一種重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，屬于發(fā)酵工程【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明以重組畢赤酵母N24菌株為發(fā)酵菌種，首先在以小麥B淀粉漿提供碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，然后通過流加含小麥B淀粉漿的補(bǔ)料培養(yǎng)基實(shí)現(xiàn)酵母細(xì)胞的高密度培養(yǎng)，最后通過階段性流加甲醇溶液誘導(dǎo)調(diào)控產(chǎn)木聚糖酶。該方法工藝簡單，酶活力高，環(huán)保無污染，具有較高的經(jīng)濟(jì)和社會效益。
【專利說明】—種重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于發(fā)酵工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地涉及一種重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]β_葡聚糖酶屬半纖維素酶類，廣義而言，包括了一切能分解β_糖苷鍵連成的葡萄糖聚合物的酶系。由于作用方式的不同，可分為內(nèi)切和外切β_葡聚糖酶兩類，按其所作用的不同糖昔糖類型，又分為如內(nèi)切β_1，4葡聚糖酶，外切β_1，3葡聚糖酶等酶種；而在啤酒生產(chǎn)中，則特指能分解大麥膠的大麥β_葡聚糖酶。微生物中，細(xì)菌、線菌和霉菌均能產(chǎn)生線菌和霉菌均能產(chǎn)生葡聚糖酶，但絕大多數(shù)菌株的酶系對大麥葡聚糖無特異性，只分解由β_1，2、β-1，3、β-1，4和β_1，6鍵分別構(gòu)成的纖維素及昆布聚糖等，這些產(chǎn)酶菌廣泛存在于青霉屬、木霉屬、曲霉屬、鐮刀菌屬、毛霉屬和纖維素諾卡氏菌屬中，如婁地青霉和木素木霉等。而能特異分解大麥β_葡聚糖的酶主要來源于芽袍桿菌屬和曲霉屬，國內(nèi)外已報(bào)道的有:枯草桿菌、地衣芽飽桿菌、短桿菌、黑曲霉、米曲霉、臭曲霉、凍土毛霉和溶黃質(zhì)厄氏菌等，該產(chǎn)品可以有效分解麥類和谷類植物胚乳細(xì)胞壁中的β -葡聚糖，在飼料中可用于降低非淀粉多糖(NSP)及其抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量，改善畜禽對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，提高畜禽的生長速度和飼料轉(zhuǎn)化效率。在啤酒釀造上用于降低麥汁黏度，改善過濾性能，提高麥芽溶出率，防止啤酒渾濁，穩(wěn)定啤酒質(zhì)量；在啤酒生產(chǎn)糖化過程中，添加該酶對縮短麥汁的過濾時(shí)間有明顯的效果。尤其是對用大麥作輔料或者當(dāng)大麥、麥芽質(zhì)量較差時(shí)，效果最佳。
[0003]小麥加工主要是面粉生產(chǎn)，并可進(jìn)一步深加工成小麥淀粉和谷朊粉及相應(yīng)轉(zhuǎn)化產(chǎn)品。在小麥淀粉生產(chǎn)過程中，由于小麥本身化學(xué)組成、加工工藝等因素，又會產(chǎn)生小麥Α、B兩種淀粉，A淀粉是精制淀粉，含蛋白質(zhì)等雜質(zhì)很少，可作為成品淀粉，廣泛使用于各行各業(yè)；也可進(jìn)一步深加工成變性淀粉、淀粉糖等淀粉衍生物，從而提高其附加值。B淀粉是生產(chǎn)A淀粉時(shí)由離心脫水機(jī)刮下來的“廢物”，又稱尾淀粉、淤渣淀粉、刮漿淀粉或淀粉糊精，通常可達(dá)原料面粉總質(zhì)量的20%左右，它主要是由小的淀粉粒、損傷的大淀粉顆粒以及少量細(xì)胞壁物質(zhì)、面筋碎片、戊聚糖和色素組成。小麥B淀粉漿在現(xiàn)有工藝中通常是做廢水處理掉，但是此廢水成分復(fù)雜、濃度高，一直是水處理的難題之一；若直接排放會對水體及周邊環(huán)境產(chǎn)生污染，治理污染的成本更高。此外，近些年來也有利用小麥B淀粉漿制高麥芽糖漿、麥芽糊精、食品添加劑、酒精及檸檬酸及α淀粉等方面的報(bào)道出現(xiàn)。
[0004]目前國內(nèi)外主要利用微生物法生產(chǎn)β_葡聚糖酶，其中能特異分解β_葡聚糖的酶類主要來源于芽抱菌屬和霉屬(黑曲霉、木霉)的代謝產(chǎn)物。但是對于真核畢赤酵母產(chǎn)葡聚糖酶的研究仍然較少。CN 102559641 A公開了一種重組畢赤酵母液體深層發(fā)酵生產(chǎn)β-1，3-1，4-葡聚糖酶方法，該方法利用重組畢赤酵母作為菌種，以酵母粉、蛋白胨、酵母氮源、生物素、甘油、H3P04、CaSO4.2H20、K2SO4, MgSO4.7H20、KOH為原料，進(jìn)行液體深層發(fā)酵生產(chǎn)β -葡聚糖酶，發(fā)酵濾液經(jīng)板框過濾，過濾后得到濾渣及β -葡聚糖酶濾液；所得到的β-葡聚糖酶濾液在經(jīng)過超濾和噴霧干燥后得到粉狀β-葡聚糖酶產(chǎn)品；所得濾渣干燥后可以作為飼料添加劑，不產(chǎn)生任何廢棄物，實(shí)現(xiàn)了 β_1，3-1，4-葡聚糖酶的高產(chǎn)率發(fā)酵，使本發(fā)明可以適用于工業(yè)生產(chǎn)。但是本發(fā)明所采用原料均為合成原料，成本較高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，針對現(xiàn)有技術(shù)的不足提供一種重組畢赤酵母生產(chǎn)β -葡聚糖酶的方法，該方法工藝簡單，酶活力高，變廢為寶，環(huán)保無污染。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種重組畢赤酵母生產(chǎn)β -葡聚糖酶的方法，以重組畢赤酵母Ν24為發(fā)酵菌種，首先在以小麥B淀粉漿提供碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，然后通過流加補(bǔ)料培養(yǎng)基實(shí)現(xiàn)酵母細(xì)胞的高密度培養(yǎng)，最后通過階段性流加甲醇溶液誘導(dǎo)調(diào)控產(chǎn)木聚糖酶，包括以下步驟:
①菌種制備及擴(kuò)大培養(yǎng):將活化后的重組畢赤酵母Ν24菌株在無菌條件下取f2環(huán)接種于500mLYPD培養(yǎng)基中，裝液量為40% (v/v)，于30°C、220r/min培養(yǎng)24h，制備一級種子；以10%接種量，將一級種子接種于5L的擴(kuò)大培養(yǎng)基中，裝液量為50%(v/v)，于30°C、220r/min培養(yǎng)18h，制備二級種子；
②增值培養(yǎng)階段:無菌條件下，將二級種子以10%的接種量接入已滅菌的30L增殖培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)初始pH值為5.5飛.0，培養(yǎng)溫度3(T32°C，初始通氣比1:0.6，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min，開始發(fā)酵；發(fā)酵8?16h，以120mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；16?24h，以180mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；24tT40h，以60mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；
③誘導(dǎo)產(chǎn)酶階段:當(dāng)增殖培養(yǎng)階段的葡萄糖含量低于1.0g/L以下，溶氧上升至60%(v/v)以上時(shí)，開始補(bǔ)加甲醇溶液進(jìn)行誘導(dǎo)產(chǎn)酶；所述誘導(dǎo)產(chǎn)酶分三個(gè)階段，第一階段:(Γ24小時(shí)，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.(Tl.5mL/h ;第二階段:24?72h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.5^2.0mL/h ;第三階段:72?96h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.5?3.0mL/h。
[0007]進(jìn)一步的，所述增殖培養(yǎng)基的組成為，玉米漿l(T30g/L，硫酸二氫鉀4?6g/L，硫酸鎂f 3g/L，余量為小麥B淀粉漿。
[0008]進(jìn)一步的，所述小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為3(T50g/L。
[0009]進(jìn)一步的，所述補(bǔ)料培養(yǎng)基含小麥B淀粉漿。
[0010]進(jìn)一步的，所述小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為5(Tl00g/L。
[0011]進(jìn)一步的，所述小麥B淀粉漿含PTMl 10mL/L。
[0012]進(jìn)一步的，所述PTMl 的組成為:CuSO4.5H20 6.0g/L, KI 0.088g/L，MnSO4.H2O3.0g/L, Na2MoO4.2H20 0.2g/L, H3BO3 0.02g/L, CoCl2.6H20 0.5g/L。
[0013]進(jìn)一步的，所述甲醇溶液含PTMl 10mL/L。
[0014]進(jìn)一步的，所述PTMl 的組成為:CuSO4.5H20 6.0g/L, KI 0.088g/L，MnSO4.H2O3.0g/L, Na2MoO4.2H20 0.2g/L, H3BO3 0.02g/L, CoCl2.6H20 0.5g/L。
[0015]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明一種重組畢赤酵母生產(chǎn)β_葡聚糖酶的方法，通過菌種制備及擴(kuò)大培養(yǎng)、增值培養(yǎng)及誘導(dǎo)產(chǎn)酶這三個(gè)階段，以小麥B淀粉漿為主要營養(yǎng)物質(zhì)，配以玉米漿、硫酸二氫鉀、硫酸鎂等成分，通過合適的發(fā)酵工藝條件，得到了重組畢赤酵母有效利用小麥B淀粉漿發(fā)酵生產(chǎn)木聚糖酶的方法。此外，以小麥B淀粉漿為主要原料，不僅實(shí)現(xiàn)了農(nóng)副產(chǎn)品的高附加值利用，有利于環(huán)保，具有較高的社會價(jià)值；也為小麥深加工提高了產(chǎn)品的附加值，為提高企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益開辟了一條新的途徑。該方法工藝簡單，酶活力高，環(huán)保無污染，具有較高的經(jīng)濟(jì)和社會效益。

【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明做進(jìn)一步地詳細(xì)說明。
[0017]實(shí)施例一
本發(fā)明重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，以重組畢赤酵母N24為發(fā)酵菌種，首先在以小麥B淀粉漿提供碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，然后通過流加補(bǔ)料培養(yǎng)基實(shí)現(xiàn)酵母細(xì)胞的高密度培養(yǎng)，最后通過階段性流加甲醇溶液誘導(dǎo)調(diào)控產(chǎn)木聚糖酶，可按以下步驟進(jìn)行:
①菌種制備及擴(kuò)大培養(yǎng):將活化后的重組畢赤酵母Ν24菌株在無菌條件下取f2環(huán)接種于500mLYPD培養(yǎng)基中，裝液量為40% (v/v),于30°C、220r/min培養(yǎng)24h，制備一級種子；以10%接種量，將一級種子接種于5L的擴(kuò)大培養(yǎng)基中，裝液量為50% (v/v),于30°C、220r/min培養(yǎng)18h，制備二級種子；
②增值培養(yǎng)階段:無菌條件下，將二級種子以10%的接種量接入已滅菌的30L增殖培養(yǎng)基中，其組成為玉米漿30g/L，硫酸二氫鉀4g/L，硫酸鎂3g/L，余量為小麥B淀粉漿，其中小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為50g/L，調(diào)節(jié)初始pH值為5.5，培養(yǎng)溫度30°C，初始通氣比1:0.6，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min，開始發(fā)酵；發(fā)酵8?16h，以120mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；16?24h，以180mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；24tT40h，以60mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基，其中，所述補(bǔ)料培養(yǎng)基含小麥B淀粉漿，其中小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為50g/L ;此步驟中，所述小麥B淀粉漿含PTMl 10mL/L ；
③誘導(dǎo)產(chǎn)酶階段:接種后45h，葡萄糖含量為0.5g/L，消耗殆盡，溶氧開始上升，當(dāng)溶氧量達(dá)70% (v/v),開始補(bǔ)加甲醇溶液進(jìn)行誘導(dǎo)產(chǎn)酶；所述誘導(dǎo)產(chǎn)酶分三個(gè)階段，第一階段:(Γ24小時(shí)，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.5mL/h ;第二階段:24?72h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入2.0mL/h ;第三階段:72?96h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.5mL/h ;所述甲醇溶液均含PTMl 10mL/L。
[0018]其中，步驟②③中，所述PTMl 的組成為:CuS04.5H20 6.0g/L, KI 0.088g/L,MnSO4.H2O 3.0g/L, Na2MoO4.2H20 0.2g/L, H3BO3 0.02g/L, CoCl2.6H20 0.5g/L。
[0019]葡聚糖酶活性的測定方法統(tǒng)一為:采用DNS法，在pH4.8、50°C條件下，每分鐘分解底物生成1.0 μ moL還原糖(以葡萄糖計(jì))所需酶量為I個(gè)活力單位。
[0020]經(jīng)測定，本實(shí)施例所得木聚糖酶的CMC酶活力為1905.20U/mL,與現(xiàn)有工藝所得木聚糖酶的CMC酶活力相比，提高12%。
[0021]實(shí)施例二
本發(fā)明重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，以重組畢赤酵母N24為發(fā)酵菌種，首先在以小麥B淀粉漿提供碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，然后通過流加補(bǔ)料培養(yǎng)基實(shí)現(xiàn)酵母細(xì)胞的高密度培養(yǎng)，最后通過階段性流加甲醇溶液誘導(dǎo)調(diào)控產(chǎn)木聚糖酶，可按以下步驟進(jìn)行::
①菌種制備及擴(kuò)大培養(yǎng):將活化后的重組畢赤酵母Ν24菌株在無菌條件下取f 2環(huán)接種于500mLYPD培養(yǎng)基中，裝液量為40% (v/v),于30°C、220r/min培養(yǎng)24h，制備一級種子；以10%接種量，將一級種子接種于5L的擴(kuò)大培養(yǎng)基中，裝液量為50%(v/v)，于30°C、220r/min培養(yǎng)18h，制備二級種子；
②增值培養(yǎng)階段:無菌條件下，將二級種子以10%的接種量接入已滅菌的30L增殖培養(yǎng)基中，其組成為玉米漿20g/L，硫酸二氫鉀5g/L，硫酸鎂lg/L，余量為小麥B淀粉漿，其中小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為30g/L，調(diào)節(jié)初始pH值為5.8，培養(yǎng)溫度31 °C，初始通氣比1:0.6，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min，開始發(fā)酵；發(fā)酵8?16h，以120mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；16?24h，以180mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；24tT40h，以60mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；其中，所述補(bǔ)料培養(yǎng)基含小麥B淀粉漿，其中小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為80g/L ;此步驟中，所述小麥B淀粉漿均含PTMl 10mL/L ；
③誘導(dǎo)產(chǎn)酶階段:接種后46h，葡萄糖含量為lg/L，消耗殆盡，溶氧開始上升，當(dāng)溶氧量達(dá)65% (v/v)，開始補(bǔ)加甲醇溶液進(jìn)行誘導(dǎo)產(chǎn)酶；所述誘導(dǎo)產(chǎn)酶分三個(gè)階段，第一階段:(Γ24小時(shí)，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.2mL/h ;第二階段:24?72h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入2.0mL/h ;第三階段:72?96h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入2.0mL/h ;所述甲醇溶液含PTMl 10mL/L。
[0022]其中，步驟②③中，所述PTMl 的組成為:CuS04.5H20 6.0g/L, KI 0.088g/L,MnS04.H2O 3.0g/L, Na2MoO4.2H20 0.2g/L, H3BO3 0.02g/L, CoCl2.6H20 0.5g/L。
[0023]經(jīng)測定，本實(shí)施例所得木聚糖酶的CMC酶活力為1814.50U/mL,與現(xiàn)有工藝所得木聚糖酶的CMC酶活力相比，提高11.5%。
[0024]實(shí)施例三
本發(fā)明重組畢赤酵母生產(chǎn)β -葡聚糖酶的方法，以重組畢赤酵母Ν24為發(fā)酵菌種，采用一步發(fā)酵法，菌種首先在以小麥B淀粉漿提供碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，然后通過流加補(bǔ)料培養(yǎng)基實(shí)現(xiàn)酵母細(xì)胞的高密度培養(yǎng)，最后通過階段性流加甲醇溶液誘導(dǎo)調(diào)控產(chǎn)木聚糖酶，可按以下步驟進(jìn)行::
①菌種制備及擴(kuò)大培養(yǎng):將活化后的重組畢赤酵母Ν24菌株在無菌條件下取f2環(huán)接種于500mLYPD培養(yǎng)基中，裝液量為40% (v/v),于30°C、220r/min培養(yǎng)24h，制備一級種子；以10%接種量，將一級種子接種于5L的擴(kuò)大培養(yǎng)基中，裝液量為50%(v/v)，于30°C、220r/min培養(yǎng)18h，制備二級種子；
②增值培養(yǎng)階段:無菌條件下，將二級種子以10%的接種量接入已滅菌的30L增殖培養(yǎng)基中，其組成為玉米漿10g/L，硫酸二氫鉀6g/L，硫酸鎂2g/L，余量為小麥B淀粉漿，其中小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為40g/L，調(diào)節(jié)初始pH值為6.0，培養(yǎng)溫度32°C，初始通氣比1:0.6，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min，開始發(fā)酵；發(fā)酵8?16h，以120mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；16?24h，以180mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；24tT40h，以60mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；其中，所述補(bǔ)料培養(yǎng)基含小麥B淀粉漿，其中小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為100g/L ;此步驟中，所述小麥B淀粉漿均含PTMl 10mL/L。
[0025]③誘導(dǎo)產(chǎn)酶階段:接種后48h，葡萄糖含量為0.8%，消耗殆盡，溶氧開始上升，當(dāng)溶氧達(dá)60% (v/v)，開始補(bǔ)加甲醇溶液進(jìn)行誘導(dǎo)產(chǎn)酶；所述誘導(dǎo)產(chǎn)酶分三個(gè)階段，第一階段:(Γ24小時(shí)，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.0mL/h ;第二階段:24?72h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.5mL/h ;第三階段:72?96h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入3.0mL/h ;所述甲醇溶液含PTMl 10mL/L。
[0026]其中，步驟②③中，所述PTMl 的組成為:CuS04.5H20 6.0g/L, KI 0.088g/L,MnSO4.H2O 3.0g/L, Na2MoO4.2H20 0.2g/L, H3BO3 0.02g/L, CoCl2.6H20 0.5g/L。
[0027]經(jīng)測定，本實(shí)施例所得木聚糖酶的CMC酶活力為1735.75U/mL,與現(xiàn)有工藝所得木聚糖酶的CMC酶活力相比，提高10%。
【權(quán)利要求】
1.一種重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，以重組畢赤酵母N24為發(fā)酵菌種，其特征在于:首先在以小麥B淀粉漿提供碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，然后通過流加補(bǔ)料培養(yǎng)基實(shí)現(xiàn)酵母細(xì)胞的高密度培養(yǎng)，最后通過階段性流加甲醇溶液誘導(dǎo)調(diào)控產(chǎn)木聚糖酶，包括以下步驟: ①菌種制備及擴(kuò)大培養(yǎng):將活化后的重組畢赤酵母Ν24菌株在無菌條件下取廣2環(huán)接種于500mLYPD培養(yǎng)基中，裝液量為40% (v/v),于30°C、220r/min培養(yǎng)24h，制備一級種子；以10%接種量，將一級種子接種于5L的擴(kuò)大培養(yǎng)基中，裝液量為50%(v/v)，于30°C、220r/min培養(yǎng)18h，制備二級種子； ②增值培養(yǎng)階段:無菌條件下，將二級種子以10%的接種量接入已滅菌的30L增殖培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)初始pH值為5.5飛.0，培養(yǎng)溫度3(T32°C，初始通氣比1:0.6，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min，開始發(fā)酵；發(fā)酵8?16h，以120mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；16?24h，以180mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基；24tT40h，以60mL/h的速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基； ③誘導(dǎo)產(chǎn)酶階段:當(dāng)增殖培養(yǎng)階段的葡萄糖含量低于10g/L以下，溶氧上升至60%(v/v)以上時(shí)，開始補(bǔ)加甲醇溶液進(jìn)行誘導(dǎo)產(chǎn)酶；所述誘導(dǎo)產(chǎn)酶分三個(gè)階段，第一階段:(Γ24小時(shí)，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.(Tl.5mL/h ;第二階段:24?72h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.5^2.0mL/h ;第三階段:72?96h，甲醇溶液流加速率為每升培養(yǎng)液中加入1.5^3.0mL/h。
2.如權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，其特征在于:所述增殖培養(yǎng)基的組成為，玉米漿l(T30g/L，硫酸二氫鉀r6g/L，硫酸鎂f 3g/L，余量為小麥B淀粉漿。
3.如權(quán)利要求2所述的重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，其特征在于:所述小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為3(T50g/L。
4.如權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，其特征在于:所述補(bǔ)料培養(yǎng)基含小麥B淀粉漿。
5.如權(quán)利要求4所述的重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，其特征在于:所述小麥B淀粉漿中葡萄糖的含量為5(Tl00g/L。
6.如權(quán)利要求廣5的任一項(xiàng)所述的重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，其特征在于:所述小麥B淀粉漿中含PTMl 10mL/L。
7.如權(quán)利要求6所述的重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，其特征在于:所述PTMl 的組成為:CuS04.5H20 6.0g/L, KI 0.088g/L, MnS04.H2O 3.0g/L, Na2Mo04.2H200.2g/L, H3BO3 0.02g/L, CoCl2.6H20 0.5g/L。
8.如權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母生產(chǎn)葡聚糖酶的方法，其特征在于:所述甲醇溶液中含PTMl 10mL/L。
9.如權(quán)利要求8所述的重組畢赤酵母生產(chǎn)β-葡聚糖酶的方法，其特征在于:所述PTMl 的組成為=CuSO4.5H20 6.0g/L, KI 0.088g/L, MnS04.H2O 3.0g/L, Na2Mo04.2H20.0.2g/L, H3BO3 0.02g/L, CoCl2.6H20 0.5g/L。
【文檔編號】C12N9/42GK104328099SQ201410638573
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月13日
【發(fā)明者】閆德冉, 趙子高, 高楠, 楊付偉, 劉樂 申請人:河南天冠纖維乙醇有限公司