一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法，即在球孢白僵菌PDA培養(yǎng)基內(nèi)加入寄主昆蟲研磨物，滅菌后接入球孢白僵菌孢子，然后置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)以合適的溫度進(jìn)行培養(yǎng)，待菌絲長出孢子后，在無菌操作臺(tái)內(nèi)，以刮刀刮下孢子，用于液體發(fā)酵培養(yǎng)或配成一定濃度懸濁液直接用于害蟲防治。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點(diǎn)是：本方法可長久保持球孢白僵菌對寄主昆蟲的毒力，并且可根據(jù)不同的寄主昆蟲進(jìn)行馴化，做某種害蟲的專用殺蟲劑，以達(dá)到更加有效的防治效果。而且針對不同寄主昆蟲馴化的菌株，可根據(jù)防治害蟲的種類進(jìn)行混合應(yīng)用，效果更好。
【專利說明】一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]球孢白僵菌(Verticillium Iecanii)是一種昆蟲病原真菌，屬于半知菌亞綱絲抱菌類輪枝菌屬匍匐組，其寄主范圍包括鞘翅目、鱗翅目、半翅目、纓翅目、直翅目、膜翅目、雙翅目、彈尾目、癭螨、線蟲，甚至還能寄生植物病菌，遺傳穩(wěn)定性較好，對人、畜、禽類和植物均無害，是一種廣闊應(yīng)用前景的生防真菌，但應(yīng)用過程中，在人工培養(yǎng)基上經(jīng)過幾代連續(xù)接種培養(yǎng)后，其對害蟲的毒力會(huì)顯著下降，甚至喪失，嚴(yán)重制約了球孢白僵菌資源的進(jìn)一步開發(fā)利用。因此，亟需建立一種適合連續(xù)培養(yǎng)又能保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明是為了解決上述不足，提供了一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法。
[0004]本發(fā)明的上述目的通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法，其特征在于:包括以下步驟:
[0005](I)配制適合球孢白僵菌生長的PDA培養(yǎng)基；
[0006](2)收集球孢白僵菌的寄主昆蟲，_70°C冷凍12h后，充分研磨成粉狀物，做成保持毒力添加劑；
[0007](3)按10g培養(yǎng)基中按50-200頭寄主昆蟲當(dāng)量(可根據(jù)寄主昆蟲體型進(jìn)行調(diào)節(jié))的比例加入保持毒力添加劑，滅菌，冷卻后制成球孢白僵菌保持毒力培養(yǎng)基；
[0008](4)在保持毒力培養(yǎng)基上接種球孢白僵菌的孢子，置于29°C，光照培養(yǎng)箱(L:D =12:12)內(nèi)培養(yǎng)；
[0009](5)待菌絲長出孢子后，在無菌操作臺(tái)內(nèi)，以刮刀刮下孢子，用于液體發(fā)酵培養(yǎng)或配成一定濃度懸濁液直接用于害蟲防治。
[0010]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點(diǎn)是:本方法可長久保持球孢白僵菌對寄主昆蟲的毒力，并且可根據(jù)不同的寄主昆蟲進(jìn)行馴化，做某種害蟲的專用殺蟲劑，以達(dá)到更加有效的防治效果。而且針對不同寄主昆蟲馴化的菌株，可根據(jù)防治害蟲的種類進(jìn)行混合應(yīng)用，效果更好。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1在保持毒力培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基上培養(yǎng)不同代數(shù)的球孢白僵菌對家蠅成蟲的致死中濃度的示意圖表。
[0012]圖2在保持毒力培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基上培養(yǎng)不同代數(shù)的球孢白僵菌對家蠅成蟲的致死中時(shí)間的示意圖表。

【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明進(jìn)一步詳述。
[0014]一株防治家蠅的球孢白僵菌，一種按照10gPDA培養(yǎng)基內(nèi)按200頭蠅蛆當(dāng)量的比例加入本發(fā)明的保持毒力添加劑做成保持毒力培養(yǎng)基1，按照10gPDA培養(yǎng)基內(nèi)按50頭蠅蛆當(dāng)量的比例加入保持毒力添加劑制成保持毒力培養(yǎng)基2，分別接種球孢白僵菌，產(chǎn)孢后在相同培養(yǎng)基上連續(xù)接種20代，檢測每一代孢子對家蠅的毒力，以普通PDA培養(yǎng)基上連續(xù)接種的球孢白僵菌孢子作為對照。結(jié)果表明，在普通培養(yǎng)基上連續(xù)接種5代后，其對家蠅成蟲的毒力顯著下降，致死中濃度LC50逐漸增加(圖1)，10代之后，其對家蠅成蟲的致死中濃度升高為原來20倍以上，20代以后，致死中濃度升高為原來的600倍以上，而在本發(fā)明的保持毒力培養(yǎng)基I和2上其致死中濃度基本沒有變化，說明其毒力基本沒有下降。同時(shí)，在普通培養(yǎng)基上培養(yǎng)10代后，球孢白僵菌對家蠅成蟲的致死中時(shí)間延長為原來的4倍，培養(yǎng)20代后延長為原來的10倍(圖2)，而在保持毒力培養(yǎng)基上的連續(xù)接種20代后，球孢白僵菌孢子對家蠅成蟲的致死中時(shí)間僅延長為原來的2倍，依然保持對家蠅成蟲的高致病力。因此，在10g PDA培養(yǎng)基中接50頭和200頭蠅蛆當(dāng)量的保持毒力添加劑，均可達(dá)到保持球孢白僵菌孢子對家蠅成蟲的高毒力的目的。說明在PDA培養(yǎng)基上加入家蠅幼蟲的磨碎物是一種保持球孢白僵菌對家蠅毒力的可靠方法，其接入比例可按照10g PDA培養(yǎng)基中加入50-200頭3齡蠅蛆當(dāng)量的保持毒力添加劑。
[0015]以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的【技術(shù)領(lǐng)域】，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種保持球孢白僵菌對寄主昆蟲毒力的方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)配制適合球孢白僵菌生長的PDA培養(yǎng)基； (2)收集球孢白僵菌的寄主昆蟲，_70°C冷凍12h后，充分研磨成粉狀物，做成保持毒力添加劑； (3)按100g培養(yǎng)基中按50-200頭寄主昆蟲當(dāng)量(可根據(jù)寄主昆蟲體型進(jìn)行調(diào)節(jié))的比例加入保持毒力添加劑，滅菌，冷卻后制成球孢白僵菌保持毒力培養(yǎng)基； (4)在保持毒力培養(yǎng)基上接種球孢白僵菌的孢子，置于29°C，光照培養(yǎng)箱(L:D= 12:12)內(nèi)培養(yǎng)； (5)待菌絲長出孢子后，在無菌操作臺(tái)內(nèi)，以刮刀刮下孢子，用于液體發(fā)酵培養(yǎng)或配成一定濃度懸濁液直接用于害蟲防治。
【文檔編號】C12R1/645GK104450534SQ201410634645
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月12日
【發(fā)明者】張忠, 陳丹, 劉婧, 張瑞玲, 史衛(wèi)峰 申請人:泰山醫(yī)學(xué)院