一種固液態(tài)聯(lián)合發(fā)酵產(chǎn)莫納可林k功能性紅曲的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種固液態(tài)聯(lián)合發(fā)酵產(chǎn)莫納可林K功能性紅曲的方法，屬于發(fā)酵工程領(lǐng)域。本發(fā)明首先將固態(tài)基質(zhì)經(jīng)過一定干熱處理過程，使物料達到一定膨化度、降低含水量和滅菌的目的，然后將發(fā)酵液與將處理后的固態(tài)基質(zhì)按照按質(zhì)量比例1：(0.5-5)的比例混合均勻，一定條件下再發(fā)酵10-20天。發(fā)酵結(jié)束后，將固態(tài)基質(zhì)烘干粉碎，即得到富含莫納可林K的紅曲粉末產(chǎn)品。本方法相對于單純的液態(tài)發(fā)酵可以大幅度提高莫納可林K的產(chǎn)量以及避免了液態(tài)發(fā)酵復(fù)雜的后期產(chǎn)物提取純化的過程。相對于單純固態(tài)發(fā)酵可以縮短發(fā)酵時間以及提高固態(tài)原料的利用效率。通過此法生產(chǎn)紅曲生理活性物質(zhì)，可以在保健食品和藥品等領(lǐng)域大范圍應(yīng)用。
【專利說明】一種固液態(tài)聯(lián)合發(fā)酵產(chǎn)莫納可林K功能性紅曲的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種固液態(tài)聯(lián)合發(fā)酵產(chǎn)莫納可林Κ功能性紅曲的方法，屬于發(fā)酵工程 領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 莫納可林Κ是人體膽固醇生物合成的關(guān)鍵酶輕甲基戊二酞輔酶Α還原酶（HMG - CoA還原酶）的競爭性抑制劑，可有效降低人體內(nèi)低密度膽固醇（LDL)的水平。目前國內(nèi)外 利用紅曲菌發(fā)酵法生產(chǎn)莫納可林K的方法主要有液態(tài)發(fā)酵法和固態(tài)發(fā)酵法。
[0003] 液態(tài)發(fā)酵法是在通風機械發(fā)酵罐中進行，可人為地優(yōu)化培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件。液態(tài) 發(fā)酵法可利用設(shè)備容量大的特點進行大規(guī)模生產(chǎn)，且人力成本低，自動化程度高等優(yōu)點，但 液態(tài)發(fā)酵相對于固態(tài)發(fā)酵設(shè)備投入大，動力消耗大，無菌要求比較嚴格，后處理工藝比較繁 瑣。而且目前液態(tài)發(fā)酵含莫納可林K的發(fā)酵水平較低，達不到工業(yè)化生產(chǎn)的要求而未實現(xiàn) 工業(yè)化的生產(chǎn)。
[0004] 固態(tài)發(fā)酵法以谷物為原料，將菌種轉(zhuǎn)接到滅菌的固態(tài)基質(zhì)，經(jīng)過固態(tài)發(fā)酵，烘干粉 碎得到最終產(chǎn)品。該法得到的紅曲產(chǎn)品稱紅曲粉，可作為保健食品或藥品用于高血脂癥人 群。固態(tài)發(fā)酵法有著設(shè)備投入小，能耗少，無菌要求低，發(fā)酵后處理工藝簡便，并且莫納可林 K的含量比較高。但是目前沒有適合于功能性紅曲的專用固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器。且固態(tài)發(fā)酵工 藝存在固態(tài)發(fā)酵時間長，易染菌、勞動強度大、人力消耗多、后處理工藝相對較易、難以大規(guī) 模生產(chǎn)等缺點。
[0005] 創(chuàng)造一種固態(tài)-液態(tài)聯(lián)合發(fā)酵法體系，就可將固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵的優(yōu)點相結(jié)合 在一起，從而解決液態(tài)或固態(tài)發(fā)酵體系所固有的難題，從而實現(xiàn)可大規(guī)模生產(chǎn)功能性紅曲， 提高生產(chǎn)水平及效率，增加企業(yè)效益的目的。
[0006] 但是，液態(tài)和固態(tài)聯(lián)合發(fā)酵法并不是將液態(tài)和固態(tài)二種物料簡單地組合在一起進 行發(fā)酵。因為固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)功能性紅曲時，對物料水分含量的要求很嚴格。太高或太低均 不行。常規(guī)的功能性紅曲的固態(tài)發(fā)酵，物料的含水量一般較高，如果再將液態(tài)發(fā)酵液與這種 固態(tài)發(fā)酵物料混在一起，將使后續(xù)的物料基質(zhì)含水量更高，造成后續(xù)發(fā)酵無法正常進行而 導(dǎo)致失敗。因此需要有特殊的方法處理固態(tài)原料，使其所含有水分含量大大下降，同時又要 達到原料滅菌的要求。
[0007] 本發(fā)明的固態(tài)發(fā)酵原料經(jīng)過干熱處理，使原料淀粉等物質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化達到足 夠的糊化度，同時可對原料進行有效滅菌。由于采用的是干熱處理法，而不采用傳統(tǒng)的濕熱 滅菌方法，可使固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)的含水量較低，這樣就可大幅度提高液態(tài)發(fā)酵液的接入量。在 紅曲菌接種量大的情況下，紅曲菌可快速生長，一旦紅曲菌形成生長優(yōu)勢，則可有效地避免 雜菌的污染，為后續(xù)安全地進行固態(tài)發(fā)酵提供保障，最終達到提高莫納可林K發(fā)酵水平的 目的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種固液態(tài)聯(lián)合發(fā)酵產(chǎn)莫納可林K功能性紅曲 的方法，尤其是一種紅曲菌液態(tài)-固態(tài)聯(lián)合法發(fā)酵生產(chǎn)含莫納可林Κ的功能性紅曲的方法。
[0009] 本發(fā)明技術(shù)方案主要包括以下步驟：
[0010] (1)對固態(tài)原料進行干熱法預(yù)處理，達到既滅菌又降低物料水分含量的目的； [0011] (2)培養(yǎng)獲得紅曲菌種子液；
[0012] (3)前期紅曲菌液態(tài)發(fā)酵；
[0013] (4)將發(fā)酵液接入固態(tài)原料中，繼續(xù)進行后期紅曲菌固態(tài)發(fā)酵；
[0014] 所述方案還包括固態(tài)發(fā)酵結(jié)束后進行烘干、粉碎等發(fā)酵后處理。
[0015] 所述固態(tài)原料優(yōu)選大麥、小麥、大米、小米、玉米或高粱等顆粒狀的廉價谷物。
[0016] 所述步驟（1)對固態(tài)原料進行干熱法預(yù)處理優(yōu)選將谷物原料經(jīng)過日光暴曬、紅外 加熱、微波處理、高溫烘焙或高壓汽爆等方式處理，使得物料含水量降至0. 5% -5%得到固 態(tài)發(fā)酵基質(zhì)，滅菌效果良好，密封保存待用。
[0017] 所述日光暴曬處理條件優(yōu)選1500-2000W/m2日照強度處理l-4h，攤平厚度不超過 2cm〇
[0018] 所述紅外加熱優(yōu)選紅外波長75?100(^111加熱100-2001：處理0.5-101^11。
[0019] 所述微波處理優(yōu)選800-1500W處理0· 5-5min，處理量為0· 5-2kg。
[0020] 所述高溫烘焙優(yōu)選100-200°C處理0· 5-2h。
[0021] 所述高壓汽爆優(yōu)選1. 0-1. 8MPa，維持3-10min氣壓驟減，烘干至含水量 0· 5% -10%。
[0022] 所述步驟（2)紅曲菌種優(yōu)選保藏編號為CGMCC3. 4577的紫紅曲霉，紅曲菌是食品 工業(yè)常用菌種。
[0023] 所述步驟（2)紅曲菌種子液是將紅曲菌經(jīng)PDA斜面培養(yǎng)基活化培養(yǎng)成熟后，制備 孢子懸浮液，其中孢子懸浮液中孢子的濃度不低于1〇 7個/ml。將孢子懸浮液按體積比10% 的比例接入種子培養(yǎng)基中，30°C 180r/min通風培養(yǎng)2天獲得種子液。
[0024] 所述種子培養(yǎng)基優(yōu)選（1L):葡萄糖60g、蛋白胨25g、玉米漿10mL、NaN032g、 Κ2ΗΡ04 · 3H201g、MgS040. 5g。
[0025] 所述步驟（3)前期紅曲菌液態(tài)發(fā)酵時，先將液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按照配方配制，滅菌 后按10-20% (V/V)比例將培養(yǎng)好的紅曲菌種子液接入液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，32°C、180r/min 培養(yǎng)2天，然后28°C、180r/min培養(yǎng)8-18天。進一步優(yōu)選32°C、180r/min培養(yǎng)2天，然后 28°C、180r/min 培養(yǎng) 16 天。
[0026] 所述液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)選：葡萄糖20g · I71、大豆水解液50mL · L' NaN032g · L' MgS04 · 7H201g · L'K2HP04 · 3H201g · L'玉米漿 10mL · Γ1，pH 自然。
[0027] 所述步驟（4)固態(tài)發(fā)酵是將液態(tài)發(fā)酵液按照固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液質(zhì)量比 1 :(0. 5-2) (W/W)轉(zhuǎn)接到固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)，25-32°C發(fā)酵2天，然后20-30°C發(fā)酵6-20天，每48h 攪拌一次。
[0028] 所述步驟（4)進一步優(yōu)選：將液態(tài)發(fā)酵液按照固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液質(zhì)量比 1 :(1-1.3) (W/W)轉(zhuǎn)接到固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)，28-32°C發(fā)酵2天，然后24-28°C發(fā)酵8-16天，每48h 攪拌一次。
[0029] 所述步驟（4)還進一步優(yōu)選：將液態(tài)發(fā)酵液按照固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液質(zhì)量 比1 : (1-1. 3) (W/W)轉(zhuǎn)接到固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)，30°C發(fā)酵2天，然后25°C發(fā)酵12天，每48h攪拌 一次。
[0030] 所述步驟⑷發(fā)酵結(jié)束后將樣品高溫滅菌，然后50°C左右烘干，粉碎。
[0031] 本發(fā)明固態(tài)原料采用干熱處理法，使固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)的含水量較低，可大幅度提高 液態(tài)發(fā)酵液的接入量。固態(tài)料經(jīng)過干熱處理以及紅曲菌大量轉(zhuǎn)接的情況下，有效地避免雜 菌的污染，為后續(xù)安全地進行固態(tài)發(fā)酵提供保障。本發(fā)明固態(tài)基質(zhì)處理方法使得液態(tài)-固 態(tài)聯(lián)合發(fā)酵成為可能，充分發(fā)揮了前期液態(tài)發(fā)酵自動化高、規(guī)?；蟮葍?yōu)點，后期轉(zhuǎn)入固態(tài) 發(fā)酵避免了液態(tài)發(fā)酵繁瑣的后處理過程。相比于接入時的液態(tài)發(fā)酵液Monacolin K含量 350-500mg/kg，經(jīng)過固態(tài)發(fā)酵Monacolin K含量提高了 3倍以上，同時也保留了傳統(tǒng)固態(tài)發(fā) 酵紅曲產(chǎn)品色澤宜人，健康安全，應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點。跟傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵需要20天以上的發(fā) 酵時間相比，本發(fā)明縮短固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)的時間，降低廠商發(fā)酵生產(chǎn)過程的投入。

【具體實施方式】
[0032] 種子培養(yǎng)基（1L):葡萄糖 60g、蛋白陳 25g、玉米漿 10mL、NaN032g、K2HP04 ·3Η2018、 MgS040. 5g。
[0033] 液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖20g · L'大豆水解液50mL · L' NaN032g · L' MgS04 · 7H201g · L'K2HP04 · 3H201g · L'玉米漿 lOmL · Γ1，pH 自然。
[0034] Monacolin K含量的測定方法：取液態(tài)發(fā)酵液10ml或固態(tài)紅曲米粉lg，用 70%酒精定容至50ml，55°C水浴萃取lh微濾后進行液相測定Monacolin K。色譜柱： Z0RBAXSB-C18,150mmX 4. 6mm X 5 μ m ;流動相：乙臆：水=55:45 (v/v)，用憐酸調(diào) pH 至 2· 5 ; 柱溫：28°C ;流速：1. OmL · min-1 ;進樣量：20 μ L ;檢測器：紫外檢測器，檢測波長238nm。
[0035] 實施例1液態(tài)發(fā)酵實例
[0036] 液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按照葡萄糖20g · Γ1，大豆水解液50mL · Γ1，NaN032g · Γ1， MgS04 · 7H201g · ΙΛ Κ2ΗΡ04 · 3H201g · ΙΛ 玉米漿 10mL · ΙΛ pH 自然配制，121°C滅菌 20min。 接入15% (V/V)的紅曲菌CGMCC3. 4577種子液，混合后轉(zhuǎn)速180r/min，32°C培養(yǎng)2天，28°C 培養(yǎng)18天。發(fā)酵結(jié)束后，取發(fā)酵液用70 %的酒精55°C水浴浸提lh，微濾后用HPLC測定 Monacolin K 含量，Monacolin K 含量為 428mg/L。
[0037] 實施例2傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵
[0038] 以大米為固態(tài)基質(zhì)載體，大米與營養(yǎng)液按質(zhì)量比1:1混合，121°C滅菌20min，接 入15% (W/W)的紅曲菌CGMCC3. 4577種子液，混合均勻后30°C培養(yǎng)2天，28°C培養(yǎng)20天， 其間每3天翻拌一次。營養(yǎng)液成分為葡萄糖30g/L、大豆水解液50mL/L、甘油400g/L、 NaN0310g/L、K2HP044g/L、MgS042g/L、ZnS0 4 · 7H208g/L、玉米漿 50mL/L。發(fā)酵結(jié)束后將樣品 高溫濕熱滅菌后烘干粉碎，用70%的酒精55°C水浴浸提lh，微濾后用HPLCMonacolin K含 量，Monacolin Κ含量為4380mg/kg，發(fā)酵產(chǎn)品收率53%。
[0039] 實施例3固液聯(lián)合發(fā)酵
[0040] 以大米作為固態(tài)基質(zhì)載體，大米經(jīng)過紅外加熱160°C處理5min待用。液態(tài)發(fā)酵培 養(yǎng)基按照配方配制好，經(jīng)過121°C滅菌15min，按照10% (V/V)的接種量接入CGMCC3. 4577 種子液，混合后轉(zhuǎn)速180r/min、32°C培養(yǎng)2天，28°C培養(yǎng)12天，按照大米基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液 質(zhì)量比1:1 (W/W)轉(zhuǎn)接到大米基質(zhì)上去，30°C培養(yǎng)2天，25°C培養(yǎng)12天，發(fā)酵結(jié)束后高溫滅 菌、烘干后粉碎。用70%酒精55°C水浴萃取lh微濾后測定Monacolin K含量為2165mg/ kg，發(fā)酵產(chǎn)品收率76%。
[0041] 實施例4固液聯(lián)合發(fā)酵
[0042] 以大米作為固態(tài)基質(zhì)載體，小米經(jīng)過2000W/m2日照強度（攤平厚度不超過2cm)處 理3h待用。液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按照配方配制好，經(jīng)過121°C滅菌15min，按照10% (V/V)的接 種量接入CGMCC3. 4577種子液，混合后轉(zhuǎn)速180r/min，32°C培養(yǎng)2天，28°C培養(yǎng)12,天按照 大米基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液質(zhì)量比1:1 (W/W)轉(zhuǎn)接到大米基質(zhì)上去，30°C培養(yǎng)2天，25°C培養(yǎng)12 天，發(fā)酵結(jié)束后高溫滅菌、烘干后粉碎。用70%酒精55°C水浴萃取lh微濾后測定Monacolin K含量為1863mg/kg，發(fā)酵產(chǎn)品收率78%。
[0043] 實施例5固液聯(lián)合發(fā)酵
[0044] 以大米作為固態(tài)基質(zhì)載體，小麥經(jīng)過180°C高溫烘焙處理5min待用。液態(tài)發(fā)酵培 養(yǎng)基按照配方配制好，經(jīng)過121°C滅菌15min，按照10% (V/V)的接種量接入CGMCC3. 4577 種子液，混合后轉(zhuǎn)速180r/min，32°C培養(yǎng)2天，28°C培養(yǎng)12天，按照大米基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液 質(zhì)量比1:1 (W/W)轉(zhuǎn)接到大米基質(zhì)上去，30°C培養(yǎng)2天，25°C培養(yǎng)12天，發(fā)酵結(jié)束后高溫滅 菌、烘干后粉碎。用70%酒精551：水浴萃取111微濾后測定此1^(3 〇1丨111(含量為251〇1^/ kg，發(fā)酵產(chǎn)品收率75%。
[0045] 實施例6固液聯(lián)合發(fā)酵
[0046] 以大米作為固態(tài)基質(zhì)載體，大米顆粒經(jīng)過高壓汽爆1. 5MPa，維持3-10min氣壓驟 減，烘干至含水量3%待用。液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按照配方配制好，經(jīng)過121°C滅菌15min，按照 10% (V/V)的接種量接入CGMCC3. 4577種子液，混合后轉(zhuǎn)速180r/min，32°C培養(yǎng)2天，28°C 培養(yǎng)12天，按照固態(tài)基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液質(zhì)量比1:1 (W/W)轉(zhuǎn)接到大米基質(zhì)上去，30°C培養(yǎng)2 天，25°C培養(yǎng)12天，發(fā)酵結(jié)束后高溫滅菌、烘干后粉碎，用70%酒精55°C水浴萃取lh微濾 后測定Monacolin K含量為3540mg/kg，發(fā)酵產(chǎn)品收率77%。
[0047] 實施例7固液聯(lián)合發(fā)酵
[0048] 以大米作為固態(tài)基質(zhì)載體，大米顆粒經(jīng)過高壓汽爆1. 5MPa，維持3-10min氣壓驟 減，烘干至含水量3%待用。液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按照配方配制好，經(jīng)過121°C滅菌15min，按照 10% (V/V)的接種量接入CGMCC3. 4577種子液，混合后轉(zhuǎn)速180r/min，32°C培養(yǎng)2天，28°C 培養(yǎng)12天，按照固態(tài)基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液質(zhì)量比1:0. 8 (W/W)轉(zhuǎn)接到大米基質(zhì)上去，30°C培養(yǎng) 2天，25°C培養(yǎng)12天，發(fā)酵結(jié)束后高溫滅菌、烘干后粉碎，用70%酒精55°C水浴萃取lh微濾 后測定Monacolin K含量為2478mg/kg，發(fā)酵產(chǎn)品收率76%。
[0049] 實施例8固液聯(lián)合發(fā)酵
[0050] 以大米作為固態(tài)基質(zhì)載體，大米顆粒經(jīng)過高壓汽爆1. 5MPa，維持3-10min氣壓驟 減，烘干至含水量3%待用。液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按照配方配制好，經(jīng)過121°C滅菌15min，按照 10% (V/V)的接種量接入CGMCC3. 4577種子液，混合后轉(zhuǎn)速180r/min，32°C培養(yǎng)2天，28°C 培養(yǎng)12天，按照固態(tài)基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液質(zhì)量比1:1. 3 (W/W)轉(zhuǎn)接到大米基質(zhì)上去，30°C培養(yǎng) 2天，25°C培養(yǎng)12天，發(fā)酵結(jié)束后高溫滅菌、烘干后粉碎，用70%酒精55°C水浴萃取lh微濾 后測定Monacolin K含量為4603mg/kg，發(fā)酵產(chǎn)品收率80%。
[0051] 實施例9固液聯(lián)合發(fā)酵
[0052] 以大米作為固態(tài)基質(zhì)載體，大米顆粒經(jīng)過高壓汽爆1. 5MPa，維持3-10min氣壓驟
【權(quán)利要求】
1. 一種固液態(tài)聯(lián)合發(fā)酵產(chǎn)莫納可林K功能性紅曲的方法，其特征在于，主要包括以下 步驟： (1) 對固態(tài)原料進行干熱法預(yù)處理，達到既滅菌又使得物料含水量降至0. 5% -5 %的 目的； (2) 培養(yǎng)獲得紅曲菌種子液； (3) 前期紅曲菌液態(tài)發(fā)酵； (4) 將發(fā)酵液接入固態(tài)原料中，繼續(xù)進行后期紅曲菌固態(tài)發(fā)酵。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述固態(tài)原料是大麥、小麥、大米、小米、 玉米或高粱中的一種或幾種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1)對固態(tài)原料進行干熱法預(yù)處 理是將谷物原料經(jīng)過日光暴曬、紅外加熱、微波處理、高溫烘焙或高壓汽爆處理，使得物料 含水量降至〇. 5% -5%得到固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述日光暴曬處理條件 是1500-2000W/m2日照強度處理l-4h ;所述紅外加熱是紅外波長75?1000 μ m加熱 100-200°C處理0. 5-10min ;所述微波處理是800-1500W處理0. 5-5min ;所述高溫烘焙是 100-20(TC處理0. 5-2h ;所述高壓汽爆是1. 0-1. 8MPa維持3-10min氣壓驟減，烘干至含水 量 0· 5% -10%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述紅曲菌種的保藏編號為 CGMCC3. 4577。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟（2)紅曲菌種子液是將紅曲菌種 經(jīng)活化培養(yǎng)成熟后，制備孢子懸浮液，孢子懸浮液中孢子的濃度不低于1〇 7個/ml ;將孢子 懸浮液按體積比1〇%的比例接入種子培養(yǎng)基中，3〇1：18〇1'/1^11通風培養(yǎng)2天獲得種子液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述種子培養(yǎng)基含有葡萄糖60g/L、蛋白 胨 25g/L、玉米漿 10mL/L、NaN032g/L、K2HP04 · 3H201g/L、MgS040. 5g/L。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟（3)前期紅曲菌液態(tài)發(fā)酵時，按 10-20 %比例將培養(yǎng)好的紅曲菌種子液接入滅菌后的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，32°C、180r/min培 養(yǎng)2天，然后28°C、180r/min培養(yǎng)8-18天。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖 20g · Γ1、大豆水解液 50mL · L'NaN032g · L'MgS04 · 7H201g · L'K2HP04 · 3H201g · L'玉 米漿10ιΛ·?ΛρΗ自然。
10. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟（4)固態(tài)發(fā)酵是將液態(tài)發(fā)酵液 按照固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)與液態(tài)發(fā)酵液質(zhì)量比1 :(0.5-2)的比例轉(zhuǎn)接到固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)，25-32°C 發(fā)酵2天，然后20-30°C發(fā)酵6-20天，每48h攪拌一次。
【文檔編號】C12R1/645GK104109700SQ201410326589
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年7月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月9日
【發(fā)明者】許贛榮, 趙光隆, 張薄博 申請人:江南大學(xué)