專利名稱：新型il－8受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制CXC趨化因子例如IL-8、Gro、NAP-2、ENA-78等作用于其受體的新型化合物，以及涉及制備方法和制得藥物的用途。
IL-8原來(lái)是因其能吸引及活化多形核白細(xì)胞(嗜中性粒細(xì)胞)而被鑒定出來(lái)的。近來(lái)，已證明在不同的組織或細(xì)胞例如巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及表皮細(xì)胞甚至嗜中性粒細(xì)胞中可快速誘導(dǎo)IL-8表達(dá)，以對(duì)促炎細(xì)胞因子例如IL-1α或β或TNFα或其它促炎劑如LPS做出反應(yīng)(Van Damme J.，白介素-8及相關(guān)的趨化細(xì)胞因子(Interleukin-8 andrelated chemotactic cytokines)；1994；細(xì)胞因子手冊(cè)(The cytokinesHandbook)，第二版，A.W.湯姆森主編，學(xué)院出版社，倫敦，第185-208頁(yè))。除此之外，某些文獻(xiàn)資料顯示在某些涉及嗜中性粒細(xì)胞炎性病理狀況下全身性高的IL-8含量，這提示IL-8及其他相同家族的趨化因子可能為嗜中性粒細(xì)胞活化的基本媒介(Van Damme，白介素-8及相關(guān)的趨化細(xì)胞因子(Interleukin-8 and related chemotactic cytokines)；1994；細(xì)胞因子手冊(cè)(The Cytokines Handbook)，第三版，A.W.湯姆森主編，學(xué)院出版社，倫敦，第271-311頁(yè))。
Gro-α、Gro-β、Gro-γ及NAP-2如同IL-8一樣屬于趨化因子家族，這些蛋白質(zhì)亦已給定不同的名稱。因此，Gro-α、β及γ分別稱為MGSA(黑素瘤生長(zhǎng)刺激活性)a、b及g(Richmond及Thomas，J.Cell Physiol.，1986，129，375-384；Cheng等，J.Immunol.，1992，148，451-456)。所有這些趨化因子均屬于α趨化因子組別，其在CXC單位上游處具有ELR單位(天門冬氨酸-亮氨酸-精氨酸)，此為該趨化因子亞組的特性。這些趨化因子均可結(jié)合至2型受體或CXCR2。
屬于具有七個(gè)與G蛋白偶聯(lián)的跨膜區(qū)域的受體家族的兩個(gè)IL-8受體已被鑒定并克隆A型IL-8受體(IL-8RA)或CXCR1，其與IL-8及GCP-2結(jié)合具有強(qiáng)親和性，及B型IL-8受體(IL-8RB)或CXCR2，其具有IL-8、GCP-2、Gro-α、Gro-β、Gro-γ及NAP-2作為專一性的配體(Ponath，Exp.Opin.Invest.Drugs，1998，7，1-18)，這兩種受體的氨基酸序列同源性為77％。各種文獻(xiàn)已證明在類風(fēng)濕多關(guān)節(jié)炎、敗血性休克、哮喘、膠稠性黏液病、心肌梗塞及牛皮癬中的IL-8含量異常高(Baggiolini等，F(xiàn)EBS Lett.，1992，307，97-101；Mille及Krangel，Crit.Rev.Immunol.，1992，12，17-46；Oppenheim等，Annu.Rev.Immunol.，1991，9，617-648；Seitz等，J.Clin.Invest.，1991，87，463-469；Miller等，Am.Rev.Resp.Dis.，1992，146，427-432；Donnelly等，Lancet，1993，341，643-647)。IL-8似乎涉及肺部局部缺血/再灌流癥狀(Sekido等，Nature，1993，365，654-657)。抗IL-8抗體具有阻斷體外由IL-8誘導(dǎo)的兔子嗜中性粒細(xì)胞遷移的能力，可預(yù)防兔子肺部局部缺血/再灌流過程導(dǎo)致的組織傷害。IL-8似乎在心肌缺氧/再灌流的改變上扮演重要的角色(Kukielka等，J.Clin.Invest.，1995，95，89-103)。
近來(lái)，另外的研究己證明IL-8-中和抗體在兔子中由內(nèi)毒素誘導(dǎo)的胸膜炎模型中具良好效應(yīng)(Broadus等，J.Immunol.，1994，152，2960-2967)。在酸灌輸至兔子肺部后所誘發(fā)的肺病模型(Folkesson等，J.Clin.Invest.，1995，96，107-116)及以內(nèi)毒素所誘發(fā)的急性呼吸窘迫綜合癥的模型(Yokoi等，Lab.Invest.，1997，76，375-384)中，利用IL-8中和抗體已證明IL-8與肺炎的關(guān)系，及其所造成的傷害。其他報(bào)告已證明IL-8-中和抗體在動(dòng)物皮膚病、關(guān)節(jié)炎及腎小球性腎炎模型中相似的良好效應(yīng)(Akahoshi等，Lymphokine and Cytokine Res.，1994，13，113-116；Nishimura等，J.Leukoc.Biol.，1997，62，444-449；Wada等，J.Exp.Med.，1994，180，1135-1140)。除此之外，去除編碼與人類2型受體(CXCR2)同源的鼠科IL-8受體的基因會(huì)產(chǎn)生缺少白介素-8受體的小鼠(Cacalano等，Science，1994，265，682-684)。雖然這些小鼠是健康的，但是其嗜中性粒細(xì)胞的特性已產(chǎn)生變化。事實(shí)上，在其腹膜內(nèi)注射巰基乙酸鹽后，其遷移至腹膜的能力已減少。
所有這些結(jié)果可推測(cè)IL-8家族的趨化因子在某些炎性狀況下，是嗜中性粒細(xì)胞及其它類型細(xì)胞例如內(nèi)皮細(xì)胞遷移及活化的重要媒介。除此之外，IL-8家族趨化因子亦已證明其在腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤轉(zhuǎn)移及各式癌癥的腫瘤血管發(fā)生中均扮演重要角色(Hebert及Baker，CancerInvest.，1993，11，746-750；Richards等，Am.J.Surg.，1997，174，507-512)。
對(duì)IL-8家族趨化因子特性的研究提示，在某些病理狀況下，能夠拮抗這些趨化因子至其受體上的化合物具有減弱其作用結(jié)果的潛力。因此，WO 96-18393已公開源自1-芐基吲哚-2-羧酸的化合物可結(jié)合至IL-8受體上，從而具有抑制效應(yīng)。近來(lái)，根據(jù)WO 99-06354，源白尿或硫脲的化合物亦可為IL-8受體拮抗劑。
發(fā)明目的本發(fā)明提出新型非-肽化合物，其具有與IL-8及其它相同家族趨化因子的CXCR2受體相結(jié)合的特性，表現(xiàn)為這些受體的拮抗劑。
根據(jù)本發(fā)明，化合物的這種特性使得它們作為藥物的活性成分用于預(yù)防或治療下列疾病成為可能與IL-8及相同家族趨化因子受體有關(guān)的疾病例如類風(fēng)濕多關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或畸形皮炎、與病理的血管發(fā)生有關(guān)的疾病(如癌癥)、腫瘤細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移(例如黑素瘤)、哮喘、慢性肺衰竭、急性呼吸窘迫綜合癥、大腸炎、克羅恩氏病、潰瘍性直腸炎、胃潰瘍、敗血癥休克、內(nèi)毒素休克、革蘭氏陰性敗血病、毒性休克癥、腦局部缺血、心或腎局部缺血/再灌流癥狀、腎小球性腎炎、血栓癥、阿爾茨海默氏病、自體移植宿主反應(yīng)或異體移植后排斥作用。概要描述根據(jù)本發(fā)明所提出的新穎化合物具有以下結(jié)構(gòu)式 其中X為雙鍵-C＝C-或硫原子；R1為鹵素、硝基、三氟甲基或C1-C3烷基；R2、R3及R4各為獨(dú)立的氫原子、鹵素、C1-C3烷基、硝基、三氟甲基或氰基，或R2及R3與所連接的芳香環(huán)共同形成稠合芳香環(huán)；及n等于2或3。
其它與本發(fā)明有關(guān)的新型產(chǎn)物為式I化合物的酯類及所述化合物與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿所形成的加成鹽。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及式I化合物或其鹽在制備用于預(yù)防或治療與IL-8受體活化有關(guān)疾病的藥物中的用途，例如類風(fēng)濕多關(guān)節(jié)炎、急性呼吸窘迫綜合癥、牛皮癬、克羅恩氏病，更廣泛言之，任何與大量嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)的病癥。詳細(xì)說(shuō)明如前所述，根據(jù)本發(fā)明化合物具有前述式I結(jié)構(gòu)。根據(jù)取代基R1至R4的定義，鹵素意為氟、氯及溴原子，優(yōu)選氟及氯原子。C1-C3烷基意為甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基及環(huán)丙基。
本發(fā)明優(yōu)選化合物是結(jié)構(gòu)式(Ia)所示的化合物及其酯和與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿形成的加成鹽。 其中R1為鹵素、硝基、三氟甲基或C1-C3烷基；R2及R3各為獨(dú)立的氫原子、鹵素或C1-C3烷基、或它們與其連接的苯環(huán)共同形成稠合的芳香環(huán)；及n等于2或3。
根據(jù)本發(fā)明更特別優(yōu)選式I的化合物，其中X為雙鍵-C＝C-，R1為氯原子，R2和/或R3各為氯或氟原子或甲基，優(yōu)選位于苯環(huán)位置的間位和/或?qū)ξ?，及R4為氫原子。
稠合芳香環(huán)意指一個(gè)環(huán)與另一個(gè)帶有取代基R2、R3及R4的芳香環(huán)形成含有2個(gè)稠合芳香環(huán)的基團(tuán)，例如2-萘基或1-萘基，而優(yōu)選2-萘基。
式I化合物為酸，可與有機(jī)醇酯化，特別是C2-C3脂肪醇，例如乙醇或異丙醇(或1-甲基乙醇)，酯優(yōu)選乙酯。
式I化合物可與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿鹽化。無(wú)機(jī)堿意指堿金屬的氫氧化物，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰，或堿土金屬例如石灰。有機(jī)堿意指一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)胺、氨基醇，某些非-毒性氮雜環(huán)和堿性氨基酸。鹽優(yōu)選鈉鹽或鉀鹽，及賴氨酸、精氨酸或2-氨基-2-甲基丙烷-1，3-二醇所產(chǎn)生的鹽。
式I化合物尤其可以采用包括下列步驟的方法制備a)在無(wú)水溶劑例如二氯甲烷中，有路易斯酸例如氯化鋁存在下，于-10及+50℃溫度間，使式II 的環(huán)二酸酐與式III的芳香衍生物 進(jìn)行弗瑞德-克來(lái)福特(Friedel-Crafts)反應(yīng)后，產(chǎn)生式IV的化合物， 其中式II中n等于2或3；式III中X為-C＝C-或硫原子，而R2、R3及R4各為獨(dú)立的氫原子、鹵素或C1-C3烷基，或R2和R3與其連接的芳香環(huán)一起形成稠合芳香環(huán)；式IV X、R2、R3、R4及n定義如前；b)在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)條件下，酯化上述式IV化合物，例如與化學(xué)式ROH(R＝Me或Et)脂肪醇進(jìn)行酯化，產(chǎn)生式V的酯， 其中X、R、R2、R3、R4及n如前定義；c)有氯化鋅存在下，在溶劑例如乙酸中，在溫度20至80℃間，式V化合物與式VI的苯肼 進(jìn)行費(fèi)歇爾(Fischer)反應(yīng)后，產(chǎn)生式Ie所示的吲哚衍生物， 其中式VI中R1為鹵素、三氟甲基或C1-C3烷基；式Ie中X、R、R1、R2、R3、R4及n定義如前；d)利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的反應(yīng)方法，例如與氫氧化鈉的醇水溶液反應(yīng)，將上述式Ie化合物的酯基團(tuán)水解，可產(chǎn)生式I對(duì)應(yīng)的酸衍生物， 其中X、R1、R2、R3、R4及n定義如前；及e)若有需要，將式I化合物與堿性無(wú)機(jī)或有機(jī)化合物反應(yīng)，可制備式I酸的加成鹽。
制備R1為硝基的式(I)化合物可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)方法，將R1為氫的對(duì)應(yīng)化合物硝化而成。
式(Ia)化合物可借助上述方法，利用X為雙鍵-C＝C-，R4為氫原子，而R2及R3各自為獨(dú)立的氫原子、鹵素或C1-C3烷基或與其連結(jié)的苯環(huán)一起形成稠合芳香環(huán)的式(III)芳香衍生物制備而成。
下式的酰氯 與上述式(III)芳香衍生物進(jìn)行弗瑞德-克來(lái)福特反應(yīng)后，亦可直接制得上述式(V)化合物。
制備式(I)化合物的另一種方法包括下列反應(yīng)a)將溴原子引入式VII所示吲哚衍生物的2-位 其中R為甲基，R1為氫、三氟甲基、硝基或C1-C3烷基，及n為2或3，特別是在溶劑例如四氯化碳中與N-溴丁二酰亞胺反應(yīng)后，產(chǎn)生式VIII的化合物 其中n、R及R1未變；b)在溶劑中，有催化劑例如四(三苯膦)-鈀存在下，特別是通過與式IX的硼酸反應(yīng)， 引入取代或未取代的芳香基，以替換式VIII化合物2-位的溴原子，產(chǎn)生式Ie的化合物， 其中式IX中R2、R3及R4各為獨(dú)立的氫原子、C1-C3烷基、氯原子、氟原子、三氟甲基或氰基，及X為雙鍵-C＝C或硫原子；式Ie中X、R、R1、R2、R3、R4及n定義如前；和c)利用與上述方法步驟d)中所建議的類似方法，水解式Ie化合物的酯基團(tuán)，產(chǎn)生式I化合物 其中X、R1、R2、R3、R4及n定義如前。
此方法還有另一種變化，步驟b)包括按照本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)方法，將式VIII化合物與含有硝化芳香環(huán)的錫衍生物例如三甲基(4-硝基苯基)錫反應(yīng)，可形成式I化合物，其中R2、R3或R4為硝基。
制備例I6-(4-氟苯基)-6-氧代-己酸甲酯將2.59克(19.4×10-3摩爾)的氯化鋁溶于4毫升二氯甲烷中，制成懸浮液。冷卻至-5℃，逐漸加入溶于3毫升二氯甲烷中的0.97毫升(10.3×10-3摩爾)氟苯和1.31毫升(8.4×10-3摩爾)6-氯-6-氧代己酸甲酯的混合物，溫度維持在-4及-7℃之間。而后讓溫度回升至20℃，15小時(shí)后，混合物在酸化的冰水中水解。用二氯甲烷萃取，以水洗滌萃取所得的有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥后減壓濃縮。此法回收的2克粗制品以硅膠層析法純化，利用石油醚/乙酸乙酯混合物(96/4)為洗脫液，可產(chǎn)生1.26克白色粉末狀所預(yù)期產(chǎn)物(收率＝63％)。
M.p.＝58-59℃制備例II6-(3，4-二氯苯基)-6-氧代-己酸甲酯以1，2-二氯苯為起始物質(zhì)，依循制備例I相似的步驟，可得收率79％赭色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝41-44℃制備例III6-(2-萘基)-6-氧代-己酸甲酯以萘為起始物質(zhì)，依循制備例I相似的步驟，可得收率53％淺褐色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝58-60℃制備例IV5-(4-氟苯基)-5-氧代-戊酸將22.32克(0.167摩爾)氯化鋁溶于35毫升二氯甲烷中，制成懸浮液。冷卻至0℃，慢慢加入溶于20毫升二氯甲烷中的8.3克(0.0728摩爾)戊二酸酐(二氫-2H-吡喃-2，6(3H)-二酮)和8.4毫升(0.0895摩爾)氟苯的混合物。室溫下，攪拌混合物15小時(shí)，然后于酸化冰水中水解。過濾沉淀產(chǎn)物，以水洗滌，而后在減壓下干燥。粗制品于90毫升乙酸乙酯中進(jìn)行再結(jié)晶，可得8.8克淺褐色結(jié)晶形式的預(yù)期產(chǎn)物(收率＝57.5％)。
M.p.＝134-136℃制備例V5-(4-氯苯基)-5-氧代-戊酸以氯苯為起始物質(zhì)，依循制備例IV相似的步驟，可得收率39％淺色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝108-110℃制備例VI5-(4-甲基苯基)-5-氧代-戊酸以甲苯為起始物質(zhì)，依循制備例IV相似的步驟，可得收率34％淺色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝131-133℃制備例VII5-(4-氟苯基)-5-氧代-戊酸乙酯將根據(jù)制備例IV所制得的8.67克(41.7×10-3摩爾)酸溶于80毫升乙醇中，制成懸浮液，并加入1.33毫升純硫酸。混合物攪拌回流5小時(shí)。隨后在減壓下濃縮所得的反應(yīng)介質(zhì)，并重新溶解于乙醚。先用水洗滌有機(jī)相，然后用稀釋的氫氧化鈉溶液洗滌，再用水洗滌。經(jīng)過硫酸鎂干燥后，減壓去除溶劑，可得9.65克淡橘黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物(收率＝97％)。
M.p.＝46-47℃制備例VIII5-(4-氯苯基)-5-氧代-戊酸乙酯以根據(jù)制備例V所制得的酸為起始物質(zhì)，依循制備例VII相似的步驟，可得收率87％棕色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝45-48℃制備例IX5-(4-甲基苯基)-5-氧代-戊酸乙酯以根據(jù)制備例VI所制得的酸為起始物質(zhì)，依循制備例VII相似的步驟，可得收率65％棕色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝36-38℃實(shí)施例15-溴-2-苯基-1H-吲哚-3-丁酸a)ε-[(E)-2-(4-溴苯基)亞肼基]苯己酸乙酯將1.91克(8.55×10-3摩爾)4-溴苯基肼氫氯酸鹽及0.73克(8.9×10-3摩爾)醋酸鈉溶于17毫升水中，制成混合物，并加入2.05毫升(35.8×10-3摩爾)醋酸。隨后將此混合物攪拌加熱至70℃，而后慢慢加入溶于27毫升水中的2.0克(8.54×10-3摩爾)6-苯基-6-氧代-己酸乙酯懸浮液。于70-80℃下攪拌反應(yīng)混合物45分鐘，并繼續(xù)于室溫下攪拌12小時(shí)，而后用50毫升乙酸乙酯萃取兩次。以水洗滌有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥后減壓濃縮，可得3.38克預(yù)期的化合物，直接用于下一步驟。
b)5-溴-2-苯基-1H-吲哚-3-丁酸將0.6克氯化鋅及上述步驟a)所制得的1.78克化合物溶于4.4毫升乙酸中，制成混合物。將此反應(yīng)介質(zhì)于75-85℃下加熱3小時(shí)，而后冷卻至室溫(約20℃)。加入20毫升水，而后加入40毫升乙酸乙酯。分離水相，并以30毫升的乙酸乙酯再萃取，用水洗滌所合并的有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥后減壓濃縮，可得1.74克油狀產(chǎn)物(所預(yù)期酸的酯)，將其重新溶解于10毫升含10％氫氧化鈉的乙醇溶液中。混合物回流30分鐘，而后冷卻至20℃。加入40毫升水，并在40-45℃減壓下去除乙醇。用10毫升乙酸乙酯洗滌殘余的堿性水相，而后用稀鹽酸溶液酸化至pH1，并用75毫升乙酸乙酯萃取兩次。以水洗滌有機(jī)相，干燥和減壓濃縮后可得1.8克粗制品，其經(jīng)硅膠層析法純化，利用己烷/乙酸乙酯混合物(7/3)作為洗脫液；此純化可產(chǎn)生600毫克粉紅色固態(tài)形式的預(yù)期酸(收率＝38％)。
M.p.＝155-157℃實(shí)施例25-氯-2-苯基-1H-吲哚-3-丙酸以4-氯苯基肼及5苯基-5-氧代-戊酸乙酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例1相似的方法，可得收率11％白色固態(tài)形式的預(yù)期酸。
M.p.＝167℃實(shí)施例35-氯-2-苯基-1H-吲哚-3-丁酸以4-氯苯基肼為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例1相似的方法，可得收率19％白色固態(tài)形式的預(yù)期酸。
M.p.＝167-170℃實(shí)施例45-氟-2-苯基-1H-吲哚-3-丁酸以4-氟苯基肼為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例1相似的方法，可得收率15％淺褐色固態(tài)形式的預(yù)期酸。
M.p.＝156-157℃實(shí)施例55-(三氟甲基)-2-苯基-1H-吲哚-3-丁酸以4-(三氟甲基)苯基肼為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例1相似的方法，可得收率12％橘黃色固態(tài)形式的預(yù)期酸。
M.p.＝144℃制備例X5-氯-2-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-丙酸乙酯將根據(jù)制備例VII所得的酯13.9克(40.3×10-3摩爾)、10.8克(60.4×10-3摩爾)4-氯苯基肼氫氯酸鹽及5.5克(40.3×10-3摩爾)氯化鋅溶于80毫升醋酸，制備成混合物。將混合物加熱至65-70℃，并在此溫度下攪拌18小時(shí)。冷卻后，過濾反應(yīng)介質(zhì)，將濾液在冷水中水解。用150毫升乙酸乙酯萃取沉淀的有機(jī)化合物2次。用水洗滌所得的有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥，并于減壓下濃縮，可得15克粗制品，其于乙醚/石油醚混合物中進(jìn)行再結(jié)晶。所得8.2克產(chǎn)物再經(jīng)硅膠層析法純化，以甲苯/乙酸乙酯混合物(95/5)為洗脫液，可產(chǎn)生黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物(收率＝50％)。
M.p.＝104-105℃實(shí)施例65-氯-2-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-丙酸將根據(jù)制備例X所得500毫克(1.45×10-3摩爾)的酯溶于10毫升二噁烷中，制成混合物。加入3毫升3N氫氧化鈉溶液，并將反應(yīng)介質(zhì)回流2小時(shí)。而后在減壓下去除溶劑，并將殘余物重新溶解于30毫升水中。以1N鹽酸酸化所得的溶液。用50毫升乙酸乙酯萃取所形成的酯2次。用水洗滌合并的有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥后減壓濃縮。粗制品于乙酸乙酯/石油醚混合物中進(jìn)行再結(jié)晶，可得200毫克淺褐色粉末形式的預(yù)期酸(收率＝43.5％)。
M.p.＝153-154℃制備例XI5-氯-2-(4-氯苯基)-1H-吲哚-3-丙酸乙酯以根據(jù)制備例VIII所得的化合物為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得收率35％棕色油狀形式的預(yù)期酯。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.09(br s，1H)；7.90(d，J＝8.4Hz，1H)；7.58(d，J＝2.2Hz，1H)；7.47(m，2H)；7.43(d，J＝8.4Hz，1H)；7.28(d，J＝8.4Hz，1H)；7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.2Hz，1H)；4.16(q，J＝7Hz，2H)；3.18(t，J＝8Hz，2H)；2.65(t，J＝8Hz，2H)；1.23(t，J＝7Hz，3H)。實(shí)施例7
5-氯-2-(4-氯苯基)-1H-吲哚-3-丙酸以根據(jù)制備例XI所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得收率40％淺褐色固態(tài)形式的預(yù)期酸。
M.p.＝187-190℃制備例XII5-氯-2-(4-甲基苯基)-1H-吲哚-3-丙酸乙酯以根據(jù)制備例IX所得的化合物為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得收率97％棕色糊狀形式的預(yù)期酯。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.1(br s，1H)；7.58(d，J＝1.8Hz，1H)；7.42(dt，J＝8.1Hz，J＝1.8Hz，2H)；7.29(d，J＝8Hz，2H)；7.25(d，J＝8.8Hz，1H)；7.14(dd，J＝8.8Hz，J＝1.8Hz，1H)；4.20(q，J＝7Hz，2H)；3.20(t，J＝8Hz，2H)；2.7(t，J＝8Hz，2H)；1.23(t，J＝7Hz，3H)。實(shí)施例85-氯-2-(4-甲基苯基)-1H-吲哚-3-丙酸以根據(jù)制備例XII所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得收率40％淺褐色固態(tài)形式的預(yù)期酸。
M.p.＝177-178℃制備例XIII5-氯-2-(4-氯苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以4-氯-ε-氧苯己酸甲酯為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得收率90％淺棕色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝47-48℃實(shí)施例95-氯-2-(4-氯苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XIII所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得收率20％淺褐色固態(tài)形式的預(yù)期酸。
M.p.＝194-197℃制備例XIV5-氯-2-(3，4-二氯苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以制備例II所得的化合物為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得收率26％粉紅色固態(tài)形式的預(yù)期酯。
M.p.＝285℃(分解)實(shí)施例105-氯-2-(3，4-二氯苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XIV所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得收率39％棕色固態(tài)形式的預(yù)期酸。
M.p.＝187-188℃制備例XV5-甲基-2-苯基-1H-吲哚-3-丁酸乙酯以ε-氧苯己酸乙酯及4-甲基苯基肼氫氯酸鹽為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得收率58％棕色固態(tài)形式的預(yù)期酯。
M.p.＝96-98℃實(shí)施例115-甲基-2苯基-1H-吲哚-3-丁酸以制備例XV所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得收率93％棕色固態(tài)形式的預(yù)期酸。
M.p.＝150-152℃制備例XVI5-氯-2-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以根據(jù)制備例I所得的化合物為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得收率86％棕色油狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝285℃(分解)1H NMR(CDCl3，300MHz)δ11.4(br s，1H)；7.66(d，J＝8Hz，1H)；7.64(d，J＝8Hz，1H)；7.63(d，J＝2.4Hz，1H)；7.38(d，J＝8.8Hz，1H)；7.35(d，J＝8.0Hz，1H)；7.33(d，J＝8Hz，1H)；7.09(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H)；3.55(s，3H)；2.8(t，J＝7.3Hz，2H)；2.37(t，J＝7.3Hz，2H)；1.85(qu，J＝7.3Hz，2H)。實(shí)施例125-氯-2-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XVI所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得收率53％棕色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝190-192℃制備例XVII5-氯-2-(2-萘基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以根據(jù)制備例III所得的化合物為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得收率65％橘黃色糊狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.2(br s，1H)；8.01(s，1H)；7.91(m，3H)；7.68(d，J＝8.1Hz，1H)；7.62(s，1H)；7.53(m，2H)；7.31(dd，J＝8.8Hz，J＝2.2Hz，1H)；7.16(dt，J＝6.6Hz，J＝2Hz，1H)；3.55(s，3H)；2.98(t，J＝7.3Hz，2H)；2.37(t，J＝7.3Hz，2H)；2.05(qu，J＝7.3Hz，2H)。實(shí)施例135-氯-2-(2-萘基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XVII所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得收率79％棕色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝180-185℃實(shí)施例142-苯基-5-硝基-1H-吲哚-3-丁酸在0-5℃下，將內(nèi)含1.19克(4×10-3摩爾)硝酸鈉的50毫升濃硫酸溶液加至含有3.67克(13.15×10-2摩爾)2-苯基-1H-吲哚-丁酸的200毫升濃硫酸溶液中。5℃攪拌20分鐘，而后將反應(yīng)介質(zhì)倒入水及冰的混合液中。過濾所形成之黃色沉淀物，用水及少量石油醚洗滌濾紙。減壓下干燥產(chǎn)物，并以硅膠層析法純化產(chǎn)物，利用己烷/乙酸乙酯混合物(1/1)為洗脫液，可得1.3克收率30％黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝145℃實(shí)施例155-氯-2-(4-氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸鈉將根據(jù)實(shí)施例12所得的1克(3.15×10-3摩爾)酸溶解于100毫升水中，制成懸浮液，并加入3.15毫升1N氫氧化鈉溶液。攪拌混合物30分鐘，以0.45μm濾膜過濾。濾液冷凍干燥后，可得1.05克細(xì)白粉末形式的預(yù)期產(chǎn)物(收率＝98％)。
M.p.＝160-162℃制備例XVIII5-(3，4-二氯苯基)-5-氧代-戊酸乙酯以5-(3，4-二氯苯基)-5-氧代-戊酸為起始物質(zhì)，依循制備例VII相似的方法，可得收率47％棕色油狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
NMR(300MHz，CDCl3)δ8.05(d，J＝1.5Hz，1H)；7.8(dd，J＝1.5Hz，J＝8.1Hz，1H)；7.56(d，J＝8.1Hz，1H)；4.13(q，J＝7.4Hz，2H)；3.02(t，J＝6.6Hz，2H)；2.42(t，J＝6.6Hz，2H)；2.05(qu，J＝6.6Hz，2H)；1.25(t，J＝7.4Hz，3H)。制備例XIX5-氯-2-(3，4-二氯苯基)-1H-吲哚-3-丙酸乙酯以根據(jù)制備例XVIII所得的化合物為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得(收率＝55％)橘黃色糊狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
NMR(300MHz，CDCl3)δ8.1(s，1H)；7.64(d，J＝1.5Hz，1H)；7.58(d，J＝2.2Hz，1H)；7.55(d，J＝8.8Hz，1H)；7.39(dd，J＝2.2Hz，J＝8.8Hz，1H)；7.28(d，J＝8.8Hz，1H)；7.17(dd，K＝1.4Hz，J＝8.8Hz，1H)；4.12(q，J＝8.1Hz，2H)；3.18(m，2H)；2.64(m，2H)；1.25(t，J＝8.1Hz，3H)。實(shí)施例165-氯-2-(3，4-二氯苯基)-1H-吲哚-3-丙酸以根據(jù)制備例XIX所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝36％)灰白色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝150-152℃制備例XX5-氯-2-(4-溴苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以6-(4-溴苯基)-6-氧代-己酸甲酯為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得(收率＝89％)橘色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝124-126℃實(shí)施例175-氯-2-(4-溴苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以制備例XX所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝93％)白色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝194-195℃制備例XXI5-氯-2-(4-氰基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯將根據(jù)制備例XX所得的480毫克(1.18×10-3摩爾)酯、870毫克(9.7×10-3摩爾)氰化亞銅及2毫升N-甲基-2-吡咯烷酮制成混合物，并加熱回流3小時(shí)。而后冷卻反應(yīng)介質(zhì)，加入10毫升水。室溫下攪拌混合物15分鐘，而后加入8毫升1，2-乙二胺。其后混合物以甲苯萃取三次，有機(jī)相合并后干燥并減壓濃縮。以硅膠層析法純化蒸發(fā)后的殘余物，采用己烷/乙酸乙酯混合物(80/20；v/v)作為洗脫液，可得220毫克細(xì)白粉末形式的預(yù)期產(chǎn)物(收率＝53％)。
M.p.＝182-185℃實(shí)施例185-氯-2-(4-氰基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以制備例XXI所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝22％)淡黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝214-215℃制備例XXII6-(3，4-二氟苯基)-6-氧代-己酸甲酯以1，2-二氟苯為起始物質(zhì)，依循制備例I相似的方法，可得(收率＝46％)黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝41-43℃制備例XXIII5-氯-2-(3，4-二氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以制備例XXII所得的化合物為起始物質(zhì)，依循制備例X相似的方法，可得(收率＝70％)白色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝127-128℃實(shí)施例195-氯-2-(3，4-二氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以制備例XXIII所得的化合物為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝86％)白色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝185-186℃制備例XXIV2-溴-5-氯-1H-吲哚-3-丁酸甲酯將2.25克(8.94×10-3摩爾)5-氯-1H-吲哚-3-丁酸甲酯溶于85毫升四氯化碳中制成溶液，并加入1.75克(9.83×10-3摩爾)N-溴丁二酰亞胺。反應(yīng)混合物攪拌回流1小時(shí)，而后冷卻至室溫并過濾。用四氯化碳洗滌固體，減壓下濃縮濾液。蒸發(fā)后的殘余物以硅膠層析法純化，利用石油醚/乙酸乙酯混合物(9/1；v/v)作為洗脫液，可產(chǎn)生2.11克淺褐色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物(收率71％)。
M.p.＝98℃制備例XXV5-氯-2-(4-氯-3-氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯根據(jù)制備例XXIV所得的0.4克(1.21×10-3摩爾)化合物及0.32克(1.83×10-3摩爾)4-氯-3-氟苯基硼酸溶于14毫升乙醇及14毫升甲苯中制成溶液。攪拌加入0.16克(3.75×10-3摩爾)氯化鋰，70毫克(6×10-5摩爾)四(三苯膦)鈀及3毫升(3×10-3摩爾)1M碳酸鈉溶液。隨后將反應(yīng)混合物攪拌回流14小時(shí)，減壓下去除溶劑。殘余固體以硅膠層析法純化，采用石油醚/乙酸乙酯混合物(9/1；v/v)作為洗脫液，可得225毫克淡黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物(收率＝55％)。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ11.5(s，1H)；7.73(m，1H)；7.65(s，1H)；7.61(s，1H)；7.50(d，J＝8.5Hz，1H)；7.35(d，J＝8.4Hz，1H)；7.12(d，J＝8.4Hz，1H)；3.56(s，3H)；2.84(m，2H)；2.37(m，2H)；1.83(m，2H)。實(shí)施例205-氯-2-(4-氯-3-氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以制備例XXV所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝53％)淡黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝182-186℃制備例XXVI
5-氯-2-(3，4-二甲基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以3，4-二甲基苯基硼酸為起始物質(zhì)，依循制備例XXV相似的方法，可得(收率＝77％)結(jié)晶不良黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.02(s，1H)；7.57(d，J＝2.0Hz，1H)；7.32-7.20(m，4H)；7.13(dd，J＝2.0Hz，J＝8.5Hz，1H)；3.63(s，3H)；2.88(t，J＝7.3Hz，2H)；2.34(m，8H)；2.01(qu，J＝7.3Hz，2H)。實(shí)施例215-氯-2-(3，4-二甲基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XXVI所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝90％)黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝130-134℃制備例XXVII5-氯-2-(3-氯-4-氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以3-氯-4-氟苯基硼酸為起始物質(zhì)，依循制備例XXV相似的方法，可得(收率＝31％)橘黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝90-95℃實(shí)施例225-氯-2-(3-氯-4-氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XXVII所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝77％)灰白色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝171-175℃制備例XXVIII2-溴-5-氯-1H-吲哚-3-丁酸乙酯以5-氯-1H-引哚-3-丁酸乙酯為起始物質(zhì)，依循制備例XXIV相似的方法，可得(收率＝94％)淺褐色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝108-110℃制備例XXIX5-氯-2-(3-氯苯基)-1H-吲哚-3-丁酸乙酯以根據(jù)制備例XXVIII所得的化合物及4-氯苯基硼酸為起始物質(zhì)，依循制備例XXV相似的方法，可得(收率＝83％)黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝79-81℃實(shí)施例235-氯-2-(3-氯苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XXIX所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝64％)淺褐色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝115-116℃制備例XXX5-氯-2-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以4-(三氟甲基)苯基硼酸為起始物質(zhì)，依循制備例XXV相似的方法，可得(收率＝29％)棕色糊狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ11.57(s，1H)；7.86(s，4H)；7.40(d，J＝8.5Hz，1H)；7.14(d，J＝8.5Hz，1H)；4.02(q，J＝7.0Hz，2H)；2.87(t，J＝6.6Hz，2H)；2.35(t，J＝6.6Hz，2H)；1.86(qu，J＝6.6Hz，2H)；1.15(t，J＝7.0Hz，3H)。實(shí)施例245-氯-2-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XXX所得的酯為起始物質(zhì)，根據(jù)實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝65％)白色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝132-134℃制備例XXXI
5-氯-2-(4-氟-3-甲基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸乙酯以4-氟-3-甲基苯基硼酸為起始物質(zhì)，依循制備例XXIX相似的方法，可得(收率＝87％)淡黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝118-120℃實(shí)施例255-氯-2-(4-氟-3-甲基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XXXI所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝88％)淡黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝154-155℃制備例XXXII5-氯-2-(4-氟-3-甲基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以4-氯-3-甲基苯基硼酸為起始物質(zhì)，依循制備例XXV相似的方法，可得(收率＝88％)黃色糊狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.01(s，1H)；7.57(d，J＝2.2Hz，1H)；7.43(d，J＝8.5Hz，1H)；7.40(d，J＝1.5Hz，1H)；7.30(dd，J＝2.2Hz，1H)；7.23(d，J＝8.5Hz，1H)；7.17(dd，J＝1.5Hz，J＝8.5Hz，1H)；3.63(s，3H)；2.86(t，J＝6.7Hz，2H)；2.46(s，3H)；2.34(t，J＝6.7Hz，2H)；2.00(qu，J＝6.7Hz，2H)。實(shí)施例265-氯-2-(4-氯-3-甲基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XXXII所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝86％)黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝173-174℃制備例XXXIII5-氯-2-(4-硝基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸乙酯制備200毫克(0.58×10-3摩爾)2-溴-5-氯-1H-吲哚-3-丁酸乙酯、498毫克(1.74×10-3摩爾)三甲基(4-硝基苯基)錫、140毫克(0.46×10-3摩爾)三苯胂、108毫克(0.12×10-3摩爾)三(二亞芐基丙酮)二鈀及12毫升二噁烷的混合物，將此反應(yīng)介質(zhì)于50℃攪拌加熱6天，冷卻后加入12毫升水，并以乙醚萃取混合物。隨后用水洗滌有機(jī)相，干燥并減壓濃縮。殘余物以硅膠層析法純化，采用石油醚/乙酸乙酯(85/15；v/v)作為洗脫液。內(nèi)含所要化合物的級(jí)分再經(jīng)反相C18-接枝的硅膠層析法純化，采用乙腈/水混合物(7/3；v/v)作為洗脫液，可得70毫克黃色糊狀形式的預(yù)期化合物(收率＝31％)。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ11.70(s，1H)；8.38(d，J＝8.8Hz，2H)；7.93(d，J＝8.8Hz，2H)；7.72(d，J＝1.8Hz，1H)；7.42(d，J＝8.8Hz，1H)；7.18(dd，J＝1.8Hz，J＝8.8Hz，1H)；4.05(q，J＝7.0Hz，2H)；2.95(m，2H)；2.40(m，2H)；1.85(m，2H)；1.16(t，J＝7.0Hz，3H)。實(shí)施例275-氯-2-(4-硝基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XXXIII所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝99％)黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝234-235℃制備例XXXIV5-氯-2-(3-噻吩基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯以3-噻吩基硼酸為起始物質(zhì)，依循制備例XXV相似的方法，可得(收率＝28％)黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝65-68℃實(shí)施例285-氯-2-(3-噻吩基)-1H-吲哚-3-丁酸以根據(jù)制備例XXXIV所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝67％)黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝145-150℃制備例XXXV5-氯-1H-引哚-3-丙酸甲酯將232毫克(1.04×10-3摩爾)5-氯-1H-吲哚-3-丙酸溶于14毫升乙醇中制成溶液，并于室溫下加入4.4毫升(8.8×10-3摩爾)2M(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷的己烷溶液，攪拌反應(yīng)介質(zhì)15分鐘，加入1克硅膠，而后過濾混合物。減壓下濃縮濾液，殘余物以硅膠層析法純化，采用甲基環(huán)己烷/乙酸乙酯混合物(2/1；v/v)作為洗脫液，可得225毫克黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物(收率＝91％)。
M.p.＝86℃制備例XXXVI2-溴-5-氯-1H-吲哚-3-丙酸甲酯以根據(jù)制備例XXXV所得的酯為起始物質(zhì)，依循制備例XXIV相似的方法，可得(收率＝77％)棕色油狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ11.90(s，1H)；7.58(d，J＝1.9Hz，1H)；7.28(d，J＝8.5Hz)；7.08(dd，J＝1.9Hz，J＝8.5Hz，1H)；3.56(s，3H)；2.91(t，J＝7.5Hz，2H)；2.57(t，J＝7.5Hz，2H)。制備例XXXVII5-氯-2-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-吲哚-3-丙酸甲酯以根據(jù)制備例XXXVI所得的溴化衍生物為起始物質(zhì)，依循制備例XXX相似的方法，可得(收率＝35％)無(wú)色油狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.11(s，1H)；7.76(d，J＝8.2Hz，2H)；7.68(d，J＝8.2Hz，2H)；7.62(s，1H)；7.32(d，J＝8.6Hz，1H)；7.21(d，J＝8.6Hz，1H)；3.65(s，3H)；3.22(t，J＝8Hz，2H)；2.68(t，J＝8Hz，2H)。實(shí)施例295-氯-2-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-吲哚-3-丙酸以根據(jù)制備例XXXVII所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝76％)淺褐色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝218℃制備例XXXVIII5-氯-2-(3，5-二甲基-4-氟苯基)-1H-吲哚丁酸甲酯以3，5-二甲基-4-氟苯基硼酸為起始物質(zhì)，依循制備例XXV相似的方法，可得(收率＝45％)黃色黏稠油狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
NMR(300MHz，DMSO)δ11.35(s，1H)；7.60(s，1H)；7.35(m，3H)；7.10(d，1H)；3.60(s，3H)；2.82(t，2H)；2.40(t，2H)；2.35(s，6H)；1.85(m，2H)。
利用與制備苯基硼酸衍生物相似的方法，以收率22％制得3，5-二甲基-4-氟苯基硼酸，即依序先將n-BuLi與5-溴-2-氟-1，3-二甲基苯反應(yīng)，而后硼酸異丙酯與5-溴-2-氟-1，3-二甲基苯反應(yīng)。
NMR(300MHz，DMSO)δ7.95(s，1H)；7.50(d，2H)；6.50(s，1H)；2.20(s，3H)。實(shí)施例305-氯-2-(3，5-二甲基-4-氟苯基)-1H-吲哚丁酸以根據(jù)制備例XXXVIII所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝71％)淡黃色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝58℃制備例XXXIX5-氯-2-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-1H-吲哚丁酸甲酯以4-氯-3-(三氟甲基)苯基硼酸為起始物質(zhì)，依循制備例XXV相似的方法，可得(收率＝41％)淺褐色油狀形式的預(yù)期產(chǎn)物。
NMR(300MHz，DMSO)δ11.62(s，1H)；8.05(s，1H)；7.95(d，1H)；7.85(d，1H)；7.70(s，1H)；7.40(d，1H)；7.15(d，1H)；3.60(s，3H)；2.85(t，2H)；2.35(t，2H)；1.85(m，2H)。實(shí)施例315-氯-2-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-1H-吲哚丁酸以根據(jù)制備例XXXIX所得的酯為起始物質(zhì)，依循實(shí)施例6相似的方法，可得(收率＝88％)白色固態(tài)形式的預(yù)期產(chǎn)物。
M.p.＝158-160℃表I為上述化合物結(jié)構(gòu)的總結(jié)表I
*R2和R3與苯基形成2-萘基**實(shí)施例12的鈉鹽。生物活性以下列體外試驗(yàn)測(cè)定本發(fā)明所描述的化合物對(duì)趨化因子IL-8及Gro-α的抑制效應(yīng)A)IL-8受體結(jié)合試驗(yàn)碘125標(biāo)記的人IL-8([125I]-IL-8)得自NEN(Les Ulis)，比活為2.200居里/毫摩爾。重組人CXCR2受體表達(dá)于HEK293細(xì)胞(ATCC，CRL-1573)、K-562細(xì)胞(ATCC，CCL-243)或THP-1細(xì)胞(ATCC，TIB-202)。HEK293細(xì)胞在含有4.5克/升葡萄糖、10％胎牛血清、1％Glutamax、1％非必需氨基酸(NEM)、1mM丙酮酸鈉、100IU/毫升青霉素及100微克/毫升鏈霉素的DMEM(GIBCO)培養(yǎng)液中培養(yǎng)。K-562及THP-1細(xì)胞則在含有10％胎牛血清、1％非必需氨基酸(NEM)、1mM丙酮酸鈉、100IU/毫升青霉素及100微克/毫升鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液(GIBCO)中培養(yǎng)。當(dāng)生長(zhǎng)達(dá)80％匯合時(shí)，這些細(xì)胞才進(jìn)行試驗(yàn)。
根據(jù)先前所描述的方案制備細(xì)胞膜(Bastian等，Br.J.Pharmacol.，1997，122，393-399)，但是其中的均質(zhì)緩沖液以含有20mM Tris、1.2mMMgSO4、0.1mM EDTA及25mM NaCl的鹽溶液替代，緩沖pH至8.0。競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)是于室溫下在1毫升的96孔板中進(jìn)行，終體積為0.25毫升。將細(xì)胞膜以20mM雙-三丙烷及0.4mM Tris-HCl的溶液稀釋，該溶液被緩沖pH至8.0，含有1.2mM MgSO4、0.1mM EDTA、25mM NaCl及0.03％CHAPS，與濃度遞減的測(cè)試化合物(自100μM至0.01nM)和150pM[125I]-IL-8一起溫育。非專一性結(jié)合在300nM未標(biāo)記IL-8存在下測(cè)定。室溫溫育60分鐘后，在GF/C Whatman濾紙上真空快速過濾以終止反應(yīng)，該濾紙用前已于+4℃下，與1％(w/v)聚乙烯亞胺及0.5％(w/v)BSA溶液溫育了1小時(shí)。用內(nèi)含25mM NaCl、1mM MgSO4、0.5mM EDTA及10mM Tris-HCl、pH7.4的溶液洗滌濾紙。利用γ計(jì)數(shù)器測(cè)定保留在濾紙上的放射性。
本發(fā)明所描述的化合物的親合力亦是由整個(gè)細(xì)胞結(jié)合試驗(yàn)測(cè)定。將轉(zhuǎn)染的THP-1或K-562細(xì)胞懸浮于結(jié)合試驗(yàn)緩沖液中(PBS，pH7.4，含有0.5％(w/v)BSA，但不含鈣及鎂)，其濃度為2.5×106細(xì)胞/毫升。競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)在含有1毫升的96孔板中進(jìn)行，終體積為0.25毫升。0.5×106細(xì)胞與濃度遞減的測(cè)試化合物(100μM至0.01nM)及150pM[125I]-IL-8一起溫育。非專一性結(jié)合在300nM非放射性標(biāo)記的趨化因子存在下測(cè)定。+4℃溫育90分鐘后，在GF/C Whatman濾紙上真空快速過濾以終止反應(yīng)，該濾紙用前與3％(w/v)的聚乙烯亞胺溶液溫育1小時(shí)。用內(nèi)含0.5MNaCl、pH 7.4的PBS溶液洗滌濾紙。利用γ計(jì)數(shù)器測(cè)定保留在濾紙上的放射性。
本發(fā)明所描述的式I化合物試驗(yàn)濃度為10μM時(shí)，可抑制[125I]-IL-8結(jié)合至CXCR2受體達(dá)至少95％。
B)鈣通量測(cè)定評(píng)估本發(fā)明化合物對(duì)由IL-8或Gro-α誘導(dǎo)的鈣通量的影響。
表達(dá)重組CXCR2受體的THP-1細(xì)胞、以1％(v/v)DMSO(二甲基亞砜)分化的U937細(xì)胞或Eol3細(xì)胞與螢光指示劑Fura-2 AM以濃度為5μM于37℃下溫育1小時(shí)。培養(yǎng)期后，清洗細(xì)胞，并以濃度1×106細(xì)胞/毫升懸浮在鹽溶液中，該鹽溶液含有136mM NaCl、4.7nM KCl、1.2mMMgSO4、1.6mM CaCl2、1.2mM KH2PO4、11mM葡萄糖及5mMHEPES、pH7.4。該細(xì)胞懸浮液(2毫升)置于石英杯中，并在340nm及380nm交替激發(fā)后用LS50B分光螢光計(jì)(Perkin-Elmer)于510nm處測(cè)定螢光強(qiáng)度。測(cè)定340nm及380nm激發(fā)后的螢光強(qiáng)度的比值，并根據(jù)下列的公式計(jì)算細(xì)胞內(nèi)鈣濃度[Ca2+]i=Kd(R-Rmin)(Sf2/Sb2)(Rmax-R)]]>其中Kd為Fura-2/鈣復(fù)合物的親和常數(shù)，Rmax為添加1μM離子載體溴-A23187后所測(cè)定的最大熒光強(qiáng)度，Rmin為添加離子載體后，又加入10mM EGTA所測(cè)定的最低比值，而Sf2/Sb2為380nm激發(fā)下分別在Rmin及Rmax處所測(cè)螢光數(shù)值的比值。
穩(wěn)定1分鐘后，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)基礎(chǔ)的鈣濃度，將測(cè)試化合物及對(duì)照媒介加至細(xì)胞中。培養(yǎng)2分鐘后，測(cè)定鈣濃度，用不同的拮抗劑刺激細(xì)胞(IL-8或Gro-α)。鈣濃度測(cè)定2分鐘。
本發(fā)明所描述的式I化合物可抑制因IL-8或Gro-α誘導(dǎo)的鈣釋放。
根據(jù)本發(fā)明化合物活性，由生物試驗(yàn)得知，對(duì)于IL-8具有拮抗作用，并可能用于疾病治療上。
根據(jù)本發(fā)明，建議式I化合物作為藥物活性成分用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物特別是人與IL-8和/或相同家族的趨化因子相關(guān)的疾病，這些疾病的特征一般有大量嗜中性粒細(xì)胞侵入。
通過施用有效量的至少一種式I化合物治療的疾病可包括類風(fēng)濕多關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或畸形皮炎、與血管發(fā)生相關(guān)的疾病(如癌癥)、腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移(例如黑素瘤)、哮喘、慢性肺衰竭、急性呼吸窘迫綜合癥、大腸炎、克羅恩氏病、潰瘍性腸炎、胃潰瘍、敗血癥休克、內(nèi)毒素休克、革蘭氏(-)細(xì)菌敗血病、毒性休克癥、大腦局部缺血、心或腎局部缺血/再灌流癥狀、腎小球腎炎、血栓癥、動(dòng)脈粥樣化、阿爾茨海默氏病、自體移植宿主反應(yīng)或異體移植排斥反應(yīng)。
式I化合物必須施用足夠量以便與IL-8拮抗競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合至受體上?；钚猿煞莸膭┝恳蕾囉谑┯梅绞郊安±頎顩r而定，通常介于0.01至10毫克/公斤之間。式I化合物亦可與其它活性成分一起施用。
在治療用途上，式I化合物通?？梢耘c各種常用賦型劑結(jié)合的形式施用。
所用制劑可為口服形式，例如凝膠膠囊，含有粉末狀或微粉化顆粒的活性成分的片劑，糖漿或溶液，其中活性成分存在于溶液、懸浮液、乳化液或微乳化液。
制劑亦可以局部施用的形式出現(xiàn)，例如乳膏、乳液或經(jīng)皮裝置，例如吸附貼片。活性成分亦可制成皮下、肌肉內(nèi)或靜脈注射方式。
權(quán)利要求
1.衍生自吲哚的化合物，其特征是選自i)下式I的化合物 其中X為雙鍵-C＝C-或硫原子；R1為鹵素、硝基、三氟甲基或C1-C3烷基；R2、R3及R4各為獨(dú)立的氫原子、鹵素、C1-C3烷基、硝基、三氟甲基或氰基，或R2及R3與其所連接的芳香環(huán)共同形成稠合芳香環(huán)；及n等于2或3；和ii)式I化合物的酯及所述化合物與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿所形成的加成鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的衍生自式I所示的吲哚的化合物，其中X為雙鍵-C＝C-，其特征是選自i)下式Ia的化合物 其中R1為鹵素、硝基、三氟甲基或C1-C3烷基；R2和R3各為獨(dú)立的氫原子、鹵素、C1-C3烷基，或其與所連接的苯環(huán)共同形成稠合芳香環(huán)；和n等于2或3；和ii)式I化合物的酯及所述化合物與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿所形成的加成鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于R2為氫原子、氯原子、氟原子或甲基、R3為氯原子或氟原子，及R4為氫原子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其特征在于X為雙鍵-C＝C-，及R2和R3與其所連接的苯環(huán)共同形成萘基。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其特征在于R2及R3與其所連接的苯環(huán)共同形成萘基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于R1為氯原子。
7.一種治療組合物，其特征在于含有與至少一種生理學(xué)上可接受的賦型劑結(jié)合使用的至少一種權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的衍生自式I吲哚的化合物或其鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的衍生自式I吲哚的化合物或其加成鹽的用途，所述化合物或其加成鹽用于制備用于治療或預(yù)防與IL-8和/或相同家族趨化因子過度表達(dá)有關(guān)的疾病的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及抑制CXC趨化因子例如IL－8、Gro、NAP－2、ENA－78等作用于其受體的新型化合物，以及涉及制備方法和制得藥物的用途。根據(jù)本發(fā)明，所述化合物為新型吲哚衍生物，選自i)式(I)化合物，其中X為雙鍵－C＝C－或硫原子；R
文檔編號(hào)A61P29/00GK1391556SQ0081605
公開日2003年1月15日 申請(qǐng)日期2000年11月24日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月25日
發(fā)明者金－路克·帕奎特, 馬汀·巴斯, 迪迪爾·普洛紐, 皮爾·多迪 申請(qǐng)人:法商供應(yīng)工業(yè)公司