一株解淀粉芽孢桿菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株解淀粉芽孢桿菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用。解淀粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens）SIP0902菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M2014323。本發(fā)明的解淀粉芽孢分離自凡納濱對(duì)蝦的腸道，是一種內(nèi)源性菌株，該菌株對(duì)包括副溶血弧菌、鰻弧菌、溶藻弧菌等7種水產(chǎn)動(dòng)物致病弧菌均具有較強(qiáng)的拮抗效果。該菌株制備的解淀粉芽孢桿菌粉劑，可明顯增強(qiáng)凡納濱對(duì)蝦非特性免疫功能，提高對(duì)蝦抗病原菌感染能力。
【專利說明】一株解淀粉芽孢桿菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一株解淀粉芽孢桿菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖 中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 水產(chǎn)養(yǎng)殖在我國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)中具有舉足輕重的地位。但隨著集約化、規(guī)?；?、工廠 化等高密度養(yǎng)殖模式的迅猛發(fā)展及整個(gè)養(yǎng)殖環(huán)境的持續(xù)惡化，水產(chǎn)養(yǎng)殖病害頻繁爆發(fā)每年 給水產(chǎn)養(yǎng)殖造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失；抗生素的使用在早期的水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中發(fā)揮了重要作 用，是人們防止水產(chǎn)動(dòng)物病害的首選方案；但病原微生物耐藥性的不斷增強(qiáng)以及人們對(duì)抗 生素濫用、水產(chǎn)品藥物殘留等關(guān)系人類健康問題的關(guān)注，迫使抗生素以及一些化學(xué)藥品的 在水產(chǎn)養(yǎng)殖的應(yīng)用都將受到嚴(yán)格限制；因此開發(fā)環(huán)境友好及可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的病害防控技 術(shù)及產(chǎn)品是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)亟需解決的問題。
[0003] 生物拮抗是自然界普遍存在的現(xiàn)象，某些種類的微生物通過競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)成分、產(chǎn)生 抑菌物質(zhì)、降解信號(hào)分子等不同方式以達(dá)到抑制其他微生物生長(zhǎng)的目的。微生物防控技術(shù) 就是基于這種自然法則，通過在飼料或養(yǎng)殖環(huán)境施加有益微生物控制腸道或水環(huán)境中致病 微生物的數(shù)量，維持養(yǎng)殖動(dòng)物腸道健康及良好的養(yǎng)殖環(huán)境。作為抗生素的一種替代方案，益 生菌的使用在保證養(yǎng)殖動(dòng)物生產(chǎn)性能及健康狀況的同時(shí)，也能避免藥物殘留等潛在的水產(chǎn) 品安全風(fēng)險(xiǎn)，可以創(chuàng)造較好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
[0004] 現(xiàn)有的益生菌產(chǎn)品種類繁多，主要包括光合細(xì)菌、酵母菌、乳酸菌及芽孢桿菌。其 中芽孢桿菌屬于芽孢桿菌科，廣泛分布于養(yǎng)殖環(huán)境及動(dòng)物腸道，因?yàn)榫哂休^強(qiáng)的胞外酶分 泌能力以及容易生產(chǎn)、保存等優(yōu)點(diǎn)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中具有非常廣泛的應(yīng)用。同時(shí)由于芽孢桿菌 種類繁多，不同種屬甚至同一種屬不同菌株之間，其特性(如胞外酶分泌能力、拮抗物質(zhì)的 種類及效果)可能也千差萬別。因此在眾多的芽孢桿菌中篩選到具有廣譜抗菌效果，來源于 對(duì)蝦腸道、適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的獨(dú)特菌株尤為重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一株解淀粉芽孢桿菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是： 解淀粉芽抱桿菌(ifeciBiAs 已于 2014 年 7 月 4 日保藏 于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO :M 2014323。
[0007] 解淀粉芽孢桿菌SIP0902在制備抑菌制劑中的應(yīng)用。
[0008] 解淀粉芽孢桿菌SIP0902在制備水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑中的應(yīng)用。
[0009] 解淀粉芽孢桿菌SIP0902在制備養(yǎng)殖水體改善劑中的應(yīng)用。
[0010] 一種抑菌制劑，其含有解淀粉芽孢桿菌SIP0902。
[0011] 一種水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑，其含有解淀粉芽孢桿菌SIP0902。
[0012] 一種水產(chǎn)養(yǎng)殖調(diào)水劑，其含有解淀粉芽孢桿菌SIP0902。
[0013] 一種解淀粉芽孢桿菌SIP0902菌粉的制備方法，包括如下步驟： (1) 將解淀粉芽孢桿菌SIP0902菌種劃線于種子固體培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)； (2) 種子培養(yǎng)結(jié)束后，從平板挑取一個(gè)單菌落接種于解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵液中發(fā)酵培 養(yǎng)，培養(yǎng)溫度控制在28-37°C ; (3) 當(dāng)發(fā)酵液0D600值達(dá)到1. 5-2. 0時(shí)，停止發(fā)酵，取發(fā)酵液離心，棄上清液獲得濕 菌泥，并在菌泥中加入冷凍干燥保護(hù)劑，混合均勻后進(jìn)行冷凍干燥既得解淀粉芽孢桿菌 SIP0902 粉劑。
[0014] 步驟（1)所述種子固體培養(yǎng)基的組成為：葡萄糖1.0%，蛋白胨0.5%，酵母膏 1. 〇%，瓊脂粉1. 5%，pH 7. 0, ％表示質(zhì)量百分比。
[0015] 步驟（2)所述解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵液的組成為：酵母膏0.1%，蛋白胨0.5%，淀 粉1. 0%，硫酸亞鐵0. 001%，余量為水，％表示質(zhì)量百分比。
[0016] 本發(fā)明的有益效果是： 本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌SIP0902分離自凡納濱對(duì)蝦的腸道，是一種內(nèi)源性菌株，該 菌株對(duì)包括副溶血弧菌、鰻弧菌、溶藻弧菌等7種水產(chǎn)動(dòng)物致病弧菌均具有較強(qiáng)的拮抗效 果。該菌株制備的解淀粉芽孢桿菌粉劑，可明顯增強(qiáng)凡納濱對(duì)蝦非特性免疫功能，提高對(duì)蝦 抗病原菌感染能力。

【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但并不局限于此。
[0018] 實(shí)施例1解淀粉芽孢桿菌SIP0902 解淀粉芽抱桿菌(ifeciBiAs SIP0902 已于 2014 年 7 月 4 日保藏 于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CHINA CENTER FOR TYPE CULTURE COLLECTION，CCTCC)，地址 為中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC NO :M 2014323。
[0019] 菌株信息如下： 1、來源：解淀粉芽孢桿菌SIP0902分離自健康凡納濱對(duì)蝦的腸道，經(jīng)肌肉注射實(shí)驗(yàn)證 明對(duì)凡納濱對(duì)蝦無致病性。
[0020] 2、解淀粉芽孢桿菌SIP0902的菌種形態(tài)特征： 菌落特征：在TSA培養(yǎng)基表明，菌落扁平、圓形，邊緣整齊，表面灰白色，干燥，不透明， 中間具有典型的白色圓圈。不能在TCBS培養(yǎng)基生長(zhǎng)。
[0021] 細(xì)胞特征：革蘭氏染色陽性，短桿狀，無莢膜，可形成中生芽孢，大小0. 6-0. 7 μιηΧΟ. 8-1. 0 觸。
[0022] 芽孢特征：中生，孢囊不膨大，方形。
[0023] 生理生化特征：見表1。
[0024] 表1解淀粉芽孢桿菌生理生化特征

【權(quán)利要求】
1. 解淀粉芽孢桿菌) SIP0902,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物 保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC N0:M 2014323。
2. 權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌SIP0902在制備抑菌制劑中的應(yīng)用。
3. 權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌SIP0902在制備水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑中的應(yīng)用。
4. 權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌SIP0902在制備養(yǎng)殖水體改善劑中的應(yīng)用。
5. -種抑菌制劑，其含有權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌SIP0902。
6. -種水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑，其含有權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌SIP0902。
7. -種水產(chǎn)養(yǎng)殖調(diào)水劑，其含有權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌SIP0902。
8. -種解淀粉芽孢桿菌SIP0902菌粉的制備方法，包括如下步驟： (1) 將解淀粉芽孢桿菌SIP0902菌種劃線于種子固體培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)； (2) 種子培養(yǎng)結(jié)束后，從平板挑取一個(gè)單菌落接種于解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵液中發(fā)酵培 養(yǎng)，培養(yǎng)溫度控制在28-37°C ; (3) 當(dāng)發(fā)酵液0D600值達(dá)到1. 5-2. 0時(shí)，停止發(fā)酵，取發(fā)酵液離心，棄上清液獲得濕 菌泥，并在菌泥中加入冷凍干燥保護(hù)劑，混合均勻后進(jìn)行冷凍干燥既得解淀粉芽孢桿菌 SIP0902 粉劑。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述種子固體培養(yǎng)基的組成 為：葡萄糖1. 〇%，蛋白胨0. 5%，酵母膏1. 0%，瓊脂粉1. 5%，pH 7. 0, ％表示質(zhì)量百分比。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵 液的組成為：酵母膏0.1%，蛋白胨0.5%，淀粉1.0%，硫酸亞鐵0.001%，余量為水，％表示 質(zhì)量百分比。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK104195067SQ201410319443
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年7月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月7日
【發(fā)明者】王蕓, 林黑著, 牛津, 王珺, 陳素文, 周傳朋 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所