專利名稱：大花紅景天有效成分制劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥有效成份的制劑及制備方法，具體涉及大花紅景天有效成份制劑及制備方法。
景天科紅景天屬植物是多年生草本或亞灌木植物，分布在前蘇聯(lián)遠(yuǎn)東地區(qū)及中國(guó)東北、西北、西南等高寒地區(qū)，全世界有90多種，我國(guó)擁有70多種，其中大花紅景天(Rhodiola Crenulata)在我國(guó)儲(chǔ)量很大，主要分布在西藏、四川、云南等高寒山區(qū)。
有學(xué)者對(duì)大花紅景天的成份作過系統(tǒng)研究，目前發(fā)現(xiàn)有近10多個(gè)化合物存在，其中有小分子甙類如紅景天甙(Salidroside)、大花紅天素(Crenulatin)，也有黃酮類如草質(zhì)素甙(rhodinin和rhodiosin)、大花紅景天甙(Crenuloside)、大花紅景天素(黃酮醇與苯丙素相結(jié)合)，以及其它如沒食子酸(gallic acid)、焦棓酸鹽、酪醇(tyrosol)等，還有不少大分子化合物如多糖類，其結(jié)構(gòu)主要由阿拉伯糖和葡萄糖所組成。
由于眾多成份的存在，使得大花紅景天具有較為廣泛的生理活性，它有抗疲勞、抗輻射、抗缺氧、抗衰老、抗寒冷與高溫、降血糖與血脂、調(diào)節(jié)免疫與血壓等作用，這就明確顯示它在運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)、航天醫(yī)學(xué)以及老年醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。
對(duì)于大花紅景天的開發(fā)，目前主要以生藥粉或粗提物的膠囊劑、沖劑、口服液為主，這些制劑質(zhì)量不夠穩(wěn)定，口感不佳，調(diào)味后澀味難以被隱蔽或消除，且未將各有效成份分離、定量，使其功效不明確，僅作為保健品應(yīng)用，使用程度受到限制。
本發(fā)明的目的是采用現(xiàn)代化的分離手段根據(jù)有效成份與功效的關(guān)系將大花紅景天中小分子化合物與大分子化合物予以分離、純化，制得有效成份確切的大花紅景天制劑，并可根據(jù)不同的治療目的選擇使用。
本發(fā)明公開的大花紅景天有效成份制劑是由1．含小分子化合物提取物30～70％和70～30％藥用輔料組成的醫(yī)學(xué)上可接受的各類制劑。其中小分子化合物提取物含總黃酮25～40％，含紅景天甙4～8％。
2．含大分子化合物提取物30～70％和70～30％藥用輔料組成的醫(yī)學(xué)上可接受的各類制劑。其中大分子化合物提取物中含多糖50～90％。
本發(fā)明所述的藥用輔料為制藥業(yè)中常用的藥用輔料如固體制劑所用的輔料為淀粉、糊精、微晶纖維素、磷酸氫鈣、硫酸鈣、羧甲基纖維素、蔗糖、羥丙纖維素、硬脂酸鎂、白碳黑、滑石粉、吡咯酮、乳糖、蔗糖，HPMC等。液體制劑所用的輔料為水、蔗糖、阿斯巴糖、檸檬酸、氯化鈉、維生素C、丙二醇、丙三醇等。
本發(fā)明的另一目的是提供上述大花紅景天有效成份制劑的制備方法。
本發(fā)明的大花紅景天有效成份制劑是通過下述方法制得的1．總浸膏的制備大花紅景天根經(jīng)切片，用水-醇混合劑水乙醇=99∶1～1∶99回流提取1-3次，總?cè)苊搅繛樵幉牡?0至30倍，總提取時(shí)間2至6小時(shí)。得到的藥液可經(jīng)濃縮、真空干燥得到總提取物浸膏。
浸膏提取率為20～40％，其中含總黃酮10～20％，紅景天甙1～3％，多糖10～50％。
2．有效成份的分離、純化(1)小分子化合物的分離。
取上述總浸膏1份，加水5～10份溶解，藥液流經(jīng)裝填有不帶離子交換基團(tuán)的分離介質(zhì)的層析柱，用水10～40份洗脫干凈，洗脫液待處理；然后用30～90％乙醇洗脫層析柱，濃縮乙醇洗脫液，得小分子化合物提取物，其中含總黃酮25～40％，紅景天甙4～8％。
(2)大分子化合物的分離取上述小分子化合物分離中的水洗脫液20份，濃縮至1份，攪拌狀態(tài)下加入95～100％乙醇1～3份，靜止過夜，過濾，濾餅用1份水溶解，加入2％量的活性炭回流15分鐘，趁熱過濾，濾液低溫干燥或噴霧干燥，得淡棕色粉末即為大分子化合物，多糖含量50～90％。
3．有效成份制劑的制備(1)取上述小分子化合物提取物30～70％，加入藥用輔料70～30％，按常規(guī)制劑方法制得片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑等。
(2)取上述大分子化合物提取物30～70％，加入藥用輔料70～30％，按常規(guī)制劑方法制得片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑等。
本發(fā)明所述的不帶離子交換基團(tuán)的分離介質(zhì)是指大孔樹脂、硅膠、聚酰氨、氧化鋁、纖維素、硅藻土、活性碳等。
本發(fā)明所述的小分子化合物是指大花紅景天粗提物中分子量小于2000的各類甙及甙元，主要為酪醇、紅景天甙、黃酮甙、沒食子酸、原兒茶酸、(一)表沒食子兒茶酸3-0-棓酸鹽及其衍生物等。
根據(jù)現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，阿耳茨海默病(早老年癡呆)患者腦組織中脯氨酰內(nèi)肽酶(PEP)活性增加，而該酶參與阿耳茨海默病特有的淀粉樣蛋白生成，因此期待PEP抑制劑能夠成為該病的治療藥。大花紅景天中含有的沒食子酸、棓酸鹽、原兒茶酸等，對(duì)PEP具有顯著抑制作用，其中倍酸類活性可與己報(bào)道的呈最強(qiáng)活性的天然非肽性抑制劑星形孢菌素相匹敵。紅景天中PEP抑制活性成分與該品的提高學(xué)習(xí)記憶力作用有密切關(guān)系。
大花紅景天中黃酮類化合物具有提高大白鼠紅細(xì)胞，肝臟SOD的活性，并有增加心肌超氧化岐化酶(SOD)活性的趨勢(shì)，降低大白鼠血漿、心肌、腦組織中過氧化脂質(zhì)(LPO)含量。近年研究認(rèn)為，LPO通過直接損傷血管內(nèi)皮和使前列腺素代謝失平衡等參與動(dòng)脈硬化的發(fā)生、發(fā)展過程，提高SOD活性，降低LPO水平對(duì)治療冠心病有一定作用。
紅景天中酪醇、紅景天甙等具有抗缺氧作用，能明顯延長(zhǎng)小鼠低壓缺氧環(huán)境條件下存活時(shí)間。具有抗疲勞作用，它能顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間并使抓棒摔落時(shí)間顯著延長(zhǎng)，另外還能增加血液中含氧量，消除血中、肌肉中乳酸堆積，達(dá)到消除疲勞的目的。
本發(fā)明所述的大分子化合物是指大花紅景天總提物中分子量在3000至30000之間的多糖與丹寧，多糖主要是由阿拉伯糖和葡萄糖所組成。
紅景天多糖對(duì)正常和免疫低下小鼠的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化反應(yīng)及自然殺傷(NK)活性均顯示較好的促進(jìn)和恢復(fù)作用，提示它為一種新的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，在免疫功能低下疾病(如腫瘤)的治療中有重要意義。
紅景天多糖顯著降低小鼠正常血糖及腎上腺素、葡萄糖等所致的各種實(shí)驗(yàn)性高血糖，作用有劑量依賴性，同時(shí)它對(duì)血脂也有降低作用。
紅景天多糖具有抗輻射作用，能顯著提高受照小鼠的存活率，對(duì)生物體的造血系統(tǒng)也有明顯保護(hù)作用，其有效程度可與陽(yáng)性藥物鹽酸胱胺相比，這在中藥及天然藥物中是極少見的。
用本發(fā)明大花紅景天有效成分制劑按GB15193-94有關(guān)規(guī)定進(jìn)行安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)，結(jié)果顯示1．急性毒性試驗(yàn)樣品對(duì)雌雄小白鼠的急性經(jīng)口LD50均大于21500mg/kg，以急性毒性半數(shù)致死量毒性分級(jí)，屬無(wú)毒級(jí)物質(zhì)。
2．微核試驗(yàn)結(jié)果陰性。
3．精子畸形試驗(yàn)結(jié)果陰性。
4．Ames試驗(yàn)結(jié)果陰性。
5．30天喂養(yǎng)試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生長(zhǎng)情況良好，血液學(xué)檢查，生化學(xué)檢查，主要臟體比及組織學(xué)檢查結(jié)果與對(duì)照組相比，均無(wú)明顯差異。
用本發(fā)明大花紅景天有效成分制劑進(jìn)行功能試驗(yàn)，結(jié)果顯示具有抗疲勞作用和抗輻射作用。
1．抗疲勞作用1.1．樣品樣品以蒸餾水調(diào)制成各濃度供試。
1.2．劑量設(shè)計(jì)本品人體推薦劑量為每日2.2g/60kg。本實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高三個(gè)劑量組，分別為0.19、0.37、1.1g/kg，另設(shè)空白對(duì)照組(給予蒸餾水)。
1.3．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠，雄性，20-22克，由上海醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物房提供的清潔級(jí)動(dòng)物，合格證號(hào)02-22-1。
1.4．給樣途徑灌胃。
1.5．實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果1.5.1負(fù)重游泳試驗(yàn)取昆明種小白鼠40只，隨機(jī)分為四組，每組10只。按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)喂養(yǎng)28天，于末次灌胃后30分鐘，將小鼠放入水中游泳，水深30cm，水溫25±0.5℃，鼠尾根部負(fù)荷5％體重的鉛皮，記錄小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間。
表1 樣品對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響(X±SD)
*P＜0.05與空白對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)由上表可見，樣品高劑量組與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異。
1.5.2肝糖元測(cè)定取昆明種小白鼠40只，隨機(jī)分為四組，每組10只。按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)喂養(yǎng)28天，于末次灌胃后30分鐘，將小鼠放入30℃水中游泳90分鐘，取出，立刻取鼠肝臟，測(cè)肝糖元。
表2樣品對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后肝糖元的影響(X±SD)
*P＜0.05與空白對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)由上表可見，樣品高劑量組與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異。
1.5.3血乳酸測(cè)定取昆明種小白鼠40只，隨機(jī)分為四組，每組10只。按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)喂養(yǎng)28天后測(cè)血乳酸并在末次給樣后30分鐘，負(fù)重2％(體重)在溫度25-30*(2水中游泳60分鐘，取出，測(cè)血乳酸，熱風(fēng)烘干，安靜30分鐘后，再測(cè)血乳酸。
表3樣品對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸的影響(X±SD)
空白對(duì)照 10 4.5±0.210.5±3.77.6±1.4低劑量10 4.4±0.310.7±2.07.9±1.2中劑量10 4.4±0.110.5±0.87.0±1.0高劑量10 4.3±0.311.0±1.05.2±0.7**P＜0.05與空白對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)由上表可見，樣品高劑量組實(shí)驗(yàn)后30分鐘動(dòng)物血乳酸含量與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異。
1.5.4尿素氮測(cè)定取昆明種小白鼠40只，隨機(jī)分為四組，每組10只。按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)喂養(yǎng)28天，于末次灌胃后30分鐘，將小鼠放入30℃水中游泳90分鐘，取出，熱風(fēng)烘干，使安靜，取鼠血，離心，取血清測(cè)尿素氮。
表4 樣品對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血清尿素氮的影響(X±SD)
*P＜0.05與空白對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)由上表可見，樣品高劑量組與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異。
2．抗輻射作用2.1．樣品樣品以蒸餾水調(diào)制成各濃度，供試。
2.2．動(dòng)物來(lái)源昆明種小白鼠，體重18-22克，雄性，由上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供的清潔級(jí)動(dòng)物，合格證號(hào)02-22-1。
2.3．劑量設(shè)計(jì)本樣品人體推薦劑量為每日2.2g/60kg，本次實(shí)驗(yàn)設(shè)立低、中、高三個(gè)劑量組，分別為0.19、0.37、1.1g/kg，正常對(duì)照組和輻射對(duì)照組均飲用蒸餾水。
2.4．給樣途徑灌胃2.5．實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，受試物組與輻射對(duì)照組均以60Co照射一次，劑量為8GY，照射時(shí)間為8分鐘，照射距離為2米，照射后第二天一半動(dòng)物取血做白細(xì)胞計(jì)數(shù)，另一半動(dòng)物觀察平均存活時(shí)間或30天存活率，正常對(duì)照組取血做白細(xì)胞計(jì)數(shù)并觀察30天存活率。
表5小鼠平均存活時(shí)間(X±SD)
輻射對(duì)照 1010.8±0.6 0低劑量1010.6±0.8 0中劑量1013.9±5.3 0高劑量1014.8±5.9* 10*P＜0.05與輻射對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，樣品高劑量組與輻射對(duì)照組相比，有顯著性差異。
表6 小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)(X±SD)
*P＜0.05與輻射對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，樣品高劑量組的白細(xì)胞計(jì)數(shù)與輻射對(duì)照組相比，有顯著性差異。
試驗(yàn)結(jié)果表明樣品能延長(zhǎng)動(dòng)物負(fù)重游泳時(shí)間，降低動(dòng)物運(yùn)動(dòng)后血乳酸和尿素氮水平，促進(jìn)糖元素儲(chǔ)備；能延長(zhǎng)較高劑量一次性照射后動(dòng)物的平均存活時(shí)間和存活率，升高白細(xì)胞總數(shù)。說(shuō)明本樣品具有抗疲勞和抗輻射作用。
本發(fā)明公開的大花紅景天有效成份制劑，有效成份含量確切，療效顯著，可根據(jù)不同的治療目的選擇使用。本發(fā)明公開的大花紅景天有效成份制劑的制備方法簡(jiǎn)便，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
實(shí)施例1 大花紅景天有效成份總浸膏的制備取大花紅景天10Kg切片，用70％醇80Kg回流提取3小時(shí)，傾出藥液，藥渣內(nèi)再加70％醇70Kg，回流2.5小時(shí)，合并藥液，濃縮，真空干燥得到總提取物浸膏3Kg，其中含總黃酮17％，紅景天甙2.5％，多糖48％。
實(shí)施例2 大花紅景天有效成份小分子化合物提取物的制備取實(shí)施例1總提取物浸膏1份，加水10份溶解，藥液流經(jīng)裝填有大孔樹脂層析柱，用水30份洗脫干凈，洗脫液待處理；然后用90％乙醇洗脫層析柱，濃縮乙醇洗脫液，即得小分子化合物提取物，其中含總黃酮37％，紅景天甙7％。
實(shí)施例3 大花紅景天有效成份大分子化合物提取物的制備取實(shí)施例2中的待處理洗脫液20份，濃縮至1份，攪拌狀態(tài)下加入98％乙醇3份，靜止過夜，過濾，濾餅用1份水溶解，加入2％量的活性炭回流15分鐘，趁熱過濾，濾液低溫干燥或噴霧干燥，得淡棕色粉末即為大分子化合物提取物，多糖含量75％。
實(shí)施例4按配制總量取實(shí)施例2的小分子化合物提取物40％，加入藥用輔料微晶纖維素20％，硫酸鈣10％、糊精10％、淀粉14.7％，羥丙纖維素4％，硬酯酸鎂0.8％，白碳黑0.5％，充分混勻后制粒，按所需劑量分包裝即得顆粒劑。
實(shí)施例5將實(shí)施例4制得的顆粒劑，按所需劑量灌裝于空膠殼中即得膠囊劑。
實(shí)施例6將實(shí)施例4制得的顆粒劑直接壓片，薄膜包衣，即得片劑。
實(shí)施例7按配制總量取實(shí)施例3的大分子化合物提取物55％，加入藥用輔料微晶纖維素20％，淀粉10％，乳糖7.7％，羥丙纖維素6％，硬酯酸鎂0.8％，白碳黑0.5％，充分混勻后制粒，按所需劑量分包裝即得顆粒劑。
實(shí)施例8將實(shí)施例7制得的顆粒劑，按所需劑量灌裝于空膠殼中即得膠囊劑。
實(shí)施例9將實(shí)施例7制得的顆粒劑直接壓片，薄膜包衣，即得片劑。
權(quán)利要求
1.一種大花紅景天有效成份的制劑，其特征在于該有效成份制劑是(1)含小分子化合物提取物30～70％和70～30％藥用輔料組成的醫(yī)學(xué)上可接受的各類制劑；(2)含大分子化合物提取物30～70％和70～30％藥用輔料組成的醫(yī)學(xué)上可接受的各類制劑。
2.一種如權(quán)利要求1所述的大花紅景天有效成份的制劑，其特征在于其中所述的小分子化合物提取物含總黃酮25～40％，含紅景天甙4～8％。
3.一種如權(quán)利要求1所述的大花紅景天有效成份的制劑，其特征在于其中所述的大分子化合物提取物中含多糖50～90％。
4.一種如權(quán)利要求1所述的大花紅景天有效成份制劑的制備方法，其特征在于該制劑由下述步驟制得(1)總浸膏的制備大花紅景天根經(jīng)切片，用水一醇混合劑水乙醇=99∶1～1∶99回流提取1-3次，總?cè)苊搅繛樵幉牡?0至30倍，總提取時(shí)間2至6小時(shí)。得到的藥液可經(jīng)濃縮、真空干燥得到總提取物浸膏；其中含總黃酮10～20％，紅景天甙1～3％，多糖10～50％；(2)有效成份的分離、純化(a)小分子化合物的分離取上述總浸膏1份，加水5～10份溶解，藥液流經(jīng)裝填有不帶離子交換基團(tuán)的分離介質(zhì)的層析柱，用水10～40份洗脫干凈，洗脫液待處理；然后用30～90％乙醇洗脫層析柱，濃縮乙醇洗脫液，得小分子化合物提取物，其中含總黃酮25～40％，紅景天甙4～8％；(b)大分子化合物的分離取上述小分子化合物分離中的水洗脫液20份，濃縮至1份，攪拌狀態(tài)下加入95～100％乙醇1～3份，靜止過夜，過濾，濾餅用1份水溶解，加入2％量的活性炭回流15分鐘，趁熱過濾，濾液低溫干燥或噴霧干燥，得淡棕色粉末即為大分子化合物，多糖含量50～90％；(3)有效成份制劑的制備(a)取上述小分子化合物提取物30～70％，加入藥用輔料70～30％，按常規(guī)制劑方法制得片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑等；(b)取上述大分子化合物提取物30～70％，加入藥用輔料70～30％，按常規(guī)制劑方法制得片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑等。
全文摘要
本發(fā)明涉及大花紅景天有效成分的提取分離及制劑。本發(fā)明公開的大花紅景天有效成分制劑由含小分子化合物的活性成分總黃酮、紅景天甙或大分子化合物的活性成分多糖30～70%和70～30%藥用輔料組成的醫(yī)學(xué)上可接受的各類制劑。本發(fā)明公開的大花紅景天有效成分制劑,有效成分含量確切,療效顯著,可根據(jù)不同的治療目的選擇使用。本發(fā)明公開的大花紅景天有效成分制劑的制備方法簡(jiǎn)便,適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1320440SQ0011542
公開日2001年11月7日 申請(qǐng)日期2000年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月21日
發(fā)明者張國(guó)明, 胡馨 申請(qǐng)人:上海市中藥研究所