本發(fā)明屬于活性物質(zhì)提取技術領域，具體涉及一種楊梅果實中抗氧化物質(zhì)提取和保藏方法。

背景技術：

本發(fā)明中所涉及的楊梅為荸薺種，屬烏種群，為全國著名良種。果實中等大，果形略扁圓，果核小，與果肉易分離。該品種的風土適應性強，果實成熟后不易脫落，6月下旬始熟，7月中旬即可采收完畢。不僅鮮食口味首屈一指，加工后風味更是優(yōu)于其他品種。

楊梅除了含有豐富的碳水化合物、蛋白質(zhì)、氨基酸、有機酸、礦物質(zhì)、維生素外，還含有豐富的抗氧化物質(zhì)。其主要生物活性物質(zhì)有黃酮類、多酚類、靴質(zhì)類、多糖類和氨基酸等。近年來，國內(nèi)外對楊梅的研究逐漸活躍，以期對人類健康做出貢獻。宋代的醫(yī)學著作《食療草本》以及《明代醫(yī)學著論目》對楊梅的藥用功能均有記載，楊梅具有“生津、止渴、調(diào)理五臟、滌清腸胃、祛除煩潰惡氣”之功效，秋邱麟等研究表明楊梅活性成分具有抗氧化、抗過敏、抗腫瘤、降低神經(jīng)毒素、降血糖等藥理作用。

楊梅藥用價值極高，其果實、果仁、葉子和果皮均可入藥。我國民間歷來有用楊梅浸酒來治療腹瀉、腹痛，且效果極佳。耿曉玲，張白曦等研究表明楊梅果實提取物對金黃色葡萄球菌、志賀氏痢疾桿菌、溶血性鏈球菌和傷寒沙門氏菌具有良好的抑菌作用。

長期以來，楊梅浸酒都是直接將楊梅洗凈，然后以酒精度50％-60％vol的白酒1:1浸泡12個月后過濾，耗時長且活性物質(zhì)隨著時間延長易降解。本發(fā)明通過超聲輔助提取荸薺楊梅中抗氧化活性物質(zhì)，采用響應曲面法確定楊梅果實中活性物質(zhì)的提取工藝，提供一種省時、高效的提取方法，并明確活性提取物的保藏方法。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了更好地提取楊梅中的抗氧化物質(zhì)，指導完善楊梅酒浸提工藝，并為楊梅的儲藏和開發(fā)提供理論指導。

為實現(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明目的，發(fā)明人提供如下技術方案：

一種楊梅果實中抗氧化物質(zhì)提取和保藏方法，按以下步驟進行：

(1)楊梅果實前處理：將楊梅去核，經(jīng)液氮冷凍處理保藏，提取前高速破壁處理，

(2)抗氧化活性物質(zhì)提?。航?jīng)步驟(1)處理的楊梅果肉與含水乙醇按照30～40ml含水乙醇：1g楊梅果肉的料液比混合，于25～30℃下超聲輔助處理，隨后做離心處理，取上清液即可得楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液，

(3)保藏：將楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液在酸性條件下凍藏，且儲存過程中應避免接觸金屬材料和光照。

作為優(yōu)選方案，本發(fā)明中采用的楊梅為荸薺楊梅。

作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述步驟(1)中液氮與楊梅比率為1:1(v/w)；破壁處理為20000-25000r/min下處理3～5min。

作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述步驟(2)中含水乙醇中的酒精含量為60％～70％；超聲輔助處理的超聲功率為300～400w、工作頻率為70～80khz、處理時間為50～60min；離心處理為5000rpm下處理5～10min。

作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述步驟(3)中的酸性條件指ph≤3；金屬材料主要包括銀、銅、鋁、鐵、鈉等。

作為優(yōu)選方案，本發(fā)明還包括步驟(4)真空冷凍干燥步驟：將楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液濃縮后，于0～0.01mpa的真空低壓下經(jīng)冷凍進行脫水干燥，即得楊梅粉狀天然抗氧化活性物質(zhì)。這樣更利于運輸和保藏。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：

(1)本發(fā)明在荸薺楊梅前處理過程中利用液態(tài)冷凍結(jié)合高速破壁處理，有效提高了楊梅中總抗氧化活性物質(zhì)的釋放率。

(2)本發(fā)明利用超聲輔助提取，并運用響應曲面確定楊梅中抗氧化活性物質(zhì)的提取方案，確定了最佳提取工藝(超聲時間54.94min、料液比1:39.38[g/ml]、酒精濃度66.72％)，提取效率高，工藝簡單容易操作。

(3)按照本發(fā)明提供的楊梅抗氧化活性物的保藏方法，可有效減緩抗氧化物的降解速率，延長活性物質(zhì)的保藏時間。楊梅果實中提取所得活性物質(zhì)可添加至食品、化妝品、保健品中實現(xiàn)應用，還可以作為抑菌活性物質(zhì)，進而實現(xiàn)楊梅高附加值的綜合利用。

附圖說明

圖1是本發(fā)明中超聲時間、料液比、酒精濃度、提取溫度對楊梅果實抗氧化活性物質(zhì)提取的影響示意圖。

圖2是本發(fā)明按響應曲面法確定楊梅果實中活性抗氧化物質(zhì)提取工藝的示意圖。

圖3是本發(fā)明楊梅果實中抗氧化活性物質(zhì)穩(wěn)定性貯藏曲線圖。

圖4是本發(fā)明楊梅果實中活性物質(zhì)的抑菌效果柱形圖。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例，更具體地說明本發(fā)明的內(nèi)容。應當理解，本發(fā)明的實施并不局限于下面的實施例，對本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護范圍。

在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設備和原料等均可從市場購得或是本行業(yè)常用的。若無特別指明，實施例采用的方法為本領域通用技術。

主要原料和儀器說明：

本發(fā)明的楊梅果實為荸薺種楊梅；kq5200db型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超生儀器有限公司；arantij-e型高速冷凍離心機，beckmancoulterinc.。

實施例1

一種楊梅果實中抗氧化物質(zhì)提取和保藏方法，按以下步驟進行：

(1)楊梅果實前處理：

將楊梅果實去核，去核后的楊梅果實與等量液氮(1:1；w/v)混合冷凍，再經(jīng)20000r/min下破壁處理5min。

(2)抗氧化活性物質(zhì)提取：

將步驟(1)所得的楊梅果肉，與酒精含量為66.72％的含水乙醇按照39.38ml含水乙醇：1g楊梅果肉的料液比混合，于30℃下超聲(功率為300w，工作頻率為80khz)輔助處理處理54.94min，隨后于5000rpm下離心處理5min，取上清液得到楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液。

(3)楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液調(diào)節(jié)ph至3，裝于棕色試劑瓶(玻璃)存放在-20℃下保藏。

取重復樣品3批次進行檢測。

(4)將楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液濃縮后，于0～0.01mpa的真空低壓下經(jīng)冷凍進行脫水干燥，即得楊梅粉狀天然抗氧化活性物質(zhì)。復溶后，對其抗氧化活性進行檢測。

比較例傳統(tǒng)楊梅浸提方案

將荸薺楊梅與酒精濃度為55％的酒精溶液按照1:1的比例混合，在不高于30℃室溫下浸泡90天，分離楊梅與浸提液即可。

重復樣品3批次進行檢測。

按照下述方法對實施例1和比較例的楊梅果實提取液樣品進行檢測，其中：

本發(fā)明采用abts法來測定楊梅提取液中抗氧化活性物含量：

過硫酸鉀先與abts溶液反應形成藍綠的abts⁺自由基，抗氧化劑與此自由基反應會導致藍綠色變淺，通過顏色變淺的程度來測定抗氧化劑抗氧化能力的強弱，通常以trolox(ug/g)當量表示。abts工作液的配制:將5ml7mmol/labts和88ul140mmol/l過硫酸鉀溶液混合，在室溫、避光條件下靜置12-16h，形成abts⁺儲備液，該儲備液在室溫、避光的條件下表現(xiàn)穩(wěn)定[16]，使用前用蒸餾水稀釋成工作液(a)，要求其在734nm波長下的吸光度為0.70±0.02。取配置好的溶液(a)2ml加入100ul的超聲提取的楊梅樣液，室溫下反應6min后，在734nm下測其吸光度b。依照擬合的標準曲線方程計算出trolox當量。

實施例1和比較例的抗氧化活性物質(zhì)提取量以trolox當量計分別為459.83ug/g和160.78ug/g，提取液經(jīng)濃縮干燥后所得楊梅粉狀天然抗氧化活性物質(zhì)，經(jīng)復溶后其活性仍可達332.64ug/gtrolox當量。對比試驗表明：本發(fā)明可有效提取楊梅果實中的抗氧化活性物質(zhì)，操作簡便易行。采用棕色玻璃瓶避光凍藏，可有效延長抗氧化活性物質(zhì)的保藏期限，經(jīng)濃縮干燥所得粉狀天然抗氧化活性物質(zhì)，活性高且便于運輸和保藏。

本發(fā)明針對楊梅抗氧化活性物質(zhì)工藝，根據(jù)響應a面法確定了最佳的提取工藝。利用design-expert軟件對實驗數(shù)據(jù)(表1)進行擬合后，得到抗氧化活性物質(zhì)提取率--活性物質(zhì)trolox當量(y)對自變量超聲時間(a)、料液比(b)和酒精濃度(c)的二次回歸模型：

y＝439.28+6.95*a+23.16*b+27.15*c-8.09*ab+2.22*ac+4.35*bc-8.04*a²-7.42*b²-31.14*c²

超聲波輔助提取活性物質(zhì)的模型極為顯著(p＝0.0033<0.01)表示回歸模型指標高度顯著；r²為0.9034說明僅有約10％不能由該模型解釋，失擬誤差不顯著(p＝0.2935＞0.05),說明該模型擬合程度良好。

回歸方程的各項顯著性表明：一次項a(p＝0.2428＞0.05)不顯著；b(p＝0.0030<0.05)顯著；c(p＝0.0012<0.05)顯著；二次項c²顯著，由此可知，各影響因素對于楊梅活性物質(zhì)的提取影響不是簡單的線性關系。通過分析得出了楊梅中抗氧化物質(zhì)的最佳工藝條件：提取時間54.94min，料液比39.38(g/ml)，酒精濃度66.72％(v/v)。

表1利用響應面法優(yōu)化本發(fā)明中的楊梅果實中活性物質(zhì)的提取數(shù)據(jù)

實施例2

一種楊梅果實中抗氧化物質(zhì)提取和保藏方法，按以下步驟進行：

(1)楊梅果實前處理：

將楊梅果實去核，去核后的楊梅與等量液氮(1:1；w/v)混合冷凍，再經(jīng)25000r/min下破壁處理3min。

(2)抗氧化活性物質(zhì)提?。?/p>

將步驟(1)所得的楊梅果肉，與酒精含量為60％的含水乙醇按照35ml含水乙醇：1g楊梅果肉的料液比混合，于30℃下超聲(功率為400w，工作頻率為70khz)輔助處理處理60min，隨后于5000rpm下離心分離5min，取上清液即可得楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液。

(3)楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液調(diào)節(jié)ph至2.5，裝于棕色試劑瓶(玻璃)存放在-20℃下保藏。

取重復樣品3批次進行檢測，經(jīng)檢測可達到實施例1的技術效果，此處不再一一贅述

實施例3

一種楊梅果實中抗氧化物質(zhì)提取和保藏方法，按以下步驟進行：

(1)楊梅果實前處理：

將楊梅果實去核，去核后的楊梅與等量液氮(1:1；w/v)混合冷凍，再經(jīng)20000r/min下破壁處理4min。

(2)抗氧化活性物質(zhì)提取：

將步驟(1)所得的楊梅果肉，與酒精含量為70％的含水乙醇按照40ml含水乙醇：1g楊梅果肉的料液比混合，于25℃下超聲(功率為350w，工作頻率為80khz)輔助處理處理50min，隨后于5000rpm下離心分離10min，取上清液即可得楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液。

(3)楊梅抗氧化活性物質(zhì)提取液調(diào)節(jié)ph至3，裝于棕色試劑瓶(玻璃)存放在-20℃下保藏。

取重復樣品3批次進行檢測，經(jīng)檢測可達到實施例1的技術效果，此處不再一一贅述。