專利名稱：制備具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽(cyclodepsipeptides)的新方法，該化合物中的一些是已知的。
通過微生物方法制備各種具有24個(gè)環(huán)原子的環(huán)狀的，含芳基乳酸的方法已經(jīng)被公開，例如PF 1022A,PF 1022B,PF 1022C,PF 1022D和PF 1022E,(參見環(huán)狀縮八肽(cyclooctadepsipeptides)的發(fā)酵PF 1022A來自Mycelia sterilia(FERM Bp-2671；在先名稱FERMP-10504),EP-OS(歐洲專利公開說明書)382173；T.Sasaki等，J.Antibiotics 45,1992,pp.692-697；同一培養(yǎng)物中可分離PF1022B,PF 1022C，和PF 1022D；JP-Pat.5170749；PF 1022E:JP-Pat.6184126)。
PF 1022系列化合物結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示
通過化學(xué)合成的方法制備某些具有24個(gè)環(huán)原子的環(huán)狀的，含芳基乳酸的方法也已被公開，(參見，環(huán)狀縮八肽的全合成JP Pat.5229997；JP Pat.5320148；Makoto Ohyama等，Biosci.Biotech.Biochem.58(6),1994,PP.1193-1194；Makio Kobayshi等，Annu.Rep.Sankyo Res.Lab.46,1994,PP.67-75；Stephen J.Nelson等，J.Antibiotics 47,(11),1994,PP.1322-1327；JScherkenbeck等，Tetrahedron 51(31),1995,PP.8459-8470[PF1022A]；WO 94/19334；WO 95/19053；EP-OS[歐洲專利公開說明書]634 408；EP-OS[歐洲專利公開說明書]626 375；EP-OS[歐洲專利公開說明書]626376)。
已有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)某些具有24個(gè)環(huán)原子的含芳基乳酸的環(huán)縮肽可用作殺體內(nèi)寄生蟲劑(參見例如EP-OS[歐洲專利公開說明書]382；EP-OS[歐洲專利公開說明書]503538；WO 93/19053；EP-OS[歐洲專利公開說明書]0634408；WO 94/19334；WO 95/07272；EP-OS[歐洲專利公開說明書]626375；EP-OS[歐洲專利公開說明書]626376)。
盡管通過化學(xué)合成法可制備在苯基乳酸片段具有各種取代基R1的某些環(huán)縮八肽(參見WO 94/19334；WO 95/19053；EP-OS[歐洲專利公開說明書]634408；EP-OS[歐洲專利公開說明書]626375；EP-OS[歐洲專利公開說明書]626376)，但到目前為止，微生物方法僅可優(yōu)選地得到含未取代的D-苯基乳酸的環(huán)縮八肽(R1=-H；參見PF 1022A,PF 1022B,PF 1022C和PF 1022D)。
除前述的含D-(4-羥基苯基)乳酸的環(huán)縮八肽PF 1022E(R1=4-羥基；參見JP Pat.6184126)的發(fā)酵外，到目前止尚未公開其他含取代的芳基乳酸的環(huán)縮八肽的發(fā)酵制備。
因此本發(fā)明涉及利用Agonomycetales菌株或從其中分離酶催化劑制備具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽的方法。
在本發(fā)明方法中，通式(Ⅰ)具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽
其中R1表示直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，烷氧基，鏈烯氧基，芳基烷氧基，環(huán)烷氧基，烷氨基，二烷氨基，烷羰基，烷羰基氧基，烷氧羰基，烷氨基羰基，二烷氨基羰基，雜芳基羰基，烷氧基磺?；?，烷氨基磺?；榘被酋；榱蚧?，烷基亞磺酰基，烷基磺?；?，雜芳基磺?；骰鶊F(tuán)可任選地被取代，羥基，鹵素，硝基，氨基，羧基，氨基甲酰基，氰基，或者，如果合適，取代的環(huán)氨基，以及R2,R3和R4相互獨(dú)立地表示直鏈或支鏈烷基，任選地被選自下列基團(tuán)取代的雜芳基甲基或芐基，取代基選自氫，直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，烷氧基，鏈烯氧基，芳基烷氧基，環(huán)烷氧基，烷氨基，二烷基氨基，烷羰基，烷羰基氧基，烷氧羰基，烷氨基羰基，二烷基氨基羰基，雜芳基羰基，烷氧基磺酰基，烷氨基磺?；?，二烷基氨基磺?；?，烷硫基，烷基亞磺?；榛酋；s芳基磺?；骰鶊F(tuán)可任選地被取代，羥基，鹵素，硝基，氨基，羧基，氨基甲酰基，氰基，或它可任選地被一個(gè)合適的環(huán)氨基取代，排除如下式(1)化合物，其中R1表示4-羥基，R3表示未取代的芐基而其它基團(tuán)定義如上，通過使a)通式(Ⅱ),(Ⅲ),(Ⅳ)和(Ⅴ)的光學(xué)活性或外消旋的氨基酸
其中R1,R2,R3和R4定義如上，或使b)通式(Ⅵ),(Ⅶ),(Ⅷ)和(Ⅸ)光學(xué)活性或外消旋的2-羥基羧酸
其中R1,R2,R3，和R4定義如上，在合適的營養(yǎng)溶液中的Agonomycetales菌株的存在下或在從該菌株分離出的合成酶存在下，在緩沖系統(tǒng)中反應(yīng)，然后分離得到所需的具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽而被制備。
通式(Ⅰ)的具有24個(gè)環(huán)原子的含芳基乳酸的環(huán)縮肽及其酸加成鹽和金屬鹽絡(luò)合物非常適于控制體內(nèi)寄生蟲，特別適用于醫(yī)療和獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
在通式中獨(dú)立地充當(dāng)或作為基團(tuán)組成部分的任選地取代的烷基指優(yōu)選地具有1到6個(gè)，特別是1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基?？商岬降睦訛槿芜x地被取代的甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，1-甲基丁基，2-甲基丁基，3-甲基丁基，1,2-二甲基丙基，1,1-二甲基丙基，2,2-二甲基丙基，1-乙基丙基，己基，1-甲基戊基，2-甲基戊基，3-甲基戊基，4-甲基戊基，1,2-二甲基丁基，1,3-二甲基丁基，2,3-二甲基丁基，1,1-二甲基丁基，2,2-二甲基丁基，3,3-二甲基丁基，1,1,2-三甲基丙基，1,2,2-三甲基丙基，1-乙基丁基和2-乙基丁基。優(yōu)選的基團(tuán)為甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基和叔丁基。
在通式中獨(dú)立地充當(dāng)或作為基團(tuán)組成部分的任選地取代鏈烯基優(yōu)選地為具有1到6個(gè)，特別是1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基?？商岬降睦訛槿芜x地被取代的乙烯基，2-丙烯基，2-丁烯基，3-丁烯基，1-甲基-2-丙烯基，2-甲基-2-丙烯基，2-戊烯基，3-戊烯基，4-戊烯基，1-甲基-2-丁烯基，2-甲基-2-丁烯基，3-甲基-2-丁烯基，1-甲基-3-丁烯基，2-甲基-3-丁烯基，3-甲基-3-丁烯基，1,1-二甲基-2-丙烯基，1,2-二甲基-2-丙烯基，1-乙基-2-丙烯基，2-己烯基，3-己烯基，4-己烯基，5-己烯基，1-甲基-2-戊烯基，2-甲基-2-戊烯基，3-甲基-2-戊烯基，4-甲基-2-戊烯基，3-甲基-3-戊烯基，4-甲基-3-戊烯基，1-甲基-4-戊烯基，2-甲基-4-戊烯基，3-甲基-4-戊烯基，4-甲基-4-戊烯基，1,1-二甲基-2-丁烯基，1,1-二甲基-3-丁烯基，1,2-二甲基-2-丁烯基，1,2-二甲基-3-丁烯基，1,3-二甲基-2-丁烯基，1,3-二甲基-3-丁烯基，2,2-二甲基-3-丁烯基，2,3-二甲基-2-丁烯基，2,3-二甲基-3-丁烯基，1-乙基-2-丁烯基，1-乙基-3-丁烯基，2-乙基-2-丁烯基，2-乙基-3-丁烯基，1,1,2-三甲基-2-丙烯基，1-乙基-1-甲基-2-丙烯基和1-乙基-2-甲基-2-丙烯基。優(yōu)選的基團(tuán)為任選地取代的乙烯基，2-丙烯基、2-丁烯基或1-甲基-2-丙烯基。
在通式中獨(dú)立地充當(dāng)或作為基團(tuán)組成部分的任選地取代的環(huán)烷基為優(yōu)選地具有3到10，特別是具有3,5或7個(gè)碳原子的單-，雙-及三環(huán)烷基?？商岬降睦訛槿芜x地被取代的環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，環(huán)辛基，雙環(huán)[2.2.1]庚基，雙環(huán)[2.2.2]辛基和金剛烷基。
在通式中獨(dú)立地充當(dāng)或作為基團(tuán)組成部分的任選地取代的烷氧基指優(yōu)選地具有1到6個(gè)，特別是1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基?？商岬降睦訛槿芜x地取代的甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基和叔丁氧基。
在通式中獨(dú)立地充當(dāng)或作為基團(tuán)組成部分的任選地取代的烷硫基指優(yōu)選地具有1到6個(gè)，特別是1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷硫基?？商岬降睦訛槿芜x地取代的甲硫基，乙硫基，正丙硫基，異丙硫基，正丁硫基，異丁硫基，仲丁硫基和叔丁硫基。
在通式中獨(dú)立地充當(dāng)或作為基團(tuán)組成部分的任選地取代的烷氧羰基指優(yōu)選地具有1到6個(gè)，特別是1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基?？商岬降睦訛槿芜x地取代的甲氧羰基，乙氧羰基，正丙氧羰基，異丙氧羰基，正丁氧羰基，異丁氧羰基，仲丁氧羰基和叔丁氧羰基。
在通式中獨(dú)立地充當(dāng)或作為基團(tuán)組成部分的任選地取代的烷羰基指優(yōu)選地具有1到6個(gè)，特別是1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷羰基?？商岬降睦訛槿芜x地取代的甲基羰基，乙基羰基，正丙基羰基，異丙基羰基，正丁基羰基，異丁基羰基，仲丁基羰基和叔丁基羰基。通式中任選地取代的芳烷基指在其芳基部分優(yōu)選地具有6到10個(gè)，特別是8個(gè)碳原子(優(yōu)選苯基或萘基，特別是苯基)在其烷基部分優(yōu)選地具有1到4個(gè)，特別是1或2個(gè)碳原子，并且烷基部分可為直鏈或支鏈的任選地取代的芳烷基?？商岬讲閮?yōu)選的例子為芐基和苯乙基。
通式中獨(dú)立地充當(dāng)或作為基團(tuán)組成部分的任選地取代的雜芳基指優(yōu)選地具有1到3個(gè)，特別是1或2個(gè)，相同或不同的5-到7-元環(huán)的芳香雜環(huán)基。芳雜環(huán)中的雜原子為氧，硫或氮?？商岬讲閮?yōu)選的例子為任選地取代的呋喃基，噻吩基，吡唑基，咪唑基，1,2,3-和1,2,4-三唑基，異噁唑基，噻唑基，異噻唑基，1,2,3,-,1,3,4-,1,2,4-和1,2,5-噁二唑基，氮雜苯基，吡咯基，吡啶基，哌嗪基，噠嗪基，嘧啶基，吡嗪基，1,3,5-,1,2,4-和1,2,3-三嗪基，1,2,4-,1,3,2-,1,3,6-和1,2,6-噁嗪基，氧雜(oxepinyl)，硫雜(thiepinyl)和1,2,4-二氮雜。
通式中的基團(tuán)可任選地取代一次或多次，優(yōu)選1到3次，特別是1到2次，取代基可相同或不同。可提到的取代基的例子優(yōu)選地為優(yōu)選地具有1到4個(gè)，特別是1到2個(gè)碳原子的烷基，如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基和叔丁基；優(yōu)選地具有1到4個(gè)，特別是1到2個(gè)碳原子的烷氧基，如甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，和叔丁氧基；烷硫基如甲硫基，乙硫基，正丙硫基，異丙硫基，正丁硫基，異丁硫基，仲丁硫基和叔丁硫基；優(yōu)選地具有1到4個(gè)，特別是1到2個(gè)碳原子并優(yōu)選地具有1到5個(gè)，特別是1到3個(gè)優(yōu)選自氟，氯或溴，特另是氟和氯的，相同或不同的鹵原子的鹵代烷基，如二氟甲基，三氟甲基，三氯甲基；羥基；鹵素，優(yōu)選氟，氯，溴和碘，特別是氟和氯；氰基；硝基；氨基；每個(gè)烷基中優(yōu)選地具有1到4個(gè)，特別是1或2個(gè)碳原子的單烷基氨基和二烷基氨基，如甲氨基，甲基乙基氨基，二甲氨基，正丙基氨基，異丙氨基，甲基正丁基氨基；烷基羰基如甲基羰基；優(yōu)選地具有2到4個(gè)，特別是2到3個(gè)碳原子的烷氧羰基，如甲氧羰基和乙氧羰基；具有1到4個(gè)，特別是1到2個(gè)碳原子的烷基亞磺?；?；具有1到4個(gè)，特別是1到2個(gè)碳原子和1到5個(gè)鹵原子的鹵代烷基亞磺?；?，如三氟甲基亞磺酰基；磺酰基(-SO2-OH)；優(yōu)選地具有1到4個(gè)，特別是1或2個(gè)碳原子的烷基磺?；?，如甲磺?；鸵一酋；蛘呔哂?到4個(gè)，特別是1到2個(gè)碳原子和1到5個(gè)鹵原子的鹵代烷基磺?；缛谆酋；?。
合適的環(huán)氨基為具有一個(gè)或多個(gè)作為雜原子的氮原子的芳族或脂族雜環(huán)系統(tǒng)，其中該雜環(huán)可為飽和的或不飽和的，單環(huán)系統(tǒng)或稠環(huán)系統(tǒng)，并可任選地含有其他雜原子如氮，氧和硫等。另外，環(huán)氨基也可為螺環(huán)或橋環(huán)系統(tǒng)。環(huán)氨基的原子數(shù)沒有限制，例如單環(huán)系統(tǒng)由3到8個(gè)原子組成而三環(huán)系統(tǒng)由7到11個(gè)原子組成。
可提到的具有一個(gè)氮原子作為雜原子的飽和及不飽和單環(huán)系統(tǒng)的環(huán)氨基的例子為1-氮雜環(huán)丁基，吡咯烷基，2-吡咯啉-1-基，1-吡咯基，哌啶子基，1,4-二氫吡啶-1-基，1,2,5,6-四氫吡啶-1-基，高哌啶子基；可提到的具有兩個(gè)或更多氮原子作為雜原子的飽和或不飽和單環(huán)系統(tǒng)的環(huán)氨基的例子為1-咪唑烷基，1-咪唑基，1-吡唑基，1-三唑基，1-四唑基，1-哌嗪基，1-高哌嗪基，1,2-二氫噠嗪-1-基，1,2-二氫嘧啶基-1-基，全氫嘧啶-1-基和1,4-二氮雜環(huán)庚烷-1-基；可提到的具有1到3氮原子和1到2個(gè)氧原子作為雜原子的飽和或不飽和單環(huán)系統(tǒng)的環(huán)氨基的例子為噁唑烷-3-基，異噁唑烷-2-基，嗎啉代基或2,6-二甲基嗎啉代基；還可提到具有1到3個(gè)氮原子和1到2個(gè)硫原子作為雜原子的飽和或不飽和單環(huán)環(huán)氨基，可提到的具有稠合環(huán)系統(tǒng)的飽和或不飽和的環(huán)氨基的例子為吲哚-1-基，1,2-二氫苯并咪唑-1-基，全氫吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基；可提到的具有螺環(huán)系統(tǒng)的環(huán)氨基的例子為2-氮雜螺，[4,5]-癸-2-基；可提到的具有橋雜環(huán)系統(tǒng)的環(huán)氨基的例子為2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚-7-基。
總的說明，按本發(fā)明可制備的具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽由通式(Ⅰ)定義
被優(yōu)選地制備的通式(Ⅰ)化合物為其中
R1表示具有至多4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，具有至多6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，特別是環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，烷氧基，特別是甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，環(huán)烷氧基，特別是環(huán)丙氧基，鏈烯氧基，特別是烯丙氧基，二氧代亞烷基，特別是二氧代亞甲基，烷氨基，特別是甲氨基，乙氨基，二烷氨基，特別是二甲氨基，二乙氨基，烷氧羰基，特別是甲氧羰基，乙氧羰基，叔丁氧羰基，烷氨基羰基，特別是甲氨羰基，二烷氨基羰基，特別是二甲氨基羰基，烷氨基磺酰基，特別是甲氨基磺?；?，二烷氨基磺?；貏e是二甲氨基磺?；?，烷硫基，特別是甲硫基或叔丁硫基，烷基亞磺?；?，特別是甲基亞磺?；蚴宥』鶃喕酋；?，烷基磺?；貏e是甲基磺?；蚴宥』酋；?，雜芳基磺酰基，特別是N-嗎啉基磺酰基或N-吡唑基磺?；骰鶊F(tuán)可任選地被取代，羥基，鹵素，特別是溴，氯，氟或碘，硝基，氨基，羧基，氨基甲?；?，氰基或，如果合適，取代的環(huán)氨基，特別是N-吡咯烷基，N-哌啶基，N-嗎啉基，N-(2,6-二甲基嗎啉基)，N-甲基哌嗪基，N-硫代嗎啉基或N-二氧代硫代嗎啉基，以及R2和R4表示具有至多4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是甲基，以及R3表示具有至多4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是甲基，或表示任選由下列基團(tuán)取代的芐基氫，具有至多4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，具有至多6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，特別是環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，烷氧基，特別是甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，環(huán)烷氧基，特別是環(huán)丙氧基，鏈烯氧基，特別是烯丙氧基，二氧代亞烷基，特別是二氧代亞甲基，烷氨基，特別是甲氨基，乙氨基，二烷氨基，特別是二甲氨基，二乙氨基，烷氧羰基，特別是甲氧羰基，乙氧羰基，叔丁氧羰基，烷氨基羰基，特別是甲氨羰基，二烷氨基羰基，特別是二甲氨基羰基，烷氨基磺?；貏e是甲氨基磺?；?，二烷氨基磺酰基，特別是二甲氨基磺?；?，烷硫基，特別是甲硫基或叔丁硫基，烷基亞磺酰基，特別是甲基亞磺?；蚴宥』鶃喕酋；?，烷基磺?；?，特別是甲基磺?；蚴宥』酋；?，雜芳基磺?；?，特別是N-嗎啉基磺酰基或N-吡唑基磺?；?，各基團(tuán)可任選地被取代，羥基，鹵素，特別是溴，氯，氟或碘，硝基，氨基，羧基，氨基甲?；杌?，或者可被合適的環(huán)氨基，特別是N-吡唑烷基，N-哌啶基，N-嗎啉基，N-(2,6-二甲基嗎啉基)，N-甲基哌嗪基，N-硫代嗎啉基或N-二氧代硫代嗎啉基任選地取代，的通式(Ⅰ)化合物。
排除通式(Ⅰ)化合物，其中R1表示4-羥基，R3表示未取代的芐基其它基團(tuán)定義如上，特別優(yōu)選地制備的通式(Ⅰ)化合物為其中R1表示烷氧基，特別是甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，烷氨基，特別是甲氨基，乙氨基，二烷氨基，特別是二甲氨基，二乙氨基，羥基，鹵素，特別是溴，氯，氟或碘，硝基，氨基，如果合適，取代的環(huán)氨基，特別是N-嗎啉基，N-甲基哌嗪基或N-二氧代硫代嗎啉基，以及R2和R4表示具有至多4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是甲基，以及R3表示具有至多4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是甲基，或表示任選地由下列基團(tuán)取代的芐基氫，烷氧基，特別是甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，烷氨基，特別是甲氨基，乙氨基，二烷氨基，特別是二甲氨基，二乙氨基，羥基，鹵素，特別是溴，氯，氟或碘，硝基，氨基，或者可被合適的環(huán)氨基，特別是N-嗎啉基，N-甲基哌嗪基或N-二氧代硫代嗎啉基任選地取代，的通式(Ⅰ)化合物。
排除如下通式(Ⅰ)化合物，其中，R1表示4-羥基，R3表示未取代的芐基其他基團(tuán)定義如上。
非常特別優(yōu)選地制備的通式(Ⅰ)化合物為其中R1表示烷氧基，特別是甲氧基，叔丁氧基，羥基，鹵素，特別是溴，氟或碘，硝基，氨基，二烷氨基，特別是二甲氨基，或者如果合適，取代的環(huán)氨基，特別是N-嗎啉基，以及R2和R4表示甲基，以及R3表示任選地由下列基團(tuán)取代的芐基氫，烷氧基，特別是甲氧基，叔丁氧基，羥基，鹵素，特別是溴，氯，氟或碘，硝基，氨基，二烷氨基，特別是二甲氨基，或者，可被合適的環(huán)氨基，特別是N-嗎啉基任選地取代，的通式(Ⅰ)化合物。
排除如下通式(Ⅰ)化合物，其中R1表示4-羥基，R3表示未取代的芐基以及其它基團(tuán)定義如上。
在本發(fā)明制備條件下，可生成光學(xué)活性的，立體異構(gòu)體形式的通式(Ⅰ)化合物。
但是，將優(yōu)選地生成其中2-氨基酸具有(S)-構(gòu)型(L-形式)而2-羥基-羧酸具有(R)-構(gòu)型(D-形式)的通式(Ⅰ)化合物。
具體地，可提到下列光學(xué)活性通式(Ⅰ)的化合物環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酸-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)
環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳L酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-氨基苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-乳酰-D-3-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-羥基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-甲氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)
環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-叔丁氧基-苯基-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-叔丁氧基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-叔丁氧基-苯基-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-N-嗎啉基-苯基-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-N-嗎啉基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-N-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-二甲氨基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)
環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-碘苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-3-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-溴苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-2-氯苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-)某些通式(Ⅰ)化合物為已知化合物(參見，例如WO 94/19334；WO 95/19053；EP-OS[歐洲專利公開說明書]626375；EP-OS[歐洲專利公開說明書]626 376)。
如果本發(fā)明制備具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽(Ⅰ)的方法中使用4-硝基苯丙氨酸(R1=4-NO2)作為式(Ⅱ)氨基酸，該方法可用，例如，下列反應(yīng)式表示
式(Ⅱ)到(Ⅴ)提供了在本發(fā)明的方法中作原料的氨基酸的一般定義。這些結(jié)構(gòu)式中，R1,R2,R3和R4優(yōu)選地表示在本發(fā)明式(Ⅰ)化合物的描述中作為優(yōu)選取代基而被提及的基團(tuán)。
如果用作原料的天然或合成氨基酸為手性的，它可為(S)-或(R)-構(gòu)型(L-或D-形式)。但優(yōu)選(S)-構(gòu)型的α-氨基酸。
可提到的例子為Aad,Abu,jAbu,ABz,2ABz,εAca,Ach,Acp,Adpd,Ahb,Aib,βAib,Ala,βAla,ΔAla,Alg,All,Ama,Amt,Ape,Apm,Apr,Arg,Asn,Asp,Asu,Aze,Azi,Bai,Bph,Can,Cit,Cys,(Cys)2,Cyta,Daad,Dab,Dadd,Dap,Dapm,Dasu,Djen,Dpa,Dtc,Fel,Gln,Glu,Gly,Guv,hAla,hArg,hCys,hGln,hGlu,His,hIle,hLeu,hLys,hMet,hPhe,hPro,hSer,hThr,hTrp,hTyr,HyI,Hyp,3Hyp,Ile,Ise,Iva,Kyn,Lant,Lcn,Leu,Lsg,Lys,βLys,ΔLys,Met,Mim,Min,nArg,Nle,Nva,Oly,Orn,Pan,Pec,Pen,Phe,Phg,Pic,Pro,Δpro,Pse,Pse,Pya,Pyr,Pza,Qin,Ros,Sar,Sec,Sem,Ser,Thi,βThi,Thr,Thy,Thx,Tia,T1e,T1y,Trp,Trta,Tyr,Val,Nal,Tbg,Npg,Chg,Thia(參見，例如Houben-Weyl,Methoden der Organischen Chemie[有機(jī)化學(xué)方法],Volume XV/1 and 2,Stuttgart,1974)。
但優(yōu)選取代的苯丙氨酸(Phe)。在通式(Ⅱ)取代的苯丙氨酸中，R1優(yōu)選地表示在本發(fā)明式(Ⅰ)化合物的描述中作為優(yōu)選取代基而被提及的基團(tuán)。
如果本發(fā)明制備具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽(I)的方法中使用4-硝基苯乳酸(R1=4-NO2)作為式(Ⅵ)2-羥基-羧酸，該方法b可用，例如，下列反應(yīng)式表示
式(Ⅵ)到(Ⅸ)提供了在本發(fā)明方法b中用作原料的2-羥基-羧酸的一般定義。
在這些結(jié)構(gòu)式中，R1,R2,R3和R4優(yōu)選地表示在本發(fā)明式(Ⅰ)化合物的描述中作為優(yōu)選取代基而被提及的基團(tuán)。
如果用作原料的2-羥基-羧酸為手性的，它可為(S)-或(R)-構(gòu)型(L-或D-形式)。但優(yōu)選(S)-構(gòu)型的2-羥基羧酸。
可提到的例子為Hyac,Hyba,Hydd,Hyde,Hyic,Hyiv,Hymb,Hypp,Hypr(Lac),Hytd,Hyud,Hyva,PhLac(參見，例如，Houben-Weyl,Methodender Organischen Chemie[有機(jī)化學(xué)方法]，Volume XV/1和2,Stuttgart,1974)。
但優(yōu)選取代的苯基乳酸(PhLac)。在通式(Ⅵ)取代的苯基乳酸中，R1優(yōu)選地表示在本發(fā)明式(Ⅰ)化合物的描述中作為優(yōu)選取代基而被提及的基團(tuán)。
可提到的適于本發(fā)明方法a和b的菌株為Agonomycetales菌種中的Mycelia sterilia。
特別是按布達(dá)佩斯公約在Brunswick德國微生物保藏中心(DMS)于1995年11月30日保藏的編號(hào)為DSM 10345的Mycelisterilia541-11菌株。
該方法也可使用從微生物中分離出的合成酶。該方法需要的環(huán)縮肽合酶可按文獻(xiàn)中已知的方法從上述菌株中分離(參見，例如Isolation of enniatin synthetases:R.Pieper,H.Kleinkauf,R.Zocher,J.Antibiotics 45,1993,pp.1273-1277；DE-A 4406025)。
Agonomycetales菌種的菌株的發(fā)酵按本身已知的方法在合適的營養(yǎng)溶液存在下進(jìn)行。這些營養(yǎng)溶液含鹽和菌株生長必需的碳和氮源。
適用于本發(fā)明方法的有機(jī)鹽所有的堿金屬，堿土金屬和周期表中Ⅱ到Ⅷ副族元素的金屬鹽。
可提到的例子為鋰，鈉，鉀，銫，鎂，鈣，鋇，鋅，鎘，鈧，鈦，鋯，釩，鈮，鉻，鉬，錳，鐵，鈷或鎳的乙酸鹽，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，氫氟酸鹽，硝酸鹽，亞硝酸鹽，磷酸鹽，磷酸氫鹽，磷酸二氫鹽，亞磷酸鹽，亞磷酸氫鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，碳酸鹽和碳酸氫鹽。
優(yōu)選使用的是堿土金屬，特別是鎂，和周期表中Ⅱ,Ⅶ和Ⅷ副族金屬，例如鋅，錳和鐵的乙酸鹽，鹵化物，磷酸鹽，磷酸氫鹽，磷酸二氫鹽，和硝酸鹽。
適用于本發(fā)明方法的碳源為碳水化合物和含碳水化合物的產(chǎn)品。
可提到的例子為單糖，如戊糖，特別是核糖，己糖，特別是葡萄糖和果糖，低聚糖如雙糖，特別是蔗糖，麥苯糖和乳糖，三糖，特別是棉子糖，以及四-，五-和六糖。
優(yōu)選使用單糖如己糖，特別是葡萄糖，以及低聚糖如雙糖，特別是蔗糖。
適用于本發(fā)明方法的氮源為氨基酸和含氮鹽。
可提到的例子為上述天然及合成的氨基酸或含氮鹽如硝酸銨，亞硝酸銨或上述金屬的硝酸鹽或亞硝酸鹽。
優(yōu)選使用上述天然氨基酸和含氮鹽如硝酸銨。
首先按本身已知的方法，將發(fā)酵法使用的菌株在由，例如，糖漿/玉米漿組成的介質(zhì)中培養(yǎng)。培養(yǎng)后，分離菌絲體。為了制備游離的培養(yǎng)液，將由碳源和無機(jī)鹽組成的Fusarium-defined介質(zhì)(FDM)用菌絲體接種，并再次發(fā)酵。幾天后，可按每1ml預(yù)培養(yǎng)液“uberimpten”制備FDM主培養(yǎng)液，并類似地發(fā)酵。
然后在式(Ⅱ)到(Ⅴ)或(Ⅵ)到(Ⅸ)化合物存在下進(jìn)行實(shí)際的發(fā)酵。
發(fā)酵期為1到30天。進(jìn)行發(fā)酵的溫度為+5℃到+40℃，優(yōu)選+15℃到+35℃，特別優(yōu)選+25℃到+30℃。發(fā)酵在無菌及常壓下進(jìn)行。
為了進(jìn)行發(fā)酵，式(Ⅱ)到(Ⅴ)或(Ⅵ)到(Ⅸ)化合物一般的濃度為5mM到100mM，優(yōu)選5mM到70mM。
發(fā)酵結(jié)束后，從培養(yǎng)液中除去菌絲體，將濾液任選地用有機(jī)溶劑萃取數(shù)次，勻漿，然后過濾。將所得培養(yǎng)濾液按常規(guī)方法萃取，干燥并真空濃縮。
將所得環(huán)縮肽粗產(chǎn)物按常規(guī)方式通過柱層析或逆流分配純化。最佳方法需要由具體情況決定(參見制備實(shí)施例)。
如果本發(fā)明方法是在分離的環(huán)縮肽合酶的存在下進(jìn)行的，那么它將在金屬鹽，S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)和腺苷三磷酸(ATP)存在下，在含水緩沖系統(tǒng)中進(jìn)行。
可提到的金屬鹽為鋰，鈉，鉀，銫，鎂，鈣或鋇的乙酸鹽，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，氫氟酸鹽，硝酸鹽，磷酸鹽，磷酸氫鹽，亞磷酸鹽，亞磷酸氫鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，碳酸鹽和碳酸氫鹽。
優(yōu)選使用堿土金屬鹽，例如氟化鎂，硫酸鎂或乙酸鎂。
本發(fā)明方法a和b在含水緩沖溶液中進(jìn)行。
可提到的例子了市場上可得到的緩沖溶液，例如pH1.0的，特別是甘氨酸-鹽酸，pH2.0到4.0的，特別是檸檬酸-鹽酸，pH5.0到6.0，特別是檸檬酸-氫氧化鈉溶液，pH7.0的，特別是磷酸鹽，特別是硼酸-鹽酸，以及pH8.0,pH9.0到10.0的，特別是硼酸/氯化鉀-氫氧化鈉溶液。
該方法優(yōu)選地在“生理?xiàng)l件”下，即pH6.0到9.5的條件下進(jìn)行，為此優(yōu)選地使用磷酸鹽緩沖溶液，特別是磷酸氫鉀/磷酸氫二鈉或磷酸氫鉀/磷酸氫二鉀。
為了實(shí)施該方法，一般在玻璃容器中使用2mM到8mM，優(yōu)選3mM到5mM式(Ⅱ)到(Ⅴ)或(Ⅵ)到(Ⅸ)化合物，S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM),3mM到9mM，優(yōu)選4mM到6mM腺苷三磷酸(ATP)，和2mM到25mM，優(yōu)選5mM到15mM堿土金屬鹽，10mM到100mM，優(yōu)選40mM到60mM緩沖液與100μg到1000μg優(yōu)選200μg到600μg，分離的環(huán)縮肽合酶。
玻璃容器內(nèi)酶促合成的反應(yīng)時(shí)間為2分鐘到24小時(shí)。進(jìn)行玻璃容器內(nèi)酶促合成的溫度范圍為從0℃到+50℃，優(yōu)選+10℃到+35℃，特別優(yōu)選+20℃到+30℃。
pH值的范圍為6.5到9.5，優(yōu)選7.0到8.0，在整個(gè)反應(yīng)過程中通過加入緩沖劑使pH值保持在7.3。
該方法優(yōu)選地在無菌反應(yīng)條件下及常壓下進(jìn)行。
通過加水可使玻璃容器內(nèi)酶促合成停止。
不過，如果使用式(Ⅱ)到(Ⅴ)化合物，該玻璃容器內(nèi)酶促反應(yīng)優(yōu)選地在相應(yīng)的轉(zhuǎn)氨酶或脫氫酶存在下進(jìn)行。
為了精制，將水相用有機(jī)溶劑萃取幾次，干燥并真空蒸發(fā)。
所得環(huán)縮肽粗產(chǎn)物可按常規(guī)方法通過柱層析或逆流分配純化。最佳方法也需要由具體情況決定(也參見制備實(shí)施例)。
制備實(shí)施例實(shí)施例1環(huán)(-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-硝基-苯基乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-乳酰-N-甲基-L-亮氨酰-D-4-硝基-苯基乳酰-)
制備方法a4-硝基-苯丙胺的自然條件下的摻入無菌條件下將濃度為50mM的4-硝基苯丙氨酸加入培養(yǎng)了3日的Agonomycetales菌種的Myceliasterilia主培養(yǎng)物中并繼續(xù)發(fā)酵3天。從Fusaria培養(yǎng)液中除去菌絲體，冷凍干燥后，用甲醇萃取數(shù)次。將合并的有機(jī)相蒸發(fā)至干。
制備方法b將無菌形式的濃度為50mM的4-硝基苯基乳酸加入培養(yǎng)了3日的Agonomycetales菌種的Myceliasterilia主培養(yǎng)液中，并繼續(xù)發(fā)酵3天。從Fusaria培養(yǎng)液中除去菌絲體，冷凍干燥后，用甲醇萃取數(shù)次。將合并的有機(jī)層蒸發(fā)至干。
將方法a和b制備的產(chǎn)物以制備HPLC的方法(RP-18/乙腈-水)純化。
1H-NMR(600MHz,CDCL3,δ):7.43(d,8H,=Chmeta；4-NO2-芐基)；8.15；8.18(2d,8H=Chortho；4-NO2-芐基)ppm[構(gòu)象異物混合物]4-硝基-苯基乳酸的玻璃容器中的摻入26℃下將50-100Mg酶在200Ml 4mM二硫蘇糖醇，20％甘油和pH7.8的三羥甲基氨基甲烷緩沖液的混合物中與下列底物培養(yǎng)兩小時(shí)5mM ATP，
10mMMgCl2,2mM L-亮氨酸，0.5mM S-腺苷-L-甲硫氨酸，2mM D-乳酸，50-100μMD-4-硝基苯基乳酸。
然后用乙酸乙酯萃取整個(gè)反應(yīng)物并對形成的產(chǎn)物進(jìn)行層析純化(TLC,HPLC)。
以相似的方法可制備下面表1中所示的通式(Ⅰ)化合物的LDLDLDLD立體異構(gòu)體表1通式(Ⅰ)化合物的例子
a)APCI-MS or EI-MS m/z(％)b)1H-NMR(600MHz,CDCl3)δin ppmc)HMQC倍量(600MHz,CDCl3)δin ppm培養(yǎng)，預(yù)培養(yǎng)物和主培養(yǎng)物1．瓊脂上的培養(yǎng)使用下列介質(zhì)，將菌株在瓊脂上培養(yǎng)葡萄糖2.0％，胨1.0％，酵母提取物1.0％麥芽提取物1.0％KH2PO40.05％Arar 1.5％121℃下滅菌20分鐘。
滅菌后介質(zhì)pH≈7.0。
2．液體配養(yǎng)物a)玉米漿/糖漿介質(zhì)將Myceliasterilia菌株在由糖漿(30g/l)，玉米漿(10g/l)和葡萄糖(30g/l)組成的介質(zhì)中培養(yǎng)。
為了制備預(yù)培養(yǎng)物,將介質(zhì)用菌絲體從瓊脂板接種，振蕩器中放置約3天后，用于相同介質(zhì)的燒瓶(各個(gè)容量為100ml)的接種。
b)選擇性介質(zhì)選擇性地,下列介質(zhì)也可用于菌株培養(yǎng)物的培養(yǎng)麥胚提取物2.0％藥用介質(zhì)(Pharmamedia)1.0％MgSO4·7H2O 0.2％NaCl 0.2％淀粉2.6％麥芽糖漿6.0％CaCO30.3％121℃下滅菌20分鐘。
滅菌后介質(zhì)pH為7.5。
為了進(jìn)行進(jìn)料試驗(yàn)，將有關(guān)前體(例如4-硝基苯丙氨酸，4-硝基苯基乳酸，4-氨基苯胺，4-氨基苯基乳酸)加入培養(yǎng)了3天的培養(yǎng)物中；最終濃度為50mM。
權(quán)利要求
1．利用Agonomycetales菌株或從其中分離的酶催化劑制備具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽的方法。
2．制備通式(Ⅰ)
其中R1表示直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，烷氧基，鏈烯氧基，芳基烷氧基，環(huán)烷氧基，烷氨基，二烷氨基，烷羰基，烷羰基氧基，烷氧羧基，烷氨基羰基，二烷氨基羰基，雜芳基羰基，烷氧基磺?；?，烷氨基磺?；?，二烷氨基磺?；?，烷硫基，烷基亞磺酰基，烷基磺?；?，雜芳基磺?；?，各基團(tuán)可任選地被取代，羥基，鹵素，硝基，氨基，羧基，氨基甲酰基，氰基，或者，如果合適，取代的環(huán)氨基，以及R2,R3和R4各自獨(dú)立地表示直鏈或支鏈烷基，任選地被選自下列基團(tuán)取代的雜芳基甲基或芐基，取代基選自氫，直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，烷氧基，鏈烯氧基，芳基烷氧基，環(huán)烷氧基，烷氨基，二烷基氨基，烷羰基，烷羰基氧基，烷氧羰基，烷氨基羰基，二烷基氨基羰基，雜芳基羰基，烷氧基磺?；?，烷氨基磺?；榛被酋；?，烷硫基，烷基亞磺?；?，烷基磺酰基，雜芳基磺?；?，各基團(tuán)可任選地被取代，羥基，鹵素，硝基，氨基，羧基，氨基甲?；杌?，或它可任選地被一個(gè)合適的環(huán)氨基取代，的方法，其中式(1)化合物被排除的例外情況是R1表示4-羥基，R3表示未取代的芐基而其它基團(tuán)定義如上，該方法的特征在于，使a)通式(Ⅱ),(Ⅲ),(Ⅳ)和(Ⅴ)的光學(xué)活性或外消旋的氨基酸
其中R1,R2,R3，和R4定義如上，或使b)通式(Ⅵ),(Ⅶ),(Ⅷ)和(Ⅸ)光學(xué)活性或外消旋的2-羥基羧酸
其中R1,R2,R3，和R4定義如上，在合適的營養(yǎng)溶液中的Agonomycetales菌株的存在下或在從該菌株分離出的合酶存在下，在緩沖系統(tǒng)中反應(yīng)，然后分離得到所需的具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新的利用Agonomycetales菌株或從其中分離的酶催化劑制備具有24個(gè)環(huán)原子的含取代的芳基乳酸的環(huán)狀縮肽的方法:其中R
文檔編號(hào)C12P17/14GK1208439SQ96199838
公開日1999年2月17日 申請日期1996年11月25日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月7日
發(fā)明者P·杰施克, G·邦瑟, G·蒂爾金, W·埃特澤爾, A·哈德爾, N·門克, H·克萊恩考夫, R·佐赫爾, 飯沼勝春, 宮本功一 申請人:拜爾公司