蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，將蛹蟲草干燥，粉碎至80~120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理1~3min；然后加熱至60~90℃，攪拌反應(yīng)20~60min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖；濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8~10，加入堿性蛋白酶水解8~12h，煮沸1~5min，終止酶解反應(yīng)，過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽。本發(fā)明提供的提取工藝，可同時(shí)提取出蛹蟲草多糖和多肽，實(shí)現(xiàn)蛹蟲草資源的充分利用，并且提取條件溫和，提取出產(chǎn)品的生物活性高，提取方法簡單易操作。
【專利說明】蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥材料【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝。

【背景技術(shù)】
[0002]現(xiàn)代社會(huì)生活節(jié)奏較快，多數(shù)人身體處于亞健康狀態(tài)，炎癥、癌癥、腫瘤等疾病時(shí)有發(fā)生。蛹蟲草作為一種食、藥兼用真菌，其有效成分例如蟲草多肽、蟲草多糖等在醫(yī)療、保健、食療等各方面都具有顯著功效，因此蛹蟲草系列產(chǎn)品的開發(fā)研究應(yīng)該受到重視。
[0003]有關(guān)研究表明，蛹蟲草富含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖三大類營養(yǎng)物質(zhì)，以及多種維生素和微量元素，含有豐富的蟲草酸(甘露醇)、蟲草素(3’ -脫氧腺苷)、蟲草多糖和超氧化物歧化酶(SOD)等生物活性物質(zhì)。蛹蟲草子座含蛋白質(zhì)25.73%、糖27.75%、脂肪2.93%，其中氨基酸總含量為11.45 mg/g，微量元素Se、Zn、Cu的含量比冬蟲夏草高出三倍以上，還測定到蛹蟲草子座包含多種B族維生素和W、VE,以及蟲草酸、SOD和蟲草素等特殊化學(xué)成分，其中SOD的含量為584 u/mg。姜泓等(2000)、呂子明等(2008)使用大孔吸附樹脂和硅膠色譜柱等分離純化技術(shù)，從蛹蟲草中首次分離純化出4種新型化合物，即蟲草環(huán)肽Α、Ν6-[β-(乙酰胺甲酰)氧乙基]腺苷、二十四烷酸單甘油酯、Ν-(2-羥乙基)腺苷。此夕卜，王剛等利用浸提、濃縮、色譜分離等常規(guī)提取分離方法，從蛹蟲草子座中分離出一種腦苷脂類化合物一腦苷脂B，此物質(zhì)被證明在動(dòng)植物細(xì)胞識別中起重要作用。Byung等從蛹蟲草子座中分離得到分子量為12kDa的小分子蛋白肽，經(jīng)檢測其對尖孢鐮刀菌有顯著抗菌活性，并能對人乳腺癌和膀胱癌細(xì)胞有抑制作用；Ng等從蛹蟲草中提取到天然活性肽Cordymin，測定到此多肽分子量為10.90kDa，其對玉米小班病菌、球腔菌、絲核菌、加拿大白色念珠菌都有顯著抑制作用；宗靜采用胃蛋白酶和胰蛋白酶雙酶酶解蛹蟲草子座制備的蛹蟲草多肽具有一定的還原能力。在蟲草素、蟲草多糖等活性成分提取過程中，子座剩余物多被以殘?jiān)问綇U棄，造成資源浪費(fèi)及環(huán)境污染，且在熱水浸提蟲草素所得蛹蟲草剩余物中，會(huì)有一些蟲草素、蟲草多糖的殘留，具有抗氧化、抑菌、提高機(jī)體免疫力等功能。因此利用熱水浸提蟲草素所得蛹蟲草剩余物制備具有特定生物學(xué)功能的蛹蟲草多肽，不僅有利于蛹蟲草資源的綜合利用，更能進(jìn)一步挖掘開發(fā)蛹蟲草的潛在價(jià)值。SDS-PAGE和葡聚糖凝膠層析技術(shù)作為現(xiàn)階段在蛋白多肽物質(zhì)測定分離中應(yīng)用最廣的方法之一，可分離鑒定分子量在15-200kDa范圍內(nèi)的大分子蛋白及肽類物質(zhì)，對多肽組分的帶電性質(zhì)、形狀等也可作出初步鑒定。另外，蛹蟲草HWM剩余物經(jīng)酶解后所得的酶解液呈現(xiàn)棕色且顏色較深，影響了后續(xù)蛹蟲草多肽的分離純化。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，可同時(shí)提取出蛹蟲草多糖和多肽，實(shí)現(xiàn)蛹蟲草資源的充分利用，并且提取條件溫和，提取出產(chǎn)品的生物活性高，提取方法簡單易操作。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
1)將蛹蟲草干燥，粉碎至8(Γ120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理f3min ；
2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲草水溶液加熱至6(T90°C，攪拌反應(yīng)2(T60min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8?10，加入堿性蛋白酶水解8?12h，煮沸I飛min，終止酶解反應(yīng)，過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽。
[0006]步驟I)中蛹蟲草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:1(Γ20，單位為g/mL。
[0007]步驟I)超聲處理的超聲頻率為100(Tl800W。
[0008]步驟2)中加熱至80°C,攪拌反應(yīng)40min。
[0009]步驟3)中堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入400(T6000U。
[0010]步驟3)中堿性蛋白酶水解1h,煮沸2min。
[0011]有益效果:本發(fā)明提供的一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，可同時(shí)提取出蛹蟲草多糖和多肽，實(shí)現(xiàn)蛹蟲草資源的充分利用，并且提取條件溫和，提取出產(chǎn)品的生物活性高，提取方法簡單易操作。
[0012]【具體實(shí)施方式】實(shí)施例1
一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲草干燥，粉碎至100目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理Imin ;蛹蟲草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:18，單位為g/mL。
[0013]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲草水溶液加熱至90°C，攪拌反應(yīng)20min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖，提取率65% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8，加入堿性蛋白酶水解8h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入4000U，煮沸3min，終止酶解反應(yīng)，過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽，提取率78%。
[0014]實(shí)施例2
一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲草干燥，粉碎至80目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理f 3min ;蛹蟲草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:10，單位為g/mL。
[0015]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲草水溶液加熱至70°C，攪拌反應(yīng)30min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖，提取率63% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至10，加入堿性蛋白酶水解8h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入5000U，煮沸3min，終止酶解反應(yīng)，過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽，提取率71%。
[0016]實(shí)施例3
一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲草干燥，粉碎至80目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理2min ;蛹蟲草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:18，單位為g/mL。
[0017]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲草水溶液加熱至80°C，攪拌反應(yīng)30min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖，提取率66% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至9，加入堿性蛋白酶水解10h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入5000U，煮沸2min，終止酶解反應(yīng)，過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽，提取率75%。
[0018]實(shí)施例4
一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲草干燥，粉碎至80目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理3min ;蛹蟲草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:15，單位為g/mL。
[0019]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲草水溶液加熱至90°C，攪拌反應(yīng)20min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖，提取率69% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8，加入堿性蛋白酶水解12h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入6000U，煮沸5min，終止酶解反應(yīng)，過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽，提取率76%。
[0020]實(shí)施例5
一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲草干燥，粉碎至120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理2min ;蛹蟲草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:16，單位為g/mL。
[0021]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲草水溶液加熱至60°C，攪拌反應(yīng)2(T60min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖，提取率68% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至9，加入堿性蛋白酶水解8h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入6000U，煮沸l(wèi)min，終止酶解反應(yīng)，過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽，提取率72%。
[0022]實(shí)施例6
一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲草干燥，粉碎至100目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理2min ;蛹蟲草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:14，單位為g/mL。
[0023]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲草水溶液加熱至90°C，攪拌反應(yīng)20min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖，提取率70% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8，加入堿性蛋白酶水解10h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入4000U，煮沸2min，終止酶解反應(yīng)，過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽，提取率79%。
[0024]實(shí)施例7
一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，包括如下步驟:
I)將蛹蟲草干燥，粉碎至120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理Imin ;蛹蟲草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:12，單位為g/mL。
[0025]2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲草水溶液加熱至70°C，攪拌反應(yīng)35min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖，提取率74% ；
3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8.5，加入堿性蛋白酶水解10h，堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入5000U，煮沸2min，終止酶解反應(yīng)， 過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽，提取率84%。
【權(quán)利要求】
1.一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于包括如下步驟:1)將蛹蟲草干燥，粉碎至8(Γ120目，加入蒸餾水，攪拌均勻，然后超聲處理f3min ； 2)將步驟I)超聲處理后的蛹蟲草水溶液加熱至6(T90°C，攪拌反應(yīng)2(T60min，然后過濾收集濾餅和濾液，濾液加入乙醇，靜置，析出蛹蟲草多糖； 3)將步驟2)收集的濾餅加入蒸餾水中，攪拌，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8?10，加入堿性蛋白酶水解8?12h，煮沸I飛min，終止酶解反應(yīng)，過濾，取濾液HPLC純化得蛹蟲草多肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟I)中蛹蟲草與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:1(Γ20，單位為g/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟I)超聲處理的超聲頻率為100(Tl800W。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟2)中加熱至80°C,攪拌反應(yīng)40min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟3)中堿性蛋白酶加入量為每克濾餅加入400(T6000U。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛹蟲草多糖和多肽的提取工藝，其特征在于:步驟3)中堿性蛋白酶水解10h，煮沸2min。
【文檔編號】C12P21/06GK104403012SQ201410623832
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月10日
【發(fā)明者】金仲恩, 全春蘭, 張帆 申請人:蘇州蔻美新材料有限公司