)或環(huán)系，其可包括二或三環(huán)的環(huán)系，包括但不限于苯基和萘基。
這里使用的術(shù)語“ALK5抑制劑”是指化合物，不同于抑制smad類，例如smad6和smad7，它可選擇性抑制ALK5受體，優(yōu)先作用于p38或II型受體。
這里使用的術(shù)語“ALK5介導(dǎo)的疾病狀態(tài)”是指任何通過ALK5介導(dǎo)(或調(diào)節(jié))的疾病狀態(tài)，例如一種通過在TGF-β1信號通路中抑制smad 2/3的磷酸化而被調(diào)控的疾病。
這里使用的術(shù)語“潰瘍”是指包括但不限于糖尿病性潰瘍，慢性潰瘍，胃潰瘍和十二指腸潰瘍。
通式(I)化合物可通過現(xiàn)有技術(shù)認(rèn)可的方法從已知的或市售的原料制備。如果原料從市場上買不到，在這里還描述了它們的合成，或者它們可通過本領(lǐng)域公知的方法制備。
具體地說，X1和X2之一是NH的通式(I)化合物可按照流程1制備。酮可以在DMSO中用HBr氧化成二酮。然后按照WO98/56788中描述的方法，該二酮可以與合適的取代的醛或保護(hù)的醛衍生物和乙酸銨縮合成咪唑。另外，酮可以在HCl中用亞硝酸鈉處理得到α-肟基酮，它隨后可用合適的取代的醛或保護(hù)的醛衍生物和乙酸銨縮合得到N-羥基咪唑。用按照美國專利US5,656,644中描述的方法用三乙基亞磷酸酯處理該化合物得到咪唑。流程1
X1和X2之一是NH的通式(I)化合物也可按照流程2制備。使用鈀催化劑將合適的溴化物與三甲基甲硅烷基乙炔偶合。三甲基甲硅烷基可通過用碳酸鉀處理除去，并且使用鈀催化劑，末端的乙炔可再次與6-溴-2-甲基吡啶偶合。然后乙炔可在DMSO中用氯化鈀氧化成二酮。然后將生成的咪唑用合適的醛按照流程1的描述處理。流程2 用通式為L-R10的化合物非選擇性的烷基化咪唑氮(用在J Med.Chem.，1999，42，2180-2190中N.J.Liverton等人描述的一種方法)，其中L離去基團(tuán)，例如，鹵素、磺酸鹽或三氟甲磺酸鹽，將得到X1或X2是NR10的化合物的兩個(gè)異構(gòu)體，其中R10不是氫，異構(gòu)體可通過色譜方法(流程3)分離。流程3
R3是-CH2NHCOR7的通式(I)化合物可按照流程4制備。用(1，3-二氧-1，3-二氫-異吲哚-2-基)乙醛和乙酸銨與適當(dāng)?shù)亩s合形成咪唑。將產(chǎn)物用肼處理用以暴露游離的氨，然后采用標(biāo)準(zhǔn)的酰胺鍵生成條件與合適的羧酸偶合。流程4 在合成通式(I)化合物過程中，可以保護(hù)中間體化合物不穩(wěn)定的官能團(tuán)，例如羥基，羧基和氨基。全面討論各種不穩(wěn)定官能團(tuán)的保護(hù)和脫保護(hù)方法已在例如《有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)》(Protective Groups in OrganicChemistry)(T.W.Greene和P.G.M.Wuts，(Wiley-IntersClence，New York，2ndedition，1991))中給出。
制備通式(I)化合物的更詳細(xì)的資料在實(shí)施例中給出。
通式(I)化合物可以單獨(dú)制備或者制備至少包含2個(gè)化合物的一組化合物(compound libraries)，例如5至1000個(gè)化合物，并且更優(yōu)選10-100個(gè)通式(I)化合物。一組通式(I)化合物可通過組合的“拆分和混合(split and mix)”方法或者通過使用液相或固相化學(xué)通過本領(lǐng)域公知的方法多組平行合成。
因此，本發(fā)明的另一方面是提供至少含有2個(gè)通式(I)化合物的一組化合物或其藥用鹽。
本發(fā)明進(jìn)一步提供通式(I)化合物或其藥用鹽的在生產(chǎn)治療由ALK5受體介導(dǎo)的哺乳動(dòng)物的疾病的藥物中的用途，但是無條件i)至x)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療由ALK5受體介導(dǎo)的哺乳動(dòng)物的疾病的方法，包括給予需要治療的哺乳動(dòng)物，治療有效量的通式(I)化合物，但無條件i)至x)，或其藥用鹽。
ALK5介導(dǎo)的疾病包括，但不限于慢性腎病，急性腎病，傷口愈合，關(guān)節(jié)炎，骨質(zhì)疏松癥，腎病，充血性心力衰竭，潰瘍，眼病，角膜損傷，糖尿病腎病，神經(jīng)功能損傷，阿耳茨海默氏疾病，營養(yǎng)疾病，動(dòng)脈粥樣硬化，腹膜和皮下粘連，纖維變性是主要因素的任何疾病，包括但不限于肺纖維變性和肝臟纖維變性，以及再狹窄。
術(shù)語“治療”即包括預(yù)防性的治療又包括治療性的治療。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種抑制哺乳動(dòng)物TGF-β信號通路的方法，例如，通過I型或活化素樣激酶ALK5受體抑制smad2或smad3磷酸化，該方法包括給予需要治療的哺乳動(dòng)物，治療有效量的通式(I)化合物，但無條件i)至x)，或其藥用鹽。
本發(fā)明進(jìn)一步提供通式(I)化合物或其藥用鹽在生產(chǎn)抑制哺乳動(dòng)物TGF-β信號通路的藥物中的用途，但無條件i)至x)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種抑制哺乳動(dòng)物基質(zhì)形成的方法，例如，通過I型或活化素樣激酶ALK5受體抑制smad2或smad3磷酸化，該方法包括給予需要治療的哺乳動(dòng)物，治療有效量的通式(I)化合物，但無條件i)至x)，或其藥用鹽。
本發(fā)明進(jìn)一步提供通式(I)化合物或其藥用鹽在生產(chǎn)抑制哺乳動(dòng)物基質(zhì)形成的藥物中的用途，但無條件i)至x)。
通式(I)化合物和其藥用鹽可按照本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法，通過結(jié)合通式(I)化合物，但無條件i)至x)，與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑以常規(guī)的劑量形式給藥。這些方法可以包括混合、制粒和壓片或根據(jù)需要將組分溶解到所需的制劑中。
本發(fā)明的另一方面提供一種藥用組合物，含有通式(I)化合物，但無條件iv)至x)，或其藥用鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
本發(fā)明的藥用組合物可配制成用于任何給藥形式，包括那些適合哺乳動(dòng)物包括人類的口服、局部或非腸道給藥形式。
該組合物可配制成用于各種途徑給藥。組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、乳膏劑或液體藥劑形式，例如，口服或無菌非腸道溶液或混懸液。
本發(fā)明的局部制劑可例如為軟膏劑、乳膏劑或洗劑、眼膏劑和滴眼劑或滴耳劑，浸漬敷料(impregated dressings)和氣霧劑，且可含有適當(dāng)?shù)某Ｒ?guī)添加劑，例如防腐劑、幫助藥物滲透的溶劑以及軟膏和乳膏中的柔軟劑。
制劑中也可含有相容的常規(guī)的載體，例如，乳膏或眼膏基質(zhì)以及用于洗劑的乙醇或油醇。這樣的載體在制劑中占大約1％到大約98％，更多的通常達(dá)到大約80％。
口服的片劑和膠囊劑可以是單元?jiǎng)┝啃问剑⒖梢院谐Ｒ?guī)的賦形劑，如粘合劑，例如糖漿(syrup)、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃芪膠或聚乙烯基吡咯烷酮；填充劑，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘氨酸；壓片潤滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解劑，例如馬鈴薯淀粉；或可接受的潤濕劑如十二烷基硫酸鈉。片劑可按照常規(guī)藥學(xué)工藝的公知方法包衣?？诜囊后w制劑可制成例如水性或油性的混懸液劑、溶液劑、乳劑、糖漿劑或酏劑，或者可制成使用前與水或其他介質(zhì)混合的干劑形式。液體制劑也可含有常規(guī)的添加劑，如助懸劑，例如山梨醇、甲基纖維素、葡萄糖漿、明膠、羥基乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化的可食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨糖一油酸酯或阿拉伯膠；非水介質(zhì)(可包括食用油)，例如杏仁油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如甲基或丙基對羥基苯甲酸酯或山梨酸，并且，如果需要，可含有常規(guī)的矯味劑或著色劑。
栓劑可含有常規(guī)的栓劑基質(zhì)，例如可可酯或其他甘油酯。
對于非腸道給藥而言，可利用化合物和無菌介質(zhì)(vehicle)(優(yōu)選水)制成液體單元?jiǎng)┝拷o藥形式。化合物取決于介質(zhì)和濃度，既可以混懸又可以溶解在介質(zhì)中。制備溶液劑時(shí)可將化合物溶于注射用水并且在裝入合適的小瓶或安瓿之前過濾滅菌，然后密封。
有利地，試劑如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑可以溶在介質(zhì)中。為了提高穩(wěn)定性，可將組合物在裝入小瓶后冷凍并在真空中除去水。然后將冷凍干燥的干粉密封倒小瓶中，并且隨小瓶附帶的注射用水可作為使用前的再分散液體。非腸道給藥的混懸液可按完全相同的方法制備，除了是將化合物混懸在介質(zhì)中而不是溶解，并且不能通過過濾完成滅菌?？赏ㄟ^將化合物混懸在滅菌介質(zhì)前暴露在環(huán)氧乙烷中滅菌。有利地，組合物中包含表面活性劑或潤濕劑以促進(jìn)化合物在組合物中分布均勻。
根據(jù)給藥方法，組合物可含有0.1％(重量)以上，優(yōu)選10-60％(重量)的活性成分。當(dāng)組合物包含劑量單位時(shí)，每個(gè)劑量單位優(yōu)選含有50-500mg的活性成分。成人的給藥劑量優(yōu)選每天100至3000mg，例如根據(jù)給藥的途徑和頻率每天給藥1500mg。這樣的劑量相當(dāng)于每天1.5至50mg/kg。合適的劑量為每天5至20mg/kg。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠知道通式(I)化合物，但無條件i)至x)，給藥的最佳劑量和間隔，將由要治療疾病的性質(zhì)和程度、形式、給藥途徑和作用部位，以及治療的具體哺乳動(dòng)物決定，并且最適宜的劑量可通過常規(guī)的技術(shù)確定。本領(lǐng)域的技術(shù)人員也能夠知道最佳的治療過程，例如，通式(I)化合物但無條件i)至x)，在規(guī)定天數(shù)內(nèi)每天的給藥劑量能夠由本領(lǐng)域的技術(shù)人員通過治療決定檢驗(yàn)的常規(guī)過程確定。
未發(fā)現(xiàn)通式(I)化合物，但無條件i)至x)，或其藥用鹽在上述涉及的給藥劑量范圍內(nèi)出現(xiàn)毒性作用。
所有公開出版物，包括但并不限于在本說明書中引用的專利和專利申請，在此都具體和單獨(dú)指出作為參考引入本文。
以下的實(shí)施例僅僅用于說明但并不在任何方面限制本發(fā)明。在實(shí)施例中，測定質(zhì)譜使用的是應(yīng)用化學(xué)電離技術(shù)(CI)的Hitachi Perkin-ElmerRMU-6E或者應(yīng)用電霧電離技術(shù)(ES)Micromass Platform II。
將D3(250mg，0.1mmol)溶于丁基甲基醚(20ml)和甲醇(5ml)中。加入乙醛(2ml)并將反應(yīng)混合物加熱到回流溫度過夜。在2、4和6小時(shí)進(jìn)一步加入乙醛(3×1ml)。冷卻，用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物并分別用碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌。干燥有機(jī)相(Na2SO4)并在真空中濃縮至得到棕色油狀物，將該油狀物在硅膠干閃式色譜上用5％甲醇的二氯乙烷溶液洗脫得到淡黃色油狀物。1HNMR(250MHz，CDCl3)b2.43(3H，s)，2.51(3H，s)，3.84(3H，s)，6.92(3H，m)，7.27(1H，d)，7.38(1H，t)，7.52(2H，m)，NH未檢測到；m/z(API+)322(MH+).實(shí)施例197-[2-叔丁基-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-4H-苯并[1，4]噁嗪-3-酮 在室溫下的氬氣中將氯代乙酰氯(10mg，0.092mmol，7.5μl，1.1eq)加入D4(30mg，0.084mmol，1.0eq)的干燥的DMF(0.5ml)溶液中。分批加入碳酸鉀(46mg，0.334mmol，4.0eq)并將得到的混合物在室溫下攪拌16h。將反應(yīng)混合物用水稀釋(10ml)并用EtOAc(2×10ml)萃取。有機(jī)層用水和鹽水(各20ml)洗滌，然后干燥(MgSO4)并除去溶劑。通過硅膠閃式柱色譜純化，用9∶1 CH2Cl2∶MeOH+1％Et3N洗脫得到標(biāo)題化合物。1H NMR(400MHz；DMSO-d6)δ1.52(9H，s)，2.67(3H，s)，4.63(2H，s)，6.98(1H，d)，7.11(1H，d)，7.22(1H，s)，7.28(1H，d)，7.37(1H，d)，7.80(1H，t)，10.98(1H，br.s)，NH未檢測到；m/z[ESMS]363.2[M+H]+.實(shí)施例206-[2-叔丁基-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-3H-苯并噁唑-2-酮
在室溫下的氬氣中將三乙基胺(56mg，77μl，5.0eq)滴加到D4(40mg，0.111mmol，1.0eq)和1，1′-羰基二咪唑(20mg，0.123mmol，1.1eq)的無水的DMF(1.1ml)溶液中。將得到的混合物在室溫下攪拌16h。將反應(yīng)混合物用水稀釋(10ml)。將混合物用EtOAc(2×10ml)萃取并且有機(jī)層用水和鹽水(各20ml)洗滌，然后干燥(MgSO4)并除去溶劑。通過硅膠閃式柱色譜純化，用25∶1CH2Cl2∶MeOH+1％ Et3N洗脫得到灰白色固體的標(biāo)題化合物。1HNMR(250MHz；CD3OD)δ1.34(9H，s)，2.41(3H，s)，6.94(1H，d)，7.11-7.07(2H，m)，7.14(1H，d)，7.18(1H，s)，7.46(1H，t)，NHs為檢測到；m/z[ESMS]349.2[M+H]+.實(shí)施例217-[2-叔丁基-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-3，4-二氫-2H-苯并[1，4]噁嗪 在室溫下的氬氣中將LiAlH4溶液(262μl 1M醚溶液，0.262mmol，5.0eq)滴加到實(shí)施例19(19mg，0.052mmol，1.0eq)的無水DMF(0.75ml)溶液中。由于氫氣的生成可觀察到冒泡，并將得到的橙色混合物在室溫下攪拌5h。加入甲醇(1ml)并將將反應(yīng)混合物與飽和的酒石酸鈉鉀(30ml)和EtOAc(30ml)強(qiáng)力攪拌2小時(shí)。分離各層并將有機(jī)層用水和鹽水(各30ml)洗滌，干燥(MgSO4)并除去溶劑。通過硅膠閃式柱色譜純化，用9∶1CH2Cl2∶MeOH+1％Et3N洗脫得到灰白色固體的標(biāo)題化合物。1H NMR(250MHz；CD3OD)δ1.33(9H，s)，2.44(3H，s)，3.24(2H，t)，4.07(2H，t)，6.48(1H，d)，6.68-6.64(2H，m)，6.99(1H，d)，7.09(1H，d)，7.44(1H，t)，NHs未檢測到；m/z[ESMS]349.3[M+H]+.實(shí)施例222-[4-苯并[1，3]二氧環(huán)戊烯-5-基-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基]-甲基胺
將從D1和(1，3-二氧-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-乙醛按照實(shí)施例4的步驟制備的2-[4-苯并[1，3]二氧環(huán)戊烯-5-基-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基-甲基]-異吲哚-1，3二酮(3g)溶于甲醇(200ml)并用一水合肼(2ml)處理。將反應(yīng)物加熱回流4h，冷卻，用丙酮處理淬滅過量的腙并蒸發(fā)至干。然后將殘留物放入2M鹽酸中，中和至pH8并用二氯乙烷萃取。干燥(MgSO4)合并的有機(jī)層，在真空中濃縮并將殘留物在硅膠閃式柱色譜用90∶9∶1二氯甲烷，甲醇，0.88氨洗脫得到灰白色固體的標(biāo)題化合物。1HNMR(250MHz，CDCl3)82.53(3H，s)，4.05(2H，s)，5.99(2H，s)，6.83(1H，d，J＝6Hz)，6.94(1H，d，J＝7Hz)，7.08(2H，m)，7.28(1H，d，J＝1OHz)，7.41(1H，d，J＝7Hz)NHs未檢測到；m/z(API+)309.
從1-苯并[1，2，3]噻二唑-6-基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-乙烷-1，2-二酮2-肟(按照流程1中簡述的路線制備)和乙醛制備。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ2.54(3H，s)，2.57(3H，s)，7.02(1H，d，J＝8Hz)，7.24-7.65(1H，m)，7.47(1H，t，J＝8Hz)，7.91(1H，dd，J＝8.5 and 1Hz)，8.41(1H，d，J＝1Hz)，8.59(1H，d，J＝8.5Hz)，NH未檢測到；m/z(API+)308.1(MH+).
生物學(xué)數(shù)據(jù)本發(fā)明化合物的生物學(xué)活性可通過下述試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)評價(jià)smad3的ALK5激酶磷酸化的方法用移液管量取100微升含有150納克融合蛋白谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶-smad3/100微升涂層緩沖液的0.1摩爾碳酸氫鈉(pH7.6)將堿性閃式板(BasicFlash-Plates)(NEN生命科學(xué))涂層。將板蓋蓋上并在室溫保溫10-24小時(shí)。然后將板用200微升涂層緩沖液(0.1摩爾碳酸氫鈉)洗滌2次，并在空氣中干燥2-4小時(shí)。
為了進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，向每孔中加入90微升含有50毫摩爾HEPES緩沖液(pH7.4)；5毫摩爾MgCl2；1毫摩爾CaCl2；1毫摩爾二硫蘇糖醇；100微摩爾鳥嘌呤核苷三磷酸酯；0.5微Ci/孔 γ33P-腺嘌呤三磷酸酯(NEN生命科學(xué))和400納克在ALK5激酶域的N-末端的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白(GST-ALK5)。不加入任何GST-ALK5進(jìn)行背景計(jì)數(shù)。通過在各種化合物存在下決定酶活性評價(jià)ALK5抑制劑。將板在30℃保溫3小時(shí)。保溫后通過吸引除去試驗(yàn)緩沖液，將每孔用200微升冷的在磷酸鹽緩沖的鹽水中的10毫摩爾焦磷酸鈉洗滌3次。抽吸最后的洗滌液并干燥弄污的板。然后將板在Packard TopCount上計(jì)數(shù)。
熒光各向異性激酶接合試驗(yàn)在使無試驗(yàn)化合物時(shí)熒光配體有效地(＞50％)酶結(jié)合和在足夠濃度(＞10x Ki)的有力抑制劑存在時(shí)未結(jié)合的熒光配體的各向異性與其結(jié)合值測量不同的條件下，將激酶酶，熒光配體和不同濃度的試驗(yàn)化合物一起保溫達(dá)到熱動(dòng)力平衡。
優(yōu)選激酶酶的濃度應(yīng)≥1x Kf。所需熒光配體的濃度依賴于所使用的儀器，以及熒光和物理化學(xué)性質(zhì)。所使用的濃度必須低于激酶酶的濃度，且優(yōu)選少于激酶酶濃度的一半。典型的程序是將所有組分溶于最終組分為50mM HEPES，pH7.5，1mM CHAPS，1mM DTT，10mM MgCl2，2.5％ DMSO的緩沖液中。
ALK5酶濃度4nM熒光配體濃度1nM試驗(yàn)化合物濃度0.1nM-100uM將組分在最終體積10ul的LJL HE 384 B型黑色微滴板中保溫直到達(dá)到平衡(5-30mins)。
在LJL Acquest中讀取熒光各向異性。定義Ki＝抑制劑結(jié)合的離解常數(shù)Kf＝熒光配體結(jié)合的離解常數(shù)熒光配體是下列化合物
它是衍生自5-[2-(4-氨基甲基苯基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-4-基]-2-氯代苯酚和綠光堿性蕊香紅(rhodamine green)。
基質(zhì)標(biāo)記抑制RNA印跡程序(Northern Blot Protocol)在酶試驗(yàn)中確認(rèn)活性的數(shù)據(jù)是如下獲得的。
在具有10％胎牛血清，青霉素(5單位/ml)和鏈霉素(5ng/ml)的EMEM介質(zhì)生長來自ATCC的腎上皮癌細(xì)胞系A(chǔ)498。在100mm培養(yǎng)皿中使A498細(xì)胞生長至接近融合，在血清饑餓下(serum-starved)培養(yǎng)24小時(shí)，用化合物預(yù)處理4小時(shí)，然后加入10ng/ml TGF-β(R & D Systems，Inc.，MinneapolisMN)。將細(xì)胞暴露于TGF-β24小時(shí)。通過酸性苯酚/氯仿萃取提取細(xì)胞的RNA(Chomczynski and Sacchi，1987)。通過瓊脂糖凝膠電泳解析總共10微克RNA，并轉(zhuǎn)移至尼龍膜上(GeneScreen，NEN Life Sciences，Boston MA)。用32P標(biāo)記的cDNA探針(Stratagene，La Jolla，CA)探察粘纖蛋白mRNA。將膜暴露于磷光成像板并用ImageQuant軟件(Molecular Dynamics，Sunnyvale，CA)使頻帶顯影并定量。
基質(zhì)標(biāo)記抑制蛋白質(zhì)印跡程序(Western Blot Protocol)在酶試驗(yàn)中確認(rèn)活性的數(shù)據(jù)是如下獲得的。
在燒瓶中使細(xì)胞生長至接近融合，饑餓過夜并用TGF-β和化合物處理。用冰冷卻的磷酸鹽緩沖鹽水處理后24小時(shí)或48小時(shí)洗滌細(xì)胞。向板上加入500微升2X裝載緩沖液(loading buffer)，將細(xì)胞刮下并收集在微離心管中(2X裝載緩沖液100mM Tris-Cl，pH6.8，4％十二烷基硫酸鈉，0.2％溴酚藍(lán)，20％甘油，5％ β-巰基乙醇)。將細(xì)胞溶解并攪拌。使樣品煮沸10分鐘。將20微升樣品加在7.5％聚丙烯酰胺凝膠(BioRad)上并電泳。
通過半干的印跡將在蛋白中尺寸分餾的蛋白轉(zhuǎn)移至硝基纖維素膜。用5％磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)中奶粉和0.05％Tween-20在4級(degrees)C封鎖膜過夜。用PBS/Tween-20洗滌3次后將膜與一級抗體(primary antibody)一起在室溫保溫4小時(shí)。用PBS/Tween洗滌3次后將膜與二級抗體(secondaryantibody)在室溫保溫1小時(shí)。最后，信號用來自Amersham的檢測試劑盒顯像。
本發(fā)明化合物通常顯示ALK5受體調(diào)節(jié)活性，具有IC50值在0.0001到10μM。
權(quán)利要求
1.通式(I)化合物或其藥用鹽 其中R1是萘基、蒽基或苯基，任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、C1-6烷氧基，C1-6烷硫基，C1-6烷基，C1-6鹵代烷基，O-(CH2)m-Ph，S-(CH2)m-Ph，氰基，苯基和CO2R的取代基取代，其中R是氫或C1-6烷基，m是0-3；或R1是與芳香或非芳香的5-7員環(huán)稠和的苯基或吡啶基，其中所述的環(huán)任選地含有最多3個(gè)獨(dú)立的選自N、O和S的雜原子，且任選的由＝O取代；R2表示氫，C1-6烷基，C1-6烷氧基，苯基，C1-6鹵代烷基，鹵素，NH2，NH-C1-6烷基或NH(CH2)n-Ph，其中n是0-3；R3表示C1-6烷基，-(CH2)p-CN，-(CH2)p-COOH，-(CH2)p-CONHR4R5，-(CH2)pCOR4，-(CH2)q(OR6)2，-(CH2)pOR4，-(CH2)q-CH＝CH-CN，-(CH2)q-CH＝CH-CO2H，-(CH2)p-CH＝CH-CONHR4R5，-(CH2)pNHCOR7或-(CH2)pNR8R9，R4和R5獨(dú)立地是氫或C1-6烷基；R6是C1-6烷基；R7是C1-7烷基，或任選取代的芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基或雜芳基C1-6烷基；R8和R9獨(dú)立地選自氫，C1-6烷基，芳基和芳基C1-6烷基；p是0-4；q是1-4；X1和X2之一是N，另一個(gè)是NR10；且R10是氫，C1-6烷基或C3-7環(huán)烷基；條件是該化合物不是i)2-[5-(2-甲基苯基)-2-丙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，ii)2-[2-(1，1-二甲基乙基)-5-(4-甲氧苯基)-1H-咪唑-4-基]吡啶，iii)2-[2-(1，1-二甲基乙基)-5-苯基-1H-咪唑-4-基]吡啶，iv)2-[5-(3，5-二氯苯基)-2-甲基-1H-咪唑-4-基]吡啶，v)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-甲基-1H-咪唑-4-基]吡啶，vi)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-乙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，vii)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-氨基-1H-咪唑-4-基]吡啶，viii)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-異丙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，ix)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-丙基-1H-咪唑-4-基]吡啶，或x)2-[5-(3，5-二甲基苯基)-2-酰胺基-1H-咪唑-4-基]吡啶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是任選地由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、C1-6烷氧基，C1-6烷硫基和氰基的取代基取代的苯基；或R1是與芳香或非芳香的5-7員環(huán)稠和的苯基或吡啶基，其中所述的環(huán)任選地包含最多3個(gè)獨(dú)立地選自N、O或S的雜原子，且可以任選地由＝O取代。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中R2位于吡啶環(huán)的氮的鄰位。
4.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中R3是C1-6烷基或(CH2)pNHCOR7，其中R7是C1-7烷基，或任選取代的芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基或雜芳基C1-6烷基。
5.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中R10是氫。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，是實(shí)施例1-71定義的任一個(gè)化合物或其藥用鹽。
7.藥物組合物，含有前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，但是無條件iv)至x)，或者其藥用鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
8.抑制哺乳動(dòng)物中TGF-β信號通道的方法，包括對哺乳動(dòng)物，需要該治療的哺乳動(dòng)物，給用治療有效量的權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)中的化合物，但是無條件i)至x)，或者它們的藥用鹽。
9.治療選自慢性腎病，急性腎病，傷口愈合，關(guān)節(jié)炎，骨質(zhì)疏松癥，腎病，充血性心力衰竭，潰瘍，眼病，角膜損傷，糖尿病性腎病，神經(jīng)功能損傷，阿耳茨海默氏疾病，營養(yǎng)疾病，動(dòng)脈粥樣硬化，腹膜和皮下粘連，任何其中纖維變性是主要因素的疾病，以及再狹窄的疾病的方法，包括對需要該治療的哺乳動(dòng)物，給用治療有效量的權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)中記載的化合物，但是無條件i)至x)，或其藥用鹽。
10.抑制哺乳動(dòng)物中基質(zhì)形成的方法，包括對哺乳動(dòng)物，給用治療有效量的權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的化合物，但是無條件i)至x)，或者其藥用鹽。
全文摘要
通式(I)化合物及其藥用鹽，式(I)中R
文檔編號A61P27/02GK1404478SQ0180537
公開日2003年3月19日 申請日期2001年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月21日
發(fā)明者拉雷米·M·加斯特, 邁克爾·S·哈德利, 約翰·D·哈林, 弗蘭克·P·哈林頓, 賈格·P·希爾, 托馬斯·D·海特曼, 安德魯·H·佩恩 申請人:史密斯克萊·比奇曼公司