大腸桿菌細(xì)胞的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了大腸桿菌細(xì)胞的制備方法。步驟如下：首選挑選合適的細(xì)胞菌落，然后將DH5平板劃線，在35攝氏度環(huán)境下過夜；其后將菌落接種于菌液中，并導(dǎo)入離心管中；隨后在35攝氏度的培養(yǎng)箱中過夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除干凈即可；保存的時候可以滴入適量甘油；所述氯化鈣溶液需要提前預(yù)冷，并保存在攝氏度4度的環(huán)境中。本發(fā)明的有益效果是，成本低，對環(huán)境污染小，同時獲得的基因擴增可以得到確認(rèn)。
【專利說明】大腸桿菌細(xì)胞的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種實驗方法，具體來說，大腸桿菌細(xì)胞的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]腸埃希氏菌(E.coli)通常稱為大腸桿菌,是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的,在相當(dāng)長的一段時間內(nèi)，一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分，認(rèn)為是非致病菌。直到20世紀(jì)中葉，才認(rèn)識到一些特殊血清型的大腸桿菌對人和動物有病原性，尤其對嬰兒和幼畜(禽)，常引起嚴(yán)重腹瀉和敗血癥，它是一種普通的原核生物，根據(jù)不同的生物學(xué)特性將致病性大腸桿菌分為5類:致病性大腸桿菌(EPEC)、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(ETEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、腸出血性大腸桿菌(EHEC)、腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。大腸桿菌屬于細(xì)菌。大腸桿菌是與我們?nèi)粘Ｉ铌P(guān)系非常密切的一類細(xì)菌，學(xué)名稱作“大腸埃希菌”，屬于腸道桿菌大類中的一種。它是寄生在人體大腸里對人體無害的一種單細(xì)胞生物，結(jié)構(gòu)簡單，繁殖迅速，培養(yǎng)容易，它是生物學(xué)上重要的實驗材料。在嬰兒剛出生的幾小時內(nèi)，大腸桿菌就經(jīng)過吞咽在腸道內(nèi)定居了。正常情況下，大多數(shù)大腸桿菌是非常安分守己的，他們不但不會給我們的身體健康帶來任何危害，反而還能競爭性抵御致病菌的進(jìn)攻，同時還能幫助合成維生素K2，與人體是互利共生的關(guān)系。只有在機體免疫力降低、腸道長期缺乏刺激等特殊情況下，這些平日里的良民才會興風(fēng)作浪，移居到腸道以外的地方，例如膽囊、尿道、膀胱、闌尾等地，造成相應(yīng)部位的感染或全身播散性感染。因此，大部分大腸桿菌通常被看作機會致病菌。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]為克服上述 技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案:
大腸桿菌細(xì)胞的制備方法，步驟如下:首選挑選合適的細(xì)胞菌落，然后將DH5平板劃線，在35攝氏度環(huán)境下過夜；其后將囷落接種于囷液中，并導(dǎo)入尚心管中；隨后在35攝氏度的培養(yǎng)箱中過夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除干凈即可。
[0004]本發(fā)明中，保存的時候可以滴入適量甘油。
[0005]本發(fā)明中，所述氯化鈣溶液需要提前預(yù)冷，并保存在攝氏度4度的環(huán)境中。
[0006]本發(fā)明的有益效果是，成本低，對環(huán)境污染小，同時獲得的基因擴增可以得到確認(rèn)。
【具體實施方式】
[0007]大腸桿菌細(xì)胞的制備方法，步驟如下:首選挑選合適的細(xì)胞菌落，然后將DH5平板劃線，在35攝氏度環(huán)境下過夜；其后將菌落接種于菌液中，并導(dǎo)入離心管中；隨后在35攝氏度的培養(yǎng)箱中過夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除干凈即可，保存的時候可以滴入適量甘油。所述氯化鈣溶液需要提前預(yù)冷，并保存在攝氏度4度的環(huán)境中。[0008]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或 改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.大腸桿菌細(xì)胞的制備方法，其特征在于，步驟如下:首選挑選合適的細(xì)胞菌落，然后將DH5平板劃線，在35攝氏度環(huán)境下過夜；其后將菌落接種于菌液中，并導(dǎo)入離心管中；隨后在35攝氏度的培養(yǎng)箱中過夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除干凈即可。
2.如權(quán)利要求1所述的大腸桿菌細(xì)胞的制備方法，其特征在于，保存的時候可以滴入適量甘油。
3.如權(quán)利要求1所述的大腸桿菌細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述氯化鈣溶液需要提前預(yù)冷，并保存在攝氏 度4度的環(huán)境中。
【文檔編號】C12R1/19GK103602612SQ201310525800
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】徐麗 申請人:徐麗