一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三酯檢測(cè)試劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三酯檢測(cè)試劑，屬于臨床體外檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。該試劑采用4-羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）-谷氨酸鈉緩沖體系，使體系具有良好的緩沖能力；試劑中還添加了十二烷基硫酸三乙醇胺、輔酶FAD和聚乙烯醇 AH-26等物質(zhì)，均有效的提高了試劑的穩(wěn)定性。本發(fā)明與常規(guī)單試劑檢測(cè)甘油三酯試劑相比具有更加優(yōu)異的穩(wěn)定性，更有利于臨床推廣使用。
【專利說(shuō)明】一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三酯檢測(cè)試劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三酯檢測(cè)試劑，屬于臨床體外檢測(cè)技 術(shù)領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 甘油三酯（TG)是血脂的主要組成部分，是機(jī)體重要的供能物質(zhì)。食物中的甘油三 酯在腸道經(jīng)胰脂酶消化分解，吸收后重新酯化為甘油三酯，經(jīng)淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血液。肝臟是合 成甘油三酯的主要場(chǎng)所，脂肪組織是最大的甘油三酯儲(chǔ)存庫(kù)。在病理?xiàng)l件下，各種組織細(xì)胞 合成和儲(chǔ)集的甘油三酯顯著增加。定量檢測(cè)血液和組織細(xì)胞中甘油三酯含量，是臨床、臨床 基礎(chǔ)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)生物學(xué)研宄常用的生化指標(biāo)。
[0003] 目前血清TG檢測(cè)方法眾多，一般可分為化學(xué)法、酶法和色譜法3大類?；瘜W(xué)法是 用有機(jī)溶劑抽提標(biāo)本中的TG，去除抽提液中磷脂等干擾物后，用堿水解（皂化）TG，以過(guò) 碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用顯色反應(yīng)測(cè)甲醛。比較準(zhǔn)確的是二氯甲烷硅酸變色酸法 (VanHande-Caslson法），但是操作比較復(fù)雜，技術(shù)要求高，不適于臨床常規(guī)分析中應(yīng)用；而 色譜法對(duì)儀器和操作人員的要求非常的高，且分析成本昂貴，因此化學(xué)法和色譜法不利于 臨床推廣。
[0004] 國(guó)內(nèi)幾乎所有的臨床檢測(cè)主要采用酶法檢測(cè)血清中TG含量，其主要工作原理如 下：脂肪酶分解血清中甘油三酯為甘油與脂肪酸。在ATP存在下，甘油激酶將甘油磷酸化生 成3-磷酸甘油。后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成磷酸二羥丙酮和過(guò)氧化氫。過(guò)氧化氫與 過(guò)氧化物酶、4-氨基比林進(jìn)行顯色反應(yīng)，生成有色苯醌亞胺，在480~550 nm處吸光度值與 甘油三酯濃度成正比。此法具有簡(jiǎn)便快速、微量、精密度高的優(yōu)點(diǎn)，且特異性強(qiáng)，易于達(dá)到終 點(diǎn)，線性范圍寬，有利于臨床推廣。市面上一般比較多的是雙試劑的TG檢測(cè)試劑，而單試劑 的TG檢測(cè)試劑由于其穩(wěn)定性較差，并且試劑極其容易受到環(huán)境的污染而不為市場(chǎng)所接受。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三 脂檢測(cè)試劑。
[0006] 本發(fā)明采用以下技術(shù)方案： 一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三脂檢測(cè)試劑，其特征在于，所述試劑包括： 50-60mmol/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、l-5g/L牛血清白蛋白、 0. Ι-lg/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. Ι-lg/L過(guò)苯甲酸鈉、l-2g/L輔酶FAD、0. Ι-lg/L聚 乙烯醇 AH-26、10-100mmol/L 乙二胺四乙酸二鈉、3. 5-5mmol/L 膽酸鈉、17. 5-20. 5mo/Ll 七水合硫酸鎂、l-3mmol/L 4-氨基安替比林、3.5-5mmol /L N，N-二甲基苯胺、0. I-Ig/ L TritonX-100、l-3KU/L脂蛋白脂肪酶、0. 25-500KU/L甘油激酶、1-3KU/L過(guò)氧化物酶、 1-3KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. Ι-lg/L疊氮鈉。
[0007] 作為本發(fā)明的一種優(yōu)選，所述試劑中包括：50mmol/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨 酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、3g/L牛血清白蛋白、0. 5g/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. 5g/L過(guò)苯甲 酸鈉、I. 5g/L輔酶FAD、0. 5g/L聚乙烯醇AH-26、50mmol/L乙二胺四乙酸二鈉、4mmol/L膽 酸鈉、18mol/L七水合硫酸鎂、2mmol/L 4-氨基安替比林、4. 5mmol /L N，N-二甲基苯胺、 0. 5g/L TritonX-100、2KU/L脂蛋白脂肪酶、300KU/L甘油激酶、2KU/L過(guò)氧化物酶、2KU/L甘 油-3-磷酸氧化酶、0. 5g/L疊氮鈉。
[0008] 本發(fā)明試劑的制備方法是將各組分依次溶于IL蒸餾水中制備完成。
[0009] 本發(fā)明的有益效果是： 1)本發(fā)明選擇了 4-羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)-谷氨酸鈉緩沖液，本緩沖體系在pH值 為6. 8-8. 2范圍內(nèi)具有良好的緩沖能力，使整個(gè)配方處于一種極其穩(wěn)定的狀態(tài)，提高了試 劑的穩(wěn)定性。
[0010] 2)本發(fā)明試劑中分別添加十二烷基硫酸三乙醇胺，它能有效的保護(hù)脂蛋白脂 肪酶的穩(wěn)定性；此外，試劑中加入了輔酶FAD和聚乙烯醇AH-26,它們能夠有效地保護(hù)甘 油-3-磷酸氧化酶中酶的活性基團(tuán)使酶不易失活，從而提高酶的穩(wěn)定性。
[0011] 4)本發(fā)明中選取穩(wěn)定性較強(qiáng)，不易分解的N，N-二甲基苯胺作為色原，替代原有 4_氯苯酚，有效的減緩試劑空白升高的弊病，從而保證了試劑的穩(wěn)定性。
[0012] 5)本發(fā)明中還在試劑中加入了具有弱氧化性質(zhì)的過(guò)苯甲酸鈉，能夠有效地去除抗 壞血酸、膽紅素等還原性物質(zhì)對(duì)生化試劑還原性物質(zhì)的干擾，從而提高試劑的抗干擾能力 和穩(wěn)定性。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例1-3與對(duì)照組7天37°C熱穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果圖； 圖2是本發(fā)明實(shí)施例1-3與對(duì)照組15天試劑開瓶穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果圖； 圖3是本發(fā)明實(shí)施例1-3與對(duì)照組7天37°C熱穩(wěn)定性試劑空白檢測(cè)結(jié)果圖； 圖4是本發(fā)明實(shí)施例1-3與對(duì)照組15天試劑開瓶穩(wěn)定性試劑空白檢測(cè)結(jié)果圖。

【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0015] 實(shí)施例1 一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三脂檢測(cè)試劑，所述試劑包括：50mmol/L 4-羥乙基 哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、lg/L牛血清白蛋白、0. lg/L十二烷基硫酸三乙醇 胺、0. lg/L過(guò)苯甲酸鈉、lg/L輔酶FAD、0. lg/L聚乙烯醇AH-26、10mmol/L乙二胺四乙酸二 鈉、3. 5mmol/L膽酸鈉、17. 5mo/Ll七水合硫酸鎂、lmmol/L 4-氨基安替比林、3. 5mmol /L N， N-二甲基苯胺、0. lg/L TritonX-100、lKU/L脂蛋白脂肪酶、0. 25KU/L甘油激酶、1KU/L過(guò)氧 化物酶、1KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. lg/L疊氮鈉。
[0016] 將上述各組分依次溶于IL蒸餾水中制備完成。
[0017] 實(shí)施例2 一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三酯檢測(cè)試劑，所述試劑包括：60mmol/L 4-羥乙基 哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、5g/L牛血清白蛋白、lg/L十二烷基硫酸三乙醇 胺、lg/L過(guò)苯甲酸鈉、2g/L輔酶FAD、lg/L聚乙烯醇AH-26、100mmol/L乙二胺四乙酸二鈉、 5mmol/L膽酸鈉、20. 5mo/Ll七水合硫酸鎂、3mmol/L 4-氨基安替比林、5mmol /L N，N_二 甲基苯胺、lg/L TritonX-100、3KU/L脂蛋白脂肪酶、500KU/L甘油激酶、3KU/L過(guò)氧化物酶、 3KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、lg/L疊氮鈉。
[0018] 將上述各組分依次溶于IL蒸餾水中制備完成。
[0019] 實(shí)施例3 一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三酯檢測(cè)試劑，所述試劑包括： 50mmoI/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4 )、3g/L牛血清白蛋白、 0. 5g/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. 5g/L過(guò)苯甲酸鈉、I. 5g/L輔酶FAD、0. 5g/L聚乙烯醇 AH_26、50mmol/L乙二胺四乙酸二鈉、4mmol/L膽酸鈉、18mol/L七水合硫酸鎂、2mmol/L 4-氨基安替比林、4. 5mmol /L N，N-二甲基苯胺、0. 5g/L TritonX-100、2KU/L脂蛋白脂肪 酶、300KU/L甘油激酶、2KU/L過(guò)氧化物酶、2KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. 5g/L疊氮鈉。
[0020] 將上述組分依次溶于IL蒸餾水中制備完成。
[0021] 將本發(fā)明實(shí)施例1-3所制得的試劑進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)驗(yàn)證。試驗(yàn)分為15天開瓶穩(wěn) 定性驗(yàn)證和7天37 °C熱穩(wěn)定性驗(yàn)證試驗(yàn)。
[0022] 試驗(yàn)所用校準(zhǔn)品和質(zhì)控品分別為： 校準(zhǔn)品：朗道復(fù)合標(biāo)準(zhǔn)（848UN)其中TG的含量為I. 14mmol/L 質(zhì)控品：朗道復(fù)合高值質(zhì)控：620UE(TG靶值：2. 86mmol/L，靶值范圍：2. 41-3. 31mmol/ U ;朗道復(fù)合低值質(zhì)控：897UN(TG靶值：1. 09mmol/L，靶值范圍：0. 92-1. 26mmol/L)。
[0023] 試劑穩(wěn)定性驗(yàn)證試驗(yàn)的具體操作方法： 將本發(fā)明實(shí)施例1-3中所得檢測(cè)試劑作為試驗(yàn)組，取一種市售某公司生產(chǎn)的單試劑血 清甘油三酯檢測(cè)試劑作為對(duì)照組，試驗(yàn)組與對(duì)照組試劑每組各自取相同的兩份，一份做15 天開瓶穩(wěn)定性試驗(yàn)，將試劑開瓶放置在儀器的2-8°C冷藏箱中（15天不取出），作為15天開 瓶穩(wěn)定性檢測(cè)；另一份做37°C熱穩(wěn)定性檢測(cè)試驗(yàn)，封閉放置在37°C恒溫水浴鍋中（每天僅 在檢測(cè)的時(shí)候取出，檢測(cè)完畢后，依然封口放回37°C水浴鍋中，連續(xù)7天)，作為7天37°C熱 穩(wěn)定性驗(yàn)證。將試劑同時(shí)在東芝-120全自動(dòng)生化分析儀器上，按照如下表1方法進(jìn)行檢測(cè)， 并在儀器上建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別取朗道的高、低值凍干粉質(zhì)控品，溶解均勻后，各自平均分 成15份，-20°C儲(chǔ)存，每天高、低值質(zhì)控各取一個(gè)，并且跟蹤檢測(cè)結(jié)果，其跟蹤監(jiān)測(cè)趨勢(shì)如圖 1和圖2。每天檢測(cè)各組試劑的試劑空白，檢測(cè)結(jié)果如圖3,圖4。
[0024] 表ITG (甘油三酯）檢測(cè)試劑檢測(cè)方法

【權(quán)利要求】
1. 一種穩(wěn)定性強(qiáng)的單試劑血清甘油三脂檢測(cè)試劑，其特征在于，所述試劑包括： 50-60mmol/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、l-5g/L牛血清白蛋白、 0. 1-lg/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. 1-lg/L過(guò)苯甲酸鈉、l-2g/L輔酶FAD、0. 1-lg/L聚 乙烯醇 AH-26、10-100mmol/L 乙二胺四乙酸二鈉、3. 5-5mmol/L 膽酸鈉、17. 5-20. 5mo/Ll 七水合硫酸鎂、l-3mmol/L 4-氨基安替比林、3.5-5mmol /L N，N-二甲基苯胺、0. 1-lg/ L TritonX-100、l-3KU/L脂蛋白脂肪酶、0. 25-500KU/L甘油激酶、1-3KU/L過(guò)氧化物酶、 1-3KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. 1-lg/L疊氮鈉。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的單試劑血清甘油三酯檢測(cè)試劑，其特征在于，所述試劑中 包括：50mmol/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、3g/L牛血清白蛋白、 0. 5g/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. 5g/L過(guò)苯甲酸鈉、1. 5g/L輔酶FAD、0. 5g/L聚乙烯醇 AH_26、50mmol/L乙二胺四乙酸二鈉、4mmol/L膽酸鈉、18mol/L七水合硫酸鎂、2mmol/L 4_氨基安替比林、4. 5mmol /L N，N-二甲基苯胺、0. 5g/L TritonX-100、2KU/L脂蛋白脂肪 酶、300KU/L甘油激酶、2KU/L過(guò)氧化物酶、2KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. 5g/L疊氮鈉。
【文檔編號(hào)】C12Q1/61GK104498586SQ201410697066
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】楊君莉, 羅維曉, 甘宜梧, 譚柏清, 李靜, 王綺, 謝清華 申請(qǐng)人:山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司