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一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法

文檔序號(hào):463468閱讀:230來(lái)源:國(guó)知局
一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種固定化蜂房哈夫尼菌(Hafnia?alvei)AS1.1009生產(chǎn)尸胺的方法,屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域。發(fā)明旨在利用微生物包埋技術(shù),提高尸胺的生產(chǎn)率。方法為:(1)蜂房哈夫尼菌菌種三級(jí)培養(yǎng);(2)在無(wú)菌條件下利用包埋載體將菌液包埋固定;(3)將固定化菌體投加到發(fā)酵罐中發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)尸胺;發(fā)酵后尸胺的轉(zhuǎn)化率達(dá)95.31%-97.42%。本發(fā)明包埋的高濃度的蜂房哈夫尼菌種,不僅提供了高濃度的菌種微生物,而且包埋微生物顆粒增加了菌種的穩(wěn)定性和底物濃度的耐受性,增加了酶活性,從而增加了尸胺的生產(chǎn)率。
【專利說(shuō)明】一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域,具體涉及一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]尸胺,即1,5- 二氨基戊烷,屬于多胺中的二胺類,是尸體腐敗產(chǎn)生氣味中的成分之一。五碳化合物1,5-戊二胺(尸胺)作為一種生物基的平臺(tái)化合物受到越來(lái)越多的關(guān)注,特別是作為新型的高性能生物基聚合物的構(gòu)建單體。研究其生產(chǎn)菌株和生產(chǎn)工藝,供應(yīng)生物基的1,5-戊二胺及其衍生品所能帶來(lái)的巨大的經(jīng)濟(jì)效益也引起人們極大地興趣。L 一賴氨酸脫梭酶(L-lysinedecarboxylase,簡(jiǎn)稱LDC, EC4.1.1.15),是可逆的將賴氨酸脫CO2生成尸胺(1,5—戊二胺)的酶,此酶是誘導(dǎo)性胞內(nèi)酶,需磷酸毗哆醛為輔酶促進(jìn)脫羧反應(yīng),LDC存在于大腸桿菌、尸桿菌、蜂房哈夫尼菌等大多數(shù)微生物中。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)1,5-戊二胺的研究不斷深入,從實(shí)驗(yàn)室水平的代謝途徑和遺傳基因,到工業(yè)中的擴(kuò)大培養(yǎng)和提取衍生化,為1,5-戊二胺的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)提供了理論基礎(chǔ)和技術(shù)指導(dǎo)。日本東麗尖端融合研究所用高效表達(dá)的大腸桿菌來(lái)源的賴氨酸脫羧酶的大腸桿菌生產(chǎn)尸胺。蔣麗麗,焦慶才等研究了蜂房哈夫尼菌(H.alvei)Asl.1009中,L-賴氨酸脫羧酶對(duì)L-賴氨酸的脫羧作用,分析了溫度、pH、培養(yǎng)基、激活劑等因素對(duì)酶活的影響。但是依然存在尸胺發(fā)酵過(guò)程復(fù)雜,尸胺生產(chǎn)率不高,且發(fā)酵后菌體和發(fā)酵液分離困難等缺點(diǎn)。
[0003]包埋固定化微生物技術(shù)因?yàn)槠浒奈⑸锩芏雀?、抗沖擊能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好,適應(yīng)性廣等優(yōu)點(diǎn)備受關(guān)注。傳統(tǒng)發(fā)酵法利用蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺,因?yàn)槠浒l(fā)酵菌株濃度低,菌種對(duì)底物濃度的耐受性低,LDC的活性低,發(fā)酵轉(zhuǎn)化后菌體和發(fā)酵液分離困難等缺點(diǎn),使得尸胺的轉(zhuǎn)化效率低,增加了生產(chǎn)成本。為此,研究一種利用包埋固定蜂房哈夫尼菌發(fā)酵生產(chǎn)尸胺,在轉(zhuǎn)化過(guò)程中增加了菌種濃度、提高菌種底物的耐受性的包埋蜂房哈夫尼菌的技術(shù)是很有研究前景的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述問(wèn)題,本發(fā)明提供一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法。
[0005]技術(shù)方案如下:
[0006](1)蜂房哈夫尼菌菌種三級(jí)培養(yǎng);
[0007](2)在無(wú)菌條件下利用包埋載體將菌種包埋固定;
[0008](3)將固定化菌體投加到發(fā)酵罐中發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)尸胺。
[0009]所述的蜂房哈夫尼菌三級(jí)培養(yǎng)過(guò)程如下:
[0010](I) 一級(jí)培養(yǎng)-斜面培養(yǎng):將試管菌種接種于斜面培養(yǎng)基,于35°C培養(yǎng)24_36h。
[0011]斜面培養(yǎng)基組成為(g/L):蛋白胨10,牛肉浸膏5,NaCl5,玉米漿5,瓊脂20,pH7.2。
[0012](2)二級(jí)培養(yǎng)-種子培養(yǎng):自一級(jí)斜面取I環(huán)菌接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中,35°C,170r/min震蕩培養(yǎng)12h。[0013]種子培養(yǎng)基組成為(g/L):蛋白胨10,牛肉浸膏5,NaC15,玉米漿5,pH7.2。
[0014](3)三級(jí)培養(yǎng)-發(fā)酵培養(yǎng):將二級(jí)培養(yǎng)的種子液按5%接種量接入發(fā)酵罐,于35°C,通氣量(v/v) I:1.5,攪拌轉(zhuǎn)速300-600rpm,溶氧20%,培養(yǎng)24h。
[0015]發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L):葡萄糖20,玉米漿20,酵母膏5,牛肉膏3,蛋白胨10,NaC15,硫酸銨2,維生素B6I, ρΗ7.0。
[0016]優(yōu)選的發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:葡萄糖20g/L,玉米漿20g/L,酵母膏5g/L,牛肉膏3g/L,蛋白胨 10g/L,NaC15g/L,硫酸銨 2g/L,維生素 B61 g/L, ρΗ7.0。
[0017]經(jīng)過(guò)三級(jí)培養(yǎng)得到的發(fā)酵液菌體濃度為5.5 X 108-6.0 X IO8個(gè)/ml。
[0018]所述的包埋載體各組分質(zhì)量比為:海藻酸鈉:聚乙烯醇=55-70:2_5。
[0019]所述菌種包埋固定的方法如下:稱取55_70g的海藻酸鈉加入1000mL蒸餾水中,然后加入2-5g聚乙烯醇混合均勻,放入高壓滅菌鍋內(nèi)121 °C,滅菌30min,在超凈臺(tái)內(nèi)冷卻至室溫形成凝膠。將500mL蜂房哈夫尼菌發(fā)酵液離心收集菌體然后用IOmL生理鹽水重懸并加入到凝膠中,攪拌混合均勻后用無(wú)菌的IOmL注射器滴加到含2%的經(jīng)過(guò)滅菌的CaCl2溶液中,滴加完畢后放在超凈臺(tái)內(nèi)室溫繼續(xù)交聯(lián)10h,形成固定化小球,然后用經(jīng)過(guò)滅菌的生 理鹽水洗滌3次既得包埋的蜂房哈夫尼菌顆粒。上述所有操作都必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
[0020]所述的發(fā)酵轉(zhuǎn)化具體方法為:按5-10%w/v的接種量將包埋好的菌體加入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中,培養(yǎng)基的初始pH為7.0,培養(yǎng)溫度35°C,通氣量(v/v) 1: 1.5,攪拌轉(zhuǎn)速300-600rpm,溶氧20%,和攪拌相關(guān)聯(lián)。發(fā)酵活化2h時(shí),調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至70_100rpm,并關(guān)閉通風(fēng),用6mol/L的HCl在線調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH至5.5并維持恒定。連接滅菌后的200g/L的L-賴氨酸母液補(bǔ)料瓶,快速流加至發(fā)酵罐中L-賴氨酸的濃度為30g/L。轉(zhuǎn)化過(guò)程中,每2h取樣一次,用生物傳感儀測(cè)定L-賴氨酸的濃度,當(dāng)L-賴氨酸的濃度降至12g/L以下時(shí),補(bǔ)加L-賴氨酸至30g/L。經(jīng)過(guò)32h發(fā)酵后結(jié)束然后離心除去包埋的微生物顆粒。
[0021]所述的蜂房哈夫尼菌具體為蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)ASl.1009。
[0022]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下:(1)包埋的高濃度的蜂房哈夫尼菌種,不僅提供了高濃度的菌種微生物,而且包埋微生物顆粒增加了菌種的穩(wěn)定性和底物濃度的耐受性,增加了酶活性,從而增加了尸胺的生產(chǎn)率。(2)包埋的高濃度蜂房哈夫尼菌種顆??砷L(zhǎng)期保存,發(fā)酵使用方便,并且包埋顆??梢灾貜?fù)使用,簡(jiǎn)化了發(fā)酵步驟、大大的縮短了發(fā)酵周期。(3)包埋的菌種微生物,在發(fā)酵轉(zhuǎn)化過(guò)程中使用簡(jiǎn)便,且大大的簡(jiǎn)化了發(fā)酵液菌液分離的過(guò)程,大大降低了生產(chǎn)成本。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面通過(guò)具體的實(shí)施方案敘述本發(fā)明。除非特別說(shuō)明,本發(fā)明中所用的技術(shù)手段均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外,實(shí)施方案應(yīng)理解為說(shuō)明性的,而非限制本發(fā)明的范圍,本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言,在不背離本發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下,對(duì)這些實(shí)施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0024]實(shí)施例1
[0025]一種包埋蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法,步驟如下:
[0026]1、將蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei ASl.1009)菌株進(jìn)行活化6~8h,即將其從斜面培養(yǎng)基中取I環(huán)菌接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中,35°C,170r/min震蕩培養(yǎng)12h,得種子液。種子培養(yǎng)基組成為(g/L):蛋白胨10,牛肉浸膏5,NaC15,玉米漿5,pH7.2。
[0027]2、以5%的體積比將步驟2所得的種子液接到5L (裝液量為3L)的發(fā)酵罐中,于35°C,通氣量(v/v) 1:1.5,攪拌轉(zhuǎn)速300-600印111,溶氧20%,培養(yǎng)2411。發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L):葡萄糖20,玉米漿20,酵母膏5,牛肉膏3,蛋白胨10,NaC15,硫酸銨2,維生素B6I,ρΗ7.0。
[0028]3、菌種包埋固定:稱取68g的海藻酸鈉加入1000mL蒸餾水中,然后加入2g聚乙烯醇混合均勻,放入高壓滅菌鍋內(nèi)121°C,滅菌30min,在超凈臺(tái)內(nèi)冷卻至室溫形成凝膠。將500mL蜂房哈夫尼菌發(fā)酵液離心收集菌體然后用IOmL生理鹽水重懸并加入到凝膠中,攪拌混合均勻后用無(wú)菌的IOmL注射器滴滴加到含2%的經(jīng)過(guò)滅菌的CaCl2溶液中,滴加完畢后放在超凈臺(tái)內(nèi)室溫繼續(xù)交聯(lián)10h,形成固定化小球,然后用經(jīng)過(guò)滅菌的生理鹽水洗滌3次既得包埋微生物菌劑。上述所有操作都必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
[0029]4、按5%w/v的接種量將包埋好的種子加入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中,培養(yǎng)基的初始pH=7.0,培養(yǎng)溫度35°C,通氣量(v/v) I:1.5,攪拌轉(zhuǎn)速300_600rpm,溶氧20%,和攪拌相關(guān)聯(lián)。發(fā)酵至2h時(shí),調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至70-100rpm,并關(guān)閉通風(fēng),用6mol/L的HCl在線調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH至5.5并維持恒定。連接滅菌后的200g/L的L-賴氨酸母液補(bǔ)料瓶,快速流加至發(fā)酵罐中L-賴氨酸的濃度為30g/L。轉(zhuǎn)化過(guò)程中,每2h取樣一次,用生物傳感儀測(cè)定L-賴氨酸的濃度,當(dāng)L-賴氨酸的濃度降至12g/L以下時(shí),補(bǔ)加L-賴氨酸至30g/L。經(jīng)過(guò)32h發(fā)酵后結(jié)束然后離心除去包埋的微生物顆粒。尸胺產(chǎn)量為59.21g/L,轉(zhuǎn)化率達(dá)96.42%。
[0030]實(shí)施例2
[0031]1、種子液的制備和所用菌 種同實(shí)施例1。
[0032]2、發(fā)酵液制備同實(shí)施例1。
[0033]3、菌種包埋固定:稱取70g的海藻酸鈉加入1000mL蒸餾水中,然后加入2g聚乙烯醇混合均勻,放入高壓滅菌鍋內(nèi)121°C,滅菌30min,在超凈臺(tái)內(nèi)冷卻至室溫形成凝膠。將500mL蜂房哈夫尼菌發(fā)酵液離心收集菌體然后用IOmL生理鹽水重懸并加入到凝膠中,攪拌混合均勻后用無(wú)菌的IOmL注射器滴加到含2%的經(jīng)過(guò)滅菌的CaCl2溶液中,滴加完畢后放在超凈臺(tái)內(nèi)室溫繼續(xù)交聯(lián)10h,形成固定化小球,然后用經(jīng)過(guò)滅菌的生理鹽水洗滌3次既得包埋微生物菌劑。上述所有操作都必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
[0034]5、按7%w/v的接種量將包埋好的種子加入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中,培養(yǎng)基的初始pH=7.0,培養(yǎng)溫度35°C,通氣量(v/v) I:1.5,攪拌轉(zhuǎn)速300_600rpm,溶氧20%,和攪拌相關(guān)聯(lián)。發(fā)酵至2h時(shí),調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至70-100rpm,并關(guān)閉通風(fēng),用6mol/L的HCl在線調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH至5.5并維持恒定。連接滅菌后的200g/L的L-賴氨酸母液補(bǔ)料瓶,快速流加至發(fā)酵罐中L-賴氨酸的濃度為30g/L。轉(zhuǎn)化過(guò)程中,每2h取樣一次,用生物傳感儀測(cè)定L-賴氨酸的濃度,當(dāng)L-賴氨酸的濃度降至12g/L以下時(shí),補(bǔ)加L-賴氨酸至30g/L。經(jīng)過(guò)32h發(fā)酵后結(jié)束然后離心除去包埋的微生物顆粒。尸胺產(chǎn)量為57.51g/L,轉(zhuǎn)化率達(dá)93.42%。
[0035]實(shí)施例3
[0036]1、種子液的制備和所用菌種同實(shí)施例1。
[0037]2、發(fā)酵液制備同實(shí)施例1。
[0038]3、發(fā)酵罐種子液包埋:稱取75g的海藻酸鈉加入1000mL蒸餾水中,然后加入4g聚乙烯醇混合均勻,放入高壓滅菌鍋內(nèi)121°C,滅菌30min,在超凈臺(tái)內(nèi)冷卻至室溫形成凝膠。將500mL蜂房哈夫尼菌發(fā)酵液離心收集菌體然后用IOmL生理鹽水重懸并加入到凝膠中,攪拌混合均勻后用無(wú)菌的IOmL注射器滴加到含2%的經(jīng)過(guò)滅菌的CaCl2溶液中,滴加完畢后放在超凈臺(tái)內(nèi)室溫繼續(xù)交聯(lián)10h,形成固定化小球,然后用經(jīng)過(guò)滅菌的生理鹽水洗滌3次既得包埋微生物菌劑。上述所有操作都必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
[0039]5、按8%w/v的接種量將包埋好的種子加入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中,培養(yǎng)基的初始pH=7.0,培養(yǎng)溫度35°C,通氣量(v/v) I:1.5,攪拌轉(zhuǎn)速300_600rpm,溶氧20%,和攪拌相關(guān)聯(lián)。發(fā)酵至2h時(shí),調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至70-100rpm,并關(guān)閉通風(fēng),用6mol/L的HCl在線調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH至5.5并維持恒定。連接滅菌后的200g/L的L-賴氨酸母液補(bǔ)料瓶,快速流加至發(fā)酵罐中L-賴氨酸的濃度為30g/L。轉(zhuǎn)化過(guò)程中,每2h取樣一次,用生物傳感儀測(cè)定L-賴氨酸的濃度,當(dāng)L-賴氨酸的濃度降至12g/L以下時(shí),補(bǔ)加L-賴氨酸至30g/L。經(jīng)過(guò)32h發(fā)酵后結(jié)束然后離心除去包埋的微生物顆粒。尸胺產(chǎn)量為60.51g/L,轉(zhuǎn)化率達(dá)97.12%。
[0040]實(shí)施例4:發(fā)酵生產(chǎn)對(duì)比試驗(yàn)
[0041]實(shí)驗(yàn)組為將包埋的菌種按8%w/v的接種量加入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中,對(duì)照組為將與實(shí)驗(yàn)組含有同等菌體量的發(fā)酵液接入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中,其他反應(yīng)條件相同,如下:培養(yǎng)基的初始pH=7.0,培養(yǎng)溫度35°C,通氣量(v/v)l:1.5,攪拌轉(zhuǎn)速300-600rpm,溶氧20%,和攪拌相關(guān)聯(lián)。發(fā)酵至2h時(shí),調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至70_100rpm,并關(guān)閉通風(fēng),用6mol/L的HCl在線調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH至5.5并維持恒定。連接滅菌后的200g/L的L-賴氨酸母液補(bǔ)料瓶,快速流加至發(fā)酵罐中L-賴氨酸的濃度為30g/L。轉(zhuǎn)化過(guò)程中,每2h取樣一次,用生物傳感儀測(cè)定L-賴氨酸的濃度,當(dāng)L-賴氨酸的濃度降至12g/L以下時(shí),補(bǔ)加L-賴氨酸至30g/L。經(jīng)過(guò)32h發(fā)酵后結(jié)束然后離心除去微生物等雜質(zhì),提取尸胺。結(jié)果如表1。
[0042]表1
[0043]
【權(quán)利要求】
1.一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法,包括如下步驟: (1)蜂房哈夫尼菌菌種三級(jí)培養(yǎng); (2)在無(wú)菌條件下利用包埋載體將菌種包埋固定; (3)將固定化菌體投加到發(fā)酵罐中發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)尸胺; 所述的蜂房哈夫尼菌具體為蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)ASl.1009。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法,其特征在于:所述的三級(jí)培養(yǎng)過(guò)程如下: (O 一級(jí)培養(yǎng)-斜面培養(yǎng):將試管菌種接種于斜面培養(yǎng)基,于35°C培養(yǎng)24-36h。所述斜面培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成 為(g/L):蛋白胨10,牛肉浸膏5,NaC15,玉米漿5,瓊脂20,pH7.2 ; (2)二級(jí)培養(yǎng)-種子培養(yǎng):自一級(jí)斜面取I環(huán)菌接入裝有50mL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中,35°C,170r/min震蕩培養(yǎng)12h ; 所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(g/L):蛋白胨10,牛肉浸膏5,NaC15,玉米漿5,pH7.2 ;。 (3)三級(jí)培養(yǎng)-發(fā)酵培養(yǎng):將二級(jí)培養(yǎng)的種子液按5%接種量接入發(fā)酵罐,于35°C,通氣量(v/v) I:1.5,攪拌轉(zhuǎn)速 300-600rpm,溶氧 20%,培養(yǎng) 24h ; 所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為(g/L):葡萄糖20,玉米漿20,酵母膏5,牛肉膏3,蛋白胨10,NaCl5,硫酸銨 2,維生素 B6I, ρΗ7.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法,其特征在于:所述包埋載體各組分質(zhì)量比為:海藻酸鈉:聚乙烯醇=55-70:2-5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法,其特征在于:所述包埋固定的具體方法如下:稱取55-70g的海藻酸鈉加入1000mL蒸餾水中,然后加入2-5g聚乙烯醇混合均勻,放入高壓滅菌鍋內(nèi)121°C,滅菌30min,在超凈臺(tái)內(nèi)冷卻至室溫形成凝膠df500mL蜂房哈夫尼菌發(fā)酵液離心收集菌體然后用IOmL生理鹽水重懸并加入到凝膠中,攪拌混合均勻后用無(wú)菌的IOmL注射器滴加到含2%的經(jīng)過(guò)滅菌的CaCl2溶液中,滴加完畢后放在超凈臺(tái)內(nèi)室溫繼續(xù)交聯(lián)10h,形成固定化小球,然后用經(jīng)過(guò)滅菌的生理鹽水洗滌3次既得包埋的蜂房哈夫尼菌顆粒;上述所有操作都必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化蜂房哈夫尼菌生產(chǎn)尸胺的方法,其特征在于: 所述發(fā)酵轉(zhuǎn)化生成尸胺的具體方法為:按5-10%w/v的接種量將包埋好的菌體加入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中,培養(yǎng)基的初始pH為7.0,培養(yǎng)溫度35°C,通氣量(v/V) 1:1.5,攪拌轉(zhuǎn)速300-600印111,溶氧20%,和攪拌相關(guān)聯(lián)。發(fā)酵活化2h時(shí),調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至70-100rpm,并關(guān)閉通風(fēng),用6mol/L的HCl在線調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH至5.5并維持恒定;連接滅菌后的200g/L的L-賴氨酸母液補(bǔ)料瓶,快速流加至發(fā)酵罐中L-賴氨酸的濃度為30g/L ;轉(zhuǎn)化過(guò)程中,每2h取樣一次,用生物傳感儀測(cè)定L-賴氨酸的濃度,當(dāng)L-賴氨酸的濃度降至12g/L以下時(shí),補(bǔ)加L-賴氨酸至30g/L ;32h發(fā)酵結(jié)束后離心除去包埋的微生物顆粒。
【文檔編號(hào)】C12P13/00GK103725724SQ201310755027
【公開(kāi)日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2013年12月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月28日
【發(fā)明者】喬長(zhǎng)晟, 彭巧, 林青, 石漫漫 申請(qǐng)人:天津北洋百川生物技術(shù)有限公司
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