專利名稱：具有α一糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物、其制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物、其制備方法及用途，特別涉及一種具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物、其制備方法及用途。
隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，人類生活方式的改變和飲食結(jié)構(gòu)的改變，糖尿病患者(主要是II型糖尿病)的數(shù)量迅速增加，其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈逐漸增高趨勢，其死亡率已居腫瘤和心血管疾病之后的第3位。糖尿病(Diabetes Mellitus)是一類由遺傳、環(huán)境、免疫等因素引起的、具有明顯異質(zhì)性的慢性高血糖及并發(fā)癥所組成的綜合癥，主要分為I型和II型兩種。I型即胰島β細胞破壞而導(dǎo)致的胰島素絕對缺乏，也稱胰島素依賴型(IDDM)。II型系由于胰島素抵抗并胰島素分泌不足所致，亦稱非胰島素依賴型(NIDDM)。目前，糖尿病的治療主要分飲食療法、運動療法、胰島素療法、口服降糖藥及中醫(yī)藥治療等。在II型糖尿病的治療中口服降糖藥占主要地位，主要分為三類磺脲類、雙胍類和α-糖苷酶抑制劑等。α-糖苷酶抑制劑的作用機理是競爭性地抑制小腸刷狀緣的近腔上皮細胞內(nèi)的α-糖苷酶，延緩碳水化合物的消化吸收，延遲雙糖、低聚糖和多糖的吸收，延遲并減輕餐后血糖的升高。α-糖苷酶包括胰淀粉酶、麥芽糖酶和蔗糖酶等，在體內(nèi)承擔(dān)將多糖轉(zhuǎn)化為單糖的功能。其抑制劑的研究始于60年代，當時從鏈球菌的發(fā)酵培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)了2-羥甲基-3，4，5，6-四羥基吡啶，命名為Nojirimycin(野尻霉素)。其后又不斷有新的抑制劑被發(fā)現(xiàn)，大多為生物堿類。各類α-糖苷酶抑制劑結(jié)構(gòu)上共同的特點是存在擬單糖結(jié)構(gòu)，亦即有一個多羥基的六元環(huán)或五元環(huán)結(jié)構(gòu)。以六元環(huán)為例，其可為環(huán)己烷、環(huán)己烯、吡喃或吡啶等。若環(huán)中帶有氮原子則為生物堿類，這是一類最主要的α-糖苷酶抑制劑，結(jié)構(gòu)上大致可分為七類多羥哌啶類、四氫吡咯類、二氫吡咯類、吲哚拉西啶類、吡咯雙烷類和托烷類等。除生物堿類外，某些黃酮類、環(huán)烷類等也具有抑制α-糖苷酶活性的效應(yīng)。中國專利ZL98107147介紹了“用噻唑烷二酮、促胰島素分泌劑和α-葡糖苷酶抑制劑治療糖尿病”，但該專利沒有涉及到如何從中藥中提取和制造α-葡糖苷酶抑制劑。中國有豐富的中藥資源，如何利用這個資源與西醫(yī)相結(jié)合，采用中藥提取而不是化工合成的方法制造藥品是一個非常好的中西醫(yī)結(jié)合的方向。桑白皮為?？浦参锷?Morus L.)的除去栓皮的根皮。性味甘，寒。入肺、脾經(jīng)。功用主治為瀉肺平喘，行水削腫。治肺熱咳喘，吐血，水腫，腳氣，小便不利。近年來對其植物化學(xué)研究亦十分深入，其所含黃酮類成分已得到揭示，其甙類成分也逐漸受到重視。成分含有如含傘形內(nèi)酯、東莨素和黃酮成分的桑根皮素(Morusin)、桑素(Mulberrin)、桑色烯(Mulberrechromene)、環(huán)桑素(Cyclomulberrin)、環(huán)桑色烯(Cyclomulberrochromene)等，并含有鞣質(zhì)和粘液素。藥理作用有利尿作用、降壓作用和其他如鎮(zhèn)靜作用。但其中生物堿類成分研究較少。蓋因其脂溶性生物堿成分含量極少，以氯仿萃取幾乎得不到東西，因其所含的是極性較大親水性強的多羥基吡啶類。七十年代日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)桑白皮中生物堿主要含1-羥甲基-2，3，4-三羥基吡啶，此即1-脫氧野尻霉素(1-deoxy-nojirimycin)，又稱moranoline。后又進一步發(fā)現(xiàn)了moranoline的系列衍生物。至于桑白皮治療糖尿病的記載和研究較少。《上海常用中草藥》中記載治糖尿病桑白皮四錢、枸杞子五錢。煎湯服。桑葉為?？浦参锷orus alba L.的干燥葉。性味甘，苦，寒。歸肺、肝經(jīng)。具有疏散風(fēng)熱，清肺潤燥，清肝名目。用于風(fēng)熱感冒，頭暈頭痛，目赤昏花。成分主要含有甾體及三萜類化合物；黃酮化合物；香豆精化合物揮發(fā)油；生物堿；氨基酸；有機酸和其他化合物等。藥理作用主要抗菌作用、降血糖作用、抑制腸肌等作用。桑椹為桑科植物桑Morus alba L.的干燥果穗。性味甘、酸、寒，歸心、肝、腎經(jīng)。具有補血滋陰，生津潤燥。用于眩暈耳鳴，心悸失眠，須發(fā)早白，津傷口渴，內(nèi)熱消渴，血虛便秘。成分含有蘆丁、維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸、生物堿等。藥理作用具有激發(fā)淋巴細胞轉(zhuǎn)化作用。
本發(fā)明的目的就在于提供一種具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物，就是一種由桑白皮、桑葉和桑葚制備的總生物堿，其制備方法是從中藥中提取，該中藥提取物作為α-糖苷酶抑制劑應(yīng)用于治療糖尿病、肥胖癥及愛滋等疾病。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物，涉及一種具有降血糖活性的中藥有效部位，是由桑白皮、桑葉和桑葚制備的總生物堿，主要包括多羥基生物堿。制備方法包括以下步驟原藥材經(jīng)過適當粉碎后，用水，甲醇或乙醇，或含水醇類在靜態(tài)或動態(tài)下，室溫或加熱(包括回流)提取，提取溶劑量為原藥重量的5-12倍，可重復(fù)提取1-3次，然后濾去藥渣，濾液在常壓或減壓、動態(tài)狀態(tài)下濃縮至一定濃度后，通過醇沉、絮凝等方法，使雜質(zhì)沉淀，再離心或過濾(包括常壓、減壓、微濾、超濾等)除去不溶物。清液上陽離子交換樹脂，以蒸餾水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用0.2～1N的氨水溶液洗脫，洗脫液濃縮后，上陰離子交換樹脂，收集液濃縮，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，或?qū)⑹占褐苯訃婌F干燥成型。提取溶劑以水最好，溫度為80～90℃，以80℃為佳，水用量為10～12倍藥材重量，以10倍最好。醇沉能有效去處提取液所含鞣質(zhì)、多糖等雜質(zhì)，可加入乙醇使總濃度為50％～80％，以70％為好。絮凝效果更好，能更好降低有效成分的丟失。陽離子交換樹脂可采用苯乙烯系樹脂，如001×4，001×7，Amberlite IR120等，也可使用大孔型樹脂，如Amberlite 252等。洗脫液以氨水最好，可用濃度0.2～1N，以0.5N最好。陰離子交換樹脂也可采用苯乙烯系樹脂，如201×4，201×7等，或大孔樹脂，如Ambersep 900等。以上制備的干粉，為淺黃色固體物質(zhì)，易吸潮，味甘。其中所含生物堿約為總重量的50％～60％。以上制備的總生物堿干粉，加入相關(guān)輔料，可制成片劑、膠囊等劑型。1)片劑包括普通片、薄膜片、腸溶片等。用上述總生物堿干粉，加入適量稀釋劑如淀粉、糊精、甘露醇、微晶纖維等，適量的粘合劑如水、乙醇、淀粉漿、明膠、纖維素等，適量的崩解劑如干淀粉、羧甲基淀粉鈉、底取代羥丙基纖維素、海藻酸鈉等，以及適量的潤滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇等，按常規(guī)濕法制粒，干燥后整?；蚋煞ㄖ屏：髩浩?。如是包薄膜衣片，可用成膜材料如纖維素類、聚乙二醇類等，按常規(guī)包衣，分裝入密閉瓶或鋁塑板中。2)膠囊劑包括普通膠囊劑、腸溶膠囊劑等。將上述總生物堿干粉加入適量輔料如碳酸鈣、甘露醇、氧化鎂、微粉硅膠等，適量潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂、乙二醇酯，聚硅酮類等，以及適量的黏合劑如礦物油、食油等，混合成干粉或制成顆粒，填充入膠囊，分裝如密閉鋁塑包裝中。以上各劑型可加入適量甜味劑，如D-木糖、木糖醇、麥芽糖醇、甜葉菊素、天冬甜母等。
本發(fā)明的有益效果是由于桑具有良好的降血糖作用，其物質(zhì)基礎(chǔ)和機理多樣，但其中主要的一種物質(zhì)即其所含的總生物堿(多羥基生物堿)，機理為抑制α-糖苷酶活性。本發(fā)明所得之總生物堿，作為α-糖苷酶抑制劑，具有療效好、成本低等特點。可用于治療糖尿病、肥胖癥、愛滋病。
實例l桑白皮總生物堿提取實例桑白皮1000g，加水8L，微沸狀態(tài)下保溫2小時，過濾。濾渣再加6L水，微沸狀態(tài)下保溫2小時，過濾。合并兩次濾液，濃縮，絮凝，離心。離心后清液過Amberjet1200C陽離子交換柱，0.5N氨水溶液洗脫，收集硅鎢酸反應(yīng)陽性部分，收集液濃縮，再上201×4陰離子交換柱，收集不吸附部分，濃縮，干燥，得5g總生物堿。片劑的制作包括普通片、薄膜片、腸溶片等。用上述總生物堿干粉，加入適量稀釋劑如淀粉、糊精、甘露醇、微晶纖維等，適量的粘合劑如水、乙醇、淀粉漿、明膠、纖維素等，適量的崩解劑如干淀粉、羧甲基淀粉鈉、底取代羥丙基纖維素、海藻酸鈉等，以及適量的潤滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇等，可加入適量甜味劑，如D-木糖、木糖醇、麥芽糖醇、甜葉菊素、天冬甜母等。按常規(guī)濕法制粒，干燥后整?；蚋煞ㄖ屏：髩浩?。如是包薄膜衣片，可用成膜材料如纖維素類、聚乙二醇類等，按常規(guī)包衣，分裝入密閉瓶或鋁塑板中。
實例2桑葉總生物堿提取實例桑葉1000g，加水10L，浸泡過夜，煮沸后95℃保溫2小時，過濾。濾渣再加8L水，煮沸后95℃保溫2小時，過濾。合并兩次濾液，濃縮，絮凝，離心。離心后清液過Amberlite IR120C陽離子交換柱，以0.5N氨水溶液洗脫，收集液濃縮后再上201×7陰離子交換柱，收集不吸附部分，濃縮，干燥，得3g總生物堿。膠囊劑的制作包括普通膠囊劑、腸溶膠囊劑等。將上述總生物堿干粉加入適量輔料如碳酸鈣、甘露醇、氧化鎂、微粉硅膠等，適量潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂、乙二醇酯，聚硅酮類等，以及適量的黏合劑如礦物油、食油等，并可加入適量甜味劑，如D-木糖、木糖醇、麥芽糖醇、甜葉菊素、天冬甜母等?；旌铣筛煞刍蛑瞥深w粒，填充入膠囊，分裝如密閉鋁塑包裝中。
實例3體外糖苷酶抑制實驗大鼠α-1，4糖苷酶提自大鼠小腸上段黏膜正常雄性大鼠，禁食12小時，斷頭處死后取小腸上段(自十二指腸10cm)，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗兩次，取粘膜層，按1∶10用0.5mmol/l NaCl-KCl緩沖液稀釋后勻漿，20000g離心30分鐘(4℃)，沉淀用預(yù)冷的生理鹽水稀釋，500g離心10分鐘(4℃)，上清分裝供實驗。以pNP(p-硝基苯酚)法測定其活性，在405nm波長處測定反應(yīng)中生成的硝基苯酚，硝基苯酚的形成速率與酶的活性成正比，以不加酶上清液及受試藥物的反應(yīng)體系為空白管調(diào)零，以不加受試藥物反應(yīng)體系管為100％，并設(shè)拜唐平(Acarbose)為陽性對照管，加入實例1、實例2所得總生物堿(以相應(yīng)緩沖液溶解)，計算該總生物堿對酶的抑制百分率。結(jié)果得到當酶活性抑制率為20％-80％時，上述總生物堿的濃度為20-1000μg/ml，結(jié)果見

圖1，其中，紅點和黑點分別表示不同酶濃度。
圖1.桑白皮總生物堿體外抑制糖苷酶活性的效應(yīng)實例4STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠糖耐量實驗Wistar大鼠體重為180～200g，禁食后尾靜脈注射STZ 50mg/kg，72小時后測血糖值11.1mol/L以上者進行實驗，分組時各組動物平均血糖值相差不大于6mol/L，大鼠共分為6組，即空腹組、對照組、拜糖平組、小劑量組、中劑量組、大劑量組，均禁食過夜，除了空腹組灌生理鹽水外，其他各組均灌胃淀粉5g/kg，同時對照組灌胃生理鹽水、拜糖平組灌胃拜糖平50mg/kg、小劑量組灌胃桑白皮總生物堿100mg/kg、中劑量組灌胃200mg/kg、大劑量組灌胃400mg/kg。給藥后60min測血糖水平，結(jié)果見表1。
表1.桑白皮總生物堿對STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠糖耐量的影響
#P＜0.01v.s.空腹組，*P＜0.01v.s.對照組實例5正常小鼠糖耐量實驗昆明種雄性小鼠體重為22～25g，共分為6組，即空腹組、對照組、拜糖平組、小劑量組、中劑量組、大劑量組，均禁食過夜，除了空腹組灌生理鹽水外，其他各組均灌胃淀粉10g/kg，同時對照組灌胃生理鹽水、拜糖平組灌胃拜糖平50mg/kg、小劑量組灌胃桑白皮總生物堿100mg/kg、中劑量組灌胃200mg/kg、大劑量組灌胃400mg/kg。給藥后60min測血糖水平，結(jié)果見表2。
表2.桑白皮總生物堿對正常小鼠糖耐量的影響
#P＜0.01v.s.空腹組，*P＜0.01v.s.對照組實例6正常小鼠餐后血糖時間曲線昆明種雄性小鼠體重為22～25g，禁食過夜，灌胃淀粉10g/kg同時灌胃桑白皮總生物堿200mg/kg，給藥后0min、30min、60min、90min、120min測血糖水平，結(jié)果見圖2。
圖2.桑白皮總生物堿對小鼠餐后不同時間血糖的影響按以下方法控制其質(zhì)量1)生物堿鑒別反應(yīng)取干粉少量，于適量水中溶解，加入數(shù)滴6N HCl，滴加硅鎢酸試液，有灰白色至黃色沉淀生成；或滴加碘化鉍鉀試液，有棕黃色沉淀生成。2)酸堿滴定取上述干粉0.5克，溶于20ml冰乙酸中，以0.1N高氯酸為滴定液，測得其中N原子當量數(shù)。再取上述干粉0.5克，溶于20ml水中，以0.1N NaOH為滴定液，測得其中羧酸根當量數(shù)。N原子當量數(shù)減去羧酸根當量數(shù)應(yīng)為生物堿的摩爾數(shù)，生物堿分子量以180計，所算得的生物堿重量應(yīng)不低于總重量的30％。
權(quán)利要求
1.一種具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物，其特征在于中藥提取物是由桑白皮、桑葉和桑葚制備的總生物堿。
2.一種具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征在于制備工藝包括以下步驟原藥材經(jīng)過適當粉碎后，用水，甲醇或乙醇，或含水醇類在靜態(tài)或動態(tài)下，室溫或加熱(包括回流)提取，提取溶劑量為原藥重量的5-12倍，可重復(fù)提取1-3次，然后濾去藥渣，濾液在常壓或減壓、動態(tài)狀態(tài)下濃縮至一定濃度后，通過醇沉、絮凝等方法，使雜質(zhì)沉淀，再經(jīng)離心或過濾(包括常壓、減壓、微濾、超濾)除去不溶物，清液上陽離子交換樹脂，以蒸餾水洗盡不吸附的雜質(zhì)，再用洗脫液洗脫，洗脫液濃縮后，上陰離子交換樹脂，收集液濃縮，制成干粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是提取溶劑以水最好，溫度為80～90℃，以80℃為佳，水用量為10～12倍藥材重量，以10倍最好。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是可加入乙醇使總濃度為50％～80％，以70％為好。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是陽離子交換樹脂可采用苯乙烯系樹脂、大孔型樹脂中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是采用的苯乙烯系樹脂為001×4，001×7，Amberlite IR120中的一種，使用大孔型樹脂為Amberlite252。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是洗脫液以氨水最好，可用濃度0.2～1N，以0.5N最好。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是陰離子交換樹脂采用苯乙烯系樹脂、大孔樹脂中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是采用苯乙烯系樹脂為201×4，201×7中的一種，大孔樹脂為Ambersep900。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是干粉的制備采用真空干燥、冷凍干燥、收集液直接噴霧干燥成型中的一種。
11.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是制備的干粉其中所含生物堿約為總重量的50％～60％。
12.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是制備的干粉加入相關(guān)輔料，可制成片劑、膠囊等劑型。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是片劑的制作包括普通片、薄膜片、腸溶片等，用上述總生物堿干粉，加入適量稀釋劑如淀粉、糊精、甘露醇、微晶纖維等，適量的粘合劑如水、乙醇、淀粉漿、明膠、纖維素等，適量的崩解劑如干淀粉、羧甲基淀粉鈉、底取代羥丙基纖維素、海藻酸鈉等，以及適量的潤滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇等，可加入適量甜味劑，如D-木糖、木糖醇、麥芽糖醇、甜葉菊素、天冬甜母等，按常規(guī)濕法制粒，干燥后整粒或干法制粒后壓片，如是包薄膜衣片，可用成膜材料如纖維素類、聚乙二醇類等，按常規(guī)包衣，分裝入密閉瓶或鋁塑板中。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物的制備方法，其特征是膠囊劑的制作包括普通膠囊劑、腸溶膠囊劑等，將上述總生物堿干粉加入適量輔料如碳酸鈣、甘露醇、氧化鎂、微粉硅膠等，適量潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂、乙二醇酯，聚硅酮類等，以及適量的黏合劑如礦物油、食油等，并可加入適量甜味劑，如D-木糖、木糖醇、麥芽糖醇、甜葉菊素、天冬甜母等，混合成干粉或制成顆粒，填充入膠囊，分裝如密閉鋁塑包裝中。
15.一種具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物用于治療糖尿病、肥胖癥、愛滋病。
全文摘要
一種具有α－糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物、其制備方法及用途,系桑白皮、桑葉、桑枝或桑葚粉碎后用醇和/或水提取、絮凝、濃縮后,經(jīng)色譜法純化而得。獲得的是上述各藥材中所含之總生物堿。用于治療糖尿病、肥胖癥、愛滋病。
文檔編號A61P3/04GK1338275SQ0111319
公開日2002年3月6日 申請日期2001年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月29日
發(fā)明者蔣劍平, 黃哲, 邵玲, 張燕群, 張鷹峰 申請人:上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司